EA024430B1 - Антитела к pcsk9 и их применение - Google Patents
Антитела к pcsk9 и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA024430B1 EA024430B1 EA201490470A EA201490470A EA024430B1 EA 024430 B1 EA024430 B1 EA 024430B1 EA 201490470 A EA201490470 A EA 201490470A EA 201490470 A EA201490470 A EA 201490470A EA 024430 B1 EA024430 B1 EA 024430B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- zeg
- antibody
- amino acid
- pc8k9
- acid sequence
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Obesity (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к антителам к пропротеинконвертазе субтилизин/кексин типа 9 (PCSK9) или их антигенсвязывающим фрагментам, композициям, включающим такие антитела к PCSK9 или антигенсвязывающие фрагменты, и способам их применения для лечения гиперлипидемии или гиперхолестеринемии.
Description
Настоящее изобретение относится к области медицины. В частности, настоящее изобретение относится к антителам к пропротеинконвертазе субтилизин/кексин типа 9 (РС8К9), композициям, включающим такие РС8К9-антитела, и способам применения РС8К9-антител для лечения гиперлипидемии или гиперхолестеринемии.
Пропротеинконвертаза субтилизин/кексин типа 9 (РС8К9) является секретируемой сериновой протеазой, продуцируемой главным образом в печени, регулирующей концентрацию холестерина липопротеидов низкой плотности (ЛПНП-Х) в плазме. Секретируемая РС8К9 связывается и интернализуется с рецептором ЛННП (БОБР). расположенным на поверхности гепатоцитов. Благодаря БОБР плазма очищается от ЛПНП-Х за счет связывания и транспортировки частиц ЛПНП в лизосомы, где происходит их разрушение. После доставки частицы ЛННП для разрушения БОБР восстанавливаются на поверхности гепатоцитов, где связывает и интернализует следующую молекулу ЛПНП-Х из плазмы. РС8К9 регулирует уровень ЛПНП-Х в плазме, направляя интернализованный БОБР на разрушение, а не на восстановление на поверхности клетки, за счет чего снижается клиренс ЛПНП-Х. Исследования на грызунах с дефицитом или сверхэкспрессией РС8К9 подтвердили, что РС8К9 контролирует уровни циркулирующего ЛННП путем регуляции уровней БОБР. Данные о том, что циркулирующая РС8К9 участвует в разрушении БОБР печени, указывают, что нейтрализация РС8К9 антителами является перспективным терапевтическим подходом к снижению ЛПНП-Х. Кроме того, сообщалось, что статины, в настоящее время являющиеся стандартным средством для снижения ЛПНП-Х, фактически могут увеличивать экспрессию и уровни РС8К9 в сыворотке. Таким образом, антитело к РС8К9 также может снижать ЛПНП-Х синергично с лечением статинами.
Антитела к РС8К9 и их влияние на снижение ЛПНП-Х в плазме известны в данной области техники. Например, в И8 2009/0246192, И8 2009/0142352, И8 2010/0166768 и АО 2010/029513 описаны такие антитела к РС8К9 и их применение. Тем не менее, в настоящее время отсутствуют антитела, мишенью которых является РС8К9, одобренные для терапевтического применения. Таким образом, остается потребность в альтернативных РС8К9-антителах. В частности, остается потребность в альтернативных РС8К9-антителах, эффективно снижающих уровень ЛПНП-Х. В частности, остается потребность в альтернативных антителах к РС8К9, эффективно снижающих уровень ЛПНП-Х и обеспечивающих пролонгированное действие (например, пролонгированную супрессию уровня ЛПНП-Х). В предпочтительном случае такие антитела также обладают хорошими физико-химическими свойствами, облегчающими разработку, производство или изготовление лекарственных препаратов.
Настоящее изобретение обеспечивает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее вариабельную область тяжелой цепи (НСУР) и вариабельную область легкой цепи (БСУР), причем НСУР включает гипервариабельные участки (СИР) НСИР1, НСИР2 и НСИР3, а БСУР содержит СИР БСИР1, БСИР2 и БСИР3, причем аминокислотная последовательность НСОР1 представляет собой 8ЕО ГО N0: 1, аминокислотная последовательность НСИР2 представляет собой §ЕЦ ГО N0: 2, аминокислотная последовательность НСОР3 представляет собой §ЕЦ ГО N0: 3, аминокислотная последовательность БСОР1 представляет собой §ЕЦ ГО N0: 4, аминокислотная последовательность БСОР2 представляет собой 8Е0 ГО N0: 5, а аминокислотная последовательность БСОР3 представляет собой 8Е0 ГО N0: 6, причем указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с РС8К9 человека. В одном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее вариабельную область тяжелой цепи (НСУР) и вариабельную область легкой цепи (БСУР), причем аминокислотная последовательность НСУР представляет собой 8Е0 ГО N0: 7, а аминокислотная последовательность БСУР представляет собой §ЕЦ ГО N0: 8, причем указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с РС8К9 человека. В еще одном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее две вариабельные области тяжелой цепи (НСУР) и две вариабельные области легкой цепи (БСУР), причем аминокислотная последовательность каждой НСУР представляет собой 8Е0 ГО N0: 7, а аминокислотная последовательность каждой БСУР представляет собой §ЕЦ ГО N0: 8.
В еще одном конкретном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее тяжелую цепь (НС) и легкую цепь (БС), причем аминокислотная последовательность НС представляет собой §ЕЦ ГО N0: 9, а аминокислотная последовательность БС представляет собой §ЕЦ ГО N0: 10. В другом конкретном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает антитело, включающее две тяжелые цепи (НС) и две легкие цепи (БС), причем аминокислотная последовательность каждой НС представляет собой §ЕЦ ГО N0: 9, а аминокислотная последовательность каждой БС представляет собой §ЕЦ ГО N0: 10. В другом конкретном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает антитело, включающее две НС и две БС, причем аминокислотная последовательность каждой НС представляет собой §ЕЦ ГО N0: 9, а аминокислотная последовательность каждой БС представляет собой §ЕЦ ГО N0: 10.
Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтические композиции, включающие антитело или антигенсвязывающий фрагмент согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемые носители, разбавители или вспомогательные вещества. Более конкретно, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению дополнительно включает один или несколько дополнительных тера- 1 024430 певтических агентов.
Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает способ лечения гиперлипидемии или гиперхолестеринемии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества антитела или антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению. Настоящее изобретение также обеспечивает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент согласно настоящему изобретению для применения в терапии. Настоящее изобретение также обеспечивает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент согласно настоящему изобретению для применения при лечении гиперлипидемии или гиперхолестеринемии. Настоящее изобретение также обеспечивает применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению в изготовлении лекарственного средства для лечения гиперлипидемии или гиперхолестеринемии.
Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты и векторам экспрессии, кодирующим антитело или антигенсвязывающий фрагмент согласно настоящему изобретению. Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает антитело, полученное способом, причем указанный способ включает (а) культивирование клетки-хозяина, включающей первую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептидную последовательность, заданную §ЕЦ ГО N0: 9, и вторую полинуклеотидную последовательность, кодирующую вторую полипептидную последовательность, заданную §ЕЦ ГО N0: 10, при условиях, в которых экспрессируется указанная полипептидная последовательность, и (Ь) выделение из указанной клетки-хозяина антитела, включающего тяжелую цепь и легкую цепь, причем полипептидная последовательность указанной тяжелой цепи представляет собой §ЕЦ ГО N0: 9, а полипептидная последовательность указанной легкой цепи представляет собой §ЕЦ ГО N0: 10. Конкретнее, антитело, получаемое указанным способом, включает две тяжелые цепи и две легкие цепи, причем полипептидная последовательность каждой тяжелой цепи представляет собой §ЕЦ ГО N0: 9, а полипептидная последовательность каждой легкой цепи представляет собой §ЕЦ ГО N0: 10.
Полноразмерное антитело представляет собой молекулу иммуноглобулина, включающую две тяжелые (Н) и две легкие (Ь) цепи, связанные друг с другом дисульфидными связями. ^концевая часть каждой цепи включает вариабельную область размером около 100-110 аминокислот, ответственных, в первую очередь, за распознавание антигена гипервариабельными участками (СГОК), содержащихся в них. Сконцевая часть каждой цепи ограничивает константную область, главным образом ответственную за эффекторную функцию. Легкие цепи подразделяются на каппа- или лямбда-, каждая из которых характеризуется определенной константной областью, как известно в данной области техники. Тяжелые цепи подразделяются на гамма-, мю-, альфа-, дельта- или эпсилон- и определяют изотип антитела - 1дС, 1дМ, 1§А, 1дЭ или 1дЕ соответственно. Антитела 1дС, кроме того, делятся на подклассы, например 1§С1, 1дС2, 1дС3, 1дС4. Каждый тип тяжелой цепи также характеризуется определенной константной областью с последовательностью, общеизвестной специалистам. Антигенсвязывающий фрагмент в настоящем документе относится к РаЬ-фрагментам, РаЬ'-фрагментам, Р(аЬ')2-фрагментам и одноцепочечным Ρν-фрагменгам, связывающимся с РС8К9 человека. Термин связываться (или связывается) с РС8К9 человека в настоящем документе относится к взаимодействию с эпитопом на РС8К9 человека, представленным аминокислотной последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 14. Термин эпитоп в настоящем документе относится к отдельному трехмерному сайту на поверхности антигена, распознаваемому антителами или антигенсвязывающими фрагментами согласно изобретению.
СГОР перемежаются участками, которые являются более консервативными и называются каркасными участками (РР). Каждая вариабельная область легкой цепи (ЬСУР) и вариабельная область тяжелой цепи (НСУР) состоит из трех СОР и четырех РР, расположенных от Оконца к С-концу в следующем порядке: РР1, СГОРЕ РР2, СЭР2, РР3, СГОРЗ, РР4. Три СОР легкой цепи обозначаются как БСГОРЕ ЕСГОР2 и ЬСОРЗ, а три СОР тяжелой цепи обозначаются как НСГОРЕ НСГОР2 и НСГОР3. СОР содержат большую часть остатков, участвующих в специфическом взаимодействии с антигеном. Нумерацию и определение положения аминокислотных остатков в СОР в пределах областей ЬСУР и НСУР антител или антигенсвязывающих фрагментов согласно настоящему изобретению можно выполнить в соответствии с общеизвестным правилом нумерации КаЬа! (ТОСГОР 1-3, НСГОР2-3) или в соответствии с КаЬа! и СЬоЕиа (НСОР1).
Способы получения и очистки антител и антигенсвязывающих фрагментов хорошо известны специалистам в данной области техники, соответствующую информацию можно найти, например, в Наг1оте аиб Ьаие (1988), АпйЬоЛек, А ЬаЬога1огу Мапиа1, Со1й §ргшд НагЬог ЬаЬога1огу Ргекк, Со1й §ргтд НагЬог, №\ν Уогк, сЬар!егк 5-8 апй 15. Например, можно иммунизировать мышей РС8К9 человека или ее фрагментами, а затем выделить, очистить и определить аминокислотные последовательности полученных антител с использованием обычных способов, хорошо известных в данной области техники. Антигенсвязывающие фрагменты также можно получить с помощью обычных способов. Антитело или антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению сконструированы таким образом, что содержат одну или несколько каркасных областей человека, окружающих участки СОР, полученные из антитела нечеловеческого происхождения. Последовательности каркасной области антител эмбрионального типа человека можно получить в 1тМипоСепеТюк (1МСТ) через их веб-сайт ЬЬр://1т§ЕстекТг, или из ТЬе 1ттипод1оЬи1ш Рас1к Воок Мапе-Раи1е ЬеЕгапс апй Сегагй ЬеЕгапс, Асайетк Ргекк, 2001, I§ВN
- 2 024430
012441351. Конкретные каркасные области легкой цепи эмбрионального типа для использования в составе антитела или антигенсвязывающих фрагментов согласно настоящему изобретению включают А3 и 02. Конкретные каркасные области тяжелой цепи эмбрионального типа для использования в составе антитела или антигенсвязывающих фрагментов согласно настоящему изобретению включают УН3-21 и УН3-23.
Сконструированные антитела или антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению можно получить и очистить в соответствии с известными способами. Например, последовательности кДНК, кодирующие тяжелую цепь (например, аминокислотную последовательность, заданную 8ЕС ГО N0: 9) и легкую цепь (например, аминокислотную последовательность, заданную 8ЕС ГО N0: 10), можно клонировать и сконструировать в экспрессирующем векторе 08 (глутаминсинтетазы). Сконструированный иммуноглобулин-вектор экспрессии затем можно стабильно трансфицировать в клетки СНО. Специалисту в данной области техники известно, что экспрессия антител у млекопитающего приведет к гликозилированию, обычно по высококонсервативным сайтам Ν-гликозилирования в Ре-области. Стабильные клоны можно проверить на экспрессию антитела, специфически связывающегося с РС8К9 человека. Положительные клоны можно размножить в бессывороточной культуральной среде для продуцирования антител в биореакторах. Среду, в которую секретируются антитела, можно очистить обычными способами. Например, среду можно нанести на колонку с белком А- или 0-сефарозой РР, уравновешенную совместимым буфером, например фосфатно-солевым буфером. Колонку промывают для удаления неспецифически связавшихся компонентов. Связанное антитело элюируют, например, градиентом рН и детектируют фракции антитела, например, методом электрофореза в ДСН-ПААГ, а затем объединяют их. Антитело можно концентрировать и/или подвергнуть стерильной фильтрации с помощью распространенных методик. Растворимые агрегаты и мультимеры можно эффективно удалить с использованием обычных методик, включая эксклюзионную, гидрофобную, ионообменную хроматографию или хроматографию на гидроксиапатите. Продукт можно немедленно заморозить, например, при -70°С или лиофилизировать.
Антитела согласно настоящему изобретению являются моноклональными антителами. В настоящем документе термин моноклональное антитело или мАт относится к антителу, происходящему от единственной копии или клона, включая, например, клон эукариотической, прокариотической клетки или фага, а не к способу, которым оно получено. Моноклональные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты можно получить, например, с использованием гибридомных технологий, рекомбинантных технологий, технологий фагового дисплея, синтетических технологий, например СЭК-трансплантации, или их комбинации, или иных технологий, известных в данной области техники.
В еще одном варианте реализации настоящего изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или нуклеиновая кислота, кодирующая их, представлены в изолированной форме. В настоящем описании термин изолированный (выделенный) относится к белку, пептиду или нуклеиновой кислоте, не содержащим или по существу не содержащим других макромолекулярных соединений, встречающихся в клеточном окружении. В настоящем описании термин по существу не содержащий означает, что белок, пептид или нуклеиновая кислота, представляющие интерес, состоят из представленных высокомолекулярных соединений более чем на 80% (в молярном соотношении), предпочтительно более чем на 90% и более предпочтительно более чем на 95%.
Антитела или антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению можно применять при лечении пациентов. Термин лечение (или лечить) относится к замедлению, прерыванию, купированию, облегчению, остановке, снижению или обращению развития или тяжести существующего симптома, расстройства, состояния или заболевания. В настоящем описании пациент относится к человеку или млекопитающему, не являющемуся человеком, однако предпочтительно относится к человеку. В настоящем описании термин эффективное количество относится к количеству или дозе антитела или антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению, которое при однократном или многократном введении пациенту обеспечивает желательное воздействие на пациента, подвергаемого лечению. Эффективное количество может легко определить лечащий диагност, как специалист в данной области техники с учетом ряда факторов, например вида млекопитающего; его размера, возраста и общего состояния здоровья; конкретного заболевания; степени или тяжести заболевания; реакции отдельного пациента; конкретного вводимого антитела; режима введения; характеристик биодоступности вводимого препарата; выбранной схемы приема и применения сопутствующих препаратов.
Антитела или антигенсвязывающие фрагменты согласно настоящему изобретению или включающие их фармацевтические композиции можно вводить парентеральным путем (например, подкожно, внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно или трансдермально). Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно получить способами, широко известными в данной области техники (см., например, РспипдЮп: ТНе §с1епсе апб Ргаебее οί РЬатшасу, 19* еб. (1995), А. Оеппаго с1 а1., Маск РиЫРЫпд Со.); указанные композиции включают антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, описанные в настоящем документе, и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ. Например, можно получить состав антитела или антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению с такими агентами, как цитрат на- 3 024430 трия, лимонная кислота, полисорбат 80 и сахароза, а затем лиофилизировать полученную композицию и хранить ее при 2-8°С. Затем лиофилизированная композиция может быть восстановлена в стерильной воде для инъекций перед введением.
Следующие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение; в то же время понятно, что примеры приведены в качестве иллюстрации, а не ограничения и что специалист в данной области техники может внести в них различные изменения.
Пример 1. Сконструированное РС8К9-антитело.
Мышь иммунизировали пептидом, включающим укороченный по С-концу фрагмент РС8К9 человека (8ЕО ГО N0: 17); 1§О-антитела, связывающие РС8К9, выделяли и клонировали с помощью стандартных способов. СОК выделенных РаЬ мыши рандомизировали путем мутагенеза и проводили скрининг сродства полученных антител к РС8К9 человека. Мутации, усиливающие сродство, объединяли и оптимизированные СОК встраивали в каркасные области УН3-21 и А3 тяжелых и легких цепей человека соответственно. Для дальнейшей оптимизации биофизических свойств гуманизированного антитела вводили направленные замены ароматических и гидрофобных аминокислот в последовательности СОК. Кроме того, выполняли скрининг дополнительных мутаций, усиливающих сродство, в рандомизированных библиотеках СОК. Благоприятные мутации СОК объединяли случайным образом и экспрессировали, а затем выполняли скрининг сродства полученных антител к РС8К9 человека. Получили полноразмерное гуманизированное и оптимизированное РС8К9-антитело, содержащее следующие аминокислотные последовательности.
Фрагмент мАт | Аминокислотная последовательность |
НСЭК1 | ЗЬО ГО N0: 1 |
НСОК2 | 8ЕУ ГО N0: 2 |
НС1ЖЗ | 8Е0 ГО N0: 3 |
НСУК | ЗЕУ ГО N0: 7 |
НС | ЗЕС) ГО N0; 9 |
ЬСОК1 | ЗЕ<5 ГО N0: 4 |
ЬСЦК2 | ЙЕ<У ГО N0: 5 |
ьсгоиз | 8Е<} ГО N0: 6 |
ьсук | 8Е<} ГО N0: 8 |
ЬС | 8Ε<3ΙϋΝΟ: 10 |
Соответствующие последовательности кДНК, кодирующие аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей 8Е0 ГО N0: 9 и 8Е0 ГО N0: 10 соответственно представляют собой:
Фрагмент мАт | Кодирующая аоследовательность кДНК |
НС | ЗЕГ) ГО N0; 11 |
ЬС | 8Ьф ГО N0: 12 |
Пример 2. Экспрессия сконструированного РС8К9-антитела.
Сконструированное антитело к РС8К9 согласно примеру 1 можно экспрессировать в стабильно трансфицированных клетках линии СНО. Глутаминсинтетазный (08) вектор экспрессии, содержащий кДНК 8Е0 ГО N0: 11 (кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 9) и 8Е0 ГО N0: 12 (кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи 8Е0 ГО N0: 10), использовали для трансфекции линии клеток китайского хомячка СН0К18У (Боп/а Βίοίο^ίβδ РЬС, 81оидЬ, Великобритания) путем электропорации. Указанный вектор экспрессии кодировал ранний 8У (вирус обезьян 40Е) промотор и ген 08. Экспрессия 08 обеспечивала биохимический синтез глутамина, аминокислоты, необходимой клеткам СН0К18У. После трансфекции клетки подвергали массовому отбору с использованием 50 мкМ Ь-метионинсульфоксимина (М8Х). Для увеличения жесткости отбора использовали ингибирование 08 с помощью М8Х. Клетки с кДНК вектора экспрессии, встроенной в транскрипционно активные области генома клетки-хозяина, можно отобрать путем сравнения с клетками СН0К18У дикого типа, экспрессирующими эндогенный уровень 08. Жидкую культуру подвергали клонированию одиночных клеток с использованием технологии флуоресцентной сортировки клеток (РАС8); клонированные линии клеток размножали и подвергали скринингу экспрессии сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1.
- 4 024430
Пример 3. Эпитопное связывание.
РС8К9-связывающий эпитоп 1§С мыши (из которого было получено сконструированное антитело к РС8К9 из примера 1) определяли путем экстракции эпитопа и масс-спектрометрии с водороднодейтериевым обменом и сужали до области в пределах линейной аминокислотной последовательности 160-181 каталитического домена РС8К9 человека (нумерация аминокислот основана на полноразмерной последовательности РС8К9 человека, включая сигнальный пептид размером 28 аминокислот). Взаимодействие сконструированного антитела в соответствии с примером 1 с указанным эпитопом каталитического домена РС8К9 человека подтверждали оценкой его связывания с синтетическими пептидами, соответствующими остаткам 160-181 (табл. 1). Сконструированное антитело в соответствии с примером 1 связывало пептид 160-181 с более высоким сродством, чем интактную РС8К9 человека, причем различие было обусловлено повышенной скоростью ассоциации (коп). Скорость диссоциации (ко££) менее чем в 2 раза превышала аналогичный параметр интактной РС8К9, что указывало на близкую силу взаимодействия (после связывания). Кроме того, данные показывают, что почти все детерминанты связывания содержатся в указанной линейной области РС8К9. Связывание сконструированного антитела в соответствии с примером 1 с пептидом 166-181 было значительно слабее, чем с пептидом 160-181, что демонстрировало роль аминокислоты (или нескольких аминокислот) в области 160-165. Связывание сконструированного антитела в соответствии с примером 1 с пептидом 163-174 было значительно сильнее, чем с пептидом 166-181, что также указывало на вклад остатков 163-165.
Таблица 1
Кинетика связывания и сродство антитела в соответствии с примером 1 к пептидам, соответствующим последовательностям каталитического домена РС8К9 человека
Фрагмент РСЗК9 | Последовательность | •кй (1/Мс) | М' <1/с) | Ко (нМ) |
зрелая НРС8К9 С-концевой Ηίδ* | (δΕΟΙϋΝΟ: 13) | 8.67Е+04 | 1,50Е-04 | Τ8 |
НРСЗК9 160181** | ЫТРРКУР.АОЕУ(ЗРРООО31АЕ (ЗЕ<Э ГО ΝΟ: 14) | 1.45Е+06 | 2,42Е-04 | 0,17 |
НРСЗК9 166181** | ΥΚΑΟΕΥΟΡΡϋΟΟδΙΑΕ (δΕΟΙϋΝΟ: 15) | 4,58Е +06 | 1.56Е-01 | 34 |
НРСЗК9 163- ]74** | ΡΡΚΥΚΑϋΕΥφΡΡ (δΕΟΙϋΝΟ: 16) | 2,75 Е+06 | 8,31Е-03 | 3,0 |
*Использовали зрелую форму ЙРС8К9, не содержащую сигнальный пептид размером 28 аминокислот и содержащую С-концевой Ηίδ-маркер.
**Номера аминокислот присваивали в соответствии с полной РС8К9 человека, включающей сигнальный пептид размером 28 аминокислот.
Пример 4. Кинетика связывания и сродство.
Анализ методом поверхностного плазмонного резонанса (ПНР), широко известный в данной области техники, использовали для оценки кинетики связывания и сродства тестируемого антитела к РС8К9 к РС8К9 человека, яванского макака, мыши, крысы и кролика. При использовании буфера с физиологическими параметрами (ионной силой и рН) и температурой (37°С) сконструированное антитело в соответствии с примером 1 связывалось с РС8К9 человека со средней константой ассоциации (коп) 1,2х105 М-1-с-1 и средней константой диссоциации (ко££) 1,2х10-3 с-1. Средняя Кс связывания РС8К9 человека со сконструированным антителом в соответствии с примером 1 составила приблизительно 11 нМ. Сконструированное антитело в соответствии с примером 1 связывалось с РС8К9 яванского макака со средней скоростью ассоциации (коп) 1,1х 105 М-1-с-1 и средней скоростью диссоциации (ко££) 2,5х10-3 с-1, что обеспечивало Кс связывания с РС8К9 яванского макака приблизительно 25 нМ. В табл. 2 показана сводная информация по дополнительным результатам, полученным для сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 с использованием РС8К9 мыши, крысы и кролика. Приведенные данные показывают, что сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 связывалось с РС8К9 как человека, так и яванского макака с наномолярным сродством при физиологических рН, ионной силе и температуре.
- 5 024430
Таблица 2
Кинетика связывания и сродство антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 к РС8К9 человека, яванского макака, мыши, крысы и кролика
Антиген | Υ'-οη Среднее ± СО М!С: (105) | М’ Среднее ± СО с1 (10'э) | Ко Среднее ± СО нМ | п |
РС8К9 человека* | 1,2 ±0,46 | 1,2 ± 0,18 | 11 ±2,9 | 6 |
РС8К9 яванского макака* | 1,1 ±0,51 | 2,5 ± 0,79 | 25 ± 6,8 | 4 |
РСЗК.9 мыши* | ΝΒ | ΝΒ | ΝΒ | 3 |
РСЗК9 крысы* | ΝΒ | ΝΒ | ΝΒ | 2 |
РСЗК9 кролика* | ΝΒ | ΝΒ | ΝΒ | 3 |
ΝΒ Связывание не обнаружено.
*Анализ выполняли при 37°С.
**Анализ выполняли при 25°С.
Пример 5. Ингибирование связывания РС8К9 с рецептором ЛПНП.
РС8К9 регулирует уровень ЛПНП-Х в плазме, снижая содержание ЬПЬК в печени, что приводит к снижению поглощения ЛПНП гепатоцитами. Каталитический домен РС8К9 является областью, связывающейся с ЬИРК. Таким образом, ожидается, что антитела, распознающие каталитический домен РС8К9, ингибируют связывание РС8К9 с ЬИРК.
Для определения влияния тестируемого антитела к РС8К9 на связывание РС8К9 с рецептором ЛПНП использовали формат А1рЬаЬ18А®. Рекомбинантную полноразмерную РС8К9, используемую в анализе, экспрессировали как белок с С-концевым ΗΙδ-маркером в стабильной линии клеток 293 эмбриональной почки человека (НЕК) (Οίαη с1 а1., 1. ЫрМ Ке8. 48: 1488-1498, 2007). Рекомбинантный внеклеточный домен рецептора ЛПНП экспрессировали как белок с С-концевым РЬАС-маркером во транзиентно трансфицированных клетках НЕК 293Е (Οίαη е! а1., 1. ΠΐρΐΠ Кек. 48: 1488-1498, 2007). мАт мыши к РС8К9, связывавшееся с С-концевым доменом РС8К9 человека, экспрессировали в клетках НЕК 293 и очищали на аффинной колонке с белком С, а затем на 8ирегйех 200. Моноклональное антитело ΑΝΤΙ-РЬАС® ΒίοΜ2 (§1§та) является очищенным моноклональным 1§С1-антителом мыши, ковалентно связанным с биотином гидразидной связью. А№Т1-РЬАС ΒίοΜ2 распознает последовательность РЬАС на Ν-конце, МеЕ^конце или С-конце гибридных РЬАС-белков. АКП-РЬАС ΒίοΜ2 можно обнаружить с помощью конъюгатов авидина или стрептавидина. Моноклональное антитело АКП-РЬАС ΒίοΜ2 поставлялось в растворе 50% глицерина, 10 мМ фосфата натрия, рН 7,25, 150 мМ №С1, содержащем 0,02% азид натрия, и хранилось при температуре -20°С.
Эксперименты А1рЬаЬ18А® проводили в 384-луночных белых планшетах Ргох1Р1а1е (Регкш Е1тег) с использованием 25 мМ НЕРЕ8; рН 7,5, 100 мМ №С1, 2,5 мМ СаС12, 0,5% ТХ-100, 0,1% казеина, 1 мг/мл декстрана-500 и 0,05% Ргос1ш-300 в качестве буфера. В анализе использовали донорные гранулы со стрептавидином А1рЬаЬ18А® §1гер1ау1Йш Όοηοτ Веайк (Регкш Е1тег) и мАт мыши против РС8К9, конъюгированное с акцепторными гранулами А1рЬаЬ18А® АссерЮг Ьеайк. Когда гранулы располагались в непосредственной близости друг от друга за счет взаимодействия партнеров по связыванию - РС8К9 и ЬПЕК, происходил перенос синглетного кислорода с донорной гранулы на акцепторную гранулу. При возбуждении лазером при 680 нм синглетный кислород возбуждает акцепторную гранулу, что приводит к световому излучению. Акцепторные гранулы связывали с мАт мыши к РС8К9 за счет восстановительного аминирования, используя NаΒΗзСN (§1§та), и хранили при 4°С. Акцепторные гранулы, конъюгированные с мАт против РС8К9 (22 мкг/мл) предварительно нагружали 2,22 нМ РС8К9 в течение 1 ч. Донорные гранулы (44 мкг/мл) предварительно нагружали 5,55 нМ АЭТ1-РЕАС® ΒίοΜ2 и 2,22 нМ ΕΌΕΚ, содержащего РЬАС-маркер, в течение 1 ч.
После предварительной нагрузки в Ргох1Р1а1е, содержавший 9 мкл каждой смеси гранул (конечная концентрация РС8К9 и ЬПЬК = 1 нМ), добавляли 2 мкл тестируемого антитела к РС8К9 или контрольного 1дС с помощью полностью автоматизированного Μи1ΐ^тек (Весктап) и оставляли связываться в течение ночи при комнатной температуре. Сигнал А1рЬаЬ18А® (событий в секунду) измеряли с помощью Епу1кюп Τιιώο (Регкш Е1тег). Все эксперименты с анализом А1рЬаЬ18А® проводили в условиях
- 6 024430 низкой освещенности. При осуществлении процедур, по существу, так, как описано выше, связывание РС8К9 человека с ЬИЬК в анализе Л1рЬаЫ8Л® возрастало в зависимости от концентрации РС8К9. Добавление сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 (тестируемого РС8К9антитела) вызывало зависимое от концентрации полное ингибирование связывания РС8К9 с ЬИЬК при средней 1С50 приблизительно 90 пМ. Контрольный 1§С4 не оказывал влияния в ходе анализа. Результаты указанного анализа продемонстрировали, что сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 ингибировало связывание РС8К9 с ЬИЬК.
Пример 6. Ингибирование функции РС8К9 в клетках НерС2.
Для определения влияния тестируемого антитела к РС8К9 на плотность ЬИЬК на гепатоцитах клетки НерС2 человека культивировали в колбах Т75 с поли-И-лизиновым покрытием. Через 24 ч клетки высевали в количестве 5000 клеток/лунку в 100 мкл среды ΌΜΕΜ/Ρ-12 (3:1), содержавшей 5% (об./об.) сыворотки человека, истощенной по липопротеинам (ЬРИ§; 1п1гасе1) в 96-луночные черные планшеты с поли-И-лизиновым покрытием (Вейоп-Июкткоп). После инкубирования в течение ночи в среде, содержащей ЬРИ§, клетки инкубировали с 69 нМ (5 мкг/мл) рекомбинантной РС8К9 человека с С-концевым ΗΙδ-маркером и тестируемым РС8К9-антителом или контрольным 1§С4-антителом в концентрациях от 2,6 до 1333 нМ в течение 2 ч. Все этапы инкубирования выполняли при 37°С. Мониторинг уровня ЬИЬК осуществляли с использованием ЬИЬК-антитела (Ргодеп), флуоресцентно меченого 2епоп® А1еха Р1иог® 488 и при помощи набора для мечения 1§С2Ь мыши Мойке 1дС2Ь ЬаЬейпд Кб (1пуйгодеп). Клетки инкубировали с детекторным антителом в течение 90 мин при комнатной температуре, а затем фиксировали в течение 10 мин с использованием фиксатора, не содержащего формалина (РгеГег; АЛАТЕСН, Ыб), с последующей пермеабилизацией в 0,01% тритоне Х-100. Клетки окрашивали 10 мкг/мл пропидий-йодида (1пуйгодеп) для определения общего количества клеток. Количественную оценку сигнала ЬИЬК осуществляли с помощью лазерного сканирующего флуоресцентного микропланшетного цитометра с детектором флуоресценции Аситеп Ехр1огег™ (ТТР ЬаЬТесй).
При осуществлении процедур, по существу, как описано выше, РС8К9 человека вызывала снижение ЬИЬК на клетках НерС2 в зависимости от концентрации, причем ЕС50 составляла 18 нМ. Сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 (тестируемое РС8К9-антитело) ингибировало РС8К9-индуцированную супрессию ЬИЬК на клетках НерС2, причем 1С50 составляла 104 нМ. Контрольный 1§С4 человека был относительно неактивен при концентрациях до 1333 нМ. Указанные данные продемонстрировали, что сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 ингибировало РС8К9-опосредованное разрушение ЬИЬК.
Пример 7. Ингибирование РС8К9-индуцированного снижения поглощения ЛПНП.
Для определения влияния тестируемого антитела к РС8К9 на поглощение ЛПНП клетки НерС2 высевали в количестве 5000 клеток/лунку в 100 мкл среды ИМЕМ/Р-12 (3:1) с 5% ЬРИ§ человека в 96-луночные черные планшеты с поли-И-лизиновым покрытием и инкубировали при 37° С в атмосфере 5% СО2 в течение 18 ч. РС8К9 человека (69 нМ) добавляли к клеткам с тестируемым РС8К9-антителом или контрольным 1§С4 человека или без них в концентрациях от 2,6 до 1333 нМ и предварительно инкубировали с клетками в течение 2 ч при 37°С. После добавления 100 нг/лунку флуоресцентно меченого ЛПНП (ВОИ1РУЛИЕ 1пуйгодеп) клетки инкубировали в течение 4 ч при 37°С. Клетки фиксировали в фиксаторе, не содержащем формалина (РгеГег; АЛАТЕСН, Ыб.) в течение 20 мин при комнатной температуре. После двукратной промывки клеток ФБР клетки пермеабилизовали буфером ФБР, содержащем 0,01% тритон Х-100, в течение 15 мин при комнатной температуре и окрашивали 10 мкг/мл пропидиййодида для определения общего количества клеток. Поглощение ЛПНП определяли с использованием лазерного сканирующего флуоресцентного микропланшетного цитометра Аситеп Ехр1огег™ и выражали в процентах флуоресцентных клеток по отношению к общему количеству клеток. Ответ тестируемого антитела к РС8К9 или контрольного 1§С выражали в виде процентного ингибирования РС8К9, т.е. процента восстановления максимального поглощения ЛПНП в отсутствие РС8К9 по сравнению с исходным поглощением ЛПНП-Х в присутствии только РС8К9. Кроме того, рассчитывали соответствующие значения 1С50 для ингибирования РС8К9-индуцированного снижения поглощения ЛПНП.
При осуществлении процедур, по существу, как описано выше, РС8К9 человека вызывала снижение поглощения ЛПНП клетками НерС2 в зависимости от концентрации, причем ЕС50 составляла 32 нМ. Сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 (тестируемое РС8К9-антитело) обращало РС8К9-индуцированное ингибирование, что приводило к усилению поглощения ЛПНП, в то время как контрольный 1§С не вызывал обращения ингибирования. Конкретно, сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 продемонстрировало среднее максимальное процентное ингибирование РС8К9 на 84% при среднем значении 1С50 194 нМ. Указанные данные продемонстрировали, что сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 ингибировало РС8К9индуцированное снижение поглощения ЛПНП.
- 7 024430
Пример 8. Эффективность ίη νίνο.
Для определения фармакокинетических (ФК) и фармакодинамических (ФД) эффектов тестируемого антитела к РС8К9 ίη νίνο тестируемое антитело можно ввести здоровым яванским макакам и затем определить различные ФК- и ФД-параметры. Например, тестируемое антитело к РС8К9 можно внутривенно или подкожно ввести здоровым, не подвергавшимся ранее воздействию РС8К9 яванским макакам и затем измерить концентрацию тестируемого антитела в сыворотке с использованием сэндвичтвердофазного ИФА с 1дС человека. Концентрации в сыворотке, полученные в различные моменты времени после введения антитела, можно использовать для определения различных ФК-параметров тестируемого антитела, включая Т1/2, Стах, ППК и клиренс в плазме (СЬ). Аналогично, тестируемое антитело к РС8К9 можно внутривенно или подкожно ввести здоровым наивным яванским макакам и затем измерить концентрацию ЛПНП-Х в сыворотке с использованием автоматического анализатора (Эпес! ЬПЬ-С Р1и8, 2'1 Сеп., КосЬе ΌίαβηοΠχδ).
Осуществляя процедуры, по существу, как описано выше, оценивали фармакокинетику сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 у здоровых яванских макаков после однократного внутривенного введения в дозе 1, 5 или 15 мг/кг и после однократного подкожного введения в дозе 5 мг/кг. Фармакокинетические параметры, определенные в ходе указанных исследований, представлены ниже в табл. 3.
Таблица 3
Фармакокинетические параметры сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 у яванских макаков
Внутривенно (п = 4 / группу) | ||||
Доза (мг/кг) | Τι/2 (Ф | Стах (мкг/мл) | ППКо6щщ (ч * мкг/мл) | СЬ (мл/ч/кг) |
1 | 5,4 ± 1,0 | 19,8 ± 1,1 | 2218 ±222 | 0,45 ± 0,04 |
5 | 7,3 ± 1,3 | 107,3 ±3,2 | 14378 ± 1374 | 0,35 ± 0,04 |
15 | 8,4 ± 3,0 | 260,3 ± 45,0 | 57290±16535 | 0,28 ± 0,07 |
Подкожно (п = 3 / группу’) | ||||||
Доза (мг/кг) | т,шх (сут) | Стах (мкг/мл) | Τι/2 О) | ППКобщая (ч * мкг/мл) | СЬ/Р (мл/ч/кг) | %Р |
5 | 2,7 ± 0,6 | 32,4 ± 1,9 | 5,4 ± 0,7 | 11575 ± 1345 | 0,44 ±0,05 | 81 |
ЛИНН в сыворотке измеряли после введения сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 в двух независимых исследованиях. В обоих исследованиях свидетельства супрессии ЛПНП-Х были заметны в течение 24 ч после введения сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1. После внутривенного (в/в) введения антитела в соответствии с примером 1 в дозе 5 мг/кг наблюдали максимальное среднее снижение ЛПНП-Х на 60% (исследование 1) и на 25% (исследование 2). При в/в введении 5 мг/кг средняя супрессия ЛПНП-Х поддерживалась в течение приблизительно 8 недель (исследование 1) и 2 недель (исследование 2). В исследовании 2 отмечено умеренное влияние дозы (1-15 мг/кг) на величину супрессии ЛПНП-Х (25-35%). Влияние дозы на продолжительность супрессии ЛПНП-Х было более очевидным. При подкожном введении (5 мг/кг) сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 эффективно обеспечивало супрессию уровня ЛПНП-Х, причем величина супрессии была аналогична таковой после внутривенного введения. Влияние сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 на холестерин липопротеинов высокой плотности в любой дозе отсутствовало.
Пример 9. Физико-химические свойства сконструированного РС8К9-антитела.
Кроме того, обнаружено, что сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 обладало хорошей растворимостью, химической стабильностью и физической стабильностью.
А. Растворимость.
Для удобства приема желательна достаточно высокая растворимость. Например, доза 1 мг/кг при введении посредством 1,0-мл инъекции пациенту весом 100 кг требует растворимости, равной 100 мг/мл. Кроме того, желательно сохранение антитела в мономерном состоянии без образования высокомолекулярных (ВМС) агрегатов при высокой концентрации. Для определения растворимости тестируемого антитела указанное антитело можно диализовать в (1) 10 мМ цитрат, рН 6; (2) 10 мМ цитрат, рН 6, 150 мМ ЫаС1 и (3) фосфатно-солевой буфер (ФБР) рН 7,4. Затем восстановленный диализат можно анализировать путем аналитической эксклюзионной хроматографии (8ЕС) с целью измерения процентного содер- 8 024430 жания ВМС. Затем тестируемое антитело можно концентрировать в 4-мл центрифужном концентраторе при ~25°С до предела растворимости или свободного объема концентратора. При достижении свободного объема, концентрацию регистрировали как >. Затем концентрированное антитело можно анализировать методом эксклюзионной хроматографии для измерения процентного содержания ВМС. Для определения обратимости увеличения % ВМС при концентрировании концентрированный образец можно разбавить до 1 мг/мл и исследовать методом эксклюзионной хроматографии.
