EA022757B1 - МОТИВЫ ХИМИЧЕСКИХ МОДИФИКАЦИЙ ДЛЯ ИНГИБИТОРОВ И МИМЕТИКОВ мкРНК - Google Patents

МОТИВЫ ХИМИЧЕСКИХ МОДИФИКАЦИЙ ДЛЯ ИНГИБИТОРОВ И МИМЕТИКОВ мкРНК Download PDF

Info

Publication number
EA022757B1
EA022757B1 EA201171493A EA201171493A EA022757B1 EA 022757 B1 EA022757 B1 EA 022757B1 EA 201171493 A EA201171493 A EA 201171493A EA 201171493 A EA201171493 A EA 201171493A EA 022757 B1 EA022757 B1 EA 022757B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
sixteen
ome
polynucleotide
μrna
polynucleotides
Prior art date
Application number
EA201171493A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201171493A1 (ru
Inventor
Кристина Ямада
Уилльям С. Маршалл
Original Assignee
Мираджен Терапьютикс
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Мираджен Терапьютикс filed Critical Мираджен Терапьютикс
Publication of EA201171493A1 publication Critical patent/EA201171493A1/ru
Publication of EA022757B1 publication Critical patent/EA022757B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/113—Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/317—Chemical structure of the backbone with an inverted bond, e.g. a cap structure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/332—Abasic residue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/344—Position-specific modifications, e.g. on every purine, at the 3'-end

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к полинуклеотидам с химическими характеристиками, обеспечивающими улучшенную стабильность, активность и/или токсичность в отношении их применения в качестве ингибиторов мкРНК или миметиков мкРНК. Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям и составам, содержащим полинуклеотиды, и к способам лечения пациентов с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК или мРНК.

