EA021977B1 - Моноклональные антитела человека, полученные из в-клеток человека и обладающие нейтрализующей активностью против вирусов гриппа а - Google Patents
Моноклональные антитела человека, полученные из в-клеток человека и обладающие нейтрализующей активностью против вирусов гриппа а Download PDFInfo
- Publication number
- EA021977B1 EA021977B1 EA201201116A EA201201116A EA021977B1 EA 021977 B1 EA021977 B1 EA 021977B1 EA 201201116 A EA201201116 A EA 201201116A EA 201201116 A EA201201116 A EA 201201116A EA 021977 B1 EA021977 B1 EA 021977B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- virus
- influenza
- monoclonal antibody
- sequence
- zeo
- Prior art date
Links
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 title claims abstract description 107
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 42
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 83
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 16
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 67
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 64
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 35
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 28
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 19
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 12
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 101100327398 Anopheles gambiae CecA gene Proteins 0.000 claims description 4
- 101100059601 Ceratitis capitata CEC1 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims description 3
- 101100445387 Mus musculus Ephb2 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 claims description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 2
- 101000709238 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase SIK1 Proteins 0.000 claims 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 claims 1
- 102100032771 Serine/threonine-protein kinase SIK1 Human genes 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 32
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 13
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 11
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 11
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 101100309570 Caenorhabditis elegans let-765 gene Proteins 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 8
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 102100035798 Zinc finger protein 628 Human genes 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 6
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 5
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 5
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 5
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 5
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- 101150059953 SRK1 gene Proteins 0.000 description 4
- 101100534302 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) SSD1 gene Proteins 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100273858 Anopheles gambiae CecB gene Proteins 0.000 description 2
- 101100273868 Anopheles gambiae CecC gene Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 101100059604 Ceratitis capitata CEC2 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 101100059603 Drosophila virilis Cec3 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 101150060303 SOK2 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 2
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 description 2
- OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CN1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZEVSDGEBAJOTK-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[5-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CC=1OC(=NN=1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O KZEVSDGEBAJOTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150111329 ACE-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000370685 Arge Species 0.000 description 1
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 1
- 101150032275 CDPK2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150053275 CPK2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100167365 Caenorhabditis elegans cha-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102100027723 Endogenous retrovirus group K member 6 Rec protein Human genes 0.000 description 1
- 101710104662 Enterotoxin type C-3 Proteins 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102100030844 Exocyst complex component 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100040837 Galactoside alpha-(1,2)-fucosyltransferase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- 101000893710 Homo sapiens Galactoside alpha-(1,2)-fucosyltransferase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000611614 Homo sapiens Proline-rich protein PRCC Proteins 0.000 description 1
- 101000628693 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 25 Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101100059586 Oryza sativa subsp. japonica CPK19 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 102100040829 Proline-rich protein PRCC Human genes 0.000 description 1
- 241001000829 Psecas Species 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- KTRSXUDIEHUOFC-UHFFFAOYSA-N SRK2 Chemical compound Nc1c(ncn1Cc1ccc(F)cc1)C#N KTRSXUDIEHUOFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026737 Serine/threonine-protein kinase 25 Human genes 0.000 description 1
- 101100043395 Spongilla lacustris SRK2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000882403 Staphylococcus aureus Enterotoxin type C-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003460 anti-nuclear Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000802 evaporation-induced self-assembly Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004452 microanalysis Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 208000037707 susceptibility to 8 restless legs syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/11—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
Abstract
Изобретение относится к моноклональным антителам человека, полученным из В-клеток человека, присутствующих в крови пациентов, выздоровевших после инфицирования вирусами гриппа А, при этом указанные антитела обладают нейтрализующей активностью против вирусов гриппа А. Указанные моноклональные антитела против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению обладают связывающей и нейтрализующей активностью против по крайней мере одного вируса гриппа А, выбранного из группы, состоящей из подтипов H1, Н2 и Н5 вируса гриппа А, и, таким образом, являются полезными для профилактики и лечения заболевания, вызванного указанным вирусом гриппа А, а также для диагностики инфекции вируса гриппа А.
Description
Изобретение относится к моноклональным антителам человека, полученным из В-клеток человека, присутствующих в крови пациентов, выздоровевших после инфицирования вирусами гриппа А, при этом указанные антитела обладают нейтрализующей активностью против вирусов гриппа А. Указанные моноклональные антитела против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению обладают связывающей и нейтрализующей активностью против по крайней мере одного вируса гриппа А, выбранного из группы, состоящей из подтипов Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А, и, таким образом, являются полезными для профилактики и лечения заболевания, вызванного указанным вирусом гриппа А, а также для диагностики инфекции вируса гриппа А.
Область техники
Настоящее изобретение относится к моноклональным антителам человека, полученным из В-клеток человека и присутствующим в крови пациентов, выздоровевших после инфекции, вызванной вирусами гриппа А, при этом указанные моноклональные антитела обладают нейтрализующей активностью против вирусов гриппа А.
Предшествующий уровень техники
Грипп, являющийся заболеванием, обусловленным респираторной инфекцией с вирусами гриппа, часто случается зимой. Известно, что он обладает очень высокой инфективностью и поражает все возрастные группы, особенно людей старшего возраста (Тгеапог 1., 2004, N. Еп§1. 1. Мей. 350(3):218-20). Вирус гриппа является вирусом с антисмысловой РНК (рибонуклеиновой кислотой), заключённой в оболочку, принадлежащим к семейству Оййотухоутйае. Он содержит восемь сегментов одноцепочечной РНК и классифицируется по типам А, В и С. Вирусы гриппа типа А далее подразделяются на подтипы на основании их главных поверхностных белков гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (ΝΑ). К настоящему времени идентифицированы 16 белков НА и 9 белков ΝΑ (Сйеипд Т.К. апй Рооп Ь.Ь., 2007, Апп ΝΥ, Асай. δει. 1102:1-25). Вирусы гриппа имеют широкое распространение, включая птиц, свиней и человека, в зависимости от их типов и содержат геном, состоящий из сегментированных молекул РНК. По этой причине вирусы гриппа могут постоянно мутировать и рекомбинировать с образованием новых генетических вариаций (Тгеапог 1., 2004. Ν. Еп§1. 1. Мей. 350(3):218-20). По этой причине трудно получить постоянный иммунитет против вирусов гриппа. Наиболее эффективным профилактическим способом, использующимся в настоящее время, является вакцинация против каждого из конкретных вирусов гриппа, которые, как ожидается, будут распространены.
Вакцины против гриппа получают главным образом с использованием яиц, но этот способ является неэффективным, поскольку требуется значительный период времени. Соответственно, недостатком этого способа является то, что трудно получать значительные количества вирусов каждый год в течение ограниченного временного промежутка. Для устранения этого недостатка в нескольких фармацевтических компаниях (О8К, Вах1ег е! а1.) активно проводились исследования по разработке способов получения вакцин в культурах клеток. К тому же очень сложно быстро разработать вакцины против вируса пандемического гриппа, когда случается такая пандемическая инфекция. Также противовирусные препараты не являются полностью надёжными из-за проблем, связанных с появлением мутантных вирусов, обладающих устойчивостью. Для устранения этого недостатка в последнее время активно разрабатывались антитела против вирусов гриппа для терапевтических целей (ТЬгокЬу е! а1., 2008, Р1о8 Опе 3 (е3942); §ш е! а1., 2009, ШШге 81гис1ига1 & то1еси1аг Ью1оду. 16 (265-273); §1ттопк е! а1., 2007, Р1о8 Мейюше, 4(е1 78)).
Продукты крови, полученные от выздоровевших пациентов, использовали для лечения пациентов инфицированных различными вирусами, а также для лечения пандемических инфекций гриппа. Например, когда у пациентов, инфицированных вирусом испанского гриппа, были симптомы пневмонии, продукты кровы, полученные от пациентов, выздоровевших после инфицирования гриппом, использовали для лечения указанного гриппа (Ьике е! а1., 2006. Аппа1к оГ ш!ета1 тейюше. 145:599). По существу, гипериммунный глобулин (Ι§Ιν) выделяли из плазмы человека и использовали для лечения пациентов, инфицированных различными вирусами, но указанный продукт, полученный как описано выше, может быть небезопасным из-за потенциальных инфекционных агентов в крови и неприемлем для массового производства. В-клетки человека используют для скрининга специфических моноклональных антител человека. Однако иммортализация В-клеток человека вирусом Эпштейна-Барра (ЕВУ) является неэффективной для иммортилизации В-клеток и требует значительных затрат времени. Для устранения указанного недостатка были разработаны и применяются новые методики. Одной из таких методик является применение метода ОТ-ПЦР для получения генетической информации об антителе непосредственно из В-клеток. Например, существует метод, включающий окрашивание В-клеток, которые экспрессируют антитело к специфическому антигену, выделение указанных В-клеток с использованием сортировщика РАС8 (сортировщик флуоресцентно-активированных клеток), получение генетической информации об антителе из единичных В-клеток с помощью метода ОТ-ПЦР, введение указанной генетической информации в вектор экспрессии, трансфекцию этого вектора экспрессии в клетки животного и затем получение большого количества указанного антитела. Для осуществления такой продукции лёгким и быстрым способом используют следующую методику. Указанная методика матричный стоп-иммуноанализ на чипе (штипе-кро! аггау аккау оп с1ир. 18ААС) позволяет получить ген антитела скринингом единичных В-клеток, секретирующих специфическое моноклональное антитело, в течение нескольких недель (Лп е! а1., 2009, Ν;·ιΙ. Мей. 15, 1088-1092). Полученное таким образом антитело является природным антителом человека, которое может быть более эффективным с точки зрения иммуногенетики.
Непатентные документы.
1. Кеей Ь.1. апй Миепсй Н. (1938). А 81тр1е тейюй оГ екйтайпд ййу регсеп! епйрот®. Т1е Атепсап 1оита1 оГ Ну§1епе, 27 (493-497).
- 1 021977
Описание изобретения Техническая задача
Целью настоящего изобретения является предоставление моноклонального антитела, полученного из В-клеток человека и обладающего нейтрализующей активностью против вируса гриппа А.
Другой целью настоящего изобретения является предоставление выделенной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей указанное моноклональное антитело.
Ещё одной целью настоящего изобретения является предоставление вектора экспрессии, содержащего указанную молекулу нуклеиновой кислоты, введённую в него.
Ещё одной целью настоящего изобретения является предоставление линии клеток - продуцентов антитела, трансфицированных указанным вектором экспрессии.
Ещё одной целью настоящего изобретения является предоставление способа скрининга моноклонального антитела человека.
Ещё одной целью настоящего изобретения является предоставление композиции, содержащей указанное моноклональное антитело человека.
Ещё одной целью настоящего изобретения является предоставление способа лечения заболевания, вызванного вирусом гриппа А с использованием указанного моноклонального антитела человека.
Ещё одной целью настоящего изобретения является предоставление способа предупреждения заболевания, вызванного вирусом гриппа А с использованием указанного моноклонального антитела человека.
Ещё одной целью настоящего изобретения является предоставление способа диагностики инфекционного заболевания, вызванного вирусом гриппа А, с использованием указанного моноклонального антитела человека.
Ещё одной целью настоящего изобретения является предоставление набора для диагностики вируса гриппа А, который содержит указанное моноклональное антитело человека.
Решение задачи
Для достижения указанных выше целей настоящее изобретение предоставляет моноклональное антитело против вируса гриппа А, обладающее нейтрализующей активностью против по крайней мере одного из вирусов гриппа, выбранного из группы, состоящей из вирусов гриппа А подтипов Н1, Н2 и Н5.
Настоящее изобретение также предоставляет выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую указанное моноклональное антитело.
Настоящее изобретение также предоставляет вектор экспрессии, содержащий указанную молекулу нуклеиновой кислоты, введённую в него.
Настоящее изобретение также предоставляет линию клеток - продуцентов антитела, трансфицированных указанным вектором экспрессии.
Настоящее изобретение также предоставляет способ скрининга моноклонального антитела человека.
Настоящее изобретение также предоставляет композицию, содержащую указанное моноклональное антитело.
Настоящее изобретение также предоставляет композицию для предупреждения и лечения заболевания, вызванного вирусом гриппа А, при этом указанная композиция содержит указанное моноклональное антитело.
Настоящее изобретение также предоставляет композицию для диагностики инфекционного заболевания, вызванного вирусом гриппа А, при этом указанная композиция содержит указанное моноклональное антитело.
Настоящее изобретение также предоставляет способ лечения заболевания, вызванного вирусом гриппа А, с использованием указанного моноклонального антитела человека.
Настоящее изобретение также предоставляет способ предупреждения заболевания, вызванного вирусом гриппа А, с использованием указанного моноклонального антитела человека.
Настоящее изобретение также предоставляет способ диагностики инфекционного заболевания, вызванного вирусом гриппа А, с использованием указанного моноклонального антитела человека.
Настоящее изобретение также предоставляет набор для диагностики вируса гриппа А, который содержит указанное моноклональное антитело человека.
Преимущества настоящего изобретения
Моноклональное антитело против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению обладает связывающей и нейтрализующей активностями против по крайней мере одного вируса гриппа А, выбранного из группы, состоящей из вирусов гриппа А подтипов Н1, Н2 и Н5, и поэтому пригодно для предупреждения и лечения заболевания, вызванного вирусом гриппа А, и также пригодно для диагностики инфекционного заболевания, вызванного вирусом гриппа А.
- 2 021977
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 приведён набор графиков, показывающих сродство связывания антител СТ109, СТ111-1 и СТ14-2 с мономером Гемагглютинина (здесь и далее обозначаемым как НА) и тримером НА.
На фиг. 2 приведён набор графиков, показывающих сродство связывания антител СТ104, СТ120 и СТ123 с мономером НА и тримером НА.
На фиг. 3 приведён набор графиков, показывающих сродство связывания антител СТ137, СТ151 и СТ165 с мономером НА и тримером НА.
На фиг. 4 показаны карты векторов рСТ145(А) и рСТ147(В):
А: вектор рСТ145;
В: вектор рСТ147;
рас: ген, кодирующий пуромицин Ν-ацетилтрансферазу (РАС); и
Όδ: диадная симметрия (ΕΒNА1 связывается с элементами диадной симметрии (Όδ) в опР вируса ЕВУ).
На фиг. 5 показана карта вектора экспрессии, экспрессирующего моноклональное антитело против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению.
На фиг. 6 показаны результаты экспериментов по выживаемости животных (мышей), проведённых с использованием моноклональных антител против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению:
А: группа, инъецированная указанными антителами за 24 чперед заражением вирусом подтипа 45Ν1 (А/Вьетнам/1203/04);
В: группа, инъецированная указанными антителами за 48 ч перед заражением вирусом подтипа 45Ν1 (А/Вьетнам/1203/04);
С: группа, инъецированная указанными антителами за 24 ч перед заражением пандемическим вирусом подтипа НШ1 (А/Калифорния/07/2009); и
Ό: группа, инъецированная указанными антителами за 24 ч перед заражением сезонным вирусом подтипа НШ1 (А/Пуэрто-Рико/8/1934).
На фиг. 7 показаны результаты экспериментов по изменению титра вируса в назальных смывах животных (хорьков), проведённых с использованием СТ120 согласно настоящему изобретению через 24 ч после заражения подтипом НШ1 (А/калифорния/04/09).
На фиг. 8 показаны результаты экспериментов по изменению титра вируса в тканях лёгкого животных (хорьков), проведённых с использованием СТ120 согласно настоящему изобретению через 24 ч после заражения подтипом НШ1 (А/калифорния/04/09).
Наилучший способ осуществления изобретения
Здесь и далее будут определены следующие термины, используемые в настоящем описании.
Термин вирусы гриппа А означает вирусы, содержащие антисмысловую цепь РНК (рибонуклеиновую кислоту), заключённую в оболочку, принадлежащие к семейству ОгФотухоушбае. Они включают в себя одноцепочечную РНК, содержащую восемь сегментов, и классифицируются по типам А, В и С. Далее они подразделяются на подтипы на основании их главных поверхностных белков гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (НА). К настоящему моменту известны 16 НА и 9 NА.
Термин подтип Н1, используемый здесь, подразумевает вирусы гриппа А НДО1, НШ2, НШ3, Н1М, НШ5, НШ6, НШ7,41Ν8 и 41Ν9.
Термин подтип Н2, используемый здесь, подразумевает вирусы гриппа А Н2Ш. Н2Ш. 42Ν3. Н2Ш, ΜΝ5, ΜΝ6, 42Ν7, Н2ГО и Н2Ж
Термин подтип Н5, используемый здесь, подразумевает вирусы гриппа А Н5М, 45Ν2, 45Ν3, Н5Ш, Н5№, Н5Ж), 45Ν7, 45Ν8 и Н5Ж
Термин гемагглютинин (здесь и далее обозначаемый как НА) обозначает гликопротеин оболочки вирусы гриппа. Посредством НА осуществляется адсорбция и проникновение вируса гриппа в клеткухозяин. Существует 16 известных подтипов НА.
Термин выздоровевшие или полностью выздоровевшие пациенты, используемый здесь, относится к пациентам, у которых вирус гриппа А обнаруживался в ходе заболевания вирусной инфекцией, но не обнаруживался в крови после определённого периода времени, указывая на то, что эти пациенты излечились от вируса гриппа А.
Далее настоящее изобретение будет описано более детально.
