EA021095B1 - Способ получения инактивированной цельновирионной гидроокисьалюминиевой вакцины против гриппа а/h1n1 - Google Patents
Способ получения инактивированной цельновирионной гидроокисьалюминиевой вакцины против гриппа а/h1n1 Download PDFInfo
- Publication number
- EA021095B1 EA021095B1 EA201100823A EA201100823A EA021095B1 EA 021095 B1 EA021095 B1 EA 021095B1 EA 201100823 A EA201100823 A EA 201100823A EA 201100823 A EA201100823 A EA 201100823A EA 021095 B1 EA021095 B1 EA 021095B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- influenza
- virus
- vaccine
- vaccine against
- recombinant strain
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинской биотехнологии и представляет собой способ получения инактивированной цельновирионной вакцины против вируса гриппа A/H1N1 с гидроокисью алюминия из рекомбинантного штамма NIBRG-121xp, полученного методом обратной генетики в Национальном институте биологических стандартов и контроля (NIBSC, Великобритания) и представленного по линии Всемирной организации здравоохранения НИИПББ КН МОН РК для разработки пандемической вакцины. Сущность изобретения заключается в том, что для получения инактивированной цельновирионной вакцины против вируса гриппа A/H1N1 с гидроокисью алюминия используется рекомбинантный штамм NIBRG-121хр вируса гриппа, который культивируется в 10-11-суточных куриных эмбрионах, подвергается химической инактивации, комбинированной схеме очистки и концентрирования и стерилизующей фильтрации с добавлением гидроокиси алюминия. Изобретение обеспечивает получение пандемической вакцины для профилактики вируса гриппа A/H1N1 с высокой степенью очистки вируса и соответственно с улучшенной безопасностью и иммуногенностью, процесс изготовления которой является технологичным и экономичным.
Description
(57) Изобретение относится к медицинской биотехнологии и представляет собой способ получения инактивированной цельновирионной вакцины против вируса гриппа Α/Η1Ν1 с гидроокисью алюминия из рекомбинантного штамма ΝΙΒΚΟ-121χρ, полученного методом обратной генетики в Национальном институте биологических стандартов и контроля (№В§С, Великобритания) и представленного по линии Всемирной организации здравоохранения НИИНЬБ КН МОН РК для разработки пандемической вакцины. Сущность изобретения заключается в том, что для получения инактивированной цельновирионной вакцины против вируса гриппа Α/Η1Ν1 с гидроокисью алюминия используется рекомбинантный штамм ΝΙΒΚΟ-121χρ вируса гриппа, который культивируется в 10-11-суточных куриных эмбрионах, подвергается химической инактивации, комбинированной схеме очистки и концентрирования и стерилизующей фильтрации с добавлением гидроокиси алюминия. Изобретение обеспечивает получение пандемической вакцины для профилактики вируса гриппа Α/Η1Ν1 с высокой степенью очистки вируса и соответственно с улучшенной безопасностью и иммуногенностью, процесс изготовления которой является технологичным и экономичным.
Изобретение относится к медицинской биотехнологии и представляет собой способ получения инактивированной цельновирионной гидроокисьалюминиевой вакцины против гриппа А/ΗΙΝΙ из рекомбинантного штамма ΝΙΒΚΟ-121χρ, полученного методом обратной генетики в Национальном институте биологических стандартов и контроля (ΝΙΒδϋ, Великобритания) и представленного по линии Всемирной организации здравоохранения НИИПББ НЦБ КН МОН РК для разработки пандемической вакцины.
Известен способ получения пандемической вакцины СеКарап (Вах1ег, Чешская Республика/Австрия), инактивированной цельновирионной против гриппа Α/Η1Ν1 из вируса дикого типа А/Са1йогша/7/2009 (Η1Ν1)ν, где вирусная биомасса нарабатывается в перевиваемой линии клеток Уего (клетки почки зеленой мартышки), далее инактивируется формалином в конечной концентрации 0,05%, при температуре и рН реакционной среды 37°С и 7,0-7,6 соответственно, в течение 3 суток с последующим ультрафиолетовым облучением. После чего инактивированная вирусная суспензия подвергается очистке и концентрированию посредством ультрацентрифугирования на линейном градиенте сахарозы 10-50%, ультра/диафильтрации и стерилизации через фильтры диаметром пор 0,22 мкм. Полученный очищенный концентрат в зависимости от весового содержания гемагглютинина (реакция одиночной радиальной иммунодиффузии) разводится буферным солевым раствором (БСР, рН 7,2) со стабилизатором до вакцинных параметров. Адъювант и консервирующее вещество в вакцину не добавляют.
Приготовленная вышеизложенным способом вакцина с содержанием гемагглютинина 2 мкг/0,2 мл у двукратно подкожно привитых мышей интервалом в 21 день формирует иммунитет напряженностью титров антител в РТГА с гомологичным антигеном 1:145. [К1к1пет О., Но^атй К., δρπιΐΐι М. е! а1. Се11 си1!иге (Уето) йегАей \\Но1е νίπικ (Η5Ν1) \'ассте Ьакей оп \уПй-1уре νίπικ кПат шйисек сто88-рго1ес1Ае 1ттипе гек]эопкек //Уассше. - 2007. - Уо1. 25(32).-Р. 6028-6036].
Наиболее значимый недостаток представленного способа заключается в использовании патогенного для людей производственного вируса, требующего соблюдения максимального уровня биологической безопасности на производстве, сложного процесса инактивации вируса и отсутствии в препарате адъюванта, необходимого для формирования быстрого и продолжительного иммунитета у привитых людей в период пандемии.
Существуют также способ получения пандемической вакцины Κ1ι.ινί·ι1 Р (ОтпнкекБ Венгрия), инактивированной цельновирионной сорбированной против гриппа Α/Η1Ν1 из рекомбинантного штамма ΝΙΒΚΟ-121χρ, полученного в Национальном институте биологических стандартов и контроля (ΝΙΒδΟ Великобритания) методом обратной генетики из эпидемического вируса А/СаП£отша/7/2009 (Η1Ν1) и высокорепродуктивного штамма А/РК/8/34 (Η1Ν1). Согласно указанному способу вирусная суспензия нарабатывается в 10-11-суточных куриных эмбрионах, очищается и концентрируется посредством осветления через картонные фильтры, ультрацентрифугирования на линейном градиенте сахарозы и стерилизующей фильтрации на мембранных фильтрах диаметром пор 0,22 мкм. Полученный очищенный концентрат инактивируется формалином в конечной концентрации 0,025%, при температуре и рН реакционной среды 4°С и 7,0-7,6 соответственно в течение 7 суток. Далее инактивированный вирусный концентрат разводится в зависимости от весового содержания гемагглютинина (δΌδ-РАОЕ) буферным солевым раствором (БСР, рН 7,2) до вакцинных параметров, объединяется с раствором фосфата алюминия таким образом, чтобы концентрация ионов алюминия (А1+3) в препарате составляла 0,33 мг/0,5 мл и перемешивается для сорбции при 4-6°С в течение 1 ч. В качестве консервирующего вещества в вакцину вносится тиомерсал (мертиолят) из расчета 0,1 мг/мл.
Приготовленная по вышеизложенному способу вакцина с содержанием гемагглютинина 2,5 мкг/0,2 мл у двукратно подкожно привитых мышей с интервалом в 21 день формирует иммунитет напряженностью титров антител в реакции торможении гемагглютинации (РТГА) с гомологичным антигеном 1:460 ЦоНапкеп К., №со11 А., С1апсю Β.Ο, Кгатаг/ Р. Рапйетю тЛиеп/а А(ШМ) 2009 тсстек ш (Не Еигореап Ишоп// Еиго ЗшуеШ. - 2009. - Уо1. 14 (41).-Р. 19361-68].
Существенным недостатком способа является низкая производительность использованного метода очистки и концентрирования вируса и несовершенность метода сорбции.
Предлагаемый способ получения инактивированной цельновирионной гидроокисьалюминиевой вакцины против гриппа А/ΗΙΝΙ основан на использовании рекомбинантного штамма ΝΙΒΚΟ-121χρ, полученного методом обратной генетики в НШЗС (Великобритания) из эпидемического штамма А/СаП£огша/07/2009 (Η1Ν1) и высокорепродуктивного штамма донора А/РК/8/34 (Η1Ν1) и представленного по линии ВОЗ НИИПББ НЦБ КН МОН РК для разработки пандемической вакцины.
Сущность способа заключается в том, что рекомбинантный штамм ΝΙΒΚΟ-121χρ культивируется в 10-11-суточных куриных эмбрионах при 34°С в течение 72 ч, наработанная вирусная суспензия осветляется через 8-слойные марлевые фильтры, инактивируется формалином в конечной концентрации 0,05%, вначале при 4±2°С в течение 60 ч, далее при 37±1°С в течение 12 ч при соблюдении режима постоянного перемешивания. Очистка и концентрирование инактивированной вирусной суспензии проводится поэтапно, вначале осветляется через мембранные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, далее концентрируется на ультрафильтрационной установке МИ^оте® РеШсоп®саккейе кук!ет (Франция) и диализе про- 1 021095 тив 10 объемов буфера [1,0 М натрий хлористый; 0,01 М ФБР рН 7,4; 0,001 М ЭДТА| и 6 объемов буфера [0,15 М натрий хлористый; 0,01 М ФБР рН 7,4; 0,001 М ЭДТА]. Полученный вирусный концентрат дополнительно очищается с помощью гель-фильтрации на колонках с сефарозой СЬ-6В, после чего стерилизуется через каскад мембранных фильтров с диаметром пор АР 20 - 0,45-0,22 мкм. Далее очищенный вирусный концентрат в цельном или разведенном до вакцинных параметров виде объединяют в асептических условиях с рабочим раствором гидроокиси алюминия (содержание ионов А1+3 2 мг/мл) в соотношении 1:1, перемешивают лабораторным гомогенизатором Т25 Ъазю иЬТКА-ТиККАХ, 1КА (Германия) в течение 3 мин при 3000 об/мин. Полученную смесь после гомогенизации переливают в специальные стаканы и инкубируют при температуре 6±2°С в течение 24 ч при постоянном перемешивании (60-80 об/мин) с помощью спиннера ТесЬие (Франция). После окончания срока инкубации смесь фасуют во флаконы нужного объема и контролируют качество на соответствие нормативному документу. Показатель полноты сорбции антигена на гидроокиси алюминия при соблюдении вышеуказанного режима составления превышает 90%.
Приготовленная по предлагаемому способу вакцина с содержанием гемагглютинина 3 мкг/0,2 мл при двукратной внутрибрюшинной вакцинации мышей с интервалом 7 суток формирует у них иммунитет напряженностью 1:425 в РТГА. При контрольном заражении (интраназально под легким эфирным наркозом) вакцинированных мышей эпидемическим вирусом А/СаПГопиа/07/2009 (Η1Ν1), адаптированного мышам в дозе 15 ЬП50/0,03, все животные оставались живыми и не проявляли признаков какой-либо болезни в течение 14-дневного срока наблюдения.
Предлагаемый способ отличается от аналогов, в том числе от прототипа тем, что в технологии изготовления вакцины применяются оптимальные режимы формалиновой инактивации вируса, составления вакцины, комбинированная схема очистки и концентрирования вируса посредством хроматографических и фильтрационных методов.
Изобретение выполнимо в условиях научно-производственных объединений при наличии рекомбинантного штамма ΝΙΒΚΟ-121χρ вируса гриппа, соответствующего технологического оборудования и соблюдения предлагаемого режима приготовления вакцины.
Эффективность и воспроизводимость предлагаемого способа получения инактивированной цельновирионной гидроокисьалюминиевой вакцины против гриппа Α/Η1Ν1 из рекомбинантного штамма ΝΙΒΚΟ-121χρ вируса гриппа подтверждена при приготовлении трех производственноэкспериментальных серий этого препарата в НИИПББ НЦБ КН МОН РК, в последующем прошедших с положительными результатами доклинические испытания специфической активности и безопасности в РГП Национальный центр экспертизы лекарственных средств, г. Алматы, Республика Казахстан, и Научно-исследовательском институте гриппа СЗО РАМН РФ, г. Санкт-Петербург, Российская Федерация.
Claims (1)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ получения инактивированной цельновирионной вакцины против вируса гриппа Α/Η1Ν1 с гидроокисью алюминия, включающий культивирование рекомбинантного штамма ΝΙΒΚΟ-121χρ вируса гриппа в 10-11-суточных куриных эмбрионах, химическую инактивацию, комбинированную схему очистки и концентрирования, стерилизующую фильтрацию вируса, добавление гидроокиси алюминия, отличающийся тем, что до этапа очистки осветленную аллантоисную суспензию вакцинного вируса инактивируют формалином в конечной концентрации 0,05% сначала при температуре от 2 до 6°С в течение 60 ч, затем при температуре от 36 до 38°С в течение 12 ч, после чего полученную суспензию очищают на мембранных фильтрах и концентрируют с помощью ультра/диафильтрации в тангенциальном потоке против 10 объемов буфера, включающего 1,0 М натрий хлористый; 0,01 М ФБР рН 7,4; 0,001 М ЭДТА и 6 объемов буфера, включающего 0,15 М натрий хлористый; 0,01 М ФБР рН 7,4; 0,001 М ЭДТА, а также гель-фильтрации на колонках с сефарозой.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EA201100823A EA021095B1 (ru) | 2011-06-22 | 2011-06-22 | Способ получения инактивированной цельновирионной гидроокисьалюминиевой вакцины против гриппа а/h1n1 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EA201100823A EA021095B1 (ru) | 2011-06-22 | 2011-06-22 | Способ получения инактивированной цельновирионной гидроокисьалюминиевой вакцины против гриппа а/h1n1 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201100823A1 EA201100823A1 (ru) | 2012-12-28 |
EA021095B1 true EA021095B1 (ru) | 2015-04-30 |
Family
ID=47427491
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201100823A EA021095B1 (ru) | 2011-06-22 | 2011-06-22 | Способ получения инактивированной цельновирионной гидроокисьалюминиевой вакцины против гриппа а/h1n1 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
EA (1) | EA021095B1 (ru) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2080124C1 (ru) * | 1995-10-19 | 1997-05-27 | Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток | Способ получения живой гриппозной вакцины |
RU2283139C1 (ru) * | 2005-03-21 | 2006-09-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения антигенов для вакцины против вирусов гриппа |
RU2318871C1 (ru) * | 2006-04-19 | 2008-03-10 | ГУ "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" РАМН /ГУ НИИЭМ РАМН/ | Штамм вируса гриппа гкв 2389 для получения живой интраназальной и инактивированной гриппозной вакцины |
-
2011
- 2011-06-22 EA EA201100823A patent/EA021095B1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2080124C1 (ru) * | 1995-10-19 | 1997-05-27 | Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток | Способ получения живой гриппозной вакцины |
RU2283139C1 (ru) * | 2005-03-21 | 2006-09-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения антигенов для вакцины против вирусов гриппа |
RU2318871C1 (ru) * | 2006-04-19 | 2008-03-10 | ГУ "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" РАМН /ГУ НИИЭМ РАМН/ | Штамм вируса гриппа гкв 2389 для получения живой интраназальной и инактивированной гриппозной вакцины |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Availability of a new candidate reassortant vaccine virus for pandemic (H1N1) 2009 virus vaccine development, 06.08.2009, [он-лайн], [найдено 03.09.2012]. Найдено из Интернет * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EA201100823A1 (ru) | 2012-12-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5535910B2 (ja) | ウイルスワクチンを生産する方法 | |
RU2197264C2 (ru) | Способ получения поверхностных антигенных белков из вирусов гриппа, противогриппозная вакцина | |
RU2710239C1 (ru) | Способ получения антигена или антигенов для производства противогриппозной вакцины и вакцина на его основе | |
CN104814985A (zh) | 一种海藻多糖的应用 | |
US11607448B2 (en) | Whole avian-origin reverse genetic system and its use in producing H7N9 subtype avian influenza vaccine | |
RU2447898C2 (ru) | Вакцина ipv-dpt | |
CN104888212A (zh) | 一种流感病毒亚单位疫苗及其制备方法 | |
CN104611299B (zh) | 一种人工重组的h9n2禽流感病毒株、制备方法、疫苗组合物及其应用 | |
CN102133399B (zh) | 一种制备流感病毒裂解疫苗的新工艺 | |
CN112156182A (zh) | 一种全悬浮细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗 | |
Tabynov et al. | Immunogenic and protective properties of the first Kazakhstan vaccine against pandemic influenza A (H1N1) pdm09 in ferrets | |
CN102600468A (zh) | 一种含mf59佐剂禽流感病毒裂解疫苗的制备工艺 | |
US20120107354A1 (en) | Viral vaccine and process for preparing the same | |
CN107537030A (zh) | 一种三价流感病毒亚单位疫苗及其制备方法 | |
CN107537032A (zh) | 一种四价流感病毒亚单位疫苗及其制备方法 | |
EA021095B1 (ru) | Способ получения инактивированной цельновирионной гидроокисьалюминиевой вакцины против гриппа а/h1n1 | |
CN102614508B (zh) | 一种人用流感病毒裂解疫苗的病毒裂解灭活方法 | |
RU2604414C2 (ru) | Живая вакцина для профилактики гриппа и способ ее получения | |
KR101581228B1 (ko) | 바이러스의 증식을 위한 2-단계 온도 프로파일 | |
KR101862332B1 (ko) | 인플루엔자 전바이러스 백신 제조 방법 | |
CN1194005C (zh) | 利用Sepharose4FF柱层析技术生产流行性感冒灭活疫苗 | |
RU2804948C2 (ru) | Пентавалентная субъединичная вакцина против респираторных инфекций и способ ее получения | |
CN117603922A (zh) | 一种流感病毒裂解液、流感病毒抗原及其制备方法与应用 | |
RU2652889C1 (ru) | Способ изготовления вакцины инактивированной эмульсионной против ящура и вакцина инактивированная эмульсионная против ящура | |
CN102671194A (zh) | 一种人用预防狂犬病和破伤风的疫苗 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |