EA027433B1 - Производное оксима бензоилпиридина, обладающее противосудорожной активностью - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области биологически активных соединений, конкретно к применению производного О-(2-R-оксим 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридина в качестве противосудорожного средства.

Description

(57) Изобретение относится к области биологически активных соединений, конкретно к применению производного О-(2-К-оксим 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридина в качестве противосудорожного средства.

027433 В1

027433 Β1

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области биологически активных соединений для профилактики и лечения эпилепсии (пароксизмальных состояний), конкретно к новым соединениям - производным О-(2-Коксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридинов, обладающим противосудорожной активностью.

В настоящее время одно из ведущих мест среди многообразных заболеваний ЦНС занимает эпилепсия, которой страдают люди всех возрастов независимо от этнических и географических признаков. Считается, что у 50 млн людей установлен диагноз эпилепсии (ШогШ Неа1!Н Огдаш/аИоп: ерйерзу: ер1йешю1о§у, ае1ю1о§у апй рго§поз13, ШНО Вас! 8Нее1, 2001). По прогнозам экспертов количество больных эпилепсией в ближайшие годы будет заметно расти. Больные эпилепсией вынуждены длительно, а порой всю жизнь принимать антиконвульсанты.

Наиболее широкое применение как в России, так и за рубежом имеют два препарата - карбамазепин и вальпроат. Однако эти препараты не всегда купируют пароксизмальные состояния. Кроме того, необходимое для эффективного лечения длительное применение (минимум в течение 2-3 лет) антиконвульсантов сопровождается значительными побочными эффектами со стороны различных органов и систем, что, в свою очередь, еще больше снижает качество жизни пациентов. Так, побочные эффекты карбамазепина возникают у трети получавших его пациентов, а плохая переносимость является причиной отмены препарата примерно у 5% больных (Ушкалова Е.А. Проблемы безопасности и качества противоэпилептических препаратов// Фарматека, 2007, № 7 (142), с. 79-86).

Предметом настоящего изобретения является применение производного оксима бензоилпиридина общей формулы

или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из -СН₂СН₂К¹, -СОК²;

₁ н Ρ

К¹ выбран из = ЖСНзЬ;

С1 “V# ^С|;~Ч/^{С|; сн=сн}чу К² выбран из ; ' '

X выбран из С1, В, в качестве противосудорожного средства.

Кроме того, предметом настоящего изобретения является применение производного оксима бензоилпиридина общей формулы

ΝΟΚ

или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из -СН₂СН₂К¹, -СОК²;

ι < Р «О

К¹ выбран из ; Ы(СН₃)₂;

,^С|

К² выбран из ; ' '

X выбран из С1, В, для профилактики или лечения пароксизмальных состояний, например, для профилактики или лечения эпилепсии.

Предметом настоящего изобретения является также способ получения производного оксима бензоилпиридина общей формулы

или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из -СН₂СН₂К¹;

< > О

К¹ выбран из ; - ; Ы(СН₃)₂;

- 1 027433

X выбран из С1, Р, путем взаимодействия соединения общей формулы

где X определен выше, с соединением общей формулы С1-СН₂СН₂К¹, где К¹ определен выше.

Взаимодействие, в частности, осуществляют в присутствии гидрида натрия в ДМФА, полученное основание растворяют в спирте, добавляют сухую щавелевую кислоту и выделяют целевой продукт.

Предметом настоящего изобретения является также способ получения производного оксима бензоилпиридина общей формулы

или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из -СОК²;

,^С|

К² выбран из ;

X выбран из С1, Р, путем взаимодействия соединения общей формулы

где X определен выше, с соединением общей формулы К²СОС1, где К² определен выше.

Взаимодействие, в частности, осуществляют в присутствии триэтиламина при кипячении.

Кроме того, предметом настоящей заявки является также лекарственная форма, содержащая производное оксима бензоилпиридина общей формулы

или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из_-СН₂СН₂К¹, -СОК²;

ι ι ? 33

К¹ выбран из Ы(СН₃)₂;

С1 “С3^_с|:~33 ^{С1: сн=сн}33

К² выбран из ;

X выбран из С1, Р, в эффективном количестве для применения в качестве противосудорожного средства.

Заявляемое соединение, его свойства и способы получения в литературе не описаны.

Заявленное решение иллюстрируется схемой синтеза, представленной на чертеже.

Схема синтеза.

Из хлорангидрида никотиновой кислоты(11), полученного нагреванием никотиновой кислоты с хлористым тионилом, реакцией с хлор или (фтор)бензолом в присутствии хлористого алюминия (реакция Фриделя Крафтса) получаются 3-(4-хлор или (фтор)бензоил)пиридины (III) а,б (выходы на этой стадии 40-60%) зависят от качества хлористого алюминия, а также от температуры, при которой прибавляют ингредиенты (Р Огд. Сйет., 1986, ν. 46, 3479-3483).

При реакции кетонов (III) а,б с гидроксиламином солянокислым в присутствии щелочи образуются оксимы 3-(4-хлор или (фтор)бензоил)пиридинов (IV) а,б с выходами 90-95% (Р Огд. Сйет., 1986, ν. 46, 3479-3483).

При реакции соединения (IV) а,б с диалкиламиноэтилхлоридом в присутствии гидрида натрия в ДМФА получены основания соединений (I а-д) в виде основных масел, выход количественный. Основания растворяют в спирте, добавляют сухую щавелевую кислоту и выделяют соединения - О-2-диалкиламиноэтилоксимы 3-(4-хлор или (фтор)бензоил)пиридинов (I а-д).

При реакции оксимов (IV) а,б с хлорангидридами различных кислот в присутствии триэтиламина

- 2 027433 при кипячении получены О-бензоильные производные оксимов 3-(4-хлор или (фтор)бензоил)пиридинов (I е-м). Строение соединений (I а-м) подтверждено с помощью ПМР-спектроскопии. У оксимов (IV) а,б и у соединений (I в, е, ж, и-м) наблюдается син-анти-изомерия (соотношения изомеров приведены в табл. 2).

Экспериментальная часть химического синтеза.

ПМР-спектры сняты на приборе Вгикег-АС 250, внутренний стандарт-ТМС.

Данные элементного анализа производных О-(2-К-оксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридинов и их физико-химические свойства приведены в табл. 1 и 2.

Оксим 3-(4-хлорбензоил)пиридина (IV а).

10,9 г (0,05 моль) кетона(Ш) [I. Огд. Сйеш., 1981, 40, р. 3479-3482] растворяют в 90 мл спирта при нагревании, к этому раствору добавляют раствор гидроксиламина (10,4 г (0,15 моль) в 14 мл воды), затем прикапывают раствор (5 г ЫаОН (0,125 моль) в 8 мл воды), кипятят смесь 2 ч при перемешивании, отфильтровывают осадок, промывают большим количеством воды, сушат: выход -11,5 г (98,6%), кристаллизуют из 70% спирта) (- 100 мл), выход 10,75 г (92,19%), т.пл. 145-150°.

ПМР-спектр (СЭС1₃): δ, 7,25-7,48 (5Н, т, АгС1, 5Н, Ру), 7,71-7,80 (1Н, м, 4-Н Ру), 8,57-8,79 (2Н,т, 2Н, 6-Н, Ру), 9,53-9,91 (1Н, два широких сигнала от 2-х изомеров). Анализ: вычислено %: С-61,94, Н-3,9, N-12,04, С1-15,24. Брутто формула - С^НдСМО. Найдено %: С - 62,38, Н - 3,96, N - 12,12, С1 - 15,55.

Оксим 3-(4-фторбензоил)пиридина (IV б).

Синтезирован аналогично (IV а) из 3-(4-фторбензоил)пиридина (I. Огд. Сйет., 1981, ν. 40, р. 34793482). Выход. Т.пл. 146-148 (из 70% сп), ПМР-спектр: (ДМСО-б₆) δ: 2 изомера (1:1).

7,2 (1Н, с, Аг), 7,3 (1Н, с, Аг), 7,4-7,6 (4Н, м, 4-Н, 8-Н, АгН), 7,6-7,8 (2Н, м, 6-Н), 8,4-8,7 (2Н, м, 2-Н), 11,63, 11,74 (с, ШН).

Анализ. Найдено % N - 12, 9,3, 13,03. С₁₉ Н₉ Р^О. Вычислено % N 12,95.

Пример 1. О-2-Морфолиноэтилоксим 3-(4-хлорбензоил)пиридина, оксалат Са).

К суспензии 0,99 г (0,0248 моль) 60% VII в 7 мл сухого диметилформамида (ДМФА) прикапывают раствор 2,90 г (0,0124 моль) оксима (IV а) в 12 мл ДМФА, при охлаждении водой и перемешивают при комнатной температуре 1 ч. Образуется смесь с осадком желтого цвета. Затем прикапывают 2,79 г (0,0187 моль) основания 4-(2-хлорэтил)морфолина и перемешивают при комнатной температуре 2 ч, разбавляют смесь водой (250 мл), экстрагируют раствор этилацетатом (по 100 мл 2 раза). Экстракт сушат под Мд5О₄ и упаривают, в остатке получается масло (3,15 г), которое растворяют в 10 мл абсолютного спирта, и добавляют 0,77 г сухой щавелевой кислоты в 7 мл абсолютного спирта. Выпавший осадок отфильтровывают и получают 2 г оксалата (I а).

Таким же образом получены соединения I б-д.

Пример 2. О-(3,4-Дихлорбензоил)оксим 3-(4-хлорбензоил)пиридина (I ж).

Смесь 1,16 г (0,005 моль) оксима (IV а) и 1,15 г (0,0055 моль) хлорангидрида 3,4-дихлорбензойной кислоты [полученного кипячением 3,4 дихлорбензойной кислоты с хлористым тионилом] в 25 мл сухого бензола доводят до кипения, выпадает осадок, добавляют 0,56 г (0,055 моль) триэтиламина и кипятят смесь 3,5 ч, охлаждают, отфильтровывают (осадок практически растворяется в воде), бензольный раствор промывают водой, раствором №11СО₃, водой, сушат над Мд5О₄, упаривают, затирают эфиром. Осадок отфильтровывают, выход I ж - 1,7 г (85%), кристаллизуют из спирта 2 раза.

По этому методу синтезированы соединения I е-м.

Данные о соединениях приведены в табл. 1 и 2.

Таблица 1

Данные элементного анализа производных О-(2-К-оксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридинов

Соединение	Найдено (%)	Вычислено (%)
С	н	С1	N	С	н	С1	N
1а	52,58	5.26	7,77	9,10	52,92	5,33	7,81	9,26
16. ·0,5Η2Ο	56,74	5,93	8,10	9,68	56,95	5,69	8,00	9,49
Ιβ·Η2Ο	52,48	5,50	8,76	10,39	52,49	5,38	8,61	10,20
Ιγ	—	—		9,69				10,02

- 3 027433

1д	—	—	—	10,28	—	—	—	10,07
I е	61,69	3,33	19,16	7,76	61,47	3,26	19,10	7,55
1ж	55,90	2,85	26,01	6,81	56,25	2,73	26,22	6,91
1з	63,75	3,60	10,57	12,30	64,00	3,58	10,50	12,44
I и	69,59	4,28	9,97	7,80	69,52	4,17	9,77	7,72
1к	—	—,	—	—	—	—		—
I л			18,21	7,27	—		18,22	7,20
I м		-	—	8,32				8,09

Таблица 2

Физико-химическая характеристика производных О-(2-К-оксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридинов

Соеди нения	X	ГС	выход %	Тплавл. В °С растворитель	Брутто формула	ПМР- спектр (ДМСО-ф) δ т д
1	2	3	4	5	6	7
I а·	С1	сн2сн2/Юь	46,6	177-178 (спирт)	С20Н22 С1 ΝβΟβ	2,92(4Н,м, СН2- Ν-ΟΗ2), 3,21 (2Н уш.т. СН2), 3,70 (4Н, м, СН2-О-СН2), 4,44(2Н, уш т, СН2под РЮО), 7,40 и 7,51(4Н,М, ,АгН), 7,52 и 7,79 м, 8,56 д, 8,66(д д 4-Н,5-Н, 4-Н,2-Н,6-Н.Ру)
1 б	С1	-СН2СН2|/~	88,6	125-127	С2-|Н24 С! Ν3Ο5	1,45(6Н,м,(СН2)3 цикла), 3,05(4Н,м, СН2- Ν-СНг-цикла), 3,36(2Н,т, СН2),4,49(2Н,т, СН2), 7,4-7,9(8Н,м,РгН,АгН),
I в	С1	СН2СН2Ы(СНз)2	76,5+	154-155 (спирт)	с18н20 о Ν3Ο5	Два изомера -30%-анти и 70%-(син) ХС-2,71 “ и 2,73Б (3Η,ο,Ν (СН3)2, 3,43(2Н, м, СН2),4,49(2Н, м, СН2), 4,70 у ср НДОиСООН)2 7,40-7,60 (5Н,м и 5-Н Ру), 7,76-7,82 (1Н,м, 4-Н, Ру), 8,52-8,70 (2Н,м, 2-Н, 6-Н Ру)
I г	Р	СН2СН2|Ю~р	32,0	145-146 (спирт)	С20Н24 Р Ν3Ο6	3,18(4Н,м СН2- Ν-СНг-кольца), 3,48(2Н, уш.т., СН2), 3,77 и 4,00 (под ΝϋΟ) (4Н, м, СН2- О-СН2), 4,49 (2Н,уш.с СН2), 7,25-8,70 (8Н,м, АгН, РуН,),