Авторы настоящего изобретения выделили одноядерные клетки периферической крови (рег1рНега1 Ыооб топопис1еаг се11§, РВМС) из крови, полученной от пациентов, выздоровевших после инфицирования вирусов гриппа А. Выделенные клетки РВМС подвергали скринингу на В-клетки - продуценты моноклональных антител. Генетическую информацию для получения моноклональных антител в В-клетках получали с помощью метода ОТ-ПЦР и вводили в вектор рсЭНА. Указанным вектором трансфицировали клетки СНО для предварительного подтверждения продукции антител и их активности по связыванию с НА. В общей сложности было отобрано 82 антитела. Для более аккуратного измерения способности к связыванию с НА всеми указанными антителами, генетическая информация которых была введена в вектор рсОНА, трансфицировали клетки Ρ2Ν человека и проводили сравнительный анализ антител, полученных из трансфицированных клеток, методом НА-ЕЬРЗА с использованием мономера НА и тримера
- 3 021977
НА в качестве антигенов. Таким образом, было отобрано 35 антител, которые реагировали с тримерным НА в большей степени, чем с мономерным НА. Гены указанных 35 отобранных антител из векторов ροΌΝΑ переносили в векторы экспрессии МагЕх и затем ими трансфицировали клетки Ρ2Ν для получения большего количества антител. Эти антитела использовали в эксперименте по микронейтрализации (здесь и далее обозначаемом как тест ΜΝ) и в эксперименте по ингибированию гемагглютинации (здесь и далее обозначаемом как тест Н1) для определения нейтрализующих активностей против различных вирусов гриппа. Некоторое количество указанных антител показывали высокую или низкую нейтрализующую активность против различных вирусов гриппа, но все указанные антитела показали отрицательный результат в тесте Н1. В ходе теста ΜΝ были окончательно отобраны три моноклональных антитела (антитела СТ104, СТ120 и СТ123), показавших нейтрализующую активность против различных вирусов. Было установлено, что среди этих трёх моноклональных антител антитело СТ104 обладало нейтрализующей активностью против подтипов Н1 и Н5, антитело СТ120 обладало нейтрализующей активностью против подтипов Н1, Н2 и Н5, и антитело СТ123 обладало нейтрализующей активностью против подтипа Н1 (см. табл. 1). Также в экспериментах по выживаемости животных (мышей), проводившихся с использованием подтипов Н1 апб Н5, антитела СТ104 и С120 показали превосходное профилактическое и терапевтическое действие против инфицирования Н5Ш. а все три антитела показали превосходное профилактическое действие против инфицирования пандемическим и сезонным НШ1 (см. фиг. 6). В других экспериментах с животными (хорьки), проводившихся с использованием подтипов Н1, антитело СТ120 показало терапевтический эффект против инфицирования НШ1 (А/Калифорния/04/09) (см. фиг. 7 и 8). На основании приведённых выше результатов авторы настоящего изобретения создали настоящее изобретение по нейтрализующим антителам, которые защищают против инфицирования вирусом гриппа А.
Соответственно, настоящее изобретение предоставляет моноклональное тело, обладающее нейтрализующей активностью против подтипов Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А.
Согласно настоящему изобретению указанное моноклональное антитело предпочтительно связывается с НА на поверхности вируса гриппа А. Также указанное моноклональное антитело предпочтительно получено из В-клеток, присутствующих в крови пациентов, выздоровевших после инфицирования подтипом НШ1 вируса гриппа А.
Согласно настоящему изобретению указанный вирус гриппа А предпочтительно является подтипом НДО1, где указанный подтип НШ1 вирус А является вирусом, выбранным из группы, состоящей из А/Техас/05/2009-К015, А/Нью-Йорк/18/2009-К015, А/Соломоновы острова/2006 и А/Огайо/83. Также указанный вирус гриппа А предпочтительно является подтипом Н2№, где указанным подтипом 42Ν2 вируса гриппа А является А/Энн Арбор/6/60 са. В дополнение указанный вирус гриппа А предпочтительно является подтипом Н5Ш, где подтипом 45Ν1 вируса гриппа А является вирусом, выбранным из А/Вьетнам/1203/04 и А/Аньхуэй/1/05.
Согласно настоящему изобретению указанное моноклональное антитело не обладает нейтрализующей активностью против подтипа Κ3Ν2 вируса гриппа А.
Настоящее изобретение также предоставляет моноклональное антитело против вируса гриппа А, содержащее следующие последовательности полипептидов лёгкой и тяжёлой цепей:
лёгкую цепь, содержащую участок СЭК1, содержащий последовательность ЗЕЦ ГО ΝΟ: 7, участок СЭК2, содержащий последовательность ЗЕЦ ГО ΝΟ: 2, и участок СЭК3, содержащий последовательность ЗЕЦ ГО ΝΟ: 8; и тяжёлую цепь, содержащую участок СЭК1, содержащий последовательность ЗЕЦ ГО ΝΟ: 9, участок СЭК2, содержащий последовательность ЗЕЦ ГО ΝΟ: 10, и участок СЭК3, содержащий последовательность ЗЕЦ ГО ΝΟ: 11.
В настоящем изобретении моноклональное антитело предпочтительно содержит лёгкую цепь, содержащую последовательность полипептида ЗЕЦ ГО ΝΟ: 40, и тяжёлую цепь, содержащую последовательность полипептида ЗЕЦ ГО ΝΟ: 41. Указанное моноклональное антитело предпочтительно обладает нейтрализующей активностью подтипов Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А и не обладает нейтрализующей активностью против подтипа Н3 вируса гриппа А. Подтип Н1 включает НДО1, НШ2, НШ3, НШ4,
НШ5, НШ6, НШ7, НШ8 и НШ9, а подтип Н2 включает Н2Ш, Н2Ы2, Н2Ы3, Н2Ы4, Н2Ы5, Н2Ы6,
Н2Ю, 42Ν8 и 42Ν9. Также подтип Н5 включает Н5Ш, Н5Ы2, Н5Ы3, Н5Ы4, Н5Ы5, Н5Ы6, Н5Ы7, Н5№ и 45Ν9.
Фрагментом моноклонального антитела против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению является не целое антитело, а его часть. Он обладает способностью к связыванию с НА вируса гриппа А и включает все фрагменты, которые конкурентно связываются с НА в присутствии моноклонального антитела против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению.
В дополнение, настоящее изобретение включает функциональные варианты моноклонального антитела согласно настоящему изобретению. Если варианты указанного моноклонального антитела способны конкурировать с моноклональным антителом согласно настоящему изобретению за специфическое связывание с подтипами Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А и его фрагментами, они считаются функциональными вариантами моноклонального антитела согласно настоящему изобретению. В частности, если функцио- 4 021977 нальные варианты могут связываться с подтипами Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А или их фрагментами и обладают нейтрализующей активностью против этих подтипов или их фрагментов, они считаются функциональными вариантами моноклонального антитела согласно настоящему изобретению. Функциональные варианты включают производные, которые, по существу, сходны по первичной последовательности, но которые содержат, например, модификации ίη νίίτο или ίη νίνο, химические и/или биохимические, которые отсутствуют в родительском моноклональном антителе согласно настоящему изобретению, но не ограничиваются ими. Такие модификации включают, например, ацетилирование, ацилирование, ковалентное присоединение нуклеотида или производного нуклеотида, ковалентное присоединение липида или производного липида, поперечное связывание, образование дисульфидных связей, гликозилирование, гидроксилирование, метилирование, окисление, пэгилирование, протеолитическую обработку, фосфорилирование и подобные им. В качестве альтернативы функциональными вариантами могут быть моноклональные антитела, содержащие последовательность аминокислот с заменами, вставками, делециями или их комбинациями одной или нескольких аминокислот по сравнению с последовательностью аминокислот родительских моноклональных антител. Кроме того, функциональные варианты могут включать укороченные последовательности аминокислот на любом или на обоих Ν- или С-концах. Функциональные варианты согласно настоящему изобретению могут обладать такими же или другими, либо более высокой, либо более низкой, связывающими способностями по сравнению с родительским моноклональным антителом, но всё же способными к связыванию подтипов Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А или их фрагментами. Например, функциональные варианты согласно настоящему изобретению могут обладать повышенной или пониженной способностью к связыванию подтипов Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А или их фрагментами в сравнении с родительскими связывающими молекулами. Предпочтительны модификации в последовательностях аминокислот вариабельных участков, включая каркасные участки, гипервариабельные участки, в частности участки СЭК3, но такие модификации не ограничиваются ими. Как правило, лёгкая или тяжёлая цепь содержит три гипервариабельных участка, содержащих три СГОК, и более консервативные участки, также называемые каркасные участки (РК). Указанные гипервариабельные участки содержат остатки аминокислот из СОК и остатки аминокислот из гипервариабельных петель. Функциональные варианты входят в рамки настоящего изобретения, если обладают по крайней мере 50-99%, предпочтительно по крайней мере около 60-99%, более предпочтительно по крайней мере около 80-99%, даже более предпочтительно по крайней мере около 90-99%, в частности по крайней мере около 95-99%, в частности по крайней мере 97-99% гомологией последовательности аминокислот с родительским моноклональным антителом, определённом в настоящем описании. Компьютерные алгоритмы, такие как Сар или ВеШТ известные специалисту в данной области техники, могут быть использованы для оптимального выравнивания сравниваемых последовательностей аминокислот и для определения сходных или идентичных остатков аминокислот. Функциональные варианты могут быть получены как путём изменения родительских моноклональных антител, так и их частей с помощью стандартных методов молекулярной биологии, известных специалисту в данной области техники, включая ПЦР, направленный мутагенез с использованием олигонуклеотидов и сайт-специфический мутагенез, или методов органического синтеза.
Настоящее изобретение также предоставляет моноклональное антитело против вируса гриппа А, содержащее лёгкую цепь, содержащую участок СГОКЕ содержащий полипептид, кодированный последовательностью 8ЕС ГО ΝΟ: 23, участок СЭК2, содержащий полипептид, кодированный последовательностью 8ЕС ГО ΝΟ: 18, и участок СЭК3, содержащий полипептид, кодированный последовательностью 8ЕС ГО ΝΟ: 24, и тяжёлую цепь, содержащую участок СЭК1, содержащий полипептид, кодированный последовательностью 8ЕС ГО ΝΟ: 25, участок СОК2, содержащий полипептид, кодированный последовательностью 8ЕС ГО ΝΟ: 26, и участок СГОКЗ, содержащий полипептид, кодированный последовательность 8ЕС ГО ΝΟ: 27.
В настоящем изобретении моноклональное антитело предпочтительно содержит лёгкую цепь, содержащую последовательность полипептида 8ЕС ГО ΝΟ: 38, и тяжёлую цепь, содержащую последовательность полипептида 8ЕС ГО ΝΟ: 39. Указанное моноклональное антитело предпочтительно обладает нейтрализующей активностью подтипов Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А и не обладает нейтрализующей активностью против подтипа Η3Ν2 вируса гриппа А. Подтип Н1 включает Η1Ν1, Η1Ν2, Η1Ν3, Η1Ν4, Η1Ν5, Η1Ν6, Η1Ν7, Η1Ν8 и Η1Ν9, а подтип Н2 включает Η2Ν1, Η2Ν2, Η2Ν3, Η2Ν4, Η2Ν5, Η2Ν6, Η2Ν7, Η2Ν8 и Η2Ν9. Также подтип Н5 включает Η5Ν1, Η5Ν2, Η5Ν3, Η5Ν4, Η5Ν5, Η5Ν6, Η5Ν7, Η5Ν8 и Η5Ν9.
Настоящее изобретение также предоставляет выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую указанное моноклональное антитело против вируса гриппа А. Указанная нуклеиновая кислота согласно настоящему изобретению включает все молекулы нуклеиновой кислоты, полученные трансляцией последовательностей аминокислот указанных антител согласно настоящему изобретению в последовательности полинуклеотидов в соответствии с методами, известными специалисту в данной области техники. Соответственно, множество молекул полинуклеотидов с открытыми рамками считывания (ОРС) могут быть получены, и они также не выходят за рамки молекул нуклеиновых кислот согласно настоящему изобретению.
- 5 021977
Настоящее изобретение также предоставляет вектор экспрессии, содержащий указанную молекулу нуклеиновой кислоты, введённую в него. Указанный вектор экспрессии предпочтительно может быть получен из одного из выбранных из группы, состоящей из вектора экспрессии МагЕх, полученного компанией СеШгюп 1пс. (Корея), коммерческих широкодоступных векторов ρί'.ΌΝΛ. Р, К1, КР1, Со1, рВК322, ТоЬ, Τι; космид; фагов, таких как лямбда, лямбдоид, М13, Ми, Р1, Р22, О μ, Т-еуеп, Т2, Т4, Т7, и др.; вирусов растений, но не ограничивается ими. Любой из множества векторов экспрессии, известных специалисту в данной области техники, может быть использован в настоящем изобретении, и выбор указанного вектора экспрессии зависит от природы выбранной клетки-хозяина. Введение указанного вектора в клетки-хозяева может быть осуществлено посредством трансфекции с использованием фосфата кальция, инфицирования вирусом, трансфекции, осуществляемой с использованием ΌΕΑΕ-декстрана, трансфекции с использованием липофектамина или электропорацией, но не ограничивается указанными методами, и любой специалист в данной области техники может выбрать и использовать метод введения, подходящий для указанного вектора экспрессии и используемой клетки-хозяина. Предпочтительно, чтобы указанный вектор содержал один или несколько маркеров селекции, но не ограничивался ими, при этом также может использоваться вектор, не содержащий маркер селекции. Выбор указанных маркеров селекции может зависеть от выбранной клетки-хозяина, хотя это не является критичным для настоящего изобретения, как это хорошо известно специалистам в данной области техники.
Для осуществления очистки молекулы нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению в указанный вектор экспрессии может быть введена последовательность маркера (1ад). Примеры указанных маркеров включают гексагистидиновый маркер, маркер гемагглютинина, маркер тус или РЬАО, но не ограничиваются ими. В рамках настоящего изобретения может быть использована любая очистка с использованием маркера, известная специалисту в данной области техники.
Настоящее изобретение также предоставляет линию клеток, трансформированных указанным вектором экспрессии, - продуцентов моноклонального антитела против вируса гриппа А.
В настоящем изобретении указанные клетки включают клетки млекопитающих, клетки растений, клетки насекомых, клетки грибов или клетки бактериального происхождения, но не ограничиваются ими. Среди клеток млекопитающих в качестве клеток-хозяев предпочтительно могут быть использованы клетки, выбранные из группы, состоящей из клеток СНО, клеток Ρ2Ν, клеток С8О, клеток ВНК, клеток меланомы Боуэса, клеток НеЬа, клеток 911, клеток АТ1080, клеток А549, клеток НЕК 293 и клеток НЕК 293Т, но не ограничиваются ими. Любая из клеток, используемых специалистом в данной области техники в качестве клеток млекопитающего, может быть использована в настоящем изобретении.
Настоящее изобретение также предоставляет способ скрининга антитела, обладающего нейтрализующей активностью против вируса гриппа А, в пациентах, выздоровевших после инфицирования вирусом гриппа А, при этом указанный способ включает в себя следующие стадии:
1) проверка, полностью ли выздоровел пациент инфицированный вирусом гриппа А, и отбор пациентов, у которых в крови не обнаруживается вирус гриппа А, среди указанных проверенных пациентов;
2) сбор крови у полностью выздоровевших пациентов, отобранных на стадии 1);
3) выделение В-клеток из крови пациентов, собранной на стадии 2);
4) отбор В-клеток, которые производят антитела, связывающие НА, среди В-клеток, полученных на стадии 3);
5) выделение РНК из В-клеток, отобранных на стадии 4);
6) амплификация генов антител из РНК, выделенной на стадии 5);
7) клонирование генов, амплифицированных на стадии 6) в векторы экспрессии;
8) трансфекция клеток-хозяев векторами, полученными на стадии 7);
9) проверка, производят ли клетки-хозяева, трансфицированные на стадии 8), антитела, связывающие НА;
10) выращивание трансфицированных клеток, отобранных на стадии 9);
11) очистка антител, связывающихся с НА вируса гриппа А, из культуры трансфицированных клеток стадии 10);
12) перепроверка, обладают ли антитела, очищенные на стадии 11), нейтрализующей активностью против вируса гриппа А; и
13) повторный отбор антитела, обладающего нейтрализующей активностью против вируса гриппа А, подтверждённой на стадии 12).
Настоящее изобретение также предоставляет композицию, содержащую указанное моноклональное антитело против вируса гриппа А.
Указанная композиция согласно настоящему изобретению может содержать, в дополнение к указанному моноклональному антителу против вируса гриппа А, фармацевтически приемлемый наполнитель. Фармацевтически приемлемые наполнители хорошо известны специалисту в данной области техники.
Настоящее изобретение также предоставляет композицию для профилактики и лечения заболевания, вызванного вирусом гриппа А, содержащую указанное моноклональное антитело против вируса гриппа А.
- 6 021977
Указанная композиция согласно настоящему изобретению может содержать, в дополнение к указанному моноклональному антителу против вируса гриппа А, фармацевтически приемлемый наполнитель. Фармацевтически приемлемые наполнители хорошо известны специалисту в данной области техники.
Также указанная композиция для профилактики и лечения согласно настоящему изобретению может содержать по крайней мере пять других терапевтических агентов против гриппа А. Указанная композиция для профилактики и лечения согласно настоящему изобретению может содержать различные моноклональные антитела, связывающиеся с подтипами Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А или их фрагментами, при этом указанные моноклональные антитела могут проявлять синергетический эффект в отношении нейтрализующей активности.
Также указанная композиция для профилактики и лечения согласно настоящему изобретению дополнительно может содержать один или несколько других терапевтических агентов или диагностических агентов. Указанные терапевтические агенты включают противовирусные лекарства, но не ограничиваются ими. Такие лекарства могут включать антибиотики, малые молекулы, органические и неорганические соединения, ферменты, последовательности полинуклеотидов, противовирусные пептиды и т.д.