Description

Настоящее изобретение относится к химическим мотивам ингибиторов и миметиков микроРНК (мкРНК или штК.), а конкретно к химически модифицированным смысловым и антисмысловым полинуклеотидам мкРНК, преимуществами которых являются активность, стабильность и/или токсичность при введении пациенту.
Предшествующий уровень техники
МикроРНК (шЖ.) участвуют в ряде биологических процессов, включая регуляцию и поддержание сердечной функции (см., СЫеи К..., Мо1еси1ат Мейюше: ΜκτοΚΝΑδ апй 1йе 1е11-1а1е НсаП. Ыа1иге 447, 389-390 (2007)). Таким образом, штК. представляют собой относительно новый класс терапевтических мишеней для таких состояний, как, наряду с другими, гипертрофия сердца, инфаркт миокарда, сердечная недостаточность, повреждение сосудов и патологический сердечный фиброз. штК. представляют собой небольшие, не кодирующие белок РНК, длиной приблизительно от 18 до приблизительно 25 нуклеотидов, действующие как репрессоры мРНК-мишеней, способствуя их разрушению, когда их последовательности полностью комплементарны, или посредством ингибирования трансляции, когда их последовательности содержат несоответствия. Зрелая цепь мкРНК, когда она связана со своей РНК-мишенью за счет комплементарности пар оснований, встроена в индуцируемый РНК-комплекс сайленсинга (К18С).
На функцию мкРНК можно воздействовать терапевтически с помощью антисмысловых полинуклеотидов или полинуклеотидов, которые имитируют функцию мкРНК (миметик мкРНК). Однако если полинуклеотиды вводят в интактные клетки, их атакуют и разрушают нуклеазы, что приводит к потере активности. Хотя в попытке избежать их разрушения получены аналоги полинуклеотидов, например, посредством замен в 2' положении (В. §ртоа! е! а1., ШсЮс Ас1Й8 КсзсатсН 17 (1989), 3373-3386), модификации часто влияют на активность полинуклеотида в отношении его планируемого биологического действия. Такая сниженная активность в каждом случае может быть результатом неспособности модифицированного полинуклеотида формировать стабильный дуплекс с РНК-мишенью и/или исчезновения взаимодействия с клеточным аппаратом.
Для эффективного воздействия на функцию мкРНК в терапевтическом смысле необходимы химические характеристики или мотивы для улучшенных характеристик стабильности, активности и/или токсичности ингибиторов мкРНК и миметиков мкРНК.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, содержащим химические характеристики, обеспечивающие улучшенную стабильность, активность и/или токсичность при использовании их в качестве ингибиторов мкРНК или миметиков мкРНК. Изобретение, кроме того, относится к фармацевтическим композициям и составам, содержащим полинуклеотиды, и к способам лечения пациентов с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК или мРНК.
В одном из аспектов изобретение относится к полинуклеотиду с одной или несколькими модификациями нуклеотидов в положениях 2' и по меньшей мере с одной концевой или кэпирующей модификацией. Мотив химических модификаций может устранить необходимость в целиком связанных фосфотиоатными связями полинуклеотидах и/или полноразмерных антисмысловых или смысловых последовательностях мкРНК. Полинуклеотид представляет собой ингибитор мкРНК или миметик мкРНК и, как продемонстрировано в настоящем документе, обеспечивает улучшенную активность по сравнению с немодифицированными полирибонуклеотидами и/или по сравнению с другими возможными модификациями полинуклеотидов.
Например, полинуклеотид может представлять собой ингибитор мкРНК или миметик мкРНК с одной или с комбинацией модификаций в положении 2', как описано в настоящем документе, таких как модификации, выбранные из О-алкила (например, О-метила или ОМе), галогена (например, фтора), дезокси (Н) и закрытой нуклеиновой кислоты, а в некоторых вариантах осуществления, по существу, все или все положения 2' нуклеотидов модифицированы. В некоторых вариантах осуществления концевая или кэпирующая модификация может представлять собой 5' и/или 3' фосфотиоатный монофосфат, и/или группу без основания, или другую кэпирующую структуру, как описано в настоящем документе. Полинуклеотид не обязательно должен быть полностью связан фосфотиоатными связями, но там, где такие связи присутствуют, такие связи можно создавать, например, между двумя концевыми нуклеотидами на 5'-конце и двумя концевыми нуклеотидами на 3'-конце. Нуклеотидная последовательность может быть полноразмерной по отношению к зрелой мкРНК или полноразмерной антисмысловой мкРНК (зрелая форма), но в некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит укороченную последовательность мкРНК или укороченную антисмысловую последовательность мкРНК. Такие модифицированные укороченные последовательности могут демонстрировать высокие уровни активности даже при сравнении с более длинными (немодифицированными или модифицированными обычным способом) аналогами. Полинуклеотид может представлять собой антагомир с антисмысловой последовательностью, комплементарной (всем или частям) штК.-15Ъ, штК.-21, штК.-208а или другим, как описано в настоящем
- 1 022757 документе.
Во втором аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции или составу, содержащим полинуклеотид по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтическую композицию можно получить в виде фармацевтически приемлемых форм, включая коллоидную дисперсную систему, макромолекулярный комплекс, нанокапсулу, микросферу, гранулу, эмульсию маслов-воде, мицеллу, смешанную мицеллу или липосому. Композиция может содержать конъюгаты с холестерином и другими молекулами, такими как направленные лиганды, для доставки полинуклеотида в клетки-мишени млекопитающих.
В третьем аспекте изобретение относится к способу лечения пациента с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК или мРНК.
Например, состояние может представлять собой одно или несколько из гипертрофии сердца, инфаркта миокарда, сердечной недостаточности, повреждения сосудов и патологического сердечного фиброза. Такие состояния подвергают лечению, предотвращают или облегчают посредством введения полинуклеотидов и композиций по изобретению. Таким образом, изобретение относится к применению модифицированных полинуклеотидов и композиций по изобретению для лечения состояний, связанных с экспрессией мкРНК или мРНК.
Описание чертежей
Фиг. 1 представляет собой таблицу, в которой приведены характерные параметры модификаций мкРНК. Представленная последовательность представляет собой антисмысловую последовательность (полноразмерную и укороченную) зрелой Ш1Р-15Ь. Описание сокращений предоставлено в табл. 3. Условное обозначение для каждой иллюстративной РНК включает:мкРНК-мишень (например, 15В); структуру в 2' (О-метил, ОМе; или О-метил и фтор, Ме/Р; или О-метил и дезокси, Ме/Н; или закрытая нуклеиновая кислота, ЗНК); размер полинуклеотида (РЬ для полноразмерного или 16-членного олигонуклеотида) и структуру на конце или внутренние связи, включая РО для связанных фосфодиэфиром, Р8 для связанных фосфотиоатом, Р8_ЕО для связанных фосфотиоатом поочередно, Р8_ЕС для фосфотиоатного концевого кэпа, структуру без основания и РО8 для 5' и 3' фосфотиоатного монофосфата.
На фиг. 2 представлены результаты тестов ш νίίτο для модифицированных полинуклеотидов на фиг. 1 в клетках НеЬа при двух концентрациях, 10 нМ (левый столбец в каждом наборе) и 0,1 нМ (правый столбец в каждом наборе), с использованием анализа с двумя люциферазами. Чем больше значение отношения люцифераз, тем лучше активность ингибитора. Результаты сгруппированы по длине 16членных и полноразмерных олигонуклеотидов. Химические соединения с наилучшей эффективностью представлены в табл. 4.
На фиг. 3 представлены результаты для модифицированных фосфотиоатным монофосфатом полинуклеотидов при прямом сравнении с фосфодиэфирным или фосфотиоатным каркасом при 10 нМ (левый столбец в наборе) и 0,1 нМ (правый столбец в наборе) в анализе с двумя люциферазами. РО связаны фосфодиэфиром, Р8 связаны фосфотиоатом и РО_РО8 связаны фосфодиэфиром с концевым фосфотиоатным монофосфатом на 3'- и 5'-концах.
На фиг. 4 представлен нокаут Ш1Р-15Ь у мышей с полинуклеотидами 5-14 из табл. 5. Определяли избыток Ш1Р-15Ь в печени (левый столбец в наборе) и сердце (правый столбец в наборе) и данные сравнивали с данными мышей с инъекцией физиологического раствора.
На фиг. 5 представлено ингибирование т1Р-208а модифицированными антисмысловыми полинуклеотидами в кардиомиоцитах неонатальных крыс. Результаты на фиг. 5 представляют собой количественную ПЦР для экспрессии вМНС. В левом столбце представлены результаты при 100 нМ ингибитора, а в правом столбце представлены результаты при 1 нМ ингибитора.
На фиг. 6 представлено ингибирование Ш1Р-21 антисмысловыми полинуклеотидами с различными модификациями в анализе с двумя люциферазами.
На фиг. 7 представлено распределение четырех различных модифицированных антисмысловых полинуклеотидов Ш1Р-15Ь в ткани ίη νίνο после инъекции мышам в указанных дозах.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, содержащим химические характеристики, обеспечивающие улучшенную стабильность, активность и/или токсичность в отношении их применения в качестве ингибиторов мкРНК или миметиков мкРНК. Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям и составам, содержащим полинуклеотиды, и к способам лечения пациентов с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК или мРНК.
Модифицированные полинуклеотиды.
Полинуклеотид содержит одну или несколько модификаций нуклеотидов в положениях 2' и по меньшей мере одну концевую модификацию или кэп, как подробнее описано ниже. Полинуклеотид представляет собой ингибитор мкРНК или миметик мкРНК и демонстрирует улучшенную активность по сравнению с немодифицированными полирибонуклеотидами и/или по сравнению с другими возможными модификациями полинуклеотидов.
Как используется в настоящем документе, ингибитор мкРНК представляет собой полинуклеотид с последовательностью, которая является антисмысловой, комплементарной или частично комплементар- 2 022757 ной, как описано в настоящем документе, зрелой одноцепочечной мкРНК или ее части. Миметик мкРНК представляет собой полинуклеотид с последовательностью, соответствующей (идентичной или, по существу, идентичной, как описано в настоящем документе) зрелой одноцепочечной мкРНК или ее части.
Полинуклеотид содержит одну или несколько модификаций нуклеотидов (в отношении 2'гидроксила) в положениях 2'. Введение модифицированных в положении 2' нуклеотидов в антисмысловые олигонуклеотиды, например, может увеличить устойчивость олигонуклеотидов к нуклеазам и их термостабильность с комплементарной РНК. Различные модификации в положениях 2' могут быть независимо выбраны из модификаций, обеспечивающих повышенную чувствительность к нуклеазам, без опасности для молекулярных взаимодействий с РНК-мишенью или с клеточным аппаратом. Такие модификации можно выбирать на основании их повышенной активности ш νίίτο или ш νίνο. В настоящем документе описаны характерные способы определения увеличенной активности (например, 1С50) ингибирования мкРНК.