- 4 027433

1 д	Р	сн2сн2мО>	70,7	152-153 (спирт)	С21Н24РМ3О5	Два изомера син (35%) и анти (65%) 1,47 (2Н,М, СН2), 1,65(4Н , м, СН2. СН2), 3,02 (4Н, м, СН2- Ы-СН2), 3,32(2Н,м ΟΗ2Ν). 4,11уш.сигнал НДО. и (СООН)2 4,46 (2Н, м, СН2О), 7,85-( 6Н,м, РуН,(4-Н,5-Н и АгН(Р)], 8,55 (1Н, д, 2-Н Ру), 8,63 и 8,66 (1Н,два д д от син-анти изомеров, 6-Н Ру)
I е	С1		43,0	143-145	ΟιθΗι2 С12 Ν2Ο2	Два изомера : син и анти
		а3”		(этилацетат		7,45-8,04 (1 ОН,м, АгН) (5-Н и 4-Н РуН), 8,65-8,84(2Н,м,6-Н и 2-Н РуН),
1ж	С1	а	50,5	129-130	С19НП οι3ν2ο2	7,50- 7,85 (8Н,м, АгН и 5-Н Ру),
				(спирт)		7,90-8,02(1 Н,м,4-Н и Ру),
		- со—(ч л>-а				8,70-8,82 (2Н, м, 2-Н, 6-Н, Ру),
						Два изомера : син (40%) и анти (60%)
I з	С1	а	34,0	142-143	Οι3Ηι2 0Ι3Ν3Ο2	7,25- 7,60 (,м, АгН, 5-Н),
			(этилацетат		7,75 (м,4-Н, Ру),
		- со—А-а				8,60-8,80 (6Н, два д д от,2-х
						Ру), 8,8-8,9 (2-Н от 2-х Ру)
1	2	3	4	5	6	7
I и	С1		52, 5	141-142	С21Н15 С1 Ν2Ο2	Два изомера (30:70)
		СОСН= СЬЦ		(спирт)		6,60“ и 6,64е (1Н,двад, от 2 х изомеров СН=), 7,36-7,77 (6Н,м и два С АгН| и СН=), 7,91(1Н ,м, 4-Н РуН,), 8,62е(и 8,76 м (1Н, д.д„6-Н Ру),
						8,73б(и 8,75 “(1Н,д 2-Н,Ру).
I к	Р	/=\	34,0	137-139	С19Н12 РС1	Два изомера
		- со—а		(спирт)	Ν2Ο2	7,30-8,01(10Н ,м, АгН, Ру,), 8,71 (1Н, С,2-Н, Ру), 8,78 (1Н,д 6-Н,Ру).
I л	Р	а	77.1	125-127	ЩэНцСЬР	Два изомера
		/—( “ со—у —а		(спирт)	Ν2Ο2	7,37Μ,45^Η7,7«7·θ-Η 7,51-7,71 (2Η!Μ!-00’Ρ! 7,66(1 Н,м,5-Н Ру),7,68 ( 1Н,д д Н а), 7,74 , 7 80“ (1Н,д,2-Н Ру), 7,80е и 7,82“ (1Н, д, -Н6), 7,94“, 7,88 Б (1Н, м,4-Н Ру),8,71“ и 8,73е (1Н,д, 2-НРу),
						8,76м и 8,79 е (1Н, д. д. 6-Н Ру),
I м	Р		49,7	124-126	С21Н15 Ρ Ν2Ο2	Два изомера
		СОСН= СНч( 2>		(спирт)		7,35- 7,8,(6Н ,м, и два с АгН, СН=,),
						7,9- 8,79 (ЗН, м,4-Н, Ру, 6-Н,Ру, 6-Н,Ру, 2-Н,Ру

Соединения I а-д - монооксалаты. Соединения I е-м - основания.

Фармакологические исследования.

Противосудорожная активность производных О-(2-К-оксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридина представлена в следующих примерах.

Пример 1. Противосудорожное действие производных О-(2-К-оксимов 3-(4хлор(фтор)бензоил)пиридина в тесте максимального электрошока.

Методика максимального электрошока (МЭШ) моделирует первично-генерализованные судороги так называемые большие (Сгап! та1) судорожные припадки и является базисным тестом при оценке действия веществ с противосудорожной активностью (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, М., 2005, с. 277-294; ЕозсЕег е! а1., ТКе го1е о£ 1есЪтса1, Ью1о§юа1 апб рйагтасо1о§1са1 ГасЮгз ΐη Фе 1аЬога;огу еуаШабоп о£ апПсопуиПаП; бгидз. II. Мах1та1 е1есЕо8Носк §е17иге тобе1з, Ерберзу Кез., 1991, ν. 8, р. 79-94; Аапуагб Е.А. ЕаЬогаШгу еνа1иаΐ^оη о£ апбербербс бгидз. К^1е^ о£ 1аЬога;огу теФобз, Ерберз1а, 1969, ν. 10, р. 107-119). В этой методике судороги вызываются электрическим воздействием и основной оцениваемой компонентой судорог при максимальном электрошоке является тоническая экстензия задних конечностей.

Эксперименты проводили на белых беспородных мышах-самцах, массой 20-26 г, которых содержали в виварии в одинаковых условиях обитания и кормления (стандартный брикетированный корм). С животными работали в соответствии с действующими Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных и Международными рекомендациями по проведению медикобиологических исследований с использованием животных (Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (Хроника ВОЗ, 1985, т. 39, № 3, с. 3-9).

- 5 027433

Максимальный электросудорожный припадок (МЭШ) создавали с использованием сертифицированной установки Кос1еп1 8Ьоекег§ (Нагуагй ЛррагаШз, ϋ8Ά). Электрический стимул подавался через предварительно смоченные в физиологическом растворе специальные глазные электроды (50 Гц, 50 мА, длительностью 0,2 с) (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005, с. 277-294). Непосредственно после проведения МЭШ у всех (100%) мышей возникает тоническая экстензия задних и передних конечностей и затем клонические судороги и гибель животных. Противосудорожный эффект заявляемого соединения оценивали по его способности предупреждать тоническую экстензию и гибель животных. Регистрировали число (процент) животных у которых наблюдается защитный противосудорожный эффект и процент выживших после МЭШ мышей после введения соединения в различных дозах. На основании полученных данных методом пробит-анализа (ГйеййеЫ, АПсохоп) рассчитывали ЭД₁₆ - дозу, при введении которой противосудорожный эффект наблюдался у 16% животных и ЭД₅₀ - дозу, при введении которой противосудорожный эффект наблюдался у 50% животных.

Установлено, что соединение 1а в широком диапазоне доз от 1 до 12 мг/кг достоверно предупреждает как развитие тонической экстензии, так и гибель животных, вызванную проведением максимального электрошока (табл. 3).

Противосудорожный эффект соединения 1а зависит от дозы препарата и усиливается с ее повышением. В малой дозе 1 мг/кг соединение 1а предупреждает развитие тонических судорог у 30% мышей, в дозе 1,5 мг/кг - у 50%, в дозе 3,0 мг/кг - у 70%, в дозе 6,0 мг/кг - у 75% и в дозе 12 мг/кг - у 80% мышей.

Таблица 3

Влияние производных О-(2-К-оксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридина на судороги, вызванные максимальным электрошоком

Соединения	Доза мг/кг, внб	Процент выживших животных
Контроль	0	10
Соединение 1а	0,4	16,6
	1,0	30,0
	1,5	50,0*
	3,0	70,0*
	6,0	75,0*
	12.0	80,0*
Соединение 16	0,25	50,0*
	0,5	66,6*
	1,0	80,0*
	2,0	83,3*
Соединение 1в	2,0	50,0*
	4,0	50,0*
	10,0	50,0*
	20,0	16,6
Соединение 1ж	I- -и кз -ь ООО о о о	16,6 66,6* 66,6*
Соединение 1м	50,0 100,0	30,0 50,0*

* - Р<0,05 в сравнении с контролем.

Соединение 1б оказывает противосудорожное действие в тесте максимального электрошока в диапазоне доз от 0,25 до 2,0 мг/кг, соединение 1в - в диапазоне доз от 2,0 до 10 мг/кг, соединение 1ж - в диапазоне доз от 20 до 40 мг/кг, соединение 1о - в диапазоне доз от 50,0 до 100,0 мг/кг (табл. 3).

В качестве препаратов сравнения использовали карбамазепин и вальпроат кальция (конвульсофином) в субстанции. Исследуемые вещества вводили внутрибрюшинно за 30 мин до начала эксперимента.

Для соединения 1а, карбамазепина и вальпроата кальция (конвульсофина), методом П11сНПе1П, АПсохоп рассчитывали дозы, вызывающие начальный противосудорожный эффект у 10% животных (ЭД₁₀), дозы, вызывающие эффект у 50% животных (ЭД₅₀) и дозы, вызывающие эффект у большинства - 90%

- 6 027433 животных (ЭД₉₀) (табл. 4).

Начальная действующая доза соединения 1а, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель 10% мышей (ЭД₁₀) составляет 0,35(0,304-0,40) мг/кг, доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель 50% мышей (ЭД₅₀) - 2,1 (1,87-2,35) мг/кг и доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель большинства (90%) мышей (ЭД₅₀) - 13,5 (11,73-15,52) мг/кг (табл. 4).

По противосудорожной активности в тесте максимального электрошока соединение 1а значительно превосходит карбамазепин и вальпроат кальция. Начальная действующая доза карбамазепина, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель 10% мышей (ЭД₁₀) составляет 3,4 (2,80-4,11) мг/кг, доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель 50% мышей (ЭД50) - 9,2 (7,49-11,22) мг/кг и доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель большинства (90%) мышей (ЭД90) - 22,3 (18,4-26,98) мг/кг (табл. 4).

Для вальпроата кальция начальная действующая доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель 10% мышей (ЭД₁₀) составляет 40,1 (32,08-50,12) мг/кг, доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель 50% мышей (ЭД50) - 68,2 (52,86-84,56) мг/кг и доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель большинства (90%) мышей (ЭД90) - 110,5 (88,4-138,12) мг/кг (табл. 4).

Таким образом, производные О-(2-К-оксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридина обладают противосудорожным действием в тесте максимального электрошока. Выраженной активностью в этом тесте обладают соединения 1а, 1б, 1в и 1ж, которые предупреждают как развитие тонической экстензии, так и гибель животных, вызванную максимальным электрошоком.

Таблица 4

Сравнительная противосудорожная активность соединения 1 а карбамазепина и конвульсофина в тесте максимального электрошока

Вещества	Доза, мг/кг	% животн ых без тониче ских судоро г	% выживш их животн ых	ЭД10 Доза в мг/кг, вызывающая эффект у 10% животных	ЭД50 Доза в мг/кг, вызывающая эффект у 50% животных	ЭД90 Доза в мг/кг, вызывающая эффект у 90% животных
Контроль		16,6	16,6
Соединение 1а	0,4	16,6	16,6	0,35 (0,304+0,40) 8= 1,19, 1=1,15	2,1 (1,87+2,35) 8= 1,17, 1=1,12	13,5 (11,73+15,52) 8= 1,21, 1=1,15
Соединение 1а	1,0	30,0	30,0
Соединение 1а	1,5	50,0*	50,0*
Соединение 1а	3,0	70,0*	60,0*
Соединение 1а	6,0	75,0*	50,0*
Соединение 1а	12,0	80,0*	70,0*
Карбамазепин	5,0	25,0	20,0	3,4 (2,80+4,11) 8= 1,29, 1=1,21	9,2 (7,49+11,22) 8= 1,22, 1=1,23	22,3 (18,4+26,98) 8= 1,29, 1=1,21
Карбамазепин	10,0	50,0*	60,0*
Карбамазепин	20,0	90,0*	90,0*
Конвульсофин	30,0	10,0	10,0	40,1 (32,08+50,12) 8= 1,31, 1=1,25	68,2 (52,86+84,56) 8= 1,29, 1=1,24	110,5 (88,4+138,12) 8= 1,31, 1=1,25
Конвульсофин	50,0	25,0	25,0
Конвульсофин	100,0	86,0*	86,0*

* - Р< 0,05 в сравнении с контролем.

ЭД50 - доза, при введении которой противосудорожный эффект наблюдается у 50% животных, ЭД₁₀ - доза, при введении которой противосудорожный эффект наблюдается у 10% животных и ЭД₉₀ доза, при введении которой противосудорожный эффект наблюдается у 90% животных.

Противосудорожный эффект соединения 1а наблюдается в широком диапазоне доз, является дозозависимым и постепенно увеличивается с повышением дозы. Начальная действующая доза соединения 1а составляет 0,35 мг/кг, а доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибели большинства (90%) мышей (ЭД90) - 13,5 мг/кг. По противосудорожной активности в тесте максимального электрошока по показателю ЭД50 соединение 1а значительно превосходит карбамазепин (в 4,4 раза) и вальпроат кальция (в 32,5 раза).

- 7 027433

Пример 2. Противосудорожное действие производных О-(2-К-оксимов 3-(4хлор(фтор)бензоил)пиридина в тесте антагонизма с коразолом.

Тест антагонизма с коразолом является так же, как и тест максимального электрошока, базисной методикой при оценке действия веществ с противосудорожной активностью (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2005, с. 277-294; БоксНеге! а1., ТНе го1е оГ 1ссПп1са1. Ъю1ощса1 апй рНагтасо1одюа1 ГасЮгк ίη 1Пс 1аЪогаЮгу еуа1иайоп оГ апйсопуиЕай йгидк. III. Реп1у1епе1е1га/о1 5С1/иге тойек. Ерйерку Кек., 1991, ν. 8, р. 171189). В этой методике судороги вызываются химическим воздействием и моделируют первичногенерализованные судороги при так называемых малых (РеШ та1) судорожных припадках. Опыты проводили на белых беспородных мышах-самцах, массой 20-26 г. Животных содержали в виварии в одинаковых условиях обитания и кормления (стандартный брикетированный корм). С животными работали в соответствии с действующими Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных и Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (Хроника ВОЗ, 1985, т. 39, № 3, с. 3-9).

Коразол в дозе, вызывающей судороги у 97% животных (ЭД57), вводили подкожно в область шейного отдела спины. Животных наблюдали в течение 60 мин после инъекции коразола и регистрировали процент животных с наличием генерализованных клонических судорог с утратой рефлекса переворачивания, которые заканчивались гибелью животных. ЭД₉₇ рассчитывали методом пробит анализа (ЬйсЬйе1й, ХУПсохоп).

Для определения противосудорожной активности соединений коразол в дозе ЭД97 вводили подкожно на пике максимального эффекта соединений (через 30 мин после соединения) и затем осуществляли регистрацию судорог и гибели мышей в течение 60 мин отдельно у каждого животного. Животных, у которых не наблюдалось (после введения вещества и затем коразола) в течение 60 мин повторяющихся клонических судорог передних и/или задних конечностей длительностью более чем 3 с без потери и с потерей рефлекса переворачивания, тонических судорог и гибели, считали защищенными. Регистрировали латентное время 1-го генерализованного приступа и процент выживших животных. На основании полученных данных методом пробит-анализа (Ы1сНйе1й, ХУПсохоп) рассчитывали ЭД₅₀ - дозу, при введении которой противосудорожный эффект наблюдался у 50% животных, ЭД1₀ - дозу, при введении которой противосудорожный эффект наблюдался у 10% животных и ЭД₉₀ - дозу, при введении которой противосудорожный эффект наблюдался у 90% животных.

Рассчитанная доза коразола, при введении которой судороги и гибель возникают у 97% животных (ЭД97), составляет 95 мг/кг. У контрольных животных после введения коразола в дозе 95 мг/кг судорожные проявления развивались в следующей последовательности. 1. Одно или более миоклонических подергиваний всего тела - 100% мышей. 2. Повторяющиеся клонические судороги передних и/или задних конечностей длительностью более чем 3 с без потери рефлекса переворачивания - 100% мышей. 3. Генерализованные клонические судороги передних и задних конечностей с утратой рефлекса переворачивания - 90% мышей. 4. Тоническая экстензия передних конечностей с потерей рефлекса переворачивания. 5. Тоническая экстензия передних и задних конечностей с утратой рефлекса переворачивания - 90% мышей. 6. Гибель животных - 90% мышей. Латентное время наступления первого приступа генерализованных клонических судорог составило в среднем по контрольной группе 278,1 с.

Установлено, что соединение 1а обладает выраженным противосудорожным действием в тесте антагонизма с коразолом, достоверно увеличивая процент выживших животных. Противосудорожный эффект соединения 1а наблюдается в диапазоне доз от 6 до 12 мг/кг (табл. 5).

Среди изученных соединений выраженной достоверной противосудорожной активностью в тесте антагонизма с коразолом обладает также соединение 1ж в дозе 10 мг/кг (табл. 5).

- 8 027433

Таблица 5

Влияние производных О-(2-К-оксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридина на судороги, вызванные коразолом

Соединения	Доза мг/кг, внб	Процент выживших животных
Контроль	0	10
Соединение 1а	3,0	10,0
	6,0	40,0*
	10,0	50,0*
	12,0	50,0*
	20.0	16,6
Соединение 1в	5,0	25,0
	10,0	12,5
Соединение 1г	12,5	10,0
	25,0	16,6
	50,0	16,6
Соединение 1ж	10,0	83,3*
	20,0	16,6
Соединение 1и	12,5	10,0
	25,0	16,6
	50,0	10,0
Соединение 1м	12,5	10,0
	25,0	16,6
	50,0	10,0

* - Р< 0,05 в сравнении с контролем.

В качестве препаратов сравнения использовали карбамазепин и вальпроат кальция (конвульсофин). Исследуемые вещества вводили внутрибрюшинно за 30 мин до коразола.

Таблица 6

Сравнительная противосудорожная активность соединения 1 а карбамазепина и конвульсофина в тесте антагонизма с коразолом

Вещества	Доза, мг/кг	Латентное время 1-го приступа кпонических судорог, сек	% мышей с отсутствием судорог и гибели	эдю мг/кг	ЭД50 мг/кг	ЭД90 мг/кг
Контроль- Коразол 95 мг/кг		278,1 ±29,3	10%
Соединение1а +коразол	3,0	273 ±37,1	10%	3,1 (2,56- 3,75) 3= 1,29, 1=1,21	11,3 (8,35- 14,9) 8= 1,67, 1=1,32
Соединение!а +коразол	6,0	578,7 ± 52,6*	40%*
Соединение!а +коразол	10,0	581,6 ±48,5*	50%*
Соединение!а +коразол	12,0	524,9 ± 54,2*	50%*
Соединение!а +коразол	20,0	395,5 ±81,9	16%
Соединение!а +коразол	40,0	293,4 ± 72,5	16%

- 9 027433

Карбамазепин +коразол	10,0	281,8 ±78,3	0%	Нет эффекта
Карбамазепин +коразол	20,0	258,1 ±94,8	0%
Карбамазепин +коразол	40,0	243,7 ± 83,4	0%
Конвульсофин	50	264,3 ±95,7	10%	51,2 (43,8+ 62,5) 8= 1,22, ί=1,17	76,8 (65,1 + 95,2) 8= 1,24, 1=1,18	110,6 (94,4+129,4) 8= 1,22, 1=1,17
Конвульсофин	75	389,7 ± 73,*4	50%*
Конвульсофин	100	420,3 ±72,1*	83%*

Р< 0,05 в сравнении с контролем.

ЭД₅₀ - доза, при введении которой противосудорожный эффект наблюдается у 50% животных, ЭД₁₀ - доза, при введении которой противосудорожный эффект наблюдается у 10% животных и ЭД₉₀ доза, при введении которой противосудорожный эффект наблюдается у 90% животных.

Для соединения 1а, карбамазепина и вальпроата кальция (конвульсофина), методом ЬЛсЬйеШ, Ж1сохоп рассчитывали дозы, вызывающие начальный противосудорожный эффект у 10% животных (ЭД10), дозы, вызывающие эффект у 50% животных (ЭД₅₀) и дозы, вызывающие эффект у большинства - 90% животных (ЭД90).

Установлено, что соединение 1а в дозах 3,0-12 мг/кг обладает противосудорожным действием в тесте антагонизма с коразолом, что выражается в достоверном увеличении латентного времени наступления судорог и предупреждении судорог и гибели животных. Показано, что в дозах 6 и 12 мг/кг соединение 1 увеличивает латентное время наступления судорог в 1,9 раза (табл. 6).

Рассчитанная начальная действующая доза соединения 1, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибели 10% мышей (ЭД₁₀) в тесте антагонизма с коразолом, составляет 3,1 (2,56-3,75) мг/кг, а доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель 50% мышей (ЭД₅₀) - 11,3 (8,3514,9) мг/кг (табл. 6).

Карбамазепин в широком диапазоне доз от 10 до 40 мг/кг не обладает активностью в тесте антагонизма с коразолом (табл. 6).

Для вальпроата кальция начальная действующая доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель 10% мышей (ЭД₁₀), составляет 51,2 (43,8-62,5) мг/кг, доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель 50% мышей (ЭД50) - 76,8 (65,1-95,2) мг/кг и доза, при которой наблюдается предупреждение судорог и гибель большинства (90%) мышей (ЭД90) - 110,6 (94,4-129,4) (табл. 6).

Таким образом, производные О-(2-К-оксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридина обладают противосудорожным действием в тесте антагонизма с коразолом. Выраженной активностью в этом тесте обладает соединение 1а, которое увеличивает латентный период наступления судорог и предупреждает развитие судорог и гибель животных. Противосудорожный эффект соединения 1а является дозозависимым и постепенно увеличивается с повышением дозы, достигает 50%, но потом уменьшается. По противосудорожной активности в тесте антагонизма с коразолом по показателю ЭД50 соединение 1а значительно (в 6,8 раз) превосходит вальпроат кальция и карбамазепин, который не обладает активностью в этом тесте.

Пример 3. Противосудорожное действие оксалата соединения 1а на первично- и вторичногенерализованную судорожную активность мозга крыс с хроническим кобальт-индуцированным эпилептогенным очагом.

Опыты проводили на белых беспородных крысах самцах массой 280-300 г. Хронический кобальтовый эпилептогенный очаг создавался аппликацией порошка металлического кобальта на поверхность двигательной области (сенсомоторной) коры левого полушария мозга крыс по стандартной методике (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005. - с. 277-294; ШаИоп Ν.Υ. е! а1., ЬатоШдте νδ. рйепу1от Гог 1геа1теп1 оГ δίοίιΐδ ерйерйсиз: сотрайзоп ίη ап ехрептеп1а1 тобе1. Ерйерзу Кез., 1996, ν. 24, р. 19-28). В кости черепа крысы просверливалось трепанационное отверстие, в которое вводилась стеклянная канюля с порошком кобальта (диаметр канюли соответствовал диаметру отверстия и не превышал 1 мм). Канюля опускалась на поверхность коры (твердая мозговая оболочка предварительно вскрывалась тонкой инъекционной иглой). У всех крыс эпилептогенный очаг локализовался в сенсомоторной области коры левого полушария по следующим координатам: 1 мм вперед от брегмы и 1 мм в сторону от сагиттального шва. Животным вживлялись долгосрочные электроды в двигательную зону коры правого и левого полушарий, дорзальный отдел гиппокампа справа и слева, хвостатое ядро справа и латеральные ядра гипоталамуса. В субкортикальные структуры электроды вживлялись с помощью стереотаксического прибора. Операции по вживлению электродов проводились под нембуталовым наркозом (50 мг/кг). Корковые электроды изготавливались из нихромовой проволоки диаметром 120 мкм в лаковой изоляции. Кончик электрода

- 10 027433 зачищался. В качестве подкорковых электродов использовалась нихромовая проволока диаметром 70-90 микрон. Концы электродов припаивались к серебряным штырькам, которые крепились на поверхности черепа зубным висфат-цементом протакрилом. Запись электрической активности производилась в условиях свободного передвижения животного по экспериментальной камере. Для того чтобы избежать артефактов от движения штырьков, использовались специальные пружинные контакты. Отводящие провода помещались в общий экран, который заземлялся. Все вышеуказанные приспособления позволяли производить безартефактную запись электроэнцефалограмм крыс в условиях свободного поведения животных. Регистрацию биоэлектрической активности проводили с использованием 21-канального нейрографа Нейро-КМ, работающего на базе ΙΒΜ-РС с установленными фильтрами на 32 Гц и постоянной времени 0,3.

Компьютерный анализ ЭЭГ осуществлялся с помощью программы ΒΚΆΙΝδΥδ. Программный комплекс выполнял следующие функции: ввод в компьютер многоканальной ЭЭГ и ее визуальное редактирование, включающее фильтрацию (использовался полосовой фильтр в интервале частот от 32 до 1,5 Гц), выделение артефактов и их устранение из анализируемого отрезка ЭЭГ; спектральный анализ ЭЭГ и статистическую обработку полученных результатов.

Аппликация кобальта на кору головного мозга крысы вызывает гиперактивность нейронов, локализованных в месте введения, что выражается в появлении эпилептиформных пароксизмальных разрядов на ЭЭГ. Формирующийся эпилептогенный очаг является началом развития динамической постоянно усложняющейся структурно-функциональной эпилептической системы (ЭС). Функциональная организация этой системы характеризуется наличием детерминантного и зависимого очагов; детерминантный очаг усиливает и синхронизирует активность других очагов, объединяя их в единый комплекс. В развитии эпилептической системы, вызванной аппликацией кобальта на сенсомоторную кору мозга, выделяют несколько стадий. Основными из них являются стадия формирования первичного и вторичного эпилептогенных очагов через 24-48 ч после операции, стадия генерализованной эпилептиформной активности (ЭпА) в различных структурах мозга со стабильным уровнем синхронизированных пароксизмальных разрядов на 5-6 день после аппликации кобальта.

Влияние соединения 1а на эпилептиформную активность мозга крыс изучалось при однократном (внутрибрюшинном) введении вещества в дозе 6,5 мг/кг. Исследовалось влияние вещества на разные стадии формирования эпилептической системы. После введения вещества регистрация ЭЭГ проводилась в течение 60 мин.

На первой стадии формирования ЭС (через 24-48 ч после операции) установлено, что уже через 30 мин после введения вещества число разрядов ЭпА (в среднем за 1 мин) достоверно снижается в электрокортикограммах с двух сторон (ипси- и контрлатеральная кора) (табл. 7) и наблюдается также укорочение средней длительности разрядов в этих структурах.

Таблица 7

Влияние соединения 1а на число судорожных разрядов в электрограммах различных структур мозга крыс с кобальт-индуцированным эпилептогенным очагом на первой стадии формирования эпилептической системы

Структуры мозга	Контроль (фон)- Число разрядов ЭпА за минуту	Соединение 1а (6,5 мг/кг) Число разрядов ЭпА за минуту
Кора ипсилатеральная	5,2 ±0,8	3,6 ± 0,74*
Кора контрлатеральная	7,98 ± 0,7	5,7 ± 0,32*
Хвостатое ядро	7,2 ±0,51	8,03 ±0,81
Гипокамп ипсилатеральный	8,1 ± 1,22	9,5 ± 1,28

* Р< 0,01 по сравнению с контролем.

- 11 027433

Таблица 8

Влияние соединения 1а на число судорожных разрядов в различных структурах мозга крыс с кобальт-индуцированным эпилептогенным очагом на второй стадии формирования эпилептической системы

Структуры мозга	Контроль (фон)- Число разрядов ЭпА за минуту	Соединение 1а (6,5 мг/кг) Число разрядов ЭпА за минуту
Кора ипсилатеральная	2,7 ±0,53	3,1 ±0,65
Кора контрлатеральная	3,8 ±0,41	1,9 ±0,32*
Гиппокамп контрлатеральный	6,1 ±0,52	4,1 ±0,43*

*Р< 0,01 по сравнению с контролем.

На второй стадии развития эпилептической системы (5-6 день после операции), при наличии сформированной генерализованной эпилептической активности, когда сформированы вторичные очаги в контрлатеральной коре и подкорковых структурах, однократное введение соединения 1а в дозе 6,5 мг/кг вызывает достоверное уменьшение числа разрядов в электрограммах контралатеральной сенсомоторной коры и в контралатеральном дорзальном гиппокампе, т.е. во вторичных очагах (табл. 8).

Таким образом, на модели парциальной эпилепсии у крыс с кобальт-индуцированным эпилептогенным очагом соединение 1а оказывает выраженное противосудорожное действие, достоверно уменьшая число судорожных разрядов в различных структурах мозга как на первой, так и на второй стадиях формирования эпилептической системы. При этом на первой стадии наиболее заметное уменьшение числа судорожных разрядов на ЭЭГ наблюдается в электрограммах первичного очага - в ипсилатеральной коре, а в развернутую 2 стадию уменьшение разрядной активности отмечается во вторичных очагах - в контрлатеральной коре и контрлатеральном дорзальном гиппокампе. Таким образом, на модели парциальной эпилепсии соединение 1а оказывает достоверный противосудорожный эффект как на первичные, так и на вторичные эпилептические очаги.

Пример 4. Противосудорожное действие оксалата пиридина (соединение 1а) при эпилептическом статусе.