Указанная композиция для профилактики и лечения согласно настоящему изобретению должна быть стерильной и стабильной в условиях производства и хранения. Также она может быть в форме порошка для восстановления в подходящем фармацевтически приемлемом наполнителе перед введением или во время него. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекции предпочтительными способами получения являются вакуумная сушка и лиофильная сушка с получением порошка активного ингредиента с добавлением любого дополнительного желаемого ингредиента из его предварительно стерильного отфильтрованного раствора. С другой стороны, указанная композиция согласно настоящему изобретению может быть в виде раствора и указанный фармацевтически приемлемый наполнитель может быть добавлен и/или смешан перед введением или во время него с получением формы единичной дозы для инъекции. Предпочтительно, чтобы указанный фармацевтически приемлемый наполнитель подходил для высокой концентрации лекарства, мог поддерживать нужную текучесть и, если необходимо, мог препятствовать абсорбции.
Выбор оптимального пути введения указанной композиции для профилактики и лечения будет зависеть от нескольких факторов, включающих физико-химические свойства указанных активных молекул в указанной композиции, срочности клинической ситуации и взаимосвязи между концентрацией указанных активных молекул в плазме и желаемым терапевтическим эффектом. Например, указанные моноклональные антитела согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены с носителем, который будет предотвращать их быстрое высвобождение, таким как составы с контролируемым высвобождением, включая имплантаты, трансдермальные пластыри и микрокапсулированные системы доставки. В настоящем изобретении могут быть использованы биодеградируемый, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимер молочной кислоты. Более того, указанное моноклональное антитело может быть покрыто материалом или соединением, предотвращающим инактивацию антитела, или назначаться вместе с ним. Например, указанное моноклональное антитело может вводиться вместе с подходящим носителем, например липосомами, или разбавителем. Пути введения указанной композиции для профилактики и лечения согласно настоящему изобретению могут подразделяться на оральное или парентеральное введение. Предпочтительным путём введения является внутривенный, но не ограничивается только им.
Формы дозирования для орального применения могут быть в виде таблеток, пастилок, леденцов, водных или масляных суспензий, дисперсных порошков или гранул, эмульсий, твёрдых капсул, мягких желатиновых капсул, сиропов или эликсиров, пилюль, драже, жидкостей, гелей или глинистых суспензий. Эти составы могут содержать фармацевтически приемлемые наполнители, включая гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, связующие агенты, лубриканты, предохраняющие вещества, красители, вкусовые агенты или подсластители, растительные или минеральные масла, увлажняющие агенты и загустители.
Составы для парентерального введения могут быть в форме водных или неводных изотонических стерильных нетоксичных растворов или суспензий для инъекций или инфузий. Указанные растворы или суспензии могут содержать агенты, которые не являются токсичными для реципиента в применяемых дозировках и концентрациях, такие как 1,3-бутандиол,раствор Рингера, раствор Хэнка, изотонический раствор хлорида натрия, масла, жирные кислоты, местные анестезирующие агенты, предохраняющие вещества, буферы, агенты, увеличивающие вязкость или растворимость, водорастворимые антиоксиданты, антиоксиданты, растворимые в масле, и металл-хелатирующие агенты.
Настоящее изобретение предоставляет композицию для диагностики вируса гриппа А, которая включает конъюгат, содержащий маркер, конъюгированный с указанным моноклональным антителом против вируса гриппа А.
Указанная композиция для диагностики согласно настоящему изобретению содержит по крайней мере один детектируемый маркер, такой как детектируемая частица/агент. Указанный маркер может быть конъюгирован нековалентным образом с моноклональным антителом согласно настоящему изобре- 7 021977 тению. Указанный маркер также может быть конъюгирован непосредственно с моноклональным антителом посредством ковалентного связывания. С другой стороны, указанный маркер может быть конъюгирован с моноклональным антителом посредством одного или нескольких связывающих агентов. Методики конъюгирования маркера с моноклональным антителом хорошо известны специалисту в данной области техники. Детектируемая частица/агент, используемая в качестве маркера, предпочтительно является выбранной из группы, состоящей из ферментов, простетических групп, флуоресцентных веществ, люминесцентных веществ, биолюминесцентных веществ, радиоактивных веществ, металлов, эмитирующих позитроны и ионов нерадиоактивных парамагнитных металлов, но не ограничиваются ими.
Настоящее изобретение также предоставляет способ лечения заболевания, вызванного вирусом гриппа А, при этом указанный способ включает стадию введения моноклонального антитела против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению субъекту с заболеванием, вызванным вирусом гриппа А.
В указанном способе лечения согласно настоящему изобретению вирусом гриппа А предпочтительно является вирус, выбранный из группы, состоящей из подтипов Η1, Н2 и Н5. Подтип Н1 включает Η1Ν1, Η1Ν2, Η1Ν3, Η1Ν4, Η1Ν5, Η1Ν6, Η1Ν7, Η1Ν8 и Η1Ν9, а подтип Н2 включает Η2Ν1, Η2Ν2, Η2Ν3, Η2Ν4, Η2Ν5, Η2Ν6, Η2Ν7, Η2Ν8 и Η2Ν9. Также подтип Н5 включает Η5Ν1, Η5Ν2, Η5Ν3, Η5Ν4, Η5Ν5, Η5Ν6, Η5Ν7, Η5Ν8 и Η5Ν9.
В указанном способе лечения согласно настоящему изобретению вместе с моноклональным антителом согласно настоящему изобретению может вводиться любой терапевтический агент против заболевания, вызванного вирусом гриппа А, известный специалисту в данной области техники.
В указанном способе лечения согласно настоящему изобретению заболеванием, вызванным вирусом гриппа А, может быть заболевание, выбранное из группы, состоящей из заболеваний, вызванных новым штаммом вируса, пандемического гриппа и сезонного гриппа, но не ограничивается ими.
В указанном способе лечения согласно настоящему изобретению доза моноклонального антитела против вируса гриппа А может подгоняться для достижения оптимального ответа. Указанной дозой является, например, 0,01-200 мг/кг, предпочтительно 0,1-150 мг/кг и более предпочтительно 1-100 мг/кг, но не ограничивается ими. Несколько раздельных доз могут вводиться ежедневно или указанная доза может быть пропорционально снижена в соответствии потребностями ситуации у пациента. Указанная композиция согласно настоящему изобретению может вводиться в виде единичной порции или множественных порций, распределённых в течение суток. Метод введения не ограничен каким-либо образом в настоящем изобретении и может определяться лечащим врачом.
В указанном способе лечения согласно настоящему изобретению метод введения моноклонального антитела против вируса гриппа А может разделяться на оральное введение и парентеральное введение. Предпочтительным методом введения является внутривенное введение, но метод не ограничивается только им.
Настоящее изобретение также предоставляет способ профилактики заболевания, вызванного вирусом гриппа А, при этом указанный способ включает стадию введения субъекту моноклонального антитела против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению.
В указанном способе профилактики согласно настоящему изобретению указанное моноклональное антитело против вируса гриппа А может вводиться вместе с любым агентом, известным специалисту в данной области техники, для профилактики против заболевания, вызванного вирусом гриппа А.
В указанном способе профилактики согласно настоящему изобретению доза моноклонального антитела против вируса гриппа А может подгоняться для достижения оптимального ответа. Указанной дозой является, например, 0,01-200 мг/кг, предпочтительно 0,1-150 мг/кг и более предпочтительно 1-100 мг/кг, но не ограничивается ими. Несколько раздельных доз могут вводиться ежедневно или указанная доза может быть пропорционально снижена в соответствии потребностями ситуации у пациента. Указанная композиция согласно настоящему изобретению может вводиться в виде единичной порции или множественных порций, распределённых в течение суток. Метод введения не ограничен каким-либо образом в настоящем изобретении и может определяться лечащим врачом.
Настоящее изобретение также предоставляет способ диагностики у пациента инфекции, вызванной вирусом гриппа А, при этом указанный способ включает следующие стадии:
1) контактирование образца с моноклональным антителом против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению и
2) детекция реакции между указанным моноклональным антителом и образцом.
В качестве альтернативы указанный способ диагностики может включать следующие стадии:
1) контактирование образца с композицией для детекции согласно настоящему изобретению и
2) детекция реакции между указанной композицией для детекции и образцом.
В способе диагностики согласно настоящему изобретению вирус гриппа А относится к одному или нескольким подтипам, выбранным из группы, состоящей из Η1, Н2 и Н5. Подтип Η1 включает Η1Ν1, Η1Ν2, Η1Ν3, Η1Ν4, Η1Ν5, Η1Ν6, Η1Ν7, Η1Ν8 и Η1Ν9, а подтип Н2 включает Η2Ν1, Η2Ν2, Η2Ν3, Η2Ν4, Η2Ν5, Η2Ν6, Η2Ν7, Η2Ν8 и Η2Ν9. Также подтип Н5 включает Η5Ν1, Η5Ν2, Η5Ν3, Η5Ν4, Η5Ν5, Η5Ν6, Η5Ν7, Η5Ν8 и Η5Ν9.
- 8 021977
В способе диагностики согласно настоящему изобретению моноклональное антитело согласно настоящему изобретению может быть, если необходимо, коньюгировано с маркером для диагностики и детекции в соответствии с любым из методов, известных специалисту в данной области техники.
В способе диагностики согласно настоящему изобретению образцом предпочтительно является образец, выбранный из группы, состоящей из слизи, мокроты, крови, клеток лёгкого, слизь тканей лёгкого, ткани дыхательных путей и слюны, но не ограничиваются ими. Указанный образец может быть приготовлен в соответствии с любым из методов, традиционно используемых специалистами в данной области техники. В способе диагностики согласно настоящему изобретению указанным способом детекции реакции может быть способ, выбранный из группы, состоящей из иммунологического анализа по гомогенному или гетерогенному связыванию, такому как радиоиммунологический анализ (Κ.ΙΑ), ЕЬ1§Л, иммунофлуоресценции, иммуногистохимии, РЛС8, В1ЛСОКЕ и вестерн-блот анализ. Любой метод детекции, известный специалисту в данной области техники, может быть использован в настоящем изобретении.
Настоящее изобретение также предоставляет набор для диагностики вируса гриппа А, содержащий 1) моноклональное антитело против вируса гриппа А согласно настоящему изобретению и 2) контейнер.
В дополнение, настоящее изобретение предоставляет набор для диагностики инфекции, вызванной вирусом гриппа А, содержащий 1) композицию для диагностики вируса гриппа А согласно настоящему изобретению и 2) контейнер.
В указанном наборе для диагностики согласно настоящему изобретению вирусом гриппа А предпочтительно является один или несколько подтипов вируса, выбранных из группы, состоящей из Η1, Н2 и Н5. Подтип Н1 включает Η1Ν1, Η1Ν2, Η1Ν3, Η1Ν4, Η1Ν5, Η1Ν6, Η1Ν7, Η1Ν8 и Η1Ν9, а подтип Н2 включает Η2Ν1, Η2Ν2, Η2Ν3, Η2Ν4, Η2Ν5, Η2Ν6, Η2Ν7, Η2Ν8 и Η2Ν9. Также подтип Н5 включает Η5Ν1, Η5Ν2, Η5Ν3, Η5Ν4, Η5Ν5, Η5Ν6, Η5Ν7, Η5Ν8 и Η5Ν9.
В указанном наборе для диагностики согласно настоящему изобретению поддерживающая опора включена в указанный контейнер 2). Указанное моноклональное антитело согласно настоящему изобретению может быть прикреплено к поддерживающей опоре, и указанная поддерживающая опора может быть пористой или непористой, плоской или неплоской.
Примеры
Пример 1. Выделение РВМС из крови пациентов, выздоровевших от гриппа.
Группа выздоровевших состояла из пациентов-добровольцев по истечении 2-4 недель после подтверждения инфекций новых типов гриппа. У указанных добровольцев подтверждали отсутствие вируса гриппа (Η1Ν1) в их крови и наличие антител против новых типов вируса гриппа. Это исследование осуществляли по разрешению Комитета по ведомственной экспертизе ((Не ΙηδΙίΐΗΐίοηαΙ Рс\зс\у ВоагД, ΙΚΒ). Эта группа пациентов характеризовалась следующим образом:
(1) указанные пациенты не были вакцинированы против сезонного гриппа;
(2) у пациентов не обнаруживались вирусы других инфекций, а именно ΗΒδΑ§, и не обнаруживались антитела против ИСУ и Ηΐν;
(3) у пациентов в плазме методом ОТ-ПЦР не обнаруживался подтип вируса гриппа Η1Ν1;
(4) у пациентов в сыворотке методом ЕЬТЗА обнаруживался титр 1:160 или выше (мономера) ΗΑ(Η1Ν1) подтипа Η1Ν1 вируса гриппа А.
Около 100 мл цельной крови отбирали у добровольцев и одноядерные клетки периферической крови (реЛрЬега1 Ь1ооД топопис1еаг сеШ, РВМС) выделяли из собранной крови с использованием ЬутрНоргер™ (Ах18-§Ые1Д, Норвегия, 1114545). Выделенные РВМС промывали три раза физиологическим раствором с фосфатным буфером, консервировали в концентрации 2х107 клеток/мл в среде для замораживания КМ Ьапкет (СоктоЫо, Япония, КОЫ6092010) и хранили в ёмкости с жидким азотом.
Пример 2. Первичный скрининг моноклональных антител.
В-клетки, секретирующие антигенспецифические антитела, скринировали с использованием метода, описанного Лп е( а1. (Лп А. е( а1., 2009. Ν;·ι( МеД. 15, 1088-1092). Вкратце, РВМС добавляли в каждую лунку подготовленного чипа для микроанализа с плотностью 1 клетка/лунку. Наличие антител, секретируемых единичными клетками, подтверждали с помощью предварительно нанесённых антител против 1§О человека. Секретируют ли отобранные клетки, антитела, связывающие ΗΑ, проверяли с помощью меченых антител против ΗΑ с использованием спот-иммуноанализа с применением ферментов (ЕЬ1§РОТ; 8еДдМск Ι.Ό., 2005, Ме(ЛоД8 Мо1. Вю1. Уо1. 302, р. 314). Полные последовательности генов, кодирующих тяжёлые и лёгкие цепи указанных антител из индивидуальных клеток, секретирующих антитела, получали методом обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР). Полученные ДНК, кодирующие тяжёлые и лёгкие цепи, вводили в векторы экспрессии рсЭКА 3.1 (+) (1пуйтодеп, США, ν790-20) с получением векторов экспрессии, продуцирующих каждую из тяжёлых и лёгких цепей указанных антител. Полученными векторами экспрессии совместно трансфицировали клетки ΤΉΟ. После этого среди антител, полученных из трансфицированных клеток ΟΗΟ, предварительно отобрали 82 антитела, связывающихся с ΗΑ, с использованием метода ΗΑ-ΕΜδΑ, описанного в примере 3. При этом все антитела, реагирующие с ΗΑ, были предварительно проскринированы без последовательных разбавлений образцов указанных антител.
- 9 021977
Пример 3. Вторая стадия скрининга моноклональных антител и их продукция.
Для повторного скринирования моноклональных антител, обладающих высокой связывающей аффинностью к рекомбинантному НА, среди 82 первично отобранных антител проводили НА-ЕПЗА с использованием мономеров НА и тримеров НА.
Рекомбинантный мономер НА (11055-У08Н) вируса гриппа А (А/Калифорния/04/2009) приобрели у компании δίηο Вю1одюа1 1пс. (Китай). Указанный коммерческий мономерный НА состоял из внеклеточного домена НА (тей - д1п529), содержащего 10 полигистидиновых остатков на С-конце, и был получен из трансфицированных клеток человека. Рекомбинантный тример НА (ГР-180) был предоставлен компанией 1РР (ЧпЛиеп/а РеадеШ Реюигсе. США). Тример НА из Н1Ы1 (А/Калифорния/04/2009) содержал сайт расщепления тромбина на С-конце, домен тримеризации (Го16оп) и шесть остатков гистидина и был получен с использованием бакуловирусной системы. Реакционную способность антитела в связывании с НА антигеном измеряли методом ЕПЗА с использованием указанных НА и антитела. В частности, сначала в каждую лунку 96-луночного планшета для микротитрования (Ыипс, Оептатк, 449824) вносили 50 мкл каждого из мономера НА или тримера НА (250 нг/мл). Планшет блокировали физиологическим раствором с фосфатным буфером (Текпоуа, США, Ό5120), содержащим 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА), а затем в каждую лунку планшета добавляли серийные 3-кратные разбавления образцов антитела (начальная концентрация: 1 мкг/мл). Затем указанный планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем обрабатывали меченными пероксидазой антителами козы против гамма-глобулинов человека (2уте6, ИЗА, 62.8420). После инкубации в течение 1 ч при комнатной температуре указанный планшет инкубировали с тетраметилбензидином (ТМВ; Еадта-АИпск США, Т0440) и останавливали указанное инкубированные добавлением 1н. НС1. Измеряли оптическую плотность при 450/570 нм с использованием планшетного сканера (Зрес1татах р1и8 384, Мо1еси1аг ОеНсе) и реакционную способность антиген-антитело отображали в виде графика с использованием программы Старйраб ргйт (СтарЬРаб ЗоП\\аге 1пс. ИЗА). Как показано на фиг. 1, антитела СТ109, СТ111-1 и СТ154-2 показали очень высокие связывающие активности с тримерным НА и также показали высокую активность связывания с мономерным НА, которая была ниже, чем связывающие активности против тримера НА.
Также антитела СТ104, СТ120 и СТ123 показали высокие связывающие активности с тримерным НА, но при этом показали низкую или нулевую активность против мономерного НА (фиг. 2). Другие антитела (СТ137, СТ151 и СТ165) показали низкую активность против этих двух антигенов или не показали такую активность против двух антител (фиг. 3).
На основании результатов, показанных на фиг. 1-3, среди 82 первично отобранных антител вторично были отобраны 35 антител, обладающих высокой активностью против тримера НА. Для того чтобы количественно оценить связывающие активности моноклональных антител и, таким образом, снизить количество моноклональных антител в тесте ΜΝ, было необходимо повысить уровни экспрессии вторично отобранных антител. Поэтому гены, кодирующие указанные антитела, переклонировали с кДНК векторов в векторы экспрессии МагЕх, сконструированные и запатентованные компанией Се11йюп, 1пс., следующим образом. После переклонирования векторы экспрессии МагЕх, содержащие гены указанных антител, использовали для получения антител, требующихся для проведения теста ΜΝ и теста Н1.
Исходные векторы рс^NА, содержащие каждый из генов тяжёлой и лёгкой цепей 35 вторично отобранных антител, обрабатывали ферментами рестрикции ΝΙκΙ и Рте1 для того, чтобы разделить гены тяжёлой цепи и гены лёгкой цепи. Полученные гены тяжёлой цепи и гены лёгкой цепи вводили соответственно в векторы рСТ145 и векторы рСТ147, которые обрабатывали теми же самыми ферментами рестрикции. Векторы рСТ145 и рСТ147 были сконструированы компанией Се111г1оп, 1пс. для получения векторов экспрессии тяжёлой цепи и лёгкой цепи соответственно (фиг. 4). Затем для конструирования векторов экспрессии, содержащих транскрипционную единицу тяжёлой цепи (промотор - ген тяжёлой цепи - поли А) вместе с транскрипционной единицей лёгкой цепи (промотор - ген лёгкой цепи - поли А), векторы рСТ145, содержащие гены тяжёлой цепи, обрабатывали ферментами рестрикции Рас1 и А§с1 для выделения транскрипционных единиц тяжёлой цепи, а затем векторы рСТ147, содержащие гены лёгкой цепи, обрабатывали теми же ферментами рестрикции и внедряли в выделенные транскрипционные единицы тяжёлой цепи. Затем векторы, содержащие транскрипционную единицу тяжёлой цепи вместе с транскрипционной единицей лёгкой цепи, отбирали с использованием ферментов рестрикции (фиг. 5). Проверяемые векторы выделяли с использованием набора ЕпбоГгее ркшшб тах1 кй (О1АСЕК Германия, 12362) и нуклеотидные последовательности анализировали с использованием части выделенных образцов ДНК, определяя, таким образом, последовательность нуклеотидов генов антител. Затем указанными ДНК выделенных антител трансфицировали суспензию линии клеток Ρ2Ν (сконструированных компанией Се111т1оп, 1пс., Корея) для получения моноклональных антител кратковременным способом продукции. Так, указанную трансфекцию проводили следующим способом. Трансфекцию указанных клеток плазмидной ДНК осуществляли с использованием катионного полимера ГтееЗ!у1еТМ Мах (1пуйтодеп, США, 16447-100) в соответствии с инструкцией производителя. За день перед трансфекцией клетки Ρ2Ν, культивированные в среде ЕХ-СЕЛЬ 293 без сыворотки (ЗАГС, Ь1К, 14571С; здесь и далее обозначаемая как среда ЕХ-СЕЛЬ 293), центрифугировали и суспендировали в концентрации 1х106 клеток/мл в модифицированной среде ЕХ-СЕЬЬ 293 (ЗАГС, Ь1К, 65237; изготовлена по заказу) и 80 мл суспензии клеток
- 10 021977 засевали колбы Эрленмейера объёмом 250 мл или 200 мл суспензии клеток засевали колбы Эрленмейера объёмом 1 л в количестве 200 мл. В день трансфекции в случае, когда засевали 80 мл суспензии клеток, каждую из ДНК, кодирующую моноклональное антитело, и 100 мкл реагента РгееЗ1у1еТМ Мах разбавляли в объёме 1,6 мл с использованием среды ОрОРРО 8РМ II (1иуйгодеи, США, 12309) и аккуратно перемешивали. В случае, когда засевали 200 мл суспензии клеток, каждые 250 мкг ДНК и 250 мкг реагента Ргее81у1еТМ Мах разбавляли в объёме 4 мл с использованием среды ΘρίίΡΚΌ 8РМ II и аккуратно перемешивали. Сразу после процесса перемешивания раствор, содержащий реагент Ргее8!у1еТМ Мах, разбавленный в нём, смешивали с раствором, содержащим ДНК, разбавленную в нём, и смешанный раствор инкубировали при температуре окружающей среды в течение 19 мин. В процессе инкубирования при температуре окружающей среды в течение 19 мин засеянные клетки Ρ2Ν разбавляли до концентрации клеток 0,8х106 с использованием свежей модифицированной среды ЕХ-СЕРЬ 293. После инкубирования в течение 19 мин указанный смешанный раствор ДНК и реагента Ргее8!у1еТМ Мах добавляли к культуре клеток Ρ2Ν, подготовленной для трансфекции. Через день после трансфекции такое же количество среды ЕХ-СЕЬЬ 293 добавляли к трансфицированным клеткам, которые затем культивировали в течение 7-8 суток, получая, таким образом, моноклональные антитела.
Пример 4. Проверка ίη νίίτο нейтрализующей активности против вирусов.
Среди отобранных 35 моноклональных антител выбрали 11 антител, которые продемонстрировали высокие аффинности по связыванию с тримером НА в НА-ЕиЗА, и подвергли их тесту МN для проверки их нейтрализующих активностей против различных вирусов гриппа.
Пример 4-1. Культура линии клеток МЭСК и определение концентрации вирусов.
В качестве линии клеток Мадин-Дарби почек собак (МЭСК) использовали лондонскую линию (МОСК-Ь). Указанную линию клеток МОСК культивировали во влажном инкубаторе с 5% СО2 при 37°С с использованием среды ЭМЕМ (С|Ьсо. США, 11965), содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки (АНак Вю1одюа18, США, Р0500А), 1Х пенициллин/стрептомицин (ОЛсо, США, 15140), 25 мМ НЕРЕЗ (ОШсо, США, 15630) и 2 мМ Ь-глутамин (ОШсо, США, 25030).
Концентрацию вирусов количественно оценивали с помощью метода ЕЫЗА для определения средней эффективной дозы в культуре ткани (ТСШ50). Определение концентрации вирусов осуществляли следующим образом. Сначала исходный раствор вируса последовательно разводили в 10 раз разбавителем для вирусов |ЭМЕМ (ОЛсо, США), 3% БСА (О1Ьсо,ИЗА, 15260), 1Х пенициллин/стрептомицин (ОЛсо, США) и 25 мМ НЕРЕЗ (ОЛсо, США)] и 100 мкл разбавленного вируса добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета. В качестве негативного контроля использовали разбавитель для вирусов, не содержащий вирус. Затем указанную линию культивированных клеток МЭСК обрабатывали трипсином, удаляли из инкубатора для культивирования и затем обрабатывали культуральной средой МЭСК для нейтрализации трипсина. Затем осадки этих клеток дважды промывали солевым раствором с фосфатным буфером и разбавляли до концентрации клеток 5х105 клеток/мл разбавителем для вирусов. 3-4 мкг/мл ТРСК-трипсина (Зщша, ИЗА) добавляли в 96-луночный планшет, содержащий вирусы, затем сразу 100 мкл добавляли в линию клеток МЭСК в каждую лунку планшета и инкубировали во влажном инкубаторе с 5% СО2 при 37°С в течение 20 ч. После инкубирования планшет один раз промывали солевым раствором с фосфатным буфером, а затем 200 мкл смешанного раствора холодного ацетона: солевого раствора с фосфатным буфером (РВЗ) (80:20) добавляли в каждую лунку планшета. Затем указанные клетки фиксировали в течение 8 мин, после чего планшет высушивали при температуре окружающей среды в течение 20 мин. 200 мкл солевого раствора с фосфатным буфером добавляли в каждую лунку планшета дважды для промывки. 100 мкл биотинилированных моноклональных антител против ядерного белка (ΝΡ) (МШроге, США, МАВ8257В), разбавленных в 2,000 раз солевым раствором с фосфатным буфером, содержащим 1% БСА, добавляли в каждую лунку планшета и инкубировали при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Планшет промывали три раза 200 мкл/лунку солевым раствором с фосфатным буфером и антитела, конъюгированные со стрептавидином-НКР, разбавляли в 20,000 раз солевым раствором с фосфатным буфером, содержащим 1% БСА. Затем 100 мкл разведённого антитела добавляли в каждую лунку планшета и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. После промывки планшета четыре раза солевым раствором с фосфатным буфером в каждую лунку добавляли 100 мкл раствора ОРЭ (З1дта, США, Р8287) и планшет проявляли при комнатной температуре в течение 10 мин. Планшет обрабатывали 50 мкл/лунку 3 М НС1 для остановки цветного проявления и затем измеряли оптическую плотность ΟΌ490 в каждой лунке. На основании ΟΌ490 рассчитывали ТСГО50 с использованием метода Кееб & Миепсй (Тйе Ашепсап 1938).
Пример 4-2. Тест МК
Каждое антитело разбавляли до концентрации 10 мкг/мл разбавителем для вирусов.
Начиная с этой концентрации, указанное разведение антитела последовательно разбавляли в 2 раза разбавителем для вирусов и 50 мкл каждого разведения добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета. Также 50 мкл вирусов добавляли в каждую лунку планшета в концентрации, соответствующей 100 ТСГО50, и инкубировали во влажном инкубаторе с 5% СО2 при 37°С в течение 1 ч. Затем в каждую лунку добавляли 3-4 мкг/мл ТРСК-трипсина (Зщша, США, Т1426) и 100 мкл обработанных клеток
- 11 021977
ΜΏΟΚ и инкубировали во влажном инкубаторе с 5% СО2 при 37°С в течение 20 ч. Затем проводили тест ΜΝ в соответствии с таким же методом, как при количественной оценке вирусов, описанной в примере 4-1, определяя, таким образом, значение ОЭ490 для каждой лунки. Лунки со значением ΟΏ490 большим, чем такое значение для лунок, содержащих только клетки, как считалось, содержали клетки, инфицированные вирусами. Среди значений ОЭ490 для каждого антитела, при которых не обнаруживался антиген вируса, наименьшие концентрации (мкг/мл) антител приведены в табл. 1, и указанная более низкая концентрация антитела означает более высокую нейтрализующую активность против вируса.
Таблица 1
Результаты теста микронейтрализации (тест ΜΝ), проведённого с использованием отобранных антител и вирусов различных типов
* Единица: мкг/мл.
Как видно из результатов теста ΜΝ для 11 кандидатов антител против вирусов гриппа подтипов Η1, Н2, Н3 и Н5, антитело СТ104 обладало нейтрализующей активностью против вируса гриппа двух пандемических подтипов Η1Ν1 (А/Техас/05/2009 и А/Нью-Йорк/18/2009) и двух сезонных подтипов Η1Ν1 вирусов (А/Соломоновы острова/3/2006 и А/Огайо/83) при низких концентрациях (0,313-0,625 мкг/мл) и также нейтрализовало два вируса подтипа Η5Ν1 (А/Вьетнам/1203/04 и А/Эньхуэй/1/05) при концентрациях 1,25 и 0,625 мкг/мл соответственно. Однако указанное антитело СТ104 не обладало нейтрализующей активностью против вирусов подтипа Η2Ν2 (А/Энн Арбор/6/60са) и подтипа Η3Ν2 вируса (А/Висконсин/67/2005). Антитело СТ123 обладало нейтрализующей активностью только против четырёх протестированных вирусов подтипов Η1Ν1. В частности, антитело СТ120 обладало высокой нейтрализующей активностью против вирусов гриппа четырёх подтипов Η1Ν1, вируса гриппа одного подтипа Η2Ν2 (А/Энн Арбор/6/60 са) и вирусов гриппа двух подтипов Η5Ν1. Однако описанные выше антитела не обладали нейтрализующей активностью против подтипа Η3Ν2, принадлежащего к монофилетическому таксону Η3.
Значения 1С50 трёх выбранных антител, обладающих нейтрализующей активностью против вирусов, были измерены для сравнения, и результаты измерений приведены в табл. 2. Здесь значение 1С50 является концентрацией антитела, при которой указанное антитело проявляет 50% от наивысшей ней- 12 021977 трализующей активности против вирусов, и меньшее значение 1С50 означает большую активность указанного антитела.
Таблица 2
Значения 1С50 нейтрализующих активностей СТ104, СТ120 и СТ123 против вирусов двух пандемических типов Η1Ν1 {Антитело |А/Техас/05/2009-КС 15
I ) { |Концентрация антитела* 1С5о !А/Нью-Йорк/18/2009-К.С18 {Концентрация антитела* ТС50 ·
| {СТ104 | |0.313 мкг/мл | {0.29 мкг/мл | 1.25 мкг/мл | 0.56 мкг/мл | ||
| 1СТ120 | |0.156 мкг/мл | {0.15 мкг/мл | 0.313 мкг/мл | 0.31 мкг/мл | ||
| СТ123 | ίθ.625 мкг/мл | {0.068 мкг/мл | 1.25 мкг/мл | 0.29 мкг/мл |
Замечание. Концентрацией антитела* являются нейтрализующие концентрации антитела, приведённые в табл. 1.
Как видно из табл. 2 выше, указанные три антитела обладали очень низкими значениями 1С50 и поэтому обладали высокой нейтрализующей активностью против двух вирусов, приведённых в табл. 2.
Пример 5. Исследование способности антитела ингибировать реакцию гемагглютинации, вызванной вирусами.
Готовили серийные двукратные разведения антитела в 96-луночном планшете с Т-образным дном, добавляли вирусы в количестве 4 единиц гемагглютинации и смешивали их с антителом. Затем планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего в каждую лунку планшета добавляли 1% птичьих эритроцитов. Конечную точку ингибирования гемагглютинации определяли как самую низкую концентрацию антитела, при которой реакция гемагглютинации полностью отсутствовала.
Результаты показывают, что ни одно из протестированных антител не ингибировало гемагглютинацию для двух пандемических подтипов вируса Η1Ν1 (А/Техас/05/2009-К015 и А/Нью-Йорк/18/2009К.О18) даже в высоких концентрациях (>20 мкг/мл) (табл. 3).
Таблица 3
Результаты ингибирования гемагглютинации для отобранных антител в отношении двух типов пандемического вируса Η1Ν1
| Антитело | А/Техас/05/2009-ΚΌΙ5 | А/Нью-Йорк/ 18/2009-К018 | |
| СТ104 | {> 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл | |
| СТ105 | > 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл | |
| СТ109 | > 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл | |
| СТ111-1 | > 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл | |
| СТ112-1 | ·> 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл | |
| СТ113 | > 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл | |
| СТ119 | > 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл | |
| СТ120 | > 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл | |
| СТ122-1 | > 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл | |
| СТ123 | > 20 мкг/мл | > 20 мкг/мл |
Пример 6. Исследование профилактического и терапевтического влияния антител на вызываемую вирусами гриппа инфекцию в экспериментах на животных.
Пример 6-1. Эксперимент по выживанию мышей.
Для того чтобы определить, оказывают ли антитела СТ104, СТ120 и СТ123, отобранные, как описано в приведенных выше примерах, профилактическим и терапевтическим действием против подтипов Η1Ν1 и Η5Ν1 вируса у мышей, были проведены следующие эксперименты.
Каждую группу, состоящую из пяти мышей, назальным путём инфицировали вирусами в количестве 10хГИ50. За 24 до и через 48 ч после инфицирования вирусами мышам путём интраабдоминальной инъекции вводили каждое из трех отобранных антител (СТ-104, СТ-120 и СТ123) и антитело, представ- 13 021977 ляющее собой отрицательных контроль (СТ-Р6), в количестве 10 мг/кг массы тела мыши.
Результаты экспериментов показаны на фиг. 6. Как показано на фиг. 6, в случаях, когда мышам инъецировали СТ-104 или СТ-120 за 24 ч до инфицирования подтипа Η5Ν1 вируса (А/Вьетнам/1203/2004) в количестве 10хЬЭ50, все мыши выжили, но когда мышам вводили СТ-123, через 12 дней погибло 20% мышей. В случае антитела отрицательного контроля (СТ-Р6), мыши, которым инъецировали антитело отрицательного контроля, погибли через 7 дней (фиг. 6А). В случае, когда антитела инъецировали через 2 дня после инфицирования вирусом с целью исследовать терапевтическое действие антител, все мыши, которым вводили СТ-104 и СТ-120, дожили до 14 дня - последнего дня периода наблюдения, а все мыши, которым инъецировали антитело отрицательного контроля (СТ-Р6) или СТ-123, погибли (фиг. 6В).
В случае, когда антитела вводили за 24 ч до инфицирования пандемическим подтипом вируса Η1Ν1 (А/Калифорния/07/2009)с целью исследования профилактического действия антител, все мыши, которым инъецировали СТ-120 и СТ-123, дожили до 14 дня - последнего дня периода наблюдения, также выжило 80% мышей, которым инъецировали СТ-104, тогда как все мыши, которым инъецировали антитела отрицательного контроля (СТ-Р6), погибли (фиг. 6С).
Кроме того, все мыши, которым вводили СТ-104 или СТ-123 за 24 ч до инфицирования сезонными подтипами вируса Η1Ν1 (А/Пуэрто-Рико/8/1934), выжили в течение периода наблюдения, мыши, которым вводили СТ-120, демонстрировали степень выживаемости 80%, а все мыши, которым вводили антитела отрицательного контроля (антитело СТ-Р6), погибли (фиг. 6Ό).
Пример 6-2. Эксперимент на хорьках.
