EA025625B1 - Модифицированные антикомплементарные олигонуклеотиды с противораковыми свойствами и способ их получения - Google Patents
Модифицированные антикомплементарные олигонуклеотиды с противораковыми свойствами и способ их получения Download PDFInfo
- Publication number
- EA025625B1 EA025625B1 EA201300489A EA201300489A EA025625B1 EA 025625 B1 EA025625 B1 EA 025625B1 EA 201300489 A EA201300489 A EA 201300489A EA 201300489 A EA201300489 A EA 201300489A EA 025625 B1 EA025625 B1 EA 025625B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- rna
- dna
- polynucleotides
- oligonucleotides
- mixture
- Prior art date
Links
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 28
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 26
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 16
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 43
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 22
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 9
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 4
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 claims description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims 1
- 150000003628 tricarboxylic acids Chemical class 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 29
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 24
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 10
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 abstract description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 6
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 abstract 1
- -1 halogen carboxylic acids Chemical class 0.000 abstract 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 229940063683 taxotere Drugs 0.000 description 15
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 9
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 7
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 7
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 5
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 4
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 3
- 241000152447 Hades Species 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 240000000220 Panda oleosa Species 0.000 description 2
- 235000016496 Panda oleosa Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 201000004477 skin sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N (1aR,1bS,4aR,7aS,7bS,8R,9R,9aS)-4a,7b,9,9a-tetrahydroxy-3-(hydroxymethyl)-1,1,6,8-tetramethyl-1,1a,1b,4,4a,7a,7b,8,9,9a-decahydro-5H-cyclopropa[3,4]benzo[1,2-e]azulen-5-one Chemical compound C1=C(CO)C[C@]2(O)C(=O)C(C)=C[C@H]2[C@@]2(O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@]3(O)C(C)(C)[C@H]3[C@@H]21 QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000015580 Increased body weight Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical group C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108091006629 SLC13A2 Proteins 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- FXRDPPFLWGSMQT-UHFFFAOYSA-N benzo[f]chromen-3-one Chemical compound C1=CC=C2C(C=CC(O3)=O)=C3C=CC2=C1 FXRDPPFLWGSMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N phorbol Natural products C[C@@H]1[C@@H](O)[C@]2(O)[C@H]([C@H]3C=C(CO)C[C@@]4(O)[C@H](C=C(C)C4=O)[C@@]13O)C2(C)C QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008263 repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/30—Production chemically synthesised
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение может быть использовано в медицине и ветеринарии для создания препарата, эффективного для лечения онкологических заболеваний человека и животных. Суть изобретения: модифицированные антикомплементарные олигонуклеотиды с противораковыми свойствами и способ их получения, отличающиеся тем, что в качестве олигонуклеотидов используют смесь продуктов гидролиза полинуклеотидов, а модификацию проводят путем изменения на противоположный знак зарядов молекул нуклеотидных оснований, приобретающих при этом антикомплиментарные свойства. Гидролиз полинуклеотидов проводят с применением природных или синтетических нуклеаз, кислотного или щелочного гидролиза, а модификацию структуры - путем ацилирования аминогрупп мононуклеотидов в структуре олигонуклеотидов ангидридами дикарбоновых кислот или путем алкилирования галогенкарбоновыми кислотами. Разработанная смесь обладает способностью селективно связываться с мРНК и останавливать тем самым синтез белка в раковых клетках подобно действию микроРНК. Применение препарата в связи с его способностью адаптироваться к организму позволяет преодолевать привыкание опухоли к препарату. Средство имеет широкий спектр действия, малотоксично и доступно для промышленного производства, эффективно на всех стадиях ракового процесса.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к фармации и онкологии, и предназначено для лечения онкологических заболеваний человека.
Предшествующий уровень техники
Среди существующих новых направлений в лечении онкологических заболеваний существует ряд весьма перспективных подходов. Одним из таких подходов можно считать разработку препаратов для генной терапии рака (1]. В данном подходе основным действующим началом являются полинуклеотиды. Генную терапию можно разделить на две большие группы: средства для инактивации генов [2] и средства для внесения генного материала внутрь клетки [3]. Инактиваторы генов еще называют апйкепке полинуклеотиды [4]. Многочисленные исследования, которые проводятся в данном направлении, реально эффективных ίη νίνο препаратов не выявили. Это связано с целым рядом проблем: синтезированные ДНК (РНК) быстро разрушались нуклеазами крови [5], не проникали внутрь клеток, разрушались системами репарации генома [6]. Иногда ίη νίίτο наблюдалась кратковременная блокада экспрессии белковмишеней, накопление в гепатоцитах [7]. Существуют разные подходы к проектированию аШйеще олигонуклеотидов, но принцип их взаимодействия с мишенями остается один: образование водородных связей между комплементарными нуклеотидами при увеличении степени устойчивости к нуклеазам [8]. В одних случаях разработчики защищали от действия нуклеаз 5'- конец олигонуклеотида, в других - модифицировали 3'- конец [9’10]. Исследователи из США заменили дезоксирибозильные остатки на фрагменты морфолина с целью создать устойчивые к действию нуклеаз фрагменты ДНК (РНК) [11,12]. При этом принцип инактивации генов путем их комплементарного взаимодействия с апйкепке-нуклеотидами остался прежним - образование водородных связей. Именно эта водородная связь и является основной причиной неэффективности существующих препаратов на основе апйкепке - ДНК (РНК). Ферменты типа геликаз [13] очень быстро и легко раскручивают гибридизованную с геном-мишенью апйкепке - ДНК и активность гена снова восстанавливается.
Известны нуклеотидные последовательности, связанные с развитием рака предстательной железы и легких [14]. Механизм действия этих микроРНК связан с подавлением синтеза белка, через блокаду трансляции матричной РНК. Авторы запатентовали последовательности микроРНК, подтвердили их эффекты в клеточных культурах, показали специфичность данных олигонуклеотидов к этим двум видам опухолей. Основными недостатками патента является то, что авторы не показали возможные пути применения данных микроРНК для борьбы с онкологическими заболеваниями, не показали, как можно защитить эти олигонуклеотиды от действия нуклеаз в организме, не показали противоракового эффекта препаратов на основе этих микроРНК.
Наиболее близким прототипом являются олигонуклеотиды содержащие модифицированные и неприродные нуклеотидные основания [15]. Механизм действия запатентованных олигонуклеотидов был аналогичен апШепке ΚΝΑ и Ш1сто ΚΝΑ, а препараты могли применяться в лечении, в том числе онкологических заболеваний. Недостатком патентуемых олигонуклеотидов является применение природного принципа образования связи с РНК-мишенью - водородной связи, чувствительной к нуклеазам и геликазам. Кроме того, патентовалась четкая статическая химическая структура, не способная адаптироваться к окружающим условиям. Применение объекта данного патента не было эффективным в экспериментах на моделях животных при онкологических заболеваниях, кроме того, данная разработка применима более для диагностических и скрининговых исследований ίη νίίτο, чем создание препаратов для лечения животных и человека в связи с тем, что предлагаемые модификации нуклеотидных оснований являются новыми ксенобиотиками и не подлежат безопасному метаболизму и биодеградации в организме.
Раскрытие изобретения
В основу изобретения поставленная задача разработать модифицированные антикомплементарные олигонуклеотиды с противораковыми свойствами и способ их получения.
Поставленная задача решается путем получения модифицированных антикомплементарных олигонуклеотидов с противораковыми свойствами, отличающимися тем, что в качестве олигонуклеотидов используют смесь (ансамбль) продуктов гидролиза полинуклеотидов, а модификацию проводят путем изменения на противоположный знак зарядов молекул нуклеотидных оснований, приобретающих при этом антикомплиментарные свойства.
Также поставленная задача решается путем разработки способа получения модифицированных антикомплементарных олигонуклеотидов с противораковыми свойствами, отличающегося тем, что для их получения сперва проводят частичный гидролиз полинуклеотидов (ДНК, РНК или их смеси) растительного, животного, микробного или грибкового происхождения химическим или биохимическим (ферментативным) путем, а затем проводят процесс химической модификации суммы полученных олигонуклеотидов с заменой заряда молекул их нуклеотидных оснований на противоположный путем алкилированием монохлоруксусной кислотой или ацилированием янтарным ангидридом и используют в качестве противоракового средства смесь (ансамбль) из полученных антикомплементарных олигонуклеотидов.
- 1 025625
Краткое описание чертежей
Фиг. 1А - специфичная гибридизация ацилированных РНК только со своими предшественниками (фиг. 1В - та же реакция с ДНК-плазмидами).
Фиг. 2 - замена водородной связи на ионную при образовании гибридов между антикан и мишенями.
Фиг. 3 - саркома. Окраска гематоксилин - эозин.
Лучший вариант осуществления изобретения
В наших ранних исследованиях при изучении ацилированных полинуклеотидов был выявлен новый феномен: ацилированные по экзоциклическим аминогруппам полинуклеотиды селективно гибридизуются только со своими неацилированными предшественниками. Плазмида рИС18 гибридизовалась только со своим ацилированным производным, а плазмида рВК322 гибридизовалась, соответственно, только с ацилированной рВК322 (фиг. 1А и 1В). При этом образовывались нерастворимые, неплавкие конъюгаты. Именно свойство неплавкости отличало классические двухспиральные ДНК от полученных гибридов. Они не плавились ни при какой температуре и не растворялись ни в чем, кроме концентрированных щелочей. Данное свойство синтезированных ацил-ДНК мы объясняем изменением самого принципа образования связи между цепями ДНК: с водородной на ионную и смешанную.
Такая связь (фиг. 2) абсолютно не предусмотрена природными механизмами репарации. Таким образом, клеточные геликазы и нуклеазы будут неэффективными при образовании гибридов между такими ацил-ДНК (РНК) и их неацилированными предшественниками. Кроме полинуклеотидов, нами была показаны зависимость заряд-активность и в ряду других ацилированных биополимеров: белков, полисахаридов, полинуклеотидов, таннидов, бактериофагов, иммуноглобулинов. На основе этих исследований разработан и внедрен новый ветеринарный противовирусный препарат [16]. Нами было установлено, что определенная прецизионная модификация структуры биополимера способна или увеличить его биологическую активность, полностью изменить свойства или привести к образованию самоорганизующихся структур. Обнаруженные нами закономерности были положены в основу принципа получения микроРНК с ацилированными экзоциклическими аминогруппами. Нами использован ансамбль из олигонуклеотидов - продуктов гидролиза полинуклеотидов, но с измененными на противоположные зарядами молекул. Ансамбль - термин из супрамолекулярной химии. Объекты супрамолекулярной химии - супрамолекулярные ансамбли, строящиеся самопроизвольно из комплементарных, т.е. имеющих геометрическое и химическое соответствие фрагментов, подобно самопроизвольной сборке сложнейших пространственных структур в живой клетке [17’18].
Данный препарат получил название антикан. Ранее нами были изучены липосомальные формы некоторых перспективных препаратов и на основе тех данных разработана лекарственная форма для антикан
МикроРНК - это новый класс некодирующих РНК длиной 18-25 нуклеотидов, которые негативно регулируют посттрансляционную экспрессию генов. Механизм действия этих малых фрагментов РНК основан на взаимодействии (гибридизации) микроРНК с матричной РНК прямо в полирибосомальном комплексе. Такая гибридизация приводит к остановке синтеза конкретного белка. Роль микроРНК в онкогенезе и перспективы использования микроРНК в терапии рака представлены в обзоре [19]. Но микроРНК не способны самопроизвольно проникать через клеточную мембрану. В настоящий момент ведутся исследования по созданию разнообразных транспортных систем для доставки микроРНК в клеткимишени. Наиболее перспективными носителями являются липосомы, полимерные наночастицы, самоорганизующиеся полимеры.
Известна способность многих аденокарцином захватывать из межклеточного матрикса посредством пиноцитоза олигонуклеотиды и наночастицы [20’21]. При этом здоровые клетки не способны захватывать малые олигонуклеотиды и липосомы [22]. Это обеспечивает селективность накопления антикан в раковых клеток и отсутствие токсичности у препарата. Для получения антикан нами была использована суммарная дрожжевая РНК, фрагментированная панкреатической нуклеазой до фрагментов размерами от 2 до 15 н. Затем экзоциклические аминогруппы этих олигонуклеотидов были модифицированы с заменой заряда. Для усиления накопления антикан в опухоли, он был включен в моноламелярные фосфотидилхолиновые липосомы. Селективное накопление в раковой клетке антикан приводит к его гибридизации с комплементарными мишенями в матричной РНК раковой клетки и к постепенной остановке синтеза белка, антикан блокирует не только интронные, но экзонные области в матричной РНК, что приводит практически к мгновенной остановке синтеза белка Действие антикан основано на индукции апоптоза через остановку синтеза белка, антикан фактически не влияет на здоровые клетки, блокирует синтез всех клеточных белков, исключает адаптацию раковой опухоли к терапии и селекцию устойчивых клеток.
Молекулярный механизм действия препарата не изучался.
Антикан кроме противораковой активности ίη νίίτο, также проявил высокую активность ίη νίνο на моделях бензидиновой саркомы у крыс, асцитной аденокарциномы Эрлиха у мышей (данные представлены в отчете).
Пример 1. Получение ансамбля (смеси) модифицированных олигонуклеотидов (Антикан).
Микробная биомасса содержит до 11% нуклеиновых кислот и может служить сырьем для получе- 2 025625 ния микробной РНК, на основе которой возможно получение деринатов, представляющих собой смесь олигонуклеотидов. Объектом исследований данного этапа работы явилась РНК, выделенная из биомассы дрожжей р. §ассЬаготусс8 ссгсуыас.
Выделение суммарной РНК из пекарских дрожжей. Размораживали при комнатной температуре 4 кг прессованных дрожжей, измельчали их и суспендировали в 8 л кипящей воды, содержащей 300 г ДДС-Иа. Суспензию кипятили 40 мин при непрерывном перемешивании, затем разливали по стальным центрифужным стаканам, помещали их немедленно в лед и охлаждали до 5°С (~15 мин), после чего центрифугировали на центрифуге 6К15 производства Германии (17000 г, 10 мин, 4°С). Осадок и часть желеобразной интерфазы отбрасывали, а перешедшую в надосадочную жидкость РНК очищали. Для этого к надосадочной жидкости, полученной на предыдущей стадии, добавляли ЫаС1 до конечной концентрации 3М. После растворения соли суспензию выдерживали в течение 1 ч для формирования осадка, который далее отделяли центрифугированием при 17000 г, в течение 10 мин. Осадок промывали двумя порциями по 8 л 3М ЫаС1, суспендировали в 2 л этанола и оставляли на ночь. На следующий день суспензию центрифугировали при 17000 г, в течение 10 мин. Осадок растворяли в дистиллированной воде до концентрации РНК 450 Ό260, ед./мл (~1,6 л). Раствор осветляли центрифугированием при тех же условиях, после чего из надосадочной жидкости РНК осаждали, добавляя ЫаС1 до конечной концентрации 0,15 М и равный объем этанола (~2 л). Сформировавшийся осадок отделяли от супернатанта центрифугированием (17000 г, 10 мин), промывали 1 л этанола и высушивали в вакуум - эксикаторе над СаС1. Все операции проводили при 0-4°С.
Выделение высокополимерной РНК из пекарских дрожжей.
День 1 - экстракция РНК. Растворяли 7,5 г ДДС-Ыа в 300 мл воды в термостойком стеклянном стакане на 1 л, доводили раствор до кипения и высыпали в него в течение 5 мин 30 г сухих дрожжей так, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 98°С. Полученную суспензию кипятили 40 мин при непрерывном перемешивании и по мере упаривания добавляли в нее кипящую воду до 300 мл. По окончании экстракции суспензию охлаждали до ~60°С, добавляли в нее свежевскипяченную воду до 450 мл, перемешивали, переносили в мерный цилиндр на 500 мл и ставили отстаиваться при 20°С на 22 ч.
День 2 - высаливание РНК и промывка высоленной РНК 3М ЫаС1. Отстоявшийся супернатант (280 мл) переносили в мерный стеклянный стакан объемом 500 мл, добавляли в него 81 г ЫаС1 и воду до 450 мл, перемешивали и ставили отстаиваться при 19°С на 6 ч. Через 6 ч образовавшуюся интерфазу (250 мл) отбирали, а в разделившуюся на 2 фракции (часть осела, часть всплыла) высоленную РНК добавляли 3М ЫаС1 до 450 мл, перемешивали и ставили отстаиваться при 19°С на ночь.
День 3 - промывка высоленной РНК 3М ЫаС1.
Интерфазу (300 мл) отбирали, а к высоленной РНК добавляли 3М ЫаС1 до 450 мл, перемешивали и ставили отстаиваться при 19°С на 5 ч. Через 5 ч интерфазу (280 мл) отбирали, а к высоленной РНК добавляли 3М ЫаС1 до 450 мл, перемешивали и ставили отстаиваться при 19°С на 3 ч. Через 3 ч интерфазу (250 мл) отбирали, а к высоленной РНК добавляли 3М ЫаС1 до 450 мл, перемешивали и ставили отстаиваться при 19°С на ночь.
День 4 - промывка высоленной РНК спиртом. Верхнего слоя почти нет. Осадок занимает объем ~100 мл. Супернатант удаляли, а к осадку добавляли этанол до 300 мл, перемешивали и ставили отстаиваться при 18°С на 5 ч. Через 5 ч супернатант сливали, а к осадку (140 мл) добавляли свежую порцию этанола до 320 мл, перемешивали и ставили отстаиваться при 19°С на 40 мин, после чего супернатант сливали, а к осадку (120 мл) добавляли 120 мл свежего этанола, перемешивали и через 30 мин отстоя супернатант сливали. К осадку (110 мл) добавляли 110 мл свежего этанола, перемешивали и через 30 мин отстоя супернатант сливали, а суспензию РНК выливали тонким слоем в плоскую ванночку и сушили на воздухе при комнатной температуре до отсутствия запаха спирта. Чистую высокополимерную РНК из высушенного полуфабриката выделяли экстракцией водой в целлофановом диализном мешке.
Ферментативный гидролиз полученной суммы РНК. В качестве нуклеазы была выбрана панкреатическая рибонуклеаза (РНК-аза) с активностью 14000 ед./мг в количестве 0,4% от массы РНК. Гидролиз РНК проводили в течение 4 ч. Гидролизат высушивали в распылительной сушилке.
Химическая модификация олигонуклеотидов гидролизата. Получали 3,5% водный раствор гидролизата, добавляляли янтарный ангидрид в количестве от 10 до 45% от сухой массы гидролизата, перемешивали на холоде до полного растворения ангидрида. Полученный раствор стерилизовали 120 мин текучим паром. Готовый раствор далее исследовали на предмет наличия противораковых свойств.
Пример 2. Изучение острой токсичности Антикана.
Было поставлено 36 серий опытов на 220 животных.
Среднесмертельную дозу антикана устанавливали на 3 видах животных: беспородных белых мышах массой 20-22 г, белых крысах массой 190-200 г и морских свинках массой 300-400 г обоего пола при внутривенном введении. С целью сравнения широты терапевтического действия антикана и препарата сравнения - таксотера - мы устанавливали среднесмертельную дозу таксотера также при внутривенном введении.
- 3 025625
Расчет среднесмертельной дозы проводили по методу Б.М. Штабского с использованием уравнения:
где Υ-% эффективности
где XX и Х2 - значение двух крайних из трех исследованных доз, которые имеют эффект в менее или более 50% животных, третья доза является промежуточной;
Υ1 и Υ2 - проценты летальности, которые отвечают дозам XI и Х2;
ΣΥ - сумма трех исследованных доз;
количество доз, которые использовались при расчетах, равно 3.
При подстановке к формуле (1) значения Υ, которое составляет 50, 84, 16 процентов смертности, рассчитывали БИ50, БИ84 и БИ16. Потом находили δ- среднюю ошибку среднесмертельной дозы, благодаря использованию формулы Миллера-Тейнтера
16,
N - общее количество животных в группах, в которых погибло или выжило хоть одно животное, и устанавливали доверительные интервалы.
Мышам антикан вводили внутривенно медленно (перед использованием готовили векторные липосомы к сухому лиофилизированному порошку Антикан, который брали в соответствующих дозах, добавляли раствор 0,9% натрию хлорида) в дозах 1000, 1500, 2000, 2500, 3500 мкг/кг массы животного. Анализ результатов свидетельствует об о том, что среднесмертельная доза препарата для этого вида животных составляет 2780 мкг/кг.
Исследование антикана на крысах в дозах 1000, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000 мкг/кг дало возможность рассчитать среднесмертельную дозу для этого вида животных - 2590 мкг/кг. Среднесмертельная доза антикана для для морских свинок составляет 2420 мкг/кг массы.
При внутривенном пути использования таксотера крысам БИ 50 = 120 мкг/кг массы тела.
Сравнительная характеристика Антикана и Таксотера приведена в табл. 5.
Таблица 1
Сравнительные характеристики Антикана и Таксотера
| Препарат | ЕВ50, мкг/кг | Б1Д 50» мкг/кг у крыс при внутрисосудистом введении | Терапевтическ нй индекс | Относительны й терапевтическ ий индекс |
| Антикан | 5 | 2590 | 518 | 151,5 |
| Таксотер | 35 | 120 | 3,42 | 1 |
Анализ полученных данных, которые показаны в табл. 1, приводит к выводу о том, что антикан в липосомах менее токсичен, чем препарат таскотер, и превосходит препарат сравнения по эффективной дозе. Терапевтический индекс, который характеризует широту терапевтического действия, у антикана в 151,5 раз больше, чем у препарата сравнения благодаря липосомальной форме. Для экстраполяции токсичности антикана на человека мы рассчитали коэффициент видовой чувствительности (КВЧ) по формуле
БП50 (для крыс) 2590
КВЧ--------------------------- ------------------= 0,9
БИ50 (для мышей) 2780
Таким образом, антикан не имеет видовой чувствительности или она медленно выражена.
- 4 025625
Пример 3. Противораковая активность антикана.
Определение противораковой активности антикана в клеточной культуре проводили в культуре клеток НеЬа-2. Для этого к среде 199 добавляли разное количество антикана от 2 до 12 мкг/мл среды. (см.таб 2) Для контроля использовали культуру без антикана. Наблюдение за культурами клеток вели в течение 5 суток с ежедневным просмотром. Минимальной активной дозой (МАД) антикана считали такое его минимальное количество, которое вызывало дегенерацию 90-95% клеток (табл. 2)
Таблица 2
Сравнительная характеристика чувствительности культуры опухолевых клеток НеЬа-2 относительно антикана
| Активность антикана при разной кислотности среды 199 1 культуры клеток. |
| Препарат | МАД в мкг/мл | Контроль | Опыт |
| Анти-кан | 10 | 0 | ++++ |
| Таксотер | 10 | 0 | ++ |
| Липосом ы пустые | 0 | 0 |
1 Цитопатическое действие;
++++ дегенерация 100% клеток;
отсутствие дегенерации.
При установлении минимальной концентрации антикана, которая тормозит рост клеток проведено сопоставление количества клеток, которые выжили, и концентрацией антикана в растворе.
Таблица 3
Влияние антикана на клетки НеЬа
| Доза. мкг/мл | Количество клеток до инкубации, млн | Количество живых клеток после инкубации, млн, ±1000 | Количество живых клеток после инкубации, % | ||
| анти- | таксотер | анти- | таксотер | ||
| как | ткан | ||||
| 2 | 150000+1000 | 72000 | 150000 | 48 | 100 |
| 4 | 153000±1000 | 21400 | 150000 | 14 | 98 |
| 6 | 150000±1200 | 9800 | 145000 | 6,5 | 97 |
| 8 | 152000±1000 | 0 | 135000 | 0 | 89 |
| 10 | 158000±1000 | 0 | 130000 | 0 | 82 |
| 12 | 162000±1000 | 0 | 153000 | 0 | 94 |
Как видно из табл. 3, эффективная доза антикана находится в пределах между 8-12 мкг/мл раствора.
Антикан приводил к 95% дегенерации опухолевых клеток. Для подтверждения противоопухолевого действия ίη νίνο антикан был исследован на моделях бензидиновой кожной саркомы и перевивной асцитной аденокарциномы у барбадосских мышей. На 5 мышах с аденокарциномой также исследовали распределение липосом антикана по организму животных благодаря флуоресцентному зонду, растворенному в фосфолипидной оболочке.
Пример 4. Изучение противораковой активности антикана на модели бензидиновой саркомы (фиг. 3.).
Перед применением к силикагелю добавляли 7 мл раствору 2% бензидина в 0,9% натрия хлориде до образования опалесцирующей суспензии (1 г силикагеля на 5 мл физ. раствора). Двадцати пяти мышам барбадосской линии массой 18-20 г обоего пола, которых удерживали на рационе вивария через каждых 3 суток подкожно вводили возле шеи иммобилизированные на силикагеле бензидин и форболацетат. Через две недели у 18 животных появились опухоли разных размеров в виде небольшого бугра на шее около силикагелевой грануломы. Каждой группе животных вводили парентерально соответствующее соединение в дозе 100 мкг/кг массы два раза на сутки два недели, начиная с 16 дня после введения канцерогена.
- 5 025625
Таблица 4
Сравнение противоопухолевого действия антикана против соединения-аналога (таксотера) и липина
| Название препарата | Масса животных (г) | |
| До лечения | После лечения | |
| Таксотер | 28 ±1,2 | 23± 1,1 (2 мыши погибли) |
| Антикан | 25+ 1,7 | 15+ 1,5 |
| Липосомы пустые | 26± 2,1 | 34+1,3 (5 мышей погибло) |
Примечание: п=7, р>0,05 по сравнению с контролем и предыдущими данными.
Как видно из табл. 4, антикан уменьшал массу подопытных животных на 10 г, при этом у контрольных животных масса тела продолжала расти, и некоторые из них умерли. После анатомического исследования силикагелевой грануломы было установлено, что животные, которых лечили антиканом не имели признаков злокачественного превращения грануломы в саркому.
Сроки гибели животных приведены в табл. 5.
Таблица 5
Сроки гибели животных с бензидиновой саркомой кожи
| Название препарата | строки гибели животных, суток. |
| Таксотер | 28+1,1 |
| Название препарата | строки гибели животных, суток. |
| Антикан | 49+1,2 |
| Липосомы пустые | 17±0,9 |
Примечание: п=10, р>0,05 по сравнению с контролем и предыдущими данными. Таким образом, антикан увеличивает вдвое против таксотера продолжительность жизни животных.
Пример 5. Исследование противоопухолевого действия Антикана на асцитной аденокарциноме Эрлиха.
Противоопухолевое действие композиций исследовали на моделях асцитной карциномы Эрлиха у молодых мышей барбадосской линии обоего пола массой 15-17 г (68 штук), которых выдерживали на рационе вивария.
мышам инокулировали от мыши с аденокарциномой инсулиновым шприцем 0,1 мл асцитной жидкости в область печенки. Через 7 суток у 42 мышей появились признаки опухоли (увеличилась масса тела и размеры живота), 2 мыши погибли на второй день, 1 мышь не подала признаки опухоли.
Десяти мышам вводили антикан в липосомальном виде(см. табл. 6) Еще 10 мышам вводили субстанцию антикана, еще десяти - 0,9% раствор натрия хлорида с липином.
Таблица 6
Количественные биологические и статистические характеристики при исследовании противоопухолевой активности антикана
| Средство | Липосомы | Срок гибели животных после первой инъекции. Среднее значение Суток. | |
| Опытные животные | Контрольные животные | ||
| антикан | + | 37.4+0,88 | 3,2+0,44 |
| -//- | - | 18+3,2 | 3,1+0,48 |
| Таксотер | 15+0,5 | 3+0,5 | |
| -//- | - | 14+0,12 | 3+0,6 |
Примечание: п=10, р>0,05 в сравнении с контролем и предыдущими данными.
Антикан вводили тем мышам, в которых брали кровь. Мыши с аденокарциномой Эрлиха после перевивки опухоли и лечения жили 18 суток при использовании субстанции антикана, что в 6 раз дольше, чем в контроле, и 37 суток при использовании антикана в липосомах, что в 12 раз дольше, чем в контроле. При достоверности больше 99,5% можно утверждать о значительном усилении противораковой активности липосомального антикана против контроля - таксотера. После анатомирования животных при- 6 025625 знаков опухолей и метастазов в органах животных найдено не было.
Пример 6. Исследование распределения липосом Антикана по организму животных.
Для исследования распределения липосом по органам животных использовали биологически инертный 5,6-бензокумарин, который имеет липофыильный характер и флюоресцентные свойства. Последний растворяли в спирте (0,5 М раствор), и добавляли к раствору Фосфолипиду при создании липосом в количестве 0,01 мл раствора кумарину на 10 мл раствора фосфолипида. Наибольшая флуоресценция наблюдалась в печени и в асцитной жидкости, которая подтверждает тропность липосом к опухоли. В контроле липосомы распределялись в селезенку, печень и лимфоузлы.
Распределение липосом изучали в организме мышей-опухоленосителей (5 животных) и здоровых крыс (5 животных) после инфузионного введения антикана. Антикан вводили в дозе 100 мкг/кг. Через 5 ч животных забивали, и исследовали интенсивность флюоресценции на флюориметре НР-Р-40М.
Таблица 7
Накопление антикана в зависимости от скорости введения
| Животные | Орган | Форма введения анти- Флуоресценция, % кана |
| здоровые крысы | медленное инфузионное введение | |
| 41- | плазма | 23.4+0,1 |
| -II- | печень | 26,1+0,1 |
| -II- | легкие | 0,5+0,1 |
| -II- | селезенка | 6,2+0,1 |
| -II- | почки | 32,2+0,1 |
| -II- | кровь | 25,6+0,1 быстрое в/в введенние |
| Животиые | Орган | Форма введения анти- Флуоресценция, % * кана |
| 41- | плазма | 25,3+0,1 |
| -II- | печень | 56,2+0,1 |
| 41- | легкие | 0,5+0,1 |
| 41- | селезенка | 0,3+0,1 |
| 41- | почки | 0,2+0,1 |
| 41- | кровь | 5,5+0,1 |
| мыши с аденокарцином ой | медленное инфузионное введение | |
| -II- | плазма | 15,2+0,1 |
| -II- | печень | 12,2+0,1 |
| 41- | легкие | 0,5+0,1 |
| -II- | селезенка | 8.2+0,1 |
| -II- | нирки | 52,2+0,1 |
| асцитная жидкость | 45,6+0,1 быстрое в/в введение | |
| -II- | плазма | 23,2+0,1 |
| -II- | печень | 60,2+0,1 |
| 41- | легкие | 0,2+0,1 |
| -II- | селезенка | 0,5+0,1 |
| -II- | почки | 0,3+0,1 |
| 41- | асцитная жидкость | 5,2+0,1 |
* относительная флуоресценция - процент флуоресценции относительно интенсивности флуоресценции введенного раствора антикана.
- 7 025625
Как видно из табл., при наличии опухоли, накопление антикана идет там, но в зависимости от срока инфузии. Чем быстрее вводится антикан, тем больше его накапливается в печени. Поэтому рациональным является введение антикана в виде медленных инфузий.
Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а конкретно к онкологии, и может быть использовано в лечение онкологических инфекций животных и человека.
Промышленная применимость
Изобретение относится к медицине и фармации, а именно к онкологии и фармации и может быть использовано для создания новых более эффективных противораковых препаратов, представляющих собой динамические самоадаптирующиеся и самоорганизующиеся системы. Полученные таким образом препараты являются полностью экологически безопасными, биодеградируемыми и полностью метаболизируемыми как в организме пациентов, так и в окружающей среде, а технологии их получения относятся к группе полностью безотходных. Производство подобных препаратов осуществимо на существующем оборудовании фармацевтических предприятий и не требует уникального оборудования. Сырьевая база доступна и не требует дополнительных усилий для выращивания или производства.
Использованные источники информации 1 Оа1аззо М, Е1епа Зала М, Уойта 5. Иоп-сосйпа КЛАз: а кеу ю Гишге регзопаНгеЛ то1еси1аг Легару?//ОепотеМе<1. 2010РеЬ 18:2(2):12.
2 1ип£ 1. 8о1апк1 А. Метой КА, Кате! К, Κίηι Н, ОгаЫ МА, ^ЛЫНатз Е1, Тзеп§ НК, Ьее К.
8е1ес(Ае ίηΗΛίΐίοη οί йитап Ъгат (итог сеНз ЛгоицЬ ти1(йипсйопа1 циапГит-<1о1-Ьазе<1 3ίΚΝΑ Ьейуегу// Апее\у СЬет Ιηΐ Εά Епд1. 2010;49(1):103-7.
3 Εί X, Еш Υ, А'сп Ζ, Εί С. Би Н, Лап Μ, Лп К, Зип Е, Оао Р, Уапу Е, Хи X, Кап 8, ДУап£ Ζ, \Уап§ Υ, Лп Ν. Ροΐεηΐ апД-1итог ейес1з оГ а <1иа1 зресШс опсо1уЛс айепочзгиз ехргеззтд арорЛп ίη νίΐτο апО ίη νίνο// Μοί Сапсег. 20101ап 20;9:10.
4 ЕттпсЬ 8, Ч’'апд; V/. 1оЬп К, Εί XV, ΡϋιζεΓ ВМ. АпЛзепзе §артегз яе1еси\-е1у зирргезз тЛуЦиа! опсодетс р73 зрНсе 13оГогтз ап<] тЫЬк 1итог дгоМЬ ίη νίνο// Μοί Сапсег. 2009 Аид 11;8:6Ε ’ Р1зЬег М. АЬгатох М, Уап АегяеЬо1 А, КогепзИ 1, Οίχίΐ V, 1ийапо КЬ, Непк'Л’цп Р,
Вю1офса1 ейессз οί Ηεχίΐοί ап<1 аЬгйоктосЬЛес! κίΚΝΑϊ ГагдеЛпд В-Ка£// Еиг 1 Ркагтасо!.
2009 Маг 15;606(1-3):38-44 6 СгаиЛета Р, РесЬтег М. Оатез 8. Ау§ип Η, Κΐίρρεί А, Ргопк 01, Οίββε К, КаиГтапп 1.
Зггиссига! уалаДопз апд згаЫИзтд тоЛйсаДопз οί зупЛеЛс δίΚΝΛϊ ίη таттаИап сеНз//
Лис1ек АиЛз Кез. 2003 Лт 1;31(11):2705-16.
7 Сгооке КМ, ОгаЬат М1, Магйп М1, ЛетотЛз КМ, У/уг/уИемЛесг Т, Ситттз ЬЕ.
Ме1аЬоЛзт οί апЛзепзе оНдописКопЛез ίη га( 1Дег Ьотодепа1ез. 1 РЬагтасо1 Ехр ТЬег.
20001ап;292(1): 140-9.
8 Мота ВР, 1оЬпз(оп 1р, 8азтог Н, Ситттз Т.Е.Лис1еазе гез151апсе апЛ апЛзепзе асЛхцу оГ тоЛйед оНдопискоЛЛез тагде1еЛ Ю На-газ. 1 ΒίοΙ СЬет. 1996 Дт 14;271(24): 14533-40.
9 Ойез КУ, 8рП1ег ϋθ, Огееп 1А, С1агк КЕ, Τίάά ЭМ. ΟρίίηιϊζΗίίοη οί апЛзепзе оЛдоЛеохупискоЛЛе зкисШге Гог (агдеЛпд Ьсг-аЫ тКЛА. В1ооЛ. 1995 1и115;86(2):744-54.
10 ХоЛо Л, Актт-ГаЪЪгот М, Мапит О, ЦиаЛпГодйо Ρ. РупгтЛте рЬозрЬогоЛюак оЛдопискоЛЛез Гогт 1прк-з1гапЛеЛ ЬеЬсез апЛ рготоСе (гапзспрДоп ίηΙιίΕύίοη. Ыискк АСЛз Кез. 1994 Аид 25;22(16):3322-30.
11 δειζίΐηί Р, \\’е11ег ЭЛ, ЗЬгезузЬигу 8В. ЗаГе1у рЬагтасокду апЛ депоюхкйу е\а1иа1юп оГ АУ1-4658.1п11 Τοχίοοί. 2010 Маг-Арг;29(2):143-56.
12 МоипсЬ ОУ, 1епЛгге)е\Узк1 1Л, МагзЬаП ΝΒ, НтпсЬз 01, Аегзеп РЛ. ВгапЛ КМ.
АпЛзепзе (агдеЛпд оГ сРЛ1Р зепзШгез асисакЛ Т сеНз Ю ипЛегдо арор1оз1з апЛ ЛевепзШгез гезропзез Ю соп1ас1 ЛегтаЛЛз. 11пуез1 ОеппаюЕ 2009 Аид; 129(8) :1945-53.
- 8 025625 13 Ве1оп СА, Риск ϋΝ. НеПсазе 1п1пЬиогз аз зресШсаИу (аг§ете<1 аптМга) (Ьегару Гог НераППз С. Ришге Уйо1. 2009 Мау 1;4(3):277-293 14 Патент США № 7709616 «мнкроРНК и ее использование».
13 Патент США № 7579451 ОНдописКоОдез сотрпзщ§ а тосПйед ог поп-паШга! пис1еоЬазе 16 Н1[р://\™\¥.а£гоуе1,сот.иаЛп(1ех.рЬр?1с1=25 17 Ьир://<Ис.аса<1ет1с.ги/с11с.п8Г/гите1к1/79240 18 ]еап-МаНе ЕсНп. 8иргато1еси1аг СЬепнз(гу. Сопсер(з апс! РегересПуез.- ΨεϊηΠείιη; К εν,' Уогк; Вазе1; СатЪпсЦе; Токуо: УСН УеНаёзрезеИзсЬайтЪН, 1995.-Р. 103 (СЬарЬег 7) 19 Ва§пуикоуа1 Т.У., РодлЬпу ГР. СЬекЬцп У.Р. ΜϊογοΚΝΑβ ίη погта1 апс1 сапсег се11з: А Νε\ν с1азз оГ§епе ехргеззюп геди1а1огз// Рхрсптста! Опсо1о§у.-2006, N 28,- Р. 263-269 20 5(е1пЬаизег I, Ьап^ег К, 8(геЬЬаг<й К, ЙрапкцсЬ В. 11р(аке оГ р1ачтпд-1оас1м1 папорагйс1ез ίη Ьгеаз( сапсег се11з апс! еГГес! оп Р1к1 ехргеззюп. I ϋπι§ Таг»е1. 2009 8ер; 17(8):627-37.
21 Ιλι Л, Рапдес К, СЬеп ГА ηονεί тесЬашвт ίκ ϊηνοίνεά ίη сайотс ПрП1-тесПа1ес1 Гипсйопа1 3ΐΚΝΑ кеНуегу. Мо1 РЬапп. 2009 Мау-кт;6(3):763-71.
22 Могейа ΙΝ, 8апюз А, Моига V, Редюзо де Тата МС, ίϊηιοεδ δ. Νοη-νίι^Ι Пр^-Ьазед папораП1с1ез Гог (агде(ед сапсег зузгегтс депе зПепстд. I Иапоза Иапо(есЬпо1, 2008 Мау;8(5):2187-204.
Claims (24)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Супрамолекулярная смесь антикомплементарных олигонуклеотидов с противораковыми свойствами, полученная при частичном гидролизе полинуклеотидов с последующим ацилированием или алкилированием аминогрупп нуклеотидных оснований олигонуклеотидов, которая обеспечивает способность олигонуклеотидов связываться со своими немодифицированными предшественниками и мишенями в мРНК раковой клетки посредством ионных и смешанных связей.
- 2. Супрамолекулярная смесь по п.1, где ацилирование проводят ангидридами ди- и трикарбоновых кислот.
- 3. Супрамолекулярная смесь по п.1, где алкилирование проводят монохлоруксусной кислотой.
- 4. Способ получения супрамолекулярной смеси антикомплементарных олигонуклеотидов с противораковыми свойствами, которые способны связываться со своими немодифицированными предшественниками и мишенями в мРНК раковых клеток посредством ионных и смешанных связей, где способ включает частичный гидролиз полинуклеотидов и затем ацилирование или алкилирование аминогрупп нуклеотидных оснований олигонуклеотидов.
- 5. Способ по п.4, где полинуклеотиды представляют собой ДНК.
- 6. Способ по п.4, где полинуклеотиды представляют собой РНК.
- 7. Способ по п.5, где ДНК представляет собой ДНК из дрожжей.
- 8. Способ по п.5, где ДНК представляет собой ДНК животного происхождения.
- 9. Способ по п.5, где ДНК представляет собой ДНК растительного происхождения.
- 10. Способ по п.5, где ДНК представляет собой ДНК микробного происхождения.
- 11. Способ по п.6, где РНК представляет собой РНК из дрожжей.
- 12. Способ по п.6, где РНК представляет собой РНК животного происхождения.
- 13. Способ по п.6, где РНК представляет собой РНК растительного происхождения.
- 14. Способ по п.6, где РНК представляет собой РНК микробного происхождения.
- 15. Способ по п.4, где полинуклеотиды представляют собой смесь РНК и ДНК из дрожжей.
- 16. Способ по п.4, где полинуклеотиды представляют собой смесь РНК и ДНК животного происхождения.
- 17. Способ по п.4, где полинуклеотиды представляют собой смесь РНК и ДНК растительного происхождения.
- 18. Способ по п. 4, где полинуклеотиды представляют собой смесь РНК и ДНК микробного происхождения.
- 19. Способ по п.4, где частичный гидролиз полинуклеотидов представляет собой ферментативный гидролиз.
- 20. Способ по п.4, где частичный гидролиз полинуклеотидов представляет собой кислотный гидролиз.
- 21. Способ по п.4, где частичный гидролиз полинуклеотидов представляет собой щелочной гидро- 9 025625 лиз.
- 22. Способ по п.4, где частичный гидролиз полинуклеотидов представляет собой гидролиз синтетическими нуклеазами.
- 23. Способ по п.4, где ацилирование проводят янтарным ангидридом.
- 24. Способ по п.4, где алкилирование проводят монохлоруксусной кислотой.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/RU2010/000691 WO2012070965A1 (ru) | 2010-11-22 | 2010-11-22 | Модифицированные антикомплементарные олигонуклеотиды с противораковыми свойствами и способ их получения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201300489A1 EA201300489A1 (ru) | 2013-08-30 |
| EA025625B1 true EA025625B1 (ru) | 2017-01-30 |
Family
ID=46064949
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201300489A EA025625B1 (ru) | 2010-11-22 | 2010-11-22 | Модифицированные антикомплементарные олигонуклеотиды с противораковыми свойствами и способ их получения |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20120130060A1 (ru) |
| EA (1) | EA025625B1 (ru) |
| WO (1) | WO2012070965A1 (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11053608B2 (en) | 2017-06-16 | 2021-07-06 | Boris Farber | Combinatorial derivatives of RNA oligonucleotides |
| US11191806B2 (en) * | 2018-05-04 | 2021-12-07 | Boris Farber | Polymyxin-based pharmaceutical composition for treating infectious diseases |
| WO2021067825A1 (en) * | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Sirnaomics, Inc. | Oligonucleotides with nucleoside analogs |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5854224A (en) * | 1996-01-05 | 1998-12-29 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Composition and method for delivery of nucleic acids |
| US6316426B1 (en) * | 1987-10-28 | 2001-11-13 | Pro-Neuron, Inc. | Acylated uridine and cytidine and uses thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE154246T1 (de) * | 1990-07-27 | 1997-06-15 | Isis Pharmaceuticals Inc | Nuklease resistente, pyrimidin modifizierte oligonukleotide, die die gen-expression detektieren und modulieren |
| US6015676A (en) * | 1998-07-31 | 2000-01-18 | Epiclone Inc. | Method for knocking out gene transcripts by covalently binding of an anti-sense probe |
| US6617137B2 (en) * | 2001-10-15 | 2003-09-09 | Molecular Staging Inc. | Method of amplifying whole genomes without subjecting the genome to denaturing conditions |
-
2010
- 2010-11-22 WO PCT/RU2010/000691 patent/WO2012070965A1/ru active Application Filing
- 2010-11-22 EA EA201300489A patent/EA025625B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-02-01 US US12/931,468 patent/US20120130060A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6316426B1 (en) * | 1987-10-28 | 2001-11-13 | Pro-Neuron, Inc. | Acylated uridine and cytidine and uses thereof |
| US5854224A (en) * | 1996-01-05 | 1998-12-29 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Composition and method for delivery of nucleic acids |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Martynov A. V. et al. New approach to design and synthesis of therapeutic and preventive drugs, taking into account interspecies polymorphism of receptors (method of precision partial modification). Annals of Mechnicov Institute, 2007, №4, p. 5-13 * |
| Oliver C. Richards et al. Chemical mechanism of sonic, acid, alkaline and enzymic degradation of DNA. J. Mol. Biol, 1965, 11, p. 327-340 * |
| Robert Haner et al. The sequence-specific cleavage of RNA by artificial chemical ribonucleases, Antisense & Nucleic acid drug development, 1997, 7:423-430 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2012070965A1 (ru) | 2012-05-31 |
| US20120130060A1 (en) | 2012-05-24 |
| EA201300489A1 (ru) | 2013-08-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ugrinova et al. | HMGB1 protein: a therapeutic target inside and outside the cell | |
| Sheng et al. | LncRNA NBR2 inhibits tumorigenesis by regulating autophagy in hepatocellular carcinoma | |
| AU2024202093A1 (en) | Peptides and nanoparticles for intracellular delivery of mrna | |
| CN108271360A (zh) | 亲脂阳离子树枝状聚合物及其用途 | |
| Rizk et al. | The emerging role of miRNAs in Merkel cell carcinoma pathogenesis: Signaling pathway crosstalk | |
| CN116785445B (zh) | 靶向化学药物及其制备方法、药物组合物、靶向化学药物的应用 | |
| EA025625B1 (ru) | Модифицированные антикомплементарные олигонуклеотиды с противораковыми свойствами и способ их получения | |
| CN107530439A (zh) | 用于治疗癌症的对人抗原R表达的siRNA抑制 | |
| KR20150006742A (ko) | 간암 연관 유전자 특이적 siRNA, 그러한 siRNA를 포함하는 이중나선 올리고 RNA 구조체 및 이를 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물 | |
| CN105779458B (zh) | 对非小细胞肺癌具有抑制作用的核糖核酸适配体及包含其的药物组合物 | |
| CN108472504A (zh) | 肽寡核苷酸缀合物 | |
| WO2016103531A1 (ja) | 免疫賦活活性を有する核酸多糖複合体の抗腫瘍薬としての応用 | |
| CN110088278A (zh) | 双链核酸分子及其用途 | |
| KR101836877B1 (ko) | 국소 투여용 리포플렉스의 신규 제조 방법 및 상기 리포플렉스를 사용하는 항 종양제 | |
| CN106928298B (zh) | 环二核苷酸cGAMP衍生物的结构组成、制备方法及其在抗肿瘤中的应用 | |
| US20240167022A1 (en) | Template directed immunomodulation for cancer therapy | |
| CN103834035A (zh) | 一种阳离子化昆布多糖及其制备方法和应用 | |
| CN109876154A (zh) | 一类枸杞多糖修饰的纳米粒子制备及其抗肿瘤活性研究 | |
| WO2020218494A1 (ja) | ｍｉＲ３０２核酸改変体 | |
| CN110025627B (zh) | 一种防治肿瘤的药物及其用途 | |
| CN112375823B (zh) | miRNA抑制剂在制备治疗和/或预防淋巴瘤的药物中的应用 | |
| CN113171469B (zh) | 靶向肿瘤细胞表面Trop2蛋白的肿瘤治疗纳米药物及其制备方法 | |
| CN109666064A (zh) | SALL4-RBBp4复合物阻断多肽和衍生抗肿瘤多肽及其应用 | |
| CN109762042B (zh) | 一种治疗癌症的药物、其合成方法和应用 | |
| CN116463366A (zh) | 用于治疗癌症的mRNA及在制备抗癌药中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM BY KG MD TJ TM |