EA025823B1

EA025823B1 - Способ получения f-18 меченых лигандов бета-амилоида

Info

Publication number: EA025823B1
Application number: EA201201646A
Authority: EA
Inventors: Матиас Берндт; Маттиас Фрибе; Кристина Хульч; Фабрис Самсон; Сён Юн Ох; Кристоф Смуда
Original assignee: Пирамаль Имэджинг Са
Priority date: 2010-06-04
Filing date: 2011-05-30
Publication date: 2017-02-28
Also published as: MX2012014115A; US20130217920A1; JP2013532136A; AU2011260420A1; EA201201646A1; CN103328011A; BR112012030946A2; TW201210620A; EP2575898A1; SG185785A1; EP2575898B8; WO2011151282A1; EP2575898B1; TWI556832B; KR20130088117A; CA2801534A1

Abstract

Настоящее изобретение относится к способу получения соединения I, который включает стадии введения радиоактивной метки в соединение формулы II с помощью F-18 фторирующего агента, с получением соединения формулы I, если R = Н, или получением соединения формулы III, если R = PG, где используют 7,5-75 мкмоль соединения формулы II и где радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей, если R = PG, отщепления защитной группы PG с получением соединения формулы I и очистки соединения формулы I

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к способам, которые обеспечивают доступ к [Р-18]фторпегилированным производным (арил/гетерарил винил)фенил метиламина.

Предпосылки создания изобретения

Болезнь Альцгеймера (АО) представляет собой прогрессирующее нейродегенеративное нарушение, характеризующееся потерей памяти, познавательных способностей и стабильности поведения. АО определяется патологически с помощью внеклеточных сенильных бляшек, состоящих из фибриллярных отложений бета-амилоидного пептида (Αβ) и нейрофибриллярных клубков, состоящих из спаренных спиральных филаментов гиперфосфорилированного тау. 39-43 аминокислоты, включающие Αβ пептиды, имеют происхождение из более крупного предшественника амилоидного белка (АРР). В амилоидогенном метаболическом пути, Αβ пептиды отщепляются от АРР путем последовательного протеолиза с помощью бета- и гамма-секретаз. Αβ пептиды высвобождаются в виде растворимых белков и обнаруживаются в незначительных концентрациях в цереброспинальной жидкости (С8Р) в нормальном стареющем головном мозге. При прогрессировании АО Αβ пептиды агрегируют и образуют амилоидные отложения в паренхиме и сосудистой сети головного мозга, которые могут быть обнаружены посмертно в виде диффузных и сенильных бляшек и сосудистого амилоида при осуществлении гистологического анализа (недавний обзор см.: В1еиио№ и др. ЬапсеЬ 2006 Йи1 29; 368(9533): 387-403).

Болезнь Альцгеймера (АО) становится большой медицинской и социально-экономической проблемой во всем мире. Большие усилия направлены на разработку техник и методов для раннего обнаружения и эффективного лечения заболевания. В настоящее время, диагноз АО по академическим клиническим параметрам нарушений памяти составляет приблизительно 85-90% точности (Ре4ге11а Ж и др. Рафорду. 2003 226:315-36). Он основывается на исключении различных заболеваний, вызывающих сходные симптомы, и тщательном неврологическом и психиатрическом исследовании, а также на нейропсихологическом тестировании.

Молекулярная визуализация является эффективной для более раннего обнаружения прогрессирования заболевания или терапевтической эффективности по сравнению с другими наиболее распространенными методами в области неврологии, онкологии и кардиологии. Среди нескольких перспективных технологий молекулярной визуализации, таких как оптическая визуализация, МР1, БРЕСТ и РЕТ, РЕТ представляет чрезвычайный интерес относительно разработки лекарственных средств в связи с их высокой чувствительностью и способностью обеспечивать количественные и кинетические данные.

Например, позитронно-активные изотопы включают, например углерод, йод, азот и кислород. Эти изотопы могут заменять их нерадиоактивные аналоги в целевых соединениях с получением РЕТ индикаторов, которые обладают аналогичными биологическими свойствами. Из этих изотопов Р-18 является предпочтительным изотопом для мечения в связи с его периодом полураспада 110 мин, который предоставляет возможность приготовления диагностических индикаторов и последующего изучения биохимических процессов. Дополнительно, их низкая β+ энергия (634 кэВ) также является благоприятной.

Посмертное гистологическое исследование главного мозга все еще остается единственной достоверной диагностикой болезни Альцгеймера. Таким образом, полагают, что ίη νίνο обнаружение одной патологической характерной особенности заболевания - отложения амилоидных агрегатов в головном мозге - будет оказывать сильное влияние на ранее выявление АО и дифференциацию ее от других форм деменции. Дополнительно, большинство терапий, модифицирующих заболевание, которые разрабатываются, нацелены на снижение амилоидной нагрузки в головном мозге. Таким образом, визуализация амилоидной нагрузки в головном мозге может обеспечивать существенный инструмент для стратификации пациентов и мониторинга лечения (недавний обзор см.: ЫогйЬегд. Еиг. ί. Ыис1. Мей. Мо1. Ипадтд. 2008 Маг; 35 8ирр1 1:846-50). Дополнительно, также известно, что амилоидные отложения принимают участие в амилоидозах, при которых амилоидные белки (например, тау) атипично отложены в различных органах и/или тканях, вызывая заболевание. Недавний обзор см. СЬШ е1 а1. Аппи Кеу. ВюсЬет. 2006; 75:333-66.

Поскольку нуклеофильное радиоактивное фторирование осуществляют с использованием нано- и суб-наномолярных количеств [Р-18]фторида хорошо известно, что только небольшие количества введения меченого предшественника необходимо для достаточного введения радиоактивной метки. В целом, несколько микромоль предшественника обеспечивают большой избыток по отношению к радиоактивным изотопам, что приводит к реакционным кинетикам псевдо-первого порядка (Р/ν. МШег е1 а1., Апд. СЬет. 1пЬ Ей. 47 (2008), 8998-9033).

Прямое радиоактивное фторирование фторпегилированных бис-арил/гетероарил Αβ лигандов Ь описано в литературе.

1η = 2-6

Агу1—Χ-ΑΓγΙ-ί-Ο'^Μί' X = Связь, СН=СН, ОС ь

- 1 025823

а) Дифенилацетилены В (К. Сйапйга с1 а1. 1. Мей Сйет. 50 (2007), 2415-2423)

Мечение радиоактивном изотопом 1 мг (1,83-2,48 мкмоль) предшественника А в ДМСО, используя комплекс карбонат калия/криптофикс, обеспечивало получение В с радиохимическим выходом 20-30% (с поправкой на разложение).

й) Индолинил- и индолилфенилацетилены Ό (К. е1 а1. 1. Мей Сйет. 50 (2007), 2415-2423)

Мечение радиоактивном изотопом предшественника С в ДМСО, используя комплекс карбонат калия/криптофикс, обеспечивало получение Ό с радиохимическим выходом 11-16% (с поправкой на разложение).

Мечение радиоактивном изотопом 0,2 мг (0,35-0,42 мкмоль) предшественника Е в ДМСО, используя комплекс карбонат калия/криптофикс, обеспечивало получение Р с радиохимическим выходом 5-13% (с поправкой на разложение).

й) Производные фен-нафталина и фен-хинолина Н (\УО 2008/124812)

Мечение радиоактивном изотопом 1 мг (<2,11 мкмоль) предшественника О в ДМСО, используя комплекс карбонат калия/криптофикс, обеспечивало получение Н с радиохимическим выходом 30% (с поправкой на разложение).

Мечение радиоактивном изотопом предшественника I в ДМСО, используя комплекс карбонат калия/криптофикс, обеспечивало получение Н с радиохимическим выходом 11-35% (с поправкой на разложение). Исследовали влияние количества предшественника (пример п = 2), и было обнаружено, что оптимальным для этого типа превращения является 1-3 мг (1,91-5,74 мкмоль).

- 2 025823

Также фторпегилированные (арил/гетерарил винил)фенил метиламины, такие как 4-[(Е)-2-(4-{2-[2(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Ы-метиланилин и 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-Ы-метиланилин метили с помощью Р-18 фторида ранее, и они описаны в патентных заявках \νϋ 2006/066104, \νϋ 2007/126733 и представителях соответствующих патентных семейств.

4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Ы-метиланилин

4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-Ы-метиланилин;

a) V. Ζ1ιηη§ е! а1., Ыис1еаг Мебюше аиб Вю1оду 32 (2005) 799-809.

мг (7,47 мкмоль) предшественника 2а (2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(третбутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]этил метансульфонат) в 0,2 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [Р-18]фторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью НС1 и нейтрализовали с помощью ЫаОН. Смесь экстрагировали с помощью этил ацетата. Растворитель высушивали и упаривали. Остаток растворяли в ацетонитриле и очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. 20% (с поправкой на разложение), 11% (без поправки на разложение) 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Ы-метиланилина получали в течение 90 мин.

b) νθ 2006/066104.

мг (7,47 мкмоль) предшественника 2а (2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]этил метансульфонат) в 0,2 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [Р-18]фторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью НС1 и нейтрализовали с помощью ЫаОН. Смесь экстрагировали с помощью этил ацетата. Растворитель высушивали и упаривали, остаток растворяли в ацетонитриле и очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. 30% (с поправкой на разложение), 17% (без поправки на разложение) 4-[(Е)2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Н-метиланилина получали через 90 мин.

В последнее время были описаны дополнительные синтезы.

а) И8 20100113763.

2а (2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]этил метансульфонат) подвергали реакции с [Р-18]фторидным реагентом в смеси 500 мкл третспирта и 100 мкл ацетонитрила. После фторирования растворитель упаривали и добавляли смесь НС1 и ацетонитрила. После снятия защиты (нагревание при 100-120°С) смесь неочищенного продукта очищали путем ВЭЖХ (С18, 60% ацетонитрил, 40% 0,1 М формиат аммония). Показано, что при низком уровне активности [Р-18]фторида (4,1 мКи = 0,15 ГБк), получали сходные выходы с 2-10 мг предшественника. В отличие от опубликованных данных, нами было обнаружено, что при более высоких уровнях активности

- 3 025823 [Р-18]фторида (например, 30-55 ГБк) выходы существенно зависят от количества предшественника (пример 2). Дополнительно и в отличие от опубликованных данных, выходы, представленные в примере 2, относится к продукту, пригодному для использования на людях, полученного с помощью полного процесса приготовления.

Ь) Н. \Уапд е1 а1., Ыис1еаг Мебюше апб Вю1оду 38 (2011).

121-127 5 мг (9,33 мкмоль) предшественника 2а (2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(третбутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]этил метансульфонат) в 0,5 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [Р-18]фторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью НС1 и нейтрализовали с помощью ΝαΟΗ. Неочищенный продукт разводили с помощью ацетонитрила/0,1 М формиата аммония (6/4) и очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта собирали, разводили водой, пропускали через С18 картридж и элюировали с помощью этанола, получая 17% (без поправки на разложение) 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]А-метиланилина в течение 50 мин. В публикации, превращение незащищенного мезилатного предшественника (описано: 5 мг (11,48 мкмоль) незащищенного мезилатного предшественника (2-{2-[2-(4-{(Е)-2-[4-(метиламино)фенил]винил}фенокси)этокси]этокси}этил 4-метансульфонат) в 0,5 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [Р-18]фторид/криптофикс/карбонат калия. Неочищенный продукт разводили с помощью ацетонитрила/0,1 М формиата аммония (6/4) и очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта собирали, разводили водой, пропускали через С18 картридж и элюировали с помощью этанола, получая 23% (без поправки на разложение) 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]Аметиланилина в течение 30 мин.

4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р-18]Фторэтокси)этокси]этокси)пиридин-3-ил)винил]А-метиланилин

4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)пиридин-3-ил]А-метиланилин.

a) δ.Κ. ί'Ίιοί е1 а1., ТЬе 1оитпа1 о£ №ю1еаг Мебюше, 50 (2009), 1887-1894. 1 мг предшественника (1,63 мкмоль) 2Ь (2-{2-[2-({5-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]пиридин-2ил}окси)этокси]этокси}этил 4-метилбензолсульфонат) в 1 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [Р-18]фторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью НС1 и нейтрализовали с помощью №ЮН. ДМСО и неорганические компоненты удаляли путем твердофазной экстракции на картридже 8ерРак Ь§Ь( С18 (^Ма1егк). Неочищенный продукт очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта разводили водой и пропускали через 8ерРак ЬдЫ С18 картридж. Радиоактивный индикатор элюировали с помощью этанола. Выход для 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]А-метиланилина составил 10-30% (с поправкой на разложение).

b) ΧΥΟ 2010/078370.

1,5 мг (2,45 мкмоль) предшественника 2Ь (2-{2-[2-({5-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]пиридин-2-ил}окси)этокси]этокси}этил 4-метилбензолсульфонат) в 2 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [Р-18]фторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью НС1 и разводили с помощью 1% раствора Ν;·ιΟΗ для нейтрализации. Смесь загружали на картридж с обращенной фазой. Картридж промывали водой (содержащей 5% мас./об. аскорбат натрия). Неочищенный продукт элюировали с помощью ацетонитрила в резервуар, содержащий воду +5% мас./об. аскорбат натрия и ВЭЖХ растворитель. После очистки путем полупрепаративной ВЭЖХ фракцию продукта собирали в резервуар, содержащий воду +0,5% мас./об. аскорбат натрия. Раствор пропускали через С18 картридж, картридж промывали водой (содержащей 0,5% мас./об. аскорбат натрия и конечный продукт элюировали с помощью этанола во флакон, содержащий 0,9% раствор хлорида натрия с 0,5% мас./об. аскорбатом натрия.

- 4 025823

с) Υ. Ьш ]-ф., Ыис1еаг Мебюше апб Βίο1ο§γ, 37 (2010), 917-925.

мг (1,63 мкмоль) предшественника 2Ь (2-{2-[2-({5-[(Е)-2-{4-[(третбутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]пиридин-2-ил}окси)этокси]этокси}этил 4-метилбензолсульфонат) в 1 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [Р-18]фторид/криптофикс/карбонат калия (синтез с использованием [Р-18]фторида тетрабутиламмония в ацетонитриле можно найти ниже). С промежуточного соединения снимали защиту с помощью НС1 и разводили с помощью 1% раствора ΝαΟΗ. Смесь загружали на картридж Оа818 НЬВ. Картридж промывали водой, высушивали в потоке аргона и продукт элюировали с помощью этанола во флакон, содержащий солевой раствор. Несмотря на то, что радиохимические примеси удаляли посредством этой процедуры, нерадиоактивные побочные продукты, образовавшие вследствие гидролиза избытка предшественника, оставались в растворе конечного продукта.

Выход для 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]метиланилина составил 34% (без поправки на разложение) в течение 50 мин на уровне радиоактивности от 10-100 мКи (370-3700 МБк).

ОМР соответствующий процесс приготовления 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-^метиланилина описан в \УО 2010078370 и С.-Н. Υαο е1 а1., АррНеб Каб1абоп апб ЕоЮрез 68 (2010) 2293-2297. Введение радиоактивной метки 1,63 мкмоль-2,45 ммоль осуществляли в ДМСО и для предотвращения разложения 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]^-метиланилина, аскорбат натрия добавляли к ВЭЖХ растворителю (45% ацетонитрил, 55% 20 мМ ацетат аммония, содержащий 0,5% (мас./об.) аскорбат натрия) и конечный лекарственный препарат (0,5% (мас./об.) аскорбат натрия). Процесс позволяет получить вплоть до 18,5 ГБк (25,4±7,7%, с поправкой на разложение) 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]^-метиланилина. Радиохимическая чистота составила 95,3±2,2%.

До настоящего времени, максимальная активность для производного Р-18 меченого фторпегилированного (арил/гетерарил винил)фенил метиламина описана на уровне 18,5 ГБк (Υηο е1 а1.). Тем не менее, еще более высокие выходы должны поддерживаться для широкого применения и доступности радиоактивного индикатора. Способ согласно настоящему изобретению обеспечивает высокий выход Р-18 индикатора в широком диапазоне радиоактивности в отличие от ранее описанных процессов, в которых масштабирование ограничено.

Несмотря на информацию из литературы, количеств меньше чем 7,5 мкмоль и недавно меньше чем 12 мкмоль предшественника достаточно или даже оптимально для приготовления Р-18 меченых фторпегилированных производных (арил/гетерарил винил)фенил метиламина, было обнаружено существенное повышение радиохимического выхода при использовании более чем 10 мкмоль или даже более чем 12 мкмоль предшественника.

Максимальная активность для Р-18 меченого фторпегилированного производного (арил/гетерарил винил)фенил метиламина повышалась до 130 ГБк и было обнаружено, что масштабирование является практически линейным (см. фиг. 2), свидетельствуя о том, что даже еще более высокие количества радиоактивного индикатора могут быть синтезированы с помощью способа согласно настоящему изобретению.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает Способ получения радиоактивно меченого соединения формулы I и его подходящих солей неорганической или органической кислоты, его гидратов, комплексов, сложных эфиров, амидов, сольватов и пролекарств и необязательно фармацевтически приемлемого носителя, разбавителя, адъюванта или наполнителя.

Способ включает следующие стадии: радиоактивное фторирование соединения формулы II; необязательно, отщепление защитной группы; очистка соединения формулы I

- 5 025823

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы I

который включает несколько стадий.

Стадия 1.

Введение радиоактивной метки путем взаимодействия соединения формулы II с помощью Р-18 фторирующего агента, получая соединение формулы I, если К = Н, или получая соединение формулы III, если К = РО, где используют 7,5-75,0 мкмоль соединения формулы II, и где радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей,

Стадия 2.

Необязательно, если К = РО, отщепление защитной группы РО, получая соединение формулы I.

Стадия 3.

Очистка соединения формулы I, где п = 3;

X выбирают из группы, включающей: а) СН; й) N.

В одном предпочтительном варианте осуществления X = СН. В другом предпочтительном варианте осуществления X = N. К выбирают из группы, включающей:

а) Н; й) РО.

РО представляет собой аминозащитную группу.

В предпочтительном варианте осуществления РО выбирают из группы, включающей: а) Вос; й) тритил;

с) 4-метокситритил.

В более предпочтительном варианте осуществления К представляет собой Н.

В другом более предпочтительном варианте осуществления К представляет собой Вос.

ЬО представляет собой уходящую группу.

В предпочтительном варианте осуществления ЬО выбирают из группы, включающей: а) галоген; й) сульфонилокси.

В предпочтительном варианте осуществления ЬО содержит 0-3 атома фтора. Галоген представляет собой хлор, бром или йод. Предпочтительно галоген представляет собой бром или хлор.

В предпочтительном варианте осуществления сульфонилокси выбирают из группы, включающей метансульфонилокси, п-толуолсульфонилокси, трифторметилсульфонилокси, 4-цианофенилсульфонилокси, 4-бромфенилсульфонилокси, 4-нитрофенилсульфонилокси, 2-нитрофенилсульфонилокси, 4-изопропил-фенилсульфонилокси, 2,4,6-триизопропил-фенилсульфонилокси, 2,4,6-триметилфенилсульфонилокси, 4-трет-бутил-фенилсульфонилокси, 4-адамантилфенилсульфонилокси и 4-метоксифенилсульфонилокси.

В более предпочтительном варианте осуществления сульфонилокси выбирают из группы, включающей:

а) метансульфонилокси; й) п-толуолсульфонилокси;

с) (4-нитрофенил)сульфонилокси; й) (4-бромфенил)сульфонилокси.

В еще более предпочтительном варианте осуществления ЬО представляет собой метансульфонилокси. В другом еще более предпочтительном варианте осуществления ЬО представляет собой п-толуолсульфонилокси.

- 6 025823

Предпочтительное соединение формулы I представляет собой

4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Ы-метиланилин. Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой

4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р-18]Фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-Ы-метиланилин. Предпочтительное соединение формулы II представляет собой

2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-Бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]этил метансульфонат.

Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой

2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-Бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]этил 4-метилбензолсульфонат

2-{2-[2-(4-{(Е)-2-[4-(Метиламино)фенил]винил}фенокси)этокси]этокси}этил 4-метилбензолсульфонат

- 7 025823

2-{2-[2-({5-[(Е)-2-{4-[(трет-Бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]пиридин-2ил}окси)этокси]этокси}этил 4-метилбензолсульфонат.

Стадия 1 включает прямую реакцию введения [Р-18]фтор метки в соединения формулы II для получения соединения формулы I (если К = Н) или соединение формулы III (если К = РО).

Способ введения радиоактивной метки включает стадию взаимодействия соединения формулы II с помощью Р-18 фторирующего агента для получения соединения формулы III. В предпочтительном варианте осуществления производное [Р-18]фторида представляет собой 4,7,13,16,21,24-гексаокса-1,10диазабицикло[8,8,8]-гексакозан К[Р-18]Р (краун-эфирную соль криптофикс К[Р-18]Р), К[Р-18]Р, Н[Р18]Р, КН[Р-18]Р₂, Ск[Р-18]Р, Ыа[Р-18]Р или тетраалкиламмониевую соль [Р-18]Р (например, фторид [Р18]тетрабутиламмония). Более предпочтительно фторирующий агент представляет собой К[Р-18]Р, Н[Р18]Р, фторид [Р-18]тетрабутиламмония, Ск[Р-18]Р или КН[Р-18]Р₂, более предпочтительно К[Р-18], Ск[Р18]Р или фторид [Р-18]тетрабутиламмония. Еще более предпочтительный Р-18 фторирующий агент представляет собой криптофикс/калий[Р-18]фторид, предпочтительно полученный из [Р-18]фторида, криптофикса и карбоната калия.

Реакции радиоактивного фторирования осуществляют в ацетонитриле, диметилсульфоксиде или диметилформамиде или их смеси. Но также можно использовать другие растворители, которые хорошо известны специалисту в данной области техники. Вода и/или спирты могут быть задействованы в реакцию в качестве со-растворителя. Реакции радиоактивного фторирования осуществляют в течение менее чем 60 мин. Предпочтительное время реакций составляет менее чем 30 мин. Дальнейшее предпочтительное время реакций составляет менее чем 15 мин. Эти и другие условия для такого радиоактивного фторирования известны экспертам (Соепеп, Р1иогше-18 ЬаЪейпд Ме1йобк: РеаШгек аиб РоккШПШек о£ Ваыс Кеасйопк, (2006), в: БсйиЫдет Р.А., РпеЪе М., Ьейтаии Ь, (ред.), РЕТ-Сйет181ту - Тйе Ότίνίη§ Рогсе ίη Мо1еси1аг Ннадшд. Бртшдет, Вегйи Не1бе1Ъегд, р. 15-50).

Радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей. В предпочтительном варианте осуществления Радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в ацетонитриле или в смеси ацетонитрила и сорастворителей, где процент ацетонитрила составляет по меньшей мере 50%, более предпочтительно по меньшей мере 70%, еще более предпочтительно по меньшей мере 90%.

В изобретении используют 7,5-75,0 мкмоль, предпочтительно 10-50 мкмоль, более предпочтительно 10-30 мкмоль и еще более предпочтительно 12-25 мкмоль и еще более предпочтительно 13-25 мкмоль соединения формулы II на стадии 1.

В другом варианте осуществления более чем 7,5 мкмоль, предпочтительно более чем 10 мкмоль, и более предпочтительно более чем 12 мкмоль и еще более предпочтительно более чем 13 мкмоль, но менее чем 75 мкмоль соединения формулы II используют на стадии 1.

В другом варианте осуществления более чем 5 мг, предпочтительно более чем 6 мг и более предпочтительно более чем 7 мг соединения формулы II используют на стадии 1.

В другом варианте осуществления 7 мг соединения формулы II используют на стадии 1.

В другом варианте осуществления 8 мг соединения формулы II используют на стадии 1.

Необязательно, если К = РО, Стадия 2 включает снятие защиты с соединения формулы III, получая соединение формулы I. Условия реакции являются известными или очевидными для специалиста в данной области техники, которые выбирают, но не ограничиваясь только ими, из условий, описанных в пособии Огеепе аиб \УШ5. Рто1есйпд дгоирк ίη Огдашс §уп1йе818, третье издание, страницы 494-653, включенном в настоящую заявку в качестве ссылки. Предпочтительные условия реакции включают добавление кислоты и перемешивание при 0-180°С; добавление основания и нагревание при 0-180°С; или их комбинацию.

Предпочтительно стадию 1 и стадию 2 осуществляют в одном реакционном сосуде.

Стадия 3 включает очистку соединения формулы I.

Способы очистки радиоактивных индикаторов хорошо известны специалисту в данной области техники и включают ВЭЖХ методы, а также методы твердофазной экстракции.

В одном варианте осуществления смесь неочищенного продукта очищают с помощью ВЭЖХ и собранную фракцию продукта дополнительно пропускают через твердофазный картридж для удаления ВЭЖХ растворителя (такого как ацетонитрил) и для обеспечения соединения формулы I в инъецируемом лекарственном препарате.

В другом варианте осуществления смесь неочищенного продукта очищают с помощью ВЭЖХ, где,

- 8 025823 смесь ВЭЖХ растворителей (например, смеси этанола и водных буферов) могут быть частью инъецируемого лекарственного препарата соединения формулы I. Собранная фракция продукта может быть разведена или смешана с другими частями лекарственного препарата.

В другом варианте осуществления смесь неочищенного продукта очищают с помощью твердофазных картриджей.

В предпочтительном варианте осуществления способ приготовления соединения формулы I осуществляют путем использования модуля (обзор: КгакЖота, 8уп1Нс515 Моби1е8 апб АШотаОоп ίη Р-18 1аЪеЬп§ (2006), в: §ейиЫдег Р.А., РпеЬе М., ЬеЬтапп Ь, (ред.), РЕТ-СНетЩгу - ТЬе Ότίνίη§ Рогсе ίη Мо1еси1аг Ьпащпд. §ргшдег, ВегЬп Не1бе1Ъег§, р. 289-316), который предоставляет возможность автоматизированного синтеза. Более предпочтительно способ осуществляют путем использования модуля в одном сосуде. Еще более предпочтительно способ осуществляют на общеизвестных модулях некассетного типа (например, Ескег&21ед1ег Моби1аг-ЕаЪ, СЕ Тгасег1аЪ РХ, Вау1е51 §упСЬгот) и модулях кассетного типа (например, СЕ Тгасег1аЪ МХ, СЕ РакЬаЪ, 1ВА §уп!Ьега, Ескей&21ед1ег Моби1аг-БаЪ РЬагтТгасег), необязательно, дополнительное оборудование, такое как ВЭЖХ или диспергирующие устройства, присоединены к указанным модулям.

Настоящее изобретение относится к полностью автоматизированному и/или дистанционно управляемому способу получения соединения формулы I, где соединения формулы I, II и III и стадии 1, 2 и 3 описаны выше.

В предпочтительном варианте осуществления этот способ представляет собой полностью автоматизированный процесс, соответствующий СМР принципам, который обеспечивает лекарственный препарат формулы I для применения для введения (инъекции) человеку.

Определения

В контексте настоящего изобретения предпочтительные соли представляют собой фармацевтически приемлемые соли соединений в соответствии с изобретением. Изобретение также включает соли, которые в связи с их частью не пригодны для фармацевтических применений, но которые могут применяться, например, для выделения или очистки соединений в соответствии с изобретением.

Фармацевтически приемлемые соли соединений в соответствии с изобретением включают соли присоединения кислот минеральных кислот, карбоновых кислот и сульфоновых кислот, например соли соляной кислоты, бромисто-водородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, нафталин дисульфоновой кислоты, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, лимонной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты и бензойной кислоты. Фармацевтически приемлемые соли соединений в соответствии с изобретением также включают соли общепринятых оснований, такие как, в качестве примера и предпочтения, соли щелочных металлов (например, соли натрия и соли калия), соли щелочноземельных металлов (например, соли кальция и соли магния) и соли аммония, имеющие происхождение из аммиака или органических аминов, имеющих от 1 до 16 атомов углерода, такие как, в качестве примера и предпочтения, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, этилдиизопропиламин, моноэтаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, прокаин, дибензиламин, N метилморфолин, аргинин, лизин, этилендиамин и N метилпиперидин. Термин галоген или гало относится к С1, Вг, Р или I. Термин сульфонилокси относится к -О-8(О)₂-Ц, где О представляет собой необязательно замещенный арил или необязательно замещенный алкил.

Термин алкил, как используется в настоящем описании самостоятельно или в качестве части другой группы, относится к С₁-С₁₀ неразветвленной или разветвленной алкильной группе, такой как, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, гептил, гексил, децил или адамантил. Предпочтительно алкил представляет собой С₁-С₆ неразветвленный или разветвленный алкил или С₇-С₁₀ неразветвленный или разветвленный алкил. Низший алкил представляет собой С₁ -С₆ неразветвленный или разветвленный алкил.

Термин арил, как используется в настоящем описании самостоятельно или в качестве части другой группы, относится к моноциклическим или бициклическим ароматическим группам, содержащим от 6 до 10 углеродов в кольцевой части, таким как фенил, нафтил или тетрагидронафтил.

Всякий раз, когда используется термин замещенный, это обозначает, что указание о том, что один или несколько водородов на атоме, указанном в выражении с использованием замещенный, заменен/заменены одним или несколькими компонентами из группы, включающей галоген, нитро, циано, трифторметил, алкил и О-алкил, при условии, что не превышается нормальная валентность соответствующего атома, и что замещение приводит к химически стабильному соединению, т.е. соединению, которое достаточно устойчиво для перенесения выделения до пригодной степени чистоты из реакционной смеси.

Термин аминозащитная группа, как используется в настоящем описании самостоятельно или в качестве части другой группы, известен или очевиден для специалиста в данной области техники, который выбирают из, но не ограничиваясь только ими, класса защитных групп, а именно карбаматы, амиды, имиды, Ν-алкил амины, Ν-арил амины, имины, енамины, бораты, Ν-Р защитные группы, Ν-сульфенил,

- 9 025823

Ν-сульфонил и Ν-силил, и которые выбирают из, но не ограничиваясь только ими, групп, которые описаны в пособии Огеепе апй ХУиК Рго1есйид дгоирк ίη Огдашс δνηΐΐιοκίκ. третье издание, страницы 494-653, включенном в настоящую заявку в качестве ссылки. Амино-защитная группа предпочтительно представляет собой карбобензилокси (Ο6ζ), п-метоксибензил карбонил (Μοζ или ΜοΟΖ), трет-бутилоксикарбонил (ВОС), 9-флуоренилметилоксикарбонил (РМОС), бензил (Ви), п-метоксибензил (РМВ), 3,4-диметоксибензил (ΌΜΡΜ), п-метоксифенил (РМР) или защищенная аминогруппа представляет собой 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2Н-изоиндол-2-ил (фталимидо) или азидо группу.

Термин уходящая группа, как используется в настоящем описании самостоятельно или в качестве части другой группы, известен или очевиден для специалиста в данной области техники, и обозначает, что атом или группу атомов отсоединяют от химического вещества с помощью нуклеофильного агента. Примеры представлены, например, в §уи1йек1к (1982), стр. 85-125, табл. 2 (стр. 86; (последнюю запись этой табл. 2 необходимо откорректировать: и-С₄Р₉8(О)₂-О-нонафлат вместо и-С₄Н₉§(О)₂-Ононафлат), Сагеу аий ЗиийЬегд, ОгдашксЬе §уи1Ьеке, (1995), стр. 279-281, табл. 5.8; или №1ксЬег, КесеШ Кек. Эеу. Огд. СЬет., 2003, 7, 71-83, схемы 1, 2, 10 и 15 и другие). (Соеиеи, Р1иогше-18 ЬаЬеЬид ΜеΐЬοάк: РеаФгек аий РокыЬШОек о£ Вакю КеасИоик, (2006), в: 8сЬиЫдег Р.А., РпеЬе Μ., Еебтаии Ь, (ред.), РЕТСЬетИйу - ТЬе ЭгМид Рогсе т Μο1еси1а^ 1тадшд. §ргшдег, Вегби Не1Йе1Ьегд, стр. 15-50, а именно: схема 4 стр. 25, схема 5, стр. 28, табл. 4, стр. 30, фиг. 7, стр. 33).

Если специально не указано иначе, то при ссылке на соединения формулы согласно настоящему изобретению как таковые, а также на любую их фармацевтическую композицию, настоящее изобретение включает все гидраты, соли и комплексы.

Термин Р-18 обозначает изотоп фтора ¹⁸Р. Термин Р-19 обозначает изотоп фтора ¹⁹Р.

Примеры

Определение радиохимической и химической чистоты

Радиохимические и химические чистоты 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-И-метиланилина и 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Иметиланилина определяли с помощью аналитической ВЭЖХ (колонка: АЙаиЬк Т3; 150x4,6 мм, 3 мкм, \Уа1егк; растворитель А: 5 мМ К₂НРО₄ рН 2,2; растворитель В: ацетонитрил; поток: 2 мл/мин, градиент: 0:00 мин 40% В, 0:00-05:50 мин 40-90% В, 05:50-05:60 мин 90-40% В, 05:60-09:00 мин 40% В).

Время удерживания 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-винил]-Иметиланилина: 3,50-3,95 мин, в зависимости от ВЭЖХ системы, используемой для контроля качества. В связи с различным оборудованием (например, разливания по пробиркам) наблюдали отличия по времени удерживания между различными ВЭЖХ системами. Идентичность 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-И-метиланилина доказывали путем совместной инъекции с нерадиоактивным эталоном 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-19]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Иметиланилином.

Время удерживания 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-Иметиланилина: 3,47 мин. Идентичность 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3ил)винил]-И-метиланилина путем совместной элюции с нерадиоактивным эталоном -[(Е)-2-(6-{2-[2-(2[Р-19] фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3 -ил)винил] -Ν-метиланилином.

Пример 1. Сравнение радиоактивного синтеза 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-И-метиланилина на ОЕ Тгасег1аЬ ΡΧ_Ν, используя 3,5 мг относительно 7 мг мезилатного предшественника 2а

4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-И-метиланилин.

Синтез 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-И-метиланилина осуществляли на Тгасег1аЬ ΡΧ_Ν синтезатор (фиг. 1).

- 10 025823

Установки синтезатора и результаты обобщены в табл. 1. [Р-18]Фторид захватывали на ОМА картридж (С1, фиг. 1). Активность элюировали с помощью смеси карбонат калия/криптофикс (из VI) в реактор. Растворитель удаляли, в это же время нагревали под мягким потоком азота и вакуумом. Высушивание повторяли после добавления ацетонитрила (из ν2). Раствор 2а (из ν3) добавляли к высушенному остатку и смесь нагревали в течение 8 мин при 120°С. После охлаждения до 60°С добавляли смесь НС1/ацетонитрил (из ν4) и раствор нагревали в течение 4 мин при 110°С. Неочищенный продукт переносили в Микс-флакон и разводили смесью гидроксид натрия/формиат аммония из ν6. Неочищенный продукт очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта собирали в колбу, содержащую 30 мл воды, раствор пропускали через 1С18 р1и8 картридж (С3). Картридж промывали 20% этанолом в воде из ν9 и 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Нметиланилин элюировали с помощью 1,5 мл этанола во флакон с продуктом, содержащим 8,5 мл основы Лекарственного препарата (состоящей из фосфатного буфера, РЕ0400 и аскорбиновой кислоты).

Таблица 1

Установки Ттасет1аЬ ΡΧ_Ν для синтеза 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]N-метиланилина

	3,5 мг предшественника	7,0 мг предшественника
Флакон VI	1,5 мг карбоната калия, 5 мг криптофикса в 0,075 мл воды и 1,425 мл ацетонитрила
Флакон ν2	1 мл ацетонитрила для высушивания
Флакон \/3	3,5 мг (6,53 мкмоль) предшественника 2а в 1 мл ацетонитрила	7 мг (13,1 мкмоль) предшественника 2а в 1 мл ацетонитрила
Флакон ν4	0,5 мл 2М НС1 и 0,5 мл ацетонитрила
Флакон \/6	1 мл 1М ЫаОН и 2 мл формиата аммония (0,1 М)
Флакон νδ	1,5 мл этанола
Флакон У9	5 мл (20% этанол в воде) + 10 мг аскорбиновой кислоты
Картридж С1	ОМА НдЫ 0Л/а1егз)
Картридж СЗ	1С18 ρΐιΐδ (\Л/а1егв)
Колба	30 мл воды + 60 мг аскорбиновой кислоты
ВЭЖХ колонка	ΖοΦθχ Βσηιΐδ КР, 9,4*250 мм; 5μπη; (АдНеп!)
ВЭЖХ растворитель	55% ацетонитрил, 45% формиат аммония (0,1 М)
ВЭЖХ поток	4 мл/мин
Исходная активность [Р18]фторида	54000 МБк	36600 МБк
Активность продукта	12600 МБк	18000 МБк
Радиохимический выход	23% (без поправки на разложение)	49% (без поправки на разложение)

Существенное повышение радиохимического выхода для 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-^метиланилина было обнаружено после повышения количества предшественника от 3,5 до 7,0 мг.

Пример 2. Сравнение радиоактивного синтеза 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-^метиланилина на Ескей & 21ед1ег Моби1агЬаЬ, используя 4,0 мг относительно 7,4 мг мезилатного предшественника с использованием растворителя трет-амиловый спирт для фторирования

Синтез 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-^метиланилина осуществляли на Ескег! & 21ед1ет МобЫатЬаЬ синтезаторе, используя трет-амиловый спирт в качестве растворителя для фторирования. Установки синтезатора и результаты обобщены в табл. 2.

[Р-18]Фторид захватывали на ОМА картридж (С1). Активность элюировали с помощью смеси криптофикса (из ν1) в реактор. Растворитель удаляли, в это же время нагревали под мягким потоком азота и вакуумом. Высушивание повторяли после добавления ацетонитрила (из ν2). К высушенному остатку добавляли раствор предшественника (из ν3) и смесь нагревали в течение 12 мин при 120°С.

- 11 025823

Растворитель для фторирования удаляли в вакууме в течение 6 мин при 120°С. После охлаждения до 40°С добавляли смесь НС1/ацетонитрил (из У4) и раствор нагревали в течение 8 мин при 120°С.

Смесь неочищенного продукта разводили с помощью 1,5 мл 2 М ΝαΟΗ и 0,3 мл формиата аммония (1М) из У5 и после этого непосредственно переносили в ВЭЖХ флакон (Микс-флакон). Для избежания осаждения и разделения фаз смеси вследствие трет-амилового спирта, Микс-флакон содержал предварительно 1 мл ацетонитрила и 1 мл этанола.

Смесь очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта собирали в колбу, содержащую 16 мл воды. Раствор пропускали через а 1С18 епу1гоитеп1а1 сагйтбде (С2). Картридж промывали 20% этанолом в воде из У6 и 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Ю метиланилин элюировали с помощью 1,5 мл этанола из У7 во флакон с продуктом, содержащим 8,5 мл основы Лекарственного препарата (состоящей из фосфатного буфера, РЕ0400 и аскорбиновой кислоты).

Более высокий радиохимический выход 38% (без поправки на разложение) получали при использовании 7,4 мг предшественника по сравнению с процессом с использованием 4,0 мг предшественника, что обеспечивает 15% (без поправки на разложение) 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Юметиланилина.

Таблица 2
	4,0 мг предшественника	7,4 мг предшественника
Флакон VI	22 мг криптофикса 700 мкл метанола 10 мкл трет-бутил карбоната аммония 40% 100 мкл мезилата калия 0,2М
Флакон У2	100 мкл ацетонитрила для высушивания
Флакон УЗ	4,0 мг предшественника в 100 мкп ацетонитрила и 1,0 мл трет-амилового спирта	7,4 мг предшественника в 140 мкл ацетонитрила и 1,0 мл трет-амилового спирта
Флакон У4	2 мл НС1 1,5 М 1 мл ацетонитрила 30 мг аскорбата натрия
Флакон У5	1,5 мл ΝθΟΗ 2,0 М 300 мкл формиата аммония 1 М 500 мкл этанола
Флакон У6	8 мл этанола 20% 80 мг аскорбата натрия
Флакон У7	1,5 мл этанола
Картридж С1	ОМА НдМ (ша1егв), кондиционированный с мезилатом калия 0,2М
Картридж С2	1С18 епу\|гоптеп(а1 (\Л/а(егз)
Микс-флакон	1 мл ацетонитрила 1 мл этанола
Колба	16 мл воды 160 мг аскорбата натрия
ВЭЖХ колонка	Θβπιίηί С18, 10*250 мм, 5рт, РБепотепех
ВЭЖХ растворитель	60% ацетонитрил, 40% фосфатный буфер 50 мм рН 4
ВЭЖХ поток	3 мл/мин.
Исходная активность [Г-18]фторида	55,0 ГБк	30,4 ГБк
Активность продукта	8,4 ГБк	11,6 ГБк
Ргобис! рип1у (ВСР)	97%	99%
Радиохи м ический выход	15% (без поправки на разложение)	38% (без поправки на разложение)

Существенное повышение радиохимического выхода для 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Юметиланилина было обнаружено после повышения количества предшественника от 4,0 до 7,4 мг.

Пример 3. Синтез 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Ю метиланилина оп Тгасег1аЪ ΡΧ_Ν

- 12 025823

4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Ы-метиланилин.

Синтез осуществляли на Тгаеег1аЬ ΡΧ_Ν синтезаторе. [Р-18]Фторид (6,85 ГБк) захватывали на ОМА картридж. Активность элюировали с помощью смеси карбонат калия/криптофикс/ацетонитрил/вода в реактор. Растворитель удаляли, в это же время нагревали под мягким потоком азота и вакуумом. Высушивание повторяли после добавления ацетонитрила. Раствор 8 мг 2с в 1,5 мл ацетонитрила добавляли к высушенному остатку и смесь нагревали в течение 10 мин при 120°С. После охлаждения до 60°С неочищенный продукт разводили с помощью 4 мл ВЭЖХ элюент и переносили на полупрепаративную ВЭЖХ колонку (§упегду Нубго-РР, 250x10 мм, РЬепотепех). Смесь 60% этанола и 40% аскорбатного буфера (5 г/л аскорбата натрия и 50 мг/л аскорбиновой кислоты, рН 7,0) продували через колонку со скоростью 3 мл/мин. Фракцию продукта при и 12 мин. Непосредственно собирали в течение 100 с и смешивали с 15 мл основы Лекарственного препарата (фосфатный буфер, аскорбиновая кислота, РЕ0400).

2,54 ГБк (37% без поправки на разложение) получали через 53 мин суммарного времени синтеза. Радиохимическая чистота (определенная с помощью ВЭЖХ, 1_Р = 3,78 мин) составляла >99%.

Пример 4. Масштабирование синтеза 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Ы-метиланилина Масштабирование синтеза 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-Ы-метиланилина осуществляли на двух различных синтезаторах (Ескей & о 21ед1ег модульной лаборатории и ОЕ 1гасег1аЬ МХ) путем взаимодействия 8 мг предшественника 2а в ацетонитриле при 100-120°С в течение 10 мин с комплексом карбонат калия/криптофикс/[Р-18]фторид. Ν-Вос защитную группу удаляли путем нагревания с НС1 (1,5-2 М). Смесь неочищенного продукта, полученную после снятия защиты, нейтрализовали с помощью смеси 2М ΝαΟΗ и 0,1 М формиат аммония, разводили с помощью ацетонитрила и этанола и инъецировали в полупрепаративную ВЭЖХ (колонка: например, Оет1ш С18, 10x250 мм, 5 мкм, РЬепотепех или §упег§1 Нубго-РР, 250x10 мм, 10 рт 80А, РЬепотепех или §упег§1 Нубго-РР, 250x10 мм, 4 мкм 80А, РЬепотепех; растворитель: 60-70% этанол, 40-30% аскорбатный буфер и 5 мг/мл аскорбата; поток 3, или 4, или 6 мл/мин). Фракции продукта непосредственно собирали во флаконы, содержащие основу лекарственного препарата (содержащий РЕО400, фосфатный буфер и аскорбиновую кислоту), получая 10-24 мл конечного лекарственного препарата. Время снижения пикового значения корректировали с помощью программного обеспечения для получения лекарственного препарата, содержащего 15% ЕЮН.

Результаты (83 экспериментов) обобщены на фиг. 2, где каждая точка представляет собой результаты одного отдельного эксперимента. Радиохимические чистоты радиоактивного индикатора определяли с помощью ВЭЖХ и было обнаружено, что они составляют 98,9±1,6%. Почти линейные прямые на графике, указывающие тенденции, свидетельствуют от том, что аналогичные результаты (радиохимический выход 37,1±5,7% без поправки на разложение) получали в пределах широкого диапазона радиоактивности (активность продукта в интервале от 1,3 до 130,8 ГБк) и что еще более высокие активности продукта получали с помощью способа согласно настоящему изобретению.

Описание фигур

Фиг. 1 - установки Тгасег1аЬ ΡΧ_Ν (адаптированные с помощью программного обеспечения 1гасег1аЬ).

Фиг. 2 - масштабирование синтеза 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил] -Ν-метиланилина.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ получения соединения формулы I

Н‘ где η = 3;

X выбирают из группы, включающей:

a) СН;

b) Ν;

который включает следующие стадии:

стадия 1: введение радиоактивной метки в соединение формулы II с помощью Р-18 фторирующего агента, получая соединение формулы I, если К = Н, или получая соединение формулы III, если К = РО, где используют 7,5-75,0 мкмоль соединения формулы II и где радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей •Ν,

II

III где К выбирают из группы, включающей:

a) Н;

b) РО;

РО представляет собой аминозащитную группу;

ЬО представляет собой уходящую группу;

стадия 2: если К = РО, отщепление защитной группы РО, получая соединение формулы I; стадия 3: очистка соединения формулы I.
2. Способ в соответствии с п.1, где РО выбирают из группы, включающей:

a) Вос;

b) тритил;

c) 4-метокситритил.
3. Способ в соответствии с п.1 или 2, где ЬО выбирают из группы, включающей:

a) галоген;

b) сульфонилокси;

галоген представляет собой хлор, бром или йод.
4. Способ в соответствии с п.3, где сульфонилокси выбирают из группы, включающей:

a) метансульфонилокси;

b) п-толуолсульфонилокси;

c) (4-нитрофенил)сульфонилокси;

ά) (4-бромфенил)сульфонилокси.
5. Способ в соответствии с п.1, где η = 3 и X = СН.
6. Способ в соответствии с п.1, где η = 3, X = СН, К = Вос и ЬО = метансульфонилокси.
7. Способ в соответствии с пп.1-6, где используют 10-50 мкмоль соединения формулы II.
8. Способ в соответствии с п.7, где используют 10-30 мкмоль соединения формулы II.
9. Способ в соответствии с пп.1-8, где способ осуществляют в виде полностью автоматизированного процесса.