EA020425B1 - Ковалентный конъюгат полиэтиленгликоля с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором человека - Google Patents
Ковалентный конъюгат полиэтиленгликоля с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором человека Download PDFInfo
- Publication number
- EA020425B1 EA020425B1 EA201101663A EA201101663A EA020425B1 EA 020425 B1 EA020425 B1 EA 020425B1 EA 201101663 A EA201101663 A EA 201101663A EA 201101663 A EA201101663 A EA 201101663A EA 020425 B1 EA020425 B1 EA 020425B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- csf
- tyrosine
- human factor
- peg
- conjugate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается ковалентного конъюгата полиэтиленгликоля с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором человека, в котором ПЕГ присоединен к тирозиновым или гистидиновым фрагментам полипептида посредством азогруппы общей структуры:где n - целое число в интервале от 100 до 1200; А - аминокислотный фрагмент тирозина или гистидина; Г-КСФ - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Конъюгат Г-КСФ обладает большим временем циркуляции в кровотоке по сравнению с немодифицированным полипептидом при сохранении существенной доли его активности.
Description
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается ковалентного конъюгата полиэтиленгликоля с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором человека, в котором полимер присоединён к полипептиду посредством азогруппы.
Сведения о предшествующем уровне техники
Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ, О-С8Р) - полипептидный гормон, стимулирующий в культуре клеток формирование колоний гранулоцитов. Г-КСФ стимулирует пролиферацию и дифференцировку поздних клеток-предшественников в нейтрофилы. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор является главным гемопоэтическим фактором роста, регулирующим гранулоцитопоэз, и широко применяется в медицине при лечении нейтропений различной этиологии.
Показаниями к применению О-С8Р являются нейтропения наследственная, периодическая или идиопатическая, при которой число нейтрофилов ниже или равно 500 клеток/мкл (в том числе у больных, получающих цитостатические лекарственные средства по поводу немиелоидных злокачественных новообразований, а также имеющих в анамнезе тяжелые или рецидивирующие инфекции в последние 12 месяцев), сокращение продолжительности периода нейтропений и ее клинических последствий у пациентов, готовящихся к трансплантации костного мозга, стойкая нейтропения у пациентов с развернутой стадией ВИЧ-инфекции (абсолютное число нейтрофилов 1000 клеток/мкл и менее), мобилизация периферических стволовых клеток (в том числе после миелосупрессивной терапии).
Известны препараты Г-КСФ, например Филграстим - метионилколониестимулирующий фактор с молекулярной массой 18800 Да, представляющий собой негликозилированный протеин, состоящий из 175 аминокислот (производство: Мастерклон, Россия). Тем не менее, применение Г-КСФ в медицине ограничено рядом факторов, среди которых наиболее существенным является недостаточная энзиматическая стабильность в организме, которая приводит к необходимости увеличения частоты введения препарата, что в ряде случаев сопряжено с усилением побочных эффектов.
Среднее значение периода полувыведения филграстима из сыворотки как у здоровых людей, так и у больных с опухолями составляет около 3,5 ч; скорость клиренса приблизительно 0,5-0,7 мл/(мин-кг). Только при непрерывных 24-часовых в/в инфузиях филграстима в дозе 20 мкг/кг в течение 11-20 дней достигается равновесная концентрация в крови.
В связи с этим возникает необходимость в химическом модифицировании молекулы Г-КСФ с целью преодоления указанных недостатков.
Для модифицирования различных полипептидов известно применение монометоксиполиэтиленгликоля (мПЭГ), который представляет собой нейтральный полиэфир с различной молекулярной массой [Никитин И.Г., Сторожаков Т.Н. Пегилированные лекарственные препараты: современное состояние проблемы и перспективы, в сб.: Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. № 3 (13) (2001), с. 3-8].
Как правило, в ковалентных конъюгатах полимерный фрагмент присоединен к полипептиду через одну из свободных аминогрупп последнего Κοζ1ο\ν5ΐ<ί А., СЬаг1ск 8.А., Натк ГМ. Осус1ортсп1 οί Рсду1а1сб 1п1сгГсгоп5 ίοτ 1Нс ТгеаНпсШ οί СЬготс НсраИИк С. ΒιοΌγη^κ.; νοί. 15(7) (2001), ρ. 419-429], а препарат представляет собой смесь позиционных изомеров, химическая структура которых друг от друга отличается местом прикрепления полимера к полипептиду. Теоретически число позиционных изомеров в данном случае равно количеству свободных аминогрупп в полипептиде при условии их доступности для пегилирующего агента [Блохин Н.П., Никитин И.Г. Особенности фармакологической динамики и кинетики пегилированного α-интерферона (40 кДа) Пегасис: новые возможности терапии хронического гепатита С. В сб.: Материалы VII Российской конференции Гепатология сегодня. РЖГГК. 2002, с. 6].
В заявке РИ 2009122976 (опубл. 27.12.2010) предложен конъюгат трехветвистого ПЕГ-Г-КСФ следующей общей формулы:
/ ,—о\—Ζ—Υ—Θ-СЗР —ο-ν / η ииг в котором отношение связывания трехветвистого полиэтиленгликоля и Г-КСФ составляет 1:1 (моль/моль) и ПЭГ имеет среднюю молекулярную массу от 200 до 45000 Да, где η представляет собой целое число от 1 до 1000; т представляет собой целое число от 10 до 1000;
Ζ представляет собой (СН2)к или (СН2)кЫНСО(СН2)к в качестве линкера Г-КСФ и ПЭГ, где к представляет собой целое число от 1 до 6;
Υ представляет собой амидную связь, образованную объединением одной из ИН2-функциональной
- 1 020425 группы в Г-КСФ и функциональной группы производного ПЭГ.
В заявке И8 2008/0287659 (опубл. 20.11.2008) раскрыт пегилированный мутеин Г-КСФ, представляющий собой смесь ковалентных конъюгатов с разной степенью пегилирования, имеющих общую формулу
где С - мутеин Г -КСФ;
К - низший алкил; η - целое число от 420 до 550; т - целое число от 1 до 5.
Таким образом, предложенная смесь конъюгатов представляет собой смесь различных позиционных изомеров разной степени пегилирования.
Известно, что позиционные изомеры полипептидов имеют различную биологическую активность (И8 2004/0223950, опубл. 11.11. 2004). Это создаёт предпосылки для расширения арсенала таких средств за счёт различных вариантов модифицирования молекул протеинов. Например, изменение положений и способов присоединения ПЭГ к протеину позволяет изменить соотношения позиционных изомеров в конечном продукте.
Одним из способов снижения числа позиционных изомеров является присоединение ПЕГ преимущественно к Ν-терминальной аминогруппе полипептида с использованием разности значений рКа для Ν-концевой α-аминогруппы и ε-аминогруппы лизиновых фрагментов белка.
Так, в международной заявке \УО 96/011953 (опубл. 25.04.1996) предложен ковалентный конъюгат Г-КСФ с ПЕГ, полученный восстановительным алкилированием Ν-терминальной аминогруппы пептида метоксиполиэтиленгликоль-альдегидом в присутствии Ν;·ιί'.'ΝΒΗ3 при рН 5. Однако условия конъюгации в данном патенте полностью не исключают вероятность побочных реакций, в том числе присоединения ПЕГ к ε-аминогруппам лизиновых фрагментов, часть которых, несмотря на высокое значение рКа, даже при кислых рН депротонирована, а их количество в белке, в отличие от Ν-терминальной α-аминогруппы, больше одной.
Другим направлением снижения числа позиционных изомеров является присоединение ПЕГ к тиольной группе цистеинового фрагмента полипептида.
Так, в патенте \УО 03/078461 (опубл. 25.03.2003) раскрыт ковалентный конъюгат, в котором полиэтиленгликоль связан с Г-КСФ в соотношении 1:1 через малеимидную группу с тиолом цистеинового фрагмента полипептида. Однако приведенные в патенте значения относительных активностей конъюгатов показывают, что модификация по тиольным фрагментам значимых преимуществ перед конъюгатами, образованным по аминогруппам лизина, не имеют.
Таким образом, дальнейшая разработка новых типов конъюгатов, включая те, в которых не затронуты аминогруппы полипептидов, является весьма перспективной задачей.
Наиболее близкими по технической сущности рассматриваются физиологически активные конъюгаты, в частности, инсулина, раскрытые в И8 4179337 (опубл. 18.12.1979), содержащие в молекуле фрагмент парафенилендиазония и имеющие строение аминоазопроизводного формулы
где К представляет РЕС-О-СН2-, РЕС-О-СН2-СН(ОН)-СН2-О- или РЕС-О-С(=О)-;
представляет пептидную цепь.
Недостатками таких производных являются относительно большое количество возможных вариантов позиционных изомеров вследствие присоединения полимерной части к аминогруппам полипептидов и их невысокая стабильность в организме и, как следствие, связанные с этим возможности неконтролируемого изменения структуры и отщепления реакционноспособных частиц, в частности диазосоединений.
Сущность изобретения
Авторы изобретения неожиданно установили, что конъюгаты ПЕГ с Г-КСФ, в которых полимер присоединен к тирозиновым или гистидиновым фрагментам полипепетида посредством азогруппы, имеющие общую структуру (I), приобретают способность длительной циркуляции в крови и сохраняют значительную часть биологической активности немодифицированного Г-КСФ.
- 2 020425 где η - целое число в интервале от 100 до 1200;
А - аминокислотный фрагмент тирозина или гистидина;
Г-КСФ - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор.
Для доказательства строения конъюгата как азосоединения применяют, в частности, электронную спектроскопию поглощения (ЭСП), сравнивают спектральные характеристики (интенсивность, ширину и положение максимумов полос поглощения) растворов пегилированного и немодифицированного Г-КСФ и интерпретируют полученные закономерности с позиций теории цветности органических соединений, необязательно, с привлечением адекватных методов квантово-химического моделирования.
Характеристики максимумов полос поглощения приведены в табл. 1.
Таблица 1
Характеристики максимумов полос поглощения пегилированного и немодифицированного Г-КСФ (вода, рН 4,5, 11 см)
Появление полос поглощения у пегилированного Г-КСФ с максимумами при 339 и 400 нм может быть объяснено, например, с позиций теории цветности органических соединений, локальными электронными переходами в хромофорных системах не связанных сопряжением диарилазогрупп, образовавшихся в результате ковалентного присоединения ПЭГ-агента к тирозиновым и гистидиновым звеньям Г-КСФ. Уширение полос обусловлено наличием нескольких позиционных изомеров с близкими энергиями электронно-колебательных переходов.
Достижение технического результата, заключающегося в увеличении времени циркуляции в кровотоке пегилированного Г-КСФ, подтверждают в сериях исследований на мышиной модели (табл. 2).
Таблица 2
Время достижения максимальной концентрации (Ттах) и период полупревращения (Т1/2) Г-КСФ и его конъгата в соответствии с изобретением в крови мышей после п/к инъекции
Препарат | Тщах | 1*1/2/ ч |
Г-КСФ | 3,9+0,3 | 3,9±1,б |
ПЕГ-Г-КСФ | 9,8±1,4 | 15,4±3,1 |
Приведённые данные показывают, что конъюгат Г-КСФ в соответствии с изобретением обладает большим временем циркуляции в кровотоке по сравнению с немодифицированным протеином.
Результаты исследования биологической активности конъюгатов в соответствии с настоящим изобретением приведены в табл. 3.
Таблица 3
Биологическая активность пегилированного и немодифицированного Г-КСФ
Препарат | МЕ/мг | Остаточная активность, % |
Г-КСФ | КО* | 100 |
ПЕГ-Г-КСФ | 2,4-Ю7 | 24 |
Таким образом, конъюгат в соответствии с настоящим изобретением сохраняет существенную часть биологической активности немодифицированного Г-КСФ.
- 3 020425
В соответствии с изобретением конъюгат Г -КСФ с высокой степенью чистоты может быть получен способом, включающим стадии, на которых:
а) метоксиполиэтиленгликолевый эфир аминобензойной кислоты
где η принимает значения от 10 до 1200, диазотируют нитритом щелочного или щелочно-земельного металла в водной или водно-органической среде при температуре от -2 до 30°С или органическим нитритом в среде полярного органического растворителя, неограниченно смешивающегося с водой, при температуре от -40 до 30°С, молярном соотношении нитрита к метоксиполиэтиленгликолевому эфиру аминобензойной кислоты от 1,1:1 до 1000:1 и молярном соотношении кислоты к метоксиполиэтиленгликолевому эфиру аминобензойной кислоты от 3:1 до 10000:1 с последующим удалением избытка нитрита и получением активированного пегилирующего агента - ([метоксиполиэтиленгликольокси]карбонил)бензолдиазония:
где η - принимает вышеуказанные значения;
б) активированный пегилирующий агент без выделения из реакционной смеси вводят в реакцию азосочетания с Г-КСФ в молярном соотношении ПЕГ-агента к Г-КСФ 1-10:1 соответственно в водной или водно-органической среде с рН от 7,0 до 10,0 при температуре от 0 до 30°С; по достижении степени превращения по меньшей мере 70% реакцию останавливают добавлением к реакционной массе низкомолекулярной азосоставляющей с получением смеси конъюгатов разной степени пегилирования, немодифицированного полипептида и блокированного ПЭГ -агента;
в) полученную смесь разделяют ионообменной хроматографией с увеличением ионной силы буферных элюирующих растворов с выделением монопегилированного Г-КСФ.
При реализации заявленного способа обеспечивается повышение выхода пегилированного Г-КСФ и увеличение времени его циркуляции в кровотоке.
Повышение выхода пегилированного Г-КСФ достигается за счет количественного переведения ПЕГ-агента в активную форму непосредственно перед конъюгацией, исключая деградацию активной группировки - диазогруппы при транспортировке и хранении.
Увеличение времени циркуляции пегилированного Г-КСФ в кровотоке возможно за счёт способности тирозиновых и гистидиновых звеньев полипептида вступать в реакцию азосочетания с активными диазосоединениями с образованием биологически активных азопроизводных Г-КСФ.
В случае необходимости, повышение устойчивости пегилирующего агента при хранении достигается в результате применения для активации пегилирующего агента органического нитрита в среде полярного органического растворителя, неограниченно смешивающегося с водой, что дополнительно позволяет расширить температурный диапазон проведения реакции диазотирования.
В предпочтительном варианте изобретения на стадии а) диазотирование проводят нитритом натрия в среде водного раствора бромисто-водородной кислоты, а избыток нитрита удаляют сульфаминовой кислотой.
В следующем предпочтительном варианте изобретения на стадии а) диазотирование проводят третбутилнитритом в присутствии НС1 в тетрагидрофуране.
В следующем предпочтительном варианте изобретения на стадии б) для создания и поддержания рН применяют боратно-карбонатный буферный раствор, степень превращения Г-КСФ составляет 75100%, а в качестве низкомолекулярной азосоставляющей применяют тирозин.
В следующем предпочтительном варианте изобретения на стадии в) смесь разделяют ионообменной хроматографией с увеличением ионной силы буферных элюирующих растворов от 0,02 до 1,0 М ЫаС1.
На стадии а) диазотирование метоксиполиэтиленгликолевого эфира аминобензойной кислоты осуществляют прибавлением нитрита щелочного или щелочно-земельного металла в кислой водной или водно-органической среде при температуре от -2 до 30°С.
В первом варианте диазотирования применяют нитрит щелочного или щелочно-земельного металла в кислой водной или водно-органической среде. Наиболее предпочтительный интервал температур диазотирования составляет от 0 до 5°С. Кислую среду создают с помощью органических кислот, например с помощью уксусной кислоты или ее галогенпроизводных, таких как хлоруксусная, трихлоруксусная, бромуксусная, трибромуксусная, трифторуксусная кислоты, а также лимонной или винной кислот, или неорганических кислот, например хлористо-водородной, бромисто-водородной, серной или фосфорной кислот, а также смесью органических и/или нерганических кислот. Молярное соотношение нитрита к метоксиполиэтиленгликолевому эфиру аминобензойной кислоты составляет от 1,1:1 до 1000:1, предпочти- 4 020425 тельно от 1,1:1 до 10:1. Молярное соотношение кислоты к метоксиполиэтиленгликолевому эфиру аминобензойной кислоты составляет от 3:1 до 10000:1. Реакцию предпочтительно проводят в присутствии катализатора диазотирования, в качестве которого используют бромид-ионы, вносимые в реакционную смесь в виде бромоводородной кислоты или ее растворимых солей, например бромидов щелочных металлов. Наиболее предпочтительно создавать кислую среду раствором бромисто-водородной кислоты.
Во втором варианте диазотирование проводят с применением органического нитрита в среде полярного органического растворителя, неограниченно смешивающегося с водой, при температуре от -40 до 30°С. Наиболее предпочтительный интервал температур диазотирования составляет от -20 до 0°С. Предпочтительными органическими нитритами являются бутилнитриты или амилнитриты, более предпочтительно трет-бутилнитрит. Молярное соотношение нитрита к метоксиполиэтиленгликолевому эфиру аминобензойной кислоты составляет от 1,1:1 до 1000:1, предпочтительно от 1,1:1 до 10:1. Кислую среду в полярной органической среде создают растворами НС1 или НВг в алифатическом эфире, например диэтиловом эфире, или циклическом эфире, например диоксане или тетрагидрофуране. Молярное соотношение кислоты к метоксиполиэтиленгликолевому эфиру аминобензойной кислоты составляет от 3:1 до 10000:1.
По завершении диазотирования активированный ПЭГ-агент можно хранить при пониженной температуре в течение не более 2 ч в водной или водно-органической среде или не более 24 ч в полярной органической среде без существенной потери его способности к азосочетанию. Термин пониженная температура означает температуру от -2 до 5°С в случае применения водной или водно-органической среды и от -40 до 0°С в случае применения полярной органической среды. Перед применением активированного ПЭГ -агента для пегилирования Г-КСФ требуется удаление избытка нитрит-ионов, для чего к его раствору добавляют мочевину или сульфаминовую кислоту. Альтернативно, применяют азиды щелочных или щелочно-земельных металлов.
На стадии б) пегилирование Г-КСФ достигается в результате протекания реакции азосочетания диазотированного метоксиполиэтиленгликолевого эфира аминобензойной кислоты с Г-КСФ в нейтральной или слабощелочной водной или водно-органической среде при температуре от 0до 30°С. Наиболее предпочтительный интервал рН при пегилировании составляет от 9 до 10. Поддержание рН обеспечивают применением подходящего буферного раствора, например боратно-карбонатного буферного раствора. Выбор раствора находится в рамках компетенции среднего специалиста в данной области. Молярное соотношение диазотированного метоксиполиэтиленгликолевого эфира 4-аминобензойной кислоты к Г-КСФ составляет от 1:1 до 10:1, наиболее предпочтительно от 3:1 до 8:1.
Контроль процесса пегилирования осуществляют эксклюзионной или обращенно-фазовой ВЭЖХ. По достижении требуемой степени превращения полипептида реакцию пегилирования останавливают добавлением к реакционной массе низкомолекулярной азосоставляющей. Для этого в качестве низкомолекулярной азосотавляющей применяют вещества фенольной природы или их эфиры, вещества, имеющие природу ароматических аминов, или вещества, имеющие гетероциклическую природу, у которых гетероцикл способен выступать в качестве азосоставляющей в реакции азосочетания. Наиболее предпочтительными являются тирозин и гистидин, более предпочтительно тирозин. Предпочтительно степень превращения Г -КСФ, вычисленная по результатам ВЭЖХ-анализа, составляет 75-100%.
Выделение пегилированного Г-КСФ из реакционной смеси осуществляют обычными методами ионообменной хроматографии, последовательно используя буферные растворы с возрастающей ионной силой. Концентрацию Г-КСФ определяют методом ВЭЖХ или спектрофотометрически, используя соответствующее значение А280 для раствора с концентрацией полипептида 1 мг/мл.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Далее изобретение будет проиллюстрировано следующими примерами, подтверждающими возможность его осуществления с достижением указанного в описании технического результата.
Пример 1. Получение пегилированного Г-КСФ.
К охлажденному до 3°С раствору 0,5 мкмоль Г-КСФ в боратно-карбонатном буфере с рН 9,5 приливают охлажденный раствор 2,5 мкмоль 4-([метоксиполиэтиленгликольокси]карбонил)бензолдиазония (М.м. 30 кДа), поддерживая рН реакционной смеси 9,5±0,3. Реакционную смесь при охлаждении перемешивают приблизительно 2 ч, контролируя протекание превращений обращенно-фазовой ВЭЖХ (колонка Кготакй 300-5С4, 250x4,6 мм, спектрофотометрическое детектирование при 220, 280, 340 и 400 нм, градиентное элюирование: от 30% водн. ацетонитрил + 0,2% ТФУ до 80% водн. ацетонитрил + 0,2% ТФУ). По достижении степени превращения Г-КСФ равной 70-80% приливают раствор тирозина, перемешивают 10 мин и уксусной кислотой доводят рН до 5,0-6,5. Далее реакционную смесь, содержащую смесь дипегилированого, монопегилированного и немодифицированного Г-КСФ, а также блокированный пегилирующий агент, разделяют ионообменной хроматографией с увеличением ионной силы буферных элюирующих растворов от 0,02 до 1,0 М ЫаС1. Выход очищенного пегилированного Г-КСФ
39% (считая на Г-КСФ). ЭСП (вода, рН 4,5, 11 см), Хмакс, нм (Δ|“'>: 219 (36,4), 279 (6,6), 339 (5,9), 400 (3,8).
Пример 2. Определение времени циркуляции пегилированного Г-КСФ в крови на мышиной модели.
- 5 020425
Самцам мышей линии СВА вводят подкожно по 5 мкг пегилированного Г-КСФ в соответствии с изобретением, после чего собирают кровь в первый день через 2 ч после инъекции и далее через каждые 24 ч в течение 10 дней. В качестве контроля используют немодифицированный Г-КСФ, который вводят по той же схеме. Взятые пробы крови инкубируют в течение 45 мин при 37°С, после чего отделяют тромб и повторно инкубируют при 4°С, полученную сыворотку центрифугируют и сохраняют при -65°С до проведения тестов. Содержание в сыворотках крови (пг/мл) определяют с помощью ИФА набора Нитап 0-С8Р ЕЫ§А Κίΐ, далее рассчитывают время достижения максимальной концентрации и период полупревращения. Данные представлены в табл. 2.
Пример 3. Определение активности пегилированного Г-КСФ.
Человеческую миелоидную клеточную линию НЬ-60 (АТСС ССЬ-240) культивируют в среде ΚΡΜΙ 1640, в которую добавлен 10% РВ§. Культивированные клетки суспендируют при плотности примерно 2,2х105 клеток/мл и добавляют ДМСО (диметилсульфоксид со степенью чистоты, пригодной для культивирования, §1§та) при конечной концентрации 1,25% (об./об.). Затем 90 мкл клеточной суспензии высевают в каждую лунку 96-луночного планшета (Сотшд/96-луночный планшет с выпариванием при низкой температуре), после чего планшет оставляют до достижения плотности примерно 2х104 клеток на лунку и культивируют в инкубаторе при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 72 ч.
Каждый образец разводят средой ΚΡΜΙ 1640 до идентичной концентрации 10 мкг/мл, а затем проводят двукратное разведение средой ΡΡΜΙ 1640 в 19 раз. Эти серийные двукратные разведения отдельно добавляют в каждую лунку, содержащую клетки НЬ-60 в объеме 10 мкл, так, чтобы концентрация каждого образца изначально составляла 1 мкг/мл. Затем клетки культивируют в инкубаторе при 37°С в течение 72 ч.
Пролиферацию клеток НЬ-60 анализируют с использованием реагента 96 (Се11 Тйет 96ТМ, Са£ Νο. 04100, Рготеда) для определения клеточного титра и увеличивающееся число клеток определяют путем измерения оптической плотности при 670 нм. Результаты измерения приведены в табл. 3.
Claims (1)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯКонъюгат полиэтиленгликоля с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором, в котором полимер присоединен к тирозиновым или гистидиновым фрагментам полипептида посредством азогруппы, имеющий общую структурную формулу где п - целое число в интервале от 100 до 1200;А - аминокислотный фрагмент тирозина или гистидина; Г-КСФ - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EA201101663A EA020425B1 (ru) | 2011-12-21 | 2011-12-21 | Ковалентный конъюгат полиэтиленгликоля с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором человека |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EA201101663A EA020425B1 (ru) | 2011-12-21 | 2011-12-21 | Ковалентный конъюгат полиэтиленгликоля с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором человека |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201101663A1 EA201101663A1 (ru) | 2013-06-28 |
EA020425B1 true EA020425B1 (ru) | 2014-11-28 |
Family
ID=48699367
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201101663A EA020425B1 (ru) | 2011-12-21 | 2011-12-21 | Ковалентный конъюгат полиэтиленгликоля с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором человека |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
EA (1) | EA020425B1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2749509C1 (ru) * | 2020-07-28 | 2021-06-11 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Таргетное колониестимулирующее средство |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA029942B1 (ru) * | 2014-06-16 | 2018-06-29 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Форт" (Ооо "Форт") | Стабильная фармацевтическая композиция на основе конъюгатов биологически активных белков с полиэтиленгликолем, содержащих азогруппу |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5977310A (en) * | 1995-03-10 | 1999-11-02 | Toshikazu Nakamura And Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. | Peg-modified HGF |
RU2400490C2 (ru) * | 2003-12-03 | 2010-09-27 | Биодженерикс Аг | Гликопэгилированный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор |
-
2011
- 2011-12-21 EA EA201101663A patent/EA020425B1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5977310A (en) * | 1995-03-10 | 1999-11-02 | Toshikazu Nakamura And Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. | Peg-modified HGF |
RU2400490C2 (ru) * | 2003-12-03 | 2010-09-27 | Биодженерикс Аг | Гликопэгилированный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2749509C1 (ru) * | 2020-07-28 | 2021-06-11 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Таргетное колониестимулирующее средство |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EA201101663A1 (ru) | 2013-06-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2233504B1 (en) | An erythropoietin mimetic peptide derivatives and its pharmaceutical salt, the preparation and uses thereof | |
JP6426103B2 (ja) | c−Metタンパク質アゴニスト | |
CN104163864A (zh) | 经修饰fgf-21多肽和其用途 | |
WO1996028475A1 (fr) | Facteur de croissance des hepatocytes modifie a l'aide de polyethylene glycol | |
US9808535B2 (en) | Conjugates for protection from nephrotoxic active substances | |
CN101663046A (zh) | 经修饰fgf-21多肽和其用途 | |
EP3845550B1 (en) | Composition for accelerating cell proliferation comprising erythropoietin-derived peptide | |
RU2488598C2 (ru) | Гормон роста, модифицированный двухцепочечным полиэтиленгликолем, способ его получения и применение | |
BRPI0622128A2 (pt) | conjugado de polietileno glicol-g-csf | |
EP2982680A1 (en) | Protamine peptidomimetic, and pharmaceutically acceptable salts and use thereof | |
US20210268117A1 (en) | Methods of generating a pegylated il-11 composition | |
EA020425B1 (ru) | Ковалентный конъюгат полиэтиленгликоля с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором человека | |
JP6005732B2 (ja) | 非ペプチド性重合体−インスリン多量体及びその製造方法 | |
KR20090118879A (ko) | 폴리에틸렌글리콜로 화학적으로 수식된 인간 성장 호르몬, 이의 제조방법 및 용도 | |
WO2011060018A2 (en) | Compositions and methods for using peptides, modified peptides, peptidomimetics and fibrin derivatives | |
JP2012510518A (ja) | 体液貯留障害を処置するための方法および組成物 | |
WO2010074082A1 (ja) | バソヒビン修飾体 | |
EA019967B1 (ru) | Ковалентный конъюгат полиэтиленгликоля с гормоном роста человека | |
US20230416326A1 (en) | Modified interleukin-2 (il-2) molecule and use thereof | |
CN109021093B (zh) | 聚乙二醇修饰的glp-1衍生物及其药用盐 | |
US20230241239A1 (en) | Retinoic acid modified lysosome targeting chimera molecule, preparation method and applications thereof | |
KR20240042656A (ko) | 신규구조를 갖는 폴리펩타이드 접합체 약물 및 그 응용 | |
EA020220B1 (ru) | Ковалентный конъюгат полиэтиленгликоля с полипептидом, имеющим активность интерферона-гамма | |
EP3872084A1 (en) | Epi-x4 based peptides and derivatives thereof | |
JP2005281302A (ja) | 修飾インターロイキン−11及びそれを含有する医薬組成物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KG MD TJ TM |