Для исследования лечебных свойств отобранное антитело СТ120 исследовали в модели на хорьках, которые демонстрируют чувствительность к вирусу гриппа и симптомы при заражении, близкие к наблюдаемым у человека.
Каждая тестируемая группа состояла из 9 хорьков, за исключением группы отрицательного контроля, которая включала дополнительно 4 хорька для измерения исходной концентрации вирусной инфекции. После акклиматизации хорькам интраназально или интратрахеально вводили 1 мл (1х 106 ЕГО50/мл) вируса гриппа [А/Калифорния/04/09 (Η1Ν1)]. СТ120 вводили путём внутривенной инъекции через 24 ч после инокуляции вируса: группе тестирования 1 инъецировали 15 мг/кг СТ120; группе тестирования 2 инъецировали 30 мг/кг СТ120, группе тестирования 3 инъецировали 30 мг/кг СТ120 каждые 24 ч в течение 3 дней. В группе отрицательного контроля 30 мг/кг антитела СТ-Р6 вводили путём внутривенной инъекции однократно через 24 ч после инокуляции вируса.
Собирали назальные смывы каждого хорька из каждой группы тестирования в дни 1, 3, 5 и 8 после инокуляции вируса и измеряли концентрации вируса в собранных образцах с использованием оплодотворённых яиц. 3 хорьков из каждой группы тестирования забивали в дни 1, 3, 5 и 8 после инокуляции вируса и измеряли концентрации вируса в извлеченных тканях лёгкого с использованием оплодотворённых яиц. Каждый образец ткани лёгкого измельчали при помощи гомогенизатора в солевом растворе с фосфатным буфером (РВ8), содержащем антибиотики (1 мл на каждый 1 ткани лёгкого), после чего центрифугировали и отделяли супернатант.
Каждый назальный смыв собирали в 1 мл РВ8, содержащего антибиотики, а затем центрифугировали и отделяли супернатант для измерения концентрации вируса. Затем готовили серийные 10-кратные разведения супернатантов гомогенатов ткани лёгкого или назальных смывов в РВ8, содержащем антибиотики, и после этого инокулировали разведёнными супернатантами 10-13-дневные оплодотворённые яйца. Смеси алонтоисной жидкости (50 мкл) из оплодотворённых яиц, которые инкубировали в течение 48 ч, и такого же объема 0,5% эритроцитов (индюшки) инкубировали в течение 30 мин, после чего титровали вирус по агглютинации крови.
В то время как в контрольной группе титр вируса в назальных смывах оставался высоким (>1од 10,4 ЕГО0/мл) до 5 дня после инокуляции, а затем снижался, в группе, которой вводили антитело СТ120, титр был значительно снижен и в день 8 после инокуляции вирус не обнаруживался (фиг. 7). Таким образом, в группе, получавшей лечение СТ120, наблюдали более быстрый клиренс вируса, чем в контрольной группе. В частности, наблюдали более значительное подавление вируса в группе исследования 3, в которой антитело вводили ежедневно в течение первых 3 дней.
В контрольной группе титр вируса в ткани лёгкого оставался высоким (>1од 4,5 ЕГО50/мл) до дня 5 после инфицирования и затем снижался, а в группе, получавшей СТ120, титр вируса был значительно снижен. В день 8 после инфицирования вирус не обнаруживался (фиг. 8). В частности, эксперимент на хорьках показал, что подавление вируса было более значительным в группах тестирования 2 и 3. Эти результаты демонстрируют, что 30 мг/кг СТ120 более эффективно подавляют пролиферацию вируса, чем дозировка 15 мг/кг.
- 14 021977
Перечень последовательностей <110> СЕЛПТРИОН инк.
<120> моноклональное антитело человека, полученное из в-клеток человека обладающее нейтрализующей активностью против вирусов гриппа А <130> СРР2011003КК <150> ЕА201201116 <151> 07.09.2012 <160> 45 <170> коратепПп 1,71 <210> 1 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело СГ104 участок СОК1 легкой цепи <400> 1 е1п 5ег 1_еи 5ег 5ег 5ег 5ег 1 5 <210> 2 <211> 3 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> антитело СТ104 участок Срк2 легкой цепи <400> 2
С1у А1а 5ег 1 <210> 3 <211> 9 <212> РКТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ104 участок СРКЗ легкой цепи <400> 3
С1п с1п туг с1у Азп 5ег Рго туг тКг
5
- 15 021977 <210> 4 <211> 8 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ104 участок СРК1 тяжелой цепи <400> 4 с1у 01 у тНг ьеи Аап Аап туг д1а 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> РКТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ104 участок СРК2 тяжелой цепи <400> 5
IIе 5ег Рго IIе РНе С1у тНг Ьеи 1 5 <210> 6 <211> 13 <212> РКТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ104 участок сркЗ тяжелой цепи <400> 6
А1а Агд С1у Суэ С1у туг Аап суа туг туг РНе Аар с1у 1 5 10 <210> 7 <211> 6 <212> РКТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 участок СОК1 легкой цепи <400> 7
С1и Аап 11е тгр Аап Аап 1 5 <210> 8 <211> 9
- 16 021977 <212> РКТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 участок сокЗ легкой цепи <400> 8
6ΐη с1п Туг Азп Зег Тгр Рго Агд ТЬг 1 5 <210> 9 <211> 8 <212> РИТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 участок СРК1 тяжелой цепи <400> 9
С1у уа1 РЬе РЬе зег Зег нтз А1а 1 5 <210> 10 <211> 8 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 участок С0К2 тяжелой цепи <400> 10 ίίе зег рго мет РЬе сТу тЬг тЬг 1 5 <210> 11 <211> 16 <212> РКТ <213> искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ120 участок СОКЗ тяжелой цепи <400> 11
А1а Агд Азр с1у А1а б!у Зег туг Туг Рго Ьеи азп Тгр РЬе Азр Рго 15 10 15 <210> 12 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность
- 17 021977 <22О>
<223> Антитело СТ123 участок СОК1 легкой цепи <400> 12 б1п 5ег Уа1 5ег 11е 5ег туг 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ123 участок СОКЗ легкой цепи <400> 13 е1п с1п туг с1у 5ег $ег Рго туг ТКг 1 5 <210> 14 <211> 8 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ123 участок СОК1 тяжелой цепи <400> 14
С1у РНе тКг рКе 5ег дгд рНе С1у 1 5 <210> 15 <211> 8 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ123 участок сиз2 тяжелой цепи <400> 15
11е Тгр Туг Азр С1у 5ег Азп 1_уз 1 5 <210> 16 <211> 20 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
- 18 021977
| <223> | Антитело СТ123 участок | сокз тяжелой цепи | |
| <400> | 16 | ||
| д!а 1_уз | Азр Зег Агд б1у Туг Суз | Зег 5ег 11е 11е Суз | РКе б1и С1у |
| 1 | 5 | 10 | 15 |
| С1у Ьеи | Азр АЗП |
<210> 17 <211> 21 <212> ϋΝΑ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ104 участок СРК1 легкой цепи <400> 17 сададтстта дсадсадсСс с 21 <210> 18 <211> 9 <212> ϋΝΑ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СГ104 участок СРК2 легкой цепи <400> 18 ддтдсатсс 9 <210> 19 <211> 27 <212> ϋΝΑ <213> Искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ104 участок СэкЗ легкой цепи <400> 19 еадсадтагд ддаастсасс дтасасд 27 <210> 20 <211> 21 <212> ϋΝΑ <213> искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ104 участок СРК1 тяжелой цепи
- 19 021977 <400> 20 ддаддсассс ГсаасаасТа ΐ 21 <210> 21 <211> 24 <212> ΟΝΑ <213> искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ104 участок СОИ2 тяжелой цепи <400> 21 ассадссс1а ссГГТдддас атта 24 <210> 22 <211> 39 <212> ΟΝΑ <213> АПтПстаТ Зециепсе <220>
<223> Антитело СТ104 участок СОКЗ тяжелой цепи <400> 22 дсдададдст д1ддстасаа тсдстассас ЫТдасддд 39 <210> 23 <211> 18 <212> ϋΝΑ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 участок СОК1 легкой цепи <400> 23 дадаатастс ддаасаас 18 <210> 24 <211> 27 <212> ϋΝΑ <213> искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ120 участок СОКЗ легкой цепи <400> 24 садсадсата аттсдтддсс тсддасд 27 <210> 25
- 20 021977 <211> 24 <212> ϋΝΑ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 участок СОК1 тяжелой цепи <400> 25 ддадтсттсг тсадсадтса тдст 24 <210> 26 <211> 24 <212> ϋΝΑ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 участок сок 2 тяжелой цепи <400> 26 атсадссста ТдСТГддаас ааса 24 <210> 27 <211> 48 <212> ΟΝΑ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 участок сокЗ тяжелой цепи <400> 27 дсдсдтдатд дтдсддддад ттаттатсса стсаастддт Тсдасссс 48 <210> 28 <211> 21 <212> ϋΝΑ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ123 участок Сок1 легкой цепи <400> 28 сададтдтта дсатсадста с 21 <210> 29 <211> 9 <212> ϋΝΑ <213> Искусственная последовательность <220>
- 21 021977 <223> Антитело СТ123 участок СОК2 легкой цепи <400> 29 ддсдсассс 9 <210> 30 <211> 27 <212> ΟΝΑ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ123 участок СОКЗ легкой цепи <400> 30 садсадтатд дтадстсасс дтасаст 27 <210> 31 <211> 24 <212> ϋΝΑ <213> искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ123 участок сок! тяжелой цепи <400> 31 ддапсасст тсадтаддтт тддс 24 <210> 32 <211> 24 <212> 0ΝΑ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ123 участок сок2 тяжелой цели <400> 32 атасддтасд асддаадтаа сааа 24 <210> 33 <211> 60 <212> ϋΝΑ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ123 участок СОКЗ тяжелой цепи <400> 33 дсдааадатг сссдсддаса «дтадгадг атсашдтс сгдадддддд асггдасаас 60
- 22 021977 <210> 34 <211> 708 <212> ΟΝΑ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ104 легкая цепь нуклеотидной последовательности <400> 34
| ахддааассс | садсдсадсх | хсхсххссхс | схдсхасхсх | ддсхсссада | Хассассдда | 60 |
| даааххдхдх | хдасдсадхс | хссаддсасс | схдхсхххдх | схссадддда | аададссасс | 120 |
| схсхссхдса | дддссадхса | дадхсххадс | адсадсхссх | ХадХсХддХа | ссадсадааа | 180 |
| ссхддссадд | схсссаддсх | ссхсахсхах | ддхдсахсса | дсадддссас | ХддсаХссса | 240 |
| дасаддххса | дхддсадхдд | дхсхдддаса | дасххсасхс | хсассахсад | садасхддад | 300 |
| ссхдаадахх | ххдсадхдха | ххасхдхсад | садхахддда | асхсассдха | сасдхххддс | 360 |
| саддддассс | аддххдадах | сааасдаасх | дхддсхдсас | сахсхдхсхх | сахсххсссд | 420 |
| ссахсхдахд | адсадххдаа | ахсхддаасх | дссхсхдххд | ХдХдссхдсХ | даахаасххс | 480 |
| хахсссадад | аддссааадх | асадхддаад | дхддахаасд | сссхссаахс | дддхаасхсс | 540 |
| саддададхд | хсасададса | ддасадсаад | дасадсассх | асадссхсад | садсасссхд | 600 |
| асдсхдадса | аадсадасха | сдадааасас | ааадхсхасд | ссхдсдаадх | сасссахсад | 660 |
| ддссхдадсх | сдсссдхсас | ааададсххс | аасаддддад | адхдххад | 708 |
<210> 35 <211> 1410 <212> ϋΝΑ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ104 тяжелая цепь нуклеотидной последовательности <400> 35
| ахддасхдда | ссхддаддхх | ссхсхххдхд | дхддсадсад | схасаддхдх | ссадхсссад | 60 |
| дхдсадсхдд | хдсадхсхдд | ддсхдаддхд | аадаадссхд | ддХссХсддХ | дааддХсХсс | 120 |
| хдсааддсхх | схддаддсас | ссхсаасаас | хахдсхахса | дсхдддхдсд | асаддссссх | 180 |
| ддасаадддс | ххдадхддах | дддадддахс | адсссхахсх | ХХдддасаХХ | ааасхасдса | 240 |
| дададдххсс | адддсададх | сассаххасс | дсддасдхах | ххасдаасас | адхсхасахд | 300 |
| дадсхдадса | дссхдадахс | Хдаддасасд | дссдхдхахх | ХсХдхдсдад | аддххдхддс | 360 |
- 23 021977
| тасааххдхх | асхасхххда | сдддхддддс | садддаассс | ХддХсассдХ | ххссхсадсс | 420 |
| хссассаадд | дсссахсддх | схтссссстд | дсассстсст | ссаададсас | схсхдддддс | 480 |
| асадсддссс | хдддсхдссх | ддТсааддас | ХасХХссссд | аассддтдас | ддТдТсдТдд | 540 |
| аасхсаддсд | сссхдассад | сддсдхдсас | ассХТсссдд | стдтссХаса | дхссхсадда | 600 |
| схсхасхссс | хсадсадсдх | ддхдассдхд | сссхссадса | дсхтдддсас | ссадассхас | 660 |
| ахсхдсаасд | Хдаахсасаа | дсссадсаас | ассааддхдд | асаадааадх | хдадсссааа | 720 |
| ТсХХдТдаса | ааастсасас | атдсссассд | хдсссадсас | схдаасхссх | ддддддассд | 780 |
| хсадхсххсс | тсттсссссс | аааасссаад | дасассстса | хдахсхсссд | дассссхдад | 840 |
| дхсасахдсд | Хддхддхдда | сдтдадссас | даадассссд | аддхсаадхх | саасхддхас | 900 |
| дхддасддсд | хддаддхдса | хаахдссаад | асааадссдс | дддаддадса | дхасаасадс | 960 |
| асдхассдхд | хддхсадсдх | сстсассдтс | схдсассадд | асхддсхдаа | хддсааддад | 1020 |
| ХасаадХдса | аддхсхссаа | сааадсссхс | ссадссссса | Хсдадаааас | сахсхссааа | 1080 |
| дссааадддс | адссссдада | ассасаддхд | ХасасссХдс | ссссахсссд | ддахдадсхд | 1140 |
| ассаадаасс | аддХсадссХ | дассХдссХд | дХсаааддсХ | ТсХаХсссад | сдасахсдсс | 1200 |
| дхддадхддд | ададсаахдд | дсадссддад | аасаастасэ | адассасдсс | хсссдхдсхд | 1260 |
| дасХссдасд | дсхссххсхх | ссхсХасадс | аадсхсассд | хддасаадад | саддХддсад | 1320 |
| саддддаасд | хсххсхсахд | схссдхдахд | сахдадддхс | хдсасаасса | сХасасдсад | 1380 |
| аададссхсх | сссхдхсхсс | дддхааахда | 1410 |
<210> 36 <211> 235 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ104 легкая цепь пептидной последовательности <400> 36
| Мех | 01 и | ТНг | РГО | А1а | С1п | Ьеи | ьеи | РЬе | ьеи | Ьеи | Ьеи | Ьеи | тгр | ьеи | Рго |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| АЗр | тНг | ТНг | 01у | С1и | Пе | Уа1 | ьеи | тНг | С1п | Бег | Рго | С1у | тНг | Ьеи | Бег |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| ьеи | 5ег | рго | С1у | С1и | Агд | А1а | тНг | Ьеи | Бег | Суз | Агд | А1а | Бег | С1п | Бег |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| ьеи | 5ег | Бег | Бег | Бег | Ьеи | Уа1 | тгр | туг | б!п | С1п | Ьуз | Рго | С1у | с!п | А1а |
55 60
- 24 021977
| РГО | Агд | Ьеи | (_еи | 11е | Туг | С1у | А1а | Зег | зег | Агд | А1а | ТКг | с7у | 11е | Рго |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| АЗр | Агд | рКе | 5ег | 01 у | 5ег | о1у | 5ег | о1у | тКг | А5р | рКе | тКг | 1_еи | тКг | 11 е |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| 5ег | Агд | |_еи | 01 и | РГО | С1и | А5Р | РКе | А1а | Уа1 | туг | Туг | Суз | Οίη | 01п | Туг |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| с!у | АЗП | зег | РГО | туг | тКг | РКе | с!у | 01л | 01 у | тКг | οίη | Уа1 | 01 и | Не | ьуз |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Агд | ТКг | Уа1 | А1а | А1а | РГО | 5ег | Уа1 | РКе | Не | РКе | Рго | РГО | Зег | АЗр | С1и |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| С1п | 1_еи | ЬУ5 | 5ег | О1у | тКг | А1а | Зег | Уа1 | Уа1 | суз | 1_еи | Ьеи | Азп | АЗП | РКе |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| туг | Рго | Агд | с!и | А1а | Ьуз | Уа1 | οίη | тгр | ьуз | Уа1 | Азр | А5П | А1а | Ьеи | с!п |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| 5ег | С1у | АЗП | 5ег | ΟΙ η | О1и | 5ег | Уа1 | ТКг | С1и | Οίη | Азр | Зег | 1_уз | Азр | 5ег |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| тКг | Туг | Зег | 1_еи | Зег | Зег | тКг | 1_еи | ТКг | 1_еи | Зег | Суз | А1а | АЗр | туг | 01и |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| 1-У5 | НТ 5 | ьуз | Уа1 | туг | А1а | СУ5 | 01 и | Уа1 | тКг | НТ 5 | о1п | 01 у | |.еи | Зег | Зег |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| РГО | уа! | ТКг | ьуз | Зег | рКе | АЗП | Агд | С1у | С1и | СУ 5 | |||||