При осуществлении процедур, по существу, как описано выше, сконструированное антитело к РС8К9 в соответствии с примером 1 проявляло растворимость более 128 мг/мл при всех протестированных условиях. Кроме того, при высоких концентрациях имел место лишь низкий уровень ВМС.
Таблица 4
Процент ВМ-соединений в образцах для исследования растворимости, определенный методом эксклюзионной хроматографии % ВМС (диализат) % ВМС % ВМС (концентрат) (разбавление 1 мг/мл) мМ цитрат, рН 0,75 % 1,60 % 0,93 % б
мМ цитрат, 150 0,62 % 1,39% 0,90 % мМ \лС1 рНб
ФБР, рН 7,4 0,94 % 2,00 % 1,34%
В. Химическая стабильность.
Химическая стабильность облегчает разработку составов препарата с достаточным сроком хранения. Для оценки химической стабильности тестируемого антитела можно изготовить составы указанного антитела в концентрации 1 мг/мл в 10 мМ цитратном буфере при рН 4, 5, 6 или 7. Затем составленные образцы инкубировали в течение 4 недель при 4, 25 и 40°С в рамках исследования ускоренного разложения. Изменения зарядового профиля антитела, отражающие химические изменения, можно оценить с помощью капиллярного изоэлектрического фокусирования (кИЭФ) в соответствии со стандартными процедурами. При осуществлении процедур практически в соответствии с вышеприведенным описанием анализ химической стабильности сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 позволили получить следующие результаты.
Таблица 5
Химическая стабильность, определенная с помощью кИЭФ
Изменения % основного пика через 4 недели (по сравнению с 4° С) (хранение при 25° С) (хранение при 40° С)
10 мМ цитрат, рН 5 | -0,4 | ΝΤ |
10 мМ цитрат, рН 6 | -4,1 | -24,7 |
10 мМ цитрат, рН 7 | -7,7 | ΝΤ |
Результаты показывают, что через 4 недели хранения при 25°С % основного пика снижался лишь на 4,1 процентных пункта в составе с рН 6 (рН, часто используемом при изготовлении составов антител), что указывает на достаточную химическую стабильность сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 для облегчения разработки растворов с адекватным сроком хранения. Кроме того, указанное антитело также проявляло хорошую химическую стабильность при рН 5 и, в меньшей степени, при рН 7, что указывает на характеристики стабильности антитела, потенциально обеспечивающие изготовление составов в диапазоне рН.
С. Физическая стабильность.
Для оценки физической стабильности тестируемого антитела можно изготовить составы указанного антитела с концентрацией белка 1 мг/мл в 10 мМ цитратном буфере при рН 4, 5, 6 или 7 (или 10 мМ трис, рН 8). Затем образцы инкубировали в течение 4 недель при 4, 25 и 40°С в рамках исследования ускоренного разложения. После инкубирования оценивали физическую стабильность методом эксклюзионной хроматографии (§ЕС), отделявшей желательное мономерное антитело от агрегированного высокомолекулярного (ВМС) антитела.
В табл. 6 приведена сводная информация по результатам анализа физической стабильности сконструированного антитела к РС8К9 в соответствии с примером 1 после выполнения процедур, по существу,
- 9 024430 как описано выше. Данные показывают, что при рН 5, 6 и 7 изменения содержания ВМС на протяжении 4 недель при 25 или 40°С составляли менее 1%, что указывает на хорошую физическую стабильность и устойчивость к самоассоциации и агрегации.
Таблица 6
Процент ВМС в образцах при оценке физической стабильности
% ВМС, | определенный с помощью БЕС | ||||
рН 4 | рН 5 | рН 6 | рН 7 | рН 8 | |
Исходный образец | 0,26 | 0,32 | 0,40 | 0,50 | 1,31 |
25С в течение 4 недель | 0,37 | 0,44 | 0,51 | 0,66 | 2,10 |
40С в течение 4 недель | 20,34 | 1,15 | 1,02 | 1,32 | 3,41 |
- 10 024430
Последовательности
НСРК1- гипервариабельный участок 1 тяжелой цепи (8ЕОΙΡ ΝΟ: 1):
ОРРРККЬОМУ
НСРР2 - гипервариабельный участок 2 тяжелой цепи (8ЕОΙΡ N0; 2) τΐδδοοογτγγρρδνκο
НСРКЗ - гипервариабельный участок 3 тяжелой цепи (8Е0ΙΡ N0: 3):
ЕС! δ РОСОТУТУУМРУ
ЬСРК! - гипервариабельный участок 1 легкой цепи (δΕΟ ΙΡ ΝΟ: 4ι
ΚδδΚδ ЫЛ ΚΝΟΙΤΥδΥ
ЬСРК2- гипервариабельный участок 2 легкой цепи (5Е0ΙΡ N0: 5):
<5Ι,δΝΕΑ8
ЬСРКЗ - гипервариабельный участок 1 легкой цепи (δΕΟ ΙΡ ΝΟ: 6):
УОХЪЕЬРЕТ
НСУК - вариабельная область тяжелой цепи (8Е0 ΙΡ ΝΟ: 7):
РУ0ЕУР.8ООО1Л'КРОО31,К1,8С А А8СРРР8К1.СМУ\7УКОАРСКС1.РЛ\'У8Т1 δ δ СОСУ ΊΎΥΡΡ3νΚΟΚΓΤΙ8ΚΡΝΑΚΝδΕΥΕ<3ΜΝ3ΕΚΑΕΡΤΑνΥΥ0ΑΚΕΟΙδΓ<3Ο<ΪΤΥΊΎνΜΡΥ \νθζ>ΟΤΕντν88
ЬСУК - вариабельная область легкой цепи (8Е0 ΙΡ N0: 8):
Р1УМТО8Р1.31,РУТРОРРА818СК38К31,1.Р1К\О1ТУ8У\УУЕ0КРО03Р01,1.1УО1.3\1.А
80νΡϋΚΓ808030ϊϋΓΤΕΚΙ8Κ\ΈΑΕΡ\ΌνΥΥ('Ύ()ΝΙ_ΕΙ_ΡΙ_ΤΓ000ΤΚ.νΐ_ΙΙ\.
НС - тяжелая цепь (5Е0 ΙΡ ΝΟ: 9):
РУ0ЕУР8(_КЯЛЛ'КРОО31,К1,ЗС ЛЛ80РРРЗК1.0МУ\УУКОАР0К01.Р.'А'УЗТ1 δ δ ΟΟΟΥ ΊΎΥΡΡ3νΚΟΚΓΤΙ8ΚΡΝΑΚΝδΕΥΕ<5ΜΝδΕΚΑΕΡΤΑνΥΥ0ΑΚΕΟΙδΡ<3ΟΟΤΥΊΎνΜΡΥ ^СК)ОТЕУТУ88А8ТКОР8УРРЕАРС8К8Т8Е8ТААЕОСЕУКРУРРЕРУТУ8\\Л8ОАЕТ8 ОУНТРРАУЕ(233ОРУ8РЗЗУУТУР888РОТКТУТСНУРНКР8МТКУРККУЕЗКУаРРС
- 11 024430
ΡΡ€ΡΑΡΕΑΑαθΡ8νΡΕΡΡΡΚΡΚΙΠΈΜΙδΚΤΡΕντενννθνδ<3ΕΟΡΕν<5ΡΝ\νΥνθθνΕν
ΙΙΝΑΚΊΚΡΚΕΕΟΡΧδΊΎΚννδνΕΙ'νΈΙΙΟϋννΡΝΓιΚΡΥΙ^ίΚνδΝΚΓίΕΡδδΙΕΚΓΙδΚΑΚΓίΟ
ΡΚΕΡρνΥΤΕΡΡδφΕΕΜΤΚΝφνδΕΤσΕνΚΟΡΥΡδΜΑνΕΧνΕδΝΟρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδ
ΟΟδΡΡΕΥ5ΚΕΤνθΚ5Κ\Υζ>ΕΟΝνΡδ08νΜΗΕΑΕΗΝΡΓΥΤζ>Κ5Ε8Ε5ΕΟ
ЬС - легкая цепь (δΕΟ ΙΡ ΝΟ: 10):
Γ)ΤνΜΤ0δΡΙ_3Ι1ΡνΤΡ<'ϊΕΡΑδ15ΓΡδδΓ<δΕυΐΡΝ<ϊΙΤΥΛΥ\\ΎΙ1ΟΚΡΟιΟ3ΡΟΙ1Ι_ΓΥΟΕ5ΝΕΑ δίίνΡΟΚΓδΟδΟδΟΙϋΓΤΕΚΙδΚ V ΕΑΕϋΥίιν Υ Υ(ΥΟΝΕΕΕΡΕΙΓ(ίΟΟΓΚ νΕΙΚΚΙΎΑ ΑΙ'δ νΡΙΓΡΡδυΕ0ΕΚ8σΓΑ8\ν0ΕΕΝΝΡΥΡΚΕΛΚ\0\νκνϋΝΑΕ05Ο\50ΕδνΤΕ0υδΚΟ8Τ ΥδΙ.δδΤΡΤΙ,δΚΛΟΥΡΚΗΚνΥΛ€ΡνΤΗΟί.ιΙδδΡνΤΙ<δΡΝΡ(.1Ρί' кДНК тяжелой цепи (НО 15ЕО 1Р ΝΟ. 1П:
ОАОСТОСАОСТССТСОАОТСТОООООАСОСТТООТАААСССТСОСОООТСССТОА
ОАСТСТССТОТССАСССТСТООАТГСССОГГСАОТААОСТСеОСАТСОТТГеОСТСС
ОССАООСТССАОООААООООСТООАОТОООТСТСААССАТТАСТАОТООТООТОО
ТТАСАСАТАСТАТССАОАСАОТОТОААСОГХЗСООТГСАССАТСТССАОАОАСААТС
ССААаААСТСАСТОТАТСТОСАААТаААСАОССТОАОАОССОАООАСАСОаССОТ
АТАТГАСТОТОСОАОАОААООААТТАОСТТТСАОООТСОСАССТАСАСГГАТОТТА
ТСОАСТАСТОСССССАОООСАСССТООТСАССОТСТССТСАОССТССАССААОООС
ССАТСОеТСТТСССОСТАССССССТОСТССАСОАОСАССТСССАОАССАСАОССОС
ССТОООСТОССТООТСААООАСТАСТТССССОААССООТОАСООТОТСОТООААСТ
САООСОСССТОАССАОСООСОТССАСАССТТСССООСТОТССТАСАОТССТСАООА
СТСТАСТСССТСАССАССОТООТСАСССТССССТССАОСАОСТТООССАСОААОАС
СТАСАССТОСААСаТАОАТСАСААОСССАОСААСАССААООТООАСААОАОАОТТ
ОАОТССАААТАТООТСССССАТОСССАСССТОСССАОСАССТОАООССОССОООО
ОАССАТСАОТСТТССТОТТССССССААААСССААООАСАСТСТСАТОАТСТСССОО
АССССТОАОСТСАСОТОСОТОСТОСТОСАСОТОАОССАССААОАССССОАООТСС
АОТТСААСТООТАСОТООАТООСОТООАООТОСАТААТОССААОАСАААОССОСО
ООАООАОСАОТТСААСАОСАСОТАССОТОТООТСАОСОТССТСАССОТССТОСАСС
АСОАСТСКЗСТОААСООСААООАОТАСААОТОСААООТСТССААСАААООССТССС
ОТССТССАТСОАСААААССАТСТССАААСССАААСОССАОССССОАОАСССАСАО
ОТОТАСАСССТОСССССАТСССАООАООАОАТОАССААОААССАООТСАОССТОА
ССТОССТООТСАААООСТТСТАССССАОСОАСАТСОССОТООАОТОООАААОСААТ
ООССАСССООАОААСААСТАСААОАССАСОССТСССОТССТОСАСТССОАСОССТ
ССТТСТТССТСТАСАОСАООСТААССОТООАСААаАОСАООТООСАООАООаОАА
- 12 024430
ТОТСТТСТСАТОСТССОТОАТОСАТОАООСТСТОСАСААССАСТАСАСАСАОААОА
ОССТСТСССТОТСТСТОООТТОА кДНК легкой цепи (ЬС) 18ЕО1Р N0: 12)
ОАТАТГОТОАТОАСТСАОТСТССАСТСТСССТОСССОТСАССССТООАОАОССООС
СТССАТСТССТОСАООТСТАОТААОАОТСТСТТАСАТСОТААТООСАТСАСТТАТТС
ОТАТТООТАССТОСАОААОССАОООСАОТСТССАСАОСТССТОАТСТАТСАОСТОТ
ССААССТТОССТСАООАОТСССАОАСАООТТСАОТООСАОТОООТСАООСАСТОАТ
ТТСАСАСТОААААТСАОСАОООТООАООСТОАООАТОТТООАОТТТАТГАСТОСТА
ТСААААТСТАОААСТТССОСТСАСОТТСООССАОООСАССААООТООАААТСААА
СООАСТОТООСТОСАССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТОАТОАОСАОТТОАА
АТСТООААСТОССТСТОТТОТОТОССТОСТОААТААСТТСТАТСССАОАОАООССА
ААОТАСАОТООААООТООАТААСОСССТССААТСОООТААСТСССАООАОАОТОТ
САСАОАОСАООАСАОСААООАСАОСАССТАСАОССТСАОСАОСАСССТОАСОСТО
АОСАААОСАОАСТАСОАОАААСАСАААОТСТАСОССТОСОААОТСАСССАТСАОО
ОССТОАОСТСОСССОТСАСАААОАОСТТСААСАаОООАОАОТОСТАА
НРС8К9 18ЕО ΙΡ N0. 13):
КАрЕРЕРОРУЕЕЬУЬАЬККЕЕРеЬАЕАРЕНеТТАТРНКСАКРРдаКЕРСТУУУУЬКЕЕ
ТН1.808РКТАГ<Г<[.0А0АЛГ<КО\ТТК[[.НУРНО11.РОР1УКМ8ОГ)11.Р1Л1.К1РНУГ)У1
ΕΕΟ88νΡΑ08ΙΡΎΝΕΕΚ1ΤΡΡΚΥΚΑΡΕΥ0ΡΡΡΟΟ8ΕνΕνΥΕΕΡΤ8Ι08ΡΗΚΕΙΕΟΚνΜνΤ
РРЕНУРЕЕРОТКРНК0А8КСР8НСТНЬАСУУ8СКРАСУАКСА8МК8ЬКУЬНС0СКС
ΤνβΟΤΕΙΟΕΕΡΙΚΚδφΕνρΡνΟΡΕννΕΕΡΕΑΟΟΥδΚνΕΝΑΑΟφΚΕΑΚΑΟννΕνΤΑΑΟΝ
РКРРАСЕ¥8РА8АРЕУ1ТУОА™А<ЗР<ЗРУТЕОТЕО™РОКСУРЕРАРОЕРПОА58РС8
ΤΡΡνδΟδϋΤδΟΑΑΑΡίνΑΟΓΛΑΜΜΕδΑΡΡΡΕΤΙ.ΑΕΙ.ΡΟΡΕΙΗΓδΑΚΟνίΝΡΑν/ΡΡΕΡΟΓΐ
УЕТР^УААЕРР8ТНОАО\УС>ЕРСКТУ\¥8АНЗОРТКМАТАУАКСАРРЕЕЕЕ8С38Р8КЗ
ОККР.ОЕРМЕЛОООКЕУС1Е\НХЛРООЕОУУЛ1ЛРССЕЕРОЛХС8УНТЛРРЛЕЛ8МОТ
КУНСН9фОНУЕТОС88НдаЕУЕРЕОТНКРРУЕКРКО<)РХ<ЗСУеНКЕА81НАЗССНАРО
ЕЕСКУКЕНО1РАР0Е0УТУАСЕЕО№1ЕТОСЗАЕРОТЗНУЕОАУАУОМТСУУК8КОУЗ
ГГе8Т8ЕСАУТАУА1ССКЗКНЕА<ЗА8<ЗЕЕ(ЗРУНННННН
НРС8К9 160-181 18ΕΟΙΡΝΟ. 14).