В некоторых вариантах осуществления модификацию в положении 2' можно независимо выбирать из О-алкила (который может являться замещенным), галогена, дезокси (Н) и закрытой нуклеиновой кислоты. В определенных вариантах осуществления, по существу, все или все положения 2' нуклеотидов модифицированы, например, в виде независимо выбранных из О-алкила (например, О-метила), галогена (например, фтора), дезокси (Н) и закрытой нуклеиновой кислоты. Например, каждую из модификаций в положении 2' можно независимо выбрать из О-метила и фтора. В характерных вариантах осуществления каждый из пуриновых нуклеотидов содержит 2'-ОМе, а каждый из пиримидиновых нуклеотидов содержит 2'-Р. В определенных вариантах осуществления от одного до приблизительно пяти положений 2' или приблизительно от одного до приблизительно трех положений 2' оставлены немодифицированными (например, в виде 2'-гидроксилов).
Модификации в положении 2' по изобретению также включают небольшие углеводородные заместители. Углеводородные заместители включают алкил, алкенил, алкинил и алкоксиалкил, где алкил (включая алкильную часть алкокси), алкенил и алкинил могут быть замещенными или незамещенными. Алкил, алкенил и алкинил могут представлять собой алкил, алкенил или алкинил от С1 до С10, такими как С2 или СЗ. Углеводородные заместители могут содержать один, или два, или три неуглеродных атома, которые можно независимо выбирать из Ν, О и/или 8. Модификации в положении 2' могут дополнительно включать алкил, алкенил и алкинил в виде О-алкила, О-алкенила и О-алкинила.
Характерные модификации в положении 2' по изобретению включают замены на 2'-О-алкил (С1-З алкил, такой как 2'-ОМе или 2'-ΟΕΐ), 2'-О-метоксиэтил (2'-О-МОЕ), 2'-О-аминопропил (2'-О-АР), 2'-Одиметиламиноэтил (2'-О-ЭМАОЕ), 2'-О-диметиламинопропил (2'-О-ЭМАР), 2'-О-диметиламиноэтилоксиэтил (2'-О-ЭМАЕОЕ) или 2'-О-Л-метилацетамидо (2'Ό-ΝΜΑ).
Модификация в положении 2' может представлять собой ОМе во всех остатках нуклеотидов или во всех пуриновых нуклеотидах.
В определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит по меньшей мере одну модификацию 2'-галогеном (например, вместо 2'-гидроксила), такую как 2'-фтор, 2'-хлор, 2'-бром и 2'-йод. В некоторых вариантах осуществления модификация 2'-галогеном представляет собой фтор. Полинуклеотид может содержать от 1 до приблизительно 20 модификаций 2'-галогеном (например, фтором), или от 1 до приблизительно 10, или от 1 до приблизительно 5 модификаций 2'-галогеном (например, фтором). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит все нуклеотиды с 2'-фтором или 2'-фтор на всех пиримидиновых нуклеотидах. В определенных вариантах осуществления группы 2'-фтор являются независимо ди-, три- или неметилированными.
Полинуклеотид может содержать одну или несколько модификаций 2'-дезокси (например, Н для 2'гидроксила), но может содержать от 1 до приблизительно 20 модификаций 2'-дезокси, или от 1 до приблизительно 10, или от 1 до приблизительно 5 модификаций 2'-дезокси. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит все нуклеотиды с 2'-дезокси.
В определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько конформационно заторможенных модификаций нуклеозидом с бициклическим сахаром (Β8Ν), которые придают увеличенную термостабильность комплексам, сформированным полинуклеотидом, содержащим Β8Ν, и комплементарной ему цепью микроРНК-мишени. Например, в одном из вариантов осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько остатков закрытых нуклеиновых кислот (ΕΝΑ). ΕΝΑ описаны, например, в патентах США 6268490, 6316198, 6403566, 6770748, 6998484, 6670461 и 7034133, которые, таким образом, все в полном объеме включены в качестве ссылки. Закрытые нуклеиновые кислоты (ΕΝΑ) представляют собой модифицированные нуклеотиды или рибонуклеотиды, содержащие дополнительный мостик между 2' и 4' атомами углерода в группе сахара рибозы, что приводит к закрытой конформации. В одном из вариантов осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько ΕΝΑ со структурой, представленной в структуре А. В другом варианте осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько ΕΝΑ со структурой, представленной в структуре В. В еще одном варианте осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько ΕΝΑ со структурой, представленной в структуре С.
- 3 022757
С
Другие подходящие модификации Β8Ν. которые можно использовать в полинуклеотидах по изобретению, включают модификации, описанные в патентах США 6403566 и 6833361, которые оба полностью включены в настоящий документ в качестве ссылки. В определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит приблизительно от 1 до приблизительно 10 закрытых нуклеиновых кислот или от 2 до приблизительно 5 закрытых нуклеиновых кислот.
В характерных вариантах осуществления полинуклеотид содержит положения 2', модифицированные в виде 2'-ОМе. Альтернативно, в положении 2' в виде 2'-ОМе модифицированы пуриновые нуклеотиды, при этом пиримидиновые нуклеотиды модифицированы в положении 2' в виде 2'-фтора.
Полинуклеотид дополнительно содержит по меньшей мере одну концевую модификацию или кэп. Кэп может представлять собой 5'- и/или 3'-кэпирующую структуру. Термины кэп или концевой кэп включают химические модификации по любому концу полинуклеотида (в отношении рибонуклеотидов с концами) и включают модификации по связи между двумя последними нуклеотидами на 5'-конце и двумя последними нуклеотидами на 3'-конце. Как описано в настоящем документе, кэпирующая структура повышает устойчивость олигонуклеотида к экзонуклеазам без опасности для молекулярных взаимодействий с РНК-мишенью или клеточным аппаратом. Такие модификации можно выбирать на основании их увеличенной активности ιη νίίτο или ш νίνο. В настоящем документе описаны характерные способы определения увеличенной активности (например, 1С50) ингибирования мкРНК.
Кэп может находиться на 5'-конце (5'-кэп), или на 3'-конце (3'-кэп), или может присутствовать на обоих концах. В определенных вариантах осуществления 5'- и/или 3'-кэп независимо выбран из фосфотиоатного монофосфата, остатка (группы) без основания, фосфотиоатной связи, 4'-тионуклеотида, карбоциклического нуклеотида, фосфодитиоатной связи, инвертированного нуклеотида или инвертированной группы без основания (2'-3' или 3'-3'), фосфодитиоатного монофосфата и метилфосфонатной группы. Фосфотиоатная или фосфодитиоатная связь(и), когда они являются частью кэпирующей структуры, в основном, находятся между двумя концевыми нуклеотидами на 5'-конце и двумя концевыми нуклеотидами на 3'-конце.
В определенных вариантах осуществления полинуклеотид кроме одной или нескольких модификаций в положении 2', как описано выше, содержит по меньшей мере один концевой фосфотиоатный монофосфат. Фосфотиоатный монофосфат может способствовать более высокой активности ингибиторов мкРНК и миметиков мкРНК, ингибируя действие экзонуклеаз, а в некоторых вариантах осуществления устраняет необходимость в полностью связанных фосфотиоатом полинуклеотидов и/или полноразмерных ингибиторов. Фосфотиоатный монофосфат может находиться на 5'- и/или 3'-конце олигонуклеотида. Фосфотиоатный монофосфат определен приведенными ниже структурами, где В представляет собой основание, а Р представляет собой модификацию в положении 2', как описано выше
- 4 022757
В определенных вариантах осуществления в дополнение к фосфотиоатному монофосфату на 5'и/или З'-конце полинуклеотид содержит все положения 2', модифицированные в виде 2'-ОМе, или, альтернативно, пуриновые нуклеотиды в положении 2' модифицированы в виде 2'-ОМе, при этом пиримидиновые нуклеотиды в положении 2' модифицированы в виде 2'-фтор. Как продемонстрировано в настоящем документе для ингибиторов ппР-15Ь. полинуклеотид в этих вариантах осуществления не обязательно должен быть полностью связан фосфотиоатными связями и/или не обязательно должен быть полноразмерным (относительно соответствующей зрелой последовательности мкРНК). Фосфотиоатные связи могут присутствовать в некоторых вариантах осуществления, например, между последними двумя нуклеотидами на 5'- и/или З'-конце (например, в качестве части кэпирующей структуры) или как чередующиеся с фосфодиэфирными связями.
В этих или других вариантах осуществления полинуклеотид на одном из 5'- и З'-концов или на обоих 5'- и З'-концах может содержать по меньшей мере один концевой остаток без основания. Группа без основания не содержит общеизвестных пуриновых или пиримидиновых оснований нуклеотидов, таких как аденозин, гуанин, цитозин, урацил или тимин. Таким образом, в таких группах без основания отсутствует основание нуклеотида, или они содержат в 1' положении другие, не являющиеся основанием нуклеотида, группы. Например, нуклеотид без основания может представлять собой обращенный нуклеотид без основания, например, когда обращенный фосфоамидит без основания связан с 5'-амидитом (вместо З'-амидита), что приводит к фосфатной связи 5'-5'. Структура обращенного нуклеозида без основания для 5'- и З'-конца полинуклеотида представлена ниже. Полинуклеотиды с такими кэпирующими структурами без оснований с модификациями 2'-ОМе могут быть особенно эффективными, как показано в настоящем документе для шгК-21 (фиг. 6)
Фосфотиоатные связи используют для того, чтобы сделать полинуклеотиды более устойчивыми к расщеплению нуклеазами. Хотя параметры химических модификаций, описываемые в настоящем документе, могут включать фосфотиоатные связи (включая их в виде кэпирующей структуры, как описано), в определенных вариантах осуществления внутренние фосфотиоатные связи оказываются необязательными вследствие описанных 2'-модификации и кэпирующей модификации. Однако в определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько внутренних фосфотиоатных связей (отличных от связей в кэпе). Например, полинуклеотид может быть частично связанным фосфотиоатными связями, например, фосфотиоатные связи могут чередоваться с фосфодиэфирными связями.
Полинуклеотид может содержать полноразмерную или укороченную последовательность мкРНК или полноразмерную или укороченную антисмысловую последовательность мкРНК, по существу, состоять из или состоять из них. Как используется в настоящем документе, термин полноразмерная по отношению к последовательности мкРНК относится к длине зрелой последовательности мкРНК или ее антисмысловой копии. Таким образом, ингибиторы и миметики, описываемые в настоящем документе, могут представлять собой укороченные или полноразмерные (смысловые или антисмысловые) зрелые последовательности мкРНК или могут содержать эти последовательности в комбинации с другими полинуклеотидными последовательностями. Например, ингибиторы и миметики в некоторых вариантах осуществления могут соответствовать последовательностям пре-мкРНК и при-мкРНК или их частям или могут содержать другие последовательности, не являющиеся мкРНК. В определенных вариантах осуществления мотив химических модификаций, описываемый в настоящем документе, делает полноразмерные антисмысловые или смысловые (зрелые) последовательности мкРНК необязательными.
Длина полинуклеотида в определенных вариантах осуществления составляет от 5 до 25 нуклеоти- 5 022757 дов, от 8 до 18 нуклеотидов или от 12 до 16 нуклеотидов. В определенных вариантах осуществления длина полинуклеотида составляет приблизительно 8 нуклеотидов или менее, приблизительно 10 нуклеотидов или менее, приблизительно 12 нуклеотидов или менее или приблизительно 16 нуклеотидов или менее. В некоторых вариантах осуществления длина полинуклеотида составляет приблизительно 16 нуклеотидов.
Полинуклеотид может содержать нуклеотидную последовательность, сконструированную для имитации зрелой мкРНК, такой как зрелые мкРНК, приведенные в табл. 1 ниже, или нацеливания на нее. Полинуклеотид в этих или других вариантах осуществления также может быть направлен или альтернативно его можно сконструировать так, чтобы он был направлен на формы пре-мкРНК или при-мкРНК. В определенных вариантах осуществления последовательность полинуклеотида, сконструированного для ингибирования мкРНК, может содержать от 1 до 5 (например, 2, 3, или 4) несоответствий относительно полностью комплементарной последовательности мкРНК (представленной в табл. 1 ниже). В определенных вариантах осуществления последовательность полинуклеотида, сконструированного для имитации мкРНК, может содержать от 1 до 5 (например, 2, 3, или 4) замен нуклеотидов относительно зрелой последовательности мкРНК (представленной в табл. 1 ниже). Такие антисмысловые и смысловые последовательности можно вводить, например, в кшРНК или другие структуры РНК, содержащие стеблевые и петлевые участки. Такие последовательности, в частности, можно использовать для имитации функции мкРНК или воздействия на нее для лечения или облегчения, наряду с другими, гипертрофии сердца, инфаркта миокарда, сердечной недостаточности (например, застойной сердечной недостаточности), повреждения сосудов и/или патологического сердечного фиброза. Характерные виды терапевтической применимости мкРНК описаны в ссылках на патенты И8 и РСТ, приведенных в табл. 1 ниже, каждая из которых, таким образом, в полном объеме включена в качестве ссылки. Зрелые и препроцессированные формы мкРНК описаны в ссылках на патенты, приведенных ниже, и такие описания, таким образом, также включены в качестве ссылки.
Таблица 1
мкРНК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ мкРНК Ссылка
1 иаоААиоиАААОААаиАшиАи ИО 2009/012468
100 ААСссеиАЗАисссААсииеие ИО 2009/012468
10Ь иАсссисиАсзААСссААииисио ИО 2009/012468
125Ь исссисАОАСссидАсиисисА ИО 2009/012468
128 исАСАаиоААСсаоисисиио НО 2007/070483
133а иоиаоиссссиисААССАасие ИО 2009/012468
133Ь ииоасиссссоисААССАосоА ИО 2009/012468
139 исилсАоиосАсеисисиссАс ИО 2009/012468
143 исАСАисААЗСАсисилосос ИО 2007/070483
145 аиссАсишисссАООААиссси ИО 2007/070483
150 осисссААСссиисиАССАсие ИО 2009/012468
15а иА^сАосАСАиААиеаииисис НО 2009/062169
15Ь иАссАССАСАисАиссиииАСА ИО 2009/062169
16 иАосАосАсзиАААЦАшаесе ИО 2009/062169
181Ь ААСАиисАииасиаисаоиеееи ИО 2009/012468
195 ОАССАОСАСАСАААиАииССС НО 2009/012468
197 иисАссАссиисиссАсссАас ИО 2009/012468
- 6 022757
199а сссАоиошсАйАсиАссисиис ИО 2009/012468
199Ь т!й-199Ь-5р сссАоиоишАОАсиАисизиис таз.К-199Ъ-Зр АСАоиАсиеиесАСАипооциА ИЗ 61/047,005
206 ишААисиААесААаисисиаа ИО 2007/070483
208а АиААСАСОАССАААААССииаи ИО 2008/016924
208Ь АиААОАСОААСААААССиииОО ИО 2009/018492
20а ЦАААсиасшАиАсиссАооиАб ИЗ 60/950,565
21 иАСсиилисАСАсисАисиисА НО 2009/058818
214 АСАССАСССАСАСАСАСССАОи ЦЗ 61/047,005
22 ААйсоессАсиисйАСААсиаи ИО 2009/012468
221 АесиАСАииеисиссисссишс ИО 2009/012468
222 АСсидсАисисссиАсиаааи ИО 2009/012468
224 СААсисАсиАсиазшсссии ИО 2009/012468
23а АисАСАииессАоеоАииасс ИО 2009/012468
26а иисААоилАиссАосАидссси ИО 2007/070483
26Ь иосААоиААШСАесзАиАЗни ИО 2009/012468
28 ААеоАосисАСАоисиАиисАС ИО 2009/012468
2 9а иАасАсСАисибАААисеоииА ИО 2009/018493
2 9Ь иАасАССАииисАААисАаисии ИО 2009/018493
29с иАасАССАиииеАААисааииА ИО 2009/018493
30а исиАААСАиссисоАсиасААСз РСТ/Ц32010/031147
ЗОЬ исиАААСАиссиАСАсисАсси РСТ/Ц32010/031147
30с иоиАААСАиссоАСАсисисАос ИО 2009/012468
зоа исиАААСАисссссАсиааААа РСТ/Ц32010/031147
ЗОе иоцАААСАиссииоАсиааААа РСТ/и32010/031147
342-3р исисАСАСАСАААисасАсссси ИО 2009/012468
382 адАбииоиисаиазиеоАииса ИО 2009/012468
422а АСиСОАСШАОСйиСАСААСЗОС иЗ 2009/0226375
373 АсиссАсииссАсисАОААаа ИО 2009/012468
424 САосАССААиисдисиииисзАА ИО 2009/062169
483-3р исАсиссисиссиссссисии ИО 2009/012468
484 исАсесисАсиссссиссссАи ИО 2009/012468
48б-5р иссисиАсиоАссиссссссАе НО 2009/012468
497 САесАесАСАсиаиаоиииеи ИО 2009/062169
499 ииААСАсииасАсисАисиии НО 2009/018492
542-5р исееееАисАисАиаисАСОАел ИО 2009/012468
92а иАииссАсиисисссосссиси НО 2009/012468
92Ь иАииесАсиссисссаассисс НО 2009/012468
1еЕ-7а иоАееиАаиАсоииоиАиАсии НО 2009/012468
1еЬ-7Ь исАссиАоиАзсиисисисаии ИО 2009/012468
1еЕ-7с исАсзсиАаилссшсиАиссии ИО 2009/012468
1еЕ-7а АеАееиАСидсеииосАиАеии ИО 2009/012468
1ее-7е исАосиАскАсеииаиАиАоии ИО 2009/012468
1еС-7£ иеАсеиАсиАСАииаиАиАеии ИО 2009/012468
1еС-7д исАосиАсиАсициаидсАсии НО 2009/012468
451 АААсеоиЦАССАциАсоаАОии РСТ/и32010/034227
В определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит антисмысловую последовательность, полностью или частично комплементарную (как описано) всей или части при-, пре- или зрелой Ш1К-15Ь, щ1К-208а или μιΚ-21.
11иВ-15Ь. включая ее структуру и процессинг и ее потенциал для лечения (наряду с другими) гипертрофии сердца, сердечной недостаточности или инфаркта миокарда, описаны в \УО 2009/062169, таким
- 7 022757 образом, в полном объеме включенной в качестве ссылки. Последовательность пре-мкРНК пиВ-15Ь человека, которую можно использовать для конструирования ингибирующей мкРНК по изобретению, представляет собой (от 5' к 3'):
ииолооссии АААоиАсиои аосаосасаи САиооиииАС АиесиАСАои сааоаиосоа АисАииАиии осиосисиАО АААиииААОо АААиисАи.
штк-208а, включая ее структуру и процессинг и ее потенциал для лечения (наряду с другими) гипертрофии сердца, сердечной недостаточности или инфаркта миокарда, описаны в νθ 2009/018492, таким образом, в полном объеме включенной в качестве ссылки. Последовательность пре-мкРНК штк-208а человека, которую можно использовать для конструирования ингибирующей мкРНК по изобретению, представляет собой (от 5' к 3'):
асооосоаос ииииоосссо ооииАиАсси оаиосисасо иаиааоасоа осаааааоси тоииооисАО а.
штК-21, включая ее структуру и процессинг и ее потенциал для лечения (наряду с другими) гипертрофии сердца, сердечной недостаточности или инфаркта миокарда, описаны в νθ 2009/058818, таким образом, в полном объеме включенной в качестве ссылки. Последовательность пре-мкРНК штк-21 человека, которую можно использовать для конструирования ингибирующей мкРНК по изобретению, представляет собой (от 5' к 3'):
иоисоооиАО сииАисАОАс иоАиоииоАс иоииоААиси саиоосааса ссаоисоаио оосиоисиоА са.
Если мкРНК-мишень представляет собой штК-15Ъ, щ1К-208а или ш1К-21, то полинуклеотид может везде содержать 2'-ОМе или 2'-ОМе и 2'-Р, как описано, и может содержать фосфотиоатные монофосфатные кэпы на 5'- и З'-концах, и/или остатки без оснований на 5'- и/или З'-концах, и/или котированные фосфотиоатными связями концы. Полинуклеотид может быть частично связан фосфотиоатными связями или быть полностью связанным фосфодиэфирными связями, отличными от необязательного наличия фосфотиоатных концевых кэпов. Антисмысловой полинуклеотид может быть полностью комплементарным укороченной зрелой последовательности мкРНК, такой как приблизительно 8, приблизительно 10, приблизительно 12, приблизительно 14, приблизительно 15, приблизительно 16, приблизительно 17 или приблизительно 18 нуклеотидов в длину (например, приблизительно от 14 до приблизительно 18 нуклеотидов в длину). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит полноразмерную антисмысловую последовательность (относительно зрелой мкРНК) или состоит из (или, по существу, состоит) нее. В этом контексте термин по существу состоит из означает, что на 5'-конце и/или З'-конце можно добавлять дополнительные нуклеотиды, так как от 1 до 3 нуклеотидов на каждом конце, при условии, что не будет затронута активность и/или специфичность полинуклеотида в отношении его мишени.
Последовательность/структуру полинуклеотида можно выбирать из фиг. 1 или табл. 2 ниже. Сокращения приведены в табл. 3.
Таблица 2
МкРНК- ыишень Условное обозначение Последовательность (στ 5' и З1) Длина '
15Ь 15Ь_ОМе_16_РОЗ рЗ’тАтСтСтАгпитбтАтитвтитОтпСп^тСгпСтО-рз 16 ί [
15Ь 15Ь_Ме/Г„'6.РОЗ П$-1пА(С1СгтА1ит6птАЮгЧЭ1ит6ГСЮлЮЮ!и ра 16
15Ь 15Ь_ОМе„РЬ_РОЗ титвтиглАтАгпАФСтСгт|Аптигп(^Г1Агпигп0гпигТ{СгГ1Сгпигп6гпСп1 ипА-р$ 22 ! ΐ
15Ь 15Ь_Ме/Р_РЕ_рОЗ р8-{0ппС!0р'Л1'^тА(С(Сг>А10тСтАЩп'СЮтО(СЮтС(С1ОтА-р8 22
208 208а ОМе 16 РО 5 рв-тСти тититЦгп ОтОтСтитСтетОтСт От ОтА-ра 16
203 208а Ме/Р 16 РО 3 рз-юажящцплвбгсаястелясаяитА-рз 16
208 208а ОМе РЕ РО 3 р5- тАтСт АтАтбтСтОтОтОтО тИтОтСт итСтОтОтСтОти по АтЦ-ра 22
208 208а ΜβΨ РЕ РО 3 рв-тА1СтАтАтСгаиШОиЮт6О0ГСтС1ШСГи(иг1пА1и-р8 22
21 21 ОМе 16 РОЗ рв-тАт ОтСтАтСтО т СтОтйт АтОтАт АтбтСти-рв -6
21 21_Ме/Р_16_РОЗ ра-тАОЛСтАтОДЛСЮтОтАШ тАтАггОГСЮ-рв 16 '
21 21_ОМе_Р!__РОЗ рв- титСтАп^^СтАтитСгпАгпОтитСтитСтЛпитАтАтСп'Ст ОтА-рз 22
21 2ЦМе/Р„РЬ_РО5 р5*тР1СтАтА1СтАтГГСтАтвтНСтРтЗппАгпРпАпАтОГСтРтлА» 22
Синтез полинуклеотидов, включая модифицированные полинуклеотиды посредством твердофазно- 8 022757 го синтеза, хорошо известен и рассмотрен в №\у СЬеш1еа1 ΜεΐΗοάδ ίοτ §νη11ΐ05ίζίη§ Ро1упис1еоййе8. Сати1йет8 М.Н., Веаисаде §.Ь., ЕГсауйсН IV., ΡίδΗετ Е.Р., МаИсисс! Μ.Ό., §1аЪш8ку Υ. ШсЮс Лс1Й8 8ушр. §ет. 1980; (7):215-23.
Композиции, составы и доставка.
Полинуклеотид можно вводить в ряд макромолекулярных агрегатов или композиций. Такие комплексы для доставки могут включать разнообразные липосомы, наночастицы и мицеллы, сформулированные для доставки пациенту. Комплексы могут включать одну или несколько фузогенных или липофильных молекул для инициации проникновения через клеточную мембрану. Такие молекулы описаны, например, в патентах США 7404969 и 7202227, которые, таким образом, включены в качестве ссылки в полном объеме.
В композиции или составе можно использовать множество терапевтических полинуклеотидов, каждый независимо, как описано в настоящем документе. Например, в композиции или составе можно использовать от 1 до 5 ингибиторов мкРНК и/или миметиков мкРНК, каждый независимо, как указано выше, например, на основании табл. 1, 2 и фиг. 1.
Полинуклеотиды по изобретению могут быть включены в состав различных фармацевтических композиций. Фармацевтические композиции следует получать в форме, подходящей для назначенного применения. Как правило, это включает получение композиций, которые, по существу, не содержат пирогенов, а также других примесей, которые опасны для людей или животных. Характерные системы для доставки/составления включают коллоидные дисперсные системы, макромолекулярные комплексы, нанокапсулы, микросферы, гранулы и основанные на липидах системы, включая эмульсии масло-в-воде, мицеллы, смешанные мицеллы и липосомы. Коммерчески доступные жировые эмульсии, подходящие для доставки нуклеиновых кислот по изобретению в ткани сердечной и скелетных мышц, включают интралипид (1п1та11р1б®), липосин (Ыровуи®), липосин II, липосин III, нутрилипид (ΝτιΙτίΙίρίΟ) и другие подобные липидные эмульсии. Предпочтительной коллоидной системой для применения в качестве носителя для доставки ш νίνο является липосома (т.е. искусственная мембранная везикула). Получение и использование таких систем хорошо известно в данной области. Характерные составы также описаны в и§ 5981505; и§ 6217900; и§ 6383512; и§ 5783565; и§ 7202227; и§ 6379965; и§ 6127170; и§ 5837533; и§ 6747014 и νθ03/093449, которые, таким образом, включены в качестве ссылки в полном объеме.
В фармацевтических композициях и составах для получения стабильных и позволяющих захват клетками-мишенями носителей для доставки можно использовать подходящие соли и буферы. Водные композиции по настоящему изобретению содержат эффективное количество носителя для доставки, содержащего последовательности ингибирующих полинуклеотидов или полинуклеотидов мкРНК (например, липосомы или другие комплексы), растворенного или диспергированного в фармацевтически приемлемом носителе или водной среде. Фразы фармацевтически приемлемый или фармакологически приемлемый относятся к молекулярным структурам и композициям, не вызывающим при введении животному или человеку неблагоприятных, аллергических или других нежелательных реакций. Как используется в настоящем документе, фармацевтически приемлемый носитель может включать один или несколько растворителей, буферов, растворов, диспергирующих сред, покрытий, антибактериальных и противогрибковых средств, изотонических и задерживающих всасывание средств и т.п., приемлемых для применения в формулировании фармацевтических средств, таких как фармацевтические средства, подходящие для введения людям. Использование таких сред и средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области. В композиции также можно добавлять дополнительные активные ингредиенты.
Введение или доставку фармацевтических композиций по настоящему изобретению можно проводить любым путем при условии, что ткань-мишень достижима этим путем. Например, введение можно проводить посредством интрадермальной, подкожной, внутримышечной, интраперитонеальной или внутривенной инъекции или посредством прямой инъекции в ткань-мишень (например, сердечную ткань). Фармацевтические композиции, содержащие ингибиторы мкРНК, или экспрессирующие конструкции, содержащие последовательности мкРНК, также можно вводить посредством катетерных систем или систем, изолирующих коронарный кровоток для доставки терапевтических средств в сердце. Различные катетерные системы для доставки терапевтических средств в сердце и коронарные сосуды известны в данной области. Некоторые неограничивающие примеры способов, основанных на доставке посредством катетеров, или способов изоляции коронарного кровотока, пригодных для использования по настоящему изобретению, описаны в патентах США №№ 6416510; 6716196; 6953466, νθ 2005/082440, νθ 2006/089340, патентных публикациях США №№ 2007/0203445, 2006/0148742 и 2007/0060907, которые все, таким образом, включены в качестве ссылки в полном объеме.
Композиции или составы также можно вводить парентерально или интраперитонеально. В качестве иллюстрации можно получать растворы конъюгатов в виде свободного основания или фармакологически приемлемой соли в воде, подходящим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Также можно получать дисперсии в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях и в маслах. При обычных условиях хранения и применения эти препараты, как правило, содержат консервант для предотвращения роста микроорганизмов.
- 9 022757
Фармацевтические формы, подходящие для использования посредством инъекций или доставки посредством катетера включают, например, стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовляемых для немедленного приема препаратов стерильных инъецируемых растворов или дисперсий. В основном, эти препараты являются стерильными и жидкими в том смысле, что их легко инъецировать. Препараты должны быть стабильными в условиях получения и хранения и должны быть защищены от разлагающего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Подходящие растворители или диспергирующие среды могут включать, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.), их подходящие смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, посредством использования покрытия, такого как лецитин, поддерживая требуемый размер частиц в случае дисперсии, и посредством использования поверхностно-активных веществ. Предотвращения действия микроорганизмов можно добиваться различными антибактериальными противогрибковыми средствами, например парабенами, хлорбутанолом, фенолом, сорбиновой кислотой, тимеросалом и т.п. Во многих случаях предпочтительно включать в состав средства придания изотоничности, например сахара или хлорид натрия. Пролонгированного всасывания инъецируемых композиций можно добиваться использованием в композициях средств, задерживающих всасывание, например, моностеарата алюминия и желатина.
Стерильные инъецируемые растворы можно получать, добавляя конъюгаты в подходящем количестве в растворитель вместе с любыми другими ингредиентами (например, как перечислено выше) по желанию. Как правило, дисперсии получают, добавляя различные стерилизованные активные ингредиенты в стерильный носитель, который содержит основную диспергирующую среду и другие желаемые ингредиенты, например, как перечислено выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъецируемых растворов предпочтительные способы получения включают способы вакуумной сушки и лиофилизации, позволяющие получать порошок активного ингредиента(ов) и любой желаемый дополнительный ингредиент из его предварительно стерильно профильтрованного раствора.
После формулирования растворы предпочтительно вводят способом, подходящим для лекарственной формы и в таком количестве, которое является терапевтически эффективным. Составы можно легко вводить в ряде лекарственных форм, таких как инъецируемые растворы, капсулы с высвобождением лекарственного средства и т.п. Например, для парентерального введения в водном растворе раствор, как правило, подходящим образом забуферивают и сначала делают изотоническим жидкий разбавитель, например, с использованием соответствующего солевого раствора или глюкозы. Такие водные растворы можно использовать, например, для внутривенного, внутримышечного, подкожного и интраперитонеального введения. Предпочтительно, как известно специалистам в данной области, используют стерильные водные среды, особенно с учетом настоящего описания. В качестве иллюстрации однократную дозу можно растворять в 1 мл изотонического раствора ЫаС1 и или добавлять в 1000 мл жидкости для подкожного введения или инъецировать в планируемый участок введения (см., например, Кеттд1оп'8 РЬагшасеийса1 8с1спсс5 151й Εάίΐίοη, стр. 1035-1038 и 1570-1580). В зависимости от состояния субъекта, подвергаемого лечению, необходимо проводить некоторые изменения дозы. Лицо, отвечающее за введение, в любом случае должно определять подходящую для конкретного индивидуума дозу. Кроме того, для введения человеку препараты должны удовлетворять стандартам стерильности, пирогенности, общей безопасности по требованиям стандартов ΡΌΆ ОГПсс οί ВЫощсх.
Способы лечения.
Изобретение относится к способу доставки полинуклеотидов в клетки млекопитающего и к способам лечения, облегчения или предотвращения прогрессирования состояния у представляющего собой млекопитающего пациента. Как правило, способ включает введение полинуклеотида или композиции, содержащей его, представляющему собой млекопитающего пациенту. Как уже описано, полинуклеотид может представлять собой ингибитор мкРНК или миметик мкРНК (например, с нуклеотидной последовательностью, сконструированной для ингибирования экспрессии или активности мкРНК). Таким образом, пациент может находиться в состоянии, связанном с экспрессией РНК, такой как экспрессия мкРНК. Такие состояния включают, например, гипертрофию сердца, инфаркт миокарда, сердечную недостаточность (например, застойную сердечную недостаточность), повреждение сосудов, рестеноз или патологический сердечный фиброз. Таким образом, изобретение относится к применению модифицированных полинуклеотидов и композиций по изобретению для лечения таких состояний и для получения лекарственных средств для таких способов лечения, как описано.
мкРНК, вовлеченные в состояния, такие как гипертрофия сердца, инфаркт миокарда, сердечная недостаточность (например, застойная сердечная недостаточность), повреждение сосудов, рестеноз и/или патологический сердечный фиброз, а также последовательности для воздействия на функцию мкРНК описаны в \ΥΟ 2008/016924, \ΥΟ 2009/058818, \ΥΟ 2009/018492, \ΥΟ 2009/018493, \ΥΟ 2009/012468, \ΥΟ 2009/062169 и \ΥΟ 2007/070483, каждая из которых, таким образом, включена в качестве ссылки в полном объеме. Такие мкРНК и последовательности дополнительно перечислены в табл. 1, а модифицированные полинуклеотиды на основе этих последовательностей приведены в табл. 2, на фиг. 1 и описаны в настоящем документе.
В определенных вариантах осуществления у пациента присутствует один или несколько факторов
- 10 022757 риска, включая, например, длительную неконтролируемую гипертензию, нескорректированное заболевание клапанов, хроническую стенокардию, недавно перенесенный инфаркт миокарда, наследственную предрасположенность к заболеванию сердца и патологическую гипертрофию. Альтернативно или дополнительно, у пациента могут диагностировать наличие генетической предрасположенности, например, к гипертрофии сердца, или у него в семейном анамнезе может присутствовать, например, гипертрофия сердца.
В этом аспекте настоящее изобретение может относиться к улучшенной переносимости физической нагрузки, сниженной частоте госпитализации, лучшему качеству жизни, сниженной заболеваемости и/или сниженной смертности у пациентов с сердечной недостаточностью или гипертрофией сердца.
Далее настоящее изобретение проиллюстрировано приведенными ниже дополнительными примерами, которые не следует рассматривать как ограничивающие. Специалисты в данной области с учетом настоящего описания должны понимать, что в конкретных описанных вариантах осуществления можно осуществлять множество изменений и тем не менее получать аналогичный или сходный результат без отклонения от сущности и объема изобретения.
Примеры
Синтезирована панель ингибиторов мкРНК (одноцепочечных олигонуклеотидов), направленных к мкРНК ΜΡ-15Β.
Последовательности и параметры модификаций представлены в табл. 3 ниже с сокращениями.
Таблица 3
Список молекул, синтезированных для скрининга для оптимизации химического состава
Нуклеотидная единица или модификация Сокращение Нуклеотидная единица или модификация Сокращение
рибо-А гА рибо-А Р=8 гАз
рибо-0 гС рибо-С Р=3 гСз
рибо-С гС рибо-С Р=3 гСз
рибо-П ги рибо-и р=з гиз
О-метмл-А шА О-метил-А Р=3 тАа
О-метил-О тС 0-метил-0 Р=3 тпСз
О-метил-С тС О-метил-С Р=3 тСз
О-метил-и та О-метил-и Р«£ тие
фтор-С £С фтор-С Р=5 £Сз
фтор-и £и фтор-и Р=5 £ϋβ
дезокси-А Да дезокси-А Р=3 алз
дезокси-С ас дезокси-С Р=3 асз
дезокси-С ас дезокси-С Р-3 асз
дезокси-Т ат дезокси-Т Р=3 атз
ЗНК А ΙΑ ЗНК А Р=5 ΙΑ3
ЗНК О 10 ЗНК С Р=3 108
ЗНК с 1С ЗНК С Р=5 1Са
ЗНК т ΙΤ ЗНК Т Р-3 1Тз
фосфат Р
фосфотиоатный монофосфат рз
Ключ условных обозначений
Полноразмерный РЬ
поочередные связи РЗ ЕО
Связанный фосфотиоатной связью РЗ
Концевое кэпирование со связью Р5 ЕС
Бг- и 31-фосфотиоатный монофосфат РОЗ
Связанный фосфодиэфирной связью РО
Синтезировано три различных обратно комплементарных ингибитора РНК с различной длиной по отношению к зрелой щ£Р-15Ь, 8 н., 16 н. и полноразмерный (22 н.). Химические модификации в этом примере включали 2'-ОМе, 2'-Р, 2'-дезокси, связь посредством фосфотиоата и ЗНК, которые объединяли в специфические мотивы. Мотивы включали фосфотиоатные связи между двумя основаниями на каждом конце (концевое кэпирование фосфотиоатом). Дополнительные модификации включали концевое кэпирование остатками без оснований (обратный мотив без основания с фосфатной связью 5'-5' на 5'-конце
- 11 022757 и/или с фосфатной связью З'-З' на З'-конце, как описано в настоящем документе) или фосфотиоатными монофосфатами на обоих 3'- и 5'-концах.
Структуры синтезированных полинуклеотидов представлены на фиг. 1.
Пример 1. Ингибирование Ш1К-15Ь ш νίΐτο.
Панель тестировали в клетках НеЬа при двух концентрациях 10 и 0,1 нМ. Данные получали в анализе с двумя люциферазами. Посредством этого анализа не тестируют ингибирование мкРНК напрямую, а точнее тестируют действие ингибированной мкРНК, которое выявляют как увеличение под действием люциферазы Ксш11а. Вторая люцифераза, люцифераза светляка, не подвержена ингибированию мкРНК, и ее применяют в качестве внутреннего контроля. Чем больше значение отношения люцифераз, тем лучше активность ингибитора. См., Уегтеи1еи А., с1 а1., ИоиЫе-кТгаийей ге§юи8 аге е88еийа1 йсхщп сотропспц оГ ро1сШ 1иПЬйог8 оГ К18С ГипсОоп ΚΝΑ 13:723-730 (2007). Результаты скрининга представлены на фиг. 2.
На фиг. 2 предоставлены результаты, сгруппированные по длине: 16-членные и полноразмерные олигонуклеотиды. Одним заметным химическим мотивом являлся 2'-ОМе с фосфотиоатным монофосфатом.
На фиг. 3 представлено прямое сравнение фосфотиоатного монофосфата с фосфодиэфирным или фосфотиоатным каркасом. Для ''полноразмерных'' ингибиторов при концентрации 10 нм он эквивалентен со сравниваемыми веществами, но при концентрации 0,1 нМ они являются намного более активными. Для длины 16 нуклеотидов ингибиторы без фосфотиоатного монофосфата вообще не демонстрируют значительной активности. Также неожиданным является то, что полностью фосфотиоатная молекула также не является такой же активной; таким образом, по-видимому, этот способ концевого кэпирования вносит значительный вклад в активность.
Наиболее эффективные четырнадцать ингибиторов из каждого скрининга выбирали для определения 1С50, и они перечислены в табл. 4.
Таблица 4
Молекулы трансфицировали в клетки НеЬа при шести концентрациях в диапазоне от 100 нМ до 1 пМ. Через 48 ч очищали общую РНК и проводили количественную ПЦР для определения уровней ттК.15В и контрольной РНК. Рассчитывали 1С50, и они представлены в таблице ниже. Молекулы, содержащие концевые фосфотиоатные монофосфаты, перечислены полужирным шрифтом в табл. 5.
Таблица 5
1С50 Среднеквадратичная {НМ? «шибка
1 Τίην 15 8 2.28 0.0209
2 15Ь ΕΝΑ 16 РЗ 0.00 0.0001
3 15Ь ΕΝΑ 16 РЗ ЕО 0.00 0.0002
4 15Ь ΕΝΑ 16 РО 0.12 0.0004
5 15Ь ОМе 16 АЬаз1с 0.17 0.0159
б 15Ь ОМе 16 РОЗ 0.08 0.0100
7 15Ь Ме/Р 16 РОЗ 1.04 0.0333
8 15Ь ОМе Ρί АЬаас 0,06 0.0037
9 15Ь ОМе РЬ РОЗ 0.01 0.0036
10 15Ь Ме/Р Ρί РО 0.13 0.0125
11 15Ь Ме/Р РЬ РОЗ 0.18 0.0051
12 15Ь Ме/Р РЬ АЬазк 0.86 0.0090
13 15Ь Ме/Р РЬ РЗ ЕО 0.03 0.0022
14 15ЬСМеН..Р5 ЕС 0.06 0.0039
Пример 2. Ингибирование т1К-15Ь ΐη νί\Ό.
Синтезировали десять ингибиторов (полинуклеотидов 5-14 из табл. 5), направленных к т1К-15Ь, и
- 12 022757 тестировали у нормальных мышей на воздействие на уровни Ш1К-15В. Мышам (п=4) дозировали 80 мг/кг посредством инъекции в хвостовую вену при низком давлении и через четверо суток ткани анализировали на уровни Ш1К-15Ь. Анализировали печень и сердце и данные сравнивали с мышами, которым инъецировали физиологический раствор.
В печени и сердце ингибиторы с фосфотиоатными монофосфатными кэпами (ΡΟδ) продемонстрировали сильное ингибирование ιηίΡ-15Β (см. фиг. 4). То, что эти молекулы без каких-либо внутренних фосфотиоатных связей или конъюгирования с холестерином были способны продемонстрировать такое действие в сердце, было достаточно неожиданным.
Эти эксперименты демонстрируют, что существуют уникальные мотивы модификаций, которые увеличивают активность ингибиторов мкРНК. Стабильность к нуклеазам может быть важным признаком, так как молекулы, полностью связанные фосфодиэфирными связями с модификациями 2'-ОМе являются менее эффективными, чем молекулы с фосфотиоатными связями. По-видимому единственным исключением является то, когда концы кэпированы нуклеозидами без оснований или концевыми фосфотиоатными монофосфатами. Даже в виде 16-членного олигомера 1С50 этой кэпированной на конце молекулы составляет 80 пМ, тогда как 1С50 полноразмерного полинуклеотида составляет 18 0 пМ. Этот параметр модификаций: полинуклеотид с 2'-ОМе с концевыми фосфотиоатными монофосфатами представляет собой уникальный мотив.
Пример 3. Ингибирование ш1К-208а.
Получали полноразмерные и 16-членные ингибиторы ппР-208а и тестировали в кардиомиоцитах новорожденных крыс через 48 ч после трансфекции по экспрессии ВМНС (определяемой количественной ПЦР). Ингибиторы тестировали при 100 и 1 нМ.
Тестируемые ингибиторы включали положения 2', модифицированные в виде всех 2'-ОМе; А и О, модифицированные в виде 2'-ОМе, с С и и модифицированными в виде 2'-Р; и дезокси-А и -О, с 2'-ОМе С и и. Кэпирующие структуры включали остатки без оснований и кэпирование фосфотиоатным монофосфатом.
Ш1К-208 необходим для положительной регуляции экспрессии ВМНС в ответ на нагрузку на сердце и для репрессию генов быстрых скелетных мышц в сердце. См. \УО 2009/018492 и 2008/016924, каждый из которых, таким образом, включен в качестве ссылки.
Результаты представлены на фиг. 5. Как продемонстрировано, модифицированные в положении 2' полинуклеотиды с концевым кэпированием были эффективными в отношении ингибирования ппР-208а. даже в концентрации 1 нМ.
Пример 4. Ингибирование Ш1К-21.
Ингибиторы Ш1К-21 (с концевым кэпированием) тестировали ш νίΐτο при 100 нМ с использованием анализа с двумя люциферазами в клетках НеЬа. Результаты представлены на фиг. 6. Как продемонстрировано, ингибиторы со всеми 2'-ОМе с концевыми кэпами без оснований или кэпированными на концах фосфотиоатным монофосфатом были особенно эффективными.
В отношении Ш1К-15В, Ш1К208 и ингибиторов Ш1К-21 синтезировали полинуклеотиды, представленные в приведенной ниже табл. 6.
Таблица 6
жРНК- мишень Название Последовательность (от 5* к У) Длина
15Ь 15Ь_ОМе_16_РСв рв-тАтСппСтАтитетАтитбтитОтСтитбпЮти-рв 18
15Ь 15Ь_Ме/Р_16._РОЗ р®чтА1С1СтАШтС|Т|АЮ1пСПЭппОЮТг1пС1СШ-рз 16
15Ь 15Ь_ОМв„РЦРОЗ титОгпигпА1Тц^тА|гСгпС|пАтитСтАтил1<5<лип1б*Т1Сгпит&гпСтигпА- р© 22
15Ь 1йЬ_Ме/Р_РС_РОЗ р$-Шт61итАтАтА(С1С1ПА1итетАТитОЮ|пОГС1иппегС1итАрз 22
20В 208з_ОМе_16_РОЗ рз-тСтитититититОтСтитСтОтитСтититА-рз 16
гоя 20Ва_Ме/Р_16_РОЗ рз-ГСЮИЛипЯитеЮШГСтООЛСЮВЭтА-рй 18
208 2;йэ_ОМе_Р1.РОЗ рз- 1пАтСп1А(пАппОтС(пититЦтитИппСтСтитСтО!пО!пСтип1итАтиР* 22
208 208а_Мв/Р_Р1__РО5 22
21 21_ОМе_16_РОЗ р«-гГ|АтитСтАп’:01гиглСггигп6гпАти1Т-АтАл1ЭгпСп'Ц-р5 16
21 21 _Ма/Р_16_РО5 рЗ’тА1иЮтАтв(и^(ит6тА?игпАтАгпОТС<и-р5 16
21 21 ОМе. р5- титСЕпАтАтСтАтитСтАтетитСтитОтАтитАтАтСтСтитА- рз 22
21 21_Мэ(Р_Р1_РО5 рз-тРЮтАтАЮпАтРСтАг.бтРЮгт'РтОтАтРтАтАтОГСтРтА-рз 22
Пример 5. Распределение ингибиторов Ш1К-15В в тканях ш νίνο.
- 13 022757
Синтезировали четыре ингибитора Ш1К-15Ь (табл. 7) и инъецировали мышам для оценки их биораспределения в тканях. Мышей обрабатывали ангиотензином II (Λη§ II) человека, вводимым посредством осмотического насоса, который подкожно имплантировали на спине. Через семь суток после обработки Аи§ II мышам дозировали 1x0,33 мг/кг, 1x1 мг/кг, 1x3,3 мг/кг, 1x33 мг/кг или 3x0,33 мг/кг. Последняя доза означает, что мышам 3 последовательных суток дозировали по 0,33 мг/кг. На сутки 4 животных умерщвляли и ткани обрабатывали для анализа биораспределения. В течение режима дозирования обработку Αη§ II продолжали.
В табл. 7 перечислены последовательность и конкретные модификации каждого из олигонуклеотидов, используемых в этом эксперименте. Соединение 10134 содержало ЗНК и 2'-дезоксинуклеотиды и полностью фосфотиоатный каркас. Соединение 10115 содержало модификации 2'-ОМе и полностью фосфотиоатный каркас. Соединение 10623 содержало модификации 2'-ОМе, полностью фосфотиоатный каркас и 3' и 5' фосфотиоатный монофосфат. Соединение 10624 содержало модификации 2'-ОМе, чередующиеся фосфотиоатные и фосфодиэфирные связи и 3' и 5' фосфотиоатный монофосфат.
Таблица 7
соединит Название Поспеаоввтеланоетъ (от (7 к 31 Длина
| 10134 Ϊ 15Ρ.ϋΝΑ ΙΝΑ16~Ρ5 1АКЙСЗ <Юз (Аз 1Тз (Юз (Аз.Чз.йез ΙΤ5.ΙΟ3 6Сз 6Тз,!ОзДСз,1Т 16
| 10623 15Ь_ОМе_ 16_Р5_РО5 рздчАз юСз.пзСз.тАз тиз.тОздпА1! тиз.тОздпиз.тбздпСч тиздлйз.тСя тич.р 16
{ 10624 15Ь_ОМе_1 рз.тАз тС.тСз.тАтиз.те.тАз пзи.тСз.ти.тоз тС.гчиз.тО.тСз тив.р 16
I 10116 15Ь ОМе_16^РЗ ίτΛί юСз.тС® тАз гСз тСз тАз тиз.тСз.тиз.тбз тСя пЦз.лпОз.тСз ти 16
На фиг. 7 приведено накопление ингибиторов в сердце, печени, почках и легких. При сравнении кэпированных 2'-ОМе олигонуклеотидов с некэпированными количество ингибитора, доставляемого во все органы часто являлось более высоким при кэпировании с модификацией РО8. Эффект был наибольшим при наименьшей дозе 1x0,33 мг/кг. Доставка в почки при всех четырех параметрах модификаций оставалась фактически эквивалентной. Полностью модифицированный фосфотиоатный каркас по сравнению с чередующимися модификациями также продемонстрировал наибольшую доставку в сердце, печень и легкие.
Все публикации, патенты и патентные заявки, описываемые и цитируемые в настоящем документе, полностью включены в качестве ссылки. Следует понимать, что описываемое изобретение не ограничено конкретными описываемыми способами, протоколами и материалами, так как они могут варьировать. Также следует понимать, что используемая в настоящем документе терминология предназначена только с целью описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения, которое ограничено только приложенной формулой изобретения.
Специалистам в данной области очевидны, или им с применением не более чем общепринятого экспериментирования станут очевидны множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления изобретения, описываемого в настоящем документе. Подразумевается, что такие эквиваленты включены посредством приложенной формулы изобретения.
Ссылки
Приведенные ниже ссылки, таким образом, полностью включены в качестве ссылки для всех целей.
8ргоа1 В. е! а1., ШЛсю АсМк КекеагсЬ 17: 3373-3386 (1989).
Ки£Т Е.Ь. е! а1., 1оигиа1 о£ Ог§ашс СЬеш151гу, 61:1547-1550 (1996).
Сгашег Н. е! а1., НсКсОса СЫшюа Ас1а, 79: 2114-2136 (1996).
Уегшеи1еп А. е! а1., ΚΝΑ 13:723-730 (2007).
Патент США № 5998203.

Claims (12)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Полинуклеотид, содержащий антисмысловую последовательность, комплементарную зрелой Ш1К-15Ь, причем полинуклеотид содержит последовательность 5'-СТССТССТ-3' и его длина не превышает десяти нуклеотидов и включает одну или несколько внутренних фосфотиоатных связей и один или несколько остатков закрытых нуклеиновых кислот.
2. Полинуклеотид по п.1, который полностью связан фосфотиоатными связями.
3. Полинуклеотид по п.1, включающий по меньшей мере один концевой фосфотиоатный монофосфат.
4. Полинуклеотид по п.1, который целиком состоит из остатков закрытых нуклеиновых кислот.
5. Полинуклеотид по п.1, который состоит из последовательности 5'-СТССТССТ-3' и полностью связан фосфотиоатными связями и целиком состоит из закрытых нуклеиновых кислот.
6. Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотид по любому из пп.1-5 и фармацевтически приемлемый носитель.
7. Фармацевтическая композиция по п.6, которая находится в составе коллоидной дисперсной системы, макромолекулярного комплекса, нанокапсулы, микросферы, гранулы, эмульсии масло-в-воде, мицеллы, смешанной мицеллы или липосомы.
- 14 022757
8. Фармацевтическая композиция по п.6, которая находится в составе для интрадермальной доставки, подкожной доставки, внутримышечной доставки, интраперитонеальной или внутривенной доставки.
9. Фармацевтическая композиция по п.6, которая находится в составе для введения посредством сердечной катетерной системы.
10. Применение фармацевтической композиции по п.6 для лечения пациента с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК.
11. Применение по п.10, где состояние представляет собой гипертрофию сердца, инфаркт миокарда, сердечную недостаточность, повреждения сосудов или патологический сердечный фиброз.
12. Применение по п.10 или 11, при котором композицию вводят посредством сердечного катетера.
Соединение Условное обозначение Последовательность Длина 10125 15Ь ОМе 16 РО 5' ιτιΑ гпС.тС,тА,ти.тС,грА,п1и,1пО,ти,тС,тС.гпи,тО,тС,ти, 3 16 10116 15Ь ОМе 16 Р5 5' тА5?г)С5,тС5,глА5,ти5,тС5.тА5, ти^,тО5,1Г1и<:,п,С5,ГпС5,ти4,гт>С5,1ПС5,П1и( 3· 16 10117 15Ь ОМе 16 Р5 ЕО 5' тА5,тС,гпС5,гпА,ти5,тС,тА5,ти,ггО«,ти,тС$,тС,ти5,те,тС5,1пи, 3' 16 10118 150 ОМе 16 Р5 ЕС 5' тА5утС,тС,тА,ти,т6,тА,тигтС,ти,тОуггС,тЦ,т6<1гС5,ти< 3' 16 10119 15Ь ОМе 16 АЬалс 5' грртгабмоснзевия тА,тС,тС,гпА.гг!и,т<’,тА,ти,Г|С<ти,тС,тС,п-и,гпС,ггС,ти/ру™еб«<»лв»'«*’ 3' 16 10120 15Ь ОМе 16 РО5 5‘ р5>тАгтС,гпС,тА(ти,тСгтА,ти,тС,Епи1т2,гпС,гпи(тО,тСг1Г1и<р5, 3' 16 10121 15Ь Ме/Р 16 РО 5' епАХ/С,шА,1Ъ,[Т1С,тА,Ги,тС,Ри,тО,£С,Ги,тО,К:.Гь, 3' 16 10122 15Ь Ме/Р 16 Р5 5‘ тА5ДС5,?С5,пА5Ди5,т55,тА5,1и5,ггЕб5,Ю5,тб$ДС5,Ги5,гп<35,ГС$/и, 3' 16 10123 15Ь Ме/Р 16 Р5 £0 5’ тА5,ГС,ГС5,тА,Ги5,тС,тА5,Лб,тО«,Ри,тО5,ГС,Ю5,тО,ГС5,Ю, 3' 26 10124 15Ь Ме/Р 16 Р5 ЕС 5 тА$ДСХтА/и?тбдяАДи,тСДи,тб/СДи,тСДС5/и, 3' 16 10125 15Ь Ме/Р 16 АЬаис 5' Группа бед оскавмя тА К,РС.тА,Ю,П1С,тА,Я1,тС,£и,тС,£С,£и,т<ЗгК:,Ю, Группа бед оаюеам 3' 16 10126 15Ь Ме/Р 16 РО5 5 р%тАДС/С,тА/и,(п5,гоАди,тОДи,гпС/С/и,тСМсДи,р5, 3' 16 10127 15Ь Ме/Н 16 РО 5 с1А,тС,тС,йА,ти,йС,с1А,гпигс1О,«пи,(1С,тС,8пи,с1С,тС,ти, 3' 16 10123 15Ь Ме/И 16 Р£ 5' бА5,тС5,тС5,бА5,тиз)<1С5,бА5,тиь,с1б5,Еги5,0С5,тСз,гпи5,бб5,гпС5,т11, 3' 16 10129 15Ь №е/Н 16 Р5 ЕО 5' □А£,тС,тС«, РА,тиа й6,йА5,ти,йС5,ти,ае5,п»е,ти5,йС,гпС&,гг«ьг 3' 16 10130 15Ь Ме/И 16 Р$ ЕС 5' йА$,тС,тС,бА,ти,б6,йД,1ви,4С,ти,й6,тС,ти,с10,О1С5,1пи., 3 +6 10131 15Ь Мс/Н 16 АЬале 5' Гй«1аее»<»юеж« йА,тС,01С,с1А,ти,е16,с1А,ти, 3' 16 10132 15Ь Ме/Я 16 РО5 5 ре бА.тДтСЦА.ти.бДбА^ти.бДти.бС тС,ти,с16,тС,ти,рз 3' 16 10133 15Ь ΙΝΑ 16 РО 5' 1А,асхс1с,!А,гг,ао,1А,!Т,а<з,гг,|13,ас.<гггю,с1с,гг, 3 16 10134 15Ь ΙΝΑ 16 Р5 5' 1А5,йС5,аС5,1А5,ГГ5,ЙС5,1А4,И5,йО5,ГТз,1С5,<1С5,бТ5,1С5,с1С5,1Т, 3' 16 10135 15Ь ΙΝΑ 16 РЗ £0 5' 1А?,ас 6С5ια,ιτ$ йс,1А5,1т,<1С5.1т,1ег0С.<тк^С5,п·, 3' 16 10136 15Ь ОМе Я РО 5' ти,тС,т13,тА,тАгпА,тС,тС,тА,п’и,тС,тА,ти/шб,ти,пС,тС,ти,1Г(С<тС,ти,грА> 3' 22 10137 15Ь ОМе Р1 Р5 5 ти5,тС5,ти5,тА5,тА£,тА5^СцтС?,тА5,ти5,гТ|С5,тА5,ти5,1пС5(гпи$,тС5/1пС5.ти5,тС5,1гС5,ти5,тА, 3' 22 10138 15Ь ОМе Р1 Р5 ЕО 5 ти5,тС,гпи5,тАгтА5,(пА,тС5,тС,тА5,п1и,1Г1б5,тА,гпи5гт6,ти5,тС,тС$,гпЦрлб5,тС,ти5,тА 3' 22 10139 15Ь ОМе а Р5 ЕС 5 ти5,тС,ти,тА,тА,тА,тС,тС,«гА,ти,гп0,тА Γπύ,ΓηΟ,ιτιϋ,ϊηΟ,ιτιΟ,Γηΐι,ηιΟ,Γηί,ίηϋί,ηιΑ, 3 22 10140 15Ь ОМе Я АЬэ51С 5 йв?Еми»иП1и,тО,П1и(<гА,тА,тА,т€,тС,тА,тизтС,тА,ти,ЕГ1<31гпи,тС,тС,1Т1и1п1С,гпС,гпи,гпД,гр»1»вбмоаюедшА 3' 22 10141 15Ь ОМе Я РО5 5 р5,гг-и,гп€,пи,тА,тА,глА,тС,тС,тА,ти ггС,тА,ти,тС,гги,гЮ,тС,ти,гпС1,тС,гпи,гпА,,р5, 3' 22 10142 15Ь Ме/Р Я РО 5 Ш,тС,Ю,гпА/п'А,л1А/С,Ч:,тА,£и1тС,глА,£и,тС,1:игт6,«:/и11тС,К: Ш,тА, 3 22 10143 15Ь Ме/г Я Р5 5 Ю5,тб5,Ги5гпА5,тАч,тА5,ГС$/С;,тА5 Ю4,тС5,тА5,Юч,тб5/и5,тС5,1С$Ли$,тб$/С$Ди5,тА, 3' 22 10144 15Ь Ме/Р ΡΙ Р5 ЕО 5’ £и5,т£3,Ги5,тА,тА5,тА,(С5,(С,тА5,ГО,тС5,гпА,£и5,[пО,Ги5,гт'|6/С5,Ги,тС5>ГС,Ги^,пА> 3' 22 10145 15Ь. Ме/Р Я Рб ЕС 5‘ Ги$,те,№1тА,гпА,тА,ГД1С,тА,Ш,т6,тАЮ,т(ЗМго«ГС,Ю,1паК:/О5,г’пА, 3 22 10146 15Ь Ме/Р РЬ АЬа51С 5' Гдтпа 6« 0Оюеания/и,тС,Ю,тА,тА,пг4ЛСДС,тА/и,пС,тААЬтСЛи,тСЛСДи,гп<а,?С,Ю,тА,Г[мпг1а без основания 3 22 10147 15Й Ме/Р Ρί РОЗ 5' ρζ 1:и,тС<Ю,тА,тА,ЕпА/СЛС,гг1АЛ,тС,гг!АЛцт<3,Ги,тСДС,Ю,т6,«',Ю,тА,р^ 3 ?2 10148 15Ь ме/н а ро 5' 1пи,0е,ти,<1А,йА!аА,тС,тС,йА,ти,йб,йА,ти.с1С,ти,аС,тС.пШ,с!б,тС,ти,<1А, 3' 22 10149 15Ь Ме/Н Ч Р5 5‘ лпи5,с!С5,гпи5,йА5.0А5,с1А5,гг|С5,гГ!Сг,бА5,тС5,бО5,с1А5,ти5,с1<г2,гпи5,йС5,гпС5,ти5,бС5,тСз>ти5,йА, 3 22 10150 15Ь Ме/н~а Р5 ьо 5 тиз,бб,П1и5,6А,ЙА5,ЙА,ГпС$,нС,бА5,гпи,б6$,<1А,гГ1115,66,тиз(с1С,тС5,тС1г<]б5,[Г!С,гг1и5,бД, 3' 22 10151 15Ь Ме/Н а Р5 ЕС 5* Γηυί,άο,ηΊυ,όΑ,όΑ,άΑ,Γηύ,^ς^Α.Γΐυ,ίΐΰ,άΑ,Γηυ,ίΣΰ,πΊυ^ΰ,Γτο,πυ,ΕΕΰ,ηκ; тивДЧ 3' 22 10152 15ь ме/н..а дьик 5' гр|тба*лтза«цти,с16,спи,йА,(1А,йА, тС,тС1бД,1Яи,б6,бА,ти,0С,т11,бС,ЛнС,П'‘|1Л£1С,п>С,гпи,с1А, Группа без основания 3 22 10153 1Я> Ме/Н ΡΙ РО5 5* р5,пи,сК3.1Ри,<1А,йА,с1А,гпС,ппС,йА,ти,й6,йА.тли,(Ю,>пи,сЮ,гпС,гпи,йб.гпС,ги,<1А,р5, 3' 22 10154 15Ь Ι.ΝΑ Р1 РО 5' Я,аб,йТ,1МА,йА,1С,аС,с1А,1Т,<16,йА,ГГ,(Зе,йТ,16,сЗСгсГТ,1С,1С,сГТ,1А, 3 22 10155 15Ь ША Р1 Р$ 5 ГТ5,Йб5,с1Т5,1А5,аА5,£1А5,1С5,ЙС5,<1А8,П'5,<1е5,бА5,1Т5,Йб5,иТ5,1б5.аС5,ЙТ5,1б5,ГС5,С1Т5,1А, 3 22 10156 15Ь ΙΝΑ Π Р5 ЕО 5' ГТ5.с1С,с1Т?.,1А,0А5,,с1А,!С5,с]С,6А5,ГГ;6С5,6А,1Ть,с16,сГТб,1С><1С5г6Т,1С^,!С,6Т$,!А, 3' 22 10113 Т8ПУ 15 8 5' 1б5,ГТ5,}С£,1С5,1Т5,1б5,1С5Л 3 8 10623 15Ь ОМе 16 Р$ РО5 5’ р5 грА5,пС5,тС5,тА5,о’и5,ггС5,тА5,ти5,т6з,ти5,1пб5,тС5,ти5,тб5,тС5,>пи5,р 3* 16 10624 15Ь ОМе 16 Р5£О РО£ 5' р5,гТ|А5,тС,гпС5,тА,(пи5,ЕПб,гпА5,ти,тб5,1Г!и,тб5,гоС,1Г)и5,т6,тС5,ти5,р 3' 16
EA201171493A 2009-06-08 2010-06-08 МОТИВЫ ХИМИЧЕСКИХ МОДИФИКАЦИЙ ДЛЯ ИНГИБИТОРОВ И МИМЕТИКОВ мкРНК EA022757B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18503309P 2009-06-08 2009-06-08
PCT/US2010/037821 WO2010144485A1 (en) 2009-06-08 2010-06-08 CHEMICAL MODIFICATION MOTIFS FOR miRNA INHIBITORS AND MIMETICS

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201171493A1 EA201171493A1 (ru) 2012-06-29
EA022757B1 true EA022757B1 (ru) 2016-02-29

Family

ID=43309198

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201171493A EA022757B1 (ru) 2009-06-08 2010-06-08 МОТИВЫ ХИМИЧЕСКИХ МОДИФИКАЦИЙ ДЛЯ ИНГИБИТОРОВ И МИМЕТИКОВ мкРНК

Country Status (17)

Country Link
US (2) US20120148664A1 (ru)
EP (1) EP2440566A4 (ru)
JP (1) JP2012529295A (ru)
KR (1) KR20120047892A (ru)
CN (1) CN102803284B (ru)
AU (1) AU2010258875A1 (ru)
BR (1) BRPI1010885A2 (ru)
CA (1) CA2765129A1 (ru)
EA (1) EA022757B1 (ru)
GE (1) GEP20156329B (ru)
MA (1) MA33488B1 (ru)
MX (1) MX2011013176A (ru)
NZ (1) NZ597078A (ru)
SG (1) SG176716A1 (ru)
UA (1) UA105390C2 (ru)
WO (1) WO2010144485A1 (ru)
ZA (1) ZA201109319B (ru)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008018795A1 (en) 2006-08-11 2008-02-14 Prosensa Technologies B.V. Methods and means for treating dna repeat instability associated genetic disorders
NZ584793A (en) 2007-10-26 2012-05-25 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and methods for counteracting muscle disorders
US9624491B2 (en) 2010-02-26 2017-04-18 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Methods and compositions for the detection and treatment of cancer involving miRNAs and miRNA inhibitors and targets
US20120116381A1 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Houser Kevin L Surgical instrument with charging station and wireless communication
EP2652151A2 (en) * 2010-12-15 2013-10-23 Miragen Therapeutics Microrna inhibitors comprising locked nucleotides
CN102643807B (zh) * 2011-02-18 2015-06-03 中国科学院上海药物研究所 人miR-484的反义寡聚核苷酸及其应用
EP2699269A1 (en) * 2011-04-22 2014-02-26 Prosensa Technologies B.V. New compounds for treating, delaying and/or preventing a human genetic disorder such as myotonic dystrophy type 1 (dm1)
EP3211082B1 (en) * 2011-04-25 2021-02-17 Sanofi Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
WO2012149646A1 (en) * 2011-05-05 2012-11-08 Sunnybrook Research Institute Mirna inhibitors and their uses
SG194901A1 (en) * 2011-05-09 2013-12-30 Univ Glasgow Methods of modulating micrornas in the treatment of pulmonary arterial hypertension
AU2013201303C1 (en) 2011-10-06 2016-06-23 MiRagen Therapeutics, Inc. Control of whole body energy homeostasis by microRNA regulation
EP2806900B1 (en) 2012-01-27 2021-12-15 BioMarin Technologies B.V. Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of duchenne and becker muscular dystrophy
SI2841578T1 (sl) 2012-04-23 2017-12-29 Biomarin Technologies B.V. Rna modulirajoči oligonukleotidi z izboljšanimi karakteristikami za zdravljenje nevromuskularnih motenj
IN2014DN09134A (ru) * 2012-04-25 2015-05-22 Regulus Therapeutics Inc
CN102703456B (zh) * 2012-05-15 2014-04-02 武汉生命之美科技有限公司 DAPK3基因hsa-miR-20a的作用靶位点
US9163235B2 (en) 2012-06-21 2015-10-20 MiRagen Therapeutics, Inc. Inhibitors of the miR-15 family of micro-RNAs
US9388408B2 (en) 2012-06-21 2016-07-12 MiRagen Therapeutics, Inc. Oligonucleotide-based inhibitors comprising locked nucleic acid motif
UA116639C2 (uk) 2012-10-09 2018-04-25 Рег'Юлес Терап'Ютікс Інк. Способи лікування синдрому альпорта
EP2968396B1 (en) 2013-03-15 2018-12-19 Miragen Therapeutics, Inc. Locked nucleic acid inhibitor of mir-145 and uses thereof
TW201446791A (zh) 2013-05-01 2014-12-16 Regulus Therapeutics Inc 用於調節mir-122之微小rna化合物及方法
CN103290011B (zh) * 2013-05-16 2015-09-16 南京市妇幼保健院 与胎儿先天性心脏病相关的母体血清/血浆miRNA标志物mir-29c及其应用
CN103667441B (zh) * 2013-09-10 2016-10-19 山西医科大学第一医院 一种Hsa-miR-145-5p试剂盒及其成熟体模拟物的应用
GB201400598D0 (en) 2014-01-14 2014-03-05 Univ Glasgow Materials and methods for modulation of tendon healing
CN104083761A (zh) * 2014-06-25 2014-10-08 北京大学第三医院 microRNA-101抑制剂在制备预防或治疗骨关节炎药物中的应用
WO2016022753A1 (en) 2014-08-07 2016-02-11 Regulus Therapeutics Inc. Targeting micrornas for metabolic disorders
JP2018503646A (ja) 2015-01-20 2018-02-08 ミラゲン セラピューティクス， インコーポレイテッド ｍｉＲ−９２阻害剤およびその使用
WO2017043490A1 (ja) * 2015-09-07 2017-03-16 協和発酵バイオ株式会社 自然免疫誘導効果が増強した二重鎖リボ核酸
WO2017156015A2 (en) 2016-03-07 2017-09-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Micrornas and methods of their use
US20190127736A1 (en) * 2016-04-29 2019-05-02 Aptamir Therapeutics, Inc. Inhibition of mir-22 mirna by apt-110
WO2018079841A1 (ja) * 2016-10-31 2018-05-03 国立大学法人岐阜大学 二本鎖核酸分子、およびその用途
US20180193270A1 (en) 2016-11-29 2018-07-12 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
AU2019234916A1 (en) 2018-03-14 2020-10-15 Beth Israel Deaconess Medical Center Micro-RNA and obesity
CN112400020A (zh) 2018-05-08 2021-02-23 莱古路斯治疗法股份有限公司 作为具有hcv抗病毒活性与降低的高胆红素血症副作用的mir-122抑制剂的galnac缀合的经修饰的寡核苷酸
US11015197B2 (en) 2018-08-29 2021-05-25 Korea Institute Of Science And Technology Therapeutic agent for treating cancer comprising anti-miRNA-albumin composite
IL296957A (en) 2020-04-02 2022-12-01 Mirecule Inc Targeted inhibition using engineered oligonucleotides
EP4185694A1 (en) * 2020-07-23 2023-05-31 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt Combinatorial inhibition of mirnas for treatment of heart failure

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2003107669A (ru) * 2000-10-06 2004-11-20 Авонтек ГмбХ (DE) Модулирование транскрипции противовоспалительных генных продуктов
WO2005013901A2 (en) * 2003-07-31 2005-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding rnas
WO2009062169A2 (en) * 2007-11-09 2009-05-14 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Micro-rnas of the mir-15 family modulate cardiomyocyte survival and cardiac repair

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5981505A (en) 1993-01-26 1999-11-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for delivery of genetic material
US5837533A (en) 1994-09-28 1998-11-17 American Home Products Corporation Complexes comprising a nucleic acid bound to a cationic polyamine having an endosome disruption agent
US5840710A (en) 1994-12-09 1998-11-24 Genzyme Corporation Cationic amphiphiles containing ester or ether-linked lipophilic groups for intracellular delivery of therapeutic molecules
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
US6217900B1 (en) 1997-04-30 2001-04-17 American Home Products Corporation Vesicular complexes and methods of making and using the same
US7582744B2 (en) * 2004-08-10 2009-09-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified oligonucleotides
CN101426912A (zh) * 2005-08-17 2009-05-06 瑟纳治疗公司 介导rna干扰的化学修饰短干扰核酸分子
US20080287383A1 (en) * 2007-03-02 2008-11-20 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting erbb gene expression and uses thereof
EP3492594A1 (en) * 2007-10-04 2019-06-05 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Micromirs

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2003107669A (ru) * 2000-10-06 2004-11-20 Авонтек ГмбХ (DE) Модулирование транскрипции противовоспалительных генных продуктов
WO2005013901A2 (en) * 2003-07-31 2005-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding rnas
WO2009062169A2 (en) * 2007-11-09 2009-05-14 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Micro-rnas of the mir-15 family modulate cardiomyocyte survival and cardiac repair

Also Published As

Publication number Publication date
MX2011013176A (es) 2012-04-30
GEP20156329B (en) 2015-07-27
US20140066491A1 (en) 2014-03-06
WO2010144485A1 (en) 2010-12-16
CN102803284B (zh) 2015-11-25
SG176716A1 (en) 2012-01-30
EA201171493A1 (ru) 2012-06-29
EP2440566A4 (en) 2013-10-16
CA2765129A1 (en) 2010-12-16
JP2012529295A (ja) 2012-11-22
KR20120047892A (ko) 2012-05-14
CN102803284A (zh) 2012-11-28
US20120148664A1 (en) 2012-06-14
EP2440566A1 (en) 2012-04-18
ZA201109319B (en) 2013-02-27
AU2010258875A1 (en) 2012-01-19
UA105390C2 (ru) 2014-05-12
MA33488B1 (fr) 2012-08-01
BRPI1010885A2 (pt) 2015-09-22
NZ597078A (en) 2013-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA022757B1 (ru) МОТИВЫ ХИМИЧЕСКИХ МОДИФИКАЦИЙ ДЛЯ ИНГИБИТОРОВ И МИМЕТИКОВ мкРНК
AU2016200344B2 (en) Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject
US20190040384A1 (en) Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject
JP7197463B2 (ja) Ｓｍｎ２の調節のための化合物及び方法
JP6752151B2 (ja) 遺伝子サイレンシングにおいて低下したｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ効果を有するｕｎａオリゴマー
JP2018528783A (ja) コンジュゲートアンチセンス化合物及びその使用
CN108271351A (zh) 用于调节血管紧张素原表达的化合物和方法
EP3797780B1 (en) Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject
JP2015525081A (ja) マイクロｒｎａのｍｉｒ−１５ファミリーの阻害剤
WO2016040748A1 (en) Compositions and methods for detection of smn protein in a subject and treatment of a subject
JP2017510583A (ja) 遺伝子サイレンシング用トランスサイレチン対立遺伝子選択的ｕｎａオリゴマー
JP2024051108A (ja) 筋ジストロフィーに対するエクソンスキッピングオリゴマーコンジュゲート
JP7211933B2 (ja) 転写プロセシングの調節のための化合物及び方法
JPWO2020023737A5 (ru)
RU2793459C2 (ru) Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта
EP4269586A1 (en) Targeting micro rna for treatment of heart failure with preserved ejection fraction (hfpef)
WO1998049287A2 (en) Antisense oligonucleotides specific for thymidylate synthase
JP2024057599A (ja) マイクロｒｎａ２２の阻害剤

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU