TWI504414B - 生產Ｆ－１８標記之Ａβ配位體之方法 - Google Patents

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Description

生產F-18標記之Aβ配位體之方法
本發明係關於一種產生[F-18]氟聚乙二醇化(芳基/雜芳基乙烯基)-苯基甲基胺衍生物之方法。
阿茲海默氏病(AD)係一種以記憶、認知及行為穩定性喪失為特點之漸進式神經退化性病變。AD於病理學上係藉由包含β類澱粉肽(Aβ)之原纖維沈積之細胞外老年斑及包含超磷酸化τ之成對螺旋絲狀體之神經原纖維纏結所界定。包含39至43個胺基酸之Aβ肽係源自較大型類澱粉前驅蛋白(APP)。於類澱粉生成路徑中，Aβ肽係APP依序被β-及γ-分泌酶之蛋白質水解作用裂解所產生。Aβ肽係呈可溶性蛋白質釋出，並於正常老年腦中之腦脊髓液(CSF)中可以檢測到低濃度。於AD惡化期間，Aβ肽聚結並於腦之柔軟組織及血管系統中形成類澱粉沈積，可於死後檢測到擴散性及老年性斑塊，及於組織檢查期間檢測到血管類澱粉蛋白(有關最新概論可參見：Blennow等，Lancet. 2006 Jul 29;368(9533):387-403)。
阿茲海默氏病(AD)已成為全世界之嚴重健康及社會經濟問題。已有大量研究發展用於該疾病之早期檢測及有效治療的技術及方法。現時，在學術界之記憶病變臨床中，AD之診斷準確率接近85至90%(Petrella JR等，Radiology. 2003 226:315-36)。此係基於排除會導致類似症狀之各種疾病，然後仔細進行神經及精神檢查，及神經心理測試。
分子成像法具有比神經學、腫瘤學及心臟病學領域中大部份習知方法更先檢測到疾病進展或治療效果之潛力。於數種可靠的分子成像技術(如光學成像、MRI、SPECT及PET)中，PET因其高敏感度及提供定量及動力學數據之能力，而特別有利於藥物發展。
例如，正子發射同位素包括(例如)碳、碘、氮及氧。此等同位素可取代其等於標的化合物中之非放射性對應物，以產生具有類似生物性質之PET示蹤物。於此等同位素中，F-18因其半衰期為110分鐘而成為較佳標記同位素，因此可以製成診斷示蹤物，及對生物化學過程進行後續研究。此外，其低β+能量(634 keV)亦具優勢。
死後之腦組織檢查仍係阿茲海默氏病之唯一確診手段。因此，據信，疾病之病理特徵之一(腦中類澱粉物聚結物沈積)之活體內檢測對AD之早期檢測及與其他癡呆症形式區分具有重要作用。此外，在發展中之大部份疾病修飾療法旨在降低腦中類澱粉物質負載。因此，腦中類澱粉物質負載量之影像可成為為患者分級及追蹤治療之必要工具(有關最新概論可參見：Nordberg. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2008 Mar;35 Suppl 1:S46-50)。
此外，亦已知類澱粉物質沈積對類澱粉症具有重要作用，於類澱粉症中，類澱粉蛋白(例如，τ)係以非正常方式沈積於不同器官及/或組織中而導致疾病。有關最新概論可參見Chiti等，Annu Rev Biochem. 2006;75:333-66。
氟聚乙二醇化(芳基/雜芳基乙烯基)-苯基甲基胺(如4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺與4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺)已藉由F-18氟標記，且涵蓋在專利申請案WO 2006066104、WO 2007126733及相應專利案類別之個案中。
此放射示蹤物於檢測Aβ斑塊中之用途已揭示於文獻中(W. Zhang等，Nuclear Medicine and Biology 32(2005) 799-809；C. Rowe等，Lancet Neurology 7(2008) 1-7；S. R. Choi等，The Journal of Nuclear Medicine 50(2009) 1887-1894)。
為了不限制此等經F-18標記之診斷物之用途，需要一種容許可靠且安全製造經F-18標記之示蹤物之方法。此外，此等方法應提供高總合成產率，使診斷物之產量所供應之放射示蹤物儘管在110分鐘之半衰期下仍可用在無迴旋加速器之設施或放射醫藥生產設施。
過去已曾描述F-18標記之氟聚乙二醇化(芳基/雜芳基乙烯基)-苯基甲基胺之合成法，其係自常用甲磺酸酯及甲苯磺酸酯前驅物開始：
4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺
a) W. Zhang等，Nuclear Medicine and Biology 32(2005) 799-809
將4 mg前驅物2a (甲磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]-苯基}乙烯基]苯氧基}乙氧基)乙氧基]乙基酯)之0.2 mL DMSO溶液與[F-18]氟化物/克瑞吐菲(kryptofix)/碳酸鉀錯合物反應。中間產物係藉由HCl脫除保護基，及以NaOH中和。藉由乙酸乙酯萃取混合物。將溶劑乾燥並蒸發。將殘餘物溶於乙腈中並藉由半製備型HPLC純化。於90分鐘內獲得20%(經衰減校正)、11%(未經過衰減校正)4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
b) WO 2006066104
將4 mg前驅物2a (甲磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]-苯基}乙烯基]苯氧基}乙氧基)乙氧基]乙基酯)之0.2 mL DMSO溶液與[F-18]氟化物/克瑞吐菲(kryptofix)/碳酸鉀錯合物反應。中間產物係藉由HCl脫除保護基，及以NaOH中和。藉由乙酸乙酯萃取混合物。將溶劑乾燥並蒸發。將殘餘物溶於乙腈中並藉由半製備型HPLC純化。於90分鐘內獲得30%(經衰減校正)、17%(未經過衰減校正)4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
c) US 20100113763
將2a (甲磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]-苯基}乙烯基]苯氧基}乙氧基)乙氧基]乙基酯)與[F-18]氟化物試劑於500 μL第三醇及100 μL乙腈中反應。氟化之後，將溶劑蒸發及添加HCl與乙腈之混合物。脫除保護基(於100至120℃下加熱)之後，藉由HPLC(C18，60%乙腈、40% 0.1 M甲酸銨)純化粗產物混合物。
4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶- 3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺
a) S. R. Choi等，The Journal of Nuclear Medicine 50(2009) 1887-1894
將1 mg前驅物2b (4-甲基苯磺酸2-{2-[2-({5-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]-苯基}乙烯基]吡啶-2-基}氧基)乙氧基]乙氧基}乙基酯)之1 mL DMSO溶液與[F-18]氟化物/克瑞吐菲(kryptofix)/碳酸鉀錯合物反應。中間產物係藉由HCl脫除保護基，及以NaOH中和。於SepPak light C18濾筒(Waters)上進行固相萃取，移除DMSO及無機組分。粗產物係藉由半製備型HPLC純化。產物溶離份加水稀釋，並通過SepPak light C18濾筒。以乙醇溶離放射示蹤物。4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺之產率為10至30%(經衰減校正)。
WO 2010000409揭示一種用於4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺之非標準全氟化前驅物。經證實，於藉由1.3 GBq[F-18]氟化物標記後，可於全氟化固相上進行固相萃取，移除過量之4.4 μmol前驅物。然而，經放射標記之中間產物之產率僅為24%且未揭示獲得適宜注射至患者中之組合物之脫除保護基法及最終純化法。此外仍未明瞭該描述之方法是否適宜擴大至商業生產所需之更高放射活性值(例如，>50 GBq)。因此，本發明之目的係關於一種可使用諸如甲磺酸酯及甲苯磺酸酯之標準前驅物，獲得較高產率及可擴大規模之方法。
近期，已描述用於合成經F-18標記之氟聚乙二醇化(芳基/雜芳基乙烯基)-苯基甲基胺之其他製程，其等係自常用甲磺酸酯及甲苯磺酸酯前驅物為起始：
a) H. Wang等，Nuclear Medicine and Biology 38(2011) 121-127
將5 mg前驅物2a (甲磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]-苯基}乙烯基]苯氧基}乙氧基)乙氧基]乙基酯)之0.5 mL DMSO溶液與[F-18]氟化物/克瑞吐菲/碳酸鉀錯合物反應。中間產物係藉由HCl脫除保護基並以NaOH中和。粗產物係以乙腈/0.1 M甲酸銨(6/4)稀釋並藉由半製備型HPLC純化。收集產物溶離份，以水稀釋，通過C18濾筒，及以乙醇溶離，於50分鐘內獲得17%(未經過衰減校正)4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
於文獻中，描述未經保護之甲磺酸酯前驅物之轉化：將5 mg未經保護之甲磺酸酯前驅物(4-甲磺酸2-{2-[2-(4-{(E)-2-[4-(甲基胺基)苯基]乙烯基}苯氧基)乙氧基]-乙氧基}乙基酯)之0.5 mL DMSO溶液與[F-18]氟化物/克瑞吐菲/碳酸鉀錯合物反應。粗產物係以乙腈/0.1 M甲酸銨(6/4)稀釋並藉由半製備型HPLC純化。收集產物溶離份，以水稀釋，通過C18濾筒並以乙醇溶離，於30分鐘內獲得23%(未經過衰減校正)4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
b) WO 2010078370
將1.5 mg前驅物2b (4-甲基苯磺酸2-{2-[2-({5-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]-苯基}乙烯基]吡啶-2-基}氧基)乙氧基]乙氧基}乙基酯)之2 mL DMSO溶液與[F-18]氟化物/克瑞吐菲/碳酸鉀錯合物反應。中間產物係藉由HCl脫除保護基及以1% NaOH溶液稀釋來中和。將混合物負載於逆相濾筒上。藉由水(含有5%重量/體積抗壞血酸鈉)清洗該濾筒。藉由乙腈將粗產物溶離至含有水+5%重量/體積抗壞血酸鈉及HPLC溶劑之儲集器中。藉由半製備型HPLC純化之後，將產物溶離份收集至含有水+0.5%重量/體積抗壞血酸鈉之儲集器中。使溶液通過C18濾筒，以水(含有0.5%重量/體積抗壞血酸鈉)清洗該濾筒及藉由乙醇將最終產物溶離至含有0.9%氯化鈉溶液與0.5%重量/體積抗壞血酸鈉之小瓶中。
c) Y. Liu等，Nuclear Medicine and Biology 37(2010)917-925
將1 mg前驅物2b (4-甲基苯磺酸2-{2-[2-({5-[(E )-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]-苯基}乙烯基]吡啶-2-基}氧基)乙氧基]乙氧基}乙基酯)之1 mL DMSO溶液與[F-18]氟化物/克瑞吐菲/碳酸鉀錯合物反應(已發現使用四丁基[F-18]氟化銨於乙腈中進行之合成法較差)。中間產物係藉由HCl脫除保護基及以1% NaOH溶液稀釋。將混合物負載於Oasis HLB濾筒上。以水清洗該濾筒，於氬氣流下乾燥及藉由乙醇將產物溶離至含有食鹽水溶液之小瓶中，雖然，藉由此製程移除放射化學雜質，然而，來自過量前驅物水解所得之非放射活性副產物仍殘留於最終產物溶液中。
於50分鐘內，4-[(E )-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺之產率為34%，放射活性強度為10至100 mCi(370至3700 MBq)。
關於4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺之「GMP認證」製造方法係揭示於WO 2010078370及C.-H. Yao等，Applied Radiation and Isotopes 68(2010)2293-2297中。放射標記法係於DMSO中進行，且為了防止4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺分解，將抗壞血酸鈉加至HPLC溶劑(45%乙腈、55%含有0.5%(重量/體積)抗壞血酸鈉之20 mM乙酸銨)及最終調配物中(0.5%(重量/體積)抗壞血酸鈉)。該方法提供至多18.5 GBq(25.4±7.7%，經衰減校正)4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺。放射化學物純度為95.3±2.2%。
至今，氟聚乙二醇化(芳基/雜芳基乙烯基)-苯基甲基胺之放射標記係於作為溶劑之DMSO中進行放射氟化反應。已知DMSO經常於(尤其)親脂性Aβ配位體之溶解度上較乙腈具優勢(K. Serdons等；Journal of Medicinal Chemistry,52(2009)1428-1437)。
另一方面，已熟知DMSO會降低RP-HPLC之離析度。於文獻所描述之實例中，粗產物混合物係藉由乙酸乙酯萃取(W. Zhang等，WO 2006066104)或再通過一個額外固相萃取濾筒(例如，S. R. Choi等，WO 2010078370)，以於HPLC前先移除DMSO。
DMSO之另一缺點係與各種塑料之有限相容性。因此，DMSO無法用在所有自動合成器上。於最常用之「盒型」合成器Tracerlab MX(GE，過去為Coincidence)上，使用由標準模製活塞歧管製成之單次使用「盒」。另一方面，此概念提供最大的安全性及可靠性，係因製造放射醫藥物質時所直接涉及之所有部分已事先提供備用。於下一次合成前無需清潔裝置。另一方面，盒材料不耐受諸如DMSO之溶劑(R. Krasikova,Synthesis Modules and Automation in F-18 Labeling,(2006),in: Schubiger P.A.、Friebe M.、Lehmann L.(編輯)，PET-Chemistry-The Driving Force in Molecular Imaging. Springer,Berlin Heidelberg,pp.289-316)。
如US 20100113763所揭示三級醇類之用法具有缺點，其中需要先排除(藉由蒸發)該溶劑，才能進行HPLC純化法。然而，經放射性標記之衍生物之濃縮/乾燥法(已知其很容易出現放射性分解作用)包括了降解的風險。此點成為該所說明製法於放大規模時之限制。
藉由本發明解決之問題係提供一種用於製造F-18標記之氟聚乙二醇化(芳基/雜芳基乙烯基)-苯基衍生物之穩定且可靠方法，其：
-　提供高產率之放射示蹤物
-　容許自放射活性及非放射活性副產物純化放射示蹤物
-　可於非盒型模組(如Eckert&Ziegler Modular-Lab、GE Tracerlab FX、Raytest SynChrom)上使用
-　可於盒型模組(如GE Tracerlab MX、GE Fastlab、IBA Synthera、Eckert&Ziegler Modular-Lab Pharm Tracer)上使用
-　與用於諸如GE Tracerlab MX、IBA Synthera之模組之可棄式盒之塑料、閥門及管相容
-　可於寬廣之放射活性範圍內提供高產率之放射示蹤物
-　於HPLC純化前不需要諸如萃取或固相萃取法之額外製造步驟
雖然文獻記載說明F-18標記之氟聚乙二醇化(芳基/雜芳基乙烯基)-苯基衍生物之合成法應於DMSO中實施，然而發現如本發明所述利用乙腈之方法可解決上述問題。其中可獲得優於文獻結果之優異放射化學產率並已證實可改良F-18示蹤物自副產物中之分離性。此外，本文所述之方法可於標準非盒型及利用標準模製活塞歧管之盒型模組(例如，Tracerlab MX)上使用。
本文所述之方法較上述方法更簡單，其於純化(例如，藉由HPLC)前無需液相萃取(W. Zhang等，WO 2006066104)或固相萃取(例如，S.R. Choi等，WO 2010078370)或蒸發。此簡化方法降低流失(於萃取或固相萃取期間)或因濃縮(固相萃取或蒸發期間)發生放射分解以致降解之風險。此外，較少之方法步驟亦可縮短總製造時間。
此外，相較於先前已描述之無法擴大規模且尤其在較高活性強度下(實例8，圖9)所提供產率較低之方法(例如，Zhang等，WO 200606614、Choi等，WO 2010078370)，本發明方法可提供具有可靠高產率且於廣範圍放射強度內操作之F-18示蹤物。本發明方法亦比近期由US 20100113763(實例9，圖10)描述之方法提供具有較高產率之結果及較小之結果偏差。
‧本發明提供一種生產放射標記之式I 化合物及其適宜無機或有機酸鹽、其水合物、錯合物、酯、醯胺、溶劑化物及前藥，及視需要醫藥可接受載劑、稀釋劑、佐劑或賦形劑之方法。
該方法包含步驟：
-　放射性氟化式II 化合物
-　視需要，裂解保護基
-　純化並調配式I 化合物
‧　本發明亦提供一種組合物，其包含放射性標記之式I 化合物或其適宜之無機或有機酸鹽、其水合物、錯合物、酯、醯胺、溶劑化物及前藥，及視需要醫藥可接受載劑、稀釋劑、佐劑或賦形劑。
‧　本發明亦提供一種用於藉由本文所述方法製備放射性醫藥製劑之套組，該套組包含一個含有預定量式II 化合物之密封小瓶。
於第一態樣 中，本發明係關於一種生產式I 化合物之方法
其包含步驟：
步驟1： 藉由F-18氟化劑放射性標記式II 化合物，獲得式I 化合物(若R =H)或獲得式III 化合物(R =PG )
步驟2： 視需要，若R =PG ，則裂解保護基PG ，獲得式I 化合物
步驟3： 純化並調配式I 化合物
其中：n =1至6，較佳2至4，更佳3。
X 係選自包括以下之基團
a)CH，
b)N 。
於一項較佳實施例中，X =CH。
於另一項較佳實施例中，X =N 。
R 係選自包括以下之基團
a)H，
b)PG 。
PG 係「胺保護基」。
於一項較佳實施例中，PG 係選自包括以下之基團：
a)Boc，
b)三苯甲基，及
c)4-甲氧三苯甲基。
於一項更佳實施例中，R 係H。
於另一項更佳實施例中，R 係Boc。
LG 係離去基。
於一項較佳實施例中，LG 係選自包括以下之基團：
a)鹵素及
b)磺醯基氧基。
鹵素係氯、溴或碘。較佳，鹵素係溴或氯。
於一項較佳實施例中，LG 含有0至3個氟原子。
於一項較佳實施例中，磺醯基氧基係選自下列各物所組成群中：甲磺醯基氧基、對甲苯磺醯基氧基、三氟甲基磺醯基氧基、4-氰基苯基磺醯基氧基、4-溴苯基磺醯基氧基、4-硝基苯基磺醯基氧基、2-硝基苯基磺醯基氧基、4-異丙基-苯基磺醯基氧基、2,4,6-三異丙基苯基磺醯基氧基、2,4,6-三甲基苯基磺醯基氧基、4-第三丁基-苯基磺醯基氧基、4-金剛烷基苯基磺醯基氧基及4-甲氧基苯基磺醯基氧基。
於一項更佳實施例中，磺醯基氧基係選自由以下組成之群：
a)甲磺醯基氧基，
b)對甲苯磺醯基氧基，
c)(4-硝基苯基)磺醯基氧基，
d)(4-溴苯基)磺醯基氧基。
於一項甚至更佳實施例中，LG 係甲磺醯基氧基。
於另一項甚至更佳實施例中，LG 係對甲苯磺醯基氧基。
較佳之式I 化合物係：
4-[(E )-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
另一項較佳式I 化合物係：
4-[(E )-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
較佳之式II化合物係：
甲磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]苯基}乙烯基]苯氧基}-乙氧基)乙氧基]乙基酯。
另一項較佳之式II 化合物係：
4-甲基苯磺酸2-[2-(2-{4-[(E )-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]苯基}乙烯基]苯氧基}-乙氧基)乙氧基]乙基酯。
另一項較佳之式II 化合物係：
4-甲磺酸2-{2-[2-(4-{(E )-2-[4-(甲基胺基)苯基]乙烯基}苯氧基)乙氧基]乙氧基}乙基酯。
另一項較佳之式II 化合物係：
4-甲基苯磺酸2-{2-[2-(4-{(E )-2-[4-(甲基胺基)苯基]乙烯基}苯氧基)乙氧基]乙氧基}乙基酯。
另一項較佳之式II 化合物係：
4-甲基苯磺酸2-{2-[2-({5-[(E )-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]苯基}乙烯基]吡啶-2-基}氧基)乙氧基]乙氧基}乙基酯
步驟1 包括由式II 化合物直接進行[F-18]氟標記反應，獲得式I 化合物(若R =H)或式III 化合物(若R =PG )。
該放射標記方法包括使式II 化合物與F-18氟化劑反應以獲得式III 化合物之步驟。於一項較佳實施例中，該[F-18]氟化物衍生物係4,7,13,16,21,24-六氧雜-1,10-二氮雜雙環[8.8.8]-廿六烷K[F-18]F(K[F-18]F之冠醚)、K[F-18]F、H[F-18]F、KH[F-18]F2 、Cs[F-18]F、Na[F-18]F或[F-18]F之四烷基銨鹽(例如[F-18]四丁基氟化銨)。更佳，該氟化劑係K[F-18]F、H[F-18]F、[F-18]四丁基氟化銨、Cs[F-18]F或KH[F-18]F2 ，最佳為K[F-18]、Cs[F-18]F或[F-18]四丁基氟化銨。
甚至更佳之F-18氟化劑係較佳自[F-18]氟化物、克瑞吐菲及碳酸鉀形成之克瑞吐菲/[F-18]氟化鉀。
放射氟化反應係於乙腈或乙腈與熟習本項技術者熟知之共溶劑之混合物中進行。此外，可於此反應中使用水及/或醇作為共溶劑。該等放射氟化反應係進行少於60分鐘。較佳反應時間為少於30分鐘。更佳反應時間為少於15分鐘。用於此放射氟化之此等及其他條件係專業人員已知(Coenen,Fluorine-18 Labeling Methods: Features and Possibilities of Basic Reactions,(2006),in: Schubiger P.A.,Friebe M.,Lehmann L.,(編輯),PET-Chemistry-The Driving Force in Molecular Imaging. Springer,Berlin Heidelberg,pp.15-50)。
於一項較佳實施例中，式II 化合物之放射氟化法係於乙腈或乙腈與共溶劑之混合物中進行，其中乙腈之百分比為至少50%，更佳為70%，甚至更佳為90%。
於一項較佳實施例中，式II 化合物之放射氟化法係於乙腈或乙腈與共溶劑之混合物中進行，其中乙腈之百分比為至少50%，更佳為至少70%，甚至更佳為至少90%。
較佳，該放射標記法係由式II 化合物於乙腈或乙腈/共溶劑混合物中之溶液進行，其中該溶液之體積為100 μL至5000 μL，較佳為250 μL至3000 μL，更佳為500 μL至2000 μL。
於一項實施例中，步驟1 中使用7.5至75 μmol，較佳10至50 μmol，更佳10至30 μmol及甚至更佳12至25 μmol及甚至更佳13至25 μmol之式II 化合物。
於另一項實施例中，步驟1 中使用超過7.5 μmol，較佳超過10 μmol及更佳超過12 μmol及甚至更佳超過13 μmol之式II 化合物用於。
於另一項實施例中，步驟1 中使用超過5 mg，較佳超過6 mg及更佳超過7 mg之式II 化合物。
於另一項實施例中，步驟1 中使用7 mg之式II 化合物。
於另一項實施例中，步驟1 中使用8 mg之式II 化合物。
於另一項實施例中，步驟1 中，於乙腈或乙腈/共溶劑混合物之溶液中使用1.5至50 μmol/mL，較佳5至25 μmol/mL，更佳7至20 μmol/mL之式II 化合物。
視需要，若R=PG ，步驟2 包括使式III 化合物脫除保護基，獲得式I 化合物。反應條件係已知或為熟習此項技術者瞭解，其等係選自(但非限於)教科書Greene and Wuts,Protecting grous in Organic Synthesis，第三版，494至653頁所述之彼等條件，該書係以引用方式併入本文。
較佳反應條件係添加酸及於0℃至180℃下攪拌；添加鹼及於0℃至180℃下攪拌；或其組合。
較佳，步驟1 及步驟2 係於同一反應容器中進行。
步驟3 包括式I 化合物之純化及調配。用於純化放射示蹤物之方法係為熟習此項技術者已知且包括HPLC方法及固相萃取方法。
於一項實施例中，粗產物混合物係藉由HPLC純化及所收集之產物溶離份進一步通過一個固相濾筒，以移除HPLC溶劑(如乙腈)並提供呈可注射調配物形式之式I 化合物。
於另一項實施例中，粗產物混合物係藉由HPLC純化，其中HPLC溶劑混合物(例如，乙醇與水性緩衝液之混合物)可成為式I 化合物之可注射調配物之一部分。所收集之產物溶離份可以使用調配物之其他部分稀釋或混合。
於另一項實施例中，粗產物混合物係藉由固相濾筒純化。
於一項實施例中，製造式I 化合物之方法係藉由使用一個容許自動合成之模組(參見：Krasikowa,Synthesis Modules and Automation in F-18 labeling(2006),in: Schubiger P.A.,Friebe M.,Lehmann L.,(編輯),PET-Chemistry-The Driving Force in Molecular Imaging. Springer,Berlin Heidelberg,pp. 289-316)來進行。更佳，該方法係使用一鍋式模組進行。甚至更佳，該方法係於俗稱為非盒型模組(例如，Eckert & Ziegler Modular-Lab、GE Tracerlab FX、Raytest SynChrom)及盒型模組(例如，GE Tracerlab MX、GE Fastlab、IBA Synthera、Eckert & Ziegler Modular-Lab PharmTracer)上進行，視需要，將諸如HPLC或配送裝置之其他設備連接至該等模組。
於第二態樣 中，本發明係關於一種用於生產式I 化合物之完全自動化及/或遙控方法，其中式I、II 及III 化合物及步驟1、2 及3 係如上所述。
於一項較佳實施例中，此方法係一種由GMP指導認證之完全自動化方法，提供用於投與(注射)人類之式I調配物。
於第三態樣 中，本發明係關於一種用於生產式I 化合物之醫藥組合物之套組。
於一項實施例中，該套組包含一個含有預定量式II 化合物及用於溶解式II 化合物之乙腈或乙腈與共溶劑之密封小瓶。
於一項較佳實施例中，將式II 化合物溶於乙腈或乙腈與共溶劑之混合物中，其中乙腈之百分比為至少50%，更佳70%，甚至更佳90%。較佳，該套組含有1.5至75 μmol，較佳7.5至50 μmol，更佳10至30 μmol及甚至更佳12至25 μmol及甚至更佳13至25 μmol之式II 化合物。
於另一項實施例中該套組含有超過7.5 μmol，較佳超過10 μmol及更佳超過12 μmol及甚至更佳超過13 μmol之式II 化合物。
於另一項實施例中，該套組含有超過5 mg，較佳超過6 mg及更佳超過7 mg之式II 化合物。
於另一項實施例中，該套組含有7 mg之式II 化合物。
於另一項實施例中，該套組含有8 mg之式II 化合物。
視需要，該套組提供呈乙腈或乙腈與共溶劑之溶液形式之式II 化合物。於一項較佳實施例中，將式II 化合物溶於乙腈或乙腈與共溶劑之混合物中，其中乙腈之百分比為至少50%，更佳70%，甚至更佳90%。
視需要，該套組提供呈乙腈或乙腈與共溶劑之溶液形式之式II 化合物。於一項較佳實施例中，將式II 化合物溶於乙腈或乙腈與共溶劑之混合物中，其中乙腈之百分比為至少50%，更佳至少70%，甚至更佳至少90%。
視需要，該套組含有用於製造式I化合物之其他組件，如固相萃取濾筒、用於氟化之試劑(如上所述)、用於裂解保護基之試劑、用於純化之溶劑或溶劑混合物、用於調配之溶劑及賦形劑。
於一項實施例中，該套組含有用於「盒型模組」(如Tracerlab MX或IBA Synthera)之平台(例如，盒)。
定義
於本發明全文中，較佳鹽係本發明化合物之醫藥可接受鹽。本發明亦包含不適宜醫藥應用但可用於(例如)分離或純化本發明化合物之鹽。
本發明化合物之醫藥適宜鹽包括無機酸、羧酸及磺酸之酸加成鹽，例如，氫氯酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸及苯甲酸之鹽。
本發明化合物之醫藥適宜鹽亦包括常見鹼之鹽，如(實例及較佳實例)鹼金屬鹽(例如鈉鹽及鉀鹽)、鹼土金屬鹽(例如，鈣鹽及鎂鹽)及由氨或具有1至16個碳原子之有機胺(如，實例及較佳實例為乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙基胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環己基胺、二甲基胺基乙醇、普魯卡因(procaine)、二苄基胺、N-甲基嗎啉、精胺酸、賴胺酸、乙二胺及N -甲基哌啶)衍生之銨鹽。
術語鹵素或鹵基係指Cl、Br、F或I。
如本文所使用之術語「胺保護基」本身或作為另一基團之一部分時，係已知或為熟習此項技術者瞭解，其係選自(但非限於)保護基類，即，胺基甲酸根、醯胺、亞醯胺、N -烷基胺、N -芳基胺、亞胺、烯胺、硼烷、N -P保護基、N -硫基、N -磺醯基及N-矽烷基，及彼等選自(但非限於)以引用方式併入本文之教科書Greene and Wuts,Protecting groups in Organic Synthesis，第三版，494至653頁所描述中者。胺保護基較佳係芐氧羰基(Cbz)、對甲氧基苄基羰基(Moz或MeOZ)、第三丁氧基羰基(BOC)、9-茀基甲基氧基羰基(FMOC)、苄基(Bn)、對甲氧苄基(PMB)、3,4-二甲氧基苄基(DMPM)、對甲氧基苯基(PMP)，或受保護之胺基係1,3-二氧-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基(苯二甲醯亞胺基)或疊氮基。如本文所使用之術語「離去基」本身或作為另一基團之一部分時係已知或為熟習此項技術者瞭解，且意指可藉由親核劑自化學物質上分離之原子或原子基。其實例示於(例如)Synthesis(1982)，85至125頁，表2(86頁；(此表2之最後內容：「n-C4 H9 S(O)2 -O-nonaflat」需要校正為「n-C4 F9 S(O)2 -O-nonaflat」))，Carey and Sundberg，Organische Synthese,(1995)，279至281頁，表5.8；或Netscher,Recent Res. Dev. Org. Chem.,2003,7,71-83，反應圖1、2、10及15及其他)、Coenen,Fluorine-18 Labeling Methods: Features and Possibilities of Basic Reactions,(2006),in: Schubiger P.A.,Friebe M.,Lehmann L.,(編輯),PET-Chemistry-The Driving Force in Molecular Imaging. Springer,Berlin Heidelberg,15至50頁，明確而言，示於：25頁反應圖4、28頁反應圖5、30頁表4、33頁圖7)中。
術語磺醯基氧基係指-O-S(O)2 -Q，其中Q係視需要經取代之芳基或視需要經取代之烷基。
如本文所使用之術語「烷基」本身或作為另一基團之一部分時，係指C1 -C10 直鏈或分支鏈烷基，如(例如)甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第三丁基、戊基、異戊基、新戊基、庚基、己基、癸基或金剛烷基。較佳，烷基係C1 -C6 直鏈或分支鏈烷基或C7 -C10 直鏈或分支鏈烷基。低碳數烷基係C1 -C6 直鏈或分支鏈烷基。
如本文所使用之術語「芳基」本自身或作為另一基團之一部分時，係指環部分中含有6至10個碳原子之單環或雙環芳基，如苯基、萘基或四氫萘基。
當使用術語「經取代」時，其意指採用「經取代」之表述中所說明之原子上之一或多個氫被選自包含鹵素、硝基、氰基、三氟甲基、烷基及O-烷基之群中一或多個部份基團取代，但其限制條件為不可以超過各原子之價數規則，且取代作用應獲得化學上穩定之化合物，亦即該化合物應足夠穩定，可以耐受自反應混合物中分離成適用純度。
除非另外說明，否則當提及本發明通式之化合物本身或其任何醫藥組合物時，本發明包括所有水合物、鹽類及錯合物。
術語「F-18」意指氟同位素18 F。術語「F-19」意指氟同位素19 F。
實例 放射化學及化學純度測定法
4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺及4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基-N-甲基苯胺之放射化學及化學純度係藉由分析型HPLC測定(管柱：Atlantis T3；150×4.6 mm，3 μm，Waters；溶劑A：5 mM K2 HPO4 pH 2.2；溶劑B：乙腈；流速：2 mL/分鐘，梯度：0:00分40% B，0:00至05:50分40至90% B，05:50至05:60分90至40% B，05:60至09:00分40% B)。
- 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)-乙烯基]-N-甲基苯胺之滯留時間：視用於品質控制之HPLC系統，為3.50至3.95分鐘。由於不同的設備(例如，管道)，不同HPLC系統間會觀察到不同滯留時間。
4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺之識別係藉由與非放射活性參考物4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-19]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺共同注射來證明。
-4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺之滯留時間：3.47分鐘。
4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺之辨識係藉由與非放射活性參考物-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-19]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺共同注射來證明。
實例1　由GE Tracerlab FX N 上之4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺放射合成法比較乙腈與DMSO作為放射氟化溶劑之影響
使用乙腈或DMSO作為氟化溶劑，在Tracerlab FXN 合成器(圖1)上合成4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。該合成器之配置及結果概述於表1中。
於QMA濾筒(C1，圖1)上收集[F-18]氟化物。使用碳酸鉀/克瑞吐菲混合物(來自「V1」)將活性物溶離至該反應器中。在溫和氮氣流及真空下加熱移除溶劑。於添加乙腈(來自「V2」)後重複乾燥。將2a 溶液(來自「V3」)添加至乾燥殘餘物中，及將混合物在120℃下加熱8分鐘。於冷卻至60℃之後，添加HCl/乙腈混合物(來自「V4」)及將溶液在110℃下加熱4小時。
為了於半製備型HPLC之前移除DMSO，取使用DMSO之標記法之粗產物經過來自「混合小瓶」之水稀釋，隨後通過C18 light濾筒(C2，圖1)。藉由來自「V5」之水清洗該濾筒而流入該「混合小瓶」中，隨後通過注射閥門排至廢料瓶中。使用乙腈，將粗產物自「V6」溶離至該「混合小瓶」中，及使用來自「V7」之甲酸銨溶液稀釋。藉由半製備型HPLC純化該混合物。將產物溶離份收集至含有30 mL水之「燒瓶」中。使溶液通過tC18 plus濾筒(C3)。藉由來自「V9」之20%乙醇水溶液清洗該濾筒，及使用1.5 mL乙醇溶離4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺至含有8.5 mL調配基質(由磷酸鹽緩衝液、PEG400及抗壞血酸組成)之產物小瓶中。
反之，已發現，若使用乙腈作為氟化溶劑，則無需C18濾筒(C2，圖1)。未將溶劑/試劑填入「V5」及「V7」中。藉由來自V6之1 mL 1 M NaOH及2 mL甲酸銨(0.1 M)稀釋粗產物混合物，隨後直接轉移至HPLC小瓶(「混合小瓶」)中。
利用7 mg2a 於1 mL乙腈中之溶液可以得到50%之較高放射化學產率(未經過衰減校正)，相較於利用7 mg 2a於1 mL DMSO中之溶液之方法，則提供38%(未經過衰減校正)4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
表1　用於合成4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺之Tracerlab FX N 之配置
使用乙腈代替DMSO之方法之另一優點係半製備型HPLC之模式。儘管使用另一個額外C18濾筒，然而殘餘DMSO導致產物峰變寬(圖2)，而使用乙腈之方法則導致尖峰，且在相同半製備型HPLC管柱上，可以改良非放射活性副產物之分離性(圖3)。
實例2　由GE Tracerlab FX N 上之4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F- 18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺合成法比較乙腈與DMSO作為放射氟化溶劑之影響
已使用乙腈或DMSO作為氟化溶劑，在Tracerlab FXN 合成器(圖1)上合成4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺。合成器之配置及結果概述於表2中。
於QMA濾筒(C1，圖1)上收集[F-18]氟化物。藉由碳酸鉀/克瑞吐菲混合物(來自「V1」)將活性物溶離至該反應器中。在溫和氮氣流及真空下加熱移除溶劑。於添加乙腈(來自「V2」)後重複乾燥。將2b 溶液(來自「V3」)添加至乾燥殘餘物中，混合物在120℃下加熱8分鐘。於冷卻至60℃之後，添加HCl/乙腈混合物(來自「V4」)及溶液在110℃下加熱4小時。
為了於半製備型HPLC之前移除DMSO，取使用DMSO之標記法粗產物經過來自「混合小瓶」之水稀釋，隨後通過C18 light濾筒(C2，圖1)。使用來自「V5」之水清洗該濾筒，流入該「混合小瓶」中，隨後通過注射閥門排至廢料瓶中。藉由來自「V6」之乙腈溶離粗產物至該「混合小瓶」中，及藉由來自「V7」之甲酸銨溶液稀釋。藉由半製備型HPLC純化該混合物。將產物溶離份收集至含有30 mL水之「燒瓶」中。使溶液通過tC18 plus濾筒(C3)。藉由來自「V9」之20%乙醇水溶液清洗該濾筒，及藉由1.5 mL乙醇溶離4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺至含有8.5 mL調配基質(由磷酸鹽緩衝液、PEG400及抗壞血酸組成)之產物小瓶中。
反之，已發現若使用乙腈作為氟化溶劑，則無需C18濾筒(C2，圖1)。未將溶劑/試劑填入「V5」及「V7」中。藉由來自「V6」之1 mL 1 M NaOH及2 mL甲酸銨(0.1 M)稀釋粗產物混合物，隨後直接轉移至HPLC小瓶(「混合小瓶」)中。
利用7 mg2b 於1 mL乙腈中可得到44%之較高放射化學產率(未經過衰減校正)，相較地，利用7 mg 2b於1 mL DMSO中之溶液，提供34%(未經過衰減校正)4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
表2　用於合成4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)乙烯基]-N-甲基苯胺之Tracerlab FX N 之配置
此外，使用乙腈替代DMSO之方法之特點在於半製備型HPLC之模式。儘管使用另一個額外C18濾筒，然而，殘餘DMSO導致產物峰變寬(圖4)，而使用乙腈之方法則導致尖峰，且在相同半製備型HPLC管柱上，可以改良非放射活性副產物之分離性(圖5)。
實例3　4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺於GE Tracerlab MX上之合成及純化
針對4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺於Tracerlab MX上之合成及純化，裝配一種套組(表3)。
表3　用於在Tracerlab MX上製造4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺之套組之組成
於MX模組上之盒之配置顯示於圖6中。
於合成次序期間，利用來自「藍色蓋小瓶」之約1.8 mL乙腈將前驅物2c 溶於「紅色蓋小瓶」中。將氟化物(2.4 GBq)轉移至該MX模組並於該QMA濾筒上收集。藉由來自「溶離劑小瓶」之碳酸鉀/克瑞吐菲混合物將活性物溶離至反應器中。於共沸脫水(加熱、真空、氮氣流及添加來自「藍色蓋小瓶」之乙腈)之後，將含2c 之乙腈溶液自「紅色蓋小瓶」轉移至反應器中。於120℃下將所得之混合物加熱10分鐘。藉由注射器，將來自「綠色蓋小瓶」之HCl轉移至反應器中。在110℃下將混合物加熱5分鐘。於脫除保護基期間，藉由左邊注射器，將來自「溶劑袋1」之溶劑混合物沖過「純化濾筒」。將粗產物混合物與來自「2 mL注射器」之氫氧化鈉/緩衝液混合物混合，並藉由來自「溶劑袋1」之溶劑稀釋。使經稀釋之粗產物混合物通過「純化濾筒」。為了排除非放射活性副產物，將來自「溶劑袋1」之溶劑填入左邊注射器，並沖過「純化濾筒」進入廢料瓶中。重複此製程6次。將來自「溶劑袋2」填入右邊注射器，並轉移至左邊注射器。藉由左邊注射器將溶劑2沖過「純化濾筒」。令第一部分進入廢料瓶，但將7.5 mL溶離份自動收集至右邊注射器中。最後，將產物溶離份轉移至產物小瓶(已預先填充調配基質1及調配基質2)。於58分鐘總製造時間內，獲得770 MBq(32%，未經過衰減校正)4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。以濾筒為主之純化法提供之放射化學及化學純產物類似藉由半製備型HPLC所獲得的純度(圖7、圖8)。
實例4　4-甲基苯磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-(甲基)胺基}-苯基]乙烯基}苯氧基)乙氧基]乙氧基]乙基酯之放射標記法
4-甲基苯磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]苯基}-乙烯基]苯氧基}乙氧基)乙氧基]乙基酯(2c)之合成法
將4-二甲基胺基吡啶(26.7 mg)及三乙胺(225 μL)添加至0℃下之含1.0 g{4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙烯基]苯基}甲基胺基甲酸第三丁基酯(4)之二氯甲烷(12 mL)溶液。於0℃下添加對甲苯磺醯氯(417 mg)之二氯甲烷(13.5 mL)溶液。於室溫下將所得之混合物攪拌過夜。於減壓下移除溶劑，及藉由急驟層析(氧化矽，0至80%乙酸乙酯之己烷溶液)純化粗產物。獲得呈無色固體形式之850 mg2c 。
1 H NMR(300 MHz,CDCl3 ) δ ppm 1.46(s,9 H),2.43(s,3 H),3.27(s,3 H),3.59-3.73(m,6 H),3.80-3.86(m,2 H),4.05-4.19(m,2 H),6.88-7.05(m,4 H),7.21(d,J =8.3 Hz,2 H),7.32(d,J =8.3 Hz,2 H),7.39-7-47(m,4 H),7.80(d,J =8.3 Hz,2 H)。
MS(ESIpos): m/z=612(M+H)+
4-甲基苯磺酸2-{2-[2-(4-{(E)-2-[4-(甲基胺基)苯基]乙烯基}苯氧基)乙氧基]-乙氧基}乙基酯之合成法 a) 4-甲基苯磺酸2-{2-[2-(4-{(E)-2-[4-(甲基胺基)苯基]乙烯基}苯氧基)乙氧基]-乙氧基}乙基酯(2d )
將200 mg 4-甲基苯磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]苯基}-乙烯基]苯氧基}乙氧基)乙氧基]乙基酯(2c )溶於2.5 mL二氯甲烷中。添加250 μL三氟乙酸及於室溫下將混合物攪拌4小時。於減壓下移除溶劑。將粗產物溶於二氯甲烷(5 mL)中，及使用碳酸鈉溶液(10%，2×2 mL)清洗。藉由硫酸鈉乾燥有機層，於減壓下移除溶劑及藉由急驟層析(氧化矽，12至100%乙酸乙酯之己烷溶液)純化殘餘物。獲得呈淺紅色固體之84 mg2d 。
1 H NMR(300 MHz,CDCl3 ) δ ppm 2.42(s,3 H),2.87(s,3 H),3.61-3.64(m,2 H),3.65-3.68(m,2 H),3.69-3.72(m,2 H),3.81-3.84(m,2 H),4.10-4.13(m,2 H),4.15-4.17(m,2 H),6.63(d,J =8.3 Hz,2H),6.84-6.91(m,4H),7.32(d,J =7.9 Hz,2H),7.34(d,J =8.7 Hz,2H),7.39(d,J =8.7 Hz,2H),7.80(d,J =8.3 Hz,2H)。
MS(ESIpos): m/z=512(M+H)+
b) 4-甲基苯磺酸2-{2-[2-(4-{(E)-2-[4-(甲基胺基)苯基]乙烯基}苯氧基)乙氧基]-乙氧基}乙基酯鹽酸鹽(2e )
將200 mg 4-甲基苯磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]苯基}-乙烯基]苯氧基}乙氧基)乙氧基]乙基酯(2c )溶於2 M HCl之***溶液中。於室溫下將混合物攪拌72小時。於減壓下移除溶劑。添加***及收集沉澱物，藉由***清洗及於減壓下乾燥。獲得呈淺黃色固體形式之160 mg2e 。
1 H NMR(300 MHz,CDCl3 ) δ ppm 2.43(s,3 H),3.03(s,3 H),3.62-3.64(m,2 H),3.66-3.68(m,2 H),3.69-3.72(m,2 H),3.82-3.85(m,2 H),4.12-4.14(m,2 H),4.16-4.18(m,2 H),6.88-6.94(m,3H),7.04(d,J =16.2 Hz,1H),7.32(d,J =7.9 Hz,2H),7.42(d,J =8.7 Hz,2H),7.49-7-56(m,4H),7.80(d,J =8.3 Hz,2H)。
MS(ESIpos): m/z=512(M+H)+
c) 4-甲基苯磺酸2-{2-[2-(4-{(E)-2-[4-(甲基胺基)苯基]乙烯基}苯氧基)乙氧基]-乙氧基}乙基酯三氟乙酸鹽(2f )
將200 mg 4-甲基苯磺酸2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]苯基}-乙烯基]苯氧基}乙氧基)乙氧基]乙基酯(2c )溶於2.5 mL二氯甲烷中。添加252 μL三氟乙酸及在室溫下將混合物攪拌5小時。於減壓下移除溶劑。藉由己烷及***清洗粗產物，及於減壓下乾燥。獲得呈淺棕色固體形式之84 mg2f 。
1 H NMR(300 MHz,DMSO d6) δ ppm 2.40(s,3 H),2.72(s,3 H),3.46-3.50(m,2 H),3.51-3.55(m,2 H),3.57-3.61(m,2 H),3.69-3.73(m,2 H),4.10-4.09(m,2 H),4.10-4.13(m,2 H),6.59-6.66(m,2H),6.85-6.97(m,4H),7.34(d,J =8.3 Hz,2H),7.43(d,J =8.8 Hz,2H),7.46(d,J =8.1 Hz,2H),7.76(d,J =8.3 Hz,2H)。
MS(ESIpos): m/z=512(M+H)+
4-甲基苯磺酸2-{2-[2-(4-{(E)-2-[4-(甲基胺基)苯基]乙烯基}苯氧基)乙氧基]-乙氧基}乙基酯(2d、2e、2f)之放射標記法
已利用碳酸鉀/克瑞吐菲、四丁基氫氧化銨或四丁基碳酸氫銨作為試劑來進行放射標記。
a)　使用碳酸鉀/克瑞吐菲之放射標記法
於QMA濾筒上收集[F-18]氟化物。利用含7.5 mg克瑞吐菲、1 mg碳酸鉀之1425 μL乙腈及75 μL水之溶液溶離活性物。於120℃下，在溫和氮氣流下乾燥混合物。於添加1 mL乙腈後重複乾燥。
添加前驅物(5.0 mg2d 或5.36 mg2e 或6.11 mg2f )於1 mg乙腈中之溶液及在120℃下將混合物加熱15分鐘。藉由放射性TLC(氧化矽、乙酸乙酯)測定氟化物吸收量，結果如表4概述。
b)　使用四丁基氫氧化銨之放射標記法
於QMA濾筒上收集[F-18]氟化物。利用300 μL4% n-Bu4 OH與600 μL乙腈之混合物溶離活性物。於120℃下在溫和氮氣流下乾燥混合物。於添加1 mL乙腈後重複乾燥。
添加前驅物(5.0 mg2d 或5.36 mg2e 或6.11 mg2f )於1 mg乙腈中之溶液，及於120℃下將混合物加熱15分鐘。藉由放射性TLC(氧化矽，乙酸乙酯)測定氟化物吸收量，結果係如表4所概述。
c)　使用四丁基碳酸氫銨之放射標記法
於QMA濾筒上收集[F-18]氟化物。利用300 μL4% n-Bu4 NHCO3 (4% n-Bu4 OH水溶液係經過二氧化碳飽和)與600 μL乙腈之混合物溶離活性物。於120℃下在溫和氮氣流下乾燥混合物。於添加1 mL乙腈後重複乾燥。
添加前驅物(5.0 mg2d 或5.36 mg2e 或6.11 mg2f )於1 mg乙腈中之溶液及於120℃下將混合物加熱15分鐘。藉由放射性TLC(氧化矽，乙酸乙酯)測定氟化物吸收量，結果係如表4所概述。
表4　2d、2e、2f之放射標記法
實例5　由GE Tracerlab FX N 上之4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺放射合成法比較使用3.5 mg與7 mg甲磺酸酯前驅物2a之影響
已在Tracerlab FXN 合成器(圖1)上合成4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
該合成器之配置及結果概述於表5中。在QMA濾筒(C1，圖1)上收集[F-18]氟化物。利用碳酸鉀/克瑞吐菲(來自「V1」)將活性物溶離至反應器中。在溫和氮氣流及真空下加熱移除溶劑。於添加乙腈(來自「V2」)之後重複乾燥。將2a 溶液(來自「V3」)添加至乾燥殘餘物及在120℃下將混合物加熱8分鐘。於冷卻至60℃之後，添加HC1/乙腈混合物(來自「V4」)及在110℃下將溶液加熱4分鐘。
將粗產物轉移至「混合小瓶」及藉由來自「V6」之氫氧化鈉/甲酸銨混合物稀釋。藉由半製備型HPLC純化粗產物。將產物溶離份收集至含有30 mL水之「燒瓶」中。使溶液通過tC18 plus濾筒(C3)。藉由來自「V9」之20%乙醇水溶液清洗該濾筒及藉由1.5 mL乙醇將4-[(E)-2-(4-{2-[2-(氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺溶離至含有8.5 mL調配基質(由磷酸鹽緩衝液、PEG400及抗壞血酸組成)之產物小瓶中。
表5　用於合成4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺之Tracerlab FX N 之配置
已發現，將前驅物之量自3.5 mg增加至7.0 mg之後，4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺之放射化學產率顯著提高。
實例6　由Eckert&Ziegler Modularlab上之4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺放射合成法比較乙腈與第三戊基醇作為放射氟化溶劑之影響
已使用乙腈或第三戊基醇作為氟化溶劑，在Eckert & Ziegler ModularLab合成器上合成4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。該合成器之配置及結果概述下表中。
於QMA濾筒(C1)上收集[F-18]氟化物。藉由克瑞吐菲(來自「V1」)將活性物溶離至反應器中。在溫和氮氣流及真空下加熱移除溶劑。添加乙腈(來自「V2」)後重複乾燥。將前驅物2a 溶液(來自「V3」)添加至乾燥殘餘物及在120℃下將混合物加熱12分鐘。於真空下，在120℃下於6分鐘內移除氟化溶劑。冷卻至40℃之後，添加HCl/乙腈混合物(來自「V4」)及在120℃下將溶液加熱10分鐘。
藉由來自V5之1.5 mL NaOH及0.3 mL甲酸銨(1 M)稀釋粗產物混合物及隨後直接轉移至HPLC小瓶(混合小瓶)中。為避免沉澱及混合物因第三戊基醇而相分離，「混合小瓶」已事先含有1 mL乙腈及1 mL乙醇。反之，已發現若使用乙腈作為氟化溶劑時，則「混合小瓶」中無需額外包含有機溶劑。
藉由半製備型HPLC純化混合物。將產物溶離份收集至含有16 mL水之「燒瓶」中。使溶液通過tC18環境濾筒(environmental cartridge)(C2)。藉由來自「V6」之20%乙醇水溶液清洗該濾筒及藉由來自「V7」之1.5 mL乙醇將4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺溶離至含有8.5 mL調配基質(由磷酸鹽緩衝液、PEG400及抗壞血酸組成)之產物小瓶中。
使用8 mg前驅物於1.8 mL乙腈中可獲得48%之較高放射化學產率(未經過衰減校正)，相對地，使用7.4 mg前驅物於1 mL第三戊基醇中之溶液之方法，可提供38%(未經過衰減校正)4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基乙烯基)-N-甲基苯胺。
實例7　由GE Tracerlab MX上之4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺放射合成法比較乙腈與第三戊基醇作為放射氟化溶劑之影響
使用乙腈或第三戊基醇作為氟化溶劑，在GE Tracerlab MX合成器上合成4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。該合成器之配置及結果概述於下表中。
於QMA濾筒(C1)上收集[F-18]氟化物。藉由克瑞吐菲混合物(來自「V1」)將活性物溶離至反應器中。在溫和氮氣流及真空下加熱移除溶劑。添加乙腈(來自「V2」)之後重複乾燥。將前驅物2a 溶液(來自「V3」)添加至乾燥殘餘物及於120℃下將混合物加熱10分鐘。若使用第三戊基醇作為氟化溶劑，則於真空、120℃下，於6分鐘內移除氟化溶劑。當使用乙腈作為氟化溶劑時，無需蒸發步驟。於冷卻至40℃之後，添加HCl/乙腈混合物(來自「V4」)及若使用第三戊基醇作為氟化溶劑時，則在100℃下加熱溶液7分鐘，及若使用乙腈作為氟化溶劑時，則在110℃下加熱5分鐘。
藉由來自「V5」之1.8 mL 2 M NaOH及0.3 mL甲酸銨(1 M)稀釋粗產物混合物及隨後直接轉移至含有0.5 mL乙醇之產物小瓶中。
使用8 mg前驅物於1.8 mL乙腈中之溶液可獲得73%之較高放射化學產率(未經過衰減校正)，反之，使用8 mg前驅物於1.7 mL第三戊基醇及0.4 mL乙腈中之溶液之方法可提供66%(未經過衰減校正)未經純化之4-[(E )-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。
使用乙腈替代第三戊基醇之方法之另一優點係生料之放射化學純度模式。
當使用乙腈作為氟化溶劑時，放射標記時間較短，係因在放射標記後無需如使用第三戊基醇溶劑般蒸發溶劑。此外，使用乙腈作為氟化溶劑時，可觀察到放射活性之損失顯著降低，係因在真空管線中沒有如同使用第三戊基醇之方法中之蒸發步驟期間所發生之殘餘活性物。
實例8　使用DMSO之方法與使用乙腈之新穎方法之比較
於由Zhang等人之WO 2006066104中實例1、實例6及實例7一般說明之三種不同合成器(Eckert & Ziegler modular lab、GE Tracerlab FX、GE Tracerlab MX)上合成一系列4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。藉由HPLC方法A或B純化粗產物混合物。
方法A )：藉由2 M NaOH與0.1 M甲酸銨之混合物中和脫除保護基後所得之粗產物混合物(用於在DMSO中進行放射標記，粗製混合物另藉由在C18 light濾筒上進行固相萃取法預先純化，然後負載於HPLC上)並注射至半製備型HPLC上(例如，管柱：Gemini C18，10×250 mm，5 μm，Phenomenex；溶劑：70%乙腈，30% 0.1 M甲酸銨緩衝液，含5 mg/mL抗壞血酸鈉，流速3 mL/分鐘)。藉由10 mg/mL抗壞血酸鈉將產物溶離份收集至含有約160 mL水之燒瓶中。使混合物通過C18濾筒(tC18 SepPak環境濾筒，Waters)。藉由約8至10 mL之20% EtOH水溶液(含有10 mg/mL抗壞血酸鈉)清洗該濾筒。最後，藉由1.5或3 mL乙醇將產物溶離至含有8.5或17 mL「調配基質」(含有PEG400、磷酸鹽緩衝液及抗壞血酸)之小瓶中。
方法B )：(不用於在DMSO中進行放射標記)藉由2 M NaOH與0.1 M甲酸銨之混合物中和脫除保護基後所得之粗產物混合物，並注射至半製備型HPLC(管柱：例如，Gemini C18，10×250 mm，5 μm，Phenomenex或Synergi Hydro-RP，250×10 mm，10 μm 80，Phenomenex或Synergi Hydro-RP，250×10 mm，4 μm 80，Phenomenex；溶劑：60至70%乙醇、40至30%抗壞血酸鹽緩衝液5 mg/mL抗壞血酸鹽；流速3 mL/分鐘或4 mL/分鐘或6 mL/分鐘)。將產物溶離份直接收集至含有「調配基質」(包含PEG400、磷酸鹽緩衝液及抗壞血酸)之小瓶中，以提供10至24 mL最終調配物。於軟體中調整截峰時間，以獲得包含15% EtOH之調配物。
圖9中每一空心方塊(各表示一次使用DMSO之合成法結果，8個實驗)及各實心點(各表示使用乙腈之合成結果，108個實驗)代表示製造4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺之個別實驗。藉由趨勢線顯示產物活性與[F-18]氟化物之起始活性之相關性趨勢。
就使用乙腈之本發明新穎方法而言，產物活性對起始活性展現近乎線性之相關性。反之，尤其在高放射活性度下，使用DMSO作為反應溶劑時，反而獲得較低產率。
實例9　使用三級醇類之方法與使用乙腈之新穎方法之比較
於如US 20100113763中實例6及實例7一般說明之兩種不同合成器(Eckert & Ziegler modular lab及GE Tracerlab MX)上合成一系列4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺。藉由HPLC方法A或B純化粗產物混合物。
方法A )：
藉由2 M NaOH與0.1 M甲酸銨之混合物中和脫除保護基後所得之粗產物混合物並注射至半製備型HPLC上(例如，管柱：Gemini C18，10×250 mm，5 μm，Phenomenex；溶劑：70%乙腈，30% 0.1 M甲酸銨緩衝液，含5 mg/mL抗壞血酸鈉，流速3 mL/分鐘)。藉由10 mg/mL抗壞血酸鈉將產物溶離份收集至含有約160 mL水之燒瓶中。使混合物通過C18濾筒(tC18 SepPak環境濾筒，Waters)。藉由約8至10 mL之20% EtOH水溶液(含有10 mg/mL抗壞血酸鈉)清洗該濾筒。最後，藉由1.5或3 mL乙醇將產物溶離至含有8.5或17 mL「調配基質」(含有PEG400、磷酸鹽緩衝液及抗壞血酸)之小瓶中。
方法B )：
藉由2 M NaOH與0.1 M甲酸銨之混合物中和脫除保護基後所得之粗產物混合物，並注射至半製備型HPLC(管柱：例如，Gemini C18，10×250 mm，5 μm，Phenomenex或Synergi Hydro-RP，250×10 mm，10 μm 80，Phenomenex或Synergi Hydro-RP，250×10 mm，4 μm 80，Phenomenex；溶劑：60至70%乙醇、40至30%抗壞血酸鹽緩衝液5 mg/mL抗壞血酸鹽；流速3 mL/分鐘或4 mL/分鐘或6 mL/分鐘)。將產物溶離份直接收集至含有「調配基質」(包含PEG400、磷酸鹽緩衝液及抗壞血酸)之小瓶中，以提供10至24 mL最終調配物。於軟體中調整截峰時間，以獲得包含15% EtOH之調配物。
圖10中之各十字符號(各表示使用第三戊基醇之合成結果，103個實驗)及各實心點(各表示使用乙腈之合成結果，108個實驗)代表關於製造4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺之個別實驗。由趨勢線顯示產物活性與[F-18]氟化物之起始活性之相關性趨勢。
由使用乙腈之本發明新穎方法之結果發現近乎線性之相關性。反之，尤其在較高放射活性度下，使用第三戊基醇作為反應溶劑時，獲得較高之結果偏差及較低產率。
實例10　在Tracerlab FX N 上之4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}吡啶-3-基)-N-甲基苯胺合成法
於Tracerlab FXN 合成器上進行該合成法。於QMA濾筒上收集[F-18]氟化物(10 GBq)。藉由碳酸鉀/克瑞吐菲/乙腈/水混合物將活性物溶離至反應器中。在溫和氮氣流及真空下加熱移除溶劑。於添加乙腈之後重複乾燥。將8 mg2b 於1.5 mL乙腈中之溶液添加至乾燥殘餘物及在120℃下將混合物加熱10分鐘。冷卻至60℃之後，添加1 mL 1.5 M HCl及在110℃下將反應器加熱5分鐘。粗產物經過中和(1 mL 1 M NaOH/甲酸銨)、稀釋(使用0.5 mL EtOH及1.5 mL MeCN)並轉移至半製備型HPLC管柱(Synergy Hydro-RP，250×10 mm，Phenomenex)。使用60%乙醇與40%抗壞血酸鹽緩衝液(5 g/l抗壞血酸與50 mg/l抗壞血酸，pH 7.0)之混合物，依3 mL/分鐘沖過該管柱。於10分鐘時直接收集產物溶離份100秒，並與15 mL調配基質(磷酸鹽緩衝液、抗壞血酸、PEG400)混合。
於61分鐘總合成時間內獲得4.2 GBq(42%，未經過衰減校正)。放射化學純度(藉由HPLC測定，tR =3.42分鐘)係經測定為>99%。
實例11　於Tracerlab FX N 上之4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺合成法
在Tracerlab FXN 合成器上進行該合成。於QMA濾筒上收集[F-18]氟化物(6.85 GBq)。藉由碳酸鉀/克瑞吐菲/乙腈/水混合物將活性物溶離至反應器中。在溫和氮氣流及真空下加熱移除溶劑。於添加乙腈之後重複乾燥。將8 mg2g 於1.5 mL乙腈中之溶液添加至乾燥殘餘物及在120℃下將混合物加熱10分鐘。冷卻至60℃之後，藉由4 mL HPLC溶離劑稀釋粗產物並轉移至半製備型HPLC管柱(Synergy Hydro-RP，250×10 mm，Phenomenex)。使用60%乙醇與40%抗壞血酸鹽緩衝液(5 g/l抗壞血酸與50 mg/l抗壞血酸，pH 7.0)之混合物依3 mL/分鐘沖過該柱。於12分鐘時直接收集產物溶離份100秒並與15 mL調配基質(磷酸鹽緩衝液、抗壞血酸、PEG400)混合。
於53分鐘總合成時間內獲得2.54 GBq(37%，未經過衰減校正)。放射化學純度(藉由HPLC測定，tR =3.78分鐘)係經測定為>99%。
C1．．．濾筒
C2．．．濾筒
C3．．．濾筒
V1．．．小瓶
V2．．．小瓶
V3．．．小瓶
V4．．．小瓶
V5．．．小瓶
V6．．．小瓶
V7．．．小瓶
V8．．．小瓶
V9．．．小瓶
圖1　Tracerlab FXN之配置(自tracerlab軟體獲得)；
圖2　使用DMSO之合成法之製備型HPLC層析圖(上圖：放射活性，下圖：UV 254 nm)；
圖3　使用乙腈之合成法之製備型HPLC層析圖(上圖：放射活性，下圖：UV 254 nm)；
圖4　使用DMSO之合成法之製備型HPLC層析圖(上圖：放射活性，下圖：UV 254 nm)；
圖5　使用乙腈之合成法之製備型HPLC層析圖(上圖：放射活性，下圖：UV 254 nm)；
圖6　用於4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺合成法之Tracerlab MX之配置(自coincidence FDG軟體獲得)；
圖7　於通過「純化濾筒」前之MX合成法粗產物之分析型HPLC(樣品係自反應器提取)；a：放射活性；b：UV信號320 nm；
圖8　於MX合成及以濾筒為主之純化後之4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]氟乙氧基)乙氧基]-乙氧基}苯基)乙烯基]-N-甲基苯胺之分析型HPLC；a：放射活性；b：UV信號320 nm；
圖9　新穎方法(MeCN)與上述方法1(DMSO)之結果比較；及
圖10　新穎方法(MeCN)與上述方法2(第三戊基醇)之結果比較。
(無元件符號說明)

Claims (13)

  1. 一種生產式I 化合物之方法 其包括步驟：步驟1 ：藉由F-18氟化劑放射標記式II 化合物，以獲得該式I 化合物(當R =H)或獲得式III 化合物(當R =PG ) 步驟2 ：當R =PG ，則裂解保護基PG ，以獲得該式I 化合物，步驟3 ：純化及調配該式I 化合物，其中：n =1至6，X 係選自由以下組成之群a)CH，b)N，R 係選自由以下組成之群a)H， b)PG ，PG 係「胺保護基」，LG 係離去基，其中LG 含有0至3個氟原子，其中步驟1 係於乙腈中進行。
  2. 如請求項1之方法，其中PG 係選自由以下組成之群：a)第三丁氧基羰基，b)三苯甲基及c)4-甲氧三苯甲基。
  3. 如請求項1或2之方法，其中LG 係選自由以下組成之群：a)鹵素及b)磺醯基氧基，其中鹵素係氯、溴或碘。
  4. 如請求項3之方法，其中磺醯基氧基係選自由以下組成之群：a)甲磺醯基氧基，b)對甲苯磺醯基氧基，c)(4-硝基苯基)磺醯基氧基，d)(4-溴苯基)磺醯基氧基。
  5. 如請求項1之方法，其中n=3及X=CH。
  6. 如請求項1之方法，其中n=3，X=CH，R=第三丁氧基羰基及LG=甲磺醯基氧基。
  7. 2、5或6之方法，其中步驟1 中使用1.5至75μmol之該式II化合物。
  8. 2、5或6之方法，其中步驟1 中使用10至30μmol之該式II化合物。
  9. 2、5或6之方法，其中步驟1 中使用12至25μmol之該式II化合物。
  10. 2、5或6之方法，其中該方法係以完全自動化方法之方式實施。
  11. 2、5或6之方法，其中步驟3包括藉由高效能液相層析純化。
  12. 如請求項11之方法，其中該用於步驟3之高效能液相層析溶劑係乙醇與水性緩衝液之混合物。
  13. 如請求項12之方法，其中該水性緩衝液包含抗壞血酸或其鹽。
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