ΚΙΤΡΡΚΥΚΑΡΕΥφΡΡΡΟΟδΕνΕ
ЬРСЗК.9 166-181 18ΕΟΙΡΝΟ: 15):
ΥΡΑΡΡ.ΥΟΡΡΠΟΟδΙ.νΡ.
НРС8К9 163-17418ΕΟΙΡΝΟ: 16Е
ΡΡΚΥΚΑΡΕΥφΡΡ
ЬРСЗК.9. укороченная по С-конца- (ЗЕО ΙΡ ΝΟ: 171:
фЕОЕРОРУЕЕЕУЕАЕКЗЕЕРОЕАЕАРЕНОТТАТРНКСАКРРЧРКЕРОТУУУУЕКЕЕТН Εδ<3δΕΚΤΑΚΚΕ<3Α<3ΑΑΚΚΟΥΕΤΚΙΕΗνΓΗΟΕΕΡΟΡΕνΚΜδΟΡΕΕΕΕΑΕΚΕΡΗνΡΥ]ΕΕ Ρ83νΓΑ()8ΙΡ\νΝΕΕΚΓΤΡΡΚΥΚΑΡΕΥ9ΡΡΡΟΟ8ΕνΕνΥΕΕΡΤ3Ι9δΡΗΚΕΙΕαΚνΜνΤΡ РЕНУРЕЕООТКГНК0АЗКСР8НОТНЕАОУУ8ОКРАОУАКОАЗМК.8ЕКУЕТ4С(ЗОКОТ У8ОТЕ1ОЕРГТГ<К80ЕУ0РУОРЕУУЕЕРЕЛОаУ8РУЕ>РА АСОРЕАРЛОУУЕУТЛЛОУР ΚΡΡΑίΕ5 8ΡΑ8ΑΡΕνΠΑΌΑ'1ΝΑΟΡΟΡνΥΕΟ'1ΕΟΕΝ1ΌΚΕ\’ΡΕ1·ΑΡΟΕΡΙΙΟΑ33Ρί'8Υ СГУ8<}8ОТ8С>АААНУАО]ААММЕ8АЕРЕЕ
- 13 024430 <110> ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ <120> АНТИТЕЛА К РСЗК9 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ <130> Х19477 <150> 61/535625 <151> 2011-09-16 <160> 17 <170> РаЬепЫп чегзЬоп 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетическая <400> 1
С1у РЬе Рго РЬе Зег Ьуз Ьеи | С1у | МеЬ | Уа1 10 | |||
1 | 5 | |||||
<210> | 2 | |||||
<211> | 17 | |||||
<212> | БЕЛОК | |||||
<213> | Искусственная | |||||
<220> <223> | Синтетическая | |||||
<400> | 2 | |||||
ТЬг Не | Зег Зег С1у С1у | С1у | Туг | ТЬг | Туг Туг | Рго Азр Зег Уа1 Ьуз |
1 | 5 | 10 | 15 | |||
С1у |
- 14 024430
1 | 5 10 15 |
<210> <211> <212> <213> | 4 16 БЕЛОК Искусственная |
<220> <223> | Синтетическая |
<400> | 4 |
Агд Зег Зег Ьуз Зег Ьеи Ьеи НЬз Агд Азп СЬу Не ТИг Туг Зег Туг
1 | 5 10 15 |
<210> <211> <212> <213> | 5 7 БЕЛОК Искусственная |
<220> <223> | Синтетическая |
<400> | 5 |
СЬп Ьеи Зег Азп Ьеи АЬа Зег 1 5
<210> <211> <212> <213> | 6 9 БЕЛОК Искусственная |
<220> <223> | Синтетическая |
<400> | 6 |
Туг СЬп Азп Ьеи СЬи Ьеи Рго Ьеи ТЬг
1 | 5 |
<210> <211> <212> <213> | 7 125 БЕЛОК Искусственная |
<220> <223> | Синтетическая |
<400> | 7 |
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго СЬу СЬу 15 10 15
- 15 024430
Зег | Ьеи | Агд | Ьеи 20 | Зег | Суз | А1а | А1а | Зег 25 | С1у | РЬе | Рго | РЬе | Зег 30 | Ьуз | Ьеи |
С1у | Мер | Уа1 | Тгр | Уа1 | Агд | С1п | А1а | Рго | С1у | Ьуз | С1у | Ьеи | С1и | Тгр | Уа1 |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Зег | ТЬг | Не | Зег | Зег | С1у | С1у | С1у | Туг | ТЬг | Туг | Туг | Рго | Азр | Зег | Уа1 |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Ьуз | С1у | Агд | РЬе | ТЬг | 11е | Зег | Агд | Азр | Азп | А1а | Ьуз | Азп | Зег | Ьеи | Туг |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ьеи | С1п | Мер | Азп | Зег | Ьеи | Агд | А1а | С1и | Азр | ТЬг | А1а | Уа1 | Туг | Туг | Суз |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
АЬа | Агд | С1и | С1у | 11е | Зег | РЬе | С1п | С1у | С1у | ТЬг | Туг | ТЬг | Туг | Уа1 | Мер |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Азр | Туг | Тгр | С1у | С1п | С1у | ТЬг | Ьеи | Уа1 | ТЬг | Уа1 | Зег | Зег | |||
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
<210> | 8 | ||||||||||||||
<211> | 112 | ||||||||||||||
<212> : | БЕЛОК | ||||||||||||||
<213> ! | Искусственная | ||||||||||||||
<220> | |||||||||||||||
<223> ι | Синтетическая | ||||||||||||||
<400> | 8 | ||||||||||||||
Азр | Не | Уа1 | Мер | ТЬг | С1п | Зег | Рго | Ьеи | Зег | Ьеи | Рго | Уа1 | ТЬг | Рго | С1у |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
С1и | Рго | А1а | Зег | 11е | Зег | Суз | Агд | Зег | Зег | Ьуз | Зег | Ьеи | Ьеи | Низ | Агд |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Азп | С1у | 11е | ТЬг | Туг | Зег | Туг | Тгр | Туг | Ьеи | С1п | Ьуз | Рго | С1у | С1п | Зег |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Рго | С1п | Ьеи | Ьеи | 11е | Туг | С1п | Ьеи | Зег | Азп | Ьеи | А1а | Зег | С1у | Уа1 | Рго |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Азр | Агд | РЬе | Зег | С1у | Зег | С1у | Зег | С1у | ТЬг | Азр | РЬе | ТЬг | Ьеи | Ьуз | 11е |
65 | 70 | 75 | 80 |
- 16 024430
Зег Агд | УаЬ | СЬи | АЬа | СЬи | Азр | УаЬ | СЬу | УаЬ | Туг | Туг | Суз | Туг | СЬп | Азп |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||
Ьеи СЬи | Ьеи | Рго | Ьеи | ТЬг | РЬе | СЬу | СЬп | СЬу | ТЬг | Ьуз | УаЬ | СЬи | Ые | Ьуз |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||
<210> ! | 9 | |||||||||||||
<211> · | 451 | |||||||||||||
<212> ] | БЕЛОК | |||||||||||||
<213> 1 | Искусственная | |||||||||||||
<220> | ||||||||||||||
<223> ( | Бинтетическая | |||||||||||||
<400> | 9 | |||||||||||||
СЬи УаЬ | СЬп | Ьеи | УаЬ | СЬи | Зег | СЬу | СЬу | СЬу | Ьеи | УаЬ | Ьуз | Рго | СЬу | СЬу |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Зег Ьеи | Агд | Ьеи | Зег | Суз | АЬа | АЬа | Зег | СЬу | РЬе | Рго | РЬе | Зег | Ьуз | Ьеи |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||
СЬу Мер | УаЬ | Тгр | УаЬ | Агд | СЬп | АЬа | Рго | СЬу | Ьуз | СЬу | Ьеи | СЬи | Тгр | УаЬ |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||
Зег ТЬг | Ые | Зег | Зег | СЬу | СЬу | СЬу | Туг | ТЬг | Туг | Туг | Рго | Азр | Зег | УаЬ |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||
Ьуз СЬу | Агд | РЬе | ТЬг | Ые | Зег | Агд | Азр | Азп | АЬа | Ьуз | Азп | Зег | Ьеи | Туг |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||
Ьеи СЬп | Мер | Азп | Зег | Ьеи | Агд | АЬа | СЬи | Азр | ТЬг | АЬа | УаЬ | Туг | Туг | Суз |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||
АЬа Агд | СЬи | СЬу | Ые | Зег | РЬе | СЬп | СЬу | СЬу | ТЬг | Туг | ТЬг | Туг | УаЬ | Мер |
100 | 105 | ыо | ||||||||||||
Азр Туг | Тгр | СЬу | СЬп | СЬу | ТЬг | Ьеи | УаЬ | ТЬг | УаЬ | Зег | Зег | АЬа | Зег | ТЬг |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||
Ьуз СЬу | Рго | Зег | УаЬ | РЬе | Рго | Ьеи | АЬа | Рго | Суз | Зег | Агд | Зег | ТЬг | Зег |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||
СЬи Зег | ТЬг | АЬа | АЬа | Ьеи | СЬу | Суз | Ьеи | УаЬ | Ьуз | Азр | Туг | РЬе | Рго | СЬи |
145 | 150 | 155 | 160 |
- 17 024430
Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег 165
С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Н1з 170 175
ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег 180
Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег 185 190
Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег 195 200
Ьеи С1у ТЬг Ьуз ТЬг Туг ТЬг Суз 205
Азп Уа1 Азр Низ Ьуз Рго Зег Азп 210 215
ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 С1и 220
Зег Ьуз Туг С1у Рго Рго Суз Рго 225 230
Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а А1а 235 240
С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе 245
Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи 250 255
МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 260
ТЬг Суз Уа1 Уа1 νβΐ Азр Уа1 Зег 265 270
С1п С1и Азр Рго С1и Уа1 С1п РЬе 275 280
Азп Тгр Туг 5/а1 Азр С1у Уа1 С1и 285
Уа1 НЬз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго 290 295
Агд С1и С1и С1п РЬе Азп Зег ТЬг 300
Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг 305 310
17а1 Ьеи Низ С1п Азр Тгр Ьеи Азп 315 320
С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 325
Зег Азп Ьуз С1у Ьеи Рго Зег Зег 330 335
11е С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а 340
Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п 345 350
Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег С1п 355 360
С1и С1и МеЬ ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 365
Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у 370 375
РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 380
С1и Тгр С1и Зег Азп С1у С1п Рго
61и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго
- 18 024430
385 | 390 | 395 | 400 |
Рго Уа1 Ьеи Азр Зег | Азр С1у Зег | РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи | ТЬг |
405 | 410 415 | ||
Уа1 Азр Ьуз Зег Агд | Тгр С1п С1и | С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег | Уа1 |
420 | 425 430 | ||
МеЬ Нхз С1и А1а Ьеи | ΗΪ3 Азп Нхз | Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег | Ьеи |
435 | 440 | 445 | |
Зег Ьеи С1у | |||
450 | |||
<210> 10 | |||
<211> 219 | |||
<212> БЕЛОК | |||
<213> Искусственная | |||
<220> | |||
<223> Синтетическая | |||
<400> 10 | |||
Азр Не Уа1 МеЬ ТЬг | С1п Зег Рго | Ьеи Зег Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго | С1у |
1 5 | 10 15 | ||
С1и Рго А1а Зег Не | Зег Суз Агд | Зег Зег Ьуз Зег Ьеи Ьеи Нхз | Агд |
20 | 25 30 | ||
Азп С1у Не ТЬг Туг | Зег Туг Тгр | Туг Ьеи С1п Ьуз Рго С1у С1п | Зег |
35 | 40 | 45 | |
Рго С1п Ьеи Ьеи Не | Туг С1п Ьеи | Зег Азп Ьеи А1а Зег С1у Уа1 | Рго |
50 | 55 | 60 | |
Азр Агд РЬе Зег С1у | Зег С1у Зег | С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз | Не |
65 | 70 | 75 | 80 |
Зег Агд Уа1 С1и А1а | С1и Азр Уа1 | С1у Уа1 Туг Туг Суз Туг С1п | Азп |
85 | 90 95 | ||
Ьеи С1и Ьеи Рго Ьеи | ТЬг РЬе С1у | С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Не | Ьуз |
100 | 105 110 | ||
Агд ТЬг Уа1 А1а А1а | Рго Зег Уа1 | РЬе Не РЬе Рго Рго Зег Азр | С1и |
- 19 024430
115 120 125
С1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе 130 135 140
Туг Рго Агд С1и А1а Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п 145 150 155 160
Зег С1у Азп Зег С1п С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег 165 170 175
ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и 180 185 190
Ьуз Нхз Ьуз Уа1 Туг А1а Суз С1и Уа1 ТЬг Нхз С1п С1у Ьеи Зег Зег 195 200 205
Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд С1у С1и Суз
210 <210> 11 <211> 1356 <212> ДНК <213> Искусственная <220> <223> Синтетическая <400> 11 | 215 | ||||
даддЬдсадс 60 | ЬддЬддадЬс | Ьдддддаддс | ЬЬддЬааадс | сЬддддддЬс | ссЬдадасЬс |
ЬссЬдЬдсад 120 | ссЬсЬддаЬЬ | сссдЬЬсадЬ | аадсЬсддса | ЬддЬЬЬдддЬ | ссдссаддсЬ |
ссадддаадд 180 | ддсЬддадЬд | ддЬсЬсаасс | аЬЬадЬадЬд | дЬддЬддЬЬа | сасаЬасЬаЬ |
ссадасадЬд 240 | Ьдааддддсд | дЬЬсассаЬс | Ьссададаса | аЬдссаадаа | сЬсасЬдЬаЬ |
сЬдсаааЬда 300 | асадссЬдад | адссдаддас | асддссдЬаЬ | аЬЬасЬдЬдс | дададаадда |
аЬЬадсЬЬЬс 360 | адддЬддсас | сЬасасЬЬаЬ | дЬЬаЬддасЬ | асЬддддсса | дддсасссЬд |
дЬсассдЬсЬ 420 | ссЬсадссЬс | сассаадддс | ссаЬсддЬсЬ | ЬсссдсЬадс | дсссЬдсЬсс |
- 20 024430
аддадсассР 480 | ссдададсас | адссдсссРд | ддсРдссРдд | РсааддасРа | сРРссссдаа |
ссддрдасдд 540 | РдРсдРддаа | сРсаддсдсс | сРдассадсд | дсдрдсасас | сРРсссддсР |
дРссРасадР 600 | ссРсаддасР | сРасРсссРс | адсадсдрдд | РдассдРдсс | сРссадсадс |
РРдддсасда 660 | адассРасас | сРдсаасдРа | даРсасаадс | ссадсаасас | сааддрддас |
аадададРРд 720 | адРссаааРа | РддРссссса | РдсссасссР | дсссадсасс | Рдаддссдсс |
дддддассаР 780 | садРсРРссР | дРРсссссса | ааасссаадд | асасРсРсаР | даРсРсссдд |
ассссРдадд 840 | РсасдРдсдР | ддрддрддас | дрдадссадд | аадассссда | ддРссадРРс |
аасРддРасд 900 | РддаРддсдР | ддаддРдсаР | ааРдссаада | сааадссдсд | ддаддадсад |
РРсаасадса 960 | сдрассдрдр | ддРсадсдРс | сРсассдРсс | Рдсассадда | сРддсРдаас |
ддсааддадр 1020 | асаадрдсаа | ддРсРссаас | аааддссРсс | сдРссРссаР | сдадаааасс |
аРсРссааад 1080 | ссааадддса | дссссдадад | ссасаддрдр | асасссрдсс | сссаРсссад |
даддадаРда 1140 | ссаадаасса | ддРсадссРд | ассрдссрдд | РсаааддсРР | сРассссадс |
дасаРсдссд 1200 | РддадРддда | аадсааРддд | садссддада | асаасРасаа | дассасдссР |
сссдРдсРдд 1260 | асРссдасдд | сРссРРсРРс | сРсРасадса | ддсРаассдР | ддасаададс |
аддрддсадд 1320 | аддддааРдР | сРРсРсаРдс | РссдРдаРдс | аРдаддсРсР | дсасаассас |
Расасасада | ададссРсРс | ссРдРсРсРд | ддррда |
1356
<210> | 12 |
<211> | 660 |
<212> | ДНК |
<213> | Искусственная |
<220> <223> | Синтетическая |
<400> | 12 |
- 21 024430
даЬаЫздЬда 60 | ЬдасЬсадЬс | ЬссасЬсЬсс | сЬдсссдЬса | ссссЬддада | дссддссЬсс |
аЬсЬссЬдса 120 | ддЬсЬадЬаа | дадЬсЬсЬЬа | саЬсдЬааЬд | дсаЬсасЬЬа | ЬЬсдЬаЬЬдд |
ЬассЬдсада 180 | адссадддса | дЬсЬссасад | сЬссЬдаЬсЬ | аЬсадсЬдЬс | саассЬЬдсс |
ЬсаддадЬсс 240 | садасаддЬЬ | садЬддсадЬ | дддЬсаддса | сЬдаЬЬЬсас | асЬдааааЬс |
адсадддЬдд 300 | аддсЬдадда | ЬдЬЬддадЬЬ | ЬаЬЬасЬдсЬ | аЬсааааЬсЬ | адаасЬЬссд |
сЬсасдЬЬсд 360 | дссадддсас | сааддЬддаа | аЬсааасдда | сЬдЬддсЬдс | ассаЬсЬдЬс |
ЬЬсаЬсЬЬсс 420 | сдссаЬсЬда | ЬдадсадЬЬд | аааЬсЬддаа | сЬдссЬсЬдЬ | ЬдЬдЬдссЬд |
сЬдааЬаасЬ 480 | ЬсЬаЬсссад | ададдссааа | дЬасадЬдда | аддЬддаЬаа | сдсссЬссаа |
ЬсдддЬаасЬ 540 | сссаддадад | ЬдЬсасадад | саддасадса | аддасадсас | сЬасадссЬс |
адсадсассс 600 | ЬдасдсЬдад | сааадсадас | Ьасдадааас | асааадЬсЬа | сдссЬдсдаа |
дЬсасссаЬс 660 | адддссЬдад | сЬсдсссдЬс | асааададсЬ | Ьсаасадддд | ададЬдсЬаа |
<210> 13 <211> 672 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетическая <400> 13
Агд А1а С1п С1и Азр С1и Азр С1у Азр Туг С1и С1и Ьеи Уа1 Ьеи А1а 15 10 15
Ьеи Агд Зег С1и С1и Азр С1у Ьеи А1а С1и А1а Рго С1и НЬз С1у ТЬг 20 25 30
ТЬг А1а ТЬг РЬе НЬз Агд Суз А1а Ьуз Азр Рго Тгр Агд Ьеи Рго С1у 35 40 45
ТЬг Туг УаЬ УаЬ УаЬ Ьеи Ьуз С1и С1и ТЬг НЬз Ьеи Зег С1п Зег С1и 50 55 60
Агд ТЬг АЬа Агд Агд Ьеи СЬп АЬа СЬп АЬа АЬа Агд Агд СЬу Туг Ьеи 65 70 75 80
ТЬг Ьуз Не Ьеи НЬз 7аЬ РЬе НЬз СЬу Ьеи Ьеи Рго СЬу РЬе Ьеи 7аЬ 85 90 95
Ьуз МеЬ Зег СЬу Азр Ьеи Ьеи СЬи Ьеи АЬа Ьеи Ьуз Ьеи Рго НЬз УаЬ ЬОО Ь05 ЬЬО
Азр Туг ЬЬе СЬи СЬи Азр Зег Зег УаЬ РЬе АЬа СЬп Зег ЬЬе Рго Тгр ЬЬ5 Ь20 Ь25
Азп Ьеи СЬи Агд 1Ье ТЬг Рго Рго Агд Туг Агд АЬа Азр СЬи Туг СЬп ЬЗО Ь35 Ь40
Рго Рго Азр СЬу СЬу Зег Ьеи УаЬ СЬи УаЬ Туг Ьеи Ьеи Азр ТЬг Зег Ь45 Ь50 Ь55 Ь60
ЬЬе СЬп Зег Азр НЬз Агд СЬи ЬЬе СЬи СЬу Агд УаЬ Мер УаЬ ТЬг Азр Ь65 Ь70 Ь75
РЬе СЬи Азп УаЬ Рго СЬи СЬи Азр СЬу ТЬг Агд РЬе НЬз Агд СЬп АЬа Ь80 Ь85 Ь90
Зег Ьуз Суз Азр Зег НЬз СЬу ТЬг НЬз Ьеи АЬа СЬу УаЬ УаЬ Зег СЬу Ь95 200 205
Агд Азр АЬа СЬу УаЬ АЬа Ьуз СЬу АЬа Зег Мер Агд Зег Ьеи Агд УаЬ 2Ь0 2Ь5 220
Ьеи Азп Суз СЬп СЬу Ьуз СЬу ТЬг УаЬ Зег СЬу ТЬг Ьеи ЬЬе СЬу Ьеи 225 230 235 240
СЬи РЬе ЬЬе Агд Ьуз Зег СЬп Ьеи УаЬ СЬп Рго УаЬ СЬу Рго Ьеи УаЬ 245 250 255
УаЬ Ьеи Ьеи Рго Ьеи АЬа СЬу СЬу Туг Зег Агд УаЬ Ьеи Азп АЬа АЬа 260 265 270
Суз СЬп Агд Ьеи АЬа Агд АЬа СЬу УаЬ УаЬ Ьеи УаЬ ТЬг АЬа АЬа СЬу 275 280 285
- 23 024430
Азп РНе Агд Азр Азр А1а Суз Ьеи Туг Зег Рго А1а Зег А1а Рго С1и 290 295 300
Уа1 Не ТЬг Уа1 С1у А1а ТЬг Азп А1а С1п Азр С1п Рго Уа1 ТНг Ьеи 305 310 315 320
С1у ТНг Ьеи С1у ТНг Азп РНе С1у Агд Суз Уа1 Азр Ьеи РНе А1а Рго 325 330 335
С1у С1и Азр 11е 11е С1у А1а Зег Зег Азр Суз Зег ТНг Суз РНе Уа1 340 345 350
Зег С1п Зег С1у ТНг Зег С1п А1а А1а А1а НЬз Уа1 А1а С1у 11е А1а 355 360 365
А1а МеЬ МеЬ Ьеи Зег А1а С1и Рго С1и Ьеи ТНг Ьеи А1а С1и Ьеи Агд 370 375 380
С1п Агд Ьеи 11е НЬз РНе Зег А1а Ьуз Азр Уа1 11е Азп С1и А1а Тгр 385 390 395 400
РНе Рго С1и Азр С1п Агд Уа1 Ьеи ТНг Рго Азп Ьеи Уа1 А1а А1а Ьеи 405 410 415
Рго Рго Зег ТНг ΗΪ3 С1у А1а С1у Тгр С1п Ьеи РНе Суз Агд ТНг Уа1 420 425 430
Тгр Зег А1а НЬз Зег С1у Рго ТНг Агд МеЬ А1а ТНг А1а Уа1 А1а Агд 435 440 445
Суз А1а Рго Азр С1и С1и Ьеи Ьеи Зег Суз Зег Зег РНе Зег Агд Зег 450 455 460
С1у Ьуз Агд Агд С1у С1и Агд МеЬ С1и А1а С1п С1у С1у Ьуз Ьеи Уа1 465 470 475 480
Суз Агд А1а НЬз Азп А1а РНе С1у С1у С1и С1у Уа1 Туг А1а 11е А1а 485 490 495
Агд Суз Суз Ьеи Ьеи Рго С1п А1а Азп Суз Зег Уа1 НЬз ТНг А1а Рго 500 505 510
Рго А1а С1и А1а Зег МеЬ С1у ТНг Агд Уа1 Ηίδ Суз Шз С1п С1п С1у 515 520 525
- 24 024430
Низ Уа1 | Ьеи | ТЬг | С1у | Суз | Зег | Зег | Низ | Тгр | С1и | Уа1 | С1и | Азр | Ьеи | С1у |
530 | 535 | 540 | ||||||||||||
ТЬг Низ | Ьуз | Рго | Рго | Уа1 | Ьеи | Агд | Рго | Агд | С1у | С1п | Рго | Азп | С1п | Суз |
545 | 550 | 555 | 560 | |||||||||||
Уа1 С1у | Низ | Агд | 61и | А1а | Зег | 11е | Низ | А1а | Зег | Суз | Суз | Низ | А1а | Рго |
565 | 570 | 575 | ||||||||||||
С1у Ьеи | С1и | Суз | Ьуз | Уа1 | Ьуз | С1и | Низ | С1у | 11е | Рго | А1а | Рго | С1п | С1и |
580 | 585 | 590 | ||||||||||||
С1п Уа1 | ТЬг | Уа1 | А1а | Суз | С1и | С1и | С1у | Тгр | ТЬг | Ьеи | ТЬг | С1у | Суз | Зег |
595 | 600 | 605 | ||||||||||||
А1а Ьеи | Рго | С1у | ТЬг | Зег | Низ | Уа1 | Ьеи | С1у | А1а | Туг | А1а | Уа1 | Азр | Азп |
610 | 615 | 620 | ||||||||||||
ТЬг Суз | Уа1 | Уа1 | Агд | Зег | Агд | Азр | Уа1 | Зег | ТЬг | ТЬг | С1у | Зег | ТЬг | Зег |
625 | 630 | 635 | 640 | |||||||||||
С1и С1у | А1а | Уа1 | ТЬг | А1а | Уа1 | А1а | 11е | Суз | Суз | Агд | Зег | Агд | Низ | Ьеи |
645 | 650 | 655 | ||||||||||||
А1а С1п | А1а | Зег | С1п | С1и | Ьеи | С1п | Азр | Уа1 | Низ | Низ | Низ | Низ | Низ | Низ |
660 | 665 | 670 | ||||||||||||
<210> | 14 | |||||||||||||
<211> | 22 | |||||||||||||
<212> | БЕЛОК | |||||||||||||
<213> | Искусственная | |||||||||||||
<220> | ||||||||||||||
<223> | Синтетическая | |||||||||||||
<400> | 14 | |||||||||||||
Агд Не | ТЬг | Рго | Рго | Агд | Туг | Агд | А1а | Азр | С1и | Туг | С1п | Рго | Рго | Азр |
1 | 5 | 10 | 15 |
С1у С1у Зег Ьеи Уа1 С1и 20 <210> 15 <211> 16
- 25 024430 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетическая <400> 15
Туг Агд А1а Азр С1и Туг С1п Рго Рго Азр С1у С1у Зег Ъеи Уа1 С1и 15 10 15 <210> 16 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетическая <400> 16
Рго Рго Агд Туг Агд А1а Азр С1и Туг С1п Рго Рго 15 10 <210> 17 <211> 376 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <220>
<223> Синтетическая <400> 17
С1п С1и Азр С1и Азр С1у Азр Туг С1и С1и Ьеи Уа1 Ьеи А1а Ьеи Агд 15 10 15
Зег С1и С1и Азр С1у Ьеи А1а С1и А1а Рго С1и НЬз С1у ТЬг ТЬг А1а 20 25 30
ТЬг РЬе ΗΪ3 Агд Суз А1а Ьуз Азр Рго Тгр Агд Ьеи Рго С1у ТЬг Туг 35 40 45
Уа1 Уа1 Уа1 Ьеи Ьуз С1и С1и ТЬг Низ Ьеи Зег С1п Зег С1и Агд ТЬг 50 55 60
А1а Агд Агд Ьеи С1п А1а С1п А1а А1а Агд Агд С1у Туг Ьеи ТЬг Ьуз 65 70 75 80
11е Ьеи ΗΪ3 Уа1 РЬе ΗΪ3 С1у Ьеи Ьеи Рго С1у РЬе Ьеи Уа1 Ьуз МеЬ 85 90 95
- 26 024430
Зег СЬу Азр | Ьеи 100 | Ьеи | СЬи Ьеи АЬа Ьеи 105 | Ьуз | Ьеи | Рго НЬз | УаЬ 110 | Азр | Туг | ||||||
1Ье | СЬи | СЬи | Азр | Зег | Зег | УаЬ | РЬе | АЬа | СЬп | Зег | Не | Рго | Тгр | Азп | Ьеи |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
СЬи | Агд | 11е | ТЬг | Рго | Рго | Агд | Туг | Агд | АЬа | Азр | СЬи | Туг | СЬп | Рго | Рго |
ЬЗО | 135 | 140 | |||||||||||||
Азр | СЬу | СЬу | Зег | Ьеи | УаЬ | СЬи | УаЬ | Туг | Ьеи | Ьеи | Азр | ТЬг | Зег | Не | СЬп |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Зег | Азр | НЬз | Агд | СЬи | Пе | СЬи | СЬу | Агд | УаЬ | МеЬ | УаЬ | ТЬг | Азр | РЬе | СЬи |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Азп | УаЬ | Рго | СЬи | СЬи | Азр | СЬу | ТЬг | Агд | РЬе | НЬз | Агд | СЬп | АЬа | Зег | Ьуз |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Суз | Азр | Зег | НЬз | СЬу | ТЬг | НЬз | Ьеи | АЬа | СЬу | УаЬ | УаЬ | Зег | СЬу | Агд | Азр |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
АЬа | СЬу | УаЬ | АЬа | Ьуз | СЬу | АЬа | Зег | МеЬ | Агд | Зег | Ьеи | Агд | ЧаЬ | Ьеи | Азп |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Суз | СЬп | СЬу | Ьуз | СЬу | ТЬг | УаЬ | Зег | СЬу | ТЬг | Ьеи | 11е | СЬу | Ьеи | СЬи | РЬе |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
1Ье | Агд | Ьуз | Зег | СЬп | Ьеи | УаЬ | СЬп | Рго | УаЬ | СЬу | Рго | Ьеи | УаЬ | УаЬ | Ьеи |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Ьеи | Рго | Ьеи | АЬа | СЬу | СЬу | Туг | Зег | Агд | УаЬ | Ьеи | Азп | АЬа | АЬа | Суз | СЬп |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Агд | Ьеи | АЬа | Агд | АЬа | СЬу | УаЬ | УаЬ | Ьеи | УаЬ | ТЬг | АЬа | АЬа | СЬу | Азп | РЬе |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Агд | Азр | Азр | АЬа | Суз | Ьеи | Туг | Зег | Рго | АЬа | Зег | АЬа | Рго | СЬи | УаЬ | 11е |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
ТЬг | УаЬ | СЬу | АЬа | ТЬг | Азп | АЬа | СЬп | Азр | СЬп | Рго | УаЬ | ТЬг | Ьеи | СЬу | ТЬг |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Ьеи | СЬу | ТЬг | Азп | РЬе | СЬу | Агд | Суз | УаЬ | Азр | Ьеи | РЬе | АЬа | Рго | СЬу | СЬи |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Азр | Пе | Не | СЬу | АЬа | Зег | Зег | Азр | Суз | Зег | ТЬг | Суз | РЬе | УаЬ | Зег | СЬп |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Зег | СЬу | ТЬг | Зег | СЬп | АЬа | АЬа | АЬа | НЬз | УаЬ | АЬа | СЬу | Пе | АЬа | АЬа | МеЬ |
355 360 365
МеЬ Ьеи Зег АЬа СЬи Рго СЬи Ьеи 370 375
- 27 024430
Claims (9)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее вариабельную область тяжелой цепи (НСУК) и вариабельную область легкой цепи (ЬСУК), причем НСУК включает гипервариабельные участки (СИК) НСИК1, НСИК2 и НСИК3, а ЬСУК включает СИК ЬСИК1, ЬСИК2 и ЬСИК3, причем аминокислотная последовательность НСИК1 представляет собой 8Е0 ГО N0: 1, аминокислотная последовательность НСИК2 представляет собой 8Е0 ГО N0: 2, аминокислотная последовательность НСИКЗ представляет собой 8Е0 ГО N0: 3, аминокислотная последовательность ЬСИК1 представляет собой 8Е0 ГО N0: 4, аминокислотная последовательность ЬСИК2 представляет собой 8Е0 ГО N0: 5, а аминокислотная последовательность ЬСИК3 представляет собой 8Е0 ГО N0: 6, причем указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с РС8К9 человека.
- 2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, включающее вариабельную область тяжелой цепи (НСУК) и вариабельную область легкой цепи (ЬСУК), отличающийся тем, что аминокислотная последовательность НСУК представляет собой 8Е0 ГО N0: 7, а аминокислотная последовательность ЬСУК представляет собой 8Е0 ГО N0: 8.
- 3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.2, включающее две НСУК и две ЬСУК, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность каждой НСУК представляет собой 8Е0 ГО N0: 7, а аминокислотная последовательность каждой ЬСУК представляет собой 8Е0 ГО N0: 8.
- 4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, включающее тяжелую цепь (НС) и легкую цепь (ЬС), отличающийся тем, что аминокислотная последовательность НС представляет собой 8Е0 ГО N0: 9, а аминокислотная последовательность ЬС представляет собой 8Е0 ГО N0: 10.
- 5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.4, включающее две тяжелые цепи (НС) и две легкие цепи (ЬС), отличающийся тем, что аминокислотная последовательность каждой НС представляет собой 8Е0 ГО N0: 9, а аминокислотная последовательность каждой ЬС представляет собой 8ΙΤ) ГО N0: 10.
- 6. Антитело для лечения гиперлипидемии или гиперхолестеринемии, состоящее из двух тяжелых цепей и двух легких цепей, причем аминокислотная последовательность каждой тяжелой цепи представляет собой 8Е0 ГО N0: 9, а аминокислотная последовательность каждой легкой цепи представляет собой 8ΙΤ) ГО N0: 10.
- 7. Фармацевтическая композиция для лечения гиперлипидемии или гиперхолестеринемии, включающая антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1 и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.
- 8. Способ лечения гиперлипидемии или гиперхолестеринемии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества антитела или антигенсвязывающего фрагмента по п.1.
- 9. Способ лечения гиперлипидемии или гиперхолестеринемии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества антитела по п.6.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161535625P | 2011-09-16 | 2011-09-16 | |
PCT/US2012/054737 WO2013039958A1 (en) | 2011-09-16 | 2012-09-12 | Antibodies to pcsk9 and uses thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201490470A1 EA201490470A1 (ru) | 2014-06-30 |
EA024430B1 true EA024430B1 (ru) | 2016-09-30 |
Family
ID=46881177
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201490470A EA024430B1 (ru) | 2011-09-16 | 2012-09-12 | Антитела к pcsk9 и их применение |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8530414B2 (ru) |
EP (1) | EP2756003A1 (ru) |
JP (1) | JP6013487B2 (ru) |
KR (1) | KR101607783B1 (ru) |
CN (1) | CN103781802B (ru) |
AP (1) | AP2014007499A0 (ru) |
AR (1) | AR087715A1 (ru) |
AU (1) | AU2012308786B2 (ru) |
BR (1) | BR112014005799A2 (ru) |
CA (1) | CA2845706C (ru) |
CL (1) | CL2014000590A1 (ru) |
CO (1) | CO6910164A2 (ru) |
CR (1) | CR20140087A (ru) |
DO (1) | DOP2014000041A (ru) |
EA (1) | EA024430B1 (ru) |
EC (1) | ECSP14013242A (ru) |
GT (1) | GT201400049A (ru) |
IL (1) | IL231282A0 (ru) |
MA (1) | MA35433B1 (ru) |
MX (1) | MX347475B (ru) |
MY (1) | MY168961A (ru) |
PE (1) | PE20141147A1 (ru) |
SG (1) | SG2014014187A (ru) |
TN (1) | TN2014000094A1 (ru) |
TW (1) | TWI586687B (ru) |
UA (1) | UA114604C2 (ru) |
WO (1) | WO2013039958A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201401267B (ru) |
Families Citing this family (53)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JOP20080381B1 (ar) | 2007-08-23 | 2023-03-28 | Amgen Inc | بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9) |
JO3672B1 (ar) | 2008-12-15 | 2020-08-27 | Regeneron Pharma | أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9). |
US20130064834A1 (en) | 2008-12-15 | 2013-03-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to pcsk9 |
AR084938A1 (es) | 2011-01-28 | 2013-07-10 | Sanofi Sa | Anticuerpos humanos contra la proproteina convertasa subtilisina/kexina tipo 9 (anti pcsk9) para usar en metodos para tratar grupos de pacientes |
AR087305A1 (es) | 2011-07-28 | 2014-03-12 | Regeneron Pharma | Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit |
AU2012308797B2 (en) | 2011-09-16 | 2017-06-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing lipoprotein(a) levels by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PSCK9) |
US9255154B2 (en) | 2012-05-08 | 2016-02-09 | Alderbio Holdings, Llc | Anti-PCSK9 antibodies and use thereof |
US10058630B2 (en) * | 2012-10-22 | 2018-08-28 | Concievalve, Llc | Methods for inhibiting stenosis, obstruction, or calcification of a stented heart valve or bioprosthesis |
US10111953B2 (en) | 2013-05-30 | 2018-10-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9) |
EP2810955A1 (en) | 2013-06-07 | 2014-12-10 | Sanofi | Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9 |
EP2862877A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-22 | Sanofi | Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9 |
KR20160024906A (ko) | 2013-06-07 | 2016-03-07 | 사노피 바이오테크놀로지 | Pcsk9의 억제제를 투여함에 의한 죽상경화증의 억제 방법 |
WO2014209384A1 (en) | 2013-06-28 | 2014-12-31 | Amgen Inc. | Methods for treating homozygous familial hypercholesterolema |
EP3882273A1 (en) | 2013-11-12 | 2021-09-22 | Sanofi Biotechnology | Dosing regimens for use with pcsk9 inhibitors |
US9067998B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-30 | Kymab Limited | Targeting PD-1 variants for treatment of cancer |
US8980273B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-17 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
US8986694B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain |
US9034332B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-05-19 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US9017678B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-04-28 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
US9023359B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-05-05 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US8945560B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-02-03 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
US9045548B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision Medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US9045545B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer |
DE202014010499U1 (de) | 2013-12-17 | 2015-10-20 | Kymab Limited | Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung |
US9914769B2 (en) | 2014-07-15 | 2018-03-13 | Kymab Limited | Precision medicine for cholesterol treatment |
US8986691B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
US9051378B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-09 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US8992927B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-31 | Kymab Limited | Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain |
US8883157B1 (en) | 2013-12-17 | 2014-11-11 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
CN105085684B (zh) * | 2014-05-14 | 2020-04-17 | 上海亨臻实业有限公司 | Pcsk9靶向重组疫苗设计及其应用 |
US9139648B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-09-22 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain |
US9150660B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-10-06 | Kymab Limited | Precision Medicine by targeting human NAV1.8 variants for treatment of pain |
EP4328245A3 (en) | 2014-07-15 | 2024-06-05 | Kymab Ltd. | Antibodies for use in treating conditions related to specific pcsk9 variants in specific patients populations |
EP2975059A1 (en) | 2014-07-15 | 2016-01-20 | Kymab Limited | Antibodies for use in treating conditions related to specific pcsk9 variants in specific patients populations |
DE202015009007U1 (de) | 2014-07-15 | 2016-08-19 | Kymab Limited | Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung |
KR20170029613A (ko) | 2014-07-16 | 2017-03-15 | 사노피 바이오테크놀로지 | 이형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(heFH) 환자의 치료방법 |
WO2016023916A1 (en) | 2014-08-12 | 2016-02-18 | Kymab Limited | Treatment of disease using ligand binding to targets of interest |
WO2016071701A1 (en) | 2014-11-07 | 2016-05-12 | Kymab Limited | Treatment of disease using ligand binding to targets of interest |
EP3271405A1 (en) | 2015-03-20 | 2018-01-24 | Aarhus Universitet | Inhibitors of pcsk9 for treatment of lipoprotein metabolism disorders |
EP3337828A1 (en) | 2015-08-18 | 2018-06-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-pcsk9 inhibitory antibodies for treating patients with hyperlipidemia undergoing lipoprotein apheresis |
US11052175B2 (en) | 2015-08-19 | 2021-07-06 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Cartilage-derived implants and methods of making and using same |
CN106810609A (zh) * | 2015-11-27 | 2017-06-09 | 苏州君盟生物医药科技有限公司 | 抗pcsk9抗体及其应用 |
KR20180093068A (ko) * | 2015-12-31 | 2018-08-20 | 지앙수 헨그루이 메디슨 컴퍼니 리미티드 | Pcsk9 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 적용 |
WO2017118307A1 (zh) | 2016-01-05 | 2017-07-13 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | Pcsk9抗体、其抗原结合片段及其医药用途 |
US20200165354A1 (en) * | 2016-09-20 | 2020-05-28 | WuXi Biologics Ireland Limited | Novel Anti-PCSK9 Antibodies |
WO2018083248A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods |
JOP20190112A1 (ar) | 2016-11-14 | 2019-05-14 | Amgen Inc | علاجات مدمجة لتصلب الشرايين، شاملة مرض قلبي وعائي تصلبي |
CN108424457B (zh) * | 2017-02-13 | 2021-06-01 | 成都金洛克锶生物技术有限公司 | 针对pcsk9抗体与检测试剂盒的制备及其用途 |
MX2019012083A (es) | 2017-04-13 | 2019-11-21 | Cadila Healthcare Ltd | Nueva vacuna de peptidos contra la pcsk9. |
CN113574055B (zh) | 2019-01-18 | 2024-07-23 | 阿斯利康(瑞典)有限公司 | Pcsk9抑制剂及其使用方法 |
US20210002724A1 (en) | 2019-05-17 | 2021-01-07 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genome-Based Methods For Reducing Cardiovascular Risk |
CN114369164A (zh) * | 2020-10-15 | 2022-04-19 | 苏州君盟生物医药科技有限公司 | 抗pcsk9单克隆抗体的生产工艺 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100166768A1 (en) * | 2008-12-15 | 2010-07-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High Affinity Human Antibodies to PCSK9 |
WO2011053759A1 (en) * | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Ax1 and ax189 pcsk9 antagonists and variants |
WO2011072263A1 (en) * | 2009-12-11 | 2011-06-16 | Irm Llc | Pcsk9 antagonists |
WO2011111007A2 (en) * | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Rinat Neuroscience Corporation | ANTIBODIES WITH pH DEPENDENT ANTIGEN BINDING |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2388617A1 (en) | 1999-10-22 | 2001-05-03 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid molecules derived from rat brain and programmed cell death models |
WO2002014358A2 (en) | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Eli Lilly And Company | Novel secreted proteins and their uses |
US7572618B2 (en) | 2006-06-30 | 2009-08-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants |
EP2083860A4 (en) | 2006-11-07 | 2010-05-26 | Merck Sharp & Dohme | PCSK9 ANTAGONISTS |
JP5588175B2 (ja) | 2006-11-07 | 2014-09-10 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | Pcsk9のアンタゴニスト |
EP2083859A4 (en) | 2006-11-07 | 2010-11-24 | Merck Sharp & Dohme | ANTAGONISTS OF PCSK9 |
WO2008133647A2 (en) | 2006-11-07 | 2008-11-06 | Merck & Co., Inc. | Antagonists of pcsk9 |
CN101679527A (zh) | 2007-04-13 | 2010-03-24 | 诺瓦提斯公司 | 用于调节前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin9型(pcsk9)的分子和方法 |
JOP20080381B1 (ar) | 2007-08-23 | 2023-03-28 | Amgen Inc | بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9) |
JP2011501952A (ja) * | 2007-10-26 | 2011-01-20 | シェーリング コーポレイション | 脂質障害およびコレステロール障害を治療するための抗pcsk9および方法 |
AR070316A1 (es) | 2008-02-07 | 2010-03-31 | Merck & Co Inc | Antagonistas de pcsk9 (proproteina subtilisina-kexina tipo 9) |
AR070315A1 (es) * | 2008-02-07 | 2010-03-31 | Merck & Co Inc | Anticuerpos 1b20 antagonistas de pcsk9 |
WO2009131740A2 (en) | 2008-04-23 | 2009-10-29 | Amgen Inc. | Neutralizing proprotein convertase subtilisin kexin type 9 (pcsk9) variants and uses thereof |
TWI445716B (zh) | 2008-09-12 | 2014-07-21 | Rinat Neuroscience Corp | Pcsk9拮抗劑類 |
-
2012
- 2012-08-29 AR ARP120103190A patent/AR087715A1/es unknown
- 2012-08-31 TW TW101131954A patent/TWI586687B/zh not_active IP Right Cessation
- 2012-09-12 KR KR1020147006577A patent/KR101607783B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2012-09-12 UA UAA201401793A patent/UA114604C2/uk unknown
- 2012-09-12 MY MYPI2014700618A patent/MY168961A/en unknown
- 2012-09-12 EP EP12761863.5A patent/EP2756003A1/en not_active Withdrawn
- 2012-09-12 WO PCT/US2012/054737 patent/WO2013039958A1/en active Application Filing
- 2012-09-12 AU AU2012308786A patent/AU2012308786B2/en not_active Ceased
- 2012-09-12 MX MX2014003175A patent/MX347475B/es active IP Right Grant
- 2012-09-12 CA CA2845706A patent/CA2845706C/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-09-12 US US13/611,196 patent/US8530414B2/en active Active
- 2012-09-12 BR BR112014005799A patent/BR112014005799A2/pt active Search and Examination
- 2012-09-12 AP AP2014007499A patent/AP2014007499A0/xx unknown
- 2012-09-12 CN CN201280044580.3A patent/CN103781802B/zh active Active
- 2012-09-12 PE PE2014000352A patent/PE20141147A1/es not_active Application Discontinuation
- 2012-09-12 JP JP2014530744A patent/JP6013487B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-09-12 SG SG2014014187A patent/SG2014014187A/en unknown
- 2012-09-12 EA EA201490470A patent/EA024430B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2014
- 2014-02-19 ZA ZA2014/01267A patent/ZA201401267B/en unknown
- 2014-02-24 CR CR20140087A patent/CR20140087A/es unknown
- 2014-02-26 DO DO2014000041A patent/DOP2014000041A/es unknown
- 2014-03-03 IL IL231282A patent/IL231282A0/en unknown
- 2014-03-06 TN TNP2014000094A patent/TN2014000094A1/en unknown
- 2014-03-11 MA MA36818A patent/MA35433B1/fr unknown
- 2014-03-12 CL CL2014000590A patent/CL2014000590A1/es unknown
- 2014-03-13 GT GT201400049A patent/GT201400049A/es unknown
- 2014-03-13 EC ECSP14013242 patent/ECSP14013242A/es unknown
- 2014-03-14 CO CO14055604A patent/CO6910164A2/es active IP Right Grant
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100166768A1 (en) * | 2008-12-15 | 2010-07-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High Affinity Human Antibodies to PCSK9 |
WO2011053759A1 (en) * | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Ax1 and ax189 pcsk9 antagonists and variants |
WO2011072263A1 (en) * | 2009-12-11 | 2011-06-16 | Irm Llc | Pcsk9 antagonists |
WO2011111007A2 (en) * | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Rinat Neuroscience Corporation | ANTIBODIES WITH pH DEPENDENT ANTIGEN BINDING |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
CHAN JOYCE C Y ET AL: "A proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 neutralizing antibody reduces serum cholesterol in mice and nonhuman primates.", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES, NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES, US, vol. 106, no. 24, 16 June 2009 (2009-06-16), US, pages 9820 - 9825, XP002570200, ISSN: 0027-8424, DOI: 10.1073/pnas.0903849106 * |
YAN G. NI, STEFANIA DI MARCO, JON H. CONDRA, LAURENCE B. PETERSON, WEIRONG WANG, FUBAO WANG, SHILPA PANDIT, HOLLY A. HAMMOND, RAY : "A PCSK9-binding antibody that structurally mimics the EGF(A) domain of LDL-receptor reduces LDL cholesterol in vivo", JOURNAL OF LIPID RESEARCH, AMERICAN SOCIETY FOR BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, INC., US, vol. 52, no. 1, 1 January 2011 (2011-01-01), US, pages 78 - 86, XP002686538, ISSN: 0022-2275, DOI: 10.1194/jlr.m011445 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA024430B1 (ru) | Антитела к pcsk9 и их применение | |
JP7337864B2 (ja) | マトリプターゼ及びu‐プラスミノーゲン活性化因子の基質及び他の切断可能部分、並びにその使用方法 | |
KR102429747B1 (ko) | B 세포 성숙화 항원 결합 단백질 | |
JP2022104941A (ja) | ヒト化抗cd73抗体 | |
EA023406B1 (ru) | Антитела к гепцидину и варианты их применения | |
WO2004031238A2 (en) | Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics | |
EA025245B1 (ru) | Антитела против cd100 и способы их применения | |
EA026129B1 (ru) | АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ЧЕЛОВЕКА, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТСЯ С β-КЛОТО, РЕЦЕПТОРАМИ FGF И ИХ КОМПЛЕКСАМИ | |
UA120247C2 (uk) | Антитіло до ceacam5 і його застосування | |
US20220098260A1 (en) | BH4 Stabilized Peptides And Uses Thereof | |
TW201605904A (zh) | 治療凝血病變之新穎方法及抗體 | |
US20170158755A1 (en) | Anti-laminin4 antibodies specific for lg1-3 | |
JP7019600B2 (ja) | 加齢黄斑変性症治療用ペプチド | |
Noda et al. | Optimization of PTH/PTHrP Hybrid Peptides to Derive a Long Acting PTH Analog (LA PTH) | |
JP2024506940A (ja) | Tnf様リガンド1a(tl1a)に対するヒト化抗体を含む組成物及びその使用 | |
JP2022529156A (ja) | アクアポリン3(aqp3)の細胞外ドメインに特異的に結合する抗aqp3モノクローナル抗体及びその使用 | |
JP7303189B2 (ja) | 網膜色素変性症治療用ペプチド | |
JP2019534858A (ja) | Frizzledの選択的ペプチド阻害剤 | |
Foster et al. | A peptide-Fc opsonin with pan-amyloid reactivity | |
EP3082858B1 (en) | Adrenomedullin binder for use in therapy of cancer | |
US20060024314A1 (en) | Antibodies and cyclic peptides which bind CEA (carcinoembryonic antigens) and their use as cancer therapeutics | |
US20220227882A1 (en) | Anti-adam8 antibodies and uses of the same | |
US20220288219A1 (en) | Antigen-binding protein constructs and uses thereof | |
WO2012101125A1 (en) | Specific antibodies against human cxcl4 and uses thereof | |
La Manna et al. | Triple-negative breast cancer: new potential therapeutics derived from SOCS3 protein |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AZ BY KG TJ TM |
|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM KZ RU |