Эксперименты проводили на белых беспородных крысах самцах массой тела 250-300 г. Сначала у крыс согласно методике, описанной в примере 3, создавали кобальт-индуцированный эпилептогенный очаг и вживляли хронические электроды в различные структуры мозга. На 7-8 день после аппликации кобальта, когда у всех крыс отмечаются стойкие изменения электрической активности в структурах мозга и наблюдаются моторные судорожные проявления в виде клонических подергиваний передних лап или головы, проводили провокацию эпилептического статуса по методике описанной ранее (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005. - с. 277-294; А'аНоп Ν.Υ. е! а1., БашоДщте νδ. рНепу1от Гог 1геа1шеп1 оГ §1аΗΐδ ерПерДеш: еошрапзоп т ап ехрепшеп1а1 шобе1. БрПерзу Ке§., 1996, ν. 24, р. 19-28).

Эпилептический статус вызывали внутримышечным введением гомоцистеина тиалактона (1)ЕНошоеу§1ете 1Ню1ае1опе, НСТ) в дозе 5,5 ммоль/кг, разводимого в 3.5 мл/кг нормального физиологического раствора непосредственно перед использованием. Биоэлектрическую активность мозга крыс регистрировали в течение 15 мин до (фоновая регистрация) и в течение 2 ч после введения нейротоксина. Для оценки способности веществ устранять развившийся эпилептический статус соединение 1 в дозе 6,5 мг/кг вводили внутрибрюшинно непосредственно после регистрации фоновой активности за 15 мин до введения нейротоксина. Контрольной группе животных в те же сроки вводили физиологический раствор в равных объемах. Способность вещества устранять эпилептический статус оценивали по уменьшению числа эпилептических разрядов в электрограммах различных структур мозга после введения нейротоксина гомоцистеина тиолактона.

У всех контрольных животных (100%) после введения нейротоксина НСТ наблюдались судорожные эпилептические разряды в электрограммах различных структур мозга, которые завершались вторично-генерализованными клонико-тоническими приступами, что характеризует развитие эпилептического статуса.

Соединение 1а существенно и достоверно уменьшало число судорожных эпилептических разрядов в электрограммах различных структур мозга: контрлатеральной коре, хвостатом ядре, гипоталамусе, ипси- и контрлатеральном гиппокампе (табл. 7). При этом на электрограммах всех исследуемых структур регистрировались билатеральные разряды медленных волн с заостренными вершинами.

Соединение 1а полностью устраняло моторные судорожные проявления эпилептического статуса у 66,6% животных, и моторные вторично генерализованные тонико-клонические припадки развивались только у 33% крыс и у этих животных их число было достоверно меньше, чем в контроле (табл. 9).

При эпилептическом статусе у контрольных животных лидирующей структурой мозга, в которой в

- 12 027433 первую очередь по временным характеристикам, возникает вторично-генерализованный эпилептический приступ с наибольшей разрядной активностью, является гипоталамус (вторичный очаг) (табл. 9).

Соединение 1а достоверно снижает процент разрядной активности в ведущей структуре - гипоталамусе и несколько увеличивает процент активности в сенсомоторной ипси- и контралатеральной коре и хвостатом ядре (табл. 9).

Таблица 9

Противосудорожный эффект соединения 1а при эпилептическом статусе
Структуры мозга	Контроль, число разрядов ЭпА	Соединение 1а (6,5 мг/кг) число разрядов ЭпА
	за минуту	за минуту
Кора ипсилатеральная	9,8 ±0,21	8,5 ±0,54
Кора контрлатеральная	17,7 ±0,24	11,7 ±0,45*
Хвостатое ядро	26,8 ±0,18	10,3 ±0,32*
Г ипоталамус	13,8 ±0,45	5,7 ± 0,48*
Гиппокамп ипсилатеральный	17,2 ±0,27	12,3 ±0,37*
Гиппокамп контрлатеральный	20,4 ±0,12	9,5 ± 0,47*

* Р< 0,01 по сравнению с контролем.

Полученные данные свидетельствуют о том, что соединение 1а вызывает не только смену лидирующей при эпилептическом статусе структуры - гипоталамуса, но и достоверно снижает разрядную активность во вторичном очаге - гипоталамусе, что свидетельствует о выраженном влиянии соединения 1а на эпилептический статус.

Таким образом, при эпилептическом статусе соединение 1а достоверно уменьшает число судорожных эпилептических разрядов как в первичных, так и вторичных очагах эпилептической активности, а именно, в контрлатеральной коре, хвостатом ядре, гипоталамусе, ипси- и контрлатеральном гиппокампе и устраняет моторные судорожные проявления эпилептического статуса - вторично генерализованные тонико-клонические припадки.

Пример 5. Изучение побочных нейротоксических эффектов и острой токсичности соединение 1а.

Эксперименты проводили на белых беспородных мышах-самцах, массой 20-26 г, которых содержали в виварии в одинаковых условиях обитания и кормления (стандартный брикетированный корм). С животными работали в соответствии с действующими Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных и Международными рекомендациями по проведению медикобиологических исследований с использованием животных (Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (Хроника ВОЗ, 1985, т. 39, № 3, с. 3-9).

Исследование возможных побочных нейротоксических эффектов изучали в тестах вращающегося стержня, перевернутой сетчатой платформе и тесте залезания на сетку, которые описаны в Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологических веществ, Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005, с. 277-294).

Неврологический дефицит (нарушение координации движений, миорелаксация) оценивали в сертифицированной методике вращающегося стержня (Ко1а Коб фирма Идо Вазйе). Использовали стержень диаметром 2,5 см и скоростью вращения 6 оборотов в 1 мин. Животных помещали на вращающийся стержень и они, перебирая лапами, удерживались на нем. Неспособность животных удерживаться на вращающемся стержне в течение 1 мин, хотя бы один раз из 3-х попыток, учитывалась как показатель нарушения координации движений.

Соединение 1а использовали в широком диапазоне доз: 1, 3, 6, 12, 20, 40, 100 и 200 мг/кг. Соединение 1а вводили однократно, внутрибрюшинно и регистрацию эффектов осуществляли через 30 мин после введения.

Установлено, что контрольные мыши удерживаются на вращающемся стержне по несколько минут и у них не наблюдается нарушения походки, поз, мышечного тонуса. Кроме того, оценивали способность животных удерживаться на перевернутой сетчатой платформе и в тесте залезания на сетку (табл. 10).

Установлено, что соединение 1а в диапазоне доз от 1 до 200 мг/кг не вызывает побочных эффектов: проявлений неврологического дефицита, миорелаксации и седации в тестах удерживания на вращающемся стержне, удерживания на перевернутой сетчатой платформе и в тесте залезания на сетку (табл. 10).

В изученных дозах соединение 1а не вызывает повышения или снижения возбудимости, тремора,

- 13 027433 судорожных проявлений, киперкинезов подергиваний, изменения цвета кожных покровов и слизистых, взъерошивания шерсти, каталепсии, птоза, стереотипии и груминга. Не изменяются болевой, роговичный и пиннеальный рефлексы.

Таблица 10

Изучение побочных нейротоксических эффектов соединения 1 а

Вещества	Доза, мг/кг	Удерживание на вращающемся	Удерживание на перевернутой	Залезание на сетку
Контроль Соединением	1,0	стержне 100% (10/10) 90% (9/10)	сетчатой платформе 100% (10/10) 100% (10/10)	80% (8/10) 90% (9/10)
Соединением	3,0	100% (10/10)	100% (10/10)	100% (10/10)
Соединением	6,0	100% (9/9)	90% (9/10)	90% (9/10)
Соединением	12,0	100% (9/9)	100% (9/9)	90% (9/10)
Соединением	20,0	100% (10/10)	100% (10/10)	100% (10/10)
Соединением	40,0	100% (10/10)	100% (10/10)	100% (10/10)
Соединением	100	100% (9/10)	90% (9/10)	80% (8/10)
Соединение!а	200	90% (9/10)	90% (9/10)	80% (8/10)

Изучение острой токсичности соединения 1 а было проведено на белых беспородных мышах-самцах массой 25-30 г. Соединение 1а вводили однократно, внутрибрюшинно в дозах 50, 100, 200, 300, 350, 400, 450 мг/кг. Регистрацию гибели животных проводили через 24 и 48 ч после введения соединения 1а.

Таблица 11

Изучение острой токсичности соединения 1а

Установлено, что соединение 1а при введении в дозах 50 мг/кг не вызывает гибели мышей через 24 ч после введения. При введении соединения 1а в дозе 100 мг/кг наблюдается гибель 10% животных (1 из 10), в дозе 200 мг/кг - 33,3% животных (2 из 6) и в дозе 400 мг/кг - 50% (3 из 6) мышей (табл. 11).

Таким образом, величина ЛД₅₀ у мышей для соединения 1а при его однократном внутрибрюшинном введении составляет более 400 мг/кг.

Полученные данные свидетельствуют о том, что соединение 1а в диапазоне доз от 1 до 200 мг/кг не вызывает побочных эффектов в виде проявлений неврологического дефицита, миорелаксации и седации.

Терапевтический индекс, вычисляемый соотношением дозы, вызывающей неврологический дефицит (более 200 мг/кг) и специфический противосудорожный эффект (в тесте максимального электрошока ЭД₅₀ = 2,1 мг/кг) для соединения 1а составляет величину более 100. Соединение 1а обладает низкой токсичностью - величина ЛД50 у мышей для соединения 1а при его однократном внутрибрюшинном введении составляет более 400 мг/кг, а терапевтическая широта, вычисляемая соотношением токсической (400 мг/кг) и терапевтической (2 мг/кг) доз составляет величину 200.

Заключение.

Таким образом, производные О-(2-К-оксимов 3-(4-хлор(фтор)бензоил)пиридина обладают выраженным противосудорожным действием, оказывая влияние на судороги, вызванные максимальным электрошоком и коразолом. В частности, оксалат О-(2-диметиламиноэтил) оксима 3-(4-хлорбензоил)пиридина (соединение 1а) обладает широким спектром противосудорожных эффектов, оказывая влияние на судороги различного генеза в тестах максимального электрошока, антагонизма с коразолом, очаговой кобальт-индуцированной эпилепсии, эпилептического статуса. Противосудорожный эффект соединения 1а наблюдается в широком диапазоне доз, является дозозависимым. На моделях первичногенерализованной эпилепсии соединение 1а обладает высокой противосудорожной активностью: в тесте максимального электрошока по показателю ЭД₅₀ (2,1 (1,87-5-2,35) мг/кг) соединение 1а значительно пре- 14 027433 восходит карбамазепин (в 4,4 раза) и вальпроат кальция (в 32,5 раза), а в тесте антагонизма с коразолом соединение 1а превосходит (в 6,8 раз) вальпроат кальция и карбамазепин, который не обладает активностью в этом тесте.

На модели парциальной эпилепсии у крыс с кобальт-индуцированным эпилептогенным очагом в сенсомоторной области коры соединение 1а оказывает противосудорожный эффект как на первичные, так и на вторичные эпилептические очаги, достоверно уменьшая число судорожных разрядов в различных структурах мозга как на первой (в ипсилатеральной коре), так и на второй (в контрлатеральной коре и контрлатеральном дорзальном гиппокампе) стадиях формирования эпилептической системы.

При эпилептическом статусе, вызванным провокацией нейротоксином гомоцистеин тиолактоном у кобальт-индуцированных крыс, соединение 1а достоверно уменьшает число судорожных эпилептических разрядов в структурах мозга: контрлатеральной коре, хвостатом ядре, гипоталамусе, ипси- и контрлатеральном гиппокампе и устраняет моторные судорожные проявления эпилептического статуса - вторично генерализованные тонико-клонические припадки.

Соединение 1а в диапазоне доз от 1 до 200 мг/кг не вызывает побочных эффектов в виде проявлений неврологического дефицита, миорелаксации и седации и, таким образом, терапевтический индекс, вычисляемый соотношением дозы, вызывающей неврологический дефицит (более 200 мг/кг) и специфический противосудорожный эффект (в тесте максимального электрошока ЭД₅₀ = 2,1 мг/кг) для соединения 1 составляет величину более 100. Соединение 1а обладает низкой токсичностью - величина ЛД₅₀ составляет более 400 мг/кг.

Claims (9)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Производное оксима бензоилпиридина общей формулы

   МОК или его соли в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из -СН₂СН₂К\ -СОК²;

   К¹ выбран из ; И(СН₃)₂;

   С1

   К² выбран из ; ;

   X выбран из С1, Е, за исключением оксалатных солей соединения, у которого К обозначает -СН₂СН₂К\ К¹ обозначает

   И(СН₃)₂, X обозначает С1, Е.
2. 2. Применение производного оксима бензоилпиридина общей формулы

   МОК или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из -СН₂СН₂К\ -СОК²;

   ₁ < р /Л

   К¹ выбран из ; ; И(СН₃)₂;

   С1

   К² выбран из ;

   X выбран из С1, Е, в качестве противосудорожного средства.
3. 3. Применение производного оксима бензоилпиридина общей формулы

   ΝΟΚ или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из -СН₂СН₂К\ -СОК²;

   1 к >

   К¹ выбран из ; И(СН₃)₂;

   К² выбран из X выбран из С1, Е,

   С1

   - 15 027433 для профилактики или лечения пароксизмальных состояний.
4. 4. Применение производного оксима бензоилпиридина по п.3 для профилактики или лечения эпилепсии.
5. 5. Способ получения производного оксима бензоилпиридина общей формулы

   ЖСНзЬ;

   или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из -СН₂СН₂К?;

   ₁ Ь |/ V

   К¹ выбран из ;

   X выбран из С1, Р, путем взаимодействия соединения общей формулы где X определен выше, с соединением общей формулы С1-СН₂СН₂К¹, где К¹ определен выше.
6. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что взаимодействие осуществляют в присутствии гидрида натрия в ДМФА, полученное основание растворяют в спирте, добавляют сухую щавелевую кислоту и выделяют целевой продукт.
7. 7. Способ получения производного оксима бензоилпиридина общей формулы или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из -СОК²;

   К² выбран из X выбран из С1, Р, путем взаимодействия соединения общей формулы где X определен выше, с соединением общей формулы К²СОС1, где К² определен выше.
8. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что взаимодействие осуществляют в присутствии триэтиламина при кипячении.
9. 9. Лекарственная форма, содержащая производное оксима бензоилпиридина общей формулы или его солей в виде сукцината, фумарата, оксалата, малеата, где К выбран из_-СН₂СН₂К¹, -СОК²;

   К¹ выбран из ; Ы(СН₃)₂;

   К² выбран из X выбран из С1, Р, в эффективном количестве для применения в качестве противосудорожного средства.