EA019872B1 - Соединения, которые увеличивают количество гематопоэтических стволовых клеток - Google Patents

Соединения, которые увеличивают количество гематопоэтических стволовых клеток Download PDF

Info

Publication number
EA019872B1
EA019872B1 EA201100663A EA201100663A EA019872B1 EA 019872 B1 EA019872 B1 EA 019872B1 EA 201100663 A EA201100663 A EA 201100663A EA 201100663 A EA201100663 A EA 201100663A EA 019872 B1 EA019872 B1 EA 019872B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
purin
ethyl
isopropyl
pyridin
cells
Prior art date
Application number
EA201100663A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201100663A1 (ru
Inventor
Антони Боитано
Майкл Кук
Шифэн Пань
Питер Г. Шультц
Джон Телью
Юнцинь Вань
Син Ван
Original Assignee
Айрм Ллк
Дзе Скриппс Рисёч Инститьют
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=42111339&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA019872(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Айрм Ллк, Дзе Скриппс Рисёч Инститьют filed Critical Айрм Ллк
Publication of EA201100663A1 publication Critical patent/EA201100663A1/ru
Publication of EA019872B1 publication Critical patent/EA019872B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/16—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/60—Transcription factors

Abstract

В изобретении описаны соединения и композиции, предназначенные для размножения клеток CD34, предназначенных для трансплантации. Кроме того, описаны популяция клеток, содержащих увеличенное количество гематопоэтических стволовых клеток, и ее применение для аутологической или аллогенной трансплантации для лечения пациентов, страдающих наследственными иммунодефицитными и аутоиммунными заболеваниями и различными гематопоэтическими нарушениями, с целью восстановления последовательности поколений гематопоэтических клеток и защиты иммунной системы.

Description

Предпосылки создания изобретения Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к соединениям, предназначенным для увеличения количества клеток СЭ34+, предназначенных для трансплантации, их применению для приготовления фармацевтических композиций, предназначенных для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток для лечения наследственного иммунодефицитного заболевания, аутоимунного заболевания и/или гематопоэтического нарушения, а также к фармацевтическим композициям, содержащим заявленные соединения и/или популяции клеток с количеством гематопоэтических клеток, увеличенным с использованием заявленных соединений. Настоящее изобретение также относится к популяции клеток, содержащей увеличенное количество гематопоэтических стволовых клеток (ГСК), и к ее применению для лечения пациентов, страдающих наследственными иммунодефицитными и аутоиммунными заболеваниями и различными гематопоэтическими нарушениями, с целью восстановления последовательности поколений гематопоэтических клеток и защиты иммунной системы.
Уровень техники
Гематопоэтические стволовые клетки (ГСК) способны регенерировать все элементы крови в течение жизни индивидуума, сочетая их самообновление с дифференциацией потомства. Гематопоэтические стволовые клетки могут быть применимы для лечения, поскольку они могут восстанавливать клетки крови и иммунные клетки у реципиентов трансплантата. Кроме того, ГСК могут образовывать клетки других тканей, таких как головной мозг, мышцы и печень. Методики аутологической или аллогенной трансплантации костного мозга людям в настоящее время используют для лечения лейкоза, лимфомы и других опасных для жизни заболеваний. Для проведения этих процедур необходимо выделить большое количество стволовых клеток, чтобы было достаточно ГСК для приживления. Ограничивающим фактором использования для лечения является их недостаточное количество.
Настоящее изобретение относится к соединениям и композициям, предназначенным для увеличения популяций гематопоэтических стволовых клеток и к их применению.
Краткое изложение сущности изобретения
Одним объектом настоящего изобретения является соединение формулы 1а
1а 1,4 в которой Ь выбран из группы, включающей -ЛК5а(СН2)2-3-, -ΝΚ5α(ΟΗ2)2ΝΚΛ-, -ΝΚ5α(ΟΗ2)23-, -ΝΚ5αΟΗ2ΟΗ(ΟΗ)- и ^К5аСН(СН3)СН2-, где Я5а и Я5Ь независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил;
Я! выбран из группы, включающей тиофенил, фуранил, 1Н-бензимидазолил, изохинолинил, 1Н-имидазопиридинил, бензотиофенил, пиримидинил, пиридинил, 1Н-имидазолил, пиразинил, пиридазинил, 1Н-пирролил и тиазолил, где указанные тиофенил, фуранил, 1Н-бензимидазолил, изохинолинил, 1Н-имидазопиридинил, бензотиофенил, пиримидинилпиридинил, 1Н-имидазолил, пиразинил, пиридазинил, 1Н-пирролил или тиазолил, представляющие собой К1, необязательно могут быть замещены
1- 3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей цианогруппу, С1-С4-алкил, С1-С4-алкоксигруппу, галоген, галогензамещенный С1-С4-алкил, -8(О)0-2Я8а и -С(О)ОЯ8а, где Я8а выбран из группы, включающей водород и С1-С4-алкил;
Я2 выбран из группы, включающей -3(Ο)2ΝΚ6,Κ6|:ι. -ΝΚ6Χ’(Ο)ΝΚ6|:Κ6ο. фенил, 1Н-пирролопиридин-
3-ил, 1Н-пирролопиридин-5-ил, 1Н-индолил, тиофенил, пиридинил, 1Н-1,2,4-триазолил,
2- оксоимидазолидинил, 1Н-пиразолил, 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензимидазолил и 1Н-индазолил, где К/,,!· Я6Ь и К6с независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил; указанные фенил, 1Н-пирролопиридин-3-ил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил, 1Н-индолил, тиофенил, пиридинил, 1Н-1,2,4-триазолил, 2-оксоимидазолидинил, 1Н-пиразолил, 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензимидазолил или 1Н-индазолил, представляющие собой Я2, необязательно замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, метил, метоксигруппу, аминогруппу, -О(СН2)2МК7аЯ7Ь, -О8(О)2МК7аЯ7Ь и -МК7аЗ(О)2Я7Ь, где Я7а и Я7Ь независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил;
Я3 выбран из группы, включающей водород и бифенил; и
Я4 выбран из группы, включающей С1-С10-алкил, проп-1-ен-2-ил, циклогексил,
2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил, оксетан-3-ил, бензгидрил, тетрагидро-2Н-пиран-3-ил, фенил, тетрагид
- 1 019872 рофуран-3-ил или бензил, где указанные алкил, циклогексил, 2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил, оксетан-3-ил, бензгидрил, тетрагидро-2Н-пиран-3-ил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил или бензил необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, С1-С4-алкил и галогензамещенный С1-С4-алкил, или его соли (предпочтительно фармацевтически приемлемые соли).
Другим объектом настоящего изобретения является способ увеличения количества стволовых клеток и клеток предшественников, осуществляемый ίη νίΐτο или ех νίνο, включающий взаимодействие стволовых клеток с соединением по настоящему изобретению, где указанное соединение способно подавлять активность и/или экспрессию арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора.
Другим объектом настоящего изобретения является способ размножения гематопоэтических стволовых клеток, осуществляемый ех νίνο, включающий (а) получение исходной популяции клеток, содержащей гематопоэтические стволовые клетки, и (Ь) выращивание указанной исходной популяции клеток ех νίνο в присутствии соединения по настоящему изобретению в условиях, подходящих для размножения гематопоэтических стволовых клеток, причем указанное соединение способно подавлять активность и/или экспрессию арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора.
Другим объектом настоящего изобретения является набор для размножения гематопоэтических стволовых клеток, включающий соединение по настоящему изобретению и инструкции по использованию в способе размножения клеток по настоящему изобретению и необязательно одно или большее количество следующих веществ: цитокины, факторы роста и среды для выращивания клеток.
Другим объектом настоящего изобретения является популяция клеток, содержащая увеличенное количество гематопоэтических стволовых клеток, полученная способом по настоящему изобретению.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая популяцию клеток по настоящему изобретению, повторно суспендированную в фармацевтически приемлемой среде, пригодной для введения млекопитающему.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая популяцию клеток с увеличенным количеством гематопоэтических клеток и соединение по настоящему изобретению.
Другим объектом настоящего изобретения применение соединения по настоящему изобретению в приготовлении композиции, предназначенной для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток для лечения наследственного иммунодефицитного заболевания, аутоимунного заболевания и/или гематопоэтического нарушения, в котором указанное соединение является средством, способным осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 приведена ПРРГ (порошковая рентгенограмма) твердой формы модификации А
4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола.
На фиг. 2-12 приведены ПРРГ твердых форм солей 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Нпурин-6-иламино)этил)фенола, соответственно нитрата, мезилата, тозилата, гидрохлорида, сульфата, безилата, эзилата, гидробромида, оротата, фумарата и нападизилата.
На фиг. 13 приведена диаграмма ДСК для аморфной формы 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола.
Подробное описание изобретения
Определения.
Алкил в качестве группы или структурного элемента других групп, например галогензамещенного алкила и алкоксигруппы, может обладать линейной или разветвленной цепью. Например, алкил включает метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил и т.п. С1-С4-Алкоксигруппы включают метоксигруппу, этоксигруппу и т.п. Галогензамещенный алкил включает трифторметил, пентафторэтил и т.п.
Арил означает моноциклическую или конденсированную бициклическую ароматическую кольцевую систему, содержащую 6-10 кольцевых атомов углерода. Например, арил может означать фенил или нафтил, предпочтительно фенил. Арилен означает двухвалентный радикал, образованный из арильной группы.
Гетероарил является таким, как определено для арила, в котором один или большее количество элементов кольца представляют собой гетероатом или фрагмент, выбранный из группы, включающей О, Ν=, ΝΚ, С(О), 8, 8(0) или 8(О)2, где К обозначает водород, С1-С4-алкил или защитную группу атома азота. Например, гетероарил включает пиридил, индолил, индазолил, хиноксалинил, хинолинил, бензофуранил, бензопиранил, бензотиопиранил, бензо[1,3]диоксол, имидазолил, бензоимидазолил, пиримидинил, фуранил, оксазолил, изоксазолил, триазолил, тетразолил, пиразолил, тиенил и т.п.
Циклоалкил означает насыщенную или частично ненасыщенную моноциклическую, конденсированную бициклическую или мостиковую полициклическую кольцевую систему, содержащую указанное количество кольцевых атомов. Например, С3-С10-циклоалкил включает циклопропил, циклобутил, цик
- 2 019872 лопентил, циклогексил и т.п. Гетероциклоалкил означает циклоалкил, определенный в настоящем изобретении, при условии, что один или большее количество указанных кольцевых атомов углерода заменены фрагментом, выбранным из группы, включающей О, Ν=, ΝΚ, С(О), 8, 8(0) или 8(О)2, где К обозначает водород, С1-С4-алкил или защитную группу атома азота. Например, С3-С8-гетероциклоалкил при использовании в настоящем изобретении для описания соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, включает морфолиновую группу, пирролидинил, пиперазинил, пиперидинил, пиперидинилон,
2-оксопирролидин-1-ил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4,5]дец-8-ил и т.п.
Г алоген предпочтительно означает хлор или фтор, но также может означать бром или йод.
Гематопоэтические стволовые клетки (ГСК) при использовании в настоящем изобретении означают незрелые клетки крови, способные к самообновлению и дифференциации в более зрелые клетки крови, в том числе гранулоциты (например, промиелоциты, нейтрофилы, эозинофилы, базофилы), эритроциты (например, ретикулоциты, эритроциты), тромбоциты (например, мегакариобласты, продуцирующие тромбоциты мегакариоциты, тромбоциты) и моноциты (например, моноциты, макрофаги). В настоящем описании ГСК используется взаимозаменяемым образом с термином стволовые клетки. В данной области техники известно, что такие клетки могут включать или могут не включать клетки СЭ34'. Клетки СО34+ являются незрелыми клетками, которые экспрессируют маркер СО34, находящийся на поверхности клетки. Предполагают, что клетки СЭ34' включают субпопуляцию клеток, обладающую характеристиками стволовых клеток, определенными выше. В данной области техники хорошо известно, что ГСК включают плюрипотентные стволовые клетки, мультипотентные стволовые клетки (например, лимфоидные стволовые клетки) и/или стволовые клетки, преобразующиеся в последовательности поколений специфических гематопоэтических клеток. Стволовые клетки, преобразованные в последовательности поколений специфических гематопоэтических клеток, могут представлять собой последовательность поколений Т-клеток, последовательность поколений В-клеток, последовательность поколений дендритных клеток, последовательность поколений клеток Лангерганса и/или последовательность поколений лимфоидных тканеспецифичных макрофагальных клеток. Кроме того, ГСК также означает долгоживущие ГСК (ДЖ-ГСК) и короткоживущие ГСК (КЖ-ГСК). КЖ-ГСК являются более активными и более пролиферативными, чем ДЖ-ГСК. Однако ДЖ-ГСК характеризуются неограниченным самообновлением (т.е. они жизнеспособны на всем протяжении взрослого возраста), тогда как КЖ-ГСК характеризуются ограниченным самообновлением (т.е. они жизнеспособны в течение ограниченного периода времени). Любые из этих ГСК можно использовать в любом из способов, описанных в настоящем изобретении. Необязательно применимы КЖ-ГСК, поскольку они являются высокопролиферативными и поэтому приводят к быстрому увеличению количества ГСК и их потомства. Гематопоэтические стволовые клетки необязательно получают из препаратов крови. Препарат крови включает препарат, полученный из организма или из органа организма, содержащего клетки гематопоэтического происхождения. Такие источники включают нефракционированный костный мозг, пупочный канатик, периферическую кровь, печень, вилочковую железу, лимфу и селезенку. Все указанные выше неочищенные или нефракционированные препараты крови можно обогатить клетками, обладающими характеристиками гематопоэтических стволовых клеток, по методикам, известным специалистам в данной области техники.
Лечение, лечить относится к способу облегчения или смягчения заболевания и/или сопутствующих ему симптомов.
Размножение применительно к клеткам означает увеличение количества характеристического типа клеток или типов клеток исходя из начальной популяции клеток, которые могут быть или могут не быть идентичными. Начальные клетки, использованные для размножения, могут быть не такими, как клетки, образовавшиеся путем размножения.
Популяция клеток означает клетки эукариотного млекопитающего, предпочтительно человека, выделенные из биологических источников, например препаратов крови или тканей, и образованные более чем из одной клетки.
Обогащенная применительно к популяции клеток означает популяцию клеток, выбранную на основании наличия одного или большего количества маркеров, например СЭ34'.
Термин клетки СО34+ означает клетки, которые на своей поверхности экспрессируют маркер СО34. Клетки СЭ34' можно обнаружить и подсчитать, например, с помощью проточной цитометрии и содержащих флуоресцентные метки антител СО34.
Обогащенная клетками СО34+ означает, что популяция клеток отобрана на основании наличия маркера СО34. В соответствии с этим после использования методики отбора содержание клеток СЭ34' в популяции клеток больше содержания клеток СЭ34' в начальной популяции клеток до проведения стадии отбора на основании маркеров СО34. Например, в популяции клеток, обогащенной клетками СЭ34'. клетки СЭ34' могут составлять не менее 50, 60, 70, 80 или не менее 90% клеток.
Порция крови пупочного канатика означает кровь, собранную из пупочного канатика одного новорожденного.
- 3 019872
Описание предпочтительных вариантов осуществления
Настоящее изобретение относится к способам и композициям, предназначенным для увеличения популяций ГСК с использованием средства, способного осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора.
В одном варианте осуществления указанное средство, способное осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора, представляет собой соединение формулы I.
В одном варианте осуществления соединений формулы 1а
К.1 выбран из группы, включающей тиофен-2-ил, тиофен-3-ил, фуран-3-ил, 1Н-бензо[б]имидазол-1ил, изохинолин-4-ил, 1Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин-1-ил, бензо[Ь]тиофен-3-ил, пиримидин-5-ил, пиридин-2-ил, пиридин-4-ил, 1Н-имидазол-1-ил, пиразин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридазин-4-ил, 1Н-пиррол-2-ил и тиазол-5-ил, где указанные тиофен-2-ил, тиофен-3-ил, фуран-3-ил, 1Н-бензо[б]имидазол-1-ил, изохинолин-4-ил, 1Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин-1-ил, бензо[Ь]тиофен-3-ил, пиримидин-5-ил, пиридин-2-ил, пиридин-4-ил, 1Н-имидазол-1-ил, пиразин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридазин-
4- ил, 1Н-пиррол-2-ил или тиазол-5-ил, представляющие собой К1, необязательно могут быть замещены
1- 3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей цианогруппу, С1-С4-алкил,
С1-С4-алкоксигруппу, галоген, галогензамещенный С1-С4-алкил, -8(О)0-2К8а и -С(О)ОК8а, где К8а выбран из группы, включающей водород и Щ-С4-алкил; К2 выбран из группы, включающей -МК6аС(О)ЯК6ЬК6с, фенил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-3-ил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 1Н-1,2,4-триазол-3-ил,
2- оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, 1Н-пиразол-4-ил, 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[б]имидазол-
5- ил и 1Н-индазол-3-ил, где К6а, К6Ь и К6с независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил; указанные фенил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-3-ил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, 1Н-пиразол-4-ил, 2-оксо-2,3дигидро-1Н-бензо[б]имидазол-5-ил или 1Н-индазол-3-ил, представляющие собой К2, необязательно замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, метил, метоксигруппу, аминогруппу, -О8(О)2ИК7аК7Ь и -ИК7а8(О)2К7Ь, где К7а и К7Ь независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил; и
К4 выбран из группы, включающей изопропил, метил, этил, проп-1-ен-2-ил, изобутил, циклогексил, втор-бутил, (8)-втор-бутил, (К)-втор-бутил, 1-гидроксипропан-2-ил, (8)-1-гидроксипропан-2-ил, (К)-1-гидроксипропан-2-ил, нонан-2-ил, 2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил, оксетан-3-ил, бензгидрил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил и бензил, где указанные циклогексил, 2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил, оксетан-3-ил, бензгидрил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил или бензил необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей С1-С4-алкил и галогензамещенный С1-С4-алкил.
В другом варианте осуществления Ь выбран из группы, включающей -ИН(СН2)2-3, -ΝΗ^Η2)2ΝΗ-, -ИН(СН2)28-, -ΝΗ^^Η3^Η2- и -ΝΗ^^Η^Η)-.
В другом варианте осуществления Ь представляет собой -ΝΗ^Η2)2-.
В другом варианте осуществления К2 выбран из группы, включающей фенил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-3-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил,
2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, 1Н-пиразол-4-ил, 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[б]имидазол-
5-ил, где указанные фенил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-3-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, Ш-пиразол-4ил или 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[б]имидазол-5-ил, представляющие собой К2, необязательно содержат следующие заместители: гидроксигруппу, метоксигруппу, метил, галоген и аминогруппу.
В другом варианте осуществления Кд выбран из группы, включающей изопропил, метил, этил, проп-1-ен-2-ил, изобутил, циклогексил, втор-бутил, (8)-втор-бутил, (К)-втор-бутил, 1-гидроксипропан-2ил, (8)-1-гидроксипропан-2-ил, (К)-1-гидроксипропан-2-ил и нонан-2-ил.
Другим вариантом осуществления является соединение формулы 1а нг N
1а
N \
К, в которой Ь представляет собой -ΝΗ^Η2)2;
Κι выбран из группы, включающей тиофен-2-ил, тиофен-3-ил, фуран-3-ил, бензо[Ь]тиофен-3-ил, пиримидин-5-ил, пиридин-2-ил, пиридин-4-ил, Ш-имидазол-1-ил, пиразин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридазин-4-ил, 1Н-пиррол-2-ил и тиазол-5-ил, где указанные тиофен-2-ил, тиофен-3-ил, фуран-3-ил, бен
- 4 019872 зо[Ь]тиофен-3-ил, пиримидин-5-ил, пиридин-2-ил, пиридин-4-ил, 1Н-имидазол-1-ил, пиразин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридазин-4-ил, 1Н-пиррол-2-ил или тиазол-5-ил, представляющие собой К1, необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей цианогруппу, С1-С4-алкил, С1-С4-алкоксигруппу, галоген, галогензамещенный С1-С4-алкил, -8(О)0-2К8а и -С(О)ОК8а, где К8а выбран из группы, включающей водород и С1-С4-алкил;
К2 выбран из группы, включающей фенил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, 1Н-пиразол-4-ил,
2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[й]имидазол-5-ил, где указанные фенил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3ил, 1Н-пиразол-4-ил или 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[й]имидазол-5-ил, представляющие собой К2, необязательно замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, метоксигруппу, аминогруппу, -08(0)2ΝΚ7αΚ^ и -ΝΚ.-,,8(0)2Κ.-|:ι. где К7а и К7Ь независимо выбраны из группы, включающей водород и С1 -С4-алкил; и
Я3 выбран из группы, включающей водород, С1 -С4-алкил и бифенил; и
К4 выбран из группы, включающей изопропил, изобутил, втор-бутил, 1-гидроксипропан-2-ил, оксетан-3-ил, бензгидрил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил и бензил, где указанные оксетан-3-ил, бензгидрил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил и бензил необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей С1-С4-алкил и галогензамещенный С1-С4-алкил.
Другим вариантом осуществления являются соединения, выбранные из группы, включающей
4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-втор-бутил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-бензгидрил-2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(тетрагидро-2Н-пиран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(тиофен-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(4-(трифторметил)бензил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изобутил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-метил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(4-метилбензил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; №(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин; 2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-№(2-(тиофен-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин;
-(2-(2-(бензо [Ь]тиофен-3 -ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-№(4-фторфенетил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин; №(4-аминофенетил)-2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиримидин-5-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(тиофен-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(фуран-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-№(4-фторфенетил)-9-фенил-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(нонан-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; №(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-втор-бутил-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-4-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; этил-5-(6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)никотинат; 4-(2-((9-изопропил-2-(5-метоксипиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-ил)амино)этил)фенол; 4-(2-(2-(6-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4- (2-(9-изопропил-2-(4-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
5- (6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)никотинонитрил; 4-(2-(2-(1Н-имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиридазин-4-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиразин-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(5-(метилсульфонил)пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(4-хлорпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-((9-изопропил-2-(4-метилтиофен-3-ил)-9Н-пурин-6-ил)амино)этил) фенол; №[2-(6-метокси-1Н-индол-3-ил)этил]-9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; №[2-(5-метил-1Н-индол-3-ил)этил]-9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
1-(2-{ [9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3 -ил)-9Н-пурин-6-ил] амино}этил)имидазолидин-2-он; №(2-{[9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-ил]амино}этил)пиридин-2-амин;
9-(пропан-2-ил)-Н-[3-(1Н-пиразол-4-ил)пропил]-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; №{2-[(3-метил-1Н-1,2,4-триазол-5-ил)сульфанил]этил}-9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Нпурин-6-амин;
- 5 019872
1- (2-{ [2-( 1 -бензотиофен-3 -ил)-9-(пропан-2-ил)-9Н-пурин-6-ил]амино}этил)имидазолидин-2-он;
Ы-[2-(5-амино-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)этил]-2-(1-бензотиофен-3-ил)-9-(пропан-2-ил)-9Н-пурин-6амин;
2- (1 -бензотиофен-3 -ил)-9-(пропан-2-ил)-Н-[3 -(1Н-пиразол-4-ил)пропил] -9Н-пурин-6-амин;
2- (1-бензотиофен-3-ил)-Ы-[3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-4-ил)пропил]-9-(пропан-2-ил)-9Н-пурин-6амин;
(2-{[2-(1-бензотиофен-3-ил)-9-(пропан-2-ил)-9Н-пурин-6-ил]амино}этил)мочевину; Ы-[2-(1Н-индол-3-ил)этил]-9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенил)метансульфонамид; 4-(2-(2-(пиридин-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)пропил)фенол;
4-(2-(9-(оксетан-3-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
Ы-(2-(1Н-индазол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-((9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-ил)(метил)амино)этил)фенол; 4-(2-(9-(1-гидроксипропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенилсульфамат; 4-(2-(2-(2-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(1-метил-1Н-пиррол-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(тиазол-5-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(1Н-бензо[б]имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(2,4-диметил-1Н-имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4- (2-(9-изопропил-2-(2-метил-1Н-имидазол-1-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
5- (9-втор-бутил-6-(4-гидрокси-3-метилфенетиламино)-9Н-пурин-2-ил)никотинонитрил; Ы-(2-(1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; 9-изопропил-Ы-(2-(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)этил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(5-хлорпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4- (2-(9-изопропил-2-(5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
5- (6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-9-втор-бутил-9Н-пурин-2-ил)никотинонитрил; Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; (К)-Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; (8)-Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; (К)-Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; (8)-Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; 5-(6-(4-гидроксифенетиламино)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-2-ил)никотинонитрил;
(К)-4-(2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4- (2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)-3-метилфенол;
5- (6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)пиколинонитрил;
3- (6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)изоникотинонитрил;
3- (6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)пиколинонитрил;
4- (2-(9-изопропил-2-(6-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(изохинолин-4-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
2- хлор-4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
3- фтор-4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; Ы-(2-(5-хлор-1Н-индол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(5-фтор-1Н-индол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
4- (2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)-2-метилфенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; (8)-4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; (К)-4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3 -ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол; (К)-2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол; (8)-2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол; (К)-Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6- амин;
4-(2-(2-(1Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(4,5-диметил-1Н-имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(пиридин-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)-1-гидроксиэтил)фенол; 2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(6-метокси-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин;
- 6 019872
2- (5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(5-метокси-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин;
Ы-(2-(1Н-индол-3 -ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3 -ил)-9-(проп-1 -ен-2-ил)-9Н-пурин-6-амин;
5-(2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)пиридин-2-ол;
Ы-(2-(1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6амин;
Ы-(2-(6-(2-(диэтиламино)этокси)-1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Нпурин-6-амин;
Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(2-метил-1Н-имидазол-1-ил)-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(2-(2-этил-1 Н-имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(2-пропил-1Н-имидазол-1-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
3- (2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-6-ол;
Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(2-метил-1Н-имидазол-1-ил)-9Н-пурин-6-амин;
2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(7-метил-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин;
Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
Ы-(2-(6-фтор-1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин;
2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(6-метил-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин;
2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин;
Ы-(2-(4-фтор-1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин;
Ы-(2-(7-фтор-1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин;
2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(4-метил-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин;
Ы-(2-(1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
4- (2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(1-гидроксипропан-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)-2-метилфенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-циклогексил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(тиофен-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
1-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-6-(4-гидроксифенетиламино)-9Н-пурин-9-ил)этил)пирролидин-2-он, или его соли.
Соединения формулы 1а подробно описаны в приведенных ниже примерах и табл. I.
Другим вариантом осуществления является соединение формулы но.
или его соль.
Другим вариантом осуществления является соединение формулы или его соль.
Другим вариантом осуществления является соединение формулы ΗΝ-,
ΝΗ или его соль.
- 7 019872
Другим вариантом осуществления является соединение формулы
или его соль.
Другим вариантом осуществления является соединение формулы
или его соль.
Другим вариантом осуществления является соединение формулы
ΗΝ
или его соль.
Другим вариантом осуществления является соединение формулы
или его соль.
Другим вариантом осуществления является способ увеличения количества клеток и клеток предшественников, осуществляемый ίη νίίτο или ех νίνο; указанный способ включает взаимодействие стволовых клеток с соединением формулы 1а. При этом указанное соединение способно подавлять активность или экспрессию арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора.
Другим вариантом осуществления является способ увеличения количества клеток по настоящему изобретению, в котором стволовыми клетками являются гематопоэтические стволовые клетки человека.
Другим вариантом осуществления является способ увеличения количества клеток по настоящему изобретению, в котором стволовые клетки являются клетками, полученными из костного мозга.
Другим вариантом осуществления является способ увеличения количества клеток по настоящему изобретению, в котором стволовые клетки являются клетками, полученными из крови пупочного канатика.
Другим вариантом осуществления является способ размножения гематопоэтических стволовых клеток, осуществляемый ех νίνο, включающий (а) получение исходной популяции клеток, содержащей гематопоэтические стволовые клетки, и (Ь) выращивание указанной исходной популяции клеток ех νίνο в присутствии соединения по настоящему изобретению в условиях, подходящих для размножения гематопоэтических стволовых клеток, причем указанное соединение способно подавлять активность и/или экспрессию арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором эффектор, действующий по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора, выбран из группы, включающей Сур1В1, Сур1А1, бета-катенин, АНЕК, 8ТАТ5 и 8ТАТ1.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором исходная популяция клеток обогащена клетками С.П34'.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором исходная популяция клеток получена из клеток крови пупочного канатика.
- 8 019872
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором исходная популяция клеток получена из одной или двух порций крови пупочного канатика.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором исходная популяция клеток получена из мобилизованных клеток периферической крови.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором исходная популяция клеток в основном состоит из клеток ί.Ό34'. выделенных очисткой из одной или двух порций крови пупочного канатика.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором исходная популяция клеток в основном состоит из клеток ί.Ό34'. выделенных очисткой из одной или двух порций крови пупочного канатика с использованием колонок для аффинной хроматографии или магнитных гранул, содержащих антигенсвязывающие фрагменты антител к СЭ34.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором мобилизованные клетки периферической крови взяты у одного млекопитающего.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором условия, подходящие для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток, включают выращивание указанной исходной популяции клеток в присутствии достаточного количества 1Ь-6, Ηί-3-Ь, ТПО и БСЕ.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором соединение согласно изобретению вводят в клеточную культуральную среду в концентрации, равной от 1 пМ до 10 мкМ.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором указанное соединение вводят в клеточную культуральную среду в концентрации от 10 пМ до 100 мкМ.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором исходная популяция клеток в основном состоит из клеток ί.Ό34\ выделенных очисткой из одной или двух порций крови пупочного канатика, и указанную исходную популяцию клеток выращивают в присутствии указанного соединения в течение от 3 до 90 дней.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором исходная популяция клеток в основном состоит из клеток ί.Ό34\ выделенных очисткой из одной или двух порций крови пупочного канатика, и указанную исходную популяцию клеток выращивают в присутствии указанного соединения в течение от 7 до 35 дней.
Другим вариантом осуществления является способ размножения по настоящему изобретению, в котором исходную популяцию клеток выращивают в присутствии указанного соединения в течение времени, достаточного для увеличения количества клеток ί.Ό34' в 10-50000 раз.
Другим вариантом осуществления является набор для размножения гематопоэтических стволовых клеток, включающий соединение по настоящему изобретению и инструкции по использованию в способе по настоящему изобретению и необязательно одно или большее количество следующих веществ: цитокины, факторы роста и среды для выращивания клеток.
Другим вариантом осуществления является набор по настоящему изобретению, в котором указанные один или большее количество цитокинов или факторов роста выбраны из группы, включающей 1Ь-6, Ηί-3-Ь, БСЕ и ТПО.
Другим вариантом осуществления является популяция клеток, содержащая увеличенное количество гематопоэтических стволовых клеток, полученная способом по настоящему изобретению.
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция, содержащая популяцию клеток по настоящему изобретению, повторно суспендированную в фармацевтически приемлемой среде, пригодной для введения млекопитающему.
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция, содержащая популяцию клеток с увеличенным количеством гематопоэтических клеток и соединение по настоящему изобретению.
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, в которой популяция клеток с увеличенным количеством гематопоэтических стволовых клеток получена из одной или двух порций крови пупочного канатика, причем указанная композиция содержит полное количество клеток, составляющее не менее 105, 107, 108 или 109 клеток, и в которой 20-100% полного количества клеток составляют клетки ί.Ό34'.
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, в которой 0,1-40% полного количества клеток составляют клетки, экспрессирующие маркеры ί.Ό34 и Тйу1; 20-80% полного количества клеток составляют клетки, экспрессирующие маркеры СЭ34 и ί.Ό45ΡΛ; 10-95% клеток представляют собой СО38+ и 5-70% клеток представляют собой СО133+.
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, предназначенная для использования в аллогенной трансплантации гематопоэтических стволовых клеток млекопитающему.
- 9 019872
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, предназначенная для лечения нарушения гематопоэза.
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, которую используют, когда нарушение гематопоэза является наследственным иммунодефицитным заболеванием, аутоиммунным нарушением или гематопоэтическим нарушением.
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, при использовании которой гематопоэтическое нарушение выбрано из группы, включающей острый миелолейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический миелолейкоз, хронический лимфолейкоз, миелопролиферативные нарушения, миелодиспластические синдромы, множественную миелому, неходжкинскую лимфому, болезнь Ходжкина, апластическую анемию, истинную эритроцитарную аплазию, пароксизмальную ночную гемоглобинурию, анемию Фанкони, большую талассемию, серповидноклеточную анемию, тяжелый комбинированный иммунодефицит, синдром Вискотта-Олдрича, гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз и врожденные нарушения метаболизма.
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, причем указанная композиция применима для внутривенного вливания и указанная композиция содержит по меньшей мере 104 клеток/кг, вливаемых пациенту.
Другим вариантом осуществления является фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, причем указанная композиция применима для внутривенного вливания и указанная композиция содержит от 105 до 109 клеток/кг, вливаемых пациенту.
Другим вариантом осуществления является применение соединения по настоящему изобретению в приготовлении композиции, предназначенной для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток для лечения наследственного иммунодефицитного заболевания, аутоимунного заболевания и/или гематопоэтического нарушения, в котором указанное соединение является средством, способным осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора.
Другим вариантом осуществления является применение по настоящему изобретению, в котором гематопоэтическое нарушение выбрано из группы, включающей множественную миелому, неходжкинскую лимфому, болезнь Ходжкина, острый миелолейкоз, нейробластому, герминомы, аутоиммунные нарушения и амилоидоз.
Другим вариантом осуществления является применение по настоящему изобретению, в котором аутоиммунные нарушения выбраны из группы, включающей системную красную волчанку и системный склероз.
Другим вариантом осуществления является применение по настоящему изобретению, в котором гематопоэтическое нарушение выбрано из группы, включающей острый миелолейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический миелолейкоз, хронический лимфолейкоз, миелопролиферативные нарушения, миелодиспластические синдромы, множественную миелому, неходжкинскую лимфому, болезнь Ходжкина, апластическую анемию, истинную эритроцитарную аплазию, пароксизмальную ночную гемоглобинурию, анемию Фанкони, большую талассемию, серповидно-клеточную анемию, тяжелый комбинированный иммунодефицит, синдром Вискотта-Олдрича, гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз и врожденные нарушения метаболизма.
Другим вариантом осуществления является применение по настоящему изобретению, в котором врожденные нарушения метаболизма выбраны из группы, включающей мукополисахаридоз, болезнь Гоше, метахроматические лейкодистрофии и адренолейкодистрофии.
Применение.
ГСК представляют собой примитивные клетки, способные регенерировать все клетки крови. Во время развития месторасположение гематопоэза перемещается из печени эмбриона в костный мозг, который становится центром гематопоэза в течение всего взрослого состояния. После того как гематопоэз локализовался в костном мозге, ГСК не распределяются в полости кости случайным образом. Напротив, они располагаются вблизи от эндостеальных поверхностей. Чем больше расстояние от поверхности кости, тем больше количество зрелых стволовых клеток. Кроме того, чем ближе к центральной продольной оси кости, тем в большей степени проявляется конечная дифференцировка зрелых клеток.
Возможность получения увеличенного количества взрослых стволовых клеток, взятых из крови пупочного канатика плода или эмбриона, сильно повлияет на трансплантацию и другие средства лечения заболеваний и нарушений крови и онкологических заболеваний и нарушений и при этом лечение станет безопаснее и дешевле. Как это описано в способах, предлагаемых в настоящем изобретении, количество ГСК увеличивают ех νίνο. Способ увеличения количества стволовых клеток важен, поскольку в настоящее время вследствие недостаточного количества стволовых клеток запрещено использовать примерно 25% доноров аутологических трансплантатов. Кроме того, только примерно 25% пациентов, которым необходим аллогенный трансплантат, могут найти гистологически совместимого донора. В настоящее время существуют банки крови пупочного канатика, и они включают широкий расовый спектр общей популяции, однако использование этих банков для детей ограничено вследствие недостаточного количества стволовых клеток в образцах для взрослых реципиентов. Способ увеличения количества стволовых клеток позволяет использовать кровь пупочного канатика для взрослых пациентов и тем самым расши
- 10 019872 рить применение аллогенной трансплантации. Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, также можно использовать для увеличения количества клеток-предшественников, использующихся в клинических условиях, например, для ускорения приживления трансплантата и уменьшения длительности нейтропении.
Поэтому настоящее изобретение относится к способу увеличения количества ГСК. При использовании в настоящем изобретении увеличение количества ГСК означает, что у субъекта имеется больше ГСК, на 10% больше, на 20% больше, на 30% больше или еще больше. ГСК могут состоять из подгруппы клеток СЭ34'. увеличение количества ГСК можно измерить косвенно путем подсчета количества клеток СБ34+ в популяции клеток и, необязательно, путем оценки характеристик дифференциации клеток СБ34+ с помощью определения количества колониеобразующих единиц (КОЕ), как это описано ниже в экспериментальном разделе: увеличение количества клеток СБ34+ в культуре по меньшей мере на 10%, предпочтительно увеличение на 20% или увеличение на 30% или более по сравнению с контрольным образцом, в котором не происходило размножение, указывает на размножение ГСК. Увеличенную популяцию ГСК собирают, например, из образца костного мозга субъекта или из культуры. Сбор ГСК определяют, как извлечение или отделение клеток. Его проводят с помощью целого ряда методик, таких как ферментативные, неферментативные, с использованием центрифугирования, электротехнические или основанные на размерах, или предпочтительно путем вымывания клеток культуральными средами (например, средами, в которых инкубируют клетки) или буферным раствором. Клетки необязательно собирают, разделяют и дополнительно размножают с получением еще большей популяций ГСК и потомства дифференцированных клеток.
Способ получения увеличенной популяции ГСК включает взаимодействие средства, способного осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии АУР и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути АУР, например соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, с исходной популяцией клеток (т.е. неувеличенной популяцией клеток), содержащей смесь ГСК и необязательно клеток, поддерживающих ГСК. Стадию введения проводят ех νίνο, ίη νίνο и/или ίη νίΐτο. Как это описано в настоящем изобретении, субъекту необязательно вводят увеличенную популяцию ГСК. Для размножения ех νίνο такое средство для размножения ГСК, например соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, можно приготовить в ДМСО (диметилсульфоксид) или каком-то другом подходящем носителе, отмытом от клеток и клетки можно перенести, например, в буфер для вливания. Композиция в ДМСО, например, может содержать 0,3 мг/мл соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в растворе, содержащем 60% ДМСО/40% воды. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам доставки увеличенной популяции ГСК субъекту, включающим введение субъекту увеличенной популяции ГСК, описанной в настоящем изобретении или полученной способами, описанными в настоящем изобретении. Увеличенную популяцию ГСК необязательно используют для получения клеток крови. Клетки крови необязательно вводят нуждающемуся в них субъекту. Субъектом необязательно является тот же субъект, с использованием которого получили неувеличенную популяцию ГСК или смеси ГСК и клеток, поддерживающих ГСК.
При использовании в настоящем изобретении термин клетки, поддерживающие ГСК означает клетки, в природе находящиеся вблизи от одной или большего количества ГСК, такие как факторы, выделяющиеся клетками, поддерживающими ГСК, попадающие в ГСК, например, путем диффузии. Клетки, поддерживающие ГСК, включают, но не ограничиваются только ими, лимфоретикулярные стромальные клетки. Лимфоретикулярные стромальные клетки при использовании в настоящем изобретении включают, но не ограничиваются только ими, все типы клеток, содержащиеся в лимфоидной ткани, которые не являются лимфоцитами или предшественниками или прародителями лимфоцитов. Таким образом, лимфоретикулярные стромальные клетки включают остеобласты, эпителиальные клетки, эндотелиальные клетки, мезотелиальные клетки, дендритные клетки, спленоциты и макрофаги. Лимфоретикулярные стромальные клетки также включают клетки, которые обычно не функционируют, как лимфоретикулярные стромальные клетки, такие как фибробласты, которые были генетически изменены для экспрессирования на своей поверхности факторов, необходимых для поддержания, роста или дифференциации ГСК, включая их потомство. Лимфоретикулярные стромальные клетки необязательно получены с помощью дезагрегации кусочка лимфоидной ткани. Такие клетки способны ίη νίΐτο или ίη νίνο обеспечивать поддержание, рост или дифференциацию ГСК, включая их потомство. Лимфоидная ткань означает костный мозг, периферическую кровь (включая мобилизованную периферическую кровь), кровь пупочного канатика, плацентарную кровь, печень эмбриона, эмбриональные клетки (включая эмбриональные стволовые клетки), клетки, образованные из аорты, гонад, мезонефроса, и лимфоидную мягкую ткань. Лимфоидная мягкая ткань при использовании в настоящем изобретении включает, но не ограничивается только ими, такие ткани, как вилочковая железа, селезенка, печень, лимфатические узлы, кожа, миндалины, аденоиды и пейеровы бляшки и их комбинации.
Лимфоретикулярные стромальные клетки создают в интактной лимфоидной ткани поддерживающую микросреду для поддержания, роста или дифференциации ГСК, включая их потомство. Микросреда включает растворимые и находящиеся на поверхности клеток факторы, экспрессирующиеся клетками разных типов, которые включают лимфоретикулярную строму. Обычно поддержка, которую обеспечи
- 11 019872 вают лимфоретикулярные стромальные клетки, является и контактной, и неконтактной.
По отношению к ГСК лимфоретикулярные стромальные клетки, например, являются аутологическими (своими) или неаутологическими (не своими, например, гетерологическими, аллогенными, сингенными или ксеногенными). Аутологические при использовании в настоящем изобретении означает клетки того же субъекта. Аллогенные при использовании в настоящем изобретении означает клетки того же вида, которые генетически различны. Сингенные при использовании в настоящем изобретении означает клетки другого субъекта, которые генетически идентичны с сопоставляемыми клетками. Ксеногенные при использовании в настоящем изобретении означает клетки другого вида. Лимфоретикулярные стромальные клетки получают, например, из лимфоидной ткани человека или субъекта, не являющегося человеком, в любой момент времени после того, как орган/ткань, развилась до стадии (т.е. стадии зрелости), на которой она может обеспечивать поддержание, рост или дифференциацию ГСК. Лимфоидная ткань, из которой образованы лимфоретикулярные стромальные клетки, обычно определяют гарантии коммитирования линии дифференцировки ГСК, что приводит к специфичности линии потомства дифференцированных клеток.
Совместное выращивание ГСК (и их потомства) с лимфоретикулярными стромальными клетками обычно проводят при условиях, известных в данной области техники (например, температура, содержание СО2 и О2, питательные среды, длительность и т.п.). Время, достаточное для увеличения количества клеток, может без труда определить специалист в данной области техники и оно меняется в зависимости от количества высеянных исходных клеток. Количество введенных в начале (и затем высеянных) ГСК и лимфоретикулярных стромальных клеток меняется в зависимости потребности эксперимента. Специалист в данной области техники может легко определить идеальное количество, соответствующее потребности.
При использовании в настоящем изобретении субъект означает индивидуума. Таким образом, субъекты включают, например, одомашненных животных, таких как кошки и собаки, домашний скот (например, крупный рогатый скот, лошади, свиньи, овцы и козы), лабораторных животных (например, мыши, кролики, крысы и морские свинки), млекопитающих, млекопитающих, не являющихся людьми, приматов, приматов, не являющихся людьми, грызунов, птиц, пресмыкающихся, амфибий, рыб и любых других животных. Субъектом необязательно является млекопитающее, такое как примат или человек.
Способы увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток.
Поэтому настоящее изобретение относится к способу увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток, включающему (а) получение исходной популяции клеток, содержащей гематопоэтические стволовые клетки, и (Ь) выращивание указанной исходной популяции клеток ех νίνο в присутствии средства, способного осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арилуглеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора, при условиях, подходящих для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток.
Арил-углеводородный (диоксиновый) рецептор (АУР) представляет собой активированный цитозольным лигандом фактор транскрипции, для которого известно, что он опосредует большое количество токсических и канцерогенных проявлений у животных и, возможно, у людей (8аГе 8. 2001, Τοχίοοί. Ьей. 120:1-7). Следствием активации АУР его лигандами является транскрипционная индукция многих генов детоксификации, включая гены, кодирующие ферменты, метаболизирующие ксенобиотики в фазе I, такие как цитохромы Р450 СУР1А1, СУР1А2, СУР1В1 и СУР281, и ферменты фазы II υΌΡ-глюкуронозилтрансфераза иСТ1А6, ЫАП(Р)Н-зависимая хиноноксидоредуктаза-1 (N001). альдегиддегидрогеназа АБ0Н3А1 и различные глутатион-8-трансферазы.
В одном варианте осуществления средство, способное осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора, выбрано из группы, включающей: (ί) органическое соединение; (ίί) малую интерферирующую молекулу РНК (сиРНК), способную осуществлять понижающую регуляцию экспрессии АУР; и (ίίί) антисмысловой олигонуклеотид, способный осуществлять понижающую регуляцию экспрессии АУР.
В одном предпочтительном варианте осуществления указанный способ увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток включает (а) получение исходной популяции клеток, содержащей гематопоэтические стволовые клетки, и (Ь) выращивание указанной исходной популяции клеток ех νίνο в присутствии средства, способного осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора, при условиях, подходящих для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток, где указанное средство, способное осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора, не представляет собой альфа-нафтофлавон или 3'-метокси-4'-нитрофлавон.
Органические соединения, которые ингибируют активность АУР (в настоящем изобретении также называющиеся антагонистами АУР), описаны в данной области техники, например, 2-метил-2Н-пиразол
- 12 019872
3-карбоновая кислота (2-метил-4-о-толилазофенил)амид (СН223191), альфа-нафтофлавон, ресвератрол (ΝυΐΓ. Ме!аЬ. Сагйюуакс. Όίκ., 2003 Арг; 13(2):104-13), 3'-метокси-4'-нитрофлавон (Вюсйет. Рйагтасо1., 2007 Мау 15; 73(10):1622-34, ЕриЬ 2007 1аи 30) и 6-метил-1,3,8-трихлордибензофуран (Сапсег Век., 2004 Арг 15; 64(8):2889-97). Ингибитор активности АУР означает соединение, которое снижает АУР активность на величину, составляющую не менее 10, 20, 30, 50, 60, 70, 80 или не менее 90% от транскрипционной активности АУР, наблюдающейся при условиях активации. Исследованием для определения активности ингибирования АУР является, например, исследование с использованием индуцированного диоксином зависимого от АУР репортерного гена люциферазы, описанное в примерах. В одном варианте осуществления ингибитор активности АУР представляет собой соединение, которое по данным исследования с использованием индуцированного диоксином зависимого от АУР репортерного гена люциферазы характеризуется значением ЕС50, равным менее 10 мкМ, предпочтительно менее 5 мкМ.
АУР представляет собой фактор транскрипции, регулирующий транскрипцию различных генов человека. В одном варианте осуществления эффектор, расположенный по ходу транскрипции биосинтетического пути АУР, представляет собой ген, который непосредственно регулируется с помощью АУР на уровне транскрипции. Примеры таких генов выбраны из группы, включающей Сур1В1, Сур1А1 и АНРК В биосинтетическом пути АУР также действует вне его хорошо изученной роли в индукции ксенобиотического фермента. Показано, что ксенобиотические лиганды АУР регулируют бета-катенин, ЗТАТ5, ЗТАТ1, НЕ8-1, с-Мус, С/ЕВР, РИ.1, β-катенин, р21, Р27, рВЬ, дезоксинуклеотидилтрансферазу, СХСВ4 и его хемокиновый лиганд СХСЬ12 (8ИЕ-1).
В одном предпочтительном варианте осуществления средство, способное осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора, представляет собой соединение, определенное в разделе Краткое изложение сущности изобретения.
В другом варианте осуществления средство, способное осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора, представляет собой антисмысловой олигонуклеотид или малую интерферирующую молекулу РНК (сиРНК), способную осуществлять понижающую регуляцию экспрессии белка АУР или экспрессии белка одного или большего количества эффекторов, действующих по ходу транскрипции биосинтетического пути АУР.
Антисмысловые олигонуклеотиды, которые можно использовать для эффективного ингибирования экспрессии белка АУР, необходимо конструировать так, чтобы такие олигонуклеотиды специфически связывали указанную мРНК в клетках таким образом, чтобы ингибировать ее трансляцию. Последовательности, подходящие для использования в конструировании и синтезе антисмысловых олигонуклеотидов, которые специфически связывают мРНК АУР, геномную ДНК и/или его промотор, или другие контрольные последовательности приведены в опубликованной последовательности АУР, в частности АУР человека. Кроме того, также известны алгоритмы для идентификации последовательностей с наибольшим предсказываемым сродством связывания с их целевой мРНК, основанные на термодинамическом цикле, в котором учитывается энергия изменений структуры и целевой мРНК, и олигонуклеотидов.
Синтез молекул сиРНК, подходящих для использования в настоящем изобретении, можно провести следующим образом. Сначала последовательность АУР мРНК (или один или большее количество ее эффектов, действующих по ходу транскрипции биосинтетического пути) сканируют по ходу транскрипции от инициирующего кодона АИС на наличие АА-динуклеотидной последовательности. Наличие каждой АА и 19 3'-соседней регистрируют в качестве возможного целевого сайта сиРНК. Затем возможные целевые сайты сопоставляют с соответствующей базой данных геномов (например, человека, мыши, крысы и т.п.) с использованием любого программного обеспечения, предназначенного для сопоставления последовательностей. Выделяют предполагаемый целевой сайт, обладающий статистически значимой гомологией с другими кодирующими последовательностями. Предпочтительными являются последовательности, обладающие низким содержанием С/С, в особенности последовательности, обладающие содержанием С/С, равным менее 55%. Затем по длине целевого гена отбирают несколько целевых сайтов. Методики или алгоритмы выявления предполагаемого целевого сайта сиРНК описаны например, в публикации (Т11ек1, е1 а1., Сигг. Орш. Мо1. Тйег. 11:156, 2009). Примерами молекул сиРНК, которые способны осуществлять понижающую регуляцию экспрессии АУР, являются:
АУР 1118, 5’ ОСО ОСА ТАО АОА ССО
АСТ ТАА ΤΤΤ САА ОАО ΑΑΤ ТАА ОТС ООТ СТС ТАТ ОСС ОСТ ΤΤΤ ТТО О
3’; АУР 111А8, 5’ СОС ОСС ААА ААА ОСО ОСА ТАО АОА ССО АСТ ТАА
ТТС ТСТ ТОА ААТ ТАА ОТС ООТ СТС ТАТ ОСС ОС 3’; АУР 2428, 5’ ООС
ТТС ΤΤΤ ОАТ ОТТ ОСА ТТА АТТ САА ОАО АТТ ААТ ОСА АСА ТСА ААО ААО ССТ ТТТ ТТО О 3’; АУР 242А8, 5’ СОС ОСС ААА ААА ООС ТТС ТТТ ОАТ ОТТ ОСА ТТА АТС ТСТ ТСА АТТ ААТ ОСА АСА ТСА ААО ААО СС 3’.
Исходную популяцию клеток, содержащую гематопоэтические стволовые клетки, специалист в данной области техники выбирает в соответствии с предполагаемым применением. В данной области техники описаны различные источники клеток, содержащие гематопоэтические стволовые клетки, включая костный мозг, периферическую кровь, кровь пупочного канатика новорожденных, плаценту или дру
- 13 019872 гие источники, такие как печень, в особенности печень эмбриона.
Популяцию клеток сначала можно направить на стадии обогащения или очистки, включая негативный и/или позитивный отбор клеток на основе специфических клеточных маркеров и получить исходную популяцию клеток. Методиками отбора указанной исходной популяции клеток на основе специфических клеточных маркеров могут быть клеточная сортировка с возбуждением флуоресценции (ЕЛС8), также называющаяся проточной цитометрией, или методика с использованием твердого или нерастворимого субстрата, с которым связаны антитела или лиганды, которые взаимодействуют со специфическими маркерами, находящимися на поверхности клетки. Например, клетку можно ввести во взаимодействие с твердым субстратом (например, колонкой с гранулами, пластинками, магнитными частицами), содержащим антитела, с удалением всех несвязанных клеток. При использовании твердого субстрата, содержащего магнитные или парамагнитные гранулы, клетки, связанные с гранулами, можно легко отделить с помощью магнитного сепаратора.
В одном варианте осуществления указанная исходная популяция клеток обогащена клетками с необходимым маркером фенотипа клетки (например, ί.Ό34'. СЭ133'. СЭ90'), что устанавливают путем окрашивания красителями, таких как родамин НосеНьк или по активности альдегиддегидрогеназы. В одном предпочтительном варианте осуществления указанная исходная популяция клеток обогащена клетками ί.Ό34'. Методики обогащения популяции клеток крови клетками СЭ34' включают использование наборов, продающихся фирмой М111еиу1 Вю1ес (СЭ34' бйсе1 що1а1юи кН, М111еиу1 Вю1ес, ВегдНсН 01аНЬасй, Оеттаиу) или фирмой Вах1ет (1§о1ех 3000).
Количество крови пупочного канатика, собранной у одного новорожденного, часто недостаточно для лечения взрослого или ребенка старшего возраста. Одним преимуществом способов увеличения количества с использованием соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, или средства, способного осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора, является то, что они позволяют получить достаточное количество гематопоэтических стволовых клеток только из одной порции крови пупочного канатика.
Поэтому в одном варианте осуществления исходная популяция клеток получена из клеток крови пупочного канатика новорожденного, которые были обогащены клетками СЭ34'. В одном родственном варианте осуществления указанная исходная популяция клеток получена из одной или двух порций крови пупочного канатика.
В другом варианте осуществления исходная популяция клеток получена из клеток мобилизованной периферической крови человека, которые были обогащены клетками СЭ34'. В одном родственном варианте осуществления указанная исходная популяция клеток получена из клеток мобилизованной периферической крови человека, взятой у одного пациента.
Указанная исходная популяция клеток предпочтительно может содержать не менее 50% клеток СЭ34', в некоторых вариантах осуществления более 90% клеток СЭ34' и может содержать от 105 до 109 клеток с ядром.
Исходную популяцию клеток можно сразу использовать для размножения или заморозить и сохранить для последующего использования.
Условия выращивания исходной популяции клеток для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток будут меняться в зависимости, в частности, от исходной популяции клеток, необходимого конечного количества клеток и необходимого конечного содержания ГСК.
В одном предпочтительном варианте осуществления, в частности, с использованием исходной популяции клеток из клеток крови пупочного канатика, обогащенной клетками СЭ34', условия выращивания включают использование других цитокинов и факторов роста, обычно использующихся в данной области техники для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток. Такие цитокины и факторы роста без наложения ограничений включают 1Ь-1, 1Ь-3, 1Ь-6, 1Ь-11, О-С8Е, ОМ-С8Е, 8СЕ, Е11-3-Ь, тромбопоэтин (ТПО), эритропоэтин и их аналоги. При использовании в настоящем изобретении аналоги включают все структурные варианты цитокинов и факторов роста, обладающие такой же биологической активностью, как и природные формы, включая без наложения ограничений, варианты со сниженной или повышенной биологической активностью по сравнению с природными формами или агонисты цитокинового рецептора, такие как агонистические антитела к рецептору ТПО (например, УВ22В 8с(Еу)2, подробно описанные в публикации патента ШО 2007/145227 и т.п.). Комбинации цитокина и фактора роста выбраны для увеличения количества ГСК и клеток-предшественников при одновременном ограничении образования терминально дифференцированных клеток. В одном предпочтительном варианте осуществления один или большее количество цитокинов и факторов роста выбраны из группы, включающей 8СЕ, ЕИ-3-Ь и ТПО. В одном предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере, ТПО используют в бессывороточной среде при условиях, подходящих для размножения ГСК. В одном родственном варианте осуществления смесь 1Ь-6, 8СЕ, ΕΗ-3-Ь и ТПО используют в способе увеличения количества ГСК в комбинации с соединением, предлагаемым в настоящем изобретении, или средством, способным осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арилуглеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического
- 14 019872 пути арил-углеводородного рецептора.
1Ь-б человека, или интерлейкин-6, также известный под названием В-клеточный стимулирующий фактор 2, описан в публикации (Κίδΐιίιηοίο, Αηη. ге\зе\\· ο£ 1тт. 23:1, 2005) и имеется в продаже. 8СЕ человека, или фактор стволовых клеток, также известный под названиями лиганд е-кП. фактор роста мастоцитов или фактор 81ее1, описан в публикации (8ιηί11ι, М.А. е1 а1., АСТА НаешаЮ^щса, 105, 3:143, 2001) и имеется в продаже. Ηΐ-3-Ь, или лиганд ЕЬТ-3, также известный под названием ЕЬ, представляет собой фактор, который связывается с рецептором ЕЙ-3. Он описан (Наппит С., №11иге 368 (6472):643-8) и имеется в продаже. ТПО, или тромбопоэтин, также известный под названиями фактор роста мегакариоцитов (ΜΟΌΕ) или лиганд с-Мр1, описан (Каикйапзку Κ. (2006). N. Епд1. 1. Меб. 354 (19):2034-45) и имеется в продаже.
Размножение ГСК можно провести в базальной среде, к которой добавлены смеси цитокинов и факторов роста, описанных выше. Базальная среда обычно содержит аминокислоты, источники углерода, витамины, сывороточные белки (например, альбумин), неорганические соли, двухвалентные катионы, буферы и любые другие элементы, подходящие для использования при размножении ГСК. Примеры такой базальной среды, подходящей для способа размножения ГСК, включают без наложения ограничений 81ет8рап® 8ЕЕМ - 8егит-Егее Εχρηηδίοη Мебшт (81етСе11 ТесЬмЫ^е^, Vаηсοиνе^, Сапаба), 81ет8рап® Н3000 - ЭеПпеб Мебшт (81етСе11 ТеОп-ю^ще^ Vаηсοиνе^, Сапаба), Се110го® 8СОМ (Се11Оешх, Еге1Ьигд Сегтапу), 81етРго®®-34' 8ЕМ ([пубгсщеп).
В одном варианте осуществления соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, или средство, способное осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арилуглеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора, вводят во время осуществления способа размножения указанной исходной популяции клеток в концентрации, подходящей для размножения ГСК. В одном предпочтительном варианте осуществления указанное соединение или средство, модулирующее АНЕ, вводят в концентрации, равной от 1 пМ до 100 мкМ, например от 10 пМ до 10 мкМ или от 100 пМ до 1 мкМ.
В одном предпочтительном варианте осуществления, в котором исходная популяция клеток значительно обогащена клетками СО34+, полученными из одной или двух порций крови пупочного канатика, клетки выращивают при условиях, подходящих для размножения ГСК, в течение от примерно 3 до примерно 90 дней, например от 7 до 2 дней и/или до обеспечения указанной кратности размножения и характеристической популяции клеток. В одном предпочтительном варианте осуществления клетки выращивают при условиях, подходящих для размножения ГСК, в течение не более 21, 14 или 7 дней.
В одном варианте осуществления исходную популяцию клеток выращивают в течение времени, достаточного для образования абсолютного количества клеток СЭ34', равного не менее 105, 106, 107, 108 или 109 клеток. В другом варианте осуществления указанную исходную популяцию клеток выращивают в течение времени, достаточного для увеличения количества клеток СЭ34' в 10-50000 раз, например увеличения в 100-10000 раз.
Популяцию клеток, полученную после осуществления способа размножения, можно использовать без дополнительной очистки или можно направить на дополнительные стадии очистки или отбора.
Популяцию клеток затем можно промыть для удаления соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, или любого другого средства, способного осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора и/или любого другого компонента клеточной культуры и повторно суспендировать в суспендирующей среде, подходящей для использования клеток через непродолжительное время, или в среде для длительного хранения, например в среде, подходящей для криоконсервации.
Популяция клеток с увеличенным количеством ГСК, полученные способом размножения, и терапевтические композиции.
Настоящее изобретение также относится к популяции клеток с увеличенным количеством ГСК, получаемым или полученным способом размножения, описанным выше. В одном предпочтительном варианте осуществления такую популяцию клеток повторно суспендируют в фармацевтически приемлемой среде, подходящей для введения млекопитающему, и тем самым получают терапевтическую композицию.
Соединение, определенное в разделе Краткое изложение сущности изобретения, или средство, способное осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арилуглеводородного рецептора, позволяет размножить ГСК, например, исходя из только одной или двух порций крови пупочного канатика, с получением популяции клеток количественно и качественно подходящей для эффективного кратковременного и длительного приживления трансплантата нуждающемуся в нем человеку. В частности, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей популяцию клеток с увеличенным количеством ГСК, образованную не более чем из одной или двух порций крови пупочного канатика, причем указанная терапевтическая композиция содержит полное количество кле
- 15 019872 ток, составляющее не менее 105, 106, 107, 108 или 109 клеток, и 20-100%, например 40-80%, от полного количества клеток представляют собой клетки СЭ34'. В одном родственном варианте осуществления указанная композиция содержит 0,1-40%, например 0,1-10% клеток СЭ34' Т1ту1 + и 20-80% клеток СЭ34' СО45КЛ'. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления указанная композиция содержит
10-95% клеток СО38+ и 5-70% клеток СО133+.
Применение терапевтической композиции.
Настоящее изобретение также относится к популяции клеток с увеличенным количеством ГСК или содержащей их композиции, предназначенной для применения при аутологической или аллогенной трансплантации стволовых клеток млекопитающему.
В настоящем изобретении субъектом является, например, донор костного мозга или индивидуум, у которого уменьшено или ограничено содержание клеток крови или для которого существует опасность такого уменьшения или ограничения. Субъектом необязательно является донор костного мозга до отбора костного мозга или донор костного мозга после отбора костного мозга. Субъектом необязательно является реципиент трансплантата костного мозга. Способы, описанные в настоящем изобретении, являются особенно подходящими для субъектов, которые обладают ограниченным запасом костного мозга, таких как пожилые субъекты или субъекты, которых раньше подвергали иимунодеплетивному лечению или миелоабляционному лечению, такому как химиотерапия, например лечению лейкоза или лимфом. У субъекта необязательно уменьшено содержание клеток крови или для него существует опасность уменьшения содержания клеток крови по сравнению с контрольным содержанием клеток крови. При использовании в настоящем изобретении термин контрольное содержание клеток крови означает среднее содержание клеток крови у субъекта до события или при практическом отсутствии события, которое приводит к изменению содержания клеток крови у субъекта. Событие, которое приводит к изменению содержания клеток крови у субъекта, включает, например, анемию, травму, химиотерапию, трансплантацию костного мозга и лучевую терапию. Например, у субъекта наблюдается анемия или потеря крови, например, вследствие травмы.
Увеличенную популяцию ГСК или композицию, содержащую популяцию клеток с увеличенным количеством ГСК, вводят субъекту, например, до, одновременно или после химиотерапии, лучевой терапии или трансплантации костного мозга. У субъекта необязательно наблюдается уменьшение количества костного мозга, связанное, например, с врожденным, генетически обусловленным или приобретенным синдромом, характеризующимся потерей костного мозга или уменьшением количества костного мозга. Таким образом, субъектом необязательно является субъект, нуждающийся в гематопоэзе. Субъектом необязательно является донор костного мозга или субъект, у которого уменьшено количество костного мозга или для которого существует опасность уменьшения количества костного мозга.
Процедуры с использованием гематопоэтических стволовых клеток применимы в качестве лечения, дополнительного к химиотерапии или лучевой терапии. Например, ГСК находятся в периферической крови и затем выделены из организма субъекта, который будет подвергаться химиотерапии, и после терапии клетки возвращают в организм. Таким образом, субъектом является субъект, подвергающийся или который предположительно будет подвергаться лечению, при котором уменьшается количество иммунных клеток, такому как химиотерапия, лучевая терапия, или он будет выступать в качестве донора трансплантата костного мозга. Костный мозг является одной из наиболее пролиферирующих тканей организма и поэтому часто является органом, который в первую очередь повреждается химиотерапевтическими лекарственными средствами и излучением. Поэтому при химиотерапии или лучевой терапии быстро нарушается выработка клеток крови и химиотерапию или лучевую терапию необходимо прекратить, чтобы гематопоэтическая система могла возобновить выработку клеток крови и восполнить их недостаток до того, как пациента повторно начнут лечить с помощью химиотерапии. Поэтому, как это описано в настоящем изобретении, ГСК или клетки крови, полученные способами, описанными в настоящем изобретении, необязательно вводят таким субъектам, нуждающимся в дополнительных клетках крови.
Настоящее изобретение относится к ГСК, количество которых увеличено вследствие воздействия соединения, предлагаемым в настоящем изобретении, или средством, способным осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора или композиции с увеличенным количеством ГСК, описанным выше, в комбинации с терапевтическим средством, способным усилить пролиферацию ГСК ίη νίνο, ίη νίίτο или ех νίνο (например, малыми молекулами, антителами и т.п.) и необязательно по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым инертным наполнителем или носителем. Терапевтическое средство, способное усилить пролиферацию ГСК, означает агонистические антитела к рецептору ТПО (например, УВ22В ^(Ρν)2, подробно описанные в публикации патента \О 2007/145227 и т.п.); цитокин, такой как 8СР, 1Ь-6, лиганд Ρ1Ϊ-3, ТПО или миметик ТПО (например, такие как описанные в \О 2007/022269; \О 2007/009120; \О 2004/054515; \О 2003/103686; \О 2002/085343; \О 2002/049413; \О 2001/089457; \О 2001/039773;
\О 2001/034585; \О 2001/021180; \О 2001/021180; \О 2001/017349; \О 2000/066112;
\О 2000/035446; \О 2000/028987; \О 2008/028645 и т.п.); промиелоцитарный колониестимулирующий фактор (6-С8Р); гранулоцитарный макрофагальный колониестимулирующий фактор (6М-С8Р); про
- 16 019872 стагландин или агонист рецептора простагландина (например, агонист рецептора 1 (ЕР-1) простагландина Е2, агонист рецептора 2 (ЕР-2) простагландина Е2, агонист рецептора 3 (ЕР-3) простагландина Е2 и агонист рецептора 4 (ЕР-4) простагландина Е2, подробно описанные в публикации патента \УО 2008/073748); тетраэтиленпентамин (ТЭПА); лиганды Νοίοΐι (Эс11а-1); и/или агонист νΝΤ. Кроме того, выращивание стволовых клеток с мезенхимными стволовыми клетками (М8С§) предупреждает реакцию трансплантат против хозяина (СУНЭ) и может способствовать размножению стволовых клеток. М8С§ и стволовые клетки можно трансплантировать в виде цельной культуры.
Фармацевтически приемлемое означает вещество, которое не является биологически или в другом отношении нежелательным, т.е. вещество, которое можно ввести субъекту или в клетку без проявления нежелательных биологических эффектов или вредных взаимодействий с другими компонентами фармацевтической композиции, в которой оно содержится. Носитель или инертный наполнитель выбирают так, чтобы свести к минимуму разложение активного ингредиента и чтобы свести к минимуму нежелательные побочные эффекты у субъекта или в клетке.
Для использования в способах, описанных в настоящем изобретении, композицию готовят любым обычным образом. Введение проводят любым обычным путем, известным как эффективный для специалиста с общей подготовкой в данной области техники. Например, композицию вводят перорально, парентерально (например, внутривенно), путем внутримышечной инъекции, путем внутрибрюшинной инъекции, чрескожно, экстракорпорально, назально или местно.
Предпочтительной методикой введения является внутривенное вливание. Количество клеток, вводимых путем вливания, определяют с учетом таких факторов, как пол, возраст, масса тела, типы заболевания или нарушения, стадию развития нарушения, содержание необходимых клеток в популяции клеток и количество клеток, необходимых для обеспечения благоприятного терапевтического воздействия. В одном предпочтительном варианте осуществления композицию вводят путем внутривенного вливания и она содержит не менее 104 клеток/кг, от 105 до 5х107 клеток/кг или более, если это необходимо. В одном предпочтительном варианте осуществления все вводимые путем вливания клетки образованы из размноженных клеток крови пупочного канатика одного новорожденного.
Фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для вливания пациенту композиции, содержащей клетки, обычно включает забуференный физиологический раствор, содержащий 5% САЧ (сывороточный альбумин человека), или базальную среду без добавок, или среду, известную в данной области техники.
При пероральном введении композиция представляет собой, например, таблетки или капсулы, приготовленные обычным образом с использованием фармацевтически приемлемых инертных наполнителей, таких как связующие (например, предварительно желатинизованный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или гидрофосфат кальция); смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк или диоксид кремния); разрыхлители (например, картофельный крахмал или натриевая соль гликолята крахмала); или смачивающие агенты (например, лаурилсульфат натрия). На таблетки наносят покрытие по методикам, хорошо известным в данной области техники. Жидкие препараты для перорального введения представляют собой, например, растворы, сиропы или суспензии, или они могут представлять собой сухой препарат, предназначенный для проводимого перед использованием восстановления водой или другим подходящим разбавителем. Такие жидкие препараты готовят по обычным методикам с использованием фармацевтически приемлемых добавок, таких как суспендирующие агенты (например, сироп из сорбита, производные целлюлозы или гидрированные пищевые жиры); эмульгирующие агенты (например, лецитин или камедь акации); неводные разбавители (например, миндальное масло, маслообразные сложные эфиры, этиловый спирт или фракционированные растительные масла) и консерванты (например, метил- или пропил-п-гидроксибензоаты или сорбиновая кислота). Препараты в соответствующих случаях необязательно содержат соли, оказывающее буферное воздействие, вкусовые добавки, красители и подсластители.
Композиции готовят для парентерального введения путем инъекции, например инъекции ударной дозы вещества или непрерывного вливания. Препараты для инъекции готовят в виде разовой дозированной формы, например в виде разовой дозированной формы в ампулах или содержащих множество доз контейнерах с добавлением или без добавления консерванта. Композиции находятся в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных разбавителях, и они могут содержать образующие композиции вещества, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие вещества. Альтернативно, активный ингредиент находится в порошкообразном виде для проводимого перед применением восстановления с помощью подходящего разбавителя, например, стерильной апирогенной воды. Обычно носителями, подходящими для растворов, предназначенных для парентерального введения, являются вода, подходящее масло, физиологический раствор, водный раствор декстрозы (глюкозы) и растворы родственных сахаров и гликолей, таких как пропиленгликоль или полиэтиленгликоли. Растворы для парентерального введения содержат, например, растворимую в воде соль активного ингредиента, подходящие стабилизирующие агенты и, при необходимости, буферные вещества. Подходящими стабилизирующими агентами являются противоокислительные агенты, такие как бисульфат натрия,
- 17 019872 сульфит натрия или аскорбиновая кислота по отдельности или в композиции. Также необязательно используют лимонную кислоту и ее соли и натриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТК). Кроме того, растворы для парентерального введения необязательно содержат консерванты, такие как бензалконийхлорид, метил- или пропилпарабен и хлорбутанол. Подходящие фармацевтические носители описаны в публикации КеттдЮп: ТНе 8с1епсе апб Ргасбсе ο£ РНаппасу, 2Г’1 Ε6ίΐίοη, Ωανί6 В. Тгоу. еб., ΡίρρίοοΙΙ ^1Шат8 & \νί11<ίη5 (2005), которая во всей своей полноте включена в настоящее изобретение в качестве ссылки, по меньшей мере, в отношение данных, относящихся к фармацевтическим носителям и композициям.
Композиции необязательно готовят в виде препаратов-депо. Такие препараты длительного действия необязательно вводят путем имплантации. Так, например, композиции готовят с использованием подходящих полимерных или гидрофобных материалов (например, в виде эмульсии в приемлемом масле) или ионообменных смол, или в виде умеренно растворимых производных, например в виде умеренно растворимой соли. Композиции вводят или включают с помощью имплантатов одновременно с хирургическим имплантатом или после него.
Кроме того, для регулирования длительности действия используют стандартные фармацевтические средства. Они включают препараты регулируемого высвобождения и подходящие макромолекулы, например полимеры, сложные полиэфиры, полиаминокислоты, поливинилпирролидон, сополимер этилена с винилацетатом, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или протаминсульфат. Концентрацию макромолекул, а также методики включения подбирают так, чтобы обеспечить регулируемое высвобождение. В частицы полимерных материалов, таких как сложные полиэфиры, полиаминокислоты, гидрогели, поли(молочная кислота) или сополимеры этилена с винилацетатом, необязательно включают лекарственное средство. Эти материалы используют не только для включения лекарственного средства, но и в качестве материала для микрокапсул, содержащих соединение.
Композицию, предназначенную для использования в способах, описанных в настоящем изобретении, необязательно готовят в виде препарата замедленного высвобождения и/или высвобождения с регулированием по времени. Такие препараты замедленного высвобождения и/или высвобождения с регулированием по времени готовят с использованием средств, обеспечивающих замедленное высвобождение, или вводят с помощью устройств доставки, которые хорошо известны специалистам с общей подготовкой в данной области техники. Композиции используют для обеспечения медленного или замедленного высвобождения одного или большего количества активных ингредиентов с использованием, например, гидроксипропилметилцеллюлозы, других полимерных матриц, гелей, проницаемых мембран, осмотических систем, многослойных покрытий, микрочастиц, липосом, микрошариков или их комбинации в различных соотношениях и обеспечивают необходимый искомый профиль высвобождения. Для использования с композициями, описанными в настоящем изобретении, выбирают подходящие системы замедленного высвобождения. Таким образом, используют разовые дозированные формы, подходящие для перорального введения, такие как, но, не ограничиваясь только ими, таблетки, капсулы, желатиновые капсулы, каплеты, порошки, которым придана способность к замедленному высвобождению.
Композиции необязательно доставляют с помощью системы регулируемого высвобождения. Например, композицию вводят путем внутривенного вливания, с помощью имплантированного осмотического насоса, липосом или других средств введения. Систему регулируемого высвобождения помещают вблизи от мишени.
В некоторых случаях композицию желательно вводить местно, т.е. на участок, нуждающийся в лечении. Например, композицию вводят путем инъекции в костный мозг, например, длинной трубчатой кости. Местное введение проводят, например, путем местного вливания во время хирургического вмешательства, путем местного нанесения (например, вместе с повязкой на рану после хирургического вмешательства), инъекции, с помощью катетера, суппозитория или имплантата. Имплантат изготовлен из пористого, непористого или желатинообразного материала, включая мембраны, такие как силиконовые мембраны, или волокна.
Фармацевтические композиции, описанные в настоящем изобретении, вводят любыми обычными путями, применяющимися для введения фармацевтических средств, в виде отдельных терапевтически активных ингредиентов или в виде комбинации терапевтически активных ингредиентов. Их необязательно вводят по отдельности, но обычно вводят вместе с фармацевтическим носителем, подобранным в соответствии с выбранным путем введения и стандартной фармацевтической практикой.
Соединения, описанные в настоящем изобретении, используют в фармацевтически приемлемой форме, включая фармацевтически приемлемые соли и их производные. Термин фармацевтически приемлемая форма означает композиции, включая соединения, описанные в настоящем изобретении, которые обычно являются безопасными, относительно нетоксичными и не являются биологически или в другом отношении нежелательными. Эти композиции необязательно включают фармацевтически приемлемые носители или стабилизаторы, которые нетоксичны для подвергающихся воздействию клетки или субъекта при использующихся дозах и концентрациях. Примеры физиологически приемлемых носителей включают буферы, такие как фосфатный, цитратный и основанные на других органических кислотах; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту; обладающие небольшой молекулярной массой (менее
- 18 019872 примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, в том числе глюкоза, манноза или декстрины; хелатные реагенты, такие как ЭДТК (этилендиаминтетрауксусная кислота); гидроксисахара, такие как маннит или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как ион натрия; и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как Τ\νΕΕΝτ™ (Όηίςοιηα. ипйеб Кшдбот), полиэтиленгликоль (ПЭГ) и РЬиКОМСЗ™ (ВАЗЕ, Сегтапу).
Термин фармацевтически приемлемые соли кислот и их производные означает соли и производные соединений формулы I, описанных в настоящем изобретении, которые сохраняют биологическую эффективности и описанные характеристики и которые не являются нежелательными в биологическом или ином отношении. Фармацевтически приемлемые соли образуются, например, с неорганическими кислотами, такими как хлористо-водородная, бромисто-водородная, серная, азотная, фосфорная кислоты и т.п., и с органическими кислотами, такими как уксусная, пропионовая, гликолевая, пировиноградная, щавелевая, малеиновая, малоновая, янтарная, фумаровая, винная, лимонная, бензойная, коричная, миндальная, метансульфоновая, этансульфоновая, п-толуолсульфоновая, салициловая кислоты и т.п.
Химическую стабильность композиции, содержащей соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир, увеличивают по методикам, известным специалистам в данной области техники. Например, эфир алканкарбоновой кислоты и полиэтоксилированного сорбита (полисорбат) добавляют в композицию, содержащую соединение формулы I, в количестве, эффективном для увеличения химической стабильности соединения.
Данные, полученные с помощью исследований с использованием культур клеток или экспериментальных моделей на животных, можно использовать для установления диапазона доз, использующихся для людей. Дозы таких соединений предпочтительно находятся в диапазоне концентраций в кровотоке с проявлением небольшой токсичности или без ее проявления. Доза меняется в этом диапазоне в зависимости от использующейся дозированной формы и пути введения. Для любого соединения, применяющегося в способе, предлагаемом в настоящем изобретении, терапевтически эффективную дозу первоначально оценивают с помощью исследований с использованием культур клеток.
Настоящее изобретение также относится к упаковке или набору, содержащему один или большее количество контейнеров, заполненных одним или большим количеством ингредиентов, описанных в настоящем изобретении. Такие наборы необязательно содержат необходимые или желательные растворы и буферы. Набор необязательно содержит увеличенную популяцию стволовых клеток, полученную способами, описанными выше, или он может содержать контейнеры или композиции, предназначенные для получения увеличенной популяции ГСК. В частности, настоящее изобретение относится к набору для увеличения ех νίνο количества гематопоэтических стволовых клеток, включающему соединение, определенное в разделе Краткое изложение сущности изобретения, и инструкции по использованию такого соединения в способе размножения ГСК и необязательно один или большее количество цитокинов или факторов роста, или сред для выращивания клеток, предпочтительно сред для выращивания гематопоэтических стволовых клеток, описанных выше. Набор может дополнительно содержать антитела для мониторинга выработки клеток, такие как антитела к СЭ34, к СЭ133, к СЭ38, к СЭ45РА и/или к ТНу1. В одном предпочтительном варианте осуществления такой набор дополнительно содержит один или большее количество цитокинов или факторов роста, выбранных из группы, включающей ГЕ-6, ΕΙΐ-3-Ь, ЗСЕ и ТПО. В такой упаковке (упаковках) или наборе (наборах) необязательно содержатся инструкции по применению.
Настоящее изобретение также относится к набору, содержащему количество соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, эффективное для увеличения количества ГСК у субъекта, включающему одну или большее количество доз соединения, предназначенных для использования в течение некоторого периода времени, причем полное количество доз соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, содержащихся в этом наборе, образует количество, достаточное для увеличения количества ГСК у субъекта. Период времени составляет примерно от одного до нескольких дней, или недель, или месяцев. Таким образом, период времени составляет примерно 5, 6, 7, 8, 10, 12, 14, 20, 21, 30 или 60 дней или более или любое количество дней, равное от 1 до 90.
Способы получения соединений, предлагаемых в настоящем изобретении.
Настоящее изобретение также относится к способам получения соединений, предлагаемых в настоящем изобретении. Для описанных реакций может оказаться необходимой защита реакционноспособных функциональных групп, например гидрокси-, амино-, имино-, тио- или карбоксигрупп, если необходимо, чтобы они содержались в конечном продукте, чтобы избежать их нежелательного участия в реакциях. Можно использовать обычные защитные группы в соответствии со стандартной практикой; см., например, Т.^. Сгеепе апб Р.С.М. \Уи15 ίη РгоЮебуе Сгоирк ίη Огдашс СйетЩгу, бо1т \УПеу & Зопк, 1991.
На приведенных ниже схемах реакций 1-5 подробно описано получение соединений, предлагаемых в настоящем изобретении. Из приведенного ниже подробного описания методик специалист в данной
- 19 019872 области техники должен понимать, что любую из групп К1, Κ2, Κ3, К4 и Ь1 необязательно можно преобразовать по известным методикам и получить необходимые конечные соединения формулы I.
Соединения формулы I можно получить по следующей схеме реакций 1.
где Οι, 02, 03, Ο4, Κι, К2 и К4 являются такими, как определено для формулы I в разделе Краткое изложение сущности изобретения; и
Ь в формуле I для схемы реакций определен как -ΝΗ-Ει-, что эквивалентно, например, -ΝΚ5ει(ΟΗ2)0-3-, где К5а обозначает водород и -(СН2)0-3- обозначает Ь1.
Соединения формулы I можно получить по реакции соединения формулы 2 с соединением формулы 3 в присутствии подходящего катализатора (например, Рй2(йЬа)3 и т.п.), в присутствии подходящего лиганда (например, 1,3-бис-2,4,6-триметилфенил)имидазолийхлорида), подходящего основания (например, С§2СО3 и т.п.) и подходящего растворителя (например, 1,4-диоксан) при температуре, равной примерно от 80 до 100°С в течение от 2 до примерно 48 ч. Соединения формулы 2, в свою очередь, можно получить по реакции соединения формулы 4 с небольшим избытком амина формулы 5 в подходящем растворителе (например, изопропаноле) при температуре, равной от примерно комнатной температуры до примерно 80°С. Соединения формулы 4 можно получить алкилированием соединения формулы 6 подходящим алкилирующим реагентом 7, в котором X! обозначает хлор, бром, йод, или эфиром сульфокислоты, в присутствии подходящего основания (например, гидрида натрия или карбоната калия), в подходящем растворителе (например, ДМФ (диметилформамид)), при температуре, равной от примерно 0 до примерно 80°С. Альтернативно, реакцию можно провести по методике Мицунобу с использованием подходящего спирта Κ4-ΟΗ в присутствии подходящего фосфина (например, трифенилфосфина) и азодикарбоксилата (например, диэтилазодикарбоксилата), в инертном растворителе, таком как ТГФ (тетрагидрофуран) или толуол, при температуре от примерно 0°С до примерно комнатной температуры.
Соединения формулы Ει, в которой Οι обозначает СК3 и в которой все остальные группы Ο обозначают Ν, также можно получить по следующей схеме реакций 2.
С1
(11) щ-х, (7)
Схема реакций 2
С1 м N II /— Кз
---' НуТ N N
Р4 (Ю)
С1 ы Ν Η2ΝΛι (5)
Ϊ ______ κ/ν N
ΗΝ'ίι κιN «4 (9) (в) (1а) где Κ1, Κ2, Κ3 и Κ4 являются такими, как определено для формулы I в разделе Краткое изложение сущности изобретения; и
Ь в формуле I для схемы реакций определен как -ΝΗ-Ει-, что эквивалентно, например, -ΝΚ5ει^Η2)0-3-, где К5а обозначает водород и -(ί.Ή;)0-3- обозначает Ь1.
Соединения формулы I можно получить по реакции соединения формулы 8 с амином формулы 5 в
подходящем растворителе (например, изопропаноле) при температуре, равной от примерно комнатной температуры до примерно 100°С. Соединения формулы 8, в свою очередь, можно получить по реакции соединения формулы 9 с соединением формулы 3 в присутствии подходящего катализатора (например, Рб(РЬ3Р)4, Рб2(бЬа)3 и т.п.), необязательно в присутствии подходящего лиганда (например, 1,3-бис-(2,4,6триметилфенил)имидазолийхлорида), подходящего основания (например, С§2СО3 и т.п.) и подходящего растворителя (например, 1,4-диоксана) при температуре примерно от 80 до 100°С в течение от 2 до примерно 48 ч.
Соединения формулы 9, в свою очередь, можно получить по реакции соединения формулы 10 со смесью дийодметана, йодида меди(1) и алкилнитрита (например, изоамилнитрита), необязательно в присутствии инертного растворителя, при температуре примерно от 50 до 100°С. Соединения формулы 10 можно получить алкилированием соединения формулы 11 подходящим алкилирующим реагентом 7, в котором Х1 обозначает хлор, бром, йод, или эфиром сульфокислоты в присутствии подходящего основания (например, гидрида натрия или карбоната калия), в подходящем растворителе (например, ДМФ), при температуре от примерно 0 до примерно 80°С. Альтернативно, реакцию можно провести по методике Мицунобу с использованием подходящего спирта К4-ОН в присутствии подходящего фосфина (например, трифенилфосфина) и азодикарбоксилата (например, диэтилазодикарбоксилата), в инертном растворителе, таком как ТГФ или толуол, при температуре от примерно 0°С до примерно комнатной темпера туры.
Соединения формулы II, которые являются подгруппой соединений формулы I, в которой Κι обозначает присоединенный через атом N гетероциклил или присоединенный через атом N гетероарил, можно получить, как подробно описано на приведенной ниже схеме реакций 3.
Схема реакций 3
где С1, С2, С3, С4, Κι, К2 и К4 являются такими, как определено для формулы I в разделе Краткое изложение сущности изобретения; и
Ь в формуле I для схемы реакций определен как -ΝΗ-Γι-, что эквивалентно, например, -№5а(СН2)0-3-, где К5а обозначает водород и -(СН2)0-3- обозначает Ь1.
Соединения формулы II можно получить по реакции соединения формулы 2 с соединением формулы 20 в присутствии избытка циклического амина или содержащего группу ΝΗ гетероцикла (например, замещенного пиразола, замещенного имидазола и т.п.) при температуре от примерно 50 до примерно
250°С, в течение от примерно 1 до примерно 24 ч, необязательно в присутствии основания, такого как гидрид натрия или ДБУ (1,8-диазабикло[5.4.0]ундец-7-ен).
Соединения формулы 10, в которой С1 обозначает СК3 и в которой все остальные группы С обозначают Ν, также можно получить по следующей схеме реакций 4.
Схема реакций 4
где К3 и К4 являются такими, как определено для формулы I в разделе Краткое изложение сущности изобретения.
Соединения формулы 10 можно получить в соответствии с методиками, описанными в публикациях I. Меб. СЬет, 1972, 456 и I. Меб. СЬет., 1992, 4180. Ортоэфир формулы 21 вводят в реакцию с соединением формулы 22, необязательно в присутствии кислоты, такой как уксусная кислота, при температуре от примерно комнатной температуры до примерно 150°С, в течение от примерно 1 до примерно 24 ч. Соединение формулы 22, в свою очередь, можно получить по реакции соединения формулы 23 с первичным амином формулы 24, необязательно в присутствии кислоты, такой как пТСК (п-толуолсульфоновая кислота), или основания, такого как триэтиламин или ДБУ, при температуре от примерно 50 до примерно 200°С.
Соединения формулы IV можно получить, как подробно описано на схеме реакций 5.
- 21 019872
где Οι, 02, Оз, О4, Κι и К2 являются такими, как определено для формулы I в разделе Краткое изложение сущности изобретения;
Ь в формуле I для схемы реакций определен как -ΝΗ-Π-, что эквивалентно, например, -ΝΚ5Ε1^Η2)0-3-, где К5а обозначает водород и -(СЩ)0-3- обозначает Ь1;
К20 и Κ2ι независимо выбраны из группы, включающей водород и С1 -С4-алкил.
Соединение формулы IV, в которой К2! обозначает водород, можно получить из соединения формулы III путем обработки подходящим восстановительным реагентом, таким как алюмогидрид лития или диизобутилалюминийгидрид, в подходящем растворителе, таком как ТГФ или толуол, при температуре от примерно -78 до примерно 50°С. Для завершения реакции необходимо от примерно 0,5 до примерно 16 ч. Соединение формулы IV, в которой К2! обозначает низш. алкил, можно получить путем обработки соединения формулы III алкиллитием или реагентом Гриньяра в подходящем растворителе, таком как эфир или тетрагидрофуран, при температуре от примерно -78 до примерно 50°С. Для завершения реакции необходимо от примерно 0,5 до примерно 16 ч.
Подробное описание примеров синтеза соединения формулы I приведено в представленных ниже примерах.
Дополнительные методики синтеза соединений, предлагаемых в настоящем изобретении.
Соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, можно получить в виде фармацевтически приемлемой соли присоединения с кислотой по реакции соединения в свободной форме с фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислотой. Альтернативно, фармацевтически приемлемую соль присоединения соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, с основанием можно получить по реакции соединения в форме свободной кислоты с фармацевтически приемлемым неорганическим или органическим основанием. Альтернативно, солевые формы соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, можно получить с использованием солей исходных веществ или промежуточных продуктов.
Например, соли 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (пример 1, ниже) синтезируют следующим образом.
Мезилат: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) растворяют в 12 мл ацетона при 50°С. По каплям добавляют метансульфоновую кислоту (0,137 г; 1,40 ммоль). Быстро происходит кристаллизация. Белой суспензии дают охлаждаться в течение примерно 30 мин при охлаждении до комнатной температуры. Взвесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре и фильтруют. Твердое вещество промывают тремя порциями ацетона (6 мл) и сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает температурой плавления, равной примерно 233°С, и энтальпией плавления, равной 98 г/Дж. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными 0,2%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды найдено равным 0,4%.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к мезилату соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к мезилату соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,4, 6,7, 18,3,
18,6, 26,9 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,4, 6,7, 10,3, 12,9, 16,4, 18,3, 25,8, 26,5, 26,9.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к мезилату соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 3.
Тозилат: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) растворяют в 12 мл при 50°С. По каплям добавляют раствор моногидрата паратолуолсульфоновой кислоты (0,271 г; 1,40 ммоль) в ацетоне (1,2 мл). В раствор при 50°С вносят затравочные кристаллы и быстро происходит кристаллизация. Суспензии дают охлаждаться в течение примерно 30 мин до комнатной температуры и перемешивают в течение примерно 18 ч. После фильтрования твердое вещество промывают тремя порциями ацетона (6 мл) и сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает температурой плавления, равной примерно 233 °С, и энтальпией плавления, равной
- 22 019872 г/Дж. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными 0,2%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды найдено равным 0,4%.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к тозилату соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к тозилату соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,2, 13,3, 16,7,
19.5, 25,4 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики: 6,2, 7,6, 12,4, 13,3, 15,1, 16,7, 17,7, 19,5, 20,2, 24,6, 24,9, 25,4, 25,6.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к тозилату соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 4.
Сульфат: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) растворяют в 10 мл ацетона и 1 мл воды примерно при 55°С. По каплям добавляют раствор серной кислоты (0,280 г; 2,79 ммоль) в 1 мл воды. Быстро происходит кристаллизация. Суспензии дают охлаждаться в течение примерно 30 мин до комнатной температуры, перемешивают в течение примерно 18 ч и фильтруют. Осадок на фильтре промывают тремя порциями по 6 мл ацетона и сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает температурой плавления, равной примерно 224°С, и энтальпией плавления, равной 91 г/Дж. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными менее 0,05%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды найдено равным 0,2%.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к сульфату соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к сульфату соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,5, 6,8, 10,7,
13.5, 26,4, 27,6 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,5, 6,8, 10,7, 13,1, 13,5, 18,6, 18,8, 20,8, 26,4, 27,1, 27,6.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к сульфату соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 6.
Эзилат: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) растворяют в 12 мл ацетона при 50°С. По каплям добавляют этансульфоновую кислоту (0,155 г; 1,40 ммоль). Быстро происходит кристаллизация. Полученной белой суспензии дают охлаждаться в течение примерно 30 мин до комнатной температуры. Суспензию перемешивают в течение примерно 18 ч при комнатной температуре и фильтруют. Твердое вещество промывают тремя порциями по 6 мл ацетона и сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает температурой плавления, равной примерно 231°С, и энтальпией плавления, равной 76 г/Дж. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными 0,6%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды найдено равным 0,05%.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к эзилату соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к эзилату соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,3, 9,9, 18,4, 25,3, 26,1 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,3, 9,9, 17,1, 17,9, 18,4, 19,0, 22,0, 25,3, 26,1, 27,1.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к эзилату соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 8.
Гидробромид: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) растворяют в 6 мл ДМФ при 65°С. По каплям добавляют бромисто-водородную кислоту 48% (0,235 г; 1,40 ммоль). Раствору дают охлаждаться в течение примерно 30 мин до комнатной температуры. При 55°С добавляют затравочные кристаллы и медленно происходит кристаллизация. Суспензию перемешивают в течение примерно 18 ч при комнатной температуре и фильтруют. Твердое вещество промывают с помощью 4 мл ДМФ/вода 1:1 и 6 мл воды. Соль сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает температурой плавления, равной примерно 285°С, и энтальпией плавления, равной 119 г/Дж. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными 1,0%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды не обнаружено.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к гидробромиду соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к гидробромиду соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 7,0,
- 23 019872
25,9, 26,8, 27,9 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 7,0, 11,4, 13,3, 21,4, 23,4, 25,9, 26,4, 26,8, 27,9.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к гидробромиду соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 9.
Оротат: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) и оротовую кислоту (0,222 г; 1,40 ммоль) растворяют в 7,8 мл ΝΜΡ (1-метил-2-пирролидон) при 85°С. Раствор охлаждают до 60°С и в течение примерно 5 мин по каплям добавляют 6 мл воды. Полученной белой суспензии дают охлаждаться в течение примерно 30 мин до комнатной температуры и перемешивают в течение 18 ч. После фильтрования осадок на фильтре промывают двумя порциями по 4 мл ΝΜΡ/вода 1:1 и тремя порциями по 6 мл воды. Твердое вещество сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает температурой плавления, равной примерно 240°С, и энтальпией плавления, равной 130 г/Дж. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными менее 0,05%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды найдено равным 1,7%.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к оротату соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к оротату соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 7,1, 16,3, 19,2, 23,5,
25,6, 26,9 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 7,1, 14,4, 16,3, 18,6, 19,2, 21,7, 23,0, 23,5, 25,6, 26,9, 28,7.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к оротату соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 10.
Гемифумарат: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) растворяют в 18 мл метанола при 65°С. Добавляют фумаровую кислоту (0,164 г; 1,40 ммоль) и 6 мл метанола. Раствору дают охлаждаться в течение примерно 30 мин до комнатной температуры. При 60°С добавляют небольшое количество затравочных кристаллов и медленно происходит кристаллизация. Суспензию перемешивают в течение 18ч при комнатной температуре и фильтруют. Твердое вещество промывают тремя порциями по 6 мл метанола и сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает температурой плавления, равной примерно 232°С, и энтальпией плавления, равной 83 г/Дж. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными менее 0,05%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды найдено равным 0,3%.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к гемифумарату соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к гемифумарату соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 7,2, 8,7, 14,4, 15,8, 17,4, 19,0, 23,7 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 7,2, 8,7, 10,8, 14,4, 15,8, 17,4, 17,8, 19,0, 20,1, 23,7,
27,5.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к гемифумарату соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 11.
Безилат: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) растворяют в 12 мл ацетона при 50°С. По каплям добавляют раствор бензолсульфоновой кислоты (0,225 г; 2,79 ммоль) в 1,2 мл ацетона. При 48°С добавляют затравочные кристаллы и медленно происходит кристаллизация. Суспензии дают охлаждаться в течение примерно 30 мин до комнатной температуры. Взвесь перемешивают в течение примерно 18 ч при комнатной температуре и фильтруют. Соль промывают тремя порциями по 6 мл ацетона и сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает температурой плавления, равной примерно 219°С, и энтальпией плавления, равной 92 г/Дж. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными 0,3%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды найдено равным примерно 0,05%.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к безилату соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к безилату соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,2, 7,7, 17,7, 25,5 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,2, 7,7, 15,2, 16,7, 17,1, 17,7, 19,8, 20,2, 24,9, 25,2, 25,5.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к безилату соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 7.
- 24 019872
Нападизилат: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) и 0,259 г 1,5-нафталиндисульфоновой кислоты (0,70 ммоль) растворяют в 9 мл ДМФ при 87°С. Прозрачному раствору дают охлаждаться в течение примерно 30 мин до комнатной температуры. При 65°С добавляют затравочные кристаллы и медленно происходит кристаллизация. Суспензию перемешивают в течение примерно 18 ч при комнатной температуре и фильтруют. Твердое вещество промывают двумя порциями по 4 мл ДМФ/вода 1:1 и тремя порциями по 6 мл воды. Соль сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает температурой плавления, равной примерно 304°С, и энтальпией плавления, равной 83 г/Дж. При 107°С обнаруживают широкую эндотермическую область, которую можно приписать потере воды. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными 6,1%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды найдено равным менее 0,05%.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нападизилату соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к нападизилату соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,4,
9,6, 13,1, 15,7, 16,1, 26,0 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 9,6, 13,1, 15,7, 16,1, 16,4, 20,4, 20,9, 23,7, 26,0, 26,9.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к нападизилату соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 12.
Гидрохлорид: свободное основание 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенола (0,60 г; 1,40 ммоль) растворяют в 12 мл ацетона при 55°С. По каплям добавляют хлористо-водородную кислоту 37% (0,138 г; 1,40 ммоль). Быстро происходит кристаллизация. Белой суспензии дают охлаждаться в течение примерно 30 мин до комнатной температуры и перемешивают в течение 18 ч. После фильтрования твердое вещество промывают тремя порциями по 6 мл ацетона и сушат сначала в течение примерно 3 ч при 50°С/примерно 10 мбар и затем в течение примерно 16 ч при 80°С/примерно 10 мбар. Вещество обладает экзотермической областью примерно при 162°С с энтальпией, равной ~13,8 Дж/г. Это явление можно приписать превращению твердого вещества в более стабильную модификацию. Затем, при 259°С, наблюдается эндотермическая область с энтальпией, равной 99,7 Дж/г. Полученное вещество характеризуется потерями при сушке, равными 0,6%. Поглощение воды определяли с помощью термогравиметрии после выдерживания при относительной влажности, равной 80%, в течение 24 ч. Поглощение воды найдено равным 0,3%.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к гидрохлориду соединения примера 1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к гидрохлориду соединения примера 1, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,1, 7,0, 19,8, 26,1 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 6,1, 7,0, 18,1, 19,8, 24,7, 26,1, 27,0, 27,7.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к гидрохлориду соединения примера 1, обладающему порошковой рентгенограммой, приведенной на фиг. 5.
Формы свободной кислоты или свободного основания соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, можно получить из соответствующих солей присоединения с основаниями или солей присоединения с кислотами соответственно. Например, соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, в форме соли присоединения с кислотой можно превратить в соответствующее свободное основание путем обработки подходящим основанием (например, раствором гидроксида аммония, гидроксидом натрия и т.п.). Соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, в форме соли присоединения с основанием можно превратить в соответствующую свободную кислоту путем обработки подходящей кислотой (например, хлористо-водородной кислотой и т.п.). Нитрат соединения примера 1 можно получить по методикам, известным специалисту в данной области техники. Порошковая рентгенограмма представлена на фиг. 2.
Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, в неокисленной форме можно получить из Ν-оксидов соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, путем обработки восстановительным реагентом (например, серой, диоксидом серы, трифенилфосфином, борогидридом лития, борогидридом натрия, трихлоридом, трибромидом фосфора и т.п.) в подходящем инертном органическом растворителе (например, ацетонитриле, этаноле, водном растворе диоксана и т.п.) при температуре от 0 до 80°С.
Пролекарственные производные соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, можно получить по методикам, известным специалистам с общей подготовкой в данной области техники (дополнительные подробности см., например, в публикации 8аи1шег е1 а1. (1994), ΒίοοΓ§;·ιηίο апб Мебюша1 С.’11ет151гу Ьебегк, νοί. 4, р. 1985). Например, подходящие пролекарства можно получить по реакции не являющегося производным соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, с подходящим карбамоилирующим реагентом (например, 1,1-ацилоксиалкилкарбанохлоридатом, п-нитрофенилкарбонатом и т.п.).
- 25 019872
Содержащие защитные группы производные соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, можно получить по методикам, известным специалистам с общей подготовкой в данной области техники. Подробное описание методик, применимых для введения защитных групп и их удаления, приведено в публикации Τ.ν. Сгсспс, Рго1ес1тд Сгоирк ίη Огдашс Сйеш181гу, 3гб βάίίίοη, ίοΐιη νίίον & δοηκ, 1пс., 1999.
Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получить в виде отдельных стереоизомеров с помощью реакции рацемической смеси соединения с оптически активным разделяющим реагентом с образованием пары диастереоизомерных соединений, разделения диастереоизомеров и выделения оптически чистых энантиомеров. Хотя разделение энантиомеров можно провести с использованием ковалентных диастереоизомерных производных соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, предпочтительны диссоциирующие комплексы (например, кристаллические соли диастереоизомеров). Диастереоизомеры обладают разными физическими характеристиками (например, температурами плавления, температурами кипения, растворимостями, реакционной способностью и т.п.) и их можно легко разделить с использованием этих различий. Диастереоизомеры можно разделить с помощью хроматографии или, предпочтительно, по методикам разделения, основанным на различиях их растворимостей. Затем оптически чистый энантиомер вместе с разделяющим реагентом извлекают по любой возможной методике, которая не приводит к рацемизации. Более подробное описание методик, пригодных для выделения стереоизомерных соединений из их рацемической смеси, приведено в публикации Έπη 1асцне5, Аибге СоНе!, 8атие1 Η. \νίΕη, Еηаηί^οте^8, Касета1е5 αηά КеюкПющ, ίοΐιη ^11еу Αη6 δοηκ, 1пс., 1981. Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, также можно получить в виде отдельных стереоизомеров по методикам хиральной хроматографии, в частности, с помощью ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) или надкритической жидкостной хроматографии с использованием хиральной неподвижной фазы.
Порошковые рентгенограммы в настоящем изобретении снимали с помощью прибора Вгикег Ό8 Уагю в режиме пропускания, излучение СиКа (30 кВ, 40 мА), диапазон сканирования 2-40° (по углам 2-тета), длительность шага 90,3 с. Исследование аморфного соединения примера 1 с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) проводили с помощью прибора Регкт Е1тег Э8С7 при скорости нагревания, равной 40°С/мин.
Резюмируя, можно сказать, что соединения формулы I можно получить способом, который включает:
(a) проведение реакций по схемам реакций 1-5;
(b) необязательное превращение соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в фармацевтически приемлемую соль;
(c) необязательное превращение солевой формы соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в несолевую форму;
(б) необязательное превращение неокисленной формы соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в фармацевтически приемлемый Ν-оксид;
(е) необязательное превращение Ν-оксидной формы соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в его неокисленную форму;
(ί) необязательное выделение индивидуального изомера соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, из смеси изомеров;
(д) необязательное превращение не являющегося производным соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в фармацевтически приемлемое пролекарственное производное; и (11) необязательное превращение пролекарственного производного соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в его не являющуюся производным форму.
Если получение исходных веществ специально не описано, то эти соединения являются известными или их можно получить по методикам, аналогичным известным в данной области техники или раскрытым в приведенных ниже примерах.
Специалист в данной области техники должен понимать, что указанные выше превращения являются только примерами методик получения соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, и что также можно использовать другие хорошо известные методики.
- 26 019872
Примеры
Настоящее изобретение дополнительно поясняется, но не ограничивается приведенными ниже примерами, которые иллюстрируют получение соединений формулы I, предлагаемых в настоящем изобретении.
Пример 1.
4-(2-(2-(Бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол
Синтез 2,6-дихлор-9-изопропил-9Н-пурина (Ь).
К 2,6-дихлор-9Н-пурин (а) (6,0 ммоль), растворенному в безводном ДМФ (5,0 мл), при перемешивании при КТ в течение 2 ч медленно добавляли гидрид натрия (7,8 ммоль). Добавляли 2-йодпропан и смесь перемешивали в течение 16 ч. Смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании смесью гексан/ЕЮАс (от 20:1 до 3:1) и получали искомое соединение в виде белого твердого вещества.
Ή ЯМР (500 МГц, СИС13): δ 8,15 (к, 1Н), 4,91 (т, 1Н), 1,63 (ά, 6Н).
Синтез 4-(2-(2-хлор-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол (с).
2,6-Дихлор-9-изопропил-9Н-пурин (1,1 ммоль) смешивали с тирамином (1,16 ммоль), растворяли в ί-РгОН (6 мл) и смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании смесью гексан/ЕЮАс (от 5:1 до 1:2) и получали искомое соединение в виде белого твердого вещества.
Ή ЯМР (500 МГц, СИС13): δ 9,21 (Ьг, 1Н), 8,49 (к, 1Н), 7,80 (к, 1Н), 7,10 (ά, 2Н), 6,73 (ά, 2Н), 4,87 (т, 1Н), 4,03 (ΐ, 2Н), 3,01 (ΐ, 2Н), 1,68 (ά, 6Н);
МСВР (масс-спектрометрия высокого разрешения) (ЭУ - ионизация электронным ударом) рассчитано для С16Н18СШ5О (М+Н+) 332,1273, найдено 332,1278.
Синтез 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (ά).
В высушенную пламенем колбу Шленка помещали 4-(2-(2-хлор-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенол (0,62 ммоль), тианафтен-3-бороновую кислоту (0,94 ммоль), рά2(άЬа)3 (0,062 ммоль), Ск2СО3 (1,25 ммоль) и 1,3-бис-(2,4,6-триметилфенил)имидазолийхлорид (0,125 ммоль). Колбу откачивали и повторно заполняли с помощью Ν2 и добавляли безводный 1,4-диоксан (2 мл). Колбу герметизировали и реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали непосредственно с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании смесью гексан/ЕЮАс (от 20:1 до 1:4) и получали искомое соединение в виде желтоватого твердого вещества.
Альтернативно, синтез соединения примера 1 можно провести следующим образом.
Синтез 2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-6-хлор-9-изопропил-9Н-пурина (Ь).
В круглодонную колбу помещали 6-хлор-2-йод-9-изопропил-9Н-пурин (получен в примере 15с, 3,31 г, 0,0103 моль), бензо[Ь]тиофен-3-илбороновую кислоту (2,74 г, 0,0154 моль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (1,19 г, 0,0103 моль). К этой смеси добавляли толуол (80 мл), этанол (25 мл) и водный раствор карбоната натрия (2 М, 21 мл). Колбу герметизировали и реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 1 ч. К охлажденной смеси добавляли воду и ее экстрагировали этилацетатом. Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании с помощью от 20 до 50% ЕЮАс в гексане и получали искомое соединение в виде твердого вещества, которое перекристаллизовали из 1:1 смеси метанол/вода.
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-ά^: δ 9,15 (ά, 1Н), 8,85 (к, 2Н), 8,17 (ά, 1Н), 7,62 (ΐ, 1Н), 7,53 (ΐ, 1Н), 5,06 (т, 1Н), 1,71 (ά, 6Н);
МС (масс-спектрометрия) т/ζ 329,0 (М+1).
Синтез 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (с).
2-(Бензо[Ь]тиофен-3-ил)-6-хлор-9-изопропил-9Н-пурин (2,2 г, 0,0067 моль) суспендировали в безводном 2-пропаноле (70 мл) в пробирке высокого давления. Добавляли тирамин (1,01 г, 0,0074 моль). Пробирку герметизировали и нагревали при 85°С в течение 16 ч. Добавляли дополнительное количество тирамина (0,50 г, 0,0037 моль) и смесь нагревали при 85°С в течение 48 ч. Реакционную смесь концентрировали и водный раствор бикарбоната натрия добавляли к остатку, который экстрагировали с помо- 27 019872 щью ЕЮАс. Объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании с помощью от 50 до 85% ЕЮАс в гексане и получали твердое вещество. Твердое вещество растирали с метанолом и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
Альтернативно, синтез соединения примера 1 можно провести следующим образом.
Синтез 2,6-дихлор-9-изопропил-9Н-пурина (Ь).
К 2,6-дихлор-9Н-пурину (а) (998 г, 5,28 моль), растворенному в безводном ДМФ (5,0 л), при перемешивании при 10°С в течение 1 ч добавляли гидрид натрия (60% дисперсия, 254 г, 6,35 моль). Добавляли 2-йодпропан (1595 г) и смесь перемешивали при КТ в течение 24 ч. Добавляли воду (5,0 л) и полученный твердый осадок собирали и промывали водой (500 мл) и гептаном (2x2,5 л). Неочищенное твердое вещество кристаллизовали из изопропилацетата (2,1 л) и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
Синтез 4-(2-(2-хлор-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (с).
2,6-Дихлор-9-изопропил-9Н-пурин (500 г) при 50°С при перемешивании порциями добавляли к смеси тирамина (593 г), триэтиламина (262 г) и ί-РгОН (5,0 л). Смесь перемешивали при этой температуре в течение 4 ч, затем реакционную смесь концентрировали. Остаток переносили в изопропилацетат (6,0 л) и промывали 20% раствором лимонной кислоты (2,0 л) и водой (2,0 л). Органический слой концентрировали досуха, затем переносили в этанол (2,0 л) и повторно концентрировали досуха. Неочищенное твердое вещество кристаллизовали из этанола (3,2 л) и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
Синтез 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (ά).
Смесь 4-(2-(2-хлор-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (950 г), тианафтен-3-бороновой кислоты (561 г), дихлор-бис-(трифенилфосфин)палладия(11) (10,1 г), карбоната калия (791 г), воды (3,25 л) и ДМА (диметиламин) (3,25 л) перемешивали в атмосфере азота в течение 10 мин. Затем смесь при перемешивании нагревали при 70°С в течение 14 ч. Добавляли этилацетат (6,5 л) и воду (3,25 л) добавляли и смесь фильтровали через целит (125 г) при 50°С, промывали этилацетатом (1,0 л). Слои разделяли и водный слой при 50°С дополнительно экстрагировали этилацетатом (7,5 л). Объединенные органические слои промывали водой (3x2,5 л), затем отгоняли примерно 2,5 л растворителя. Добавляли тетрагидрофуран (2,5 л) и модифицированный тиогруппами силикагель (200 г). Смесь перемешивали при 70°С в течение 16 ч, затем фильтровали и слой промывали этилацетатом (1,0 л). Объединенные фильтраты концентрировали при атмосферном давлении до объема, равного примерно 5 л, затем смеси давали охладиться. Полученное твердое вещество собирали и промывали этилацетатом (2x1,0 л) и получали искомое соединение.
Соединение примера 1 можно перекристаллизовать из смеси толуол/этанол и при комнатной температуре промыть водным раствором ЫаНСО3.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению примера 1 в кристаллической форме модификации А, причем модификация А на порошковой рентгенограмме содержит следующие пики (угол 2-тета °): 12,1, 16,9, 18,9, 21,3 и который в дополнительном варианте осуществления содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 12,1, 15,9, 16,9, 17,3, 18,9, 21,3, 22,1, 23,6, 24,4, 27,3.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению примера 1 в твердой форме модификации А, который содержит на порошковой рентгенограмме следующие пики (угол 2-тета °): 9,0, 12,1, 13,0, 13,1, 13,6, 14,4, 14,7, 15,1, 15,9, 16,9, 17,3, 17,7, 18,0, 18,9, 19,0, 20,1, 21,3, 22,1, 22,3, 22,6, 22,8, 23,4, 23,6, 24,4, 25,3, 26,3, 26,5, 27,3, 27,8, 28,2, 29,5, 29,7, 30,4, 30,7, 31,0, 31,4, 32,2, 32,8, 33,3, 34,3, 35,5, 36,4, 37,5, 38,4, 39,0, 39,4.
Порошковая рентгенограмма соединения примера 1, модификация А, представлена на фиг. 1. Аморфное соединение примера 1 получали ίη δίΐιι в тигле для ДСК (дифференциальная сканирующая калориметрия) путем нагревания соединения до плавления и отжига/охлаждения. Во время цикла охлаждения можно было наблюдать стеклование, однако в цикле повторного нагревания оно было более характеристичным и наблюдалось примерно при 70-75°С. Диаграмма ДСК представлена на фиг. 13.
Пример 15.
4-((2-(Пиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол но.
- 28 019872
Синтез 2-амино-6-хлор-9-изопропил-9Н-пурина (Ь).
Гидрид натрия (1,5 г 60% дисперсии в минеральном масле, 38 ммоль) в течение 10 мин при перемешивании при КТ порциями добавляли к суспензии 2-амино-6-хлор-9Н-пурина (5,34 г, 31,5 ммоль) в безводном ДМФ (50 мл). Через 45 мин смесь охлаждали в бане со льдом, затем добавляли 2-йодпропан. Охлаждающую баню удаляли и при перемешивании смеси давали нагреваться до КТ в течение 16 ч. Смесь охлаждали льдом, затем добавляли воду. Смесь концентрировали и остаток обрабатывали горячим этилацетатом. Охлажденную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании с помощью от 0 до 50% ЕЮАс в гексане и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 7,83 (8, 1Н), 5,17 (8, 2Н), 4,71-4,66 (т, 1Н), 1,57 (б, 6Н).
МС т/ζ 212,1 (М+1).
Синтез 6-хлор-2-йод-9-изопропил-9Н-пурина (с).
6-Хлор-9-изопропил-9Н-пурин-2-амин (2,68 г, 12,7 ммоль) при КТ растворяли в ТГФ (64 мл). Добавляли йод (1,61 г, 6,25 ммоль), СНД2 (10,6 мл) и Си! (1,27 г, 6,66 ммоль). Смесь перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре. Добавляли изопентилнитрит (5,33 мл). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 45 мин и затем охлаждали до комнатной температуры. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и смесь трижды экстрагировали с помощью ЕЮАс. Объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили над Мд§О4 и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании с помощью от 0 до 30% этилацетата в гексане и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
Ή ЯМР (400 МГц, СЭС13): δ 8,09 (8, 1Н), 4,95-4,88 (т, 1Н), 1,65 (б, 6Н).
МС т/ζ 323,0 (М+1).
Синтез 6-хлор-2-(пиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурина (б).
В круглодонную колбу помещали 6-хлор-2-йод-9-изопропил-9Н-пурин (1,2 г, 3,7 ммоль), циклический эфир пиридин-3-бороновой кислоты с 1,3-пропандиолом (0,91 г, 5,6 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (430 мг, 0,37 ммоль). К этой смеси добавляли толуол (60 мл), этанол (6 мл) и водный раствор карбоната натрия (2 М, 15 мл). Колбу герметизировали и реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 4 ч. К охлажденной смеси добавляли воду и ее экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании с помощью от 30 до 70% ЕЮАс в гексане и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
Ή ЯМР (400 МГц, СЭ3ОО): δ 9,60 (б, 1Н), 8,90-8,87 (т, 1Н), 8,68 (8, 1Н), 8,67 (б, 1Н), 7,63-7,60 (т, 1Н), 5,12-5,05 (т, 1Н), 1,74 (б, 6Н).
МС т/ζ 274,1 (М+1).
Синтез 4-((2-(пиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (е).
6-Хлор-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин (300 мг, 1,1 ммоль) суспендировали в безводном 2-пропаноле (40 мл) в пробирке высокого давления. Добавляли тирамин (300 мг, 2,2 ммоль). Пробирку герметизировали и нагревали при 85°С в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюировании с помощью от 0 до 70% ЕЮАс в гексане и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
Пример 123.
4-(2-(9-Изопропил-2-(2-метил-1Н-имидазол-1-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол
В пробирку для микроволнового реактора помещали 4-(2-(2-хлор-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенол (30 мг, 0,091 ммоль), 2-метил-1Н-имидазол (59 мг, 0,73 ммоль) и 0,5 мл NМР. Герметизированную пробирку нагревали микроволновым излучением при 240°С в течение 2 ч. Реакционную смесь очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (колонка С18, элюирование с помощью АЦН (ацетонитрил)-Н2О 0,05% ТФК (трифторуксусная кислота)) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
Пример 128.
4-(2-(2-(5-Хлорпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол
- 29 019872
Синтез 4-(2-(2-йод-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (Ь).
Смесь 6-хлор-2-йод-9-изопропил-9Н-пурина (а) (1,0 г, 3,1 ммоль), тирамина (0,64 г, 4,65 ммоль), триэтиламина (0,63 г, 6,2 ммоль) и 2-пропанола (30 мл) нагревали при 85°С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали и добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (от 25 до 75% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
МС т/ζ 424,1 (М+1).
Синтез 4-(2-(2-(5-хлорпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (с).
По методике примера 15ά 4-(2-(2-йод-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол (Ь) вводили в реакцию с 5-хлорпиридин-3-илбороновой кислотой. Неочищенный продукт очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (колонка С18, элюирование с помощью АЦН-Н2О 0,05% ТФК) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
Пример 134.
4-(2-(6-(5-Фторпиридин-3-ил)-1-изопропил-1Н-пиразоло[3,4-б]пиримидин-4-иламино)этил)фенол
Синтез 4-(2-(6-хлор-1-изопропил-1Н-пиразоло[3,4-б]пиримидин-4-иламино)этил)фенола (Ь).
По методике примера 128Ь 4,6-дихлор-1-изопропил-1Н-пиразоло[3,4-б]пиримидин (И83399196) (а) (0,184 г, 0,795 ммоль) вводили в реакцию с тирамином. Неочищенный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 25 до 75% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
МС т/ζ 332,1 (М+1).
Синтез 4-(2-(6-(5-фторпиридин-3 -ил)-1 -изопропил-1Н-пиразоло [3,4-б]пиримидин-4иламино)этил)фенола (с).
По методике примера 15ά 4-(2-(6-хлор-1-изопропил-1Н-пиразоло[3,4-б]пиримидин-4иламино)этил)фенол (Ь) вводили в реакцию с 5-фторпиридин-3-илбороновой кислотой. Неочищенный остаток очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (колонка С18, элюирование с помощью АЦНН2О 0,05% ТФК) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
Пример 141.
4-(2-(2-(5-Фторпиридин-3-ил)-7-изопропил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-иламино)этил)фенол
Синтез 2,4-дихлор-7-изопропил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидина (Ь).
По методике примера 15Ь 2,4-дихлор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (0,5 г, 2,67 ммоль) вводили в реакцию с 2-йодпропаном. Неочищенный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 15 до 25% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
МС т/ζ 230,2 (М+1).
Синтез 4-(2-(2-хлор-7-изопропил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-иламино)этил)фенола (с).
По методике примера 128Ь 2,4-дихлор-7-изопропил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (Ь) (0,278 г, 1,21 ммоль) вводили в реакцию с тирамином. Неочищенный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 25 до 75% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
МС т/ζ 331,1 (М+1).
Синтез 4-(2 -(2-(5 -фторпиридин-3 -ил) -7-изопропил-7Н-пирроло [2,3 -ά] пиримидин-4иламино)этил)фенола (ά).
По методике примера 15ά 4-(2-(2-хлор-7-изопропил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4иламино)этил)фенол (20 мг, 0,06 ммоль) вводили в реакцию с 5-фторпиридин-3-илбороновой кислотой. Неочищенный остаток очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (колонка С18, элюирование с
- 30 019872 помощью АЦН-Н2О 0,05% ТФК) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещест ва.
Пример 153.
(К)-4-(2-(2-(Бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол
Синтез (К)-2,6-дихлор-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурина (Ь).
Раствор 5,7-2,6-дихлор-9Н-пурина (400 мг, 2,12 ммоль), (8)-тетрагидрофуран-3-ола (88 мг, 2,5 ммоль) и трифенилфосфина (1,0 г, 3,8 ммоль) в безводном ТГФ (30 мл) при -78°С обрабатывали диизопропилазодикарбоксилатом (856 мг, 4,23 ммоль). Реакционной смеси давали нагреться до КТ и ее перемешивали в течение 16 ч. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и смесь экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 10 до 80% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали белое твердое вещество, которое содержало искомое соединение, загрязненное трифенилфосфоксидом.
МС т/ζ 258,0 (М+1).
Синтез (К)-4-(2-(2-хлор-9-(тетрагидрофуран-3 -ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (с).
По методике примера 128Ь (К)-2,6-дихлор-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин (Ь) вводили в реакцию с тирамином. Неочищенную реакционную смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой.
МС т/ζ 360,1 (М+1).
Синтез иламино)этил)фенола.
По методике (К)-4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6примера 15б (К)-4-(2-(2-хлор-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6иламино)этил)фенол (с) вводили в реакцию с бензо[Ь]тиофен-3-илбороновой кислотой (22,3 мг, 0,125 ммоль). Неочищенный остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
Пример 157.
2-(6-(2-(1Н-Индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3 -ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол
Синтез метил-2-(2,6-дихлор-9Н-пурин-9-ил)пропаноата (Ь).
Смесь 2,6-дихлор-9Н-пурина (5,0 г, 26,5 ммоль), метил-2-бромпропаноата (5,3 г, 31,7 ммоль) и карбоната калия (11,0 г, 79,4 ммоль) в безводном ДМФ (100 мл) нагревали при 100°С в течение 15 ч. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3x150 мл). Органические слои объединяли, промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 10 до 80% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде белого твердого вещества.
МС т/ζ 275,0 (М+1).
Синтез метил-2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-хлор-9Н-пурин-9-ил)пропаноата (с).
Смесь метил-2-(2,6-дихлор-9Н-пурин-9-ил)пропаноата (Ь) (600 мг, 2,2 ммоль), триптамина (420 мг, 2,6 ммоль) и 2-пропанола (30 мл) нагревали при 85°С в герметизированной пробирке в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 10 до 80% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде белого твердого вещества.
МС т/ζ 360,1 (М+1).
- 31 019872
Синтез метил-2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9ил)пропаноата (б).
В пробирку высокого давления объемом 150 мл помещали метил-2-(6-(2-(1Н-индол-3ил)этиламино)-2-хлор-9Н-пурин-9-ил)пропаноат (с) (300 мг, 0,75 ммоль), 5-фторпиридин-3-илбороновую кислоту (159 мг, 1,1 ммоль), тетракис-(трифенилфосфин)палладий(0) (87 мг, 0,075 ммоль), К3РО4 (638 мг, 3,0 ммоль) и безводный диоксан (15 мл). Пробирку высокого давления продували азотом и герметизировали, затем реакционную смесь при перемешивании нагревали при 130°С в течение 6 ч. К охлажденной смеси добавляли воду и смесь экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 10 до 80% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали искомое соединение, загрязненное небольшим количеством трифенилфосфиноксида.
МС т/ζ 460,1 (М+1).
Синтез 2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ола.
Алюмогидрид лития (230 мг, 6,1 ммоль) при 0°С порциями добавляли к раствору метил-2-(6-(2-(1Ниндол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропаноата (282 мг, 0,61 ммоль) в безводном ТГФ (15 мл). При перемешивании реакционной смеси давали нагреться до КТ в течение 2 ч, затем осторожно добавляли воду. Смесь экстрагировали с помощью ЕЮЛс (3x50 мл). Органические фракции объединяли, промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (от 0 до 5% растворителя В в дихлорметане; растворитель В = 2 М раствор аммиака в метаноле) и получали частично очищенный искомый продукт. Его дополнительно очищали с помощью препаративной ТСХ (тонкослойная хроматография) (5% растворителя В в дихлорметане) и получали искомое соединение в виде белого твердого вещества.
Примеры 157К и 1578.
(К)-2-(6-(2-(1Н-Индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол и (8)-2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол
ΝΗ ΝΗ
Р Р (К/8)-(6-(2-(1Н-Индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол разделяли на отдельные энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ на хиральной колонке 21x250 мм ЬиХ-СеПи^ке^ (РНегютепех). Получали раствор рацемата в метаноле концентрации 3 мг/мл и его загружали в колонку порциями по 0,5 мл раствора за одно введение. Колонку элюировали смесью 85/7,5/7,5 гексан/этанол/метанол при скорости потока, равной 20 мл/мин, в течение 25 мин. Пики 1 и 2 наблюдались при 20 мин и 22,5 мин соответственно. Аналитическую хроматографию проводили на хиральной колонке 4,6x100 мм ^иx_Се11и1ο8е-2 (РНегютепех) при элюировании смесью 90/5/5 гексан/этанол/метанол при 1 мл/мин в течение 20 мин. Пики 1 и 2 наблюдались при 17,45 и 18,14 мин соответственно.
Пример 157К.
(К)-2-(6-(2-(1Н-Индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол
ΝΗ
Р
Синтез (К)-№(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-(1-(бензилокси)пропан-2-ил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Нпурин-6-амина (Ь).
С помощью последовательно проводимых методик примера 153Ь (с использованием 2,6-дихлор-9Нпурин и (8)-1-(бензилокси)пропан-2-ол в качестве реагентов), примера 153с (с использованием триптамина в качестве реагента) и примера 153б (с использованием 5-фторпиридин-3-илбороновой кислоты в качестве реагента) получали искомое соединение.
- 32 019872
Синтез (Я)-2-(6-(2-(1Н-индол-3 -ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3 -ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1 ола (с).
Раствор (К.)-Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-(1-(бензилокси)пропан-2-ил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Нпурин-6-амина (Ь) (0,15 г, 0,29 ммоль) в ДХМ (дихлорметан) (10 мл) при -78°С в течение 2 ч обрабатывали с помощью ВС13 (1 М, 2,9 мл, 2,9 ммоль) в ДХМ (10 мл). Добавляли 1н. водный раствор гидроксида натрия и смесь экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (5% МеОН в ДХМ в качестве элюента) и получали искомое соединение.
МС т/ζ 432,2 (М+1).
Пример 1578.
(8)-2-(6-(2-(1Н-Индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол
ΝΗ
Е
По методике примера 157Я, но с использованием (Я)-1-(бензилокси)пропан-2-ола вместо (8)-1-(бензилокси)пропан-2-ола получали искомое соединение.
МС т/ζ 432,2 (М+1).
Пример 161.
4-(2-(6-(5-Фторпиридин-3-ил)-1-изопропил-1Н-имидазо[4,5-с]пиридин-4-иламино)этил)фенол
Синтез 4,6-дихлор-1-изопропил-1Н-имидазо[4,5-с]пиридина (Ь).
По методике примера 15Ь 4,6-дихлор-1Н-имидазо[4,5-с]пиридин (I. Не!. СНет. 1965, 196-201) (0,19 г, 1,0 ммоль) вводили в реакцию с 2-йодпропаном. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 25 до 35% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
МС т/ζ 230,2 (М+1).
Синтез 4-(2-(6-хлор-1-изопропил-1Н-имидазо[4,5-с]пиридин-4-иламино)этил)фенола (с).
Смесь 4,6-дихлор-1-изопропил-1Н-имидазо[4,5-с]пиридина (Ь) (40 мг, 0,17 ммоль), тирамина (120 мг, 0,86 ммоль) и 2-бутанола (2 мл) нагревали микроволновым излучением при 140°С в течение 8 ч. Смесь концентрировали и остаток очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (колонка С18, элюирование с помощью АЦН-Н2О 0,05% ТФК) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
МС т/ζ 331,1 (М+1).
Синтез 4-(2-(6-(5-фторпиридин-3-ил)-1-изопропил-1Н-имидазо[4,5-с]пиридин-4иламино)этил)фенола (ά).
В сосуд для микроволнового реактора объемом 5 мл помещали 4-(2-(6-хлор-1-изопропил-1Нимидазо[4,5-с]пиридин-4-иламино)этил)фенол (с), (17 мг, 0,051 ммоль), 5-фторпиридин-3-илбороновую кислоту (72 мг, 0,51 ммоль) и тетракис-(трифенилфосфин)палладий(0) (36 мг, 0,031 ммоль). К этой смеси добавляли толуол (1 мл), этанол (0,5 мл) и водный раствор карбоната натрия (2 М, 0,5 мл). Сосуд герметизировали и реакционную смесь перемешивали при 140°С при нагревании микроволновым излучением в течение 2 ч. К охлажденной смеси добавляли воду и ее экстрагировали этилацетатом (3x5 мл). Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (колонка С18, элюирование с помощью АЦН-Н2О 0,05% ТФК) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
- 33 019872
Пример 177.
4-(2-(5-(5-Фторпиридин-3-ил)-3-изопропил-3Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин-7-иламино)этил)фенол
Синтез 5,7-дихлор-3-изопропил-3Н-имидазо[4,5-Ь]пиридина (Ь).
По методике примера 15Ь 5,7-дихлор-3Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин (I. Мей. СНет., 2007, 50, 828-834) (0,118 г, 0,624 ммоль) вводили в реакцию с 2-йодпропаном. Неочищенную смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 25 до 35% этилацетата в гексане в качестве элюента) и получали смесь искомого соединения (содержащееся в большом количестве вещество) и изомерного продукта в виде твердого вещества.
МС т/ζ 230,2 (М+1).
Синтез 4-(2-(5-хлор-3-изопропил-3Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин-7-иламино)этил)фенола (с).
Смесь продуктов, содержащую 5,7-дихлор-3-изопропил-3Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин (Ь) (40 мг, 0,17 ммоль), тирамин (120 мг, 0,87 ммоль) и 2-пропанол (2 мл), нагревали в герметизированном сосуде при 140°С в течение 72 ч. Смесь концентрировали и остаток очищали с помощью препаративной ТСХ (1:2 гексаны/этилацетат в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
МС т/ζ 331,1 (М+1).
Синтез 4-(2-(5-(5 -фторпиридин-3 -ил) -3 -изопропил-3Н-имидазо [4,5-Ь] пиридин-7 иламино)этил)фенола (й).
По методике примера 161й 4-(2-(5-хлор-3-изопропил-3Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин-7иламино)этил)фенол (с) (15 мг, 0,047 ммоль) вводили в реакцию с 5-фторпиридин-3-илбороновой кислотой. Неочищенный остаток очищали с помощью препаративной ТСХ (1:1 гексаны/этилацетат в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
Путем повторения методик, описанных в приведенных выше примерах, с использованием подходящих исходных веществ получают следующие соединения формулы I, приведенные в табл. 1.
- 34 019872
Таблица 1
Пример № Структура Физические характеристики 'Н ЯМР и/или МС ЕС50 (%С1»4+) мкМ
1 ΝΗ X ’Н ЯМР (500 МГц, СОСЬУ δ = 9,20 (4, ΙΗ), 8,58 (5, ΙΗ), 8,00-7. 80 (т, 2Η), 7,55-7,38 (т, ЗН), 7,11 (ά, 2Н), 6,72 (4, 2Н), 6,18 (Ьг, ΙΗ), 5,01-4,68 (т, 1Н), 4,02 (Ьг, 2Н), 3,00 (Г, 2Н), 1,68 (4, 6Н), МСВР (ЭУ) т/ζ 430,1698 (М+1) 0,12
2 НО. γΑ. ’Н ЯМР (500 МГц, СОС13): δ = 9,22 (4, ΙΗ), 8,53 (5, ΙΗ), 7,92 (4, ΙΗ), 7,80 (δ, ΙΗ), 7,52-7. 33 (τη, 3Η), 7,13 (4, 2Η), 6,74 (4, 2Η), 6,08 (Ьг, 1 Η), 4,80-4,62 (т, ΙΗ), 4,02 (Ьг, 2Η), 3,01 (1, 2Η), 2,20-1,90 (т, 2Η), 1,77 (4, ЗН), 0,92 (1, ЗН); МСВР (ЭУ) т/ζ 444,1857 (М+1) 0,03
νη
5 У N х
N -Ν 0 Α
но. к Ίι 0,15
X, \ 'ΝΗ
3 ί МСВР (ЭУ) т/ζ 554,2005 (М+1)
''Ν
у и
ч ν
но. к Ί1 1,49
4 δ ν' 'νη МСВР (ЭУ) т/ζ 472,1807 (М+1)
II 8 'Ν^ 'Ν/ V
г X С ζ
- 35 019872
- 36 019872
11 £1 'νη МСВР (ЭУ) т/г 430,1697 (Μ+1) 1,45
но N \ зА/ 0
ό Ν 0 Ν X
X 1,76
кА
12 к ΝΧ ΝΗ Ύ Λ МСВР (ЭУ) т/г 432,1655 (Μ+1)
ιι з / Ή X
Η 2ν ΥΊ 5,75
кА
13 Ъ1Н л Γ\ МСВР (ЭУ) т/г 429,1853 (Μ+1)
3 Г/ Ν к?
но. тЧ 0,17
кА
14 1 N 'ΝΗ Ή Λ МСВР (ЭУ) т/ζ 376,1881 (Μ+1)
А 'Α Ά Λ-
15 но. А N А X Ν Λ 'НЯМР (400 МГц, СО3ОО)б9,57(с1, ΙΗ), 8,85-8,83 (Щ, ΙΗ), 8,59 (я, ΙΗ), 8,16(8, ΙΗ), 7,57 (ς, ΙΗ), 7,13 (ά, 2Η), 6,72(ά, 2Η), 4,984,91 (т, ΙΗ), 3,91 (Ь&, 2Η), 2,98 (ί, 2Η), 1,68 (ά, 6Н); МСВР (ЭУ) т/ζ 375,1928 (Μ+1) 0,19
но. ΥΊ 0,46
кА
16 1 N ''νη ί МСВР (ЭУ) т/ζ 374,1976 (Μ+1)
А 'Α А Λ~
но. ГУ 0,97
кА
17 1 N 'νη ί -Α МСВР (ЭУ) т/ζ 380,1544 (Μ+1)
<У Ν
- 37 019872
18 ο X МСВР (ЭУ) т/ζ 364,1769 (Μ+1) 3,9
19 Χι НН ο ό МСВР (ЭУ) т/ζ 466,1493 (Μ+1) М
20 ·? ΝΗ Ν Ν> МСВР (ЭУ) т/ζ 420,2184 (Μ+1) 7,8
21 Χ1 ΝΗ МСВР (ЭУ) т/ζ 514,2638 (Μ+1) 0,13
23 %/ ин жА> :++ Ν ο МСВР (ЭУ) т/ζ 467,2013 (М+1) 0,019
31 _+0° ΗΙ/++ν νΑα 0¾ МС т/ζ 375,2 (М + 1) 0,66
32 ΗΝ^ ο ЕюАрС-М^М^ 1+ МС т/ζ 447,2 (М + 1) 5,6
- 38 019872
33 пгон 0,27
МС т/г 405,2 (Μ + 0
34 хг МС т/г 393,2 (Μ + 1) 0,16
хАмА Р N 7
35 гг ην''-- 0,34
Ме Λ-Л гуУ N 7 МС т/г 389,2 (Μ + 1)
37 Г¥°н 0,024
ν^γΛ νοχΑνΛχ УХ 7 МС т/г 400,2 (Μ + 1)
38 „~σ° 1,6
ΐΑ> Ο Ν У МС т/г 367,2 (Μ + 1)
40 ™~σ° 0,26
№ ГЗ у Ν / МС т/г 364,2 (Μ + 1)
42 ΖΓ0Η 0,64
αΑ МС т/г 376,2 (Μ + 1)
γΑΑ У ζ
43 ζτ0Η 2,4
νΆ^ν^ν\ Α>ν / МС т/г 376,2 (Μ + 1)
44 1,7
05 СУ у МС т/г 375,2 (Μ + 1)
45 Αγ0Η 0,063
Λα> ме О м у Α > МС т/г 389,2 (Μ + 1)
46 „УГ 0,65
°2 χΑ МС т/г 453,2 (Μ + 1)
Ме Α^Α^ Ν Ν\ 4Ν '
48 У/Он 0,51
нгиАи πΑ όΑ у Ν 1 МС т/г 409,2 (Μ + 1)
- 39 019872
МСт/ζ 393,2 (Μ +
МС т/ζ 378,2 (Μ +
1)
МС т/ζ 380,2 (Μ +
62 \\ . Ν Ν-0 6 МС т/ζ 412,1 (Μ + υ 0,72
70 Ο Η Ν=\ Ν^Ν ΓΊ1 МС т/ζ 367,2 (Μ + υ 2,7
72 |Γ| Η /ΝΛ. / Η ΝγΝ Α 4χΝ МС т/г 375,2 (Μ + 1) 6,3
73 ,Ν-=η Η Ν=\ ΝγΝ Α МС т/ζ 363,2 (Μ + 1) 8,2
76 ν^χνΆ Н,МЧУ Χ-Ν /—/ Ν^< V ο МС т/ζ 396,2 (Μ + υ 6,0
81 λΝΗ Γίν^ν 0 МС т/ζ 422,1 (Μ + 1) 2,7
- 40 019872
82 Η ~^Ν ν ΝΗ2 Н_ум Η'ΝΗ μ χ^ Λ МС т/ζ 420,1 (Μ + 1) 7,9
83 00 7,1
Λν > >γΝχ > ΗΝ--ζ/Α Ν^Ζ МСм/: 430,1 (Μ + О
84 οο 5,4
Λν \=Ν МС/и/ζ 418,1 (Μ + О
88 Ν < Χ^ΑΝ уХ> ' МС т/ζ 446,10 (Μ + η 2,6
89 СХ/ 1,4
/л λ=Ύ ΝΗ Χν -ν Χν4 νΗ2 0 МС т/ζ 396,10 (Μ + 1)
90 νζ ^·ν° МС т/ζ 456,2 (Μ + 1) 3,3
91 зи< ΗΝ-./1 V Ν Ν-Ζ МС т/ζ 398,1 (Μ + η 0,029
Ο
92 Ог /^ν-ч Η Ν=, __5 1 1ι νΑ^ Γ·ζν/ Η ΝγΧ ' МС т/ζ 452,2 (Μ + 1) 7,1
938 Χν τΟ^Ύ^Τ·» Α МС т/ζ 403,1 (Μ + 1) ι,ι
Ο
93К. ηοΧΧ~~'^ ΧΧγ''ο Ύν ά МС т/ζ 403,1 (Μ + 1) 0,52
94 ноХХ^'уХ^у ο МС т/ζ 389,1 (Μ + 1) 0,97
95 Η N=7, 1 /Γ^ν-Ν, 7 1 ηο-^Χ^Χ γ ΥγΝ4/ Νγ>Ν ' МС т/ζ 389,1 (Μ + 1) 2,3
и
- 41 019872
98 ГУ 8,2
Γ ΝΗ
•X
ΗΙΨ МС т/ζ 399,2 (Μ + 1)
XX ΐΑ л Д -Ν Ν
X
99 Χ0Η 7,5
Г Αχ
X МС т/г 389,2 (Μ +
Ν^χιι 4 -Ν Χ> 1)
XX /ΧΝΖ Ν
[1 Ή X
ИЗ χγ0Η МС т/ζ 391,2 (Μ + 0,54
г Ху 1)
НН
Ν'Χл Д -Ν
С А/ /ΑΗ
114 Χν°ν МС т/г 454,1 (Μ + 1,1
Г ί [| 8Ο2ΝΗ2 1)
ΗΝΓ
XX νΑ Χ^ -Ν > Ν
ν· X
118 (Χ0Η 0,45
ΗΝ^ ΑχΧ
.XX Ν'Χ Α Д ΧΝ _-Ν X МС т/ζ 393,2 (Μ + 1)
Τ X
119 Хгон 1,4
ΗΝ^ χχ
Λ Ν > МС т/г 377,2 (Μ + 1)
(ГУ χΧ <Χ Ν Ν
\ X
120 βΧ0Η 1,4
ΗΝ^ Άχχ -Ν > Ν А МС т/г 381,2 (Μ +
Χ-8 Ο
121 X 0,086
к Λ ΝΗ МС т/ζ 414,2 (Μ +
ς Μ ^ΙΑ ν^ν υ
X
122 ΗΟ 0,42
ί Λ ΝΗ МС т/ζ 414,2 (Μ +
Ν' /- Α X 1)
ο νΑ Ν Ν Α
123 'НЯМР (400 МГц, 0,066
НО. ^Χ ДМСО): δ= 9,21(Ьг,
ΙΗ), 8,57 (1, ΙΗ),
4 Λ ΝΗ 8,36 (5, ΙΗ), 8,23 (ά, ΙΗ), 7,70 (ά, ΙΗ), 7,04 (ά, 2Η), 6,66 (ά,
Ν' Α-Ν 2Η), 4,84-4,72 (т,
ΊΑ ΙΗ), 3,67 (ς, 2Η),
ΧΑ 2,99 (а, 3Η), 2,83 (ί,
νΑ X 2Η), 1,56 (ά, 6Н); МС т/ζ 378,2 (Μ + υ
- 42 019872
124 Η0ΥΊ 0,003
ΑΧ ^ΝΗ МС т/ζ 428,2 (Μ +
Α ^ν ν, Α 1)
О Ν
125
Ш ~Τη А Α МС т/г 399,2 (Μ + 1)
Ν^ν
υ Λ
126 ην-ν 5,0
ΑΑ ΝΗ МС т/г 363,2 (Μ +
Ν Τ А 1)
Ν Α
Μ Α
127 ΗΟγ% 0,47
V ^ΝΗ χήτ ΑΑ МС т/г 407,3 (Μ + Ο
Α'ϊ
к Э К
Ν
ί 28 ΗΟγ% 'Η ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 9,47 (з, 0,019
^ΝΗ ΙΗ), 8,71 (з, ΙΗ), 8,67 (3, ΙΗ), 8,32(3, ΙΗ), 8,04 (<, ΙΗ), 7,10(0, 2Η), 6,69 (ά, 2Η), 4,91-4,81 (т,
μΑν Α
С1гг ΙΗ), 3,80-3,70 (πι, 2Η), 2,86 ((, 2Η),
ЧХ 1,58 (ά, 6Н); МС т/г 409,2 (Μ + 1)
129 η0Άί 0,12
V 'ΝΗ МС т/ζ 443,2 (Μ +
τ нА λ Α / 1)
Р 'гАг ΑΑ
ζ1 Ν Λ
ВО ΗΝ·—. ο1 ^ΝΗ 'Η ЯМР (400 МГц, ДМСО): й = 10,82 (з, ΙΗ), 9,74 (з, ΙΗ), 9,10 (в, ΙΗ), 8,99 (з, ΙΗ), 8,32 (з, ΙΗ), 8,13 (1, ΙΗ), 7,65 (ά, ΙΗ), 7,32 (0, ΙΗ), 7,22 (3, ΙΗ), 7,06 (ί, 0,001
А ΙΗ), 6,99 (1, ΙΗ),
1Ι> 4,72-4,60 (т, ΙΗ),
Α ' Ν Ν 3,96-3,85 (т, 2Η),
к 1] Α Α 3,08 (1, 2Η), 2,08- 1,88 (т, 2Η), 1,58 (4, ЗН), 0,77 (1, ЗН); МС т/ζ 437,2 (Μ + 1)
- 43 019872
131 ΗΝ—, Α ΝΗ гАгЛ Α\ 1НЯМР(400 МГц, ДМСО); δ = 10,83 (δ, ΙΗ), 9,40 (5, ΙΗ), 8,97(5, ΙΗ), 8,76 (я, ΙΗ), 8,35(8, ΙΗ), 8,18 (1,1 Η), 7,62 (4, ΙΗ), 7,33 <ά, ΙΗ), 7,23 (з, ΙΗ), 7,06 (ί, ΙΗ), 6,97 (1, ΙΗ), 4,72-4,60 (га, ΙΗ), 3,96-3,82 (т, 2Η), 3,10 (ΐ, 2Η), 2,53 (5, 3Η), 2,09-1,89 (τη, 2Η), 1,58(6, 3Η), 0,77 (ΐ, ЗН); МС т/г 426,2 (Μ + 1) 0,004
132К Λ Ηί/'-Λ+/ Αχ ΑΑ МС т/г 430,2 (Μ + I) 0,001
1328 9 Ε ΝΗ нЮ'—·^ А-д УА МС т/г 430,2 (Μ + 1) 0,002
132 ΗΝ—-, А ΝΗ Ал Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 10,83 (з, ΙΗ), 9,42(5, ΙΗ), 8,66(8, ΙΗ), 8,41 (6, ΙΗ), 8,31 ($, ΙΗ), 8,09 (ί, ΙΗ), 7,64 (ά, ΙΗ), 7,34 (ά, ΙΗ), 7,22(5, ΙΗ), 7,07(1, ΙΗ), 6,97(1, ΙΗ), 4,68-4,60 (т, ΙΗ), 3,92-3,84 (т, 2Η), 3,08 (ΐ, 2Η), 2,08- 1,90 (т, 2Η), 1,58 (ά, 3Η), 0,77 (ΐ, ЗН); МС т/г 430,2 (Μ + 1) 0,003
131К 9 Ь ΝΗ н|/'-Х νΑ АΑ МС т/ζ 426,2 (Μ + Ο 0,003
1318 9 ь ,ΝΗ ΗΝ'^Χ^/ νΑ^ . Α МС т/г 426,2 (Μ + Ο 0,003
133 Ύλ ΉΗ Ν X χ X. К Αα 0 МС т/г 414,2 (Μ + 1) 0,18
- 44 019872
134 НО- Ρ-, Χιι 'Η ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 9,44 (5, ΙΗ), 9,21 (5, ΙΗ), 8,69 (ά, ΙΗ), 8,56 ((, ΙΗ), 8,47 (4, ΙΗ), 8,14 (8, ΙΗ), 7,09 (ά, 2Η), 6,69 (ά, 2Η), 5,17-5,09 (т, ΙΗ), 3,80-3,75 (т, 2Η), 2,87 (ί, 2Η), 1,48 (ά, 6Н); МС т/ζ 393,2 (Μ + 1) 0,20
А Α Ν Λ
ΝΗ V
135 но\ 0,38
,-х^ и ί). ί ΝΗ МС т/ζ 430,2 (Μ + υ
А—
к--. А. 7
_/ νΑν ,Ν
А-
137 НО- ΧΊ1
кА кн МС т/ζ 421,1 (Μ +
Р-. Ас -Ν Α 1)
М
138 НО- XV 0,40
кА кн МС т/ζ 389,2 (Μ +
мА νΑγ V -Ν 4> 'Ν 1)
М У-
139 НО ΥΧ 1,3
и ''кн 1 МС т/ζ 400,2 (Μ +
А Α 1)
ν^Αι Ν
АХ X
140 но.. Ά 0,091
кА кн 1 МС т/ζ 400,2 (Μ +
Ν'^Χγ' νΑ V -Ν > 'Ν υ
λ-
~®Ν
141 но... ο 'Η ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 9,42 (8, ΙΗ), 8,63 (4, ΙΗ), 0,16
ЧА ^кн νΑτ ιι -. X 8,42 (4, ΙΗ), 7,79 (1, ΙΗ), 7,35 (ά, ΙΗ), 7,09 (4, 2Η), 6,70 (4, 2Η), 6,61 (4, ΙΗ), 5,08-5,00 (т, ΙΗ),
А Ά ~Ν 3,76-3,70 (т, 2Η),
ζ / Α 2,87 (ΐ, 2Η), 1,47 (4,
N 6Н); МС т/ζ 392,2 (Μ + 1)
143 но.. хе 4,3
кА кн МС т/ζ 400,2 (Μ +
Δ Ν -Ν Ν I)
1 Д N
- 45 019872
144 ΗΟΧΧ 'νη α5α> νγν'Ν АХ А МС т/ζ 389,2 (Μ + 1) 0,16
145 ζ^ζΑ ДА /—ζ ζΑ О /=Сг Α Α% I МС т/ζ 425,2 (Μ + I) 5,4
146 Μ Χη и л МС т/ζ 409,1 (Μ + О 0,24
147 ^ΝΗ νΛα Д МС т/ζ 393,2 (Μ + 1) 0,092
148 ΗΝ·—. ο\ Γ ΝΗ С1 I ν %α Ν^νΑΑΑ Μ Λ МС т/ζ 432,2 (Μ + О 0,75
149 ΗΝ—, ό 1 Γ ΝΗ чЛл ν-^Α'ΑΑ Μ Α МС т/ζ 416,2 (Μ + η 0,52
150 “Α ΝΗ чЧа νχΑχΑ V Λ МС т/ζ 389,2 (Μ + 1) 0,057
151 уд Ду” X МС т/ζ 444,1 (Μ + О 0,17
152 “А ^ΝΗ АклД АД'м а 5 0 МС т/ζ 458,2 (Μ + 1) 0,35
- 46 019872
153 ΉΗ ο/Α СГ ΙΗ ЯМР (400 МГц, С0300): 6 = 9,14(3, ΙΗ), 8,55 <5, ΙΗ), 8,33 ($, ΙΗ), 7,96(4, ΙΗ), 7,44 (ι, ΙΗ), 7,15 (4, 2Η), 6,73 (ά, 2Η), 5,46-5,43 (τη, ΙΗ), 4,27-3,94 (т, 6Η), 2,98 (ΐ, 2Η), 2,73-2,64 (т, ΙΗ), 2,46-2,39 (т, 1Н); МС т/ζ 458,2 (Μ + 1) 0,22
157 γ-ΝΗ /Ъ ΗΝ Ν<νΝ> \Α Α Ν он Ή ЯМР (400 МГц, СОзОЭ): δ = 9,40 (з, ΙΗ), 8,53-8,48(т, 2Η), 8,23 (з, ΙΗ), 7,65 (ά, ΙΗ), 7,31 (4, ΙΗ), 7,11 (8, ΙΗ), 7,08-7,04 (т, 1 Η), 7,01-6,97 (τη, ΙΗ), 4,08-4,03 (т, ЗН), 3,94(44, ΙΗ), 3,353,30 (т, ΙΗ), 3,19(1, 2Η), 1,68 (4, ЗН); МС т/ζ 432,2 (Μ + 1) 0,005
Ι57Κ Η со . Α X/ Χ-Οη ΗΝ—/7 ΐ №/Ν Α МС т/ζ 432,2 (Μ + 0- 0,008
1578 Η οο , Γ/ οη ν=/ν МС т/ζ 432,2 (Μ + υ 0,003
158 /Ъ ΗΝ γιι·ι·'ιν'·1 и Φ МС т/г 444,2 (Μ + 1) 0,012
159 χγ0Η νΑχ γΥ αΑν> ΑΧ Α МС т/ζ 415,2 (Μ + 1) 0,59
160 σ“ νΑ-Ν /=\ Α Α > < /ΑΧ ν+ο X Ν^ / МС т/ζ 415,2 (Μ + 1) 1,9
161 -ΧΓ ΗΝ α5ο ΡΊΩί Α 'НЯМР (400 МГц, ДМСО): 5 = 9,11 (з, 1 Н), 8,64 (δ, 1Н), 8,51 (8, 1Н), 8,30(4, 1Н), 7,74 (з, 1Н), 7,09 (ά, 2Н), 6,69 (4, 2Н), 4,88-4,76 (т, ΙΗ), 3,88-3,78 (т, 2Н), 2,88 (ΐ, 2Н), 1,56 (4, 6Н); МС т/ζ 392,2 (Μ + 1) 0,17
162 χτ°Η ΗΝ'''·-'1'νΑ^ν ме Η 1 > μ Αΐ χ гг / МС т/г 392,2 (М+ 1) 0,14
- 47 019872
166 Ν ύΥ N 7 МС т/ζ 378,1 (Μ + 1) 7,5
167 Υ» χΥ Ρ МС т/ζ 409,2 (Μ + η 0,29
169 ΗΝ—, Υ\ ΝΗ Υ- \ Ν 7 МС т/г 446,2 (Μ + 1) 0,044
170 -—ΝΗ γ ΗΝ υ >. N 7 МСт/ζ 416,2 (Μ + η 0,006
172 МеО Ρ /Υ^ΝΗ νΑ-λ> ’τ/' Λ N ζ МС т/г 446,2 (Μ + Ο 0,42
173 ΗΝ—. ιΛβ ργΛ γ N 7 МС т/ζ 414,1 (Μ + 1) 0,012
174 -Ν^-ΟΗ ΗΝ'^^ΥΥ νΑ-Ν 4> чсС γ N 7 МС т/г 394,2 (Μ + Ο 2,2
175 ΝΗ ^ΥΥν ΗΝ^ ϊυό Ύ ν Ν 7 МС/и/г417,2 (Μ + Ο 0,42
176 Υ. / ΥΎχλ ί Ν 1 Η МС т/ζ 531,3 (Μ + 1) Ы
177 ™-σ“ Ε /03 ΟΝ γ Υ 7 Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 9,18 (δ, ΙΗ), 9,15 (8, ΙΗ), 8,57 (ά, ΙΗ), 8,29 (ά, ΙΗ), 8,26 (8, ΙΗ), 7,11 (δ, 2Η), 7,01 (5, ΙΗ), 6,79 (ί, ΙΗ), 6,95 (δ, 2Η), 4,924,84 (т, 1 Η), 3,723,62 (т, 2Η), 2,83 (ί, 2Η), 1,56 (δ, 6Н); МС т/ζ 392,2 (Μ + 1) 0,14
- 48 019872
178 ΗΝ^. Ζ Р ]НЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 10,83 (5, ΙΗ), 8,67(1, ΙΗ), 8,37 (8, ΙΗ), 8,15 (ά, ΙΗ), 7,71 (ά, ΙΗ), 7,57 (ά, ΙΗ), 7,33 (а, ΙΗ), 7,20 (8, ΙΗ), 7,06(1, ΙΗ), 6,96 (ί, ΙΗ), 4,60-4,48 (т, ΙΗ), 3,86-3,76 (т, 2Η), 3,06 (1, 2Η), 2,96 (5, 3Η), 2,051,85 (т, 2Η), 1,56 (ά, ЗН), 0,76 (ί, ЗН); МС т/ζ 415,2 (Μ + 1) 0,003
180 но л5г> ΖΝ Ν^Ν н >- МС т/ζ 392,2 (Μ + 1) 0,13
181 но Ух» Ζν Ν Ν' и л- Рг МС т/ζ 406,2 (Μ + 1) 2,5
182 ОН й ί . ΝΗ ΗΝ^’ху/χ Ν ζ МС т/ζ 432,2 (Μ + 1) 5,1
183 ρ к ΝΗ ΗΝ^'^'7 Ν^Υ\ •χΥΑ Ζ ’н ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ= 10,84 (§, 1Н), 9,37 (з, ΙΗ), 8,52 (&, 1Н), 8,50(5, 1Н), 8,29 (5, ΙΗ), 8,01 (1, 1Н), 7,66 (а, 1Н), 7,34 (ά, 1Н), 7,23 (т, 1Н), 7,07 (1, 1Н), 6,98 (ί, 1Н), 4,89-4,83 (т, 1Н), 3,95-3,85 (т, 2Н), 3,09 (1,2Н), 2,41 (8, ЗН), 1,58 (а, 6Н); МС т/ζ 412,2 (М + 1) 0,01
184 ρ ί. ΝΗ νΑ-Λ л X > /'ν'ν^ν_ №<, /— МС т/г 401,2 (М + 1) 0,008
185 ίΧ^Μβ Λ χΖ?νη νΑ-λ 'ХуХ X Ν Ζ МС т/ζ 430,2 (М + 1) 0,024
186 9 X ΝΗ ΗΝ^Ζ=^ ΝΛγ-Ν V\ МС т/г 430,2 (М + 0 0,007
- 49 019872
187 9 к ΝΗ νΧ-ν ΜθχΧΝΧ Μ X 'Η ЯМР (400 МГц, ДМСО): θ = 10,84 (5, ΙΗ), 9,38(5, ΙΗ), 8,49 (т, ΙΗ), 8,47 (δ, ΙΗ), 8,10(1, ΙΗ), 7,67 (ά, ΙΗ), 7,35 (ά, ΙΗ), 7,22 (т, ΙΗ), 7,07 (1, ΙΗ), 6,98 (1, ΙΗ), 5,85-5,78 (т, ΙΗ), 5,17 (1, 2Η), 5,03 (1, 2Η), 3,843,84 (т, 2Η), 3,09 (1, 2Η), 2,40(5, ЗН); МС т/ζ 426,2 (Μ + 1) 0,034
188 ·ί к ΝΗ νΑχ χΑ Ν 7 МС т/ζ 434,2 (Μ + 0 0,005
189 Ме 9 к ΝΗ н|.у.,А/ νΑχ XX Ν 7 'Η ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 10,65 (5, ΙΗ), 9,42 (5, ΙΗ), 8,68 (т, ΙΗ), 8,41 (ά, ΙΗ), 8,34 (5, ΙΗ), 8,08 (ί, ΙΗ), 7,53 (δ, ΙΗ), 7,12 (т, 2Η), 6,81 (ά, ΙΗ), 4,904,81 (т, ΙΗ), 3,93ЗЛО (т, 2Η), 3,05 (1, 2Η), 2,38 (5, 3Η), 1,58 (δ, 6Н); МС т/ζ 432,0 (Μ + 1) 0,026
190 9 9 ΝΗ 1 μ Ме Ν ΐ9> XX Ν 7 ‘Η ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 10,71 (5, ΙΗ), 9,42 (5, ΙΗ), 8,67 (δ, ΙΗ), 8,38 (δδ, ΙΗ), 8,32 (δ, ΙΗ), 8,05 (1, ΙΗ), 7,55 (δ, ΙΗ), 7,21 (δ, ΙΗ), 6,98 (1, ΙΗ), 6,93 (ί, ΙΗ), 4,924,83 (т, ΙΗ), 3,783,71 (т, 2Η), 2,99 (1, 2Η), 2,33(5, 3Η), 1,59(4, 6Н); МС т/ζ 430,2 (Μ + 1) 0,005
195 С ΝΗ ΗΝ^-^^7 Ν'4-’Α χ-\ ВЭЖХ-МС рассчитано МС т/ζ 434,2 (Μ + 1) 0,003
196 χ νΧ-ν χχ МС т/ζ 434,2 (Μ + 1) 0,002
197 мЧх ΪΓ ΝΗ νΑ-ι XX ‘Η ЯМР (400 МГц, ДМСО): 5= 10,79 (5, ΙΗ), 9,37 (δ, ΙΗ), 8,64 (δ, ΙΗ), 8,39 (δ, ΙΗ), 8,31 (5, ΙΗ), 8,06 (1, ΙΗ), 7,15 (5, ΙΗ), 7,13 (δ, ΙΗ), 6,90(1, ΙΗ), 6,69 (δ, ΙΗ), 4,90-4,83 (т, ΙΗ), 3,83-3,87 (т, 2Η), 3,24 (1, 2Η), 2,65(5, 3Η), 1,57(δ, 6Н); МС т/ζ 430,2 (Μ + 1) 0,011
- 50 019872
198 У к N А ^Скон МС т/ζ 429,1 (М + 1) 1,1
199 ΗΝ X Υί Ζ^* у? νΑ'Υ’ν н и МС т/г 399,2 (М + 1) 1,6
200 Йу/Тон ΝγΝ МС т/г 423,2 (М + 1) 0,001
А
ρΑχΝ
201 Η0ΥΊ
кА ^''ΝΗ
/ή Ν·Ά ΪΙ —-Ν У N к
С О
202 ΗΟΎ0
кА ^ΝΗ
д и N л
$АГ С
203 НОАА
кА ^ΝΗ
V -Ν А X
Соединения, являющиеся аффинными зондами, относящиеся к соединениям, предлагаемым в настоящем изобретении, также можно получить, как описано в следующих примерах.
Пример 210.
3-(2-(2-(Бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-5-ил-6-(5((3а8,48,6аК)-2-оксогексагидро-1Н-тиено[3,4-б]имидазол-4-ил)пентанамидо)гексаноат
Синтез 3-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-5-ил-6аминогексаноата (е).
К раствору 3-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-5-ил6-(трет-бутоксикарбониламино)гексаноата (а) (80 мг, 0,117 ммоль) в ДХМ (20 мл) добавляли ТФК (5 мл).
- 51 019872
Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 3 ч. Ее концентрировали. Добавляли водный раствор карбоната натрия и смесь экстрагировали с помощью ДХМ. Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали и получали продукт в виде масла.
МС т/ζ 582,2 (М+1).
Синтез 3-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-5-ил-6-(5((3а8,48,6аК)-2-оксогексагидро-1Н-тиено[3,4-й]имидазол-4-ил)пентанамидо)гексаноата.
К раствору (+)-биотина (35 мг, 0,14 ммоль) и Εΐ3Ν (36 мг, 0,35 ммоль) в ДМФ (1 мл) добавляли НАТи (90 мг, 0,24 ммоль). Смесь перемешивали в течение 10 мин и затем добавляли к раствору (3-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-5-ил-6аминогексаноата (Ь) (68 мг, 0,12 ммоль) в ДМФ (1 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ и затем концентрировали. Остаток очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой (колонка С18, элюирование с помощью МеОН-Н2О 0,05% ТФК) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества. Соединение примера 210 характеризуется значением ЕС50, полученным при исследовании содержания клеток СЭ34'. равным 2,1 мкМ.
Пример 211.
3-(2-(2-(Бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-5-ил-6-(третбутоксикарбониламино)гексаноат
Синтез 2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-6-хлор-9-изопропил-9Н-пурина (Ь).
По методике примера 15й 6-хлор-2-йод-9-изопропил-9Н-пурин (3,31 г, 0,0103 моль) вводили в реакцию с бензо[Ь]тиофен-3-илбороновой кислотой. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 20 до 50% этилацетата в гексане) и получали искомое соединение в виде твердого вещества.
МС т/ζ 329,0 (М+1).
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6): δ 9,15 (й, 1Н), 8,85 (8, 2Н), 8,17 (й, 1Н), 7,62 (ΐ, 1Н), 7,53 (ΐ, 1Н), 5,06 (т, 1Н), 1,71 (й, 6Н).
Синтез 3-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-5-ола (с).
По методике примера 15е 2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-6-хлор-9-изопропил-9Н-пурин (Ь) (80 мг, 0,243 ммоль) вводили в реакцию с серотонином. Реакционную смесь концентрировали, затем добавляли водный раствор бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом. Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 0 до 5% МеОН в ДХМ в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
МС т/ζ 469,2 (М+1).
Синтез 3-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-5-ил-6(трет-бутоксикарбониламино)гексаноата (й).
К раствору 3 -(2-(2-(бензо [Ь]тиофен-3 -ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-5 -ола (55,5 мг, 0,119 ммоль) и 6-(трет-бутоксикарбониламино)гексановой кислоты (30 мг, 0,113 ммоль) в ДМФ (3 мл ) добавляли Εΐ3Ν (24 мг, 0,237 ммоль) и НАТИ (90 мг, 0,237 ммоль). Смесь перемешивали при КТ в течение 16 ч и затем концентрировали. Добавляли воду и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Органические фракции объединяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (от 0 до 5% МеОН в ДХМ в качестве элюента) и получали искомое соединение в виде почти белого твердого вещества.
Путем повторения методик, описанных в приведенных выше примерах, с использованием подходящих исходных веществ получают следующие аффинные зонды, приведенные в табл. 2.
- 52 019872
Таблица 2
Пример № Структура Физические характеристики 'Н ЯМР и/или МС
ΝγΧ ΗΝ. МСВР (ЭУ) т/ζ
26 /Ч 695,2585
х (М + 1)
/ 0 ? ”Хн Х\н нныЧ о
29 ΗΝ. δ °Ί зХГ N ν-Χ-ν ΗΝ. IX МСВР (ЭУ) т/ζ 700,3027 (Μ + 1)
209 /X, <4_ΝΗ Х-Х МС т/ζ 760,4 (Μ+ 1)
210 СХ ΗΝ^° ™ X Х--хХХ X Η ΙΗ ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 10,95 (5, ΙΗ), 9,17 (ά, ΙΗ), 8,54 (5, ΙΗ), 8,34(3, ΙΗ), 8,06(4, ΙΗ), 7,94 (Ьз, ΙΗ), 7,77 (1, ΙΗ), 7,397,48 (ιη, 2Η), 7,28-7,34 (т, ЗН), 6,79(44, ΙΗ), 6,42 (Ьз, ΙΗ), 4,85-4,93 (т, ΙΗ), 4,24-4,28 (т, ΙΗ), 4,07-4,10 (т, ΙΗ), 3,88-3,92 (т, 2Η), 3,013,11 (т, 5Η), 2,77(44, ΙΗ), 2,53-2,57 (т, ΙΗ), 2,00 (1, 2Η), 1,63 (4, 6Η), 1,23-1,60 (т, 12Н); МС т/ζ 808,3 (Μ + 1).
- 53 019872
Исследования.
Для оценки активности соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, содействующих размножению гематопоэтических стволовых клеток (ГСК), используют описанные ниже исследования.
Первичные гематопоэтические стволовые клетки взрослого человека СБ34+ выращивают и разделяют для выявления соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, которые способствуют размножению ГСК. Клетки анализируют для установления наличия необходимого фенотипа (экспрессии СБ34). Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, стимулируют размножение ГСК зависимым от дозы образом.
Культуральная среда.
Среда 8ΐет8ρаη 8ЕЕМ представляет собой бессывороточную среду (81етСе11 '^οΗηοΙο^δ, νηηοοιιуег. ВС), к которой добавляют следующие рекомбинантные цитокины человека: тромбопоэтин, интерлейкин-6, лиганд Ε1ΐ-3 и фактор стволовых клеток (все выпускающиеся фирмой Κ&Ό 8у8ΐет8, Μίηικαρο118, ΜΝ), все при конечной концентрации, равной 50 нг/мл, и к ней добавляют разбавитель (ДМСО) или соединение, предлагаемое в настоящем изобретении.
Культура клеток человека.
Свежие, подвергнутые лейкофорезу с использованием С-С8Е мобилизованные клетки периферической крови человека, взятые у здоровых доноров, клетки СБ34+ костного мозга взрослого человека и подвергнутые криоконсервации клетки СБ34+ крови пупочного канатика человека приобретают у фирмы А11Се118 (Вегке1еу, СА). Клетки человека СБ34+ обогащают подвергнутыми лейкофорезу с использованием С-С8Е мобилизованными клетками периферической крови с помощью магнитного сепаратора (МАС8, Э|гес1 СБ34+ Ρτο^ηίΐοτ Се11 Ι8ο1;·ι1ίοη Κίΐ, МШет/ Вю1ес, Вегщ8е11 С1абЬасй, бетиту) и подвергают криоконсервации. Чистота клеток СБ34, проверенная с помощью проточной цитометрии, превышает 90%. После оттаивания жизнеспособность клеток, исследованная путем отбора с помощью красителя трипановый синий, превышает 70%. Оттаявшие клетки центрифугируют и повторно суспендируют в среде 8ΐет8ρаη и затем разделяют на аликвоты для немедленного выращивания. При концентрации, равной 104 клеток/мл, клетки помещают в 384-луночный планшет (Стешет Вю-Оне, Μοη^οе. ΝοΠίι Саго1та) вместе с 50 мкл среды/лунка и выращивают в течение 7 дней. Каждые 7 дней клетки переносят в планшеты с более крупными лунками и добавляют свежую среду, так чтобы плотность клеток составляла от 104 до 5-105 клеток/мл. Клетки выращивают при 37°С в 5% СО2. Для трансплантации клетки выращивают в матрацах площадью 75 см2 и затем клетки трансплантируют мышам. При концентрации, равной 1 мкМ, 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол (соединение 1, табл. 1; пример 1), 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-втор-бутил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол (соединение 2, табл. 1) и №(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин (соединение 9, табл. 1) через 21 день все приводят к увеличению количества клеток СБ34+ СБ45КА-, полученных из 1000 тРВ СБ34+ ГСК, превышающему 10-кратное по сравнению с выращиванием в чистом разбавителе.
- 54 019872
Для соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, исследована зависимость от дозы (от 1 нМ до 10 мкМ) с целью определения эффективной концентрации, при которой необходимому воздействию подвергаются 50% клеток (ЕС50). Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, приводят к увеличению полного количества и/или содержания клеток СЭ34'. характеризующемуся значением ЕС50, равным менее 10 мкМ. Результаты приведены в табл. 1 и представленных выше примерах.
Определение количества колониеобразующих единиц в культуре клеток (КОЕ-К).
Мононуклеарные клетки, содержащие в 1 мл по 1000 клеток 5-недельной культуры крови пупочного канатика и 3-недельной культуры тРВ и по 100 клеток 3-недельной культуры ПК -3 и 1-недельной культуры тРВ, добавляют к бессывороточной метилцеллюлозной среде Ме11юСи11 8Е Н4436, содержащей метилцеллюлозу в среде Дульбекко в модифицикации Искова, бычий сывороточный альбумин,
2-меркаптоэтанол, Ь-глутамин, трансферрин человека (насыщенный железом), рекомбинантный инсулин человека и рекомбинантные цитокины человека: фактор стволовых клеток, СМ-С8Е, 1Ь-3, 1Ь-6, С-С8Е и эритропоэтин (81етСе11 ТесЬпо1од1е§). К МеШоСиН добавляют следующие рекомбинантные цитокины человека: тромбопоэтин и лиганд Е11-3 (Κ&Ό 8у51ет5), все при конечной концентрации, равной 50 нг/мл. После перемешивания смесь разделяют на 3 порции и помещают в чашки диаметром 35 мм. Чашки инкубируют в течение 14 дней при 37°С в атмосфере увлажненного воздуха, содержащего 5% СО2. В конце инкубационного периода количество миелоидных и эритроидных колоний подсчитывают с помощью инвертированного микроскопа при увеличении 40 х. Количество КОЕ-К в размножившейся культуре рассчитывают следующим образом: количество указанных подсчитанных колоний в трех чашках х полное количество мононуклеарных клеток/исходное количество клеток. До конца первой недели полное количество мононуклеарных клеток определяют умножением количества клеток, содержащихся в 1 мл, на объем культуры в миллилитрах. Начиная от конца первой недели и после этого также учитывают количество пассажей. Культуры, обработанные 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин6-иламино)этил)фенолом (соединение 1, табл. 1; пример 1), при концентрации, равной 1 мкМ, через 21 день приводят к увеличению количества колониеобразующих клеток в культуре клеток тРВ СЭ34', превышающему 10-кратное по сравнению с выращиванием в разбавителе. При использовании 1х103 ПК клетки ί.Ό34', обработанные 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6- иламино)этил)фенолом (соединение 1, табл. 1; пример 1) при концентрации, равной 1 мкМ, взятые из 5недельной культуры, приводят к увеличению количества колониеобразующих единиц, превышающего 10-кратное по сравнению с контролем. Клетки, обработанные 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенолом (соединение 1, табл. 1; пример 1), приводят к образованию большего количества смешанных колоний, образовавшихся вследствие более чем 10-кратного увеличения количества колоний эритроцитов, более чем 10-кратного увеличения количества колоний промиелоцитов/макрофагов и более чем 10-кратного увеличения количества колоний макрофагов. Клетки, обработанные 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенолом (соединение 1, табл. 1; пример 1) также приводят к образованию смешанных колоний промиелоцитов/эритроцитов/моноцитов/макрофагов, которые не обнаруживаются в колониях, образовавшихся из необработанных культур.
Исследования клеток, образующих область булыжной мостовой (САЕС).
Стромальные клетки ЕВМЭ-1 помещают в матрацы площадью 25 см2 и трипсинизируют после слияния на 1/3. Поскольку эта нетрансформированная линия клеток стареет и поэтому постепенно теряет способность поддерживать рост САЕС на поздних стадиях, после пассажа 20 используют все питающие клетки. Для поддержки роста САЕС в 96-луночные планшеты высевают по 1 х 103 стромальных клеток на лунку. Культуры выдерживают в среде Исков, к которой добавляют 10% фетальной телячьей сыворотки (ФТС), 2,5% сыворотки лошади (СЛ), 1% Ь-глутамина, 1% смеси пенициллин-стрептомицин и 1х 10-5 М гидрокортизона при 37°С в атмосфере увлажненного воздуха, содержащего 5% СО2. После слияния слоев стромальных клеток их инокулируют с помощью СЭ34' ГСК, которые выращивали в течение 5 дней вместе с разбавителем или соединением, предлагаемым в настоящем изобретении. Добавляют мононкулеарные клетки в 8 серийных разведениях 1:3 (начиная с 25000 клеток/лунка) с использованием 10 лунок для каждой дозы клеток. На неделе 4 выявляют разведения, при использовании которых имеются лунки, содержащие по меньшей мере одну темную фазу гематопоэтического клона (область, образующую булыжную мостовую), содержащего не менее 5 клеток под слоем стромальных клеток. При использовании концентрации, равной 1 мкМ, 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6иламино)этил)фенол (соединение 1, табл. 1; пример 1) приводит к увеличению количества образующих область булыжной мостовой клеток, полученных из тРВ СЭ34' ГСК после 5 дней выращивания, превышающему 2-кратное по сравнению с контрольными культурами, обработанными только с помощью ДМСО.
Исследование поверхностных антигенов.
Клетки промывают окрашивающими средами (сбалансированный солевой раствор Хенкса, содержащий ФБС (фетальная бычья сыворотка) (2%) и ЭДТК (2 мМ)) и окрашивают (при 4°С в течение 30 мин) указанными первичными конъюгированными антителами. Клетки промывают описанным выше
- 55 019872 буфером и исследуют с помощью проточного цитометра ΒΌ Ь8В II (Вес1оп О|ск|п5оп, 8ап 1о5С, СА). Клетки пассируют со скоростью до 1000 клеток/с с использованием в качестве источников возбуждения пучков аргонного лазера с длиной волны 488 нм и Не№ лазера с длиной волны 633 нм Не№. Интенсивность испускания для 104 клеток измеряют с использованием логарифмического усиления и анализируют с помощью программного обеспечения Р1о\\'1о (Тгее81аг 1пс. АкЫапй, ОК). Клетки, окрашенные первичными конъюгированными изотипами контрольных антител, используют для определения фоновой флуоресценции.
Определение содержания субпопуляций клеток СЭ34'.
Содержание субпопуляций клеток СЭ34' определяют с помощью аликвот культур клеток. Клетки окрашивают АРС антителами к ТЬ.у1.1, РегСР антителами к СЭ34, РЕСу7 антителами к СО45РА, МТС антителами к СЭ38 и РЕ антителами к СЭ133 для определения содержания клеток СО34'Т11у1.1', СП34ЮТ45КА-, СО34+СП38-, СП133ЮТ38- и СП34+СП133+. Антитела к СП34, СП38, ТЬу1.1 и СО45КА приобретают у фирмы Вес1оп Оюкиъоп и антитела к СЭ133 приобретают у фирмы М111епу1 Вю1ес. Результаты исследования этих субпопуляций с помощью РАС8 приведены в процентах от всей популяции. Абсолютное количество клеток каждой популяции в культуре рассчитывают путем умножения полного количества клеток на выраженное в процентах содержание каждой популяции. При использовании клеток ПК СЭ34' в качестве исходных через 5 недель после обработки с помощью 1 мкМ 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (соединение 1, табл. 1; пример 1) полное количество клеток в культурах увеличилось в среднем более чем в 2 раза по сравнению с контрольными культурами. Важнее, что клетки, выращенные с использованием 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (соединение 1, табл. 1; пример 1), содержали более 50% клеток ί.Ό34', тогда как клетки, выращенные с использованием разбавителя, содержали <10% этих клеток, что соответствовало превышающему 10-кратное размножению клеток СЭ34' по сравнению с контролем и превышающему 10000-кратное размножению клеток по сравнению с исходными клетками. Кроме того, наличие 1 мкМ 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил9Н-пурин-6-иламино)этил)фенола (соединение 1, табл. 1; пример 1) приводило к увеличению и содержания, и полного количества субпопуляций ί.Ό34', СО34'СО45РА-, ί'Ό34'ί'Ό38-, ί.Ό133'ί.Ό38- и ί.Ό34'ί.Ό133', что для каждой субпопуляции приводило к суммарному увеличению количества, превышающему 30-кратное.
Трансплантация клеток человека СЭ34' мышам ΝΟΟ.ί’ΒΠ-ΡιΓώ;^''1 (ΝΟΩ/δΡΙΩ).
Для оценки способности к репопулированию ш у1уо клеток СЭ34' и их культивированного потомства некультивированные клетки СЭ34' или потомства культивированных клеток СЭ34' через 4 дня (тРВ) или 21 день (СВ ПК) с разбавителем или исследуемым соединением вводят путем внутривенной инъекции в ретроорбитальную область получившим сублетальную дозу облучения (3,0 Гр) 8-10недельным мышам ΝΟΌ/δΟΌ (для исследований с помощью тРВ ГСК) или ΝΟΌ/δΟΌ^-/- (для исследований с помощью ПК ГСК). Для наблюдения за приживлением трансплантата еженедельно берут пробы крови из ретроорбитальной области и ее обрабатывают раствором для лизиса эритроцитов (О|адеп, Уа1епс1а, СА) для удаления эритроцитов, промывают окрашивающими средами и исследуют с помощью проточной цитометрии. Приживление трансплантата исследуют путем детектирования в крови антител к клеткам ί.Ό45' человека. Мышей умерщвляют через 10 недель после трансплантации; собирают клетки костного мозга из бедренных костей и большеберцовых костей. Клетки костного мозга промывают окрашивающими средами и окрашивают антителами к клеткам человека. После инкубации суспензию обрабатывают раствором для лизиса эритроцитов (О|адеп, Уа1епс1а, СА) для удаления эритроцитов, промывают окрашивающими средами и исследуют с помощью проточной цитометрии, как это описано выше. ГСК, образованные и из тРВ, и из ПК, культивированные с 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил9Н-пурин-6-иламино)этил)фенолом (соединение 1, табл. 1; пример 1) при концентрации, равной 1 мкМ, через 10 недель после приживления трансплантата приводят к статистически значимому увеличению содержания клеток человека.
Определение мишени.
Для установления механизма, с помощью которого соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, увеличивает количество ГСК в недифференцированном состоянии, проведено масштабное сканирование генома посредством анализа транскрипционного спектра клеток СЭ34', образованных из тРВ, обработанных в течение 24 ч соединением примера 1 и менее активным (в ~20 раз) аналогом, соединением примера 1 (2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-№(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-4-ил)пропил)-9-изопропил-9Нпурин-6-амином). Более чем в 50000 наборах проанализированных проб после обработки соединением примера 1 только 5 генов подверглись более чем 3-кратной повышающей регуляции и большинство также до некоторой степени были индуцированы неактивным аналогом. Кроме того, после обработки с помощью 1 мкМ соединения примера 1 понижающей регуляции более чем на 70% подверглись 5 генов. Во всех случаях понижающая регуляция зависела от дозы и неактивный аналог не оказал значительного воздействия ни на один ген. Два гена, которые наиболее сильно подверглись репрессии после обработки соединением примера 1 (цитохром Р450 1В1 [СУР1В1] и репрессором арил-углеводородного рецептора [АУРР]), транскрипционно регулируются арил-углеводородным рецептором (АУР). Поэтому соедине
- 56 019872 ния, предлагаемые в настоящем изобретении, могут действовать, как антагонист передачи сигнала АУР.
Кроме того, с помощью количественной полимеразной цепной реакции (КПЦР) исследована способность соединения примера 1 блокировать опосредуемую 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксином (ΤΟΌΌ, диоксин) экспрессию СУР1В1 мРНК в образованных из тРВ клетках ΟΌ34'. Обработка с помощью ΤΟΌΌ (3 нМ) приводила к 4,5-кратному увеличению содержания СУР1В1 мРНК по сравнению с контрольным образом, содержащим разбавитель (0,01% толуола). Это увеличение ингибируется соединением примера 1 зависимым от дозы образом, показывая, что соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, могут противодействовать передаче сигналов АУР. Для определения влияния соединения примера 1 на транскрипцию АУР проведено исследование способности соединения примера 1 ингибировать индуцированный диоксином зависимый от АУР репортерный ген люциферазы. Воздействие соединения примера 1(1 мкМ) на клетки, экспрессирующие АУР человека, полностью устраняет индуцированную диоксином зависимую от АУР транскрипцию. Титрование соединения примера 1 привело к значению ЕС50, равному 127 нМ, показывая, что соединение примера 1 является активным антагонистом АУР. Примечательно, что соединение примера 1 лишь очень слабо ингибирует индуцированную диоксином транскрипцию в клетках мышей и не проявляет активности по отношению к клеткам крыс и это приводит к предположению о том, что соединение примера 1 предпочтительно ингибирует АУР человека. Это коррелирует с отсутствием активности соединения примера 1 по отношению к ГСК мышей и может объяснить видовую селективность соединения примера 1. Кроме того, соединение примера 1 обладает лишь очень слабой агонистической активностью по отношению к клеткам мышей и крыс и не способно индуцировать зависимую от АУР транскрипцию в клетках человека.
Для дополнительного изучения влияния передачи сигналов АУР на ГСК исследованы два других антагониста АУР (альфа-нафтофлавон и СН-223191). При культивировании в течение 7 дней с клетками ΟΌ34', образованными из тРВ, оба соединения приводят к зависимому от дозы увеличению количества клеток ΟΌ34': введение 1 мкМ СН223191 приводит к увеличенному в 2,2 раза количеству клеток ΟΌ34'; использование 0,75 мкМ α-нафтофлавона приводит к увеличенному в 1,9-раза количеству клеток ΟΌ34', а 0,75 мкМ соединения примера 1 приводит к увеличенному в 3,4 раза количеству клеток ΟΌ34'. Чтобы показать прямое влияние АУР на вызванное соединением примера 1 размножение ГСК, образованные из ПК человека ΟΌ34' ГСК обрабатывают лентивирусными частицами, содержащими кшРНК (короткая шпилечная РНК), направленно воздействующую на АУР, которые совместно экспрессирует ЗФБ (зеленый флуоресцентный белок), или контрольным вирусом. Через 48 ч после трансдукции клетки ΟΌ34ΌΕΡ очищают с помощью клеточной сортера и содержание АУР определяют с помощью КПЦР. Обе кшРНК, направленно воздействующие на АУР, после трансдукции (на 81% с помощью §1111 и на 51% с помощью §1242) приводят к уменьшению экспрессии АУР. Это уменьшение не наблюдается у клеток, не содержащих ЗФБ, и клеток, подвергнутых трансдукции контрольным вирусом. В образованных из ПК клетках ΟΌ34', характеризующихся сниженной экспрессией АУР, обнаруживается фенотип, сходный и наблюдающийся в клетках, обработанных соединением примера 1, устойчиво экспрессирующих ΟΌ34'. Эти данные показывают, что ингибирование активности АУР соединением, предлагаемым в настоящем изобретении, является достаточным для стимулирования размножения ГСК ех νίνο.
Способ увеличения количества ГСК, получаемых из крови пупочного канатика новорожденного человека.
Используют культуральную среду δΚιηδρηη 8РЕМ (81етСе11 ΤесΗηο1οд^е5. Са1. # 09650), к которой добавлены следующие рекомбинантные цитокины человека: ТПО, 1Ь-6, лиганд ΡΙΐ-3 и 8СР, все при конечной концентрации, равной 50 нг/мл. Свежие культуральные среды готовят в день использования.
Разведения соединения в средах.
Для разведения используют 10000х концентрат соединения, предлагаемого в настоящем изобретении. Добавление соединения в культуральные среды проводят в 2 стадии. Первой стадией является 1:100 разведение (10 мкл 10000х концентрата в 990 мкл полных культуральных сред (содержащих цитокины) в пробирке Эппендорфа объемом 1,5 мл [И8Л ЗаемНИс, Са1 # 1615-5500]) с получением 100х раствора соединения в культуральных средах. Второй стадией является 1:100 разведение в культуральных средах, которое используют для инициирования культуры клеток. Объем культуры меняется в зависимости от исходного количества клеток ΟΌ34' пупочного канатика (ПК). Например, 1 х 106 клеток ПК ΟΌ34' высевают в 20 мл сред (5х104 клеток/мл). В этом случае для обеспечения конечной концентрации (см. табл. 3) 200 мкл 100х раствора соединения примера 1 добавляют к 20 мл сред в конической пробирке объемом 50 мл (ВесЮи Όχΐίίηδοη, Са1 # 352098).
Инициирование культуры клеток.
Для экспериментов по размножению ех νίνο используют очищенные клетки ПК ΟΌ34' человека. После оттаивания жизнеспособность клеток, исследованная путем отбора с помощью красителя трипановый синий, превышает 50%. Оттаявшие клетки разводят в 5 раз в культуральных средах (без цитокинов или соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, таких как соединение примера 1) и центрифугируют при 300д при 25°С в течение 8 мин. После отсасывания надосадочной жидкости таблетку повторно суспендируют в соответствующем объеме культуральной среды (5х104 клеток/мл, табл. 3) и
- 57 019872 затем смесь вводят (игла № 22, продукты фирмы Ап-Тйе; шприц объемом 20 мл, ΒΌ Са) # 309661) в мешочки фирмы АЕС (табл. 5) для немедленного выращивания. Клетки выращивают при 37°С в 5% СО2.
Добавление сред к культуре клеток.
Для сред объемом до 80 мл используют описанную выше процедуру (разведения соединения в средах). Для сред объемом более 80 мл сначала в конических пробирках объемом 10 мл готовят разведение 1:100 (Ссгшпд, Са) # 430052, табл. 4). Второй стадией является 1:100 разведения в культуральных средах в стерильных контейнерах (ΒΌ Εа1сοη, Са) # 354015) и затем смесь вводят в мешочки фирмы АЕС (игла № 22, продукты фирмы Ап-Тйе; шприц объемом 60 мл, ΒΌ Са) # 309653).
Таблица 3
Разведения соединения примера 1 для начала размножения клеток СО34' крови пупочного канатика
Количество клеток СО34+, образованных из крови пупочного канатика(х 10$) Исходный объем культуры(мл) Необходимый объем ЮОх разведения соединения примера 1 (мкл) Приготовляемый объем ЮОх разведения соединения примера 1 (мл) Необходимый объем 10000х разведения соединения примера 1 (мкл)
0,25 5 50 1 10
0,50 10 100 1 10
0,75 15 150 1 10
1,00 20 200 1 10
1,25 25 250 1 10
1,50 30 300 1 10
1,75 35 350 1 10
2,00 40 400 1 10
2,50 50 500 1 10
3,00 60 600 1 10
4,00 80 800 1 10
Таблица 4
Разведения соединения примера 1 для добавления в средах для проведения размножения клеток СЭ34', образующихся из крови пупочного канатика
Объем добавляемых сред (мл) Необходимый объем ЮОх разведения соединения примера 1 (мкл) Приготовляемый объем ЮОх разведения соединения примера 1 (мл) Необходимый объем ЮОООх разведения соединения примера 1 (мкл)
10,00 100 1 10
20,00 200 1 10
30,00 300 1 10
40,00 400 1 10
50,00 500 1 ю
60,00 600 1 10
70,00 700 1 10
80,00 800 1 10
100,00 1000 5 50
120,00 1200 5 50
160,00 1600 5 50
250,00 2500 5ч 50
500,00 5000 10 100
750,00 7500 10 100
1000,00 10000 10 100
- 58 019872
Таблица 5
Ограничения для объемов мешочков фирмы Лшепсап Ниого8еа1 СогрогаДои
Номер в каталоге мешочков фирмы АРС Объем для оптимального размножения (мл) Максимальный объем мешочка (мл)
1РР-0007 7 7
2РР-0032 32 32
2РР-0072 71 130
2РР-0Н8 118 245
2РР-0197 179 580
2РР-0225 225 665
2РР-0270 270 960
2РР-750С 750
Такую же методику можно применять при использовании в качестве исходного материала для аутологической трансплантации взятых у пациента мобилизованных клеток периферической крови.
Также можно приготовить композицию, содержащую популяцию клеток с увеличенным количеством ГСК, подходящую для внутривенного введения путем вливания. Для приготовления клеток, предназначенных для вливания, с помощью центрифугирования в течение 10 мин при 300д готовят таблетку культивированных клеток и ее повторно суспендируют в буфере для вливания, содержащем 5% САЧ (Вах1ег), при концентрации, равной от 106 до 108 клеток/мл.
Следует понимать, что описанные в настоящем изобретении примеры и варианты осуществления предназначены только для иллюстрации и что в соответствии с сущностью и объемом настоящего изобретения и объемом прилагаемой формулы изобретения специалист в данной области техники может внести в нее различные модификации и изменения. Все публикации, патенты и заявки на патенты, цитированные в настоящем изобретении, включены в настоящее изобретение в качестве ссылки для всех объектов.

Claims (54)

1. Соединение формулы в которой Ь выбран из группы, включающей -НК5а(СН2)2-3-, -№К.5а(СН2)2МК.5Ь-, -ЫК.5а(СН2)2§-, №К.5аСН2СН(ОН)- и ^5аСН(СН3)СН2-, где К5а и К5Ь независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил;
К.1 выбран из группы, включающей тиофенил, фуранил, 1Н-бензимидазолил, изохинолинил, 1Нимидазопиридинил, бензотиофенил, пиримидинил, пиридинил, 1Н-имидазолил, пиразинил, пиридазинил, 1Н-пирролил и тиазолил, где указанные тиофенил, фуранил, 1Н-бензимидазолил, изохинолинил, 1Н-имидазопиридинил, бензотиофенил, пиримидинил, пиридинил, 1Н-имидазолил, пиразинил, пиридазинил, 1Н-пирролил или тиазолил, представляющие собой К!, необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей цианогруппу, С1-С4-алкил, С1-С4алкоксигруппу, галоген, галогензамещенный С1-С4-алкил, -8(О)0-2К8а и -С(О)ОК8а, где К8а выбран из группы, включающей водород и С1-С4-алкил;
К2 выбран из группы, включающей -§(О)2ЫК6аК6Ь, -НК6аС(О)МК6ЬК6с, фенил, 1Н-пирролопиридин-
3-ил, 1Н-пирролопиридин-5-ил, 1Н-индолил, тиофенил, пиридинил, 1Н-1,2,4-триазолил, 2оксоимидазолидинил, 1Н-пиразолил, 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензимидазолил и 1Н-индазолил, где К6а, К6Ь и К6с независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил; указанные фенил, 1Нпирролопиридин-3-ил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил, 1Н-индолил, тиофенил, пиридинил, 1Н-1,2,4триазолил, 2-оксоимидазолидинил, 1Н-пиразолил, 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензимидазолил или 1Ниндазолил, представляющие собой К2, необязательно замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, метил, метоксигруппу, аминогруппу, О(СН2)2МК7аК7Ь, -О8(О)2МК7аК7Ь и -ΝΚ-,,8(Ο)2Κ-Ι:, где К7а и К7Ь независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил;
К3 выбран из группы, включающей водород и бифенил; и
К4 выбран из группы, включающей С1-С10-алкил, проп-1-ен-2-ил, циклогексил, 2-(2оксопирролидин-1-ил)этил, оксетан-3-ил, бензгидрил, тетрагидро-2Н-пиран-3-ил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил и бензил, где указанные алкил, циклогексил, 2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил, оксетан-3-ил, оксетан-2-ил, бензгидрил, тетрагидро-2Н-пиран-3-ил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил или бензил необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей гидро
- 59 019872 ксигруппу, С1 -С4-алкил и галогензамещенный С1 -С4-алкил, или его соль.
2. Соединение по п.1, в котором
Κ1 выбран из группы, включающей тиофен-2-ил, тиофен-3-ил, фуран-3-ил, 1Н-бензо[б]имидазол-1ил, изохинолин-4-ил, 1Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин-1-ил, бензо[Ь]тиофен-3-ил, пиримидин-5-ил, пиридин-2ил, пиридин-4-ил, 1Н-имидазол-1-ил, пиразин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридазин-4-ил, 1Н-пиррол-2-ил и тиазол-5-ил, где указанные тиофен-2-ил, тиофен-3-ил, фуран-3-ил, 1Н-бензо[б]имидазол-1-ил, изохинолин-4-ил, 1Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин-1-ил, бензо[Ь]тиофен-3-ил, пиримидин-5-ил, пиридин-2-ил, пиридин-4-ил, 1Н-имидазол-1-ил, пиразин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридазин-4-ил, 1Н-пиррол-2-ил или тиазол-5ил, представляющие собой Κι, необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей цианогруппу, С1-С4-алкил, С1-С4-алкоксигруппу, галоген, галогензамещенный С1-С4-алкил, -8(О)0-2К8а и -С(0)0К8а, где К8а выбран из группы, включающей водород и С1-С4алкил;
К2 выбран из группы, включающей -ΝΚ^^ΝΚ^,Κ^, фенил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-3-ил, 1Нпирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 1Н-1,2,4-триазол-3-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, 1Н-пиразол-4ил, 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[б]имидазол-5-ил и 1Н-индазол-3-ил, где К6а, К6:. и К6с независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил; указанные фенил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-3ил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-
4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 1Н-1,2,4-триазол-3-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, 1Нпиразол-4-ил, 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[б]имидазол-5-ил или 1Н-индазол-3-ил, представляющие собой Κ2, необязательно замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, метил, метоксигруппу, аминогруппу, -О8(О)2NΚ7аΚ7Ь и ^К7а8(О)2К7Ь, где К7а и К7Ь независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил; и
Κ4 выбран из группы, включающей изопропил, метил, этил, проп-1-ен-2-ил, изобутил, циклогексил, втор-бутил, (8)-втор-бутил, (К)-втор-бутил, 1-гидроксипропан-2-ил, (8)-1-гидроксипропан-2-ил, (Κ)-1гидроксипропан-2-ил, нонан-2-ил, 2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил, оксетан-3-ил, бензгидрил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил и бензил, где указанные циклогексил, 2-(2-оксопирролидин-1-ил)этил, оксетан-3-ил, бензгидрил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил или бензил необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей С1-С4-алкил и галогензамещенный С1-С4-алкил.
3. Соединения по п.1 или 2, в которых Ь выбран из группы, включающей -ΝΗ(0Η2)2-3-, ΝΗ(0Η2)2ΝΗ-, -ΝΗ(ΟΗ2)28-, -ΝΗΟΗ^Η3)ΟΗ2- и -ΝΗ^20Η(0Η)-.
4. Соединения по п. 1 или 2, в которых Ь представляет собой -ΝΗ(0Η2)2-.
5. Соединение по любому из пп.1-4, в котором К2 выбран из группы, включающей фенил, 1Ниндол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-3-ил, 1Н-1,2,4триазол-5-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, 1Н-пиразол-4-ил, 2-оксо-2,3-дигидро-1Нбензо[б]имидазол-5-ил, где указанные фенил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-3-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, 1Н-пиразол-4-ил или 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[б]имидазол-5-ил, представляющие собой Κ2, необязательно содержат следующие заместители: гидроксигруппу, метоксигруппу, метил, галоген и аминогруппу.
6. Соединение по любому из пп.1-5, в котором Κ4 выбран из группы, включающей изопропил, метил, этил, проп-1-ен-2-ил, изобутил, циклогексил, втор-бутил, (8)-втор-бутил, (К)-втор-бутил, 1гидроксипропан-2-ил, (8)-1-гидроксипропан-2-ил, (К)-1-гидроксипропан-2-ил и нонан-2-ил.
7. Соединение по п.1, представляющее собой соединение формулы
1а в которой Ь представляет собой -ΝΗ^Η2)2;
Κ1 выбран из группы, включающей тиофен-2-ил, тиофен-3-ил, фуран-3-ил, бензо[Ь]тиофен-3-ил, пиримидин-5-ил, пиридин-2-ил, пиридин-4-ил, 1Н-имидазол-1-ил, пиразин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридазин-4-ил, 1Н-пиррол-2-ил и тиазол-5-ил, где указанные тиофен-2-ил, тиофен-3-ил, фуран-3-ил, бензо[Ь]тиофен-3-ил, пиримидин-5-ил, пиридин-2-ил, пиридин-4-ил, 1Н-имидазол-1-ил, пиразин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридазин-4-ил, 1Н-пиррол-2-ил или тиазол-5-ил, представляющие собой Κι, необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей цианогруппу, С1-С4-алкил, С1-С4-алкоксигруппу, галоген, галогензамещенный С1-С4-алкил, -8(Ο)0-2Κ8ει и -^0)0^, где Κ8ει выбран из группы, включающей водород и С1-С4-алкил;
Κ2 выбран из группы, включающей фенил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3
- 60 019872 ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3-ил, 1Н-пиразол-4-ил,
2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[й]имидазол-5-ил, где указанные фенил, 1Н-индол-3-ил, тиофен-3-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, 1Н-1,2,4-триазол-5-ил, 2-оксоимидазолидин-1-ил, 1Н-пиразол-3ил, 1Н-пиразол-4-ил или 2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[й]имидазол-5-ил, представляющие собой Κ2, необязательно замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, метоксигруппу, аминогруппу, -Οδ^ΕΝΚ^Κ^ и -ΝΚ7α8(Ο)2Κ7^ где К7а и К7Ь независимо выбраны из группы, включающей водород и С1-С4-алкил; и
К3 выбран из группы, включающей водород, С1 -С4-алкил и бифенил; и
К4 выбран из группы, включающей изопропил, изобутил, втор-бутил, 1-гидроксипропан-2-ил, оксетан-3-ил, бензгидрил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил и бензил, где указанные оксетан-3-ил, бензгидрил, фенил, тетрагидрофуран-3-ил и бензил необязательно могут быть замещены 1-3 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей С1-С4-алкил и галогензамещенный С1-С4-алкил.
8. Соединение по п.1, выбранное из группы, включающей 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-втор-бутил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-бензгидрил-2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(тетрагидро-2Н-пиран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(тиофен-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(4-(трифторметил)бензил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изобутил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-метил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(4-метилбензил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; №(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин;
2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-№(2-(тиофен-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин;
3 -(2-(2-(бензо [Ь]тиофен-3 -ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-№(4-фторфенетил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин; №(4-аминофенетил)-2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиримидин-5-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(тиофен-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(фуран-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-№(4-фторфенетил)-9-фенил-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(нонан-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; №(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-втор-бутил-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-4-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; этил-5-(6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)никотинат; 4-(2-((9-изопропил-2-(5-метоксипиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-ил)амино)этил)фенол; 4-(2-(2-(6-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4- (2-(9-изопропил-2-(4-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
5- (6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)никотинонитрил; 4-(2-(2-(1Н-имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиридазин-4-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(пиразин-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(5-(метилсульфонил)пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(4-хлорпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-((9-изопропил-2-(4-метилтиофен-3-ил)-9Н-пурин-6-ил)амино)этил)фенол;
№[2-(6-метокси-1Н-индол-3-ил)этил]-9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; №[2-(5-метил-1Н-индол-3-ил)этил]-9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
1-(2-{ [9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3 -ил)-9Н-пурин-6-ил] амино}этил)имидазолидин-2-он; №(2-{[9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-ил]амино}этил)пиридин-2-амин; 9-(пропан-2-ил)-№[3-(1Н-пиразол-4-ил)пропил]-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; №{2-[(3-метил-1Н-1,2,4-триазол-5-ил)сульфанил]этил}-9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Нпурин-6-амин;
1- (2-{ [2-( 1 -бензотиофен-3 -ил)-9-(пропан-2-ил)-9Н-пурин-6-ил]амино}этил)имидазолидин-2-он; №[2-(5-амино-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)этил]-2-(1-бензотиофен-3-ил)-9-(пропан-2-ил)-9Н-пурин-6- амин;
2- (1 -бензотиофен-3 -ил)-9-(пропан-2-ил)-Щ3 -(1Н-пиразол-4-ил)пропил] -9Н-пурин-6-амин; 2-(1-бензотиофен-3-ил)-Щ3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-4-ил)пропил]-9-(пропан-2-ил)-9Н-пурин-6- амин;
- 61 019872 (2-{[2-(1-бензотиофен-3-ил)-9-(пропан-2-ил)-9Н-пурин-6-ил]амино}этил)мочевину;
№[2-(1Н-индол-3-ил)этил]-9-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; №(4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенил)метансульфонамид;
4-(2-(2-(пиридин-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)пропил)фенол;
4-(2-(9-(оксетан-3-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
№(2-(1Н-индазол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
4-(2-((9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-ил)(метил)амино)этил)фенол;
4-(2-(9-(1-гидроксипропан-2-ил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенилсульфамат;
4-(2-(2-(2-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(1-метил-1Н-пиррол-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(тиазол-5-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(1Н-бензо[б]имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(2,4-диметил-1Н-имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4- (2-(9-изопропил-2-(2-метил-1Н-имидазол-1-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
5- (9-втор-бутил-6-(4-гидрокси-3-метилфенетиламино)-9Н-пурин-2-ил)никотинонитрил; №(2-(1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; 9-изопропил-№(2-(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)этил)-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
4-(2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(5-хлорпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4- (2-(9-изопропил-2-(5-(трифторметил)пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
5- (6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-9-втор-бутил-9Н-пурин-2-ил)никотинонитрил; №(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; (К)-№(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; (8)-№(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
№(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; (К)-№(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; (8)-№(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
5-(6-(4-гидроксифенетиламино)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-2-ил)никотинонитрил; (К)-4-(2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4- (2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)-3-метилфенол;
5- (6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)пиколинонитрил;
3-(6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)изоникотинонитрил;
3- (6-(4-гидроксифенетиламино)-9-изопропил-9Н-пурин-2-ил)пиколинонитрил;
4- (2-(9-изопропил-2-(6-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(9-изопропил-2-(изохинолин-4-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
2- хлор-4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
3- фтор-4-(2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
№(2-(5-хлор-1Н-индол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
№(2-(5-фтор-1Н-индол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
4- (2-(9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)-2-метилфенол;
4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; (8)-4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; (К)-4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3 -ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол; (К)-2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол; (8)-2-(6-(2-(1Н-индол-3-ил)этиламино)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9Н-пурин-9-ил)пропан-1-ол; (К)-№(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(тетрагидрофуран-3-ил)-9Н-пурин-6амин;
4-(2-(2-(1Н-имидазо[4,5-Ь]пиридин-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
4-(2-(2-(4,5-диметил-1Н-имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-№(2-(пиридин-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин;
4- (2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)-1-гидроксиэтил)фенол;
2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-№(2-(6-метокси-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин; №(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин;
2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-№(2-(5-метокси-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин; №(2-(1Н-индол-3 -ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3 -ил)-9-(проп-1 -ен-2-ил)-9Н-пурин-6-амин;
5- (2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)пиридин-2-ол; №(2-(1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6- амин;
№(2-(6-(2-(диэтиламино)этокси)-1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н
- 62 019872 пурин-6-амин;
Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-втор-бутил-2-(2-метил-1Н-имидазол-1-ил)-9Н-пурин-6-амин; 4-(2-(2-(2-этил-1Н-имидазол-1-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(2-пропил-1Н-имидазол-1-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
3- (2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-иламино)этил)-1Н-индол-6-ол; Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-9-изопропил-2-(2-метил-1Н-имидазол-1-ил)-9Н-пурин-6-амин; 2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(7-метил-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-метилпиридин-3-ил)-9-(оксетан-3-ил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(6-фтор-1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин; 2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(6-метил-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин; 2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(4-фтор-1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(7-фтор-1Н-индол-3-ил)этил)-2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-9Н-пурин-6-амин; 2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-изопропил-Ы-(2-(4-метил-1Н-индол-3-ил)этил)-9Н-пурин-6-амин; Ы-(2-(1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5-ил)этил)-9-изопропил-2-(пиридин-3-ил)-9Н-пурин-6-амин;
4- (2-(2-(5-фторпиридин-3-ил)-9-(1-гидроксипропан-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)-2-метилфенол; 4-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-9-циклогексил-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол; 4-(2-(9-изопропил-2-(тиофен-3-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)фенол;
1-(2-(2-(бензо[Ь]тиофен-3-ил)-6-(4-гидроксифенетиламино)-9Н-пурин-9-ил)этил)пирролидин-2-он, или его соль.
9. Соединение по п.1, представляющее собой соединение формулы но.
ΝΗ или его соль.
10. Соединение по п.1, представляющее собой соединение формулы
НО. -χ
ΝΗ или его соль.
11. Соединение по п.1, представляющее собой соединение формулы ΗΝ-,
ΝΗ или его соль.
12. Соединение по п.1, представляющее собой соединение формулы ΗΝ_,
ΝΗ
- 63 019872 или его соль.
13. Соединение по п.1, представляющее собой соединение формулы или его соль.
14. Соединение по п.1, представляющее собой соединение формулы или его соль.
15. Соединение по п.1, представляющее собой соединение формулы или его соль.
16. Способ увеличения количества стволовых клеток и клеток предшественников, осуществляемый ίη νίΐΓο или ех νίνο, включающий взаимодействие стволовых клеток с соединением по любому из пп.115, где указанное соединение способно подавлять активность и/или экспрессию арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арилуглеводородного рецептора.
17. Способ по п.16, в котором стволовые клетки получены из человеческого источника.
18. Способ по п.16, в котором стволовые клетки получены из костного мозга.
19. Способ по п.16, в котором стволовые клетки получены из крови пупочного канатика.
20. Способ по любому из пп.17-19, в котором стволовыми клетками являются гематопоэтические стволовые клетки.
21. Способ размножения гематопоэтических стволовых клеток, осуществляемый ех νίνο, включающий (а) получение исходной популяции клеток, содержащей гематопоэтические стволовые клетки, и (Ь) выращивание указанной исходной популяции клеток ех νίνο в присутствии соединения по любому из пп.1-15 в условиях, подходящих для размножения гематопоэтических стволовых клеток, причем указанное соединение способно подавлять активность и/или экспрессию арил-углеводородного рецептора и/или эффектора, действующего по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора.
22. Способ по п.21, в котором эффектор, действующий по ходу транскрипции биосинтетического пути арил-углеводородного рецептора, выбран из группы, включающей Сур1В1, Сур1А1, бета-катенин, АНКК, ЗТАТ5 и ЗТАТ1.
23. Способ по п.21 или 22, в котором указанная исходная популяция клеток обогащена клетками СО34+.
24. Способ по п.21 или 22, в котором указанная исходная популяция клеток получена из клеток крови пупочного канатика.
25. Способ по п.21 или 22, в котором указанная исходная популяция клеток получена из одной или двух порций крови пупочного канатика.
26. Способ по п.21 или 22, в котором указанная исходная популяция клеток получена из мобилизованных клеток периферической крови.
27. Способ по п.21 или 22, в котором указанная исходная популяция клеток в основном состоит из клеток СЭ34', выделенных очисткой из одной или двух порций крови пупочного канатика.
28. Способ по п.21 или 22, в котором указанная исходная популяция клеток в основном состоит из клеток ί.Ό34', выделенных очисткой из одной или двух порций крови пупочного канатика с использова
- 64 019872 нием колонок для аффинной хроматографии или магнитных гранул, содержащих антигенсвязывающие фрагменты антител к СЭ34.
29. Способ по п.26, в котором мобилизованные клетки периферической крови взяты у одного млекопитающего.
30. Способ по любому из пп.21-29, в котором указанные условия, подходящие для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток, включают выращивание указанной исходной популяции клеток в присутствии достаточного количества 1Ь-6, Ηΐ-3-Ь, ТПО и 8СЕ
31. Способ по любому из пп.21-30, в котором указанное соединение вводят в клеточную культуральную среду в концентрации, равной от 1 пМ до 10 мкМ.
32. Способ по любому из пп.21-30, в котором указанное соединение вводят в клеточную культуральную среду в концентрации, равной от 10 пМ до 100 мкМ.
33. Способ по любому из пп.21-32, в котором указанная исходная популяция клеток в основном состоит из клеток СЭ34', выделенных очисткой из одной или двух порций крови пупочного канатика, и указанную исходную популяцию клеток выращивают в присутствии указанного соединения в течение от 3 до 90 дней.
34. Способ по любому из пп.21-32, в котором указанная исходная популяция клеток в основном состоит из клеток СЭ34', выделенных очисткой из одной или двух порций крови пупочного канатика, и указанную исходную популяцию клеток выращивают в присутствии указанного соединения в течение от 7 до 35 дней.
35. Способ по любому из пп.21-32, в котором указанную исходную популяцию клеток выращивают в присутствии указанного соединения в течение времени, достаточного для увеличения количества клеток СЭ34' в 10-50000 раз.
36. Набор для размножения гематопоэтических стволовых клеток, включающий соединение по любому из пп.1-15 и инструкции по использованию в способе по любому из пп.21-35 и необязательно одно или большее количество следующих веществ: цитокины, факторы роста и среды для выращивания клеток.
37. Набор по п.36, в котором указанные один или большее количество цитокинов или факторов роста выбраны из группы, включающей 1Ь-6, Ηΐ-3-Ь, 8СЕ и ТПО.
38. Популяция клеток, содержащая увеличенное количество гематопоэтических стволовых клеток, полученная способом по любому из пп.21-35.
39. Фармацевтическая композиция, содержащая популяцию клеток по п.38, повторно суспендированную в фармацевтически приемлемой среде, пригодной для введения млекопитающему.
40. Фармацевтическая композиция, содержащая популяцию клеток с увеличенным количеством гематопоэтических клеток и соединение по любому из пп.1-15.
41. Композиция по п.40, в которой популяция клеток с увеличенным количеством гематопоэтических стволовых клеток получена из одной или двух порций крови пупочного канатика, причем указанная композиция содержит полное количество клеток, составляющее не менее 105, 107, 108 или 109 клеток, и в которой 20-100% полного количества клеток составляют клетки СЭ34'.
42. Композиция по п.41, в которой 0,1-40% полного количества клеток составляют клетки, экспрессирующие маркеры СЭ34 и Т1гу1, 20-80% полного количества клеток составляют клетки, экспрессирующие маркеры СЭ34 и СЭ45ВА; 10-95% клеток представляют собой СЭ38' и 5-70% клеток представляют собой СИ133+.
43. Композиция по п.42, в которой 0,1-10% полного количества клеток составляют клетки, экспрессирующие маркеры СЭ34 и Т1гу1.
44. Композиция по любому из пп.38-43, предназначенная для использования в аллогенной трансплантации гематопоэтических стволовых клеток млекопитающему.
45. Композиция по любому из пп.38-43, предназначенная для лечения нарушения гематопоэза.
46. Композиция по п.45, которую используют, когда нарушение гематопоэза является наследственным иммунодефицитным заболеванием, аутоиммунным нарушением или гематопоэтическим нарушением.
47. Композиция по п.46, при использовании которой гематопоэтическое нарушение выбрано из группы, включающей острый миелолейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический миелолейкоз, хронический лимфолейкоз, миелопролиферативные нарушения, миелодиспластические синдромы, множественную миелому, неходжкинскую лимфому, болезнь Ходжкина, апластическую анемию, истинную эритроцитарную аплазию, пароксизмальную ночную гемоглобинурию, анемию Фанкони, большую талассемию, серповидно-клеточную анемию, тяжелый комбинированный иммунодефицит, синдром Вискотта-Олдрича, гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз и врожденные нарушения метаболизма.
48. Композиция по любому из пп.38-47, причем указанная композиция применима для внутривенного вливания и указанная композиция содержит по меньшей мере 104 клеток/кг, вливаемых пациенту.
49. Композиция по любому из пп.38-47, причем указанная композиция применима для внутривенного вливания и указанная композиция содержит от 105 до 109 клеток/кг, вливаемых пациенту.
50. Применение соединения по любому из пп.1-15 в приготовлении композиции, предназначенной
- 65 019872 для увеличения количества гематопоэтических стволовых клеток для лечения наследственного иммунодефицитного заболевания, аутоимунного заболевания и/или гематопоэтического нарушения, в котором указанное соединение является средством, способным осуществлять понижающую регуляцию активности и/или экспрессии арил-углеводородного рецептора.
51. Применение по п.50, в котором гематопоэтическое нарушение выбрано из группы, включающей множественную миелому, неходжкинскую лимфому, болезнь Ходжкина, острый миелолейкоз, нейробластому, герминомы, аутоиммунные нарушения и амилоидоз.
52. Применение по п.51, в котором аутоиммунные нарушения выбраны из группы, включающей системную красную волчанку и системный склероз.
53. Применение по п.52, в котором гематопоэтическое нарушение выбрано из группы, включающей острый миелолейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический миелолейкоз, хронический лимфолейкоз, миелопролиферативные нарушения, миелодиспластические синдромы, множественную миелому, неходжкинскую лимфому, болезнь Ходжкина, апластическую анемию, истинную эритроцитарную аплазию, пароксизмальную ночную гемоглобинурию, анемию Фанкони, большую талассемию, серповидноклеточную анемию, тяжелый комбинированный иммунодефицит, синдром Вискотта-Олдрича, гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз и врожденные нарушения метаболизма.
54. Применение по п.53, в котором врожденные нарушения метаболизма выбраны из группы, включающей мукополисахаридоз, болезнь Гоше, метахроматические лейкодистрофии и адренолейкодистрофии.
EA201100663A 2008-10-30 2009-10-29 Соединения, которые увеличивают количество гематопоэтических стволовых клеток EA019872B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10982108P 2008-10-30 2008-10-30
US24276509P 2009-09-15 2009-09-15
PCT/US2009/062646 WO2010059401A2 (en) 2008-10-30 2009-10-29 Compounds that expand hematopoietic stem cells

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201100663A1 EA201100663A1 (ru) 2011-12-30
EA019872B1 true EA019872B1 (ru) 2014-06-30

Family

ID=42111339

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201100663A EA019872B1 (ru) 2008-10-30 2009-10-29 Соединения, которые увеличивают количество гематопоэтических стволовых клеток

Country Status (41)

Country Link
US (4) US8927281B2 (ru)
EP (2) EP2350078B1 (ru)
JP (1) JP5390626B2 (ru)
KR (1) KR101434719B1 (ru)
CN (1) CN102203096B (ru)
AR (1) AR074063A1 (ru)
AU (1) AU2009317898B2 (ru)
BR (1) BRPI0921799B8 (ru)
CA (3) CA2943540C (ru)
CL (2) CL2009002010A1 (ru)
CO (1) CO6410309A2 (ru)
CR (1) CR20110192A (ru)
CU (1) CU24495B1 (ru)
CY (1) CY1121857T1 (ru)
DK (1) DK2350078T3 (ru)
DO (1) DOP2011000114A (ru)
EA (1) EA019872B1 (ru)
EC (1) ECSP11011090A (ru)
ES (2) ES2736728T3 (ru)
GE (1) GEP20146053B (ru)
HN (1) HN2011001195A (ru)
HR (1) HRP20191238T1 (ru)
HU (1) HUE044802T2 (ru)
IL (1) IL212368A (ru)
JO (1) JO3593B1 (ru)
LT (1) LT2350078T (ru)
MA (1) MA32828B1 (ru)
MX (1) MX347834B (ru)
MY (1) MY155137A (ru)
NI (1) NI201100083A (ru)
NZ (1) NZ592435A (ru)
PE (1) PE20100362A1 (ru)
PL (1) PL2350078T3 (ru)
PT (1) PT2350078T (ru)
RS (1) RS59027B1 (ru)
SI (1) SI2350078T1 (ru)
SM (1) SMP201100024B (ru)
SV (1) SV2011003888A (ru)
TN (1) TN2011000174A1 (ru)
TW (1) TWI532486B (ru)
WO (1) WO2010059401A2 (ru)

Families Citing this family (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8846393B2 (en) * 2005-11-29 2014-09-30 Gamida-Cell Ltd. Methods of improving stem cell homing and engraftment
JP2010522719A (ja) * 2007-03-28 2010-07-08 ノイロサーチ アクティーゼルスカブ プリニル誘導体及びカリウムチャネルモジュレーターとしてのそれらの使用
US20100130516A1 (en) * 2007-03-28 2010-05-27 Neurosearch A/S Purinyl derivatives and their use as potassium channel modulators
AU2009251291B2 (en) * 2008-05-30 2013-05-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Purine PI3K inhibitor compounds and methods of use
US20110237607A1 (en) * 2008-09-26 2011-09-29 Neurosearch A/S Substituted purinyl-pyrazol derivatives and their use as potassium channel modulators
WO2010034707A1 (en) * 2008-09-26 2010-04-01 Neurosearch A/S Substituted purinyl-pyrazol derivatives and their use as potassium channel modulators
PE20100362A1 (es) * 2008-10-30 2010-05-27 Irm Llc Derivados de purina que expanden las celulas madre hematopoyeticas
EP2647697B1 (en) * 2010-12-01 2016-08-24 Nissan Chemical Industries, Ltd. Method for producing hematopoietic stem cells using pyrazole compound
WO2012102937A2 (en) * 2011-01-25 2012-08-02 Irm Llc Compounds that expand hematopoietic stem cells
WO2012167053A1 (en) 2011-06-01 2012-12-06 Janus Biotherapeutics, Inc. Novel immune system modulators
EP2729560A4 (en) * 2011-07-06 2014-12-03 Cellerant Therapeutics Inc MEGAKARYOCYTE PRE-PROVIDER CELLS FOR THE PRODUCTION OF BLOOD PLATES
US20140328811A1 (en) * 2011-08-01 2014-11-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method for improving the success rate of hematopoietic stem cell transplants
JP6047160B2 (ja) 2011-09-07 2016-12-21 ドイチェス クレブスフォルシュンクスツェントルム 天然ａｈｒリガンド依存性癌を治療および／または予防するための手段および方法
WO2013086436A1 (en) 2011-12-08 2013-06-13 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for enhanced generation of hematopoietic stem/progenitor cells
WO2013110198A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Université de Montréal Pyrimido[4,5-b]indole derivatives and use thereof in the expansion of hematopoietic stem cells
SG11201404608WA (en) 2012-02-13 2014-09-26 Gamida Cell Ltd Mesenchymal stem cells conditioned medium and methods of generating and using the same
CA2876780A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Saniona Aps A phenyl triazole derivative and its use for modulating the gabaa receptor complex
US9175266B2 (en) 2012-07-23 2015-11-03 Gamida Cell Ltd. Enhancement of natural killer (NK) cell proliferation and activity
US9567569B2 (en) * 2012-07-23 2017-02-14 Gamida Cell Ltd. Methods of culturing and expanding mesenchymal stem cells
US9074186B2 (en) 2012-08-15 2015-07-07 Boston Medical Center Corporation Production of red blood cells and platelets from stem cells
WO2014110020A1 (en) 2013-01-08 2014-07-17 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for expansion of embryonic hematopoietic stem cells
WO2014138485A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Irm Llc Ex vivo production of platelets from hematopoietic stem cells and the product thereof
CA2848575C (en) * 2013-05-17 2021-01-26 Universite De Montreal Methods to modulate acute myeloid leukemia stem/progenitor cell expansion and/or differentiation
SG11201603166UA (en) 2013-10-24 2016-05-30 Ospedale San Raffaele Srl Method
RU2733652C2 (ru) 2013-10-31 2020-10-06 Фред Хатчинсон Кэнсер Рисерч Сентер МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ/КЛЕТКИ-ПРЕДШЕСТВЕННИКИ И Не-Т ЭФФЕКТОРНЫЕ КЛЕТКИ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
UA115388C2 (uk) 2013-11-21 2017-10-25 Пфайзер Інк. 2,6-заміщені пуринові похідні та їх застосування в лікуванні проліферативних захворювань
WO2016118780A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center Point-of-care and/or portable platform for gene therapy
EP3288569A4 (en) 2015-04-29 2018-12-19 Fred Hutchinson Cancer Research Center Modified hematopoietic stem/progenitor and non-t effector cells, and uses thereof
US11827904B2 (en) 2015-04-29 2023-11-28 Fred Hutchinson Cancer Center Modified stem cells and uses thereof
CN109310710A (zh) * 2015-10-15 2019-02-05 细胞结构公司 自然杀伤细胞和ilc3细胞及其用途
AU2016342041B2 (en) 2015-10-23 2021-12-02 Eureka Therapeutics, Inc. Antibody/T-cell receptor chimeric constructs and uses thereof
AU2016343682A1 (en) 2015-10-30 2018-06-14 The Regents Of The University Of California Methods of generating T-cells from stem cells and immunotherapeutic methods using the T-cells
JP2019500043A (ja) * 2015-12-28 2019-01-10 ノバルティス アーゲー 異常ヘモグロビン症の治療用組成物および方法
KR20230088514A (ko) 2016-04-14 2023-06-19 프레드 허친슨 캔서 센터 표적화 핵산 나노수송체를 이용하여 치료 세포를 프로그램화하기 위한 조성물 및 방법
CA3023239A1 (en) * 2016-05-07 2017-11-16 Celularity Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia and multiple myeloma using natural killer cells
MX2018014443A (es) 2016-05-25 2019-04-15 Bayer Pharma AG 3-oxo-2,6-difenil-2,3-dihidropiridazin-4-carboxamidas.
US11352328B2 (en) 2016-07-12 2022-06-07 Arisan Therapeutics Inc. Heterocyclic compounds for the treatment of arenavirus
US20190359941A1 (en) * 2016-08-18 2019-11-28 National University Of Singapore Substituted azole derivatives for generation, proliferation and differentiation of hematopoietic stem and progenitor cells
JP2019532672A (ja) 2016-09-28 2019-11-14 ノバルティス アーゲー 多孔質膜系巨大分子送達システム
TW201839136A (zh) 2017-02-06 2018-11-01 瑞士商諾華公司 治療血色素異常症之組合物及方法
JOP20190193A1 (ar) 2017-02-09 2019-08-08 Bayer Pharma AG ممركبات 2-أريل غير متجانس-3-أكسو-2، 3-ثنائي هيدرو بيريدازين-4-كربوكساميد لمعالجة السرطان
TW201841916A (zh) 2017-04-12 2018-12-01 美商麥珍塔治療學股份有限公司 芳香烴受體拮抗劑及其用途
CN110831600B (zh) * 2017-04-21 2023-10-17 医肯纳肿瘤学公司 吲哚ahr抑制剂和其用途
CN110741016A (zh) 2017-04-26 2020-01-31 优瑞科生物技术公司 嵌合抗体/t-细胞受体构筑体及其用途
WO2019018562A1 (en) 2017-07-19 2019-01-24 Ideaya Biosciences, Inc. AMIDO COMPOUND AS MODULATORS OF AHR
WO2019025931A1 (en) 2017-07-31 2019-02-07 Novartis Ag USE OF A MUSSEL FOR REDUCING THE USE OF COCAINE OR FOR PREVENTING A RECHUTE IN THE USE OF COCAINE
CA3071534A1 (en) * 2017-08-02 2019-02-07 Northwestern University Substituted fused pyrimidine compounds and uses thereof
US20200246393A1 (en) 2017-09-28 2020-08-06 Celularity, Inc. Tumor suppression using human placenta-derived intermediate natural killer (pink) cells in combination with an antibody
US20200308603A1 (en) 2017-09-29 2020-10-01 Intellia Therapeutics, Inc. In vitro method of mrna delivery using lipid nanoparticles
EP3704232A1 (en) 2017-10-31 2020-09-09 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the expansion of hematopoietic stem and progenitor cells
CN111683669A (zh) 2017-10-31 2020-09-18 美真达治疗公司 用于造血干细胞和祖细胞移植疗法的组合物和方法
US11459312B2 (en) 2017-11-21 2022-10-04 Bayer Aktiengesellschaft Sulphur substituted 3-oxo-2,3-dihydropyridazine-4-carboxamides
EP3713923B1 (en) 2017-11-21 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft 2-phenylpyrimidine-4-carboxamides as ahr inhibitors
US11304946B2 (en) 2017-11-21 2022-04-19 Bayer Aktiengesellschaft 2-hetarylpyrimidine-4-carboxamides as aryl hydrocarbon receptor antagonists
WO2019101643A1 (en) 2017-11-21 2019-05-31 Bayer Aktiengesellschaft 3-oxo-6-heteroaryl-2-phenyl-2,3-dihydropyridazine-4-carboxamides
US11260079B2 (en) 2017-12-06 2022-03-01 Magenta Therapeutics, Inc. Dosing regimens for the mobilization of hematopoietic stem and progenitor cells
CA3083783A1 (en) 2017-12-06 2019-06-13 Magenta Therapeutics, Inc. Dosing regimens for the mobilization of hematopoietic stem and progenitor cells
EP3735412B1 (en) * 2018-01-03 2024-02-21 EdiGene Biotechnology, Inc. Compositions and methods for the expansion of hematopoietic stem and progenitor cells and treatment of inherited metabolic disorders
US11530220B2 (en) 2018-02-06 2022-12-20 Ideaya Biosciences, Inc. Substituted imidazo[1,5-a]pyrazines and [1,2,4]triazolo[4,3-a]pyrazines for the modulation of AhR
WO2020018848A1 (en) * 2018-07-19 2020-01-23 Ideaya Biosciences, Inc. Methods of culturing and/or expanding stem cells and/or lineage committed progenitor cells using amido compounds
AU2019323714A1 (en) * 2018-08-24 2021-03-25 Jaguahr Therapeutics Pte Ltd Tetrahydropyridopyrimidine derivatives as AhR modulators
WO2020043880A1 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Jaguahr Therapeutics Pte Ltd Heterocyclic compounds as ahr modulators
AU2019335968B2 (en) 2018-09-07 2024-03-07 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Heterocyclic compound
US20220098613A1 (en) 2018-09-12 2022-03-31 Fred Hutchinson Cancer Research Center Reducing cd33 expression to selectively protect therapeutic cells
JP2022502476A (ja) * 2018-10-16 2022-01-11 イケナ オンコロジー， インコーポレイテッド インドールａｈｒ阻害剤およびその使用
EP3874027A4 (en) * 2018-10-31 2022-08-10 Magenta Therapeutics, Inc. PROCEDURE FOR HEMATOPOIETIC STEM AND PROGENITOR CELL TRANSPLANTATION THERAPY
WO2021028382A1 (en) 2019-08-12 2021-02-18 Bayer Aktiengesellschaft [1,2,4]triazolo[1,5-c]quinazolin-5-amines
US20220401481A1 (en) 2019-11-01 2022-12-22 Magenta Therapeutics, Inc. Dosing regimens for the mobilization of hematopoietic stem and progenitor cells
US11591339B2 (en) 2019-11-26 2023-02-28 Ikena Oncology, Inc. Solid forms of (R)-N-(2-(5-fluoropyridin-3-yl)-8-isopropylpyrazolo[ 1,5-a][1,3,5]triazin-4-yl)-2,3,4,9-tetrahydro-1H-carbazol-3-amine maleate as aryl hydrocarbon receptor (AHR) inhibitors
JP2023505366A (ja) 2019-12-09 2023-02-08 大塚製薬株式会社 アクリルアミド化合物
WO2021123920A1 (en) 2019-12-18 2021-06-24 Novartis Ag Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies
EP4110778A1 (en) 2020-02-26 2023-01-04 Jaguahr Therapeutics Pte Ltd Pyridopyrimidine derivatives useful in modulation of ahr signalling
JP2023525513A (ja) 2020-05-06 2023-06-16 セレクティス ソシエテ アノニム 細胞ゲノムにおける外因性配列の標的化挿入のための方法
JP2023525510A (ja) 2020-05-06 2023-06-16 セレクティス ソシエテ アノニム 治療用タンパク質の送達のために細胞を遺伝子改変する方法
WO2021224633A1 (en) 2020-05-06 2021-11-11 Orchard Therapeutics (Europe) Limited Treatment for neurodegenerative diseases
WO2022004864A1 (ja) 2020-07-01 2022-01-06 ネクスジェン株式会社 ヒト長期造血幹細胞マーカー
WO2022029063A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Bayer Aktiengesellschaft Pyrido[1,2,4]triazolo[1,5-c]pyrimidin-5-amines
CN114369097B (zh) * 2020-10-15 2023-07-14 山东轩竹医药科技有限公司 杂芳环类AhR抑制剂
EP4308694A1 (en) 2021-03-16 2024-01-24 Magenta Therapeutics, Inc. Dosing regimens for hematopoietic stem cell mobilization for stem cell transplants in multiple myeloma patients
EP4359527A2 (en) 2021-06-23 2024-05-01 Novartis AG Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies
WO2023150393A2 (en) 2022-02-07 2023-08-10 Ensoma, Inc. Inhibitor-resistant mgmt modifications and modification of mgmt-encoding nucleic acids
WO2024020429A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Lyell Immunopharma, Inc. Immune cell therapy
WO2024076300A1 (en) 2022-10-03 2024-04-11 Jaguahr Therapeutics Pte Ltd Compounds useful in modulation of ahr signalling

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0082369A1 (de) * 1981-12-19 1983-06-29 MERCK PATENT GmbH Imidazo(4,5-c)pyridine, diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen und Verfahren zu ihrer Herstellung
EP0682027A1 (de) * 1994-05-03 1995-11-15 Ciba-Geigy Ag Pyrrolopyrimidinderivate mit antiproliferativer Wirkung
WO2001049688A1 (en) * 2000-01-07 2001-07-12 Universitaire Instelling Antwerpen Purine derivatives, process for their preparation and use thereof
WO2003031406A2 (en) * 2001-10-12 2003-04-17 Irm Llc Kinase inhibitor scaffolds and methods for their preparation
WO2005026164A1 (en) * 2003-09-18 2005-03-24 Altana Pharma Ag Pharmacologically active imidazo[4,5-c]pyridines
WO2006024174A1 (en) * 2004-09-03 2006-03-09 Prometic Biosciences Inc. Substituted purinyl derivatives with immunomodulator and chemoprotective activity and use alone or with medium-chain length fatty acids or glycerides
WO2006035061A1 (en) * 2004-09-30 2006-04-06 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hcv inhibiting bi-cyclic pyrimidines
WO2006061380A2 (en) * 2004-12-09 2006-06-15 Altana Pharma Ag SUBSTITUTED IMIDAZO[4,5-b]PYRIDINES AS INHIBITORS OF GASTRIC ACID SECRETION
WO2009097446A1 (en) * 2008-01-30 2009-08-06 Genentech, Inc. Pyrazolopyrimidine pi3k inhibitor compounds and methods of use

Family Cites Families (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3399196A (en) 1959-01-22 1968-08-27 Ciba Geigy Corp Nu-substituted pyrazolo-pyrimidines
US5437994A (en) * 1989-06-15 1995-08-01 Regents Of The University Of Michigan Method for the ex vivo replication of stem cells, for the optimization of hematopoietic progenitor cell cultures, and for increasing the metabolism, GM-CSF secretion and/or IL-6 secretion of human stromal cells
US5117830A (en) * 1990-11-08 1992-06-02 Whitby Research, Inc. Method of determining viability of tissue
FR2732604B1 (fr) * 1995-04-07 1997-06-06 Vacsyn Sa Derives et conjugues du mdp presentant une activite stimulatrice de la fonction hematopoietique et compositions les contenant
FR2741881B1 (fr) 1995-12-01 1999-07-30 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de purine possedant notamment des prorietes anti-proliferatives et leurs applications biologiques
US6232320B1 (en) * 1998-06-04 2001-05-15 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory compounds
JP2002529502A (ja) 1998-11-17 2002-09-10 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 血小板減少症の治療法
GC0000177A (en) 1998-12-17 2006-03-29 Smithkline Beecham Thrombopoietin mimetics
DK1150982T3 (da) 1999-02-01 2005-12-27 Cv Therapeutics Inc Purininhibitorer af cylkineafhængig kinase 2 og 1kB-alfa
JP2002543126A (ja) 1999-05-03 2002-12-17 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション Ｃｘｃｒ−４受容体アンタゴニスト−トロンボポエチン模倣物
US6960439B2 (en) * 1999-06-28 2005-11-01 Source Precision Medicine, Inc. Identification, monitoring and treatment of disease and characterization of biological condition using gene expression profiles
CN1110552C (zh) * 1999-07-13 2003-06-04 中国人民解放军第二军医大学 一种体外扩增造血干细胞的新方法
DE60025632T2 (de) 1999-09-10 2006-08-10 Smithkline Beecham Corp. Thrombopoietin-mimetika
EP1223944B1 (en) 1999-09-24 2007-01-03 SmithKline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
JP2003513965A (ja) 1999-11-05 2003-04-15 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション セミカルバゾン誘導体およびそれらのトロンボポエチン模倣物としての使用
ATE344031T1 (de) 1999-12-06 2006-11-15 Smithkline Beecham Corp Thrombopoietin-mimetika
CA2394646A1 (en) 1999-12-17 2001-06-21 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Novel purines
CY2010012I2 (el) 2000-05-25 2020-05-29 Novartis Ag Μιμητικα θρομβοποιητινης
WO2002005811A1 (fr) * 2000-07-18 2002-01-24 Nichimo Co., Ltd. Substance de renforcement des cellules souches
US7241783B2 (en) 2000-12-19 2007-07-10 Smithkline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
WO2002085343A1 (en) 2001-03-01 2002-10-31 Smithkline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
ES2321819T3 (es) * 2001-12-28 2009-06-12 Asubio Pharma Co., Ltd. Promotres del crecimiento y/o diferenciacion de celulas madre hematopoyeticas y/o progenitores hematopoyeticos.
AU2003248630A1 (en) 2002-06-06 2003-12-22 Smithkline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
US20030139427A1 (en) * 2002-08-23 2003-07-24 Osi Pharmaceuticals Inc. Bicyclic pyrimidinyl derivatives and methods of use thereof
JP2004089068A (ja) * 2002-08-30 2004-03-25 Kobe University Ａｈ受容体リガンド特異的な遺伝子発現誘導因子及びその機能に基づく異種遺伝子誘導発現系の利用技術
AU2003297925A1 (en) 2002-12-13 2004-07-09 Smithkline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
US20070161582A1 (en) * 2003-08-08 2007-07-12 Dusan Mijikovic Pharmaceutical compositions and methods for metabolic modulation
AU2004308974A1 (en) 2003-12-22 2005-07-14 Gilead Sciences, Inc. Kinase inhibitor phosphonate conjugates
TW200538120A (en) 2004-02-20 2005-12-01 Kirin Brewery Compound having TGF-beta inhibitory activity and pharmaceutical composition containing same
US7622108B2 (en) * 2004-04-23 2009-11-24 Bioe, Inc. Multi-lineage progenitor cells
GB0420719D0 (en) * 2004-09-17 2004-10-20 Addex Pharmaceuticals Sa Novel allosteric modulators
FR2876583B1 (fr) 2004-10-15 2007-04-13 Centre Nat Rech Scient Cnrse Utilisation de derives de purines pour la fabrication de medicaments pour le traitement de la mucoviscidose et de maladies liees a un defaut d'adressage des proteines dans les cellules
WO2006118914A2 (en) * 2005-04-29 2006-11-09 Children's Medical Center Corporation Methods of increasing proliferation of adult mammalian cardiomyocytes through p38 map kinase inhibition
CN101213190A (zh) 2005-07-14 2008-07-02 Irm责任有限公司 用作tpo模拟物的化合物和组合物
BRPI0616994A2 (pt) 2005-08-15 2011-07-05 Irm Llc compostos e composições como miméticos de tpo
PT2013211E (pt) * 2006-04-21 2012-06-21 Novartis Ag Derivados de purina para utilização como agonistas de receptores a2a de adenosina
US20100040600A1 (en) 2006-06-14 2010-02-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agents for Promoting the Growth of Hematopoietic Stem Cells
WO2007149548A2 (en) * 2006-06-22 2007-12-27 Medistem Laboratories, Inc. Treatment of erectile dysfunction by stem cell therapy
EP1889846A1 (en) * 2006-07-13 2008-02-20 Novartis AG Purine derivatives as A2a agonists
WO2008028645A1 (en) 2006-09-05 2008-03-13 Aplagen Gmbh Peptides binding the tpo receptor
EP2617423A1 (en) 2006-10-19 2013-07-24 Genzyme Corporation Purine derivatives for the treatment of cystic diseases
US9394520B2 (en) 2006-12-08 2016-07-19 University Of Rochester Expansion of hematopoietic stem cells
US20100130516A1 (en) 2007-03-28 2010-05-27 Neurosearch A/S Purinyl derivatives and their use as potassium channel modulators
PE20100362A1 (es) * 2008-10-30 2010-05-27 Irm Llc Derivados de purina que expanden las celulas madre hematopoyeticas
US9175266B2 (en) * 2012-07-23 2015-11-03 Gamida Cell Ltd. Enhancement of natural killer (NK) cell proliferation and activity

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0082369A1 (de) * 1981-12-19 1983-06-29 MERCK PATENT GmbH Imidazo(4,5-c)pyridine, diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen und Verfahren zu ihrer Herstellung
EP0682027A1 (de) * 1994-05-03 1995-11-15 Ciba-Geigy Ag Pyrrolopyrimidinderivate mit antiproliferativer Wirkung
WO2001049688A1 (en) * 2000-01-07 2001-07-12 Universitaire Instelling Antwerpen Purine derivatives, process for their preparation and use thereof
WO2003031406A2 (en) * 2001-10-12 2003-04-17 Irm Llc Kinase inhibitor scaffolds and methods for their preparation
WO2005026164A1 (en) * 2003-09-18 2005-03-24 Altana Pharma Ag Pharmacologically active imidazo[4,5-c]pyridines
WO2006024174A1 (en) * 2004-09-03 2006-03-09 Prometic Biosciences Inc. Substituted purinyl derivatives with immunomodulator and chemoprotective activity and use alone or with medium-chain length fatty acids or glycerides
WO2006035061A1 (en) * 2004-09-30 2006-04-06 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hcv inhibiting bi-cyclic pyrimidines
WO2006061380A2 (en) * 2004-12-09 2006-06-15 Altana Pharma Ag SUBSTITUTED IMIDAZO[4,5-b]PYRIDINES AS INHIBITORS OF GASTRIC ACID SECRETION
WO2009097446A1 (en) * 2008-01-30 2009-08-06 Genentech, Inc. Pyrazolopyrimidine pi3k inhibitor compounds and methods of use

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIAGI, GIULIANA ET AL.: "Erythro- and threo-2-hydroxynonyl substituted 2-phenyladenines and 2-phenyl-8-azaadenines: ligands for A1 adenosine receptors and adenosine deaminase". FARMACO, 57(3), 221-233 CODEN: FRMCE8; ISSN: 0014-827X, 2002, XP009132849, see compounds 11 and 20 in scheme 1 on p. 223 *
BRUN, VIRGINIE ET AL.: "Traceless solid-phase synthesis of 2,6,9-trisubstituted purines from resin bound 6-thiopurines". TETRAHEDRON, 58(39), 7911-7923 CODEN: TETRAB; ISSN: 0040-4020, 2002, XP004381446, see compound 21 on p. 7914 *
DING, SHENG ET AL.: "Expanding the diversity of purine libraries". TETRAHEDRON LETTERS, 42(50), 8751-8755 CODEN: TELEAY; ISSN: 0040-4039, 2001, XP004322535, see entries 1 and 2 in table 1 on p. 8752 *
GIORGI, I. ET AL.: EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 43, no. 8, 2008, pages 1639-1647, XP23315543, see compound 18 in scheme 2 on p. 1641 *
OUMATA, N. ET AL.: JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 51, no. 17, 2008, pages 5229-5242, XP002544873, compounds 12a and 12b in table 2 on p. 5233 *
VANDROMME, LUCIE ET AL.: "Suzuki-type Pd(0) coupling reactions in the synthesis of 2-arylpurines as Cdk inhibitors". 2006, BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, 16(12), 3144-3146 CODEN: BMCLE8; ISSN: 0960-894X, XP0025106196, see compound 17 on p. 3145 *
WAN, Z. FT AL.: BIOORGANIC & MEDICAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 13, no. 6, 2003, pages 1191-1194, XP009132793, see compound 5 in scheme 1 on p. 1192 *

Also Published As

Publication number Publication date
HUE044802T2 (hu) 2019-11-28
GEP20146053B (en) 2014-03-10
CA3061937A1 (en) 2010-05-27
TW201028153A (en) 2010-08-01
HN2011001195A (es) 2014-01-13
JP2012507554A (ja) 2012-03-29
EP2350078A2 (en) 2011-08-03
IL212368A0 (en) 2011-06-30
SI2350078T1 (sl) 2019-08-30
WO2010059401A3 (en) 2010-09-23
DK2350078T3 (da) 2019-07-15
CN102203096A (zh) 2011-09-28
AR074063A1 (es) 2010-12-22
ECSP11011090A (es) 2011-09-30
JO3593B1 (ar) 2020-07-05
HRP20191238T1 (hr) 2019-11-29
BRPI0921799B1 (pt) 2020-09-29
CU24495B1 (es) 2021-01-12
SMAP201100024A (it) 2011-07-11
AU2009317898A1 (en) 2010-05-27
NZ592435A (en) 2013-01-25
DOP2011000114A (es) 2017-09-29
LT2350078T (lt) 2019-07-25
JP5390626B2 (ja) 2014-01-15
US9580426B2 (en) 2017-02-28
EP3524604B1 (en) 2023-03-29
AU2009317898B2 (en) 2013-07-11
US20140114070A1 (en) 2014-04-24
BRPI0921799A2 (pt) 2016-01-12
WO2010059401A2 (en) 2010-05-27
PE20100362A1 (es) 2010-05-27
MX2011004593A (es) 2011-06-16
TWI532486B (zh) 2016-05-11
MA32828B1 (fr) 2011-11-01
IL212368A (en) 2015-02-26
MY155137A (en) 2015-09-15
US20170239296A1 (en) 2017-08-24
US20100183564A1 (en) 2010-07-22
PL2350078T3 (pl) 2019-09-30
EP3524604A1 (en) 2019-08-14
SMP201100024B (it) 2012-03-05
RS59027B1 (sr) 2019-08-30
US20210187033A1 (en) 2021-06-24
BRPI0921799B8 (pt) 2021-05-25
PT2350078T (pt) 2019-07-19
MX347834B (es) 2016-10-07
CY1121857T1 (el) 2020-07-31
TN2011000174A1 (en) 2012-12-17
CA2740589C (en) 2017-11-21
NI201100083A (es) 2011-11-03
CO6410309A2 (es) 2012-03-30
EA201100663A1 (ru) 2011-12-30
CR20110192A (es) 2011-06-10
CA2943540C (en) 2020-10-27
SV2011003888A (es) 2011-07-05
CU20110096A7 (es) 2012-01-31
ES2736728T3 (es) 2020-01-07
ES2948567T3 (es) 2023-09-14
CL2013001874A1 (es) 2014-04-04
CL2009002010A1 (es) 2010-06-25
CA2740589A1 (en) 2010-05-27
CN102203096B (zh) 2014-09-17
CA2943540A1 (en) 2010-05-27
KR20110075042A (ko) 2011-07-05
EP2350078B1 (en) 2019-04-17
US8927281B2 (en) 2015-01-06
KR101434719B1 (ko) 2014-08-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA019872B1 (ru) Соединения, которые увеличивают количество гематопоэтических стволовых клеток
US10336747B2 (en) Pyrimido[4,5-B]indole derivatives and use thereof in the expansion of hematopoietic stem cells
WO2020264398A1 (en) Substituted benzyl-triazole compounds for cbl-b inhibition, and further uses thereof
KR20210149757A (ko) Cbl-b 억제용의 3-치환된 피페리딘 화합물, 및 암 백신 및/또는 종양용해 바이러스와 조합된 cbl-b 억제제의 용도
KR20190138837A (ko) 아릴 탄화수소 수용체 길항제 및 이의 용도
EA018484B1 (ru) Соединения и композиции в качестве ингибиторов протеинкиназы
WO2012102937A2 (en) Compounds that expand hematopoietic stem cells
WO2019089833A1 (en) Compositions and methods for hematopoietic stem and progenitor cell transplant therapy
AU2013203936A1 (en) Compounds that expand hematopoietic stem cells

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ MD

PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title
PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
MA4A Surrender of the eurasian patent at the request of the proprietor in the following designated state(s)

Designated state(s): TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): KG