| 225 | 230 | 235 |
<210> 37 <211> 469 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ104 тяжелая цепь пептидной последовательности <400> 37
| мет | Азр | тгр | тКг | тгр | Агд | РКе | Ьеи | РКе | Уа1 | Уа1 | А1а | А1а | А1а | тКг | с1у |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Уа1 | Οίη | 5ег | οίη | Уа1 | С1п | ίβυ | Уа1 | 01 п | Зег | 01 у | А1а | С1и | Уа1 | туз | 1.У5 |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| РГО | С1у | Зег | Зег | Уа1 | 1_уз | Уа1 | 5ег | суз | Ьуз | А1а | Зег | С1у | С1у | ТКг | Ьеи |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| А5П | АЗП | Туг | А1а | ίί е | Зег | Тгр | Уа1 | Агд | о1п | А1а | Рго | 01 у | Οίη | 01 у | Ьеи |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| с1и | тгр | мет | с!у | 01 у | 11 е | 5ег | РГО | 11е | РКе | С1у | ТКг | |_еи | АЗП | Туг | А1а |
| 65 | 70 | 75 | 80 |
| с!и | Агд РЬе о1п | с! у 85 | Агд уа! тЬг 11е ТЬг А1а Азр 90 | уа! | РЬе | тЬг 95 | А5П | ||||||||
| ТЬг | Уа! | Туг | Ме1 | С1и | ьеи | 5ег | 5ег | 1_еи | Агд | бег | с! и | Азр | ТЬг | А1а | Уа1 |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| туг | РЬе | Суз | А1а | Агд | С1у | Суз | С1у | Туг | АЗП | Суз | Туг | Туг | р|те | Азр | С! у |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| тгр | С1у | С1п | С1у | ТЬг | 1_еи | Уа1 | ТЬг | Уа! | бег | бег | а! а | бег | тЬг | ЬУ5 | С! у |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| РГО | 5ег | Уа! | РЬе | РГО | 1_еи | А! а | РГО | бег | бег | |_уз | бег | тЬг | бег | С1у | б! у |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| тЬг | А1а | А1а | 1_еи | С1у | суз | |_еи | Уа1 | 1-УЗ | Азр | туг | рЬе | Рго | с! и | рго | Уа1 |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| тЬг | уа1 | бег | Тгр | АЗП | бег | С1у | А1а | 1_еи | ТЬг | бег | е!у | уа! | НТ 5 | тЬг | РЬе |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Рго | А! а | Уа! | 1_еи | С1п | 5ег | бег | с! у | 1_еи | Туг | бег | 1_еи | бег | бег | уа! | Уа1 |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| ТЬг | Уа1 | РГО | бег | бег | бег | Ьеи | б1у | тЬг | б!п | ТЬг | туг | 11е | Суз | АЗП | Уа! |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| АЗП | НТЗ | ьуз | РГО | бег | АЗП | тЬг | ьуз | Уа! | АЗр | ьуз | иуз | Уа! | с! и | РГО | ьуз |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| 5ег | Суз | А5р | 1-уз | тЬг | Нт 5 | ТЬг | Суз | Рго | Рго | Суз | РГО | А1а | Рго | с! и | Ьеи |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| |_еи | С1у с!у | Рго | бег | Уа1 | РЬе | Ьеи | рЬе | РГО | Рго | ьуз | РГО | А5р | ТЬг | ||
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Ьеи | Μβΐ | 11 е | 5ег | Агд | ТЬг | Рго | с! и | Уа! | ТЬг | Суз | Уа! | Уа1 | Уа1 | Азр | Уа! |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| бег | НТЗ | С1и | Азр | РГО | С1и | Уа1 | ьуз | РЬе | АЗП | тгр | туг | уа! | Азр | С! у | Уа! |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| е1и | Уа! | Нт 5 | АЗП | А1а | 1_уз | ТЬг | РГО | Агд | С1и | С1и | С1п | Туг | АЗП | бег | |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| тЬг | Туг | Агд | уа! | уа! | бег | уа! | ьеи | тЬг | Уа1 | 1_еи | Нт 5 | с!п | Азр | Тгр | 1_еи |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| АЗП | С1у | 1у5 | С1ц | туг | ьуз | Суз | Ьуз | Уа1 | бег | АЗП | Ьуз | А! а | 1_еи | РГО | А! а |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| РГО | 11е | €1и | Ьуз | тЬг | Пе | бег | 1_уз | А1а | 1.уз | С1у | е!п | РГО | Агд | с1и | Рго |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| с! η | Уа1 | Туг | ТЬг | 1_еи | РГО | РГО | бег | Агд | Азр | С! и | ьеи | ТЬг | 1-уз | АЗП | 6! η |
| 370 | 375 | 380 |
- 26 021977
| Уа1 5ег ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 | ьуз | о1у РЬе туг Рго зег Азр 11е А1а | |||||||||||||
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| Уа1 | 01 и | тгр | С1и | Зег | А5П | 01 у | 01 η | Рго | 01 и | АЗП | Азп | туг | ьуз | тНг | тКг |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| РГО | РГО | Уа1 | Ьеи | Азр | Зег | А5р | 01 у | зег | РЬе | рКе | ьеи | туг | зег | Ьуз | ьеи |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| ТЬг | ча1 | АЗр | Ьуз | Зег | Агд | ТГр | 01 η | С1п | 01 у | Азп | Уа1 | рЬе | зег | Суз | зег |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| Уа1 | меь | Н15 | 01 и | 01 у | ьеи | Н15 | АЗП | Н15 | Туг | ТЬг | 01 п | ьуз | Зег | ьеи | зег |
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| ьеи | 5ег | Рго | 01 у | ьуз |
465 <210> 38 <211> 705 <212> ΩΝΑ <213> искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 легкая цепь нуклеотидной последовательности <400> 38
| ахддаадссе | садсхсадсх | хсхсххссхс | схдсхасхсх | ддсхсссада | хассассдда | 60 |
| даааххдхдх | хдасасадхс | хссадссасс | ххдхсхххдх | схссадддда | аададссасс | 120 |
| схсхссхдса | дддссадхда | даахахххдд | аасаасххдд | ссхддхасса | дсааааассх | 180 |
| ддссаддсхс | ссаддсхссх | сахсхсхддх | дсдхссассд | дддссасхдд | хдхсссаадх | 240 |
| аддХХХадад | дсадсдддхс | Хаддасадаа | ХХсасХсХса | ссаХсадсад | ссхдсадхсх | 300 |
| даадаххххд | саахххаххх | схдхсадсад | хахааххсдх | ддссхсддас | дххсддссса | 360 |
| дддассаадд | хддадахсаа | асдаасхдхд | дсхдсассах | схдхсххсах | сХХсссдсса | 420 |
| ХсХдаХдадс | адХХдаааХс | ХддаасХдсс | ХсХдХХдХдх | дссхдсхдаа | ХаасХХсХах | 480 |
| сссадададд | ссааадхаса | дхддааддхд | дахаасдссс | хссаахсддд | хаасхсссад | 540 |
| дададхдхса | сададсадда | садсааддас | адсассхаса | дссхсадсад | сасссхдасд | 600 |
| схдадсааад | садасхасда | дааасасааа | дхсхасдссх | дсдаадхсас | ссахсадддс | 660 |
| схдадсхсдс | ссдхсасааа | дадсххсаас | аддддададх | дххад | 705 |
<210> 39 <211> 1419 <212> ΟΝΑ <213> искусственная последовательность
- 27 021977 <220>
<223> Антитело СТ120 тяжелая цепь нуклеотидной последовательности <400> 39
| ахддасхдда | ссхддаддхх | ссхсхххдхд | дтддсадсад | схасаддхдх | ссадхдссад | 60 |
| дХдсадсХдд | хдсадхсхдд | ддсХдаддхд | аадахдссхд | ддхссхсддх | дааддхсхсс | 120 |
| хдсаадасхх | схддадхсхх | сххсадсадх | сахдсхахса | дххдддхдсд | асаддссссх | 180 |
| ддасаадддс | ххдадхддах | дддадддахс | адсссХаХдХ | ХХддаасаас | асасхасдса | 240 |
| садаадххсс | адддсададх | сасдаххасс | дсддассаах | ссасдассас | адссхасахд | 300 |
| дадххдасса | дхсххасахс | хдаддасасд | дссдхахахх | асхдхдсдсд | хдахддхдсд | 360 |
| дддадххахх | ахссасхсаа | схддххсдас | сссхддддсс | адддаасссх | ддхсассдхс | 420 |
| хссхсадссх | ссассааддд | сссахсддхс | ххсссссхдд | сасссхссхс | саададсасс | 480 |
| хсхдддддса | садсддсссх | дддсхдссхд | дхсааддасх | асххссссда | ассддхдасд | 540 |
| дХдХсдХдда | асхсаддсдс | ссхдассадс | ддсдхдсаса | ссххсссддс | ХдХссХасад | 600 |
| хссхсаддас | хсхасхсссх | садсадсдхд | дхдассдхдс | ссхссадсад | сххдддсасс | 660 |
| садассхаса | хсхдсаасдх | даассасаад | сссадсааса | ссааддхдда | саадададхх | 720 |
| дадсссааах | сххдхдасаа | аасхсасаса | хдсссассдх | дсссадсасс | ХдаасХссХд | 780 |
| дддддассдх | садхсххссх | сххсссссса | ааасссаадд | асасссхсах | дахсхсссдд | 840 |
| ассссхдадд | хсасахдсдх | ддхддхддас | дхдадссасд | аадасссхда | ддхсаадххс | 900 |
| аасхддхасд | хддасддсдх | ддаддХдсаХ | аахдссаада | сааадссдсд | ддаддадсад | 960 |
| Хасаасадса | сдхассдхдх | ддхсадсдхс | схсассдхсс | Хдсассадда | схддсхдаах | 1020 |
| ддсааддадх | асаадхдсаа | ддхсхссаас | ааадсссхсс | садсссссах | сдадаааасс | 1080 |
| ахсхссааад | ссааадддса | дссссдадаа | ссасаддХдХ | асасссХдсс | сссахсссдд | 1140 |
| дахдадсхда | ссаадаасса | ддхсадссхд | ассхдссхдд | ХсаааддсХХ | сХаХсссадс | 1200 |
| дасахсдссд | хддадхддда | дадсаагддд | садссддада | асаасхасаа | дассасдссх | 1260 |
| сссдхдсхдд | асхссдасдд | схссххсххс | схсхасадса | адсхсассдх | ддасаададс | 1320 |
| аддхддсадс | аддддаасд1 | сххсхсахдс | ХссдхдаХдс | ахдадддхсх | дсасаассас | 1380 |
| Хасасдсада | ададссхсхс | сстдтстссд | ддхааахда | 1419 |
<210> 40 <211> 234 <212> РИТ
- 28 021977 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Антитело СТ120 легкая цепь пептидной последовательности
| <400> | 40 А1а | Рго | А1а 01п Ьеи ьеи РЬе ьеи Ьеи ьеи Ьеи тгр Ьеи Рго | |||
| мет 1 | С1и | |||||
| 5 | 10 | 15 | ||||
| Азр | ТЬг | ТЬг | 01 у | С1и Не | Уа1 Ьеи ТЬг С1п 5ег | Рго А1а ТЬг Ьеи Зег |
| 20 | 25 | 30 | ||||
| ьеи | зег | РГО | С1у | С1и Агд | А1а тЬг ьеи 5ег суз | Агд А1а 5ег С1и Азп |
| 35 | 40 | 45 | ||||
| Не | Тгр | Азп | Азп | Ьеи А1а | Тгр Туг С1п С1п Ьу5 | Рго С1у С1п А1а Рго |
| 50 | 55 | 60 | ||||
| дгд | ьеи | ьеи | Не | Зег 01у | А1а зег тЬг 01у А1а | тЬг С1у Уа1 Рго Зег |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||
| Агд | РЬе | Агд | С1у | Зег С1у | зег дгд тЬг с1и РЬе | тЬг ьеи тЬг 11е зег |
| 85 | 90 | 95 | ||||
| Зег | ьеи | С1п | зег | О1и Азр | РЬе д1а 11е туг РЬе | Суз 01п С1п Туг Азп |
| 100 | 105 | 110 | ||||
| Зег | тгр | Рго | Агд | ТЬг РЬе | б1у Рго С1у ТЬг Ьуз | \/а1 01 и 11 е Ьуз Агд |
| 115 | 120 | 125 | ||||
| ТНг | νβΐ | А1а | А1а | рго 5ег | уа1 РЬе 11е РЬе рго | рго Зег Азр о1и С1п |
| 130 | 135 | 140 | ||||
| Ьеи | ьуз | зег | С1 у | ТЬг А1а | зег Уа1 Уа1 суз ьеи | Ьеи Азп Азп РЬе Туг |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||
| Рго | Агд | 01и | А1а | Ьу5 Уа1 | Οΐπ Тгр Ьуз Уа1 Азр | Азп А1а Ьеи с!п Зег |
| 165 | 170 | 175 | ||||
| С1у | Азп | Зег | С1п | С1и Зег | Уа1 тЬг с1и 01 п Азр | Зег Ьуз Азр зег тЬг |
| 180 | 185 | 190 | ||||
| туг | 5ег | ьеи | 5ег | 5ег ТЬг | ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз | А1а Азр Туг С1и Ьуз |
| 195 | 200 | 205 | ||||
| НТ 5 | ЬУ5 | ха! | туг | А1а Суз | б1и Уа1 тЬг нтз с!п | с!у ьеи зег 5ег рго |
| 210 | 215 | 220 | ||||
| Уа1 | тЬг | ьуз | зег | РЬе дзп | дгд с!у с!и суз | |
| 225 | 230 | |||||
| <210> | 41 | |||||
| <211> | 472 | |||||
| <212> | РКТ | |||||
| <213> | искусственная последовательность |
- 29 021977 <22О>
<223> Антитело СТ120 тяжелая цепь пептидной последовательности <400> 41
| мес Азр тгр 1 | ТНг | тгр 5 | Агд РНе ьеи РНе уа1 10 | Уа1 | д1а | А1а | А1а тНг 15 | 01 у | |||||||
| Уа1 | Οίη | суз | 01 п | Уа1 | οίη | Ьеи | Уа1 | Οίη | зег | о1у | А1а | о1и | Уа1 | ьуз | Μβΐ |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Рго | о!у | 5ег | Зег | Уа1 | ьуз | Уа1 | Зег | суз | ьуз | тНг | 5ег | о1у | Уа1 | РНе | РНе |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Зег | зег | НТ 5 | А1а | т!е | Зег | тгр | νβΐ | дгд | οίη | д1а | рго | 01 у | 01 η | 01 у | ьеи |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| 01 и | тгр | меь | 01 у 01У | 11е | Зег | рго | меЬ | РНе | 01у | тНг | тНг | Нтз | Туг | А1а | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| 01 η | ьуз | рпе | 01 п | 01 у | Агд | Уа1 | тНг | Пе | тНг | А1а | А5р | 01 η | зег | тНг | ТНг |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| ТНг | А1а | туг | нет | о1и | Ьеи | тНг | зег | ьеи | тНг | Зег | о1и | Азр | тНг | А1а | уа1 |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| туг | туг | Су5 | А1а | Агд | Азр | с!у | д!а | с1у | Зег | туг | туг | Рго | Ьеи | Азп | тгр |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| РНе | А5р | Рго | Тгр | С1у | οίη | с1у | ТНг | ьеи | Уа1 | тНг | Уа1 | зег | Зег | д1а | зег |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| ТНг | ЬУЗ | О1у | Рго | Зег | Уа1 | РНе | Рго | ьеи | А1а | Рго | Зег | зег | ьуз | 5ег | тНг |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| 5ег | О1у 01 у | ТНг | А1а | А1а | ьеи | о1у | суз | Ьеи | Уа1 | ьуз | Азр | туг | РНе | Рго | |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| 01и | Рго | Уа1 | ТНг | Уа1 | Зег | тгр | АЗП | Зег | О1у | д1а | ьеи | тНг | зег | о1у | уа1 |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| НТЗ | ТНг | РНе | Рго | А1а | уа1 | ьеи | οίη | Зег | Зег | 01 у | ьеи | туг | зег | Ьеи | зег |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Зег | Уа1 | Уа1 | тНг | Уа1 | Рго | Зег | Зег | зег | Ьеи | О1у | тНг | οίη | тНг | Туг | 11е |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Суз | Азп | νβΐ | Азп | Нт 5 | ьуз | Рго | Зег | АЗП | тНг | ьуз | Уа1 | Азр | ьуз | Агд | νβΐ |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| 01и | Рго | ЬУЗ | Зег | суз | Азр | ьуз | тНг | нтз | тНг | суз | Рго | Рго | суз | рго | А1а |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| РГО | О1и | ьеи | Ьеи | О1у О1у | Рго | Зег | Уа1 | РНе | ьеи | РНе | Рго | Рго | ьуз | Рго | |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Ьуз | АЗр | тНг | Ьеи | мет | 11е | зег | Агд | тНг | Рго | о!и | Уа1 | ТНг | суз | уа! | Уа1 |
| 275 | 280 | 285 |
- 30 021977
| Уа! Азр Уа1 290 | Зег | нт 5 | б!и Азр 295 | Рго б!и Уа1 | ьуз | РНе А5П 300 | Тгр | туг | Уа1 | ||||||
| АЗР | 61 у | Уа! | б!и | Уа1 | НТ 5 | АЗП | А) а | ьуз | ТЬг | ьуз | РГО | Агд | б1и | С1и | с! л |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| туг | АЗЛ | 5ег | тНг | туг | Агд | Уа1 | Уа1 | зег | Уа1 | Ьеи | ТКг | Уа1 | Ьеи | нтз | 61л |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Азр | Тгр | ьеи | Азп | е1у | ьуз | с1и | туг | ьуз | суз | ьуз | Уа! | 5ег | Азп | ьуз | А1а |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| ьеи | РГО | А1а | Рго | Пе | б1и | Ьуз | ТНг | Пе | Зег | ьуз | А1а | ьуз | б!у | <31П | РГО |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Агд | б1и | рго | 61 л | Уа1 | туг | ТЬг | Ьеи | РГО | Рго | Зег | Агд | Азр | С1и | ьеи | тКг |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| ЬуЗ | АЗЛ | С1л | Уа1 | Зег | Ьеи | ТЬг | суз | ьеи | уа! | ьуз | 61 у | Рпе | Туг | РГО | 5ег |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| АЗр | 11е | А1а | Уа1 | с1и | Тгр | 61 и | Зег | АЗЛ | б1у | 6ΐη | РГО | б1и | Азп | АЗП | Туг |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| Ьу5 | тНг | ТКг | Рго | Рго | Уа1 | Ьеи | Азр | Зег | Азр | б1у | зег | Рпе | РКе | ьеи | туг |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| 5ег | ЬУ5 | Ьеи | ТНг | уа! | Азр | ьуз | 5ег | Агд | тгр | 61 η | б1п | б1у | АЗП | Уа1 | Рпе |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| 5ег | суз | 5ег | Уа1 | мет | нт 5 | б!и | б1у | Ьеи | НТ 5 | АЗП | нтз | туг | тКг | 61л | ьуз |
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| зег | Ьеи | Зег | Ьеи | 5ег | рго | С1у | ьуз | ||||||||
| 465 | 470 |
<210> 42 <211> 708 <212> ΡΝΑ <213> искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СГ123 легкая цепь нуклеотидной последовательности <400> 42
| атддааассс | садсдсадст | тстсттсстс | стдстастст | ддстсссада | тассассдда | 60 |
| дааастдтдт | ТдасдсадТс | тссаддсасс | стдтстттдт | сТссадддда | аададссасс | 120 |
| стстсстдса | дддссадтса | дадтдттадс | атсадстает | тадсстддта | ссадсддааа | 180 |
| сстддссадд | сТсссаддсТ | сстсатстат | ддсдсатсса | ддадддссас | ТддсаТссса | 240 |
| дасаддттса | дтддсадтдд | дтстдддаса | дасттсастс | тсассатсад | садастддад | 300 |
| сстдаадатт | ТТдсадТаТа | ТТасТдТсад | садТаТддТа | дсТсассдТа | сасТТТТддс | 360 |
| саддддасса | адстддадат | сааасдааст | дтддстдсас | сатстдтстт | сатсттсссд | 420 |
- 31 021977
| ссатстдатд адсадххдаа ахсхддаасх дссхстдттд хдхдссхдсх даахаасххс | 480 |
| Хатсссадад аддссааадх асадхддаад дхддахаасд сссхссаахс дддхаасхсс | 540 |
| саддададХд хсасададса ддасадсаад дасадсасст асадссхсад садсасссхд | 600 |
| асдсХдадса аадсадасХа сдадааасас ааадХсХасд ссХдсдаадХ сасссаХсад | 660 |
| ддссХдадсХ сдсссдТсас ааададсХХс аасаддддад адХдХХад | 708 |
<210> 43 <211> 1431 <212> ϋΝΑ
| <213> Искусственная последовательность <220> <223> Антитело СТ123 тяжелая цепь нуклеотидной последовательности | ||||||
| <400> 43 ахддадхххд ддстдадстд | ддттттсстс | дттдстсттт | таададдтдт | ссадтдтсад | 60 | |
| дТдсадсхдд | хддадхсхдд | дддаддсдтд | дтссадсстд | ддаддтссст | дадастстсс | 120 |
| ХдХдсадсдт | схддаххсас | сттсадтадд | тттддсатсс | астдддтссд | ссаддстсса | 180 |
| ддсааддддс | ХддадХддаХ | ддсадттата | ТддТасдаТд | даадтаатаа | аттстатдса | 240 |
| дасхссдхда | адддссдахх | сассатстсс | ададасаатт | ссаадаасас | ддтттатстд | 300 |
| сааахдааса | дсстсададс | сдаддасасд | дстдтсТахт | астдтдсдаа | адаттсссдс | 360 |
| ддататтдта | дтадтатсат | ттдттттдад | дддддасттд | асаастдддд | ссадддаасс | 420 |
| схддхсассд | тстсстсадс | етссассаад | ддсссатсдд | тсттссссст | ддсасссхсс | 480 |
| Хссаададса | сстстддддд | сасадсддсс | стдддстдсс | тддтсаадда | схасххсссс | 540 |
| даассддХда | сддтдтсдтд | даастсаддс | дссстдасса | дсддсдтдса | сассххсссд | 600 |
| дсхдхссхас | адТссТсадд | асТсТасТсс | стсадсадсд | тддтдассдт | дсссхссадс | 660 |
| адсххдддса | сссадасста | сатстдсаас | дтдаатсаса | адсссадсаа | сассааддХд | 720 |
| дасаададад | ттдадсссаа | атсттдтдас | аааастсаса | сатдсссасс | дхдсссадса | 780 |
| сстдаасХсс | ^дддэадасс | дтсадтсттс | СТСТТССССС | саааасссаа | ддасасссХс | 840 |
| ахдахсхссс | ддасссстда | ддтсасатдс | дТддТддТдд | асдтдадсса | сдаадасссх | 900 |
| даддХсаадХ | тсаастддта | сдтддасддс | дтддаддтдс | атаатдссаа | дасааадссд | 960 |
| сдддаддадс | адтасаасад | сасдтассдт | дтддтсадсд | тсстсассдт | ссхдсассад | 1020 |
| дастддсХда | атддсаадда | дтасаадтдс | ааддтстсса | асааадссст | сссадссссс | 1080 |
- 32 021977
| атсдадаааа | ссахстссаа | адссаааддд | садссссдад | аассасаддх | дхасасссхд | 1140 |
| сссссахссс | дддахдадсх | дассаадаас | саддхсадсс | хдассхдссх | ддхсаааддс | 1200 |
| ХХсХаХссса | дсдасаХсдс | сдХддадХдд | дададсааХд | ддсадссдда | даасаасхас | 1260 |
| аадассасдс | схсссдхдсТ | ддасхссдас | ддсхссттст | ХсстсХасад | саадсхсасс | 1320 |
| дхддасаада | дсаддхддса | дсаддддаас | дхсххстсах | дсхссдхдах | дсатдадддх | 1380 |
| стдсасаасс | асхасасдса | даададссхс | хсссхдтстс | сдддхааахд | а | 1431 |
<210> 44 <211> 235 <212> РИТ <213> Искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ123 легкая цепь пептидной последовательности <400> 44
| мех 1 | 01 и | тЬг рго | А1а 01 η ьеи ьеи РЬе Ьеи ьеи ьеи ьеи тгр Ьеи рго | ||||||||||||
| 5 | 10 | 15 | |||||||||||||
| Азр | ТЬг | тЬг | О1у | С1и | ТЬг | уа1 | ьеи | тЬг | 01п | Зег | рго | 01 у | тЬг | ьеи | Зег |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| ьеи | зег | РГО | О1у | 01 и | Агд | А1а | тЬг | Ьеи | зег | Суз | Агд | А1а | зег | С1п | зег |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| УаТ | 5ег | 11е | 5ег | туг | Ьеи | А1а | тгр | туг | 01 п | Агд | ьуз | РГО | 01 у | 01 п | А1а |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| РГО | Агд | ьеи | Ьеи | Пе | Туг | 01 у | А1а | Зег | Агд | Агд | А1а | ТЬг | 01 у | Пе | РГО |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| АЗр | Агд | РЬе | Зег | 01 у | Зег | о1у | Зег | с1у | тЬг | Азр | РЬе | тЬг | Ьеи | ТЬг | Не |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| эег | Агд | Ьеи | 01и | Рго | О1и | Азр | РЬе | А1а | Уа1 | туг | Туг | СУ5 | 01 η | 01 η | туг |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| о1у | Зег | 5ег | Рго | туг | тЬг | РЬе | 01У | С1п | 01 у | ТНг | ьуз | Ьеи | 01 и | Пе | ьуз |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Агд | тЬг | Уа1 | А1а | А1а | Рго | Зег | Уа1 | РЬе | Не | РЬе | Рго | рго | зег | Азр | 01 и |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| ΟΐΠ | Ьеи | ьуз | Зег | с1у | ТЬг | А1а | Зег | уа! | Уа1 | суз | Ьеи | Ьеи | АЗП | АЗП | РЬе |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| туг | Рго | Агд | О1и | А1а | ьуз | Уа1 | 01 η | тгр | Ьуз | Уа1 | Азр | Азп | А1а | ьеи | 01п |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Зег | с!у | АЗП | Зег | 01 η | О1и | Зег | νβΐ | тЬг | 01 и | О1п | Азр | 5ег | Ьуз | Азр | зег |
180 185 190
| ТЬг | туг | Зег | Ьеи | 5ег | Зег | ТЬг | Ьеи | ТЬг | ьеи | 5ег | ьуз | а! а | Азр | туг б!и |
| 195 | 200 | 205 | ||||||||||||
| ЬУ5 | НТ 5 | ЬУ5 | Уа! | Туг | А! а | Суз | б1и | Уа! | ТЬг | НТ 5 | 6ΐη | б!у | Ьеи | Зег 5ег |
| 210 | 215 | 220 | ||||||||||||
| Рго | Уа! | тЬг | ьуз | зег | РЬе | АЗП | Агд | 61 у | с! и | Суз | ||||
| 225 | 230 | 235 |
<210> 45 <211> 476 <212> РКТ <213> искусственная последовательность <22О>
<223> Антитело СТ123 тяжелая цепь пептидной последовательности <400> 45
| мет б1и 1 | рЬе б1у ьеи 5 | Зег | тгр уа! | РЬе Ьеи уа! 10 | А! а | ьеи | ьеи | Агд 15 | б!у | ||||||
| Уа! | 61 п | Суз | б1п | Уа! | б!п | ьеи | Уа1 | б1и | Зег | б!у б!у б!у | Уа1 | Уа! | 61 п | ||
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| РГО | 61 у | Агд | зег | Ьеи | Агд | ьеи | Зег | Суз | а! а | А! а | Зег | б1у | РЬе | тЬг | РЬе |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Зег | Агд | РЬе | б1у | Пе | НТ 5 | тгр | Уа1 | Агд | б!п | а! а | Рго | б1у | ьуз | б1у | Ьеи |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| 61 и | Тгр | МеТ | А1а | Уа! | Пе | тгр | Туг | Азр | 61 у | 5ег | АЗП | ьуз | РЬе | туг | А1а |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Азр | зег | уа! | ьуз | б1у | Агд | РЬе | тЬг | Пе | Зег | Агд | АЗр | АЗП | зег | ьуз | АЗП |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| тЬг | Уа1 | туг | ьеи | 6ΐη | мет | АЗП | Зег | Ьеи | Агд | А1а | б!и | А5р | ТЬг | А1а | Уа! |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| туг | туг | суз | А1а | ьуз | Азр | зег | Агд | С1у | туг | суз | Зег | 5ег | ί! е | Пе | Суз |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| РЬе | б!и | с! у С1у | ьеи | Азр | Азп | тгр | б1у | с! η | б1у | тЬг | Ьеи | уа1 | тЬг | Уа! | |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| зег | Зег | А1а | Зег | ТЬг | ьуз | б!у | Рго | 5ег | Уа1 | РЬе | Рго | Ьеи | а! а | Рго | Зег |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Бег | ьуз | Зег | ТЬг | Зег | б!у б!у | ТЬг | А! а | А! а | ьеи | б1у | суз | ьеи | Уа1 | Ьуз | |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Азр | туг | РЬе | Рго | С1и | РГО | Уа! | ТЬг | Уа! | Зег | тгр | АЗП | зег | 61 у | А1а | ьеи |
| 180 | 185 | 190 |
- 34 021977
| ТНг Бег с!у | Уа1 | НТЗ | тНг | РНе | РГО 200 | а! а Уа! | сеи | <з!п | Бег Бег <з1 у 205 | сеи | |||||
| 195 | |||||||||||||||
| Туг | Бег | 1_еи | Бег | 5ег | уа! | Уа1 | ТНг | Уа1 | РГО | Бег | Бег | Бег | Ьеи | <31 у | ТНг |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| <з1п | ТНг | Туг | ίί е | суз | АЗП | Уа! | Азп | нтз | ьуз | РГО | Бег | АЗП | тНг | ьуз | Уа1 |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Азр | Ьуз | Агд | Уа1 | С1и | Рго | суз | Бег | Суз | Азр | суз | ТНг | НТЗ | ТНг | суз | РГО |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| РГО | Суз | РГО | а! а | РГО | <31 и | Сеи | сеи | с!у | с! у | Рго | Бег | Уа1 | РНе | Сеи | рНе |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| РГО | рго | ьуз | рго | суз | Азр | тНг | сеи | мет | 11е | Бег | Агд | тНг | Рго | <з1и | Уа1 |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| тНг | СУЗ | уа! | Уа1 | уа! | АЗР | Уа! | Бег | нтз | <31 и | Азр | РГО | с! и | уа! | суз | рНе |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| АЗП | тгр | туг | уа! | Азр | <31 у | Уа! | <3! и | Уа1 | НТ 5 | Азп | А1а | суз | тНг | суз | рго |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Агд | б1и | с1и | б1п | туг | АЗП | Бег | тНг | туг | Агд | уа! | уа! | Бег | Уа! | цеи | тНг |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Уа1 | Сеи | НТ 5 | с1п | Азр | тгр | Ьеи | АЗП | с! у | ьуз | <з!и | туг | суз | суз | суз | Уа1 |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Бег | Азп | ьуз | А1а | ьеи | Рго | А1а | Рго | 11е | С1и | суз | ТНг | 11 е | Бег | суз | а! а |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Ьу® | <з!у | С1п | РГО | лгд | <31 и | РГО | <з!п | уа1 | туг | тНг | ьеи | РГО | РГО | Бег | лгд |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| АЗр | С1и | Сеи | тНг | ЬУ5 | АЗЛ | с1п | Уа1 | Бег | Сеи | тНг | Су5 | сеи | Уа1 | ьуз | <з1у |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| рНе | туг | РГО | Бег | Азр | ίί е | А1а | уа! | с! и | тгр | с!и | Бег | АЗП | <з1у | <31 п | РГО |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| <31 и | АЗП | АЗП | туг | ЬУ5 | тНг | тНг | РГО | РГО | Уа! | сеи | Азр | Бег | Азр | <31 у | Бег |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| РНе | РНе | Сеи | туг | Бег | суз | ьеи | ТНг | Уа1 | АЗр | суз | Бег | Агд | тгр | С1п | <з!п |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| <з1у | А5П | Уа! | рНе | Бег | суз | Бег | Уа! | мет | НТЗ | <з!и | <31 у | Сеи | НТЗ | Азп | НТЗ |
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| туг | тНг | с1п | 1-У5 | Бег | ьеи | Бег | сеи | Бег | РГО | <з1у | Суз | ||||
| 465 | 470 | 475 |
- 35 021977
Claims (22)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Моноклональное антитело против вируса гриппа А, включающее в себя следующие аминокислотные последовательности лёгкой и тяжёлой цепей:лёгкая цепь, имеющая участок СЭК1, содержащий последовательность ЗЕО ГО КО: 7, участок СГОК2, содержащий последовательность ЗЕО ГО КО: 2, и участок СЭК3, содержащий последовательность ЗЕО ГО КО: 8; и тяжёлая цепь, имеющая участок СИК1, содержащий последовательность ЗЕО ГО КО: 9, участок СГОК2, содержащий последовательность ЗЕО ГО КО: 10, и участок СГОК3, содержащий последовательность ЗЕО ГО КО: 11.
- 2. Моноклональное антитело против вируса гриппа А по п.1, отличающееся тем, что указанное моноклональное антитело включает в себя лёгкую цепь, содержащую последовательность ЗЕО ГО КО: 40, и тяжёлую цепь, содержащую последовательность ЗЕО ГО КО: 41.
- 3. Моноклональное антитело против вируса гриппа А по п.2, отличающееся тем, что указанное моноклональное антитело обладает нейтрализующей активностью против подтипов Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А.
- 4. Моноклональное антитело против вируса гриппа А, включающее в себя лёгкую цепь, содержащую участок СГОКЕ кодируемый последовательностью ЗЕО ГО КО: 23, участок СГОК2, кодируемый последовательностью ЗЕО ГО КО: 18, и участок СГОК3, кодируемый последовательностью ЗЕО ГО КО: 24; и тяжёлую цепь, содержащую участок СГОКЕ кодируемый последовательностью ЗЕО ГО КО: 25, участок СГОК2, кодируемый последовательностью ЗЕО ГО КО: 26, и участок СГОК3, содержащий полипептид, кодируемый последовательностью ЗЕО ГО КО: 27.
- 5. Моноклональное антитело против вируса гриппа А по п.4, отличающееся тем, что указанное моноклональное антитело включает в себя лёгкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, кодируемую последовательностью ЗЕО ГО КО: 38; и тяжёлую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, кодируемую последовательностью ЗЕО ГО КО: 39.
- 6. Моноклональное антитело против вируса гриппа А по п.5, отличающееся тем, что указанное моноклональное антитело обладает нейтрализующей активностью против подтипов Н1, Н2 и Н5 вируса гриппа А.
- 7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая моноклональное антитело против вируса гриппа А по п.1.
- 8. Вектор экспрессии, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п.7.
- 9. Линия клеток-продуцентов моноклонального антитела против вируса гриппа А, содержащих вектор экспрессии по п.8, трансфицированный в указанные клетки.
- 10. Линия клеток-продуцентов по п.9, отличающаяся тем, что указанной клеткой-продуцентом является клетка, выбранная из группы, состоящей из клеток СНО, клеток Р2К и клеток НЕК 293.
- 11. Композиция для профилактики и лечения заболевания, вызванного вирусом гриппа А, которая содержит моноклональное антитело против вируса гриппа А по любому из пп.1 и 4.
- 12. Композиция для диагностики вируса гриппа А, которая включает в себя конъюгат, содержащий маркер, конъюгированный с моноклональным антителом против вируса гриппа А по любому из пп.1 и 4.
- 13. Композиция по п.12, отличающаяся тем, что указанным маркером является маркер, выбранный из группы, состоящей из ферментов, люцифераз и радиоактивных изотопов.
- 14. Способ лечения заболевания, вызванного вирусом гриппа А, включающий стадию введения моноклонального антитела против вируса гриппа А по любому из пп.1 и 4 субъекту с указанным заболеванием.
- 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанным вирусом гриппа А является вирус одного или нескольких подтипов, выбранных из группы, состоящей из Н1, Н2 и Н5.
- 16. Способ профилактики заболевания, вызываемого вирусом гриппа А, включающий стадию введения субъекту моноклонального антитела против вируса гриппа А по любому из пп.1 и 4.
- 17. Способ диагностики у пациента инфекции вируса гриппа А, включающий следующие стадии:1) контактирование образца с моноклональным антителом против вируса гриппа А по любому из пп.1 и 4;2) детектирование реакции между указанным моноклональным антителом и указанным образцом путем иммунологического анализа по гомогенному или гетерогенному связыванию, выбранного из группы, состоящей из радиоиммунологического анализа (К1А), ЕЫЗА, иммунофлуоресценции, иммуногистохимии, РАСЗ, ВШСОКЕ и вестерн-блот анализа.
- 18. Способ диагностики у пациента инфекции вируса гриппа А, включающий следующие стадии:1) контактирование образца с композицией для диагностики вируса гриппа А по п.12;2) детектирование реакции между указанным моноклональным антителом и указанным образцом путем иммунологического анализа по гомогенному или гетерогенному связыванию, выбранного из группы, состоящей из радиоиммунологического анализа (К1А), ЕЫЗА, иммунофлуоресценции, иммуноги- 36 021977 стохимии, РЛС8, ВIΑСΟКЕ и вестерн-блот анализа.
- 19. Способ по п.17 или 18, отличающийся тем, что указанным вирусом гриппа А является вирус одного или нескольких подтипов, выбранных из группы, состоящей из Н1, Н2 и Н5.
- 20. Набор для диагностики вируса гриппа А, содержащий:1) моноклональное антитело против вируса гриппа А по любому из пп. 1 и 4;2) контейнер, содержащий твердый носитель, к которому прикреплено моноклональное антитело против вируса гриппа А по любому из пп. 1 и 4.
- 21. Набор для диагностики вируса гриппа А, содержащий:1) композицию для диагностики вируса гриппа А по п.12;2) контейнер, содержащий твердый носитель, к которому прикреплена композиция для диагностики вируса гриппа А по п. 12.
- 22. Набор по п.20 или 21, отличающийся тем, что указанным вирусом гриппа А является вирус одного или нескольких подтипов, выбранных из группы, состоящей из Н1, Н2 и Н5.- 37 021977- 38 021977- 39 021977
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20100020587 | 2010-03-08 | ||
| PCT/KR2011/001563 WO2011111966A2 (en) | 2010-03-08 | 2011-03-07 | Human monoclonal antibodies derived from human b cells and having neutralizing activity against influenza a viruses |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201201116A1 EA201201116A1 (ru) | 2013-03-29 |
| EA021977B1 true EA021977B1 (ru) | 2015-10-30 |
Family
ID=44563977
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201400855A EA201400855A1 (ru) | 2010-03-08 | 2011-03-07 | Моноклональные антитела человека, полученные из в-клеток человека и обладающие нейтрализующей активностью против вирусов гриппа а |
| EA201201116A EA021977B1 (ru) | 2010-03-08 | 2011-03-07 | Моноклональные антитела человека, полученные из в-клеток человека и обладающие нейтрализующей активностью против вирусов гриппа а |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201400855A EA201400855A1 (ru) | 2010-03-08 | 2011-03-07 | Моноклональные антитела человека, полученные из в-клеток человека и обладающие нейтрализующей активностью против вирусов гриппа а |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9573991B2 (ru) |
| EP (3) | EP2545074A4 (ru) |
| JP (1) | JP5795340B2 (ru) |
| KR (1) | KR101297784B1 (ru) |
| CN (1) | CN102791734B (ru) |
| AU (2) | AU2011225044B2 (ru) |
| CA (2) | CA2790949C (ru) |
| EA (2) | EA201400855A1 (ru) |
| IL (1) | IL221760A (ru) |
| MX (1) | MX338758B (ru) |
| WO (1) | WO2011111966A2 (ru) |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2010234849B2 (en) | 2009-03-30 | 2017-06-22 | Mount Sinai School Of Medicine | Influenza virus vaccines and uses thereof |
| MX342716B (es) | 2010-02-18 | 2016-10-11 | Sinai School Medicine | Vacunas para su uso en la profilaxis y tratamiento de la enfermedad del virus de influenza. |
| CA2792537A1 (en) | 2010-03-30 | 2011-10-06 | Mount Sinai School Of Medicine | Influenza virus vaccines and uses thereof |
| EP4241785A3 (en) * | 2011-09-20 | 2023-09-27 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | Influenza virus vaccines and uses thereof |
| KR101514682B1 (ko) * | 2011-09-30 | 2015-04-23 | (주)셀트리온 | 인간 ｂ 세포에서 생산된 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 활성을 가지는 결합 분자 |
| KR20130059721A (ko) * | 2011-11-29 | 2013-06-07 | (주)셀트리온 | 인간 ｂ 세포에서 생산된 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 활성을 가지는 결합 분자 |
| EP2785737A2 (en) | 2011-12-02 | 2014-10-08 | AIMM Therapeutics B.V. | Influenza a virus specific antibodies |
| WO2013089496A1 (ko) * | 2011-12-15 | 2013-06-20 | (주)에이프로젠 | H1n1-감염된 환자들로부터 유도된 매우 잠재력 있는 넓은-스펙트럼 중화 단일클론 항체 및 이를 포함하는 바이러스의 치료용 조성물 |
| US9969794B2 (en) | 2012-05-10 | 2018-05-15 | Visterra, Inc. | HA binding agents |
| US9834594B2 (en) * | 2012-09-07 | 2017-12-05 | Celltrion, Inc. | Human monoclonal antibodies derived from human B cells and having neutralizing activity against influenza A viruses |
| CA2890669A1 (en) | 2012-11-13 | 2014-05-22 | Genetech, Inc. | Anti-hemagglutinin antibodies and methods of use |
| MX2015007755A (es) | 2012-12-18 | 2016-01-14 | Icahn School Med Mount Sinai | Vacunas contra virus de la influenza y sus usos. |
| WO2014159960A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Antibodies against influenza virus hemagglutinin and uses thereof |
| KR20140118682A (ko) * | 2013-03-29 | 2014-10-08 | (주)셀트리온 | 2 이상의 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 조성물 |
| JPWO2015025900A1 (ja) * | 2013-08-23 | 2017-03-02 | 学校法人藤田学園 | 抗インフルエンザウイルス中和抗体 |
| CN112877472A (zh) * | 2013-11-07 | 2021-06-01 | 小利兰·斯坦福大学理事会 | 用于分析人体微生物组及其组分的无细胞核酸 |
| US20160304586A1 (en) * | 2013-12-05 | 2016-10-20 | Crucell Holland B.V. | Process for preparing influenza vaccines |
| WO2016010160A1 (ja) * | 2014-07-18 | 2016-01-21 | 国立感染症研究所長が代表する日本国 | 抗インフルエンザウイルス抗体及びその利用 |
| US20180008702A1 (en) * | 2014-12-05 | 2018-01-11 | Celltrion Inc. | Adjuvant composition containing at least one influenza virus neutralizing and binding molecule and vaccine composition containing same |
| WO2016089181A1 (ko) * | 2014-12-05 | 2016-06-09 | (주)셀트리온 | 1 이상의 인플루엔자 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 애주번트 조성물 및 이를 포함하는 백신 조성물 |
| TWI702229B (zh) | 2014-12-19 | 2020-08-21 | 美商再生元醫藥公司 | 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體 |
| JP2018504412A (ja) | 2015-01-23 | 2018-02-15 | アイカーン スクール オブ メディシン アット マウント サイナイ | インフルエンザウイルスワクチン接種レジメン |
| US9890206B2 (en) * | 2015-08-20 | 2018-02-13 | Medigen Biotechnology Corporation | H1N1 flu virus neutralizing antibodies |
| EP3374390A1 (en) | 2015-11-13 | 2018-09-19 | Visterra, Inc. | Compositions and methods for treating and preventing influenza |
| CA3023143A1 (en) | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Influenza virus hemagglutinin proteins and uses thereof |
| CN109803640B (zh) * | 2016-08-10 | 2022-01-04 | 赛特瑞恩股份有限公司 | 稳定的液体抗流感病毒抗体医药调配物 |
| US20180169780A1 (en) * | 2016-12-19 | 2018-06-21 | Anvil International, Llc | Cleanline threader |
| CA3058652A1 (en) | 2017-04-07 | 2018-10-11 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Anti-influenza b virus neuraminidase antibodies and uses thereof |
| JP7403733B2 (ja) | 2017-09-04 | 2023-12-25 | 国立感染症研究所長 | インフルエンザｈａスプリットワクチンの製造方法 |
| JP7372925B2 (ja) | 2018-01-26 | 2023-11-01 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | インフルエンザヘマグルチニンに対するヒト抗体 |
| TWI688653B (zh) * | 2018-01-30 | 2020-03-21 | 長庚醫療財團法人林口長庚紀念醫院 | 人源抗腸病毒７１型單株抗體的製法、產物及其應用 |
| KR20200060969A (ko) * | 2018-11-23 | 2020-06-02 | (주)셀트리온 | 인플루엔자 바이러스 질환을 치료하기 위한 투여 요법 |
| JP2022521819A (ja) | 2019-03-25 | 2022-04-12 | ビステラ， インコーポレイテッド | インフルエンザを処置および予防するための組成物および方法 |
| EP4212548A4 (en) | 2020-09-08 | 2024-04-17 | Novelgen Co., Ltd. | ANTIVIRAL COMPOSITION AGAINST INFLUENZA A VIRUS |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100040635A1 (en) * | 2008-03-28 | 2010-02-18 | Sea Lane Biotechnologies | Neutralizing antibodies to influenza viruses |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090068637A1 (en) | 2006-01-26 | 2009-03-12 | Ningshao Xia | Monoclonal antibodies binding to avian influenza virus subtype h5 haemagglutinin and use thereof |
| CN101541832B (zh) * | 2006-09-07 | 2014-11-12 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 能中和流感病毒h5n1的人结合分子及其应用 |
| WO2008028946A2 (en) * | 2006-09-07 | 2008-03-13 | Crucell Holland B.V. | Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus h5n1 and uses thereof |
| WO2009079259A2 (en) * | 2007-12-06 | 2009-06-25 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antibodies against influenza virus and methods of use thereof |
| CA2733218A1 (en) | 2008-07-25 | 2010-01-28 | Institute For Research In Biomedicine | Neutralizing anti-influenza a virus antibodies and uses thereof |
-
2011
- 2011-03-07 MX MX2012010406A patent/MX338758B/es active IP Right Grant
- 2011-03-07 EP EP11753571.6A patent/EP2545074A4/en not_active Withdrawn
- 2011-03-07 EA EA201400855A patent/EA201400855A1/ru unknown
- 2011-03-07 EA EA201201116A patent/EA021977B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-03-07 CN CN201180013223.6A patent/CN102791734B/zh active Active
- 2011-03-07 CA CA2790949A patent/CA2790949C/en active Active
- 2011-03-07 CA CA2849668A patent/CA2849668A1/en not_active Abandoned
- 2011-03-07 EP EP16175875.0A patent/EP3098236A1/en active Pending
- 2011-03-07 EP EP14181741.1A patent/EP2860190A3/en not_active Withdrawn
- 2011-03-07 KR KR1020110020061A patent/KR101297784B1/ko active IP Right Grant
- 2011-03-07 JP JP2012556968A patent/JP5795340B2/ja active Active
- 2011-03-07 US US13/583,529 patent/US9573991B2/en active Active
- 2011-03-07 AU AU2011225044A patent/AU2011225044B2/en active Active
- 2011-03-07 WO PCT/KR2011/001563 patent/WO2011111966A2/en active Application Filing
-
2012
- 2012-09-03 IL IL221760A patent/IL221760A/en active IP Right Grant
-
2013
- 2013-07-19 AU AU2013207641A patent/AU2013207641B2/en active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100040635A1 (en) * | 2008-03-28 | 2010-02-18 | Sea Lane Biotechnologies | Neutralizing antibodies to influenza viruses |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| FRIESEN, R.H.E. et al., "New class of monoclonal antibodies against severe influenza: prophylactic and therapeutic efficacy in ferrets". PLoS One, 8 February 2010, vol. 5, Issue 2, e9106. See the abstract, figure 2 and materials and methods * |
| HANSON, B. et al., "Passive immunoprophylaxis and therapy with humanized monoclonal antibody specific for influenza A H5 hemagglutinin in mice". Respiratory Research, 14 October 2006, vol. 7, Issue 126. See the whole document * |
| HIFUMI E. et al. "Characteristic features of InfA-15 monoclonal antibody recognizing H1, H3 and H5 subtypes of hemagglutinin of influenza virus A type". Journal of Bioscience and Bioengineering, 2 March 2010, vol. 109, No 6, pages 598-608. See the whole document * |
| LIM A.P.C. et al. "Neutraling human monoclonal antibody against H5N1 influenza HA selected from a Fab-phage display library". Virology Journal, 28 October 2008, vol. 5, Issue 130. See the abstract, figure 4 and methods * |
| THROSBY, M. et al., "Heterosubtypic neutralizing monoclonal antibodies cross-protective against H5N1 and H1N1 recovered from human IgM+ memory B cells". PLoS One, 16 December 2008, vol. 3, Issue 12, e3942. See the abstract, figures 5, 10, table 3 and materials and methods * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20130004505A1 (en) | 2013-01-03 |
| EP3098236A1 (en) | 2016-11-30 |
| CA2790949C (en) | 2017-08-01 |
| MX338758B (es) | 2016-04-29 |
| CA2849668A1 (en) | 2011-09-15 |
| JP2013527749A (ja) | 2013-07-04 |
| AU2011225044B2 (en) | 2013-08-22 |
| KR101297784B1 (ko) | 2013-08-20 |
| WO2011111966A2 (en) | 2011-09-15 |
| MX2012010406A (es) | 2012-10-03 |
| CN102791734B (zh) | 2014-10-15 |
| EP2860190A2 (en) | 2015-04-15 |
| CN102791734A (zh) | 2012-11-21 |
| IL221760A (en) | 2016-07-31 |
| AU2013207641B2 (en) | 2016-01-14 |
| EA201400855A1 (ru) | 2014-11-28 |
| EP2545074A4 (en) | 2014-01-08 |
| WO2011111966A3 (en) | 2012-04-05 |
| EP2860190A3 (en) | 2015-07-15 |
| JP5795340B2 (ja) | 2015-10-14 |
| EP2545074A2 (en) | 2013-01-16 |
| US9573991B2 (en) | 2017-02-21 |
| EA201201116A1 (ru) | 2013-03-29 |
| AU2011225044A1 (en) | 2012-09-20 |
| KR20110102198A (ko) | 2011-09-16 |
| CA2790949A1 (en) | 2011-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA021977B1 (ru) | Моноклональные антитела человека, полученные из в-клеток человека и обладающие нейтрализующей активностью против вирусов гриппа а | |
| CN102272155B (zh) | 登革热病毒中和抗体及其用途 | |
| Thornburg et al. | H7N9 influenza virus neutralizing antibodies that possess few somatic mutations | |
| CN101883789B (zh) | 特异于流感病毒h5亚型或者n1亚型的血凝素和神经氨酸酶的单克隆抗体及其应用 | |
| US9856312B2 (en) | Binding molecule having influenza A virus-neutralizing activity produced from human B cell | |
| EA028433B1 (ru) | Антитело, связывающееся с вирусами гриппа b и его применение | |
| KR20110047193A (ko) | 중화 항-인플루엔자 ａ 바이러스 항체 및 이의 용도 | |
| US20100074920A1 (en) | Peptide vaccine for influenza virus | |
| EA022855B1 (ru) | Моноклональные антитела, имеющие гомоподтип кросс-нейтрализующих свойств против вируса гриппа а подтипа н1 | |
| UA120264C2 (uk) | Сполука для застосування в способі лікування імунодефіциту сd4-т клітин у суб'єкта | |
| CN107750253A (zh) | 人源化流感单克隆抗体及其使用方法 | |
| WO2021233885A1 (en) | Mimotope peptides of the spike protein from the sars-cov-2 virus | |
| CN115461364A (zh) | 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用 | |
| CN114573691B (zh) | 一株人源中和抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| US9834594B2 (en) | Human monoclonal antibodies derived from human B cells and having neutralizing activity against influenza A viruses | |
| KR101718509B1 (ko) | 신종 인플루엔자 바이러스 ｈａ 단백질 특이적 항체 | |
| KR102097989B1 (ko) | 신규한 중증열성혈소판감소증후군 바이러스 | |
| JP2022515226A (ja) | 検出・処理の構成と方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |