EA020604B1 - Композиция, содержащая липосомы малого размера, и способ ее получения - Google Patents
Композиция, содержащая липосомы малого размера, и способ ее получения Download PDFInfo
- Publication number
- EA020604B1 EA020604B1 EA201100829A EA201100829A EA020604B1 EA 020604 B1 EA020604 B1 EA 020604B1 EA 201100829 A EA201100829 A EA 201100829A EA 201100829 A EA201100829 A EA 201100829A EA 020604 B1 EA020604 B1 EA 020604B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- liposomes
- composition according
- water
- mixture
- organic solvent
- Prior art date
Links
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title claims abstract description 99
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 68
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 65
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 35
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 26
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 26
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 21
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 19
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 6
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 claims description 5
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims description 5
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 4
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 4
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 claims description 3
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 claims description 3
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 claims description 3
- WKJDWDLHIOUPPL-JSOSNVBQSA-N (2s)-2-amino-3-({[(2r)-2,3-bis(tetradecanoyloxy)propoxy](hydroxy)phosphoryl}oxy)propanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC WKJDWDLHIOUPPL-JSOSNVBQSA-N 0.000 claims description 2
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 claims description 2
- SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 0.000 claims description 2
- YFWHNAWEOZTIPI-DIPNUNPCSA-N 1,2-dioctadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC YFWHNAWEOZTIPI-DIPNUNPCSA-N 0.000 claims description 2
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 claims description 2
- LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 1,2-palmitoyl-sn-glycero-3-phospho-(1'-sn-glycerol) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 0.000 claims description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims description 2
- KLFKZIQAIPDJCW-HTIIIDOHSA-N Dipalmitoylphosphatidylserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KLFKZIQAIPDJCW-HTIIIDOHSA-N 0.000 claims description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FVJZSBGHRPJMMA-IOLBBIBUSA-N PG(18:0/18:0) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC FVJZSBGHRPJMMA-IOLBBIBUSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 claims description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 2
- 229960005160 dimyristoylphosphatidylglycerol Drugs 0.000 claims 1
- BPHQZTVXXXJVHI-AJQTZOPKSA-N ditetradecanoyl phosphatidylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC BPHQZTVXXXJVHI-AJQTZOPKSA-N 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 41
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 4
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100026436 Regulator of MON1-CCZ1 complex Human genes 0.000 description 3
- 101710180672 Regulator of MON1-CCZ1 complex Proteins 0.000 description 3
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039250 Essential MCU regulator, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 101000813097 Homo sapiens Essential MCU regulator, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000007298 Mucin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 101100496087 Mus musculus Clec12a gene Proteins 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000004401 flow injection analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000010583 slow cooling Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- A61K38/1735—Mucins, e.g. human intestinal mucin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Липосомы с размерами в ограниченном интервале получают при практически непрерывном смешивании практически постоянных потоков воды и органического растворителя, который содержит липид(ы), способные образовывать липосомы, с последующим охлаждением смеси полученных липосом, причем соотношение скоростей потока воды и потока органического растворителя и скорость охлаждения указанной смеси регулируют таким образом, чтобы по меньшей мере примерно 90% липосом имели размер менее примерно 200 нм.
Description
(57) Липосомы с размерами в ограниченном интервале получают при практически непрерывном смешивании практически постоянных потоков воды и органического растворителя, который содержит липид(ы), способные образовывать липосомы, с последующим охлаждением смеси полученных липосом, причем соотношение скоростей потока воды и потока органического растворителя и скорость охлаждения указанной смеси регулируют таким образом, чтобы по меньшей мере примерно 90% липосом имели размер менее примерно 200 нм.
020604 Β1
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение в целом относится к области получения липосомальных вакцин.
Сущность изобретения
Целью настоящего изобретения является получение липосом размером менее примерно 200 нм.
Заявители неожиданно обнаружили, что при получении липосом путем смешивания органической жидкости (в которой растворены липиды) с водой решающее влияние на образование и сохранение липосом нужного размера оказывают концентрация органического растворителя и быстрое охлаждение полученной смеси. Предлагаемый способ и аппаратура позволяют осуществить синтез в примышленном масштабе гомогенных препаратов лекарственных вакцин, включенных в липосомы, путем смешивания раствора липида, содержащего липиды, растворенные в смешивающемся с водой органическом растворителе, с потоком воды в новых условиях, способствующих непрерывному получению липосом, пригодных для изготовления вакцин. В способе используют систему непрерывного смешивания, в которой соотношение скоростей потоков, т.е. соотношение скорости потока раствора липида и скорости потока воды, поддерживают постоянным, таким образом сохраняя постоянным содержание органического растворителя в системе. В способе также используют быструю стадию охлаждения независимо от масштаба, которая следует за образованием липосом и препятствует увеличению размера липосом. Кроме того, способ предлагает такое расположение трубопроводов, которое способствует образованию липосом нужного размера.
Для получения липосом размером менее примерно 200 нм согласно настоящему способу поддерживают концентрацию органического растворителя в смеси органический растворитель/вода на уровне 530%, более предпочтительно 10-25%, наиболее предпочтительно 10-25%; соотношение скоростей потоков (вода/органический растворитель) поддерживают на уровне между 19:1 и 3 1/3:1, более предпочтительно между 9:1 и 5:1 или между 9:1 и 4:1; и охлаждение смеси липосом продолжают (при температуре примерно 55-30°С) в течение менее 5 ч, более предпочтительно менее 2 ч, наиболее предпочтительно менее 30 мин, наиболее предпочтительно, по существу, мгновенно.
Изобретение позволяет преодолеть трудности в данной области, в том числе разброс в различных партиях продукта, нежелательное увеличение размера липосом во время охлаждения и необходимость разработки таких способов, как ультразвуковые способы и способы с применением давления. Липосомы, полученные согласно данному изобретению, пригодны для изготовления вакцин для людей или животных.
Перечень фигур
На фиг. 1 представлена схема аппаратуры; на врезках показано расположение Т-образных сочленений, которые необязательны в случае, когда в трубопроводе имеются внутренние выступы или перегородки для увеличения турбулентности и облегчения перемешивания.
На фиг. 2 представлена блок-схема, на которой показаны различные параметры суммарного производственного процесса в условиях клиники.
На фиг. 3 показана фотография распределения красителя (в системе, имитирующей смесь липида с растворителем) и воды в трубопроводах различного диаметра: (А) оба трубопровода диаметром 9 мм; (В) трубопроводы диаметром 5 мм (вода) и 3 мм (липид/растворитель).
На фиг. 4 показана микрофотография, полученная методом просвечивающей электронной микроскопии (увеличение 18000), показывающая образование липосом с включенными пептидами МиС-1 при использовании 20%-го раствора трет-бутанола согласно настоящему изобретению.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Настоящий способ пригоден для широкомасштабного промышленного производства препаратов наноразмерных липосом, в особенности по существу однородных липосом диаметром не более 200 нм. Предпочтительно, чтобы более 90% (средневзвешенная по объему величина по данным динамического рассеяния света) липосом имели размер менее 200 нм, наиболее предпочтительно, чтобы более 99% имели размер менее 200 нм. Частицы такого размера легко стерилизовать посредством фильтрации в соответствии со стандартами приближенного к промышленному производству в клинических условиях.
Такие однородные по размеру липосомы можно изготовить согласно данному изобретению путем регулирования концентрации органического растворителя, поддерживая ее по существу постоянной во время и после образования липосом. Регулируя концентрацию растворителя, можно контролировать размер липосом, образующихся при объединении и перемешивании раствора липида и воды (или другого водного растворителя, пригодного для формирования липосом).
При этом раствор липида и вода объединяются непосредственно в потоке сразу после места соединения трубопроводов, по которым сначала подавали раствор и воду. Раствор липида непрерывно поступает из одного трубопровода в непрерывный поток воды. Два потока могут встретиться под любым углом; например, два трубопровода, через которые текут вода и раствор липида соответственно, могут быть расположены примерно под углом 90° или менее 90°. Взвесь раствора липида и воды и облако растворителя образуются сразу после объединения трубопроводов, и это обозначает место, где, как полагают, образуются липосомы.
Кроме того, степень, в которой смешивание липида/растворителя и водной жидкости является тур- 1 020604 булентным, может также облегчать образование липосом. Соответственно особенностью аппаратуры и точки объединения, которую надо учитывать, но которая не является необходимой для образования липосом, является использование перегородок, внутренних выступов или углублений в полости любого из трубопроводов, что может способствовать увеличению турбулентности и в результате формированию липосом. Таким образом, согласно данному изобретению, создание высокой неоднородности в точке смешивания жидкостей способствует образованию липосом.
Встроенное устройство для охлаждения смеси в течение времени между образованием липосом и входом смеси в сосуд для хранения позволяет быстро остудить смесь, содержащую липосомы. Этого можно достичь, например, с помощью охлаждающей рубашки, охлаждающих змеевиков или ледяной бани, в которую погружают трубопровод или другую линию, по которой течет смесь, содержащая липосомы. При быстром охлаждении размер липосом сохраняется, в то время как при медленном охлаждении и при заданной концентрации органического растворителя размер липосом со временем увеличивается.
Регулируя (1) соотношение скоростей потоков воды и органического растворителя и (2) концентрацию органического растворителя в смеси, а также (3) охлаждение смеси сразу после образования липосом и необязательно (4) используя приспособления, повышающие турбулентность потока, можно непрерывно получать липосомы определенного размера.
Предлагаемая аппаратура и ее конструкция позволяют избежать недостатков, присущих неэффективным системам периодического действия предшествующего уровня техники, где предварительно смешивали большие объемы воды и смеси липид/растворитель, т.е. перекачивали их из одного бака в другой (см., например, патентную заявку США № 11/185448). Вместо этого данная аппаратура представляет собой непрерывно проточную открытую систему, которая позволяет осуществлять бесконечный и воспроизводимый способ получения однородных липосомных препаратов, содержащих любые терапевтические средства, включенные в раствор липида.
Данная конструкция также отличается от аппаратуры предшествующего уровня техники тем, что в ней не надо пропускать под давлением раствор липид/растворитель через сопло или отверстия микронного размера для того, чтобы они попадали в поток воды в виде аэрозоля липид/растворитель (см., например, патент США № 6843942, ^адиет е! а1, 2002, 1оигпа1 о£ Ырокоте КекеатеН, 12(3), р. 259-270, патент США № 6855277). В предлагаемой аппаратуре отсутствует необходимость в модуле инжекции перекрестных потоков, например в узле с указанным микронным отверстием, и, с другой стороны, данная конструкция препятствует смешиванию объемов воды и раствора липида в пространстве между трубопроводами. Иными словами, в данном изобретении отсутствует принудительное впрыскивание смеси липид/растворитель в воду через малое отверстие в общей стенке трубопроводов с движущимися жидкостями, которая с другой стороны разделяет две жидкости. Напротив, предложенные в изобретении аппаратура и способ создают перекрестный поток одной жидкости (воды) с другим свободно текущим потоком жидкости (раствором липида) без применения каких-либо преград или сжатого аэрозоля. В настоящем изобретении для приготовления липосом в определенном заданном интервале их размеров также не требуется гомогенизация или обработка ультразвуком, как описано ранее (например, в патенте США № 6855277).
Добавление нужного терапевтического соединения типа лекарства, пептида или липопептида в раствор липида по настоящему изобретению, а также любых других желательных ингредиентов типа адъюванта или эксципиента облегчает включение этих веществ в липосомы, которые образуются при объединении раствора липида с потоком воды.
Помимо регулирования концентрации растворителя и соотношения скоростей потоков воды и раствора липида желательно также нагревать один раствор липида или раствор липида и воду до начала подачи липида через указанную систему трубопроводов. Соответственно температура жидкостей по настоящему изобретению может быть важным критерием для установления нужного и воспроизводимого выхода однородных по размеру фильтруемых липосом. Предпочтительная температура зависит от температуры перехода используемых липидов.
Способ по настоящему изобретению позволяет работать в интервале используемых на практике скоростей потоков. Удивительным наблюдением было то, что поскольку соотношение скоростей потоков (т.е. соотношение скорости потока раствора липида и скорости потока воды) поддерживают постоянным, то неважно, с какой скоростью жидкости проникают друг в друга в пределах используемых на практике интервалов скоростей.
Следовательно, предлагаемый способ можно применять как для очень малых, так и для очень больших суммарных объемов раствора.
Соответственно, факторы настоящего изобретения, имеющего целью непрерывное образование фильтруемых липосом с включенным лекарством, представляют собой, но не ограничиваются этим:
(1) растворитель и концентрация растворителя; (2) липиды;
(3) соотношение скоростей потоков раствора липида и воды;
(4) температура жидкостей до и во время смешивания;
(5) охлаждение после смешивания жидкостей и образования липосом;
(6) непрерывная беспрепятственная подача потока каждой жидкости из одной в другую и
- 2 020604 (7) приспособления, обеспечивающие турбулентность. Следующие разделы рассматривают каждый из этих факторов.
(1) Растворитель и его концентрация.
Одним из типов растворителя является смешивающийся с водой органический растворитель, такой как, но не ограничиваясь этим, низшие спирты типа метанола, этанола, пропанола, бутанола, изоамилового спирта, изопропанола, 2-метоксиэтанола и ацетон. Предпочтительным растворителем по настоящему изобретению является бутанол или трет-бутанол. Органический растворитель нужен для растворения липидов и лекарства или биоактивных реагентов, которые затем, согласно настоящему изобретению, попадают в поток воды или водной среды, где образуются указанные липосомы с включенным лекарством или реагентом.
Одним из факторов получения липосом с размерами в определенном интервале является концентрация смешивающегося с водой органического растворителя. Согласно настоящему изобретению, концентрация органического растворителя в месте смешивания, которая является также конечной концентрацией перед удалением растворителя (например, путем лиофилизации), составляет 5-30%, более предпочтительно 10-25%, наиболее предпочтительно 10-25%. Обычно чем ниже концентрация растворителя, тем меньше размер получаемых липосомальных везикул. Следовательно, было установлено, что в предлагаемой аппаратуре в рамках предложенного способа 10%-ная концентрация трет-бутанола привела к получению липосом, среди которых примерно 99% имели размер менее 100 нм; в отличие от этого при 20%-ной концентрации трет-бутанола 99% липосом имели размер менее 200 нм. Например, при 24%-ой концентрации трет-бутанола образуются липосомы размером менее 400 нм. Соответственно, средний размер частиц в наборе липосом можно задавать путем подбора концентрации растворителя в смеси с растворителем и поддержания этой концентрации постоянной.
Желательно получать липосомы размером менее примерно 200 нм, поскольку их легко подвергнуть стерилизации путем фильтрации через применяемые в клинической практике фильтры с порами 0.22 мкм. Таким образом, в одном варианте настоящего изобретения для получения липосом размером менее 200 нм, которые легко проходят через указанные фильтры, предпочтительной концентрацией растворителя, в частности трет-бутанола, является концентрация не выше примерно 20%.
Быстрое диспергирование смеси липид/растворитель в воде способствует поддержанию стационарной концентрации растворителя, сохраняя ее на уровне указанных примерно 20%.
(2) Липиды.
Предпочтительные фосфолипиды, способные образовывать липосомы, включают, но не ограничиваются этим, дипальмитоилфосфатидилхолин (ЭРРС). фосфатидилхолин (РС; лецитин), фосфатидную кислоту (РА), фосфатидилглицерин (РО), фосфатидилэтаноламин (РЕ), фосфатидилсерин (Р§). Другие подходящие фосфолипиды включают также дистеароилфосфатидилхолин (О§РС), димиристоилфосфатидилхолин (ОМРС), дипальмитоилфосфатидилглицерин (ЭРРО), дистеароилфосфатидилглицерин (П8РО), димиристоилфосфатидилглицерин (ОМРО), дипальмитоилфосфатидную кислоту (ПРРА); димиристоилфосфатидную кислоту (ОМРА), дистеароилфосфатидную кислоту (О§РА), дипальмитоилфосфатидилсерин (ОРР§), димиристоилфосфатидилсерин (ОМР§), дистеароилфосфатидилсерин (П§Р§), дипальмитоилфосфатидилэтаноламин (ОРРЕ), димиристоилфосфатидилэтаноламин (ЭМРЕ), дистеароилфосфатидилэтаноламин (Л8РЕ). Наиболее предпочтительным липидом является ЭРРС.
Для облегчения или регулирования образования липосом желательно включать в раствор липида стерин. Особенно предпочтительным в этом отношении стерином является холестерин. Холестерин не является необходимым для облегчения формирования липосом, но он улучшает свойства липосом (например, их стабильность).
(3) Соотношение скоростей потоков раствора липида и воды.
При синхронизации начала и остановки подачи потоков воды и раствора липида соотношение скоростей потоков воды и раствора липида определяет концентрацию растворителя и, следовательно, размер липосом. Чем выше концентрация растворителя, тем крупнее будут образующиеся липосомы. Предпочтительно, чтобы соотношение скоростей потоков воды и раствора липида составляло по меньшей мере 2:1 (что соответствует концентрации органического растворителя не более примерно 33 1/3%), более предпочтительно по меньшей мере 3: 1 (что соответствует концентрации органического растворителя не более примерно 25%). Предпочтительно, чтобы соотношение было не выше 19:1. Оно может быть между примерно 19:1 (концентрация органического растворителя составит примерно 5%) и 3 1/3:1 (концентрация органического растворителя составит примерно 30%), более предпочтительно между 9:1 (концентрация органического растворителя составит примерно 10%) и 5:1 (концентрация органического растворителя составит примерно 20%) или между 9:1 и 4:1 (концентрация органического растворителя составит примерно 25%).
Соответственно скорость потока воды согласно настоящему изобретению может составлять примерно 1,7 л/мин. Скорость потока липид/растворитель согласно настоящему изобретению может составлять примерно 0,43 л/мин. На практике для данного размера липосом можно установить нужную скорость потока, поскольку соотношение держат постоянным. Например, если желательно готовить липосомы таким образом, чтобы более примерно 99% липосом имели размер менее примерно 200 нм и кон- 3 020604 центрация органического растворителя составляла примерно 20%, тогда скорости потоков можно установить при соотношении скорости потока воды и скорости потока раствора липида примерно 4:1, исходя из практических соображений о времени смешивания и объема используемых растворов.
(4) Температура липидов.
Предпочтительная минимальная температура связана с температурой перехода. Желательно нагреть как воду, так и раствор липида по настоящему изобретению предпочтительно на 10°С или более выше температуры перехода для участвующих компонентов. Таким образом, она может быть на 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более градусов выше температуры перехода. Жидкости можно нагревать в резервуарах для хранения, которые можно заизолировать рубашками для уменьшения потерь тепла. Температура каждой жидкости может быть примерно 40-45°С, примерно 45-50°С, примерно 50-55°С или примерно 55-60°С. Для ЭРРС предпочтительно держать температуру по меньшей мере 42°С, более предпочтительно по меньшей мере 45°С, наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно 50°С. Максимальная температура не является критической, но, разумеется, более высокие температуры требуют повышенных затрат энергии. Для ЭРРС температуру выбирают предпочтительно между примерно 42 и 65°С, более предпочтительно в интервале 45-60°С, наиболее предпочтительно 50-55°С.
(5) Охлаждение.
Во многих способах требуется охладить массу перед хранением, фильтрацией или другой обработкой. Авторы установили, что при выбранной температуре и концентрации растворителя, необходимых для формирования липосом в данном способе, размер липосом возрастает во времени по мере их образования. Следовательно, если охлаждение проводить в сборнике, размер порции будет влиять на конечный размер липосом, т.к. порции большего размера требуют более длительного охлаждения. Мгновенное охлаждение с помощью теплообменника сразу после образования липосом позволяет регулировать размер липосом и устраняет это препятствие, так что их размер не будет зависеть от величины порции. Для сохранения размера липосом время охлаждения на 20°С не должно превышать 5 ч, например охлаждение от примерно 55 до примерно 35°С проводят менее чем за 5 ч, более предпочтительно примерно от 55 до примерно 30°С менее чем за 2 ч, наиболее предпочтительно примерно от 55 до примерно 30°С менее чем за 30 мин. При желании смесь можно охладить до более низких температур.
(6) Постоянный поток одной жидкости в другую.
Жидкости по настоящему изобретению, т.е. воду и раствор липида, можно подавать отдельными насосами, каждый из которых отрегулирован на заданную скорость потока, как описано выше, и хранить жидкости в больших многолитровых баках. Например, в качестве резервуара можно использовать бак емкостью до 50 л или более (предпочтительно 200 л) воды для инжекции, из которого подают воду через указанные трубопроводы и Т-образные сочленения, и скорость перекачки можно контролировать с помощью расходомера, установленного на пути воды. Аналогично через аппаратуру можно прокачивать содержимое отдельного многолитрового бака для раствора липид/растворитель, например, емкостью до 50 л или более, и контролировать скорость потока таким же образом.
В зависимости от скорости, с которой воду прокачивают через аппаратуру, в исходном резервуаре в течение определенного периода времени убавляется большее или меньшее количество воды. То же самое относится и к резервуару для исходного раствора липида. Поскольку иногда желательно, чтобы скорость потока воды была по меньшей мере примерно в четыре раза выше скорости потока раствора липида, желательно использовать водный резервуар, вмещающий объем воды по меньшей мере в четыре раза больший, чем объем раствора липида. В действительности, однако, бывает период времени, когда в обоих резервуарах достаточное количество жидкости для создания непрерывного потока воды и раствора липида в течение такого времени, когда можно получить максимальное количество липосом нужного размера за единицу времени. Резервуар может быть любым сосудом, в котором можно хранить и/или нагревать объемы жидкостей, которые здесь обсуждаются, включая, но не ограничиваясь ими, сосуды из стекла, нержавеющей стали и пластика.
(7) Беспрепятственный поток жидкостей и средства, вызывающие турбулентность.
Как указано выше, в хорошей установке для подачи раствора липида в поток воды используют два трубопровода, расположенные таким образом, что внутренние пространства обоих трубопроводов открыты один для другого в точке их соединения, т.е. в сочленении, без каких-либо внутренних препятствий, которые ограничивали бы свободное протекание раствора липида через это сочленение. Два потока могут встретиться под любым углом, т.е. трубопроводы, через которые протекают вода и раствор липида соответственно, могут встретиться под углом примерно 90° или менее 90°. См. фиг. 1.
Поскольку настоящий способ вполне пригоден для целей масштабного промышленного производства, можно использовать трубопроводы любого диаметра в зависимости от соответствующего модифицирования других параметров, таких как скорость потоков и концентрация растворителя согласно настоящему изобретению. Соответственно, трубопроводы по настоящему изобретению могут быть любого диаметра, например примерно 1-20 мм или больше 20 мм. Диаметр можно выбрать на основании анализа скорости потока и эффективности перемешивания.
Трубопровод может иметь одинаковый диаметр по всей длине или на одном из его участков. Т.е. для использования типичных соединяющих деталей, широко применяемых в лабораториях для гибкого
- 4 020604 соединения стеклянных трубок или кранов и насосов, трубопровод по настоящему изобретению может быть узким с одного конца для того, чтобы его можно было легко вставить в трубу.
Два соединяющихся трубопровода могут иметь одинаковый диаметр в точке их сочленения, где встречаются их отверстия. Таким образом, водяной трубопровод может быть уже или шире трубопровода с раствором липида или наоборот. Трубопровод по настоящему изобретению может быть изготовлен из стекла, пластика или металла.
Можно использовать трубопроводы, в которых внутренние поверхности содержат ребра, выступы, углубления и зазубрины, которые модулируют поток жидкости во внутреннем пространстве. Если нужно повысить турбулентность среды в точке, где встречаются поток воды и раствор липида, то для облегчения формирования липосом один из таких трубопроводов используют для турбулизации потока воды в месте соединения и в результате индуцирования поперечных усилий выше нормальных. Такие выступы или зазубрины оптимально разместить выше сочленения в водном трубопроводе, а также или вместо этого ниже сочленения, что способствует смешиванию жидкостей.
(8) Другие факторы, ингредиенты и параметры.
(ί) Липосомы.
Желательно получать липосомы размером менее 200 нм, поскольку их легко подвергнуть стерилизации путем фильтрации через применяемые в клинической практике фильтры с порами 0,22 мкм. Приготовление липосом согласно настоящему способу с использованием предлагаемой аппаратуры приводит к популяции липосом конкретного максимального размера.
В целом размер липосом увеличивается при уменьшении соотношения скоростей потока воды и потока раствора липида и в результате с увеличением концентрации органического растворителя. На размер липосом влияют также другие факторы, такие как температура или используемый органический растворитель.
Липосомы, полученные после того, как смесь липид/растворитель сливается и смешивается с водой, затем можно (необязательно) пропустить через охлаждающую рубашку и собрать в отдельном резервуаре. Затем полученные липосомы можно лиофилизировать и позже восстановить хорошо известными способами.
(ίί) Биоактивные реагенты.
Муцин 1 (МиС-1) представляет собой распространенный высокомолекулярный муцин, который содержит полипептидное ядро, состоящее из 30-100 последовательных единиц 20 аминокислот. В составе МиС-1 пептиды, гликопептиды, липопептиды и гликолипопептиды являются особенно важными пептидами, пригодными для включения в липосомы по настоящему изобретению, но настоящее изобретение не ограничено только этими веществами, т.к. в липосомы по настоящему изобретению можно включать и другие пептиды, биоактивные реагенты, лекарства или терапевтические средства.
Предпочтительно, чтобы реагент был пептидом (необязательно гликозилированным и/или липидированным), содержащим по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь или по меньшей мере девять последовательных остатков упомянутой повторяющейся последовательности из 20 аминокислот. Следует подчеркнуть, что поскольку это тандемный повтор, выбор первой аминокислоты является в значительной степени произвольным. Предпочтительно, чтобы пептид включал по меньшей мере повторяющуюся последовательность трипептида ΌΤΚ. Он может включать, например, последовательности ΡΌΤΡΡ (АК 13-17 из 8ЕЦ ГО N0:1), 8ΆΡΌΤΚΡ (АК 11-17 из 8 НО ГО N0:1), Τ8ΛΡΌΤΚΡ (АК 10-17 из 8ΙΤ) ГО N0:1), ΡΌΤΡΡΛΡ (АК 13-19 из 8ΙΤ) ГО N0:1) или Τ8ΆΡΌΤΚΡΆΡ (АК 10-19 из 8Е0 ГО N0:1). Реагент может включать более одной повторяющейся последовательности и нецелое число повторяющихся последовательностей, например, 1 1/4.
Липидирование облегчает включение пептида в липосому. Предпочтительно, чтобы после липидирования пептид включал первую последовательность, которая является фрагментом области тандемного повтора (этот фрагмент может быть меньше, равен или больше единичного повтора), и вторую липидированную последовательность. Предпочтительно, чтобы первая последовательность была последовательностью ΒΕΡ25 или ΒΕΡ40 из МиС1, как описано ниже.
Предпочтительно, чтобы вторая последовательность была соединена с терминальным атомом углерода первой последовательности и предпочтительно включала не более пяти аминокислот и наиболее предпочтительно две или три аминокислоты. Предпочтительно липидировать от одной до трех аминокислот и предпочтительно, чтобы это были последовательные аминокислоты.
Предпочтительно, чтобы липидированные аминокислоты представляли собой независимо 8ег*, ΤΙιγ. Акр, 01и, Сук, Τυγ. Ьук*, Агд, Аки или 01и (*лучше всего). Предпочтительно, чтобы терминальная аминокислота второй последовательности не была липидирована и предпочтительно представляла собой 01у*, А1а, Уа1, Ьеи* или 11е.
Предпочтительно, чтобы липидная группа содержала остатки С12 (лауриновой), С14 (миристиновой), С16 (пальмитиновой)*, С18 (стеариновой) или С20 (арахидоновой) кислот.
В составе МиС-1 особый интерес представляет липопептид из 27 аминокислот ΒΕΡ25. Он состоит из остатков 25 аминокислот в области тандемного повтора белка МиС-1 (т.е. повтор 1 1/4) и терминального расширения в виде С-терминального модификатора из двух аминокислот (КО), в котором К
- 5 020604 (лизин) липидирован, как показано ниже:
8ТАРРАНСУТ8АРИТРРАРС8ТАРР-К(пальмитоил)-С-0Н (81Т) ГО N0: 1).
Другой особенно интересный реагент ВСИР40 представляет собой фрагмент из 40 аа остатков в области тандемного повтора белка МиС-1 и С-терминального модификатора (88И), который липидирован, как показано ниже (примером является показанное гликозилирование и другие варианты гликозилирования, а также без него):
Т8АРПТРРАРС8(Тп)Т(Тп)АРРАНСУТ8АРПТ(Тп)РРАРС8ТАРРАНСУ8(И1ро) 8 (Про)И (81Т) ГО N0: 2).
(ίίί) Другие ингредиенты.
Другими пригодными участниками липидного компонента являются гликолипиды и другие липидные адъюванты, такие как монофосфориллипид А (МРЬА) или липид А, или синтетические адъюванты, которые могут быть или не быть аналогами природных адъювантов.
(ίν) Вода.
Вода должна быть клинической чистоты.
(9) Масштабируемость.
Объемы лимитированы только размерами сосуда. Промышленные способы можно регулировать с помощью компьютерной техники.
Claims (20)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Композиция, включающая липосомы с размерами в ограниченном интервале, в которой по меньшей мере примерно 90% липосом имеют размер менее чем примерно 200 нм и в которой липосомы дополнительно содержат пептид МИС-1, или гликозилированное, и/или липидированное производное пептида МИС-1, причем композицию получают способом, включающим стадии:создание, по существу, постоянного потока воды, создание, по существу, постоянного потока органического растворителя, содержащего в растворенном виде по меньшей мере один липид и по меньшей мере один пептид МИС-1, причем указанные липиды или липид способны образовывать липосомы, по существу, постоянное смешивание указанного потока воды и указанного потока органического растворителя с образованием смеси, охлаждение указанной смеси и формирование липосом в указанной смеси, причем соотношение скоростей потока воды и потока органического растворителя и скорость охлаждения указанной смеси регулируют таким образом, чтобы получить препарат липосом, в котором по меньшей мере примерно 90% липосом имеют размер менее примерно 200 нм.
- 2. Композиция по п.1, в которой липосомы содержат фосфолипиды, которые выбирают из группы, состоящей из дипальмитоилфосфатидилхолина (ИРРС), фосфатидилхолина (РС, лецитин), фосфатидной кислоты (РА), фосфатидилглицерина (РС), фосфатидилэтаноламина (РЕ), фосфатидилсерина (Р8), другие пригодные фосфолипиды включают также дистеароилфосфатидилхолин (И8РС), димиристоилфосфатидилхолин (ИМРС), дипальмитоилфосфатидилглицерин (ИРРС), дистеароилфосфатидилглицерин ГО8РС). димиристоилфосфатидилглицерин (ИМРС), дипальмитоилфосфатидную кислоту (ИРРА), димиристоилфосфатидную кислоту (ИМРА), дистеароилфосфатидную кислоту (И8РА), дипальмитоилфосфатидилсерин (ИРР8), димиристоилфосфатидилсерин (ИМР8), дистеароилфосфатидилсерин (И8Р8), дипальмитоилфосфатидилэтаноламин (ИРРЕ), димиристоилфосфатидилэтаноламин (ИМРЕ) и дистеароилфосфатидилэтаноламин (И8РЕ).
- 3. Композиция по п.1, в которой липосомы включают дипальмитоилфосфатидилхолин (ИРРС).
- 4. Композиция по п.1, в которой липосомы дополнительно включают стерин.
- 5. Композиция по п.1, в которой пептид МИС-1 включает последовательность аминокислот 8ЕЦ ГО N0: 1.
- 6. Композиция по п.5, в которой пептид МИС-1 липидирован по лизиновому остатку.
- 7. Композиция по п.5 или 6, в которой пептид МИС-1 пальмитоилирован.
- 8. Композиция по п.1, в которой пептид МИС-1 включает последовательность аминокислот 8ЕЦ ГО N0: 2.
- 9. Композиция по п.8, в которой пептид МИС-1 липидирован по двум терминальным сериновым остаткам последовательности 8ЕЦ ГО N0: 2.
- 10. Композиция по п.8 или 9, в которой пептид МИС-1 гликозилирован.
- 11. Композиция по любому из пп.1-10, которая является лиофилизированной.
- 12. Композиция, которая восстановлена из лиофилизированной композиции по п.11.
- 13. Композиция по п.1, где соотношение скоростей потока воды и потока органического растворителя составляет по меньшей мере примерно 2:1.
- 14. Композиция по п.1, где скорость охлаждения составляет в среднем по меньшей мере примерно 4°С в час.- 6 020604
- 15. Композиция по п.1, где поток органического растворителя до смешивания имеет температуру по меньшей мере на 10°С выше температуры перехода указанных липидов.
- 16. Композиция по п.1, где дополнительно включено обеспечение средств для создания турбулентности в потоке воды, в потоке органического растворителя или в потоке смеси, образующейся в результате смешивания.
- 17. Вакцинный препарат, включающий композицию по п.1, профильтрованную в стерильных условиях.
- 18. Вакцинный препарат, включающий лиофилизированную композицию по любому из пп.1 или 17.
- 19. Вакцинный препарат, включающий восстановленную композицию по п.18.
- 20. Способ получения препарата липосом с размерами в ограниченном интервале, включающий стадии:создание, по существу, постоянного потока воды, создание, по существу, постоянного потока органического растворителя, содержащего в растворенном виде по меньшей мере один липид, причем указанные липид или липиды способны образовывать липосомы, по существу, постоянное смешивание указанного потока воды и указанного потока органического растворителя с образованием смеси, охлаждение указанной смеси и формирование липосом в указанной смеси, причем соотношение скоростей потока воды и потока органического растворителя и скорость охлаждения указанной смеси регулируют таким образом, чтобы получить препарат липосом, в котором по меньшей мере примерно 90% липосом имеют размер менее примерно 200 нм.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US13835308P | 2008-12-17 | 2008-12-17 | |
| PCT/US2009/068499 WO2010078045A2 (en) | 2008-12-17 | 2009-12-17 | Method of making small liposomes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201100829A1 EA201100829A1 (ru) | 2012-02-28 |
| EA020604B1 true EA020604B1 (ru) | 2014-12-30 |
Family
ID=42310550
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201100829A EA020604B1 (ru) | 2008-12-17 | 2009-12-17 | Композиция, содержащая липосомы малого размера, и способ ее получения |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20120034294A1 (ru) |
| EP (1) | EP2367532A4 (ru) |
| JP (2) | JP2012512260A (ru) |
| KR (1) | KR101452033B1 (ru) |
| CN (2) | CN102256595A (ru) |
| AU (1) | AU2009333177B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0923001A2 (ru) |
| CA (1) | CA2747182C (ru) |
| EA (1) | EA020604B1 (ru) |
| MX (1) | MX2011006562A (ru) |
| SG (1) | SG172257A1 (ru) |
| WO (1) | WO2010078045A2 (ru) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI395591B (zh) * | 2004-04-01 | 2013-05-11 | Oncothyreon Inc | 黏液性糖蛋白（ｍｕｃ-１）疫苗 |
| JP5771366B2 (ja) * | 2009-09-02 | 2015-08-26 | 株式会社バイオメッドコア | リポソーム製造装置及び方法 |
| MX2013009742A (es) | 2011-02-24 | 2014-01-31 | Oncothyreon Inc | Vacuna de glicolipopeptidos a base de muc1 con adyuvante. |
| KR101387575B1 (ko) * | 2012-08-10 | 2014-04-23 | 서울대학교산학협력단 | 인지질 및 아세틸렌기를 포함하는 리포좀 및 그의 용도 |
| US9693958B2 (en) * | 2013-03-15 | 2017-07-04 | Cureport, Inc. | Methods and devices for preparation of lipid nanoparticles |
| CA2977827C (en) * | 2015-03-19 | 2023-10-17 | University Of Connecticut | Systems and methods for continuous manufacturing of liposomal drug formulations |
| CA3059714C (en) * | 2017-04-13 | 2023-02-14 | National University Corporation Hokkaido University | Flow channel structure and lipid particle or micelle formation method using same |
| AU2020241756A1 (en) | 2019-03-19 | 2021-11-04 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Method of making lipid-encapsulated RNA nanoparticles |
| EP3711749A1 (en) * | 2019-03-19 | 2020-09-23 | Polymun Scientific Immunbiologische Forschung GmbH | Method of making lipid nanoparticles |
| WO2023041588A1 (en) | 2021-09-14 | 2023-03-23 | Advapharm Gmbh | Novel lipopeptide formulation |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH11139961A (ja) * | 1997-11-06 | 1999-05-25 | Taisho Pharmaceut Co Ltd | リポソームの製造方法 |
| JP2002509102A (ja) * | 1998-01-16 | 2002-03-26 | バイオミラ・ユーエスエイ・インコーポレイテッド | リポマトリックス製剤 |
| BR0012624B1 (pt) * | 1999-07-15 | 2011-08-09 | métodos para a preparação de agentes terapêuticos envolvidos por lipìdeos. | |
| JP2003514824A (ja) * | 1999-11-15 | 2003-04-22 | ビオミラ，インコーポレーテッド | 合成脂質−ａ類似体およびその使用 |
| ATE396707T1 (de) * | 2000-12-01 | 2008-06-15 | Biomira Inc | Herstellung grosser liposome durch infusion in peg |
| US20030235610A1 (en) * | 2002-06-21 | 2003-12-25 | Piedmont Pharmaceuticals, Llc | Liposomes containing biologically active compounds |
| WO2004071638A2 (en) * | 2003-02-11 | 2004-08-26 | Regents Of The University Of California, The | Microfluidic devices and method for controlled viscous shearing and formation of amphiphilic vesicles |
| US9198645B2 (en) * | 2003-11-26 | 2015-12-01 | The United States of America, as represented by the Secretary of Commerce of The National Institute of Standards and Technology | Controlled vesicle self-assembly in continuous two phase flow microfluidic channels |
| TWI395591B (zh) * | 2004-04-01 | 2013-05-11 | Oncothyreon Inc | 黏液性糖蛋白（ｍｕｃ-１）疫苗 |
| CA2596131A1 (en) * | 2005-01-28 | 2006-08-03 | Bc Cancer Agency | Liposomal compositions for parenteral delivery of agents |
| CA2613327A1 (en) * | 2005-06-28 | 2007-02-08 | Biomira, Inc. | Method of treating patients with a mucinous glycoprotein (muc-1) vaccine |
| CN101267805A (zh) * | 2005-07-27 | 2008-09-17 | 普洛体维生物治疗公司 | 制造脂质体的***和方法 |
| JP5600432B2 (ja) * | 2006-04-06 | 2014-10-01 | インスメッド， インコーポレイテッド | コアセルベート化誘導リポソーム被包法及びその調合物 |
| US7811603B2 (en) * | 2006-05-09 | 2010-10-12 | The Regents Of The University Of California | Microfluidic device for forming monodisperse lipoplexes |
| JP5126874B2 (ja) * | 2007-05-21 | 2013-01-23 | 国立大学法人神戸大学 | リポソーム製剤の製造方法 |
-
2009
- 2009-12-17 MX MX2011006562A patent/MX2011006562A/es active IP Right Grant
- 2009-12-17 CN CN2009801509533A patent/CN102256595A/zh active Pending
- 2009-12-17 US US13/140,786 patent/US20120034294A1/en not_active Abandoned
- 2009-12-17 SG SG2011044831A patent/SG172257A1/en unknown
- 2009-12-17 WO PCT/US2009/068499 patent/WO2010078045A2/en active Application Filing
- 2009-12-17 AU AU2009333177A patent/AU2009333177B2/en not_active Ceased
- 2009-12-17 EP EP09836955A patent/EP2367532A4/en not_active Withdrawn
- 2009-12-17 CA CA2747182A patent/CA2747182C/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-17 JP JP2011542440A patent/JP2012512260A/ja active Pending
- 2009-12-17 EA EA201100829A patent/EA020604B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2009-12-17 KR KR1020117015492A patent/KR101452033B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2009-12-17 BR BRPI0923001A patent/BRPI0923001A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-12-17 CN CN201610381865.6A patent/CN105935352A/zh active Pending
-
2013
- 2013-03-13 US US13/799,324 patent/US20130330398A1/en not_active Abandoned
-
2014
- 2014-07-14 JP JP2014143840A patent/JP5895030B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2015
- 2015-05-12 US US14/710,484 patent/US20150315217A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2009333177A1 (en) | 2011-07-07 |
| MX2011006562A (es) | 2011-09-27 |
| BRPI0923001A2 (pt) | 2018-09-18 |
| US20150315217A1 (en) | 2015-11-05 |
| JP2014224127A (ja) | 2014-12-04 |
| JP2012512260A (ja) | 2012-05-31 |
| CN105935352A (zh) | 2016-09-14 |
| CN102256595A (zh) | 2011-11-23 |
| EP2367532A4 (en) | 2012-12-12 |
| AU2009333177B2 (en) | 2013-09-19 |
| EA201100829A1 (ru) | 2012-02-28 |
| CA2747182C (en) | 2014-11-18 |
| WO2010078045A3 (en) | 2010-10-28 |
| WO2010078045A2 (en) | 2010-07-08 |
| CA2747182A1 (en) | 2010-07-08 |
| KR101452033B1 (ko) | 2014-10-21 |
| EP2367532A2 (en) | 2011-09-28 |
| KR20110094114A (ko) | 2011-08-19 |
| US20120034294A1 (en) | 2012-02-09 |
| SG172257A1 (en) | 2011-07-28 |
| JP5895030B2 (ja) | 2016-03-30 |
| US20130330398A1 (en) | 2013-12-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA020604B1 (ru) | Композиция, содержащая липосомы малого размера, и способ ее получения | |
| Mui et al. | Extrusion technique to generate liposomes of defined size | |
| JP3571717B2 (ja) | 粒子、該粒子の製法及びその使用 | |
| FI115115B (fi) | Menetelmät ja laite liposomien valmistamiseksi | |
| ES2384094T3 (es) | Producción de liposomas multivesiculares | |
| JP4966018B2 (ja) | 三元非ラメラ脂質組成物 | |
| JPH0639274A (ja) | リポソーム懸濁液の安定化法 | |
| WO1993006921A1 (en) | Particles, method of preparing said particles and uses thereof | |
| Mui et al. | Formation of large unilamellar vesicles by extrusion | |
| WO2008050807A1 (fr) | Procede de production d'une preparation de liposome | |
| JPH10509459A (ja) | 疏水性薬剤を含むリポソームを製造するための方法及び装置 | |
| Muderhwa et al. | Oil‐in‐water liposomal emulsions: Characterization and potential use in vaccine delivery | |
| Rao | Preparation of liposomes on the industrial scale: Problems and perspectives | |
| Eskandari et al. | Physical and chemical properties of nano-liposome, application in nano medicine | |
| Sheikh et al. | Generation of antigen specific CD8+ cytotoxic T cells following immunization with soluble protein formulated with novel glycoside adjuvants | |
| JPS607933A (ja) | リポソ−ムの製造法 | |
| JP5771366B2 (ja) | リポソーム製造装置及び方法 | |
| JPH03181415A (ja) | リポソーム表面の修飾方法および修飾装置 | |
| JP2019198860A (ja) | リポソームの製造方法および製造装置 | |
| JP2007509666A (ja) | 貯蔵安定性を有する複合エマルジョンの製造方法 | |
| JP4894119B2 (ja) | 脂肪酸含有リポソーム分散液 | |
| AU2013273711A1 (en) | Method of making small liposomes | |
| Walker | Higher order self-assembly of mixed surfactant systems | |
| JP2012086166A (ja) | リポソーム製造装置 | |
| Arunothayanun | Studies on polyhedral niosomes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |