EA019359B1

EA019359B1 - Injectable dosage form for the treatment of an acute ischaemic insult and cranial trauma and use thereof

Info

Publication number: EA019359B1
Application number: EA201101246A
Authority: EA
Inventors: Олег Константинович ГРАНСТРЕМ; Ирина Валерьевна НИКИТИНА; Петр Петрович РОДИОНОВ
Original assignee: Общество С Ограниченной Ответственностью "Герофарм"
Priority date: 2009-09-15
Filing date: 2010-09-07
Publication date: 2014-03-31
Also published as: RU2431496C2; WO2011034464A1; EA201101246A1; RU2009134280A

Abstract

An injectable dosage form for the treatment of an acute insult and cranial trauma comprises a therapeutically effective quantity of Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro and at least one substance selected from the group of antioxidants comprising β-carotene, retinyl acetate, α-tocopheryl acetate, ascorbic acid, lutein, quercetin, rutin (vitamine B), dihydroquercetin, butylhydroxytoluene, α-lipoic acid, L-carnitine, succinic acid, and also, but not necessarily, one auxiliary selected from the group consisting of stabilizers, prolonging agents, buffering additives, emulsifying solubilizers, solvents, fillers, preservatives and other auxiliaries permitted for medical use. The preparation provides a high neuroprotective effect in the case of acute, severe lesions in the CNS in different models of insult and cranial trauma and has high stability and a prolonged shelf life of more than 3 years.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к лечению нарушений функций центральной нервной системы (ЦНС), вызванных ишемическими и травматическими поражениями, а также области фармакологии, а именно к разработке и изготовлению новой инъекционной лекарственной формы ранее известной субстанции - гептапептида последовательности Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго.The invention relates to medicine, namely to the treatment of dysfunctions of the central nervous system (CNS) caused by ischemic and traumatic lesions, as well as the field of pharmacology, namely to the development and manufacture of a new injectable dosage form of a previously known substance - heptapeptide sequence Me! -C1i -N15-Rye-Rgo-C1u-Rgo.

Предшествующий уровень техникиState of the art

Лечение нарушений функции ЦНС, вызванных ишемическими и травматическими поражениями мозга, является сложной комплексной задачей. Одним из перспективных современных подходов является нейропротекторная терапия, направленная на улучшение выживания нейронов в пораженной области и нормализацию нейропластических процессов в мозге в целом. Среди нейропротекторных препаратов известны различные классы веществ и различные лекарственные формы. Так, например, ряд препаратов, обладающих нейропротекторными свойствами (пирацетам, ноопепт, глиатилин), представлены в таблетированной форме. Однако использование таблетированных нейропротекторных средств малоэффективно при острых состояниях, связанных с потерей сознания (инсульт, тяжелая черепно-мозговая травма), и у детей раннего возраста.The treatment of CNS dysfunctions caused by ischemic and traumatic brain injuries is a complex task. One of the promising modern approaches is neuroprotective therapy, aimed at improving the survival of neurons in the affected area and normalizing neuroplastic processes in the brain as a whole. Among neuroprotective drugs, various classes of substances and various dosage forms are known. So, for example, a number of drugs with neuroprotective properties (piracetam, noopept, gliatilin) are presented in tablet form. However, the use of tablet neuroprotective agents is ineffective in acute conditions associated with loss of consciousness (stroke, severe traumatic brain injury), and in young children.

Известен пептид Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго в качестве стимулятора памяти пролонгированного действия (патент СССР № 939440, кл. С07С 103/52, 1981). Описана возможность применения этого гептапептида в качестве средства лечения ишемического инсульта при интраназальном введении (патент РФ № 2124365, 1997/1999). Интраназальное введение нейропротекторых агентов, в том числе пептидной природы, является перспективным направлением (препараты Семакс - гептапептид Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго, Селанк). Этот способ введения имеет ряд положительных сторон, таких как высокая биодоступность, низкая дозировка и безболезненность для пациента при введении. Тем не менее, одним из ограничений этого способа введения является необходимость частого (до 7 и более раз в сутки) введения препарата, технические сложности при введении больших доз, что, в целом, делает проблематичным использование интраназального введения при лечении острых тяжелых поражений ЦНС.Known peptide Me! -C1i-H15-Rie-Pro-Clo-Cl-Pro as a stimulant of memory of prolonged action (USSR patent No. 939440, class C07C 103/52, 1981). The possibility of using this heptapeptide as a treatment for ischemic stroke with intranasal administration is described (RF patent No. 2124365, 1997/1999). Intranasal administration of neuroprotective agents, including peptide nature, is a promising direction (Semax preparations - the heptapeptide Me! -C1i-H15-Rie-Rgo-C1u-Rgo, Selank). This method of administration has a number of positive aspects, such as high bioavailability, low dosage and painlessness for the patient upon administration. However, one of the limitations of this method of administration is the need for frequent (up to 7 or more times a day) administration of the drug, technical difficulties in administering large doses, which, in general, makes it difficult to use intranasal administration in the treatment of acute severe CNS lesions.

Наиболее широкое распространение в медицинской практике получили инъекционные пептидные нейропротекторные препараты, такие как кортексин, церебролизин, известна инъекционная форма препарата ноопепт (патент РФ № 2330680, 09.12.2005). Инъекционное введение наибольшим образом соответствует целям и условиям проведения экстренной терапии при острых тяжелых поражениях ЦНС, таких как инсульт и черепно-мозговая травма (ЧМТ), и практике ренимационных мероприятий.The most widespread in medical practice are injectable peptide neuroprotective drugs, such as cortexin, cerebrolysin, the injectable form of the drug noopept is known (RF patent No. 2330680, 12/09/2005). Injection administration is most suitable for the goals and conditions of emergency therapy for acute severe central nervous system lesions, such as stroke and traumatic brain injury (TBI), and the practice of renimation measures.

Таким образом, применение гептапептида последовательности Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго в составе препарата Семакс для интраназального введения при острых тяжелых поражениях ЦНС, таких как ишемический инсульт и ЧМТ, обладает рядом существенных отличий и недостатков:Thus, the use of the heptapeptide of the sequence Me! -C1i-H15-Rye-Progo-C1u-Progo as part of the Semax preparation for intranasal administration in acute severe CNS lesions, such as ischemic stroke and head injury, has a number of significant differences and disadvantages:

при применении интраназального введения необходимо частое (до 7 и более раз в сутки) введение препарата пациенту;when using intranasal administration, frequent (up to 7 or more times a day) administration of the drug to the patient is necessary;

имеются технические сложности при одновременном введении рекомендованных терапевтических доз интраназальным способом;there are technical difficulties with the simultaneous administration of the recommended therapeutic doses by the intranasal method;

эффективность интраназального введения и биодоступность препарата во многом определяются состоянием слизистой носоглотки пациента, при этом интраназальное введение существующей лекарственной формы не оправдано при простудном, травматическом или ином поражении таковой;the effectiveness of intranasal administration and the bioavailability of the drug are largely determined by the condition of the patient’s nasopharyngeal mucosa, while the intranasal administration of the existing dosage form is not justified for a cold, traumatic or other lesion of such;

хранение пептидного препарата в растворе для интраназального применения приводит к пониженной стабильности действующего вещества, что обеспечивает срок использования два года и требует специального температурного режима 8-10°С.storage of the peptide preparation in a solution for intranasal administration leads to reduced stability of the active substance, which provides a shelf life of two years and requires a special temperature regime of 8-10 ° C.

Известно применение пептида Семакса формулы Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго в качестве антитромболитического, антикоагулянтного, фибринодеполимеризационного и фибринолитического средства для внутривенного введения (патент РФ № 2286168). В этом случае 1 мг препарата Семакс Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго предложено растворять в 1,5 мл физиологического раствора и вводить внутривенно лабораторным крысам по 0,5 мл (200 мкг) на 200 г массы тела. Однако использование подобного раствора пептида имеет ряд недостатков, связанных с нестабильностью пептидов в растворе вообще, и Семакса в частности, в растворах, в отсутствие стабилизирующих и буферных компонентов. Кроме того, в настоящее время отсутствует лекарственная форма, позволяющая осуществить предложенную процедуру в клинике. Поэтому представленные в патенте РФ № 2286168 результаты имеют экспериментальную ценность, но не могут быть применены в практической медицине.It is known to use the Semax peptide of the formula Me! -C1i-H15-Rie-Rgo-C1u-Rgo as an antithrombolytic, anticoagulant, fibrinodepolymerization and fibrinolytic agent for intravenous administration (RF patent No. 2286168). In this case, it was proposed to dissolve 1 mg of the drug Semax Me! -C1i-H15-Rie-Rgo-C1u-Rgo in 1.5 ml of physiological saline and 0.5 ml (200 μg) per 200 g of body weight administered to laboratory rats. However, the use of such a solution of the peptide has a number of disadvantages associated with the instability of the peptides in the solution in general, and Semax in particular in solutions, in the absence of stabilizing and buffering components. In addition, there is currently no dosage form that allows the implementation of the proposed procedure in the clinic. Therefore, the results presented in the patent of the Russian Federation No. 2286168 have experimental value, but cannot be applied in practical medicine.

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

Задачей настоящего изобретения является создание инъекционной лекарственной формы препарата Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго, который пригоден для лечения острого ишемического инсульта и черепномозговой травмы и может длительное время храниться в виде раствора и эмульсии для непосредственного введения, а также в лиофилизированном виде и в виде сухой рассыпки.The objective of the present invention is to provide an injectable dosage form of the preparation Me! -C1i-H15-Rie-Rgo-C1u-Rgo, which is suitable for the treatment of acute ischemic stroke and traumatic brain injury and can be stored for a long time in the form of a solution and emulsion for direct administration, as well as in lyophilized form and in the form of dry powder.

Другая задача состоит в повышении эффективности действия гептапептида Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы.Another objective is to increase the effectiveness of the Me! -C1i-H15-Rie-Rgo-C1u-Rgo heptapeptide for the treatment of acute ischemic stroke and traumatic brain injury.

Поставленные задачи решены тем, что предложена инъекционная лекарственная форма на основе гептапептида последовательности Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго для лечения острого ишемического инThe tasks are solved in that an injectable dosage form based on a heptapeptide of the sequence Me! -C1i-H15-Rie-Rgo-C1u-Rgo for the treatment of acute ischemic in

- 1 019359 сульта и черепно-мозговой травмы, которая согласно изобретению содержит в качестве действующего вещества терапевтически эффективное количество гептапептида Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго и по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы антиоксидантов, включающих β-каротин, ретинола ацетат, α-токоферола ацетат, аскорбиновую кислоту, лютеин, кверцетин, рутин (витамин Р), дигидрокверцетин, бутилгидрокситолуол, α-липоевую кислоту, Ь-карнитин, янтарную кислоту, а также, не обязательно, по меньшей мере одно вспомогательное вещество, выбранное из группы, включающей стабилизаторы, пролонгаторы, буферирующие добавки, эмульгаторы-солюбилизаторы, растворители, наполнители, консерванты и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению. Предложенная композиция содержит преимущественно следующее соотношение компонентов, мас.%:- 1 019359 sult and traumatic brain injury, which according to the invention contains as active ingredient a therapeutically effective amount of the heptapeptide Me1-C1i-H18-Rye-Rgo-C1u-Rgo and at least one substance selected from the group of antioxidants including β- carotene, retinol acetate, α-tocopherol acetate, ascorbic acid, lutein, quercetin, rutin (vitamin P), dihydroquercetin, butylhydroxytoluene, α-lipoic acid, b-carnitine, succinic acid, and, optionally, at least one auxiliary substance selected The second group includes stabilizers, prolongers, buffering additives, emulsifiers, solubilizers, solvents, fillers, preservatives and other auxiliary substances that are approved for medical use. The proposed composition contains mainly the following ratio of components, wt.%:

гептапептид 0,0002 - 99,99998, антиоксидант 0,00002- 99,9998, вспомогательные вещества до 100.heptapeptide 0.0002 - 99.99998, antioxidant 0.00002 - 99.9998, excipients up to 100.

При этом композиция содержит в качестве стабилизатора по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей трилон Б, натрия метабисульфит, натрия тиосульфат, глицин, аргинин, гистидин, лизин или их физиологически приемлемые соли, например, такие как гидрохлорид, сульфат, ацетат, глутамат, аспартат и малеат;Moreover, the composition contains as stabilizer at least one substance selected from the group comprising Trilon B, sodium metabisulfite, sodium thiosulfate, glycine, arginine, histidine, lysine or their physiologically acceptable salts, for example, such as hydrochloride, sulfate, acetate, glutamate, aspartate and maleate;

в качестве пролонгатора - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей поливинилпирролидон с молекулярной массой 10-60 кДа, декстран с молекулярной массой 10-100 кДа, например полиглюкин или реополиглюкин, поливиниловый спирт, натрий карбоксиметилцеллюлозу;at least one substance selected from the group consisting of polyvinylpyrrolidone with a molecular weight of 10-60 kDa, dextran with a molecular weight of 10-100 kDa, for example polyglukin or reopoliglukin, polyvinyl alcohol, sodium carboxymethyl cellulose;

в качестве буферирующей добавки - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей натрия хлорид, натрия/калия гидро- и/или дигидрофосфат, натрия или аммония ацетат;as a buffering agent, at least one substance selected from the group consisting of sodium chloride, sodium / potassium hydro and / or dihydrogen phosphate, sodium or ammonium acetate;

в качестве эмульгатора-солюбилизатора - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей соевый лецитин для инъекций, полисорбат-20, полисорбат-60, полисорбат-80, спан-20, спан-40, спан-60, спан-85, додецилсульфат натрия;as an emulsifier-solubilizer, at least one substance selected from the group comprising soya lecithin for injection, polysorbate-20, polysorbate-60, polysorbate-80, span-20, span-40, span-60, span-85, sodium dodecyl sulfate;

в качестве растворителя - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей воду для инъекций, масло оливковое, масло персиковое, масло подсолнечное;as a solvent, at least one substance selected from the group comprising water for injection, olive oil, peach oil, sunflower oil;

в качестве наполнителя - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей сорбит, маннит, ксилит, лактозу, сахарозу, декстрозу, сополимер О,Ь-молочной и гликолевых кислот;as a filler, at least one substance selected from the group consisting of sorbitol, mannitol, xylitol, lactose, sucrose, dextrose, a copolymer of O, L-lactic and glycolic acids;

в качестве консерванта - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей хлорбутанолгидрат, спирт этиловый, спирт бензиловый, фенол, хлоркрезол, кислоту бензойную, кислоту сорбиновую, мертиолат, нипагин, нипазол, бензалкония хлорид, бензэтония хлорид, цетилпиридиния хлорид, диметилдодецилбензиламмония хлорид.as a preservative, at least one substance selected from the group consisting of chlorobutanol hydrate, ethyl alcohol, benzyl alcohol, phenol, chlorocresol, benzoic acid, sorbic acid, merthiolate, nipagin, nipazole, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, cetylpyridinium chloride, cetylpyridyl chloride, cetylpyridyl chloride, cetylpyridyl chloride, cetylpyridyl chloride .

Предлагаемая инъекционная лекарственная форма может быть выполнена в виде лиофилизированного порошка, сухой рассыпки, эмульсии, раствора для внутримышечного или внутривенного введения или раствора для инфузии.The proposed injectable dosage form can be in the form of a lyophilized powder, dry powder, emulsion, solution for intramuscular or intravenous administration, or solution for infusion.

Сущность изобретения заключается в том, что, как было экспериментально установлено, добавление к пептиду Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго хотя бы одного из перечисленных выше антиоксидантов значительно потенцирует фармакологическую активность этого пептида, что позволяет снизить концентрацию пептида в лекарственной форме и получить более выраженный фармакологический результат.The essence of the invention lies in the fact that, as has been experimentally established, the addition of at least one of the above antioxidants to the Me1-C1i-H18-Rye-Progo-C1u-Progo peptide significantly potentiates the pharmacological activity of this peptide, thereby reducing the concentration of the peptide in the drug form and get a more pronounced pharmacological result.

Таким образом, предложенная инъекционная форма обладает свойствами, способствующими повышению эффективности терапии (выраженность нейропротекторного эффекта) острых тяжелых поражений ЦНС, таких как ишемический инсульт и черепно-мозговая травма, за счет увеличения биодоступности пептида, снижения кратности введения препарата в течение суток, облегчения введения необходимой терапевтической дозы и обеспечения точности дозирования необходимой терапевтической дозы.Thus, the proposed injection form has properties that enhance the effectiveness of therapy (severity of the neuroprotective effect) of acute severe CNS lesions, such as ischemic stroke and traumatic brain injury, by increasing the bioavailability of the peptide, reducing the frequency of administration of the drug during the day, and facilitating the administration of the necessary therapeutic dose and ensure the accuracy of dosing of the necessary therapeutic dose.

Помимо перечисленных выше терапевтических преимуществ, предлагаемая инъекционная форма обладает стабильностью при комнатной температуре, более длительным сроком хранения (по меньшей мере 3 года) по сравнению с лекарственной формой для интраназального введения, и не требует специальных температурных условий хранения и транспортировки.In addition to the above therapeutic advantages, the proposed injection form is stable at room temperature, has a longer shelf life (at least 3 years) compared to the intranasal dosage form, and does not require special temperature conditions for storage and transportation.

Предложены следующие возможные составы инъекционной формы пептида Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго, разработанные экспериментально.The following possible compositions of the injectable form of the Me1-C1i-H18-Rye-Progo-C1u-Progo peptide, which were developed experimentally, are proposed.

В виде сухой рассыпки на одну ампулу или флакон:In the form of dry powder on one ampoule or bottle:

гептапептид Ме(-61и-Н18-Р11е-Рго-01у-Рго 0,001- 0,02г,heptapeptide Me (-61i-H18-P11e-Rgo-01u-Rgo 0.001-0.02g,

рутин routine 0,0005 - 0,025г, 0.0005 - 0.025g, глицин glycine 0,00 - 0,025г, 0.00 - 0.025g лактозу lactose 0,005 - 0,50 г; 0.005-0.50 g;

илиor

- 2 019359- 2 019359

0,001 - 0,020г.,0.001-0.020g.,

0,0005 -0,050г,0.0005-0.050g,

0,0001 -0,01 г,0.0001-0.01 g

0,0001 -0,005г,0.0001-0.005g,

0,0001 -0,0025г,0.0001-0.0025g,

0,005-0,5 г;0.005-0.5 g;

гептапептид Ме!-О1и-Н1з-Рке-Рго-О1у-Рго аскорбиновую кислоту натрия хлорид натрия гидрофосфат натрия дигидрофосфат маннит или гептапептид Ме!-О1и-Н13-Рйе-Рго-О1у-Рго аскорбиновую кислоту α-липоевую кислоту глицинheptapeptide Me! -O1i-H1z-Рke-Рgo-О1у-Рго ascorbic acid sodium sodium chloride sodium hydrogen phosphate dihydrogen phosphate mannitol or heptapeptide Me! -O1i-Н13-Рее Рго-О1у-Рго ascorbic acid glycine α-lipoic acid

В виде раствора на одну ампулу или флакон:In the form of a solution for one ampoule or bottle:

гептапептид Ме!-С1и-Н13-РЬе-Рго-01у-Ргоheptapeptide Me! -C1i-H13-Pb-Rgo-01u-Rgo

0,001 -0,020г,0.001-0.020g

0,0005 - 0,050г,0.0005 - 0.050g,

0,0005 - 0,025г,0.0005 - 0.025g,

0,005-0,050г.0.005-0.050g.

кверцетин поливинилпирролидон трилон-Б глицин вода для инъекцийquercetin polyvinylpyrrolidone trilon-B glycine water for injection

В виде раствора для инфузий на один флакон:In the form of a solution for infusion on one bottle:

гептапептид Ме(-С1и-Н1з-Рйе-Рго-О1у-Рго аскорбиновую кислотуheptapeptide Me (-C1i-H1z-Rie-Rgo-O1u-Rgo ascorbic acid

0,001 -0,020 г,0.001-0.020 g

0,0005-0,010г,0.0005-0.010g,

0,0005 - 0,050г,0.0005 - 0.050g,

0,00 -0,0 Юг,0.00 -0.0 South,

0,0001 -0,050г, до I мл.0.0001-0.050g, up to I ml.

янтарную кислоту лизинsuccinic acid lysine

0,001 -0,020г,0.001-0.020g

0,0001 -0,500г,0.0001-0.500g

0,0001 -0,300г,0.0001-0.300g

0,000.00

- 0,03г,- 0.03 g,

-12,0 г, декстран с молекулярной массой 10-100 кДа раствор натрия хлорида 0,9% изотонический или раствор глюкозы 5-10% 100,0 - 500,0 мл.-12.0 g, dextran with a molecular weight of 10-100 kDa 0.9% isotonic sodium chloride solution or 5-10% glucose solution 100.0 - 500.0 ml.

В качестве флаконов или контейнеров для инфузии могут быть использованы флаконы или контейнеры из полипропилена.As bottles or containers for infusion, bottles or containers made of polypropylene can be used.

В виде эмульсии на одну ампулу или флакон:In the form of an emulsion per ampoule or vial:

Г ептапептид Мес-СЛи-Шз-РЬе-Рго-СИу-Рго α-токоферола ацетатG eptapeptide Mes-SLi-Sz-Pb-Rie-Siu-Rgo α-tocopherol acetate

Полисорбат-80Polysorbate-80

НипазолNipazole

Воду для инъекцийWater for injection

0,001 -0,02г,0.001-0.02 g

0,0005 - 0,050г,0.0005 - 0.050g,

0,0001 -0,0 Юг,0.0001-0.0 South,

0,0005-0,0001 г,0.0005-0.0001 g,

0,1 - 0,5 мл,0.1 - 0.5 ml

Масло оливковое 1,5-1,9 мл.Olive oil 1.5-1.9 ml.

Предложен способ приготовления лекарственной формы для инъекционного введения путем смешивания гептапептида Мс1-С1и-Н|5-Р11с-Рго-С1у-Рго с антиоксидантом и по меньшей мере одним соответствующим вспомогательным веществом и, при необходимости, стерилизация инъекционной лекарственной формы; розлив раствора в ампулы, флаконы или контейнеры для инфузионных растворов; сушку растворов в сублимационной установке; запайку ампул или укупорку флаконов с готовой продукцией.A method is proposed for preparing a dosage form for injection by mixing the heptapeptide Mc1-C1i-H | 5-P11c-Rgo-C1u-Rgo with an antioxidant and at least one appropriate auxiliary substance and, if necessary, sterilizing the injectable dosage form; pouring the solution into ampoules, vials or containers for infusion solutions; drying solutions in a sublimation unit; sealing ampoules or corking finished product bottles.

Широкий интервал концентраций вспомогательных веществ обусловлен тем, что вещества, обладающие антиоксидантной активностью, способствуют проявлению синергетического эффекта при включении их в состав инъекционного препарата в широком диапазоне концентраций. В частности, добавки антиоксидантов даже в самых минимальных дозах значительно стабилизируют молекулу гептапептида последовательности Мс1-С1и-Н|5-Р11с-Рго-С1у-Рго и потенцируют его фармакологическую активность. При увеличении концентрации антиоксиданта в составе препарата антиоксидант не только потенцирует фармакологический эффект пептида, но и проявляет свое терапевтическое действие, чем еще больше потенцирует фармакологический эффект препарата. Концентрация вспомогательных веществ других групп, например пролонгаторов (поливинилпирролидон 0,05-50,0 мг, декстран: от 1,0 до 12,0 г), подобрана в соответствии со способом применения и дозировками в клинической практике.A wide range of concentrations of excipients is due to the fact that substances with antioxidant activity contribute to the manifestation of a synergistic effect when included in the composition of the injection drug in a wide range of concentrations. In particular, antioxidant additives, even at the lowest doses, significantly stabilize the heptapeptide molecule of the Mc1-C1i-H | 5-P11c-Progo-C1u-Progo sequence and potentiate its pharmacological activity. With an increase in the concentration of antioxidant in the composition of the drug, the antioxidant not only potentiates the pharmacological effect of the peptide, but also manifests its therapeutic effect, which further potentiates the pharmacological effect of the drug. The concentration of auxiliary substances of other groups, for example, prolongators (polyvinylpyrrolidone 0.05-50.0 mg, dextran: 1.0 to 12.0 g), is selected in accordance with the method of application and dosages in clinical practice.

- 3 019359- 3 019359

Предложенный состав лекарственного средства позволяет использовать его для внутримышечных и внутривенных инъекций, а также в составе инфузионных растворов, что позволяет использовать новые лекарственные формы в тех случаях, когда применение интраназальной формы не эффективно. Таким образом, использование лекарственного средства в терапии создает удобства при проведении экстренных реанимационных мероприятий.The proposed composition of the drug allows it to be used for intramuscular and intravenous injections, as well as in the composition of infusion solutions, which allows the use of new dosage forms in cases where the use of the intranasal form is not effective. Thus, the use of the drug in therapy creates convenience during emergency resuscitation.

Краткое описание иллюстрацийBrief Description of the Illustrations

Для лучшего понимания изобретения ниже приведены примеры конкретного получения предложенных лекарственных форм со ссылками на прилагаемые иллюстрации, где:For a better understanding of the invention, the following are examples of specific preparation of the proposed dosage forms with reference to the accompanying illustrations, where:

на фиг. 1 изображены кривые динамики неврологического статуса у крыс с неполной глобальной ишемией при экспериментальной терапии предлагаемыми лекарственными формами на основе Ме!-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго (п=15, *р<0,05 в сравнении с группой контроля (физ. раствор) и 1% раствором Ме!-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго) к примеру 9;in FIG. 1 shows the dynamics of the neurological status in rats with incomplete global ischemia during experimental therapy with the proposed dosage forms based on Me! -C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo (n = 15, * p <0.05 in comparison with the control group (saline solution) and a 1% solution of Me! -C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo) for example 9;

на фиг. 2 изображены кривые смертности крыс в группах с неполной глобальной ишемией при экспериментальной терапии новыми лекарственными формами на основе субстанции Ме!-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго (п=15, *Р₁=0,002; Р₂=0,010; Р₃=0,012; Р₄=0,009; Р₅=0,05 по отношению к контрольной группе соответственно) к примеру 11.in FIG. Figure 2 shows the mortality curves of rats in groups with incomplete global ischemia during experimental therapy with new dosage forms based on the substance Me! -C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo (n = 15, * P ₁ = 0.002; P ₂ = 0.010; P ₃ = 0.012; P ₄ = 0.009; P ₅ = 0.05 with respect to the control group, respectively) for example 11.

Примеры осуществления изобретенияExamples of carrying out the invention

Далее представлены примеры получения лекарственных форм гептапептида последовательности Ме!-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго для инъекционного введения: жидкие формы (растворы и эмульсии для инъекций), твердые формы (сухие стерильные рассыпки, лиофилизированные порошки для приготовления растворов для инъекций), приведены возможные составы каждого вида инъекционной лекарственной формы и описание свойств полученного препарата.The following are examples of the preparation of heptapeptide dosage forms of the Me! -C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo sequence for injection: liquid forms (solutions and emulsions for injection), solid forms (dry sterile powders, lyophilized powders for the preparation of injection solutions ), the possible compositions of each type of injectable dosage form and a description of the properties of the resulting preparation are given.

Пример 1. Получение сухой стерильной рассыпки для инъекций.Example 1. Obtaining a dry sterile powder for injection.

Для получения стабильной инъекционной лекарственной формы гептапептида последовательности Ме!-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго методом сухой рассыпки в асептических условиях готовят тритурации из стерильных гептапептида и вспомогательных веществ. В качестве наполнителя в композиции для получения сухой рассыпки могут быть использованы вышеперечисленные сорбит, маннит, ксилит, лактоза, сахароза, декстроза, сополимер О,Ь-молочной и гликолевых кислот; вещества, оказывающие стабилизирующий эффект на молекулу гептапептида (глицин, аргинин, гистидин, лизин или их физиологически приемлемые соли), и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению.To obtain a stable injectable heptapeptide dosage form of the Me! -C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo sequence, triturations from sterile heptapeptide and excipients are prepared by dry crushing under aseptic conditions. The above sorbitol, mannitol, xylitol, lactose, sucrose, dextrose, copolymer of O, L-lactic and glycolic acids can be used as a filler in the composition for obtaining dry powder; substances that have a stabilizing effect on the heptapeptide molecule (glycine, arginine, histidine, lysine or their physiologically acceptable salts), and other auxiliary substances approved for medical use.

Конкретная фармацевтическая композиция была выполнена в твердой стерильной форме, в виде сухой рассыпки. Препарат по внешнему виду представляет собой аморфный порошок или пористую массу белого с желтоватым оттенком или желтого цвета в ампуле или флаконе.The particular pharmaceutical composition was in sterile solid form, in the form of a dry powder. The drug in appearance is an amorphous powder or a porous mass of white with a yellowish tint or yellow in an ampoule or vial.

В ампуле или флаконе содержится гептапептид, г:The heptapeptide contains in an ampoule or vial, g:

гептапептид МеЬС1и-Н1й-РЬе-Рго-О1у-Рго heptapeptide MebCl1-H1y-Pb-Rgo-O1u-Rgo 0,0015 0.0015 рутин routine 0,0075 0.0075 глицин glycine 0,01 0.01 лактоза lactose 0,30 0.30

При употреблении содержимое ампулы или флакона растворяют в 1-2 мл воды для инъекций или изотонического 0,9% раствора натрия хлорида или в 0,5-1% раствора прокаина непосредственно перед инъекцией.When used, the contents of the ampoule or vial are dissolved in 1-2 ml of water for injection or isotonic 0.9% sodium chloride solution or in 0.5-1% procaine solution immediately before injection.

Пример 2. Получение сухой стерильной рассыпки для инъекций.Example 2. Obtaining a dry sterile powder for injection.

Для получения стабильной инъекционной лекарственной формы гептапептида последовательности Ме!-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго методом сухой рассыпки в асептических условиях готовят раздельно два порошка следующих составов:To obtain a stable injectable heptapeptide dosage form of the Me! -C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo sequence, two powders of the following compositions are prepared separately under aseptic conditions by dry crushing:

А) смешивая стерильные гептапептид последовательности Ме!-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго и наполнитель из перечисленных выше;A) mixing sterile heptapeptide sequences Me! -C1i-H18-Rie-Progo-C1u-Pro and a filler of the above;

Б) смешивая вспомогательное вещество из группы антиоксидантов с буферирующими добавками. В качестве антиоксидантов в композиции для получения сухой рассыпки могут быть использованы аскорбиновая кислота, рутин (витамин Р), лютеин, кверцетин, дигидрокверцетин, β-каротин, бутилгидрокситолуол, α-липоевая кислота, Ь-карнитин, янтарная кислота. В качестве буферирующей добавки в композиции для получения сухой рассыпки могут быть использованы натрия хлорид, натрия/калия гидрои/или дигидрофосфаты, натрия или аммония ацетаты и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению.B) mixing an auxiliary substance from the group of antioxidants with buffering additives. As antioxidants, ascorbic acid, rutin (vitamin P), lutein, quercetin, dihydroquercetin, β-carotene, butylhydroxytoluene, α-lipoic acid, L-carnitine, succinic acid can be used in the composition for obtaining dry powder. Sodium chloride, sodium / potassium hydroi / or dihydrogen phosphates, sodium or ammonium acetates and other auxiliary substances approved for medical use can be used as a buffering additive in the composition for obtaining dry powder.

Полученные порошки А и Б объединяют и фасуют в ампулы или флаконы в асептических условиях.The obtained powders A and B are combined and packaged in ampoules or vials under aseptic conditions.

Конкретная фармацевтическая композиция была выполнена в твердой стерильной форме, в виде сухой рассыпки и по внешнему виду представляет собой аморфный порошок или пористую массу белого или белого с желтоватым оттенком цвета в ампуле или флаконе.The specific pharmaceutical composition was made in solid sterile form, in the form of dry powder and in appearance it was an amorphous powder or a porous mass of white or white with a yellowish tint in an ampoule or vial.

- 4 019359- 4 019359

В ампуле или флаконе содержится, г:Contained in an ampoule or vial, g:

гептапептид Ме(-Ст1и-Н15-РЬе-Рго-01у-Рго heptapeptide Me (-St1i-H15-Pb-Rgo-01u-Rgo 0,00250: 0.00250: аскорбиновая кислота vitamin C 0,0050 0.0050 натрия хлорид sodium chloride 0,003 0.003 натрия гидрофосфат sodium hydrogen phosphate 0,003 0.003 натрия дигидрофосфат sodium dihydrogen phosphate 0,0015 0.0015 маннит mannitol 0,2 0.2

Пример 3. Получение инъекционного водного раствора.Example 3. Obtaining an injectable aqueous solution.

Для приготовления стабильного инъекционного раствора в воде для инъекций сначала растворяют вспомогательные вещества из групп антиоксидантов, пролонгаторов, стабилизаторов и др. В качестве антиоксидантов в композиции для инъекционного водного раствора могут быть использованы аскорбиновая кислота, рутин (витамин Р), кверцетин, дигидрокверцетин, β-каротин, α-липоевая кислота, Ь-карнитин, янтарная кислота. В качестве пролонгаторов в композиции для инъекционного водного раствора могут быть использованы поливинилпирролидон с молекулярной массой 10-60 кДа, декстран с молекулярной массой 10-100 кДа (полиглюкин или реополиглюкин), поливиниловый спирт, натрий карбоксиметилцеллюлоза. В качестве стабилизаторов в композиции для инъекционного водного раствора могут быть использованы трилон Б, натрия метабисульфит, натрия тиосульфат, глицин, аргинин, гистидин, лизин или их физиологически приемлемые соли (гидрохлорид, сульфат, ацетат, глутамат, аспартат и малеат). Затем в полученном растворе вспомогательных веществ растворяют гептапептид Ме!-С1ц-Н15Рйе-Рго-С1у-Рго. Полученный раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации в асептических условиях, пропуская через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы или флаконы в атмосфере инертного газа, осуществляют запайку ампул или укупорку и обкатку флаконов с готовой продукцией.To prepare a stable injection solution in water for injection, first dissolve auxiliary substances from the groups of antioxidants, prolongators, stabilizers, etc. As antioxidants, ascorbic acid, rutin (vitamin P), quercetin, dihydroquercetin, β- can be used in the composition for injection water. carotene, α-lipoic acid, L-carnitine, succinic acid. Polyvinyl pyrrolidone with a molecular weight of 10-60 kDa, dextran with a molecular weight of 10-100 kDa (polyglyukin or reopoliglukin), polyvinyl alcohol, sodium carboxymethyl cellulose can be used as prolongators in the composition for injectable aqueous solution. Trilon B, sodium metabisulfite, sodium thiosulfate, glycine, arginine, histidine, lysine or their physiologically acceptable salts (hydrochloride, sulfate, acetate, glutamate, aspartate and maleate) can be used as stabilizers in the composition for injectable aqueous solution. Then in the resulting solution of excipients dissolve the heptapeptide Me! -Cl1-H15Rie-Rgo-Clu-Rgo. The resulting solution is sterilized by membrane filtration under aseptic conditions, passing through a filter with a pore diameter of 0.22 μm, poured into ampoules or vials in an inert gas atmosphere, ampoules are sealed or sealed and run-in bottles with finished products.

Конкретная фармацевтическая композиция выполнена в жидкой форме, по внешнему виду представляет собой прозрачную жидкость, расфасованную в ампулы или флаконы. В одной ампуле/флаконе содержитсяA specific pharmaceutical composition is made in liquid form, in appearance it is a clear liquid, packaged in ampoules or vials. One ampoule / vial contains

гептапептид Ме1-С1и-Н15-РЬе-Рго-01у-Рго heptapeptide Me1-C1i-H15-Rb-Rgo-01u-Rgo 0,00350 г 0.00350 g кверцетин quercetin 0,0010 г 0.0010 g поливинилпирролидон polyvinylpyrrolidone 0,0015 г 0.0015 g трилон-Б trilon-B 0,0010 г 0.0010 g глицин glycine 0,0050 г 0.0050 g вода для инъекций water for injections до 1 мл up to 1 ml

Полученный препарат готов для непосредственных инъекций.The resulting preparation is ready for direct injection.

Пример 4. Получение инъекционного раствора для инфузий.Example 4. Obtaining an injection solution for infusion.

Для приготовления стабильного инъекционного раствора для инфузий в воде для инъекций растворяют поочередно вспомогательные вещества из групп пролонгаторов, стабилизаторов, антиоксидантов. В полученном растворе вспомогательных веществ растворяют гептапептид Ме!-С1и-Н15-Рйе-Рго-С1у-Рго.To prepare a stable injection solution for infusion in water for injection, auxiliary substances from the groups of prolongators, stabilizers, antioxidants are alternately dissolved. In the resulting solution of excipients, the heptapeptide Me! -C1i-H15-Rie-Rgo-C1u-Rgo is dissolved.

Раствор, содержащий все компоненты, стерилизуют методом мембранной фильтрации в асептических условиях на фильтрационной установке, осуществляя предварительную фильтрацию через кассеты с диаметром пор 0,45 мкм и стерилизующую фильтрацию через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм. Стерильный инъекционный раствор для инфузий разливают во флаконы или контейнеры из полипропилена для инфузионных растворов, осуществляют укупорку и обкатку флаконов, запайку контейнеров с готовой продукцией.A solution containing all components is sterilized by membrane filtration under aseptic conditions on a filtration unit, by preliminary filtration through cartridges with a pore diameter of 0.45 μm and sterilizing filtration through membranes with a pore diameter of 0.22 μm. Sterile injectable solution for infusion is poured into bottles or containers made of polypropylene for infusion solutions, cork and run the bottles, seal containers with finished products.

Фармацевтическая композиция выполнена в жидкой форме, по внешнему виду представляет собой прозрачную жидкость, во флаконе или контейнере из полипропилена для инфузионных растворов. Во флаконе содержится:The pharmaceutical composition is made in liquid form, in appearance it is a clear liquid, in a bottle or container made of polypropylene for infusion solutions. The vial contains:

гептапептид Ме1-С11и-Н18-РЬе-Рго-СНу-Рго аскорбиновая кислота янтарная кислота лизин декстран (с молекулярной массой 10-100 кДа) раствор натрия хлорида 0,9% изотоническийheptapeptide Ме1-С11и-Н18-Рее-Рго-СНу-Рго ascorbic acid succinic acid lysine dextran (with a molecular weight of 10-100 kDa) 0.9% sodium chloride solution isotonic

0,020г,0.020g

0,3 50г,0.3 50g

0,250г,0.250g

0,020г,0.020g

12,0 г,12.0 g

200 мл.200 ml.

- 5 019359- 5 019359

Препарат готов для непосредственного употребления.The drug is ready for direct use.

Пример 5. Получение инъекционного раствора для инфузий ех 1етроге.Example 5. Obtaining an injection solution for infusion ex 1trog.

В отличие от способа приготовления инъекционного раствора для инфузий, описанного в примере 4, для получения стабильного инъекционного раствора для инфузий может быть использован технологический прием, позволяющий готовить раствор для внутривенного введения в отделениях интенсивной терапии и реанимации, а также при оказании скорой медицинской помощи ех 1етроге. Для этого используют изотонический раствор натрия хлорида для инфузий как базисный раствор, к которому добавляют основной раствор, содержащий вспомогательные вещества из групп антиоксидантов или стабилизаторов и гептапептид последовательности Ме1-О1и-Н18-Рйе-Рго-О1у-Рго. В качестве базисного раствора в композиции для инъекционного раствора для инфузий могут быть использованы препараты Полиглюкин (6%-ный изотонический раствор декстрана со средней молекулярной массой около 70 кДа) или Реополиглюкин (10%-ный изотонический раствор декстрана с молекулярной массой 30-40 кДа), по меньшей мере один из вышеперечисленных антиоксидантов.In contrast to the method for preparing an injection solution for infusion described in Example 4, a technological technique can be used to obtain a stable injection solution for infusion, which makes it possible to prepare a solution for intravenous administration in intensive care and resuscitation units, as well as when providing emergency medical care ex troge . For this, an isotonic solution of sodium chloride for infusion is used as a base solution, to which a basic solution is added containing auxiliary substances from the groups of antioxidants or stabilizers and the heptapeptide of the sequence Me1-O1i-H18-Rie-Progo-O1u-Pro. Polyglukin (6% isotonic dextran solution with an average molecular weight of about 70 kDa) or Reopoliglukin (10% isotonic dextran solution with a molecular weight of 30-40 kDa) can be used as a base solution in the composition for an injection solution for infusion at least one of the above antioxidants.

Для приготовления стабильного инъекционного раствора для инфузий стерильный порошок гептапептида последовательности Ме1-61и-Нщ-Рйе-Рго-01у-Рго растворяют во флаконе в 1-2 мл 10%-ного раствора кислоты аскорбиновой для инъекций. Приготовленный основной раствор шприцем вводят во флакон базисного раствора или контейнер полимерный для инфузионных растворов, соблюдая правила асептики. Готовый инфузионный раствор вводят внутривенно капельно.To prepare a stable injection solution for infusions, a sterile heptapeptide powder of the sequence Me1-61i-Nsch-Rie-Rgo-01u-Rgo is dissolved in a bottle in 1-2 ml of a 10% solution of ascorbic acid for injection. The prepared stock solution is injected with a syringe into the vial of the base solution or a polymer container for infusion solutions, observing aseptic rules. Ready infusion solution is administered intravenously.

Приготовленная ех 1етроге фармацевтическая композиция выполнена в жидкой форме, по внешнему виду представляет собой прозрачную жидкость, во флаконе или контейнере полимерном из полипропилена для инфузионных растворов. Во флаконе/контейнере содержится гептапептид Ме1-О1и-Н1£-Рке-Рго-О1у-Рго 0,020г, раствор кислоты аскорбиновой 10% 2 мл, раствор полиглюкин (6%-ный раствор декстрана с молекулярной массой 10-100 кДа в изотоническом растворе натрия хлорида) 200 мл.The pharmaceutical composition prepared by ex-troges is made in liquid form, in appearance it is a transparent liquid, in a bottle or container made of polypropylene polymer for infusion solutions. The vial / container contains the heptapeptide Me1-O1i-H1 £ -Pke-Rgo-O1y-Rgo 0.020g, a solution of ascorbic acid 10% 2 ml, a solution of polyglucin (6% solution of dextran with a molecular weight of 10-100 kDa in an isotonic solution sodium chloride) 200 ml.

Пример 6. Получение инъекционного раствора в виде эмульсии.Example 6. Obtaining an injection solution in the form of an emulsion.

Для уменьшения гидролитических процессов при контакте гептапептида Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго с водой и для включения в состав препарата антиоксидантов, проявляющих гидрофобную активность, в качестве растворителя для получения инъекционного раствора могут быть использованы неводные растворители, в частности жирные масла (масло оливковое, масло персиковое, масло подсолнечное), и вещества, позволяющие получить однородные дифильные системы из группы эмульгаторов (солюбилизаторов). В качестве эмульгаторов в композиции для инъекционного раствора в виде эмульсии может быть использовано по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей соевый лецитин для инъекций, полисорбат-20, полисорбат-60, полисорбат-80, спан-20, спан-40, спан-60, спан-85, додецилсульфат натрия.To reduce the hydrolytic processes upon contact of the heptapeptide Me1-C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo with water and to include antioxidants that exhibit hydrophobic activity in the preparation, non-aqueous solvents, in particular fatty ones, can be used as a solvent for the injection oils (olive oil, peach oil, sunflower oil), and substances that make it possible to obtain homogeneous diphilic systems from the group of emulsifiers (solubilizers). At least one substance selected from the group consisting of soya lecithin for injection, polysorbate-20, polysorbate-60, polysorbate-80, span-20, span-40, can be used as emulsifiers in the composition for injection in the form of an emulsion. Span-60, Span-85, sodium dodecyl sulfate.

В качестве антиоксидантов в композиции для инъекционного раствора в виде эмульсии может быть использован любой из вышеперечисленных антиоксидантов. Для увеличения антимикробной стабильности препарата в состав композиции может быть включен один из вышеперечисленных консервантов. В масле оливковом растворяют полисорбат-80, нипазол, масляный раствор витамина Е (α-токоферола ацетат). Гептапептид Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго растворяют в минимальном количестве воды для инъекций. Полученный водный раствор действующего вещества при перемешивании количественно переносят в масляный раствор, содержащий антиоксидант, консервант и эмульгатор.As antioxidants in the composition for injection in the form of an emulsion, any of the above antioxidants can be used. To increase the antimicrobial stability of the drug, one of the above preservatives may be included in the composition. Polysorbate-80, nipazole, an oil solution of vitamin E (α-tocopherol acetate) are dissolved in olive oil. The heptapeptide Me1-S1i-H18-Rye-Pro-S1u-Pro is dissolved in a minimum amount of water for injection. The resulting aqueous solution of the active substance with stirring is quantitatively transferred to an oil solution containing an antioxidant, preservative and emulsifier.

Конкретная фармацевтическая композиция была выполнена в жидкой форме, по внешнему виду представляет собой вязкую жидкость, в ампуле или флаконе. В ампуле/флаконе содержится:A specific pharmaceutical composition was made in liquid form, in appearance it is a viscous liquid in an ampoule or vial. The ampoule / vial contains:

гептапептид Ме1-С1и-Н1з-РЬе-Рго-О1у-Рго heptapeptide Me1-C1i-H1z-Rb-Rgo-O1u-Rgo 0,002г, 0.002g α-токоферола ацетат α-tocopherol acetate 0,020г, 0.020g полисорбат-80 polysorbate-80 0,01 Ог, 0.01 Og, нипазол nipazole 0,001г, 0.001g вода для инъекций water for injections 0,25 мл, 0.25 ml масло оливковое olive oil до 2 мл. up to 2 ml.

Пример 7. Получение лиофилизированного порошка для приготовления раствора для инъекций.Example 7. Obtaining lyophilized powder for the preparation of a solution for injection.

Для получения стабильного при хранении и хорошо растворимого лиофилизированного порошка для приготовления раствора для инъекций применяют вспомогательные формообразующие вещества из групп наполнителей, стабилизаторов, буферирующих добавок, пролонгаторов.To obtain a stable during storage and well soluble lyophilized powder for the preparation of a solution for injection, auxiliary excipients from the groups of fillers, stabilizers, buffering additives, and prolongators are used.

Фармацевтическая композиция на основе гептапептида Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго может быть получена любым известным способом лиофилизации. Один из таких способов включает следующие стадии.A pharmaceutical composition based on the heptapeptide Me1-C1i-H18-Rye-Progo-C1u-Progo can be obtained by any known lyophilization method. One such method involves the following steps.

- 6 019359- 6 019359

1. Приготовление раствора для розлива.1. Preparation of the filling solution.

Растворение гептапептида Ме!-О1и-Н18-Рйе-Рго-О1у-Рго в воде для инъекций.Dissolution of the heptapeptide Me! -O1i-H18-Rye-Progo-O1u-Progo in water for injection.

Добавление антиоксиданта и вспомогательных веществ.Addition of antioxidant and excipients.

2. Стерилизующая фильтрация, которая включает предварительную и стерилизующую фильтрацию на последовательно установленных фильтрах Ра11 с диаметром пор 0,5 и 0,22 мкм.2. Sterilizing filtration, which includes preliminary and sterilizing filtration on sequentially installed Ra11 filters with pore diameters of 0.5 and 0.22 microns.

3. Асептический розлив раствора в ампулы или флаконы.3. Aseptic filling of the solution into ampoules or vials.

4. Сублимационная сушка раствора в сублимационной установке. Кассеты помещают в установку для сублимационной сушки и замораживают в течение 4 ч до температуры -45°С. Сушку проводят при остаточном давлении от 100 до 120 мкм рт. ст. в течение 48 ч.4. Freeze-drying of the solution in a freeze-drying unit. The cassettes are placed in a freeze-drying machine and frozen for 4 hours to a temperature of -45 ° C. Drying is carried out at a residual pressure of from 100 to 120 μm RT. Art. within 48 hours

5. Запайка ампул, укупорка и закатка флаконов с готовым продуктом.5. Sealing of ampoules, capping and filling of bottles with the finished product.

6. Упаковка и маркировка.6. Packaging and labeling.

Фармацевтическая композиция выполнена в стерильной твердой форме, по внешнему виду представляет собой аморфный порошок или рыхлую таблетку в ампуле или флаконе. В каждой ампуле или флаконе содержится:The pharmaceutical composition is made in sterile solid form, in appearance it is an amorphous powder or a loose tablet in an ampoule or vial. Each vial or vial contains:

гептапептид Ме1-С1и-Н15-РЬе-Рго-Ст1у-Рго heptapeptide Me1-C1i-H15-Rb-Rgo-St1u-Rgo 0,002г, 0.002g аскорбиновая кислота vitamin C 0,0 Юг, 0.0 South, α-липоевая кислота α-lipoic acid 0,002г, 0.002g глицин glycine 0,026г. 0.026g.

При использовании содержимое ампулы или флакона растворяют в 1-2 мл воды для инъекций или изотонического 0,9% раствора натрия хлорида или в 0,5-1% раствора прокаина непосредственно перед инъекцией.When using, the contents of the ampoule or vial are dissolved in 1-2 ml of water for injection or isotonic 0.9% sodium chloride solution or in 0.5-1% procaine solution immediately before injection.

Пример 8. Влияние инъекционных форм предлагаемой композиции на объем некроза при развитии фокального инсульта.Example 8. The effect of injection forms of the proposed composition on the volume of necrosis with the development of focal stroke.

В работе использовали крыс популяции ^У181аг. В экспериментах использовали крыс возрастом 14 недель и весом 253,2±35,6 г. Срок карантина составил 10 дней. Крыс содержали в стандартных условиях: 12-часовой регулируемый режим день-ночь, свободный доступ к воде и пище, по 8 крыс в стандартной клетке Т4 смешанно - животные контрольной и экспериментальных групп. Для кормления использовали полноценный комбикорм для содержания крыс в условиях вивария, дополнительных прикормов не вводили. Животные были разделены на шесть экспериментальных групп, по 9-11 крыс в каждой группе.In the study, rats of the U181ag population were used. In the experiments, rats were used, aged 14 weeks and weighing 253.2 ± 35.6 g. The quarantine period was 10 days. Rats were kept under standard conditions: a 12-hour adjustable day-night regimen, free access to water and food, 8 rats in a standard T4 cage were mixed — animals of the control and experimental groups. For feeding, we used full-fledged compound feed for keeping rats in vivarium conditions; no additional feeding was introduced. Animals were divided into six experimental groups, 9-11 rats in each group.

Изучение эффектов пептидных препаратов на объем поражения мозга при ишемическом инсульте проводили на модели фокального инсульта по модифицированной методике (Сйеи, 1964). Операцию проводили под наркозом, 400 мг/кг хлоралгидрата внутрибрюшинно. Ишемическое повреждение создавали окклюзией левой ветви средней мозговой артерии и подходящей к ней вены с одновременной перевязкой ипсилатеральной сонной артерии для стабилизации объема поражения. Экспериментальные препараты пептида Ме!-О1и-Нщ-Рйе-Рго-О1у-Рго вводили внутрибрюшинно в дозе 150 мкг/кг в объеме 100 мкл на 100 г веса животного через 15 мин и 2 ч 15 мин после коагуляции средней мозговой артерии и в той же дозе через 24 и 48 ч после операции. 1% раствор гептапептида Ме!-61и-Н18-Рйе-Рго-61у-Рго вводили инъекционно в той же дозе. Контрольной группе вводили инъекционно физиологический раствор в эквивалентном объеме. Через 72 ч наркотизированных (400 мг/кг хлоралгидрата внутрибрюшинно) крыс декапитировали, мозг извлекали для определения объема некроза. Для определения размера области поражения коры мозга срезы толщиной 1,5-2 мм окрашивали 1% раствором 2,3,5-трифенилтетразолиум хлорид (ТТХ), выявляющим дегидрогеназную активность живых клеток. Размер инфаркта мозга измеряли планиметрически при помощи программы Аис7.The effects of peptide drugs on the volume of brain damage in ischemic stroke were studied on the model of focal stroke using a modified method (Syey, 1964). The operation was performed under anesthesia, 400 mg / kg of chloral hydrate intraperitoneally. Ischemic damage was created by occlusion of the left branch of the middle cerebral artery and a suitable vein with simultaneous ligation of the ipsilateral carotid artery to stabilize the volume of the lesion. The experimental preparations of the Me! -O1i-Nsch-Ryye-Rgo-O1u-Rgo peptide were administered intraperitoneally at a dose of 150 μg / kg in a volume of 100 μl per 100 g of animal weight 15 minutes and 2 hours 15 minutes after coagulation of the middle cerebral artery and in that the same dose 24 and 48 hours after surgery. A 1% solution of the heptapeptide Me! -61i-H18-Rye-Rgo-61u-Rgo was injected in the same dose. The control group was injected with physiological saline in an equivalent volume. After 72 h, anesthetized (400 mg / kg chloral hydrate intraperitoneally) rats were decapitated, the brain was removed to determine the volume of necrosis. To determine the size of the lesion area of the cerebral cortex, sections 1.5–2 mm thick were stained with 1% solution of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTX), revealing the dehydrogenase activity of living cells. The size of brain infarction was measured planimetrically using the Ais7 program.

- 7 019359- 7 019359

Таблица 1Table 1

Размер поражения коры головного мозга у крыс с фокальным инсультомThe size of the lesion of the cerebral cortex in rats with focal stroke

Лекарственная форма Dosage form Размер поражения (% от общего объема коры левого полушария мозга) The size of the lesion (% of the total cortex of the left hemisphere of the brain) 1 one Гептапептид Ме1-С1и-Н1з-Р11е-Рго-О1у-Рго 5 мас.%, аскорбиновая кислота 25 мас.%, α-липоевая кислота 5 мас.%, глицин 65 мас.%. (пример 7) Heptapeptide Me1-C1i-H1z-P11e-Rgo-O1u-Rgo 5 wt.%, ascorbic acid 25 wt.%, α-lipoic acid 5 wt.%, glycine 65 wt.%. (example 7) 5,1±0,3 * 5.1 ± 0.3 * 2 2 Гептапептид МеЮ1и-Н1з-РЬе-Рго-О1у-Рго 0,47 мас.%, рутин 2,35 мас.%, глицин 3,14 мас.%, лактоза 94,04 мас.%. (пример 1) Heptapeptide MeU1i-H1z-Rb-Rgo-O1u-Rgo 0.47 wt.%, Rutin 2.35 wt.%, Glycine 3.14 wt.%, Lactose 94.04 wt.%. (example 1) 5,3±0,4* 5.3 ± 0.4 * 3 3 Гептапептид Ме!-С1и-Н1з-РЬе-Рго-С1у-Рго 0,35 мас.%, кверцетин 0,10 мас.%, поливинилпирролидон 0,15 мас.%, трилон-Б 0,10 мас.%, глицин 0,50 мас.%, вода для инъекций до 1 мл (пример 3). Heptapeptide Me! -C1i-H1z-Pb-Rgo-C1u-Rgo 0.35 wt.%, Quercetin 0.10 wt.%, Polyvinylpyrrolidone 0.15 wt.%, Trilon-B 0.10 wt.%, Glycine 0 , 50 wt.%, Water for injection up to 1 ml (example 3). 6,4±0,6* 6.4 ± 0.6 * 4 4 Гептапептид МеЮ1и-Н1з-РЬе-Рго-О1у-Рго 0,1 мас.%, атокоферола ацетат 1,0 мас.%, полисорбат-80 0,5 мас.%, нипазол 0,05 мас.%, вода для инъекций 12,5 мас.%, масло оливковое до 2 мл (85,85 мас.%) (пример 6) Heptapeptide MeU1i-H1z-Pb-Rgo-O1u-Rgo 0.1 wt.%, Atocoferol acetate 1.0 wt.%, Polysorbate-80 0.5 wt.%, Nipazole 0.05 wt.%, Water for injection 12 5 wt.%, Olive oil up to 2 ml (85.85 wt.%) (Example 6) 6,0±0,7* 6.0 ± 0.7 * 5 5 Гептапептид Ме1-Сг1и-Н18-РНе-Рго-Сг1у-Рго 1,0 мас.%, раствор натрия хлорида изотонической 0,9% 1 мл. Heptapeptide Me1-Cr1i-H18-RNe-Rgo-Cr1y-Rgo 1.0 wt.%, Sodium chloride solution isotonic 0.9% 1 ml. 8,3±1,5 8.3 ± 1.5 6 6 Физиологический р-р (раствор натрия хлорида изотонической 0,9%) - контроль Physiological solution (sodium chloride solution isotonic 0.9%) - control 9,5±2,4 9.5 ± 2.4

Примечание: *Р<0,05 по отношению к группам 5 и 6.Note: * P <0.05 with respect to groups 5 and 6.

По результатам этой серии экспериментов можно заключить, что инъекционные формы гептапептида Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго защищают мозг крыс от ишемии, размер некроза значимо снижен по сравнению с группами контроля (6) и инъекционного введения 1% раствора гептапептида Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго в растворе натрия хлорида изотоническом 0,9%.According to the results of this series of experiments, it can be concluded that the injectable forms of the heptapeptide Me1-C1i-H18-Rie-Pro-C1o-Prgo protect the brain of rats from ischemia, the size of necrosis is significantly reduced in comparison with the control groups (6) and injection of 1% heptapeptide solution Ме1-С1и-Н18-Рее-Рго-С1у-Рго in a solution of sodium chloride 0.9% isotonic.

Пример 9. Изучение влияние инъекционных форм гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго на модели неполной глобальной ишемии мозга у крыс.Example 9. The study of the effect of injectable forms of the heptapeptide of the sequence Me1-C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo on the model of incomplete global brain ischemia in rats.

Исследование проводили на крысах популяции ΧνίδΙαΓ весом 165,5±15,7 г. Животные были разделены на шесть экспериментальных групп, по 15 крыс в каждой группе.The study was conducted on rats of the ΧνίδΙαΓ population weighing 165.5 ± 15.7 g. Animals were divided into six experimental groups, 15 rats in each group.

Оценку неврологической симптоматики и смертности животных при ишемическом поражении мозга крыс оценивали в модели неполной глобальной ишемии мозга (Нокктапи К.-А., 1998). Неполную глобальную ишемию мозга создавали необратимой одновременной перевязкой двух сонных артерий под эфирным наркозом. Для профилактики реперфузии на каждый из двух сосудов накладывали две лигатуры, между которыми сосуд перерезали. Эфирный наркоз позволяет практически сразу вести наблюдение за развитием неврологической симптоматики и не вызывает защитного действия на мозг при развитии ишемии (МсСга\у. 1977). Препараты пептида Ме1-61и-Нщ-Рйе-Рго-61у-Рго вводили внутрибрюшинно в дозе 150 мкг/кг в объеме 100 мкл на 100 г веса животного через 15 мин и 2 ч 15 мин после перевязки сонных артерий в день операции и в той же дозе один раз в сутки еще в течение 4 дней после операции. 1% раствор гептапептида Ме1-С1и-Нй-Р11е-Рго-С1у-Рго вводили инъекционно в той же дозе. Контрольной группе вводили инъекционно физиологический раствор в эквивалентном объеме. В течение 10 суток оценивали динамику веса и смертность животных.Assessment of neurological symptoms and mortality of animals with ischemic damage to rat brain was evaluated in a model of incomplete global brain ischemia (Noctapi K.-A., 1998). Incomplete global brain ischemia was created by irreversible simultaneous ligation of two carotid arteries under ether anesthesia. To prevent reperfusion, two ligatures were placed on each of the two vessels, between which the vessel was cut. Essential anesthesia allows you to almost immediately monitor the development of neurological symptoms and does not cause a protective effect on the brain during the development of ischemia (MsGa \ u. 1977). Peptide preparations Me1-61i-Nsch-Rye-Rgo-61u-Rgo were administered intraperitoneally at a dose of 150 μg / kg in a volume of 100 μl per 100 g of animal weight 15 minutes and 2 hours 15 minutes after ligation of the carotid arteries on the day of surgery and in that the same dose once a day for another 4 days after surgery. A 1% solution of the heptapeptide Me1-C1i-Ni-P11e-Progo-C1u-Progo was injected in the same dose. The control group was injected with physiological saline in an equivalent volume. Within 10 days, weight dynamics and animal mortality were evaluated.

После одномоментной двусторонней перевязки общих сонных артерий развивается выраженная симптоматика неврологического дефицита, выражающаяся сначала в ограничении подвижности животного, появлении птозов (опущение верхнего века, обусловленное нарушением функции мышцы, поднимающей его), затем насильственных движений, или пропульсий: кружений и прыжков, вращательных, клонических и тонических судорожных припадков в течение нескольких часов после окклюзии общих сонных артерий, парезов (уменьшение силы или амплитуды произвольных движений, обусловленное нарушением иннервации соответствующих мышц) и параличей (выпадение двигательной функции в результате патологических процессов в нервной системе) конечностей, затем наступает кома - животное дышит, но не реагирует на раздражения, и, в конечном счете, животное умирает. Состояние каждого животного после перевязки сонных артерий оценивали по балльной шкале каждые 30 мин в течение 10 ч и на следующие сутки. Определенный балл приписан каждому признаку, возникающему у животных после ишемии. Накопленные баллы суммировали каждые 30 мин, общий балл характеризует тяжесть неврологического дефицита: 0-3 балла - состояние оценивается как близкое к нормальному, 3-6 - средней тяжести, 7-24 - тяжелое, 25 баллов по шкале Саркисовой - смерть. Результат по оценке развития неврологического дефицита по шкале Саркисовой представлен на фиг. 1. Как видно из фиг. 1, животные исследуемых групп, которым вводили гептапептид последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго в лекарственных формах в соответствии с табл. 1 к примеру 8, имеют одинаковый средний балл и динамику развития неврологического статуса. Статистически эти группы достоверно отличаются от группы контроля (физиологический р-р) начиная со 2-го часа развития ишемии и группы инъекционного введения 1% расAfter simultaneous bilateral ligation of the common carotid arteries, a pronounced symptomatology of neurological deficiency develops, which is expressed first in the restriction of the animal’s mobility, the appearance of ptosis (omission of the upper eyelid due to impaired muscle function that lifts it), then violent movements, or propulsions: circles and jumps, rotational, clonic and tonic convulsive seizures within a few hours after occlusion of the common carotid arteries, paresis (decrease in the strength or amplitude of voluntary movements Due to violation of the innervation of the relevant muscles) and paralysis (loss of motor function as a result of pathological processes in the nervous system) limbs, then coma - the animal breathes, but does not respond to stimuli, and, ultimately, the animal dies. The condition of each animal after ligation of the carotid arteries was evaluated on a point scale every 30 minutes for 10 hours and the next day. A specific score is assigned to each trait that occurs in animals after ischemia. The accumulated points were summed up every 30 minutes, the total score characterizes the severity of neurological deficit: 0-3 points - the condition is estimated as close to normal, 3-6 - moderate, 7-24 - severe, 25 points on the Sarkisova scale - death. The result of assessing the development of neurological deficit according to the Sarkisova scale is presented in FIG. 1. As can be seen from FIG. 1, animals of the studied groups that were injected with the heptapeptide of the sequence Me1-C1i-H18-Rye-Progo-C1u-Progo in dosage forms in accordance with table. 1 for example 8, have the same average score and the dynamics of the development of neurological status. Statistically, these groups significantly differ from the control group (physiological solution) starting from the 2nd hour of the development of ischemia and the injection group of 1% races

- 8 019359 твора Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго. Статистическая обработка результатов позволяет говорить о том, что разработанные лекарственные формы на основе гептапептида Ме1-61и-Нк-Рйе-Рго-61у-Рго, введенные внутрибрюшинно в дозе 150 мкг/кг, облегчают неврологический статус по сравнению с контрольной группой животных.- 8 019359 of Me1-C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo. Statistical processing of the results suggests that the developed dosage forms based on the heptapeptide Me1-61 and Nk-Rye-Rgo-61u-Rgo, administered intraperitoneally at a dose of 150 μg / kg, facilitate neurological status compared with the control group of animals.

Пример 10. Частота появления крыс с легким и тяжелым проявлением неврологической симптоматики при неполной глобальной ишемии мозга на фоне экспериментальной терапии инъекционными лекарственными формами гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго.Example 10. The incidence of rats with mild and severe manifestations of neurological symptoms with incomplete global cerebral ischemia during experimental treatment with heptapeptide injectable dosage forms of the Me1-C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo sequence.

Эксперимент проводили в соответствии с методикой, описанной в примере 9. Облегчение неврологического статуса обусловлено появлением большего числа животных с легкой формой неврологического дефицита в этих группах. В этой серии экспериментов при обработке данных опирались на оценку частоты появления крыс с легким и тяжелым течением болезни (табл. 2). Из табл. 2 следует, что гептапептид последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго, введенный в виде предлагаемых препаратов внутрибрюшинно в острую стадию развития ишемического поражения, вызывает облегчение неврологического статуса крыс. Инъекционное введение 1% раствора указанного гептапептида приводило к снижению тяжелых форм на уровне тенденции.The experiment was carried out in accordance with the procedure described in example 9. Relief of the neurological status is due to the appearance of a larger number of animals with a mild form of neurological deficiency in these groups. In this series of experiments, the data processing relied on an estimate of the incidence of rats with mild and severe course of the disease (Table 2). From the table. 2 it follows that the heptapeptide of the sequence Me1-C1i-H18-Rye-Progo-C1u-Progo, introduced in the form of the proposed drugs intraperitoneally in the acute stage of development of ischemic lesion, causes a relief of the neurological status of rats. Injection of a 1% solution of the indicated heptapeptide led to a decrease in severe forms at the trend level.

Таблица 2table 2

Соотношение крыс с легким и тяжелым неврологическим дефицитом в разных экспериментальных группахThe ratio of rats with mild and severe neurological deficit in different experimental groups

Экспериментальные группы Experimental groups Число крыс с тяжелой симптоматикой The number of rats with severe symptoms Число крыс с легкой симптоматикой The number of rats with mild symptoms Статистически значимые различия по сравнению с Statistically significant differences compared to контрольной группой control group Гептапептид Ме1-О1и-НЬРЬе-Рго-О1у-Рго 5 мас.%, аскорбиновая кислота 25 мас.%, α-липоевая кислота 5 мас.%, глицин 65 мас.%. (пример 7) Heptapeptide Ме1-О1и-НЬРе-Рго-О1у-Рго 5 wt.%, Ascorbic acid 25 wt.%, Α-lipoic acid 5 wt.%, Glycine 65 wt.%. (example 7) 3 3 12 12 Р = 0,006 P = 0.006 Гептапептид Ме1-О1и-Н18РЬе-Рго-С1у-Рго 1,17 мас.%, аскорбиновая кислота 2,34 мас.%, натрия хлорид 1,40 мас.%, натрия гидрофосфат 1,40 мас.%, натрия дигидрофосфат 0,70 мас.%, маннит 93,02 мас.%. (пример 2) Heptapeptide Ме1-О1и-Н18Ре-Рго-С1у-Рго 1,17 wt.%, ascorbic acid 2.34 wt.%, sodium chloride 1.40 wt.%, sodium hydrogen phosphate 1.40 wt.%, sodium dihydrogen phosphate 0.70 wt.%, mannitol 93.02 wt.%. (example 2) 5 5 10 10 Р = 0,035 P = 0.035 Гептапептид Ме1-С1и-Н15Рйе-Рго-СНу-Рго 0,35 мас.%, кверцетин 0,10 мас.%, поливинилпирролидон 0,15 мас.%, трилон-Б 0,10 мас.%, глицин 0,50 мас.%, вода для инъекций до 1 мл (пример 3). Heptapeptide Me1-C1i-H15Rie-Rgo-SNu-Rgo 0.35 wt.%, Quercetin 0.10 wt.%, Polyvinylpyrrolidone 0.15 wt.%, Trilon-B 0.10 wt.%, Glycine 0.50 wt. .%, water for injection up to 1 ml (example 3). 4 4 11 eleven Р = 0,035 P = 0.035 Гептапептид Ме1-О1и-Н1вРЬе-Рго-01у-Рго 0,1 мас.%, α-токоферола ацетат 1,0 мас.%, полисорбат-80 0,5 мас.%, нипазол 0,05 мас.%, вода для инъекций 12,5 мас.%, масло оливковое до 2 мл (85,85 мас.%) (пример 6) Heptapeptide Ме1-О1и-Н1вРЬе-Рго-01у-Рго 0.1 wt.%, Α-tocopherol acetate 1.0 wt.%, Polysorbate-80 0.5 wt.%, Nipazole 0.05 wt.%, Water for injection of 12.5 wt.%, olive oil up to 2 ml (85.85 wt.%) (example 6) 6 6 9 nine Р = 0,009 P = 0.009 Гептапептид Ме1-О1и-Т-115РЬе-Рго-СИу-Рго 1,0 мас.%, раствор натрия хлорида изотонический 0,9% 1 мл. The heptapeptide Me1-O1i-T-115PbE-Pro-SIu-Pro is 1.0 wt.%, The sodium chloride solution is isotonic 0.9% 1 ml. 7 7 8 8 Р = 0,052 P = 0.052 Физиологический р-р (раствор натрия хлорида изотонический 0,9%) - контроль Physiological solution (isotonic sodium chloride solution 0.9%) - the control 13 thirteen 3 3

- 9 019359- 9 019359

Пример 11. Смертность крыс с неполной глобальной ишемией мозга при экспериментальной терапии инъекционными лекарственными формами гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н15-Р11С -Рго -С1у -Рго.Example 11. Mortality of rats with incomplete global cerebral ischemia during experimental therapy with injectable dosage forms of the heptapeptide of the sequence Me1-C1i-H15-P11C-Prgo-C1u-Prgo.

Эксперимент проводили в соответствии с методикой, описанной в примере 9. Во время острого периода развития ишемии введение инъекционных форм гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго предотвращало смертность крыс. В группах, получавших эти препараты в первые 12 ч эксперимента, умерло значимо меньше крыс, чем в контрольной группе (фиг. 2). Однако общая смертность животных через 10 суток после эксперимента одинакова и не отличается в этих группах. Таким образом, разработанные инъекционные лекарственные формы достоверно расширяют терапевтическое окно при ишемическом поражении головного мозга, но не являются заменой общих реанимационных мероприятий.The experiment was carried out in accordance with the procedure described in example 9. During the acute period of development of ischemia, the introduction of injectable heptapeptide sequences of the sequence Me1-C1i-H18-Rie-Prgo-Clu-Prgo prevented mortality in rats. In the groups receiving these drugs in the first 12 hours of the experiment, significantly fewer rats died than in the control group (Fig. 2). However, the total mortality of animals 10 days after the experiment is the same and does not differ in these groups. Thus, the developed injectable dosage forms significantly expand the therapeutic window for ischemic brain damage, but are not a substitute for general resuscitation measures.

Пример 12. Влияние экспериментальной терапии инъекционными лекарственными формами гептапептида последовательности Ме1-О1и-Н18-Рйе-Рго-О1у-Рго на восстановление условных рефлексов после закрытой черепно-мозговой травмы (ЧМТ).Example 12. The effect of experimental therapy with injectable heptapeptide dosage forms of the Me1-O1i-H18-Rie-Rgo-O1u-Rgo sequence on the restoration of conditioned reflexes after a closed head injury (TBI).

Исследование проведено на самцах крыс-альбиносов массой 150-160 г. Животных содержали в виварии в пластмассовых клетках по 5 голов при температуре воздуха 20-22°С, естественном освещении, на подстилках из опилок деревьев лиственных пород. Кормление осуществлялось аб 11Ьйит, в первой половине дня. Для маркировки животных применяли спиртовой раствор пикриновой кислоты. Сопоставимость экспериментальных групп обеспечивали рандомизацией выборок, использовавшихся в экспериментах. Количество животных в группе 20 шт.The study was conducted on male albino rats weighing 150-160 g. Animals were kept in a vivarium in plastic cages of 5 animals each at an air temperature of 20-22 ° C, natural light, and on bedding from sawdust of deciduous trees. Feeding was carried out in the morning, in the morning. An animal solution of picric acid was used to label animals. The comparability of the experimental groups was ensured by randomizing the samples used in the experiments. The number of animals in the group of 20 pcs.

Моделирование ЧМТ проводилось с помощью \\ещ111-бгор метода на оригинальной установке. Экспериментальную терапию начинали через 0,5 ч после механического воздействия. Экспериментальные препараты вводили в внутрибрюшинно в дозе 150 мкг/кг в объеме 100 мкл на 100 г веса животного через 15 мин и 2 ч 15 мин после коагуляции средней мозговой артерии и в той же дозе через 24 и 48 ч после операции. 1% раствор гептапептида последовательности Ме1-О1и-Нщ-Рйе-Рго-О1у-Рго вводили инъекционно в той же дозе. Контрольной группе вводили инъекционно физиологический раствор в эквивалентном объеме. Для исследования восстановления мнестических функций после черепно-мозговой травмы использовался метод активного избегания плаванием. До моделирования закрытой ЧМТ у экспериментальных животных в течение 3 дней формировали условный рефлекс активного избегания плаванием с латентным периодом 10-20 с. В процессе выработки рефлексов производилась выбраковка животных, не способных к выполнению предъявляемых задач.The simulation of TBI was carried out using the \\ another111-brgor method on the original installation. Experimental therapy was started 0.5 h after mechanical exposure. The experimental preparations were injected intraperitoneally at a dose of 150 μg / kg in a volume of 100 μl per 100 g of animal weight 15 minutes and 2 hours 15 minutes after coagulation of the middle cerebral artery and at the same dose 24 and 48 hours after surgery. A 1% solution of the heptapeptide of the Me1-O1i-Hsch-Rye-Prho-O1y-Prgo sequence was injected in the same dose. The control group was injected with physiological saline in an equivalent volume. To study the restoration of mnemonic functions after traumatic brain injury, the method of active swimming avoidance was used. Prior to modeling a closed head injury in experimental animals, a conditioned reflex of active avoidance by swimming with a latent period of 10-20 s was formed for 3 days. In the process of developing reflexes, animals that were not capable of fulfilling the tasks were rejected.

Оценка восстановления предварительно сформированного условного рефлекса проводилась начиная с первых суток после нанесения ЧМТ и продолжалась ежедневно на протяжении 7 суток. Оценивалось время нахождения животным центрального стержня в бассейне и выхода животного из воды.Assessment of the recovery of a pre-formed conditioned reflex was carried out starting from the first day after applying the head injury and continued daily for 7 days. The time the animals spent the central rod in the pool and the animal left the water was estimated.

Исследуемые препараты при внутрибрюшинном введении оказывали положительное влияние на время восстановления условного рефлекса начиная с 3 дня эксперимента. Инъекционное введение 1% раствора гептапептида Мс1-С1и-Н|5-Р11с-Рго-С1у-Рго также оказывало положительное, но менее выраженное воздействие на восстановление когнитивных функций. Динамика восстановления данного рефлекса представлена в табл. 3.The studied drugs with intraperitoneal administration had a positive effect on the recovery time of the conditioned reflex starting from the 3rd day of the experiment. Injection of a 1% solution of the heptapeptide Mc1-C1i-H | 5-P11c-Progo-C1u-Progo also had a positive, but less pronounced effect on the restoration of cognitive functions. The dynamics of the restoration of this reflex is presented in table. 3.

- 10 019359- 10 019359

Таблица 3Table 3

Динамика восстановления условного рефлекса активного избегания плаванием (время выхода животных из воды, с)The dynamics of the restoration of the conditioned reflex of active avoidance by swimming (time of animals leaving the water, s)

Экспериментальные группы Experimental groups Сроки исследования, сут Study time, days до травм ы before injuries 1 one 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 Гептапептид Ме1-О1и-Н15-Рйе-Рго- СЛу-Рго 5 мас.%, аскорбиновая кислота 25 мас.%, а-липоевая кислота 5 мас.%, глицин 65 мас.%. (пример 7) Heptapeptide Me1-O1i-H15-Rye-Rgo- SLU-Rgo 5 wt.%, Ascorbic acid 25 wt.%, A-lipoic acid 5 wt.%, Glycine 65 wt.%. (example 7) 17,4 17.4 24, 3 24, 3 9,3* 9.3 * 6,9* 6.9 * 5,8* 5.8 * 6,8* 6.8 * 5,9* 5.9 * Гептапептид Ме!-С1и-Н15-Р11е-РгоС1у-Рго 1,17 мас.%, аскорбиновая кислота 2,34 мас.%, натрия хлорид 1,40 мас.%, натрия гидрофосфат 1,40 мас.%, натрия дигидрофосфат 0,70 мас.%, маннит 93,02 мас.%. (пример 2) Heptapeptide Me! -C1i-H15-P11e-RgoC1u-Rgo 1.17 wt.%, ascorbic acid 2.34 wt.%, sodium chloride 1.40 wt.%, sodium hydrogen phosphate 1.40 wt.%, sodium dihydrogen phosphate 0.70 wt.%, mannitol 93.02 wt.%. (example 2) 17,4 17.4 22, 8 22, 8 8,2* 8.2 * 5,8* 5.8 * 6.3 6.3 6,2* 6.2 * 5,1* 5.1 * Гептапептид Ме!-О1и-Н15-РЬе-РгоО1у-Рго 0,35 мас.%, кверцетин 0,10 мас.%, поливинилпирролидон 0,15 мас.%, трилон-Б 0,10 мас.%, глицин 0,50 мас.%, вода для инъекций до 1 мл (пример 3). Heptapeptide Me! -O1i-H15-Pbie-RgoO1u-Rgo 0.35 wt.%, Quercetin 0.10 wt.%, Polyvinylpyrrolidone 0.15 wt.%, Trilon-B 0.10 wt.%, Glycine 0.50 wt.%, water for injection up to 1 ml (example 3). 17,4 17.4 29, 8 29, 8 8,5* 8.5 * 7,2* 7.2 * 7,8* 7.8 * 7,9* 7.9 * 6,1* 6.1 * Гептапептид Ме1-О1и-Н15-Рйе-Рго<31у-Рго 0,1 мас.%, а-токоферола ацетат 1,0 мас.%, полисорбат-80 0,5 мас.%, нипазол 0,05 мас.%, вода для инъекций 12,5 мас.%, масло оливковое до 2 мл (85,85 мас.%) (пример 6) Heptapeptide Me1-O1i-H15-Rye-Rgo <31y-Rgo 0.1 wt.%, A-tocopherol acetate 1.0 wt.%, Polysorbate-80 0.5 wt.%, Nipazole 0.05 wt.%, water for injection 12.5 wt.%, olive oil up to 2 ml (85.85 wt.%) (example 6) 17,4 17.4 30, 6 thirty, 6 9,3* 9.3 * 6,9* 6.9 * 7,1* 7.1 * 6,8* 6.8 * 5,9* 5.9 * Гептапептид Ме(-О1и-Н15-Рйе-Рго- СНу-Рго 1,0 мас.%, раствор натрия Heptapeptide Me (-O1i-H15-Rye-Rgo- SNu-Rgo 1.0 wt.%, Sodium solution 17,4 17.4 28, 6 28, 6 13,9 13.9 9,5* 9.5 * 12,1 12.1 11,1* 11.1 * 10,2* 10.2 * хлорида изотонический 0,9% 1 мл. isotonic chloride 0.9% 1 ml. Физиологический р-р (раствор натрия хлорида изотонический 0,9%) - контроль Physiological solution (sodium chloride solution isotonic 0.9%) - control 17,4 17.4 31, 5 31, 5 15,5 15,5 17,1 17.1 12,5 12.5 18,4 18,4 17,2 17,2

Примечание: *р<0,05 в сравнении с группой Физиологический р-р (контроль).Note: * p <0.05 in comparison with the group Physiological solution (control).

Пример 12. Изучение синергетического эффекта гептапептида последовательности Ме!-С1и-Н1к-Рйе-Рго-С1у-Рго и антиоксидантов в составе комплексных инъекционных препаратов на модели фокальной ишемии мозга у крыс, индуцированной фототромбозом.Example 12. The study of the synergistic effect of the heptapeptide of the sequence Me! -C1i-H1k-Rie-Rgo-C1u-Rgo and antioxidants as part of complex injection drugs on a model of focal brain ischemia in rats induced by photothrombosis.

Работа выполнена на 80 самцах крыс Вистар массой 213±2 г. Животные содержались в виварии при свободном доступе к пище и воде и 12-часовом световом режиме (освещение - с 7:00 до 19:00).The work was performed on 80 male Wistar rats weighing 213 ± 2 g. Animals were kept in a vivarium with free access to food and water and a 12-hour light regime (lighting - from 7:00 to 19:00).

Односторонний фокальный ишемический инфаркт сенсоромоторной области коры головного мозга крыс создавали методом фотохимически индуцируемого тромбоза согласно методике описанной Ватсоном и соавт. (^а!кои е! а1., 1985). Для определения неврологического дефицита, вызванного фотохимически индуцированным тромбозом, и оценки влияния препаратов на восстановление нарушенных функций (двигательная активность конечностей, координация движений) использовали ЫшЬ-р1ас1ид и Роге11шЬ-р1асшд тесты. Для визуального контроля размеров ишемического инфаркта мозга, вызываемого фототромбозом, на следующий день после проведения последних указанных выше тестов (на 8-й день после операции) животных декапитировали, извлекали мозг из черепной коробки и проводили визуальную оценку степени повреждения коры в сенсоромоторной области.Unilateral focal ischemic infarction in the sensorimotor region of the rat cerebral cortex was created by the method of photochemically induced thrombosis according to the technique described by Watson et al. (^ a! koi e! a1., 1985). To determine the neurological deficit caused by photochemically induced thrombosis, and to assess the effect of drugs on the restoration of impaired functions (motor activity of the limbs, coordination of movements), we used Lysb-p1ac1id and Roger-p1sc1 tests. To visually control the size of ischemic cerebral infarction caused by photothrombosis, the animals were decapitated the day after the last tests mentioned above (on the 8th day after surgery), the brain was removed from the cranium and a visual assessment of the degree of cortical damage in the sensorimotor region was performed.

Ь1тЬ-р1асшд 1ек1. Использовали вариант теста, впервые описанного Де Риком и соавт. (Ие Руск е! а1., 1989), в модификации Йолкконена и соавт. (1о1ккоиеи е! а1., 2000). Этот тест состоит из 7 упражнений, в которых определяется реакция передних и задних конечностей на тактильную и проприоцептивную стимуляцию. Выполнение заданий оценивали по 3-бальной шкале: 2 балла - нормальная реакция; 1 балл - реакция ослабленная или с задержкой >2 с; 0 баллов - реакция отсутствует. Максимальное количество баллов равнялось 14. Крыс приручали в течение нескольких дней и затем тестировали за 1 сутки до операции (базовая линия) и через 1, 2, 3, 5 и 6 суток после операции. Тестировали отдельно правые и левые конечности.L1b-p1scale 1ec1. We used a variant of the test, first described by De Rick et al. (Ie Rusk e! A1., 1989), in the modification of Yolkkonen et al. (1koeie e! A1., 2000). This test consists of 7 exercises in which the reaction of the front and hind limbs to tactile and proprioceptive stimulation is determined. Tasks were evaluated on a 3-point scale: 2 points — normal reaction; 1 point - the reaction is weakened or with a delay> 2 s; 0 points - no reaction. The maximum number of points was 14. Rats were tamed for several days and then tested 1 day before the operation (baseline) and 1, 2, 3, 5, and 6 days after the operation. Tested right and left limbs.

- 11 019359- 11 019359

Еоге11тЬ-р1ас1пд 1еМ. Тест проводили согласно методике, подробно описанной в работе (То1ккопеи с1 а1., 2003).EGe11b-p1ac1pd 1eM. The test was carried out according to the technique described in detail in (To1kkopei s1 a1., 2003).

Статистическая обработка данных. Статистический анализ проводили с использованием программы 81аЙ8Йса 6.0 (81а18оГ1. И8Л) для \Утбо\\ъ. Нормальность распределения признака в выборке оценивали по ^-критерию Шапиро-Уилка. Для сравнения показателей, полученных в тестах ЫтЬ-р1ас1ид и Еоге11тЬ-р1ас1ид проводили с помощью дисперсионного анализа ΑΝΟνΑ с критериями Краскела-Уоллиса. Для внутригрупповых сравнений использовали ϋ-критерий Манна-Уитни с поправкой Бонферрони.Statistical data processing. Statistical analysis was carried out using the program 81a8iSa 6.0 (81a18oG1. I8L) for \ Utbo \\ b. The normality of the distribution of the trait in the sample was evaluated by the Shapiro-Wilk ^ criterion. For comparison, the indices obtained in the tests Lb-p1ac1id and Eoge11b-p1ac1id were carried out using the analysis of variance ΑΝΟνΑ with the Kruskal-Wallis criteria. For intragroup comparisons, the Mann-Whitney ϋ test with Bonferroni correction was used.

Наиболее четкие и показательные результаты были получены в тесте Ь1тЬ-р1астд. Для уменьшения дисперсии в качестве показателя использовали соотношение баллов для правой и левой конечностей. Из полученных в тестах Еоге11тЬ-р1астд и Ь1тЬ-р1астд данных ясно видно, что в первые дни тестирования (дни 1 и 2 - 1 и 2 суток после операции) в результате ишемического повреждения сенсоромоторной области коры левого полушария происходит избирательное ухудшение неврологических показателей для правых конечностей, но уже начиная с 2-го дня (2 суток после операции) во всех экспериментальных группах наблюдали постепенное восстановление неврологических показателей. Практически полное восстановление неврологических показателей наблюдали уже на 7-й день после операции. В то же время у ложнооперированных животных нарушения были незначительными.The most clear and representative results were obtained in the L1bb-p1astd test. To reduce dispersion, the ratio of scores for the right and left limbs was used as an indicator. It is clearly seen from the data obtained in the tests of Ehl11b-p1astd and L1b-p1astd that in the first days of testing (days 1 and 2 - 1 and 2 days after surgery) as a result of ischemic damage to the sensorimotor region of the left hemisphere cortex, selective deterioration of neurological parameters for the right limbs occurs , but starting from the 2nd day (2 days after surgery) in all experimental groups, a gradual recovery of neurological indicators was observed. Almost complete restoration of neurological parameters was observed already on the 7th day after the operation. At the same time, in false-operated animals, the disturbances were minor.

Исследовали влияние гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго в дозе 15 мкг/кг в физиологическом растворе (раствор натрия хлорида изотонический 0,9%), антиоксидантов и смеси указанного гептапептида с антиоксидантами на изменение неврологических показателей после фокальной ишемии сенсоромоторной области в тесте Ь1тЬ-р1астд. Крысам делали 8 внутрибрюшинных инъекций указанных препаратов в течение семи дней после операции. Результаты этого эксперимента представлены в табл. 4. Как видно из этой таблицы, установлено статистически значимое улучшение неврологических показателей по сравнению с контролем через 2, 3 и 5 дней после фотохимически индуцируемого тромбоза (табл. 4 в группах 5-7). При этом наблюдали выраженный синергетический эффект при использовании препаратов, представляющих собой смесь гептапептида и антиоксидантов (группы 5-7), по сравнению с контрольными группами, при введении только гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго или только антиоксидантов. Инъекционные формы, выполненные в виде лиофилизированного порошка, содержащие гептапептид последовательностиWe studied the effect of the heptapeptide of the sequence Me1-C1i-H18-Rye-Rgo-C1u-Rgo at a dose of 15 μg / kg in physiological saline (sodium chloride solution isotonic 0.9%), antioxidants and a mixture of the heptapeptide with antioxidants on the change in neurological parameters after focal ischemia of the sensorimotor region in the L1bb-p1astd test. The rats were given 8 intraperitoneal injections of these drugs within seven days after surgery. The results of this experiment are presented in table. 4. As can be seen from this table, a statistically significant improvement in neurological indicators was established compared with the control 2, 3, and 5 days after photochemically induced thrombosis (Table 4 in groups 5-7). In this case, a pronounced synergistic effect was observed when using drugs that are a mixture of heptapeptide and antioxidants (groups 5-7), compared with the control groups, with the introduction of only the heptapeptide of the sequence Me1-C1i-H18-Rye-Progo-C1u-Progo or only antioxidants . Injectable forms in the form of a lyophilized powder containing heptapeptide sequences

Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго в комбинации с антиоксидантом (α-липоевой кислотой - состав 6, аскорбиновой кислотой - состав 5 и α-токоферола ацетат - состав7), проявляют значительную эффективность при экспериментальной терапии инсульта, в то время как гептапептид последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго (15 мкг/кг) и антиоксиданты (кислота аскорбиновая, α-липоевая кислота, α-токоферола ацетат), взятые отдельно, не приводят к достоверному улучшению неврологических показателей по сравнению с контролем. Таким образом, данный эксперимент подтверждает наличие синергетического эффекта.Ме1-С1и-Н18-Рее-Рго-С1у-Рго in combination with an antioxidant (α-lipoic acid - composition 6, ascorbic acid - composition 5 and α-tocopherol acetate - composition 7), are significant in experimental treatment of stroke, while while the heptapeptide of the sequence Me1-C1i-H18-Rye-Rgo-C1u-Rgo (15 μg / kg) and antioxidants (ascorbic acid, α-lipoic acid, α-tocopherol acetate), taken separately, do not lead to a significant improvement in neurological indicators compared to control. Thus, this experiment confirms the presence of a synergistic effect.

Таблица 4Table 4

Тест Ь1тЬ-р1астд. Изменение неврологических показателей для правых конечностей во всех экспериментальных группах (соотношение показателей для правой и левой конечностей) на 2, 3 и 5 день после инсультаTest L1b-p1astd. Change in neurological parameters for the right limbs in all experimental groups (ratio of indicators for the right and left limbs) on the 2nd, 3rd and 5th day after a stroke

Группы Groups 1 one 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 Кислота аскорбиновая [35мкг/кг] Ascorbic acid [35mkg / kg] а-липоевая кислота [25 мкг/кг] a-lipoic acid [25 mcg / kg] атокоферола ацетат [140 мкг/кг] atocopherol acetate [140 mcg / kg] Г ептапептид МегО1и-Н15РНе-РгоСНу-Рго [ 15 мкг/кг] в физиологи ческом растворе] Heptapeptide MegO1i-H15RNe-RgoCNu-Rgo [15 μg / kg] in physiological saline] Кислота аскорбино вая [35мкг/кг] + Гептапептид Меь О1и-Н15РЬе-РгоСИу-Рго [15 мкг/кг] Ascorbic acid [35 μg / kg] + Heptapeptide Me O1i-H15Pbe-Prgosiu-Rgo [15 mcg / kg] алипоевая кислота [25 мкг/кг] + Гептапептид Ме1С1и-Н1зРЬе-РгоС1у-Рго [15 мкг/кг] alipoic acid [25 mcg / kg] + Heptapeptide Me1C1i-H1zPbE-RgoC1y-Rgo [15 mcg / kg] атокоферола ацетат [140 мкг/кг] + Гептапептид МегО1и-Н1зРЬе-Рго61у-Рго [15 мкг/кг] atocopherol acetate [140 mcg / kg] + Heptapeptide MegO1i-H1zPbE-Prgo61u-Rgo [15 mcg / kg] Физи олог ичес кий Р-РКОНТ роль Physiologist R-RCONT role 2 день 2 day 0,57 0.57 0,53 0.53 0,55 0.55 0,50 0.50 0,71* 0.71 * 0,77* 0.77 * 0,69* 0.69 * 0,54 0.54 3 день 3 day 0,66 0.66 0,70 0.70 0,72 0.72 0,69 0.69 0,83* 0.83 * 0,81* 0.81 * 0,86* 0.86 * 0,61 0.61 5 день 5 day 0,75 0.75 0,79 0.79 0,74 0.74 0,76 0.76 0,88* 0.88 * 0,91* 0.91 * 0,87* 0.87 * 0,73 0.73

Примечание: *р<0,05 в сравнении с группами 1, 2, 3 и 8.Note: * p <0.05 in comparison with groups 1, 2, 3 and 8.

Пример 13. Изучение стабильности гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго с добавлением антиоксиданта в различных инъекционных формах по сравнению с раствором гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго, приготовленным в физиологическом растворе натрия хлорида.Example 13. The study of the stability of the heptapeptide sequence Me1-C1i-H18-Rye-Prgo-C1u-Rgo with the addition of an antioxidant in various injectable forms compared with a solution of the heptapeptide sequence Me1-C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo prepared in physiological sodium chloride solution.

Для экспериментального изучения стабильности предлагаемых инъекционных лекарственных форм препарата Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго (с добавлением антиоксиданта) и установления сроков годностиFor an experimental study of the stability of the proposed injection dosage forms of the drug Me1-C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo (with the addition of an antioxidant) and the establishment of expiration dates

- 12 019359 были изготовлены модельные смеси нескольких рецептур препарата (табл. 5). В качестве препаратов сравнения использовали лекарственное средство Семакс для интраназального применения 1%-ный раствор (производитель ИНПЦ Пептоген) и 1%-ный раствор гептапептида Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго в изотоническом 0,9% растворе натрия хлорида, приготовленный без добавления антиоксидантов и стабилизирующих добавок. Образцы хранили в защищенном от света прохладном месте и относительной влажности (60±5)% в течение срока наблюдения - 3 года. Результаты изучения стабильности в условиях естественного хранения представлены в табл. 5.- 12 019359 were made model mixtures of several formulations of the drug (table. 5). As a comparison drug, Semax medicinal product for intranasal use was used 1% solution (manufacturer IPPC Peptogen) and 1% solution of heptapeptide Me1-C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo in isotonic 0.9% sodium chloride solution prepared without the addition of antioxidants and stabilizing additives. Samples were stored in a cool place protected from light and relative humidity (60 ± 5)% during the observation period of 3 years. The results of stability studies in natural storage are presented in table. 5.

Таблица 5 Результаты изучения стабильности гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго в предлагаемых инъекционных лекарственных формах (лиофилизированный порошок, сухая рассыпка, эмульсия, раствор для внутримышечного или внутривенного введения)Table 5 The results of a study of the stability of the heptapeptide sequence Me1-C1i-H18-Rye-Rgo-C1u-Rgo in the proposed injectable dosage forms (lyophilized powder, dry powder, emulsion, solution for intramuscular or intravenous administration)

Составы препарата The composition of the drug Концентрация действующего вещества (гептапептида последовательности Ме1-О1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго) относительно свежеприготовленного раствора, определенная методом ВЭЖХ, % The concentration of the active substance (heptapeptide sequence Me1-O1i-H18-Rye-Rgo-C1u-Rgo) relative to the freshly prepared solution, determined by HPLC,% 1 мес 1 month 6 мес 6 months 12 мес 12 months 18 мес 18 months 24 мес 24 months 36 мес 36 month Гептапептид Ме1-С1и-Н1з-РйеРго-С1у-Рго 5 мас.%, аскорбиновая кислота 25 мас.%, α-липоевая кислота 5 мас.%, глицин 65 мас.%. (лиофилизированный порошок, пример 7) The heptapeptide Me1-C1i-H1z-RieRgo-C1u-Rgo 5 wt.%, Ascorbic acid 25 wt.%, Α-lipoic acid 5 wt.%, Glycine 65 wt.%. (lyophilized powder, example 7) 99,68 + 0,05 99.68 + 0.05 99,50 + 0,12 99.50 + 0.12 99,31 + 0,09 99.31 + 0.09 98,56 + 0,04 98.56 + 0.04 98,51 + 0,11 98.51 + 0.11 97,83 + 0,15 97.83 + 0.15 Гептапептид МеТСЛи-Н^-РИе- Рго-01у-Рго 1,17 мас.%, аскорбиновая кислота 2,34 мас.%, натрия хлорид 1,40 мас.%, натрия гидрофосфат 1,40 мас.%, натрия дигидрофосфат 0,70 мас.%, манит 93,02 мас.%. (лиофилизированный порошок, пример 2) Heptapeptide MeTSLi-H ^ -RI- Rgo-01u-Rgo 1.17 wt.%, Ascorbic acid 2.34 wt.%, Sodium chloride 1.40 wt.%, Sodium hydrogen phosphate 1.40 wt.%, Sodium dihydrogen phosphate 0.70 wt.%, Beckon 93 , 02 wt.%. (lyophilized powder, example 2) 98,84 ± 0,21 98.84 ± 0.21 98,42 ± 0,18 98.42 ± 0.18 98,02 ± 0,14 98.02 ± 0.14 97,90 + 0,12 97.90 + 0.12 97,31 ± 0,09 97.31 ± 0.09 97,25 + 0,11 97.25 + 0.11

Гептапептид Ме1-С1и-Н18-РНеРго-О1у-Рго 0,35 мас.%, кверцетин 0,10 мас.%, поливинилпирролидон 0,15 мас.%, трилон-Б 0,10 мас.%, глицин 0,50 мас.%, вода для инъекций до 1 мл (раствор для инъекций, пример 3) Heptapeptide Me1-C1i-H18-RNeRgo-O1u-Rgo 0.35 wt.%, Quercetin 0.10 wt.%, Polyvinylpyrrolidone 0.15 wt.%, Trilon-B 0.10 wt.%, Glycine 0.50 wt. .%, water for injection up to 1 ml (solution for injection, example 3) 99,26 ± 0,25 99.26 ± 0.25 99,16 + 0,18 99.16 + 0.18 98,82 + 0,05 98.82 + 0.05 98,61 + 0,14 98.61 + 0.14 98,51 ± 0,11 98.51 ± 0.11 98,19 + 0,06 98.19 + 0.06 Гептапептид Ме1-С1и-Н18-РНеРго-СЛу-Рго 0,1 мас.%, атокоферола ацетат 1,0 мас.%, полисорбат-80 0,5 мас.%, нипазол 0,05 мас.%, вода для инъекций 12,5 мас. %, масло оливковое до 2 мл (85,85 мас.%) (раствор для инъекций, пример 6) Heptapeptide Me1-C1i-H18-RNergo-SLu-Rgo 0.1 wt.%, Atocoferol acetate 1.0 wt.%, Polysorbate-80 0.5 wt.%, Nipazole 0.05 wt.%, Water for injection 12 5 wt. %, olive oil up to 2 ml (85.85 wt.%) (solution for injection, example 6) 99,52 ± 0,03 99.52 ± 0,03 99,53 ± 0,07 99.53 ± 0,07 99,40 ± 0,12 99.40 ± 0.12 99,14 ± 0,05 99.14 ± 0.05 99,02 ± 0,05 99.02 ± 0.05 98,95 + 0,13 98.95 + 0.13 Семакс для интраназального применения 1% р-р (Пептоген) Semax for intranasal use 1% solution (Peptogen) 98,01 + 0,05 98.01 + 0.05 97,16 + 0,09 97.16 + 0.09 95,31 + 0,17 95.31 + 0.17 94,82 + 0,08 94.82 + 0.08 87,68 + 0,12 87.68 + 0.12 78,01 + 0,19 78.01 + 0.19 Гептапептид МеЬСИи-НЖРКеРго-СИу-Рго 1,0 мас.%, раствор натрия хлорида изотонический 0,9% 1 мл. The heptapeptide MESII-NZHRKERGO-SIu-Rgo 1.0 wt.%, A solution of sodium chloride isotonic 0.9% 1 ml. 97,95 + 0,16 97.95 + 0.16 97,06 + 0,04 97.06 + 0.04 95,22 + 0,09 95.22 + 0.09 92,15 + 0,23 92.15 + 0.23 83,41 + 0,22 83.41 + 0.22 62,27 + 0,16 62.27 + 0.16

- 13 019359- 13 019359

Промышленная применимостьIndustrial applicability

Таким образом, приведенные выше примеры доказывают возможность получения предложенных инъекционных лекарственных форм и возможность их применения для лечения нарушений функций центральной нервной системы (ЦНС), вызванных ишемическими и травматическими поражениями.Thus, the above examples prove the possibility of obtaining the proposed injectable dosage forms and the possibility of their use for the treatment of dysfunctions of the central nervous system (CNS) caused by ischemic and traumatic lesions.

Результаты проведенных исследований по изучению стабильности гептапептида последовательности Ме1-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго в инъекционных лекарственных формах с добавлением антиоксиданта (лиофилизированный порошок, сухая рассыпка, эмульсия, раствор для внутримышечного или внутривенного введения) подтверждают, что введение антиоксиданта в состав препарата значительно стабилизирует молекулу пептида и способствует увеличению сроков годности в сравнении с препаратом, в котором отсутствуют вспомогательные вещества с антиоксидантным эффектом. Установлено, что наиболее стабильны лекарственные формы препарата, изготовленные в виде лиофилизированного порошка, сухой рассыпки и масляного раствора для инъекций.The results of studies on the stability of the heptapeptide of the Me1-C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo sequence in injection dosage forms with the addition of an antioxidant (lyophilized powder, dry powder, emulsion, solution for intramuscular or intravenous administration) confirm that the introduction of the antioxidant into the composition of the drug significantly stabilizes the peptide molecule and contributes to an increase in shelf life compared to a drug in which there are no auxiliary substances with antioxidant effect Tom. It was found that the most stable dosage forms of the drug, made in the form of lyophilized powder, dry powder and oil solution for injection.

Кроме того, предлагаемая композиция обеспечивает возможность хранения препарата при комнатной температуре, выдерживает замораживание/оттаивание не менее 4 раз, сохраняет активность в течение 7 дней при температуре 35°С, а также после длительного хранения (1 год) при пониженной температуре -20°С и далее в течение 2-х лет. Добавление вспомогательных веществ способствует более легкому высвобождению действующего вещества и обеспечению его высокой биодоступности.In addition, the proposed composition provides the ability to store the drug at room temperature, can withstand freezing / thawing at least 4 times, remains active for 7 days at a temperature of 35 ° C, and also after prolonged storage (1 year) at a low temperature of -20 ° C and further for 2 years. The addition of excipients promotes easier release of the active substance and ensures its high bioavailability.

Claims

1. Инъекционная лекарственная форма на основе гептапептида последовательности Ме1-С1п-Н|5-РНе-Рго-С1у-Рго для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы, характеризующаяся тем, что содержит в качестве действующего вещества терапевтически эффективное количество гептапептида Ме1-С1п-Н|5-РНе-Рго-С1у-Рго и по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы антиоксидантов, включающих β-каротин, ретинола ацетат, α-токоферола ацетат, аскорбиновую кислоту, лютеин, кверцетин, рутин (витамин Р), дигидрокверцетин, бутилгидрокситолуол, α-липоевую кислоту, Ь-карнитин, янтарную кислоту, а также, не обязательно, по меньшей мере одно вспомогательное вещество, выбранное из группы, включающей стабилизаторы, пролонгаторы, буферирующие добавки, эмульгаторы-солюбилизаторы, растворители, наполнители, консерванты и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению, при следующем соотношении компонентов, мас.%:1. Injectable dosage form based on a heptapeptide of the sequence Me1-C1p-H | 5-RNe-Rgo-C1u-Rgo for the treatment of acute ischemic stroke and traumatic brain injury, characterized in that it contains a therapeutically effective amount of heptapeptide Me1- as an active ingredient С1п-Н | 5-РНе-Рго-С1у-Рго and at least one substance selected from the group of antioxidants, including β-carotene, retinol acetate, α-tocopherol acetate, ascorbic acid, lutein, quercetin, rutin (vitamin P) dihydroquercetin butylhydroxytol l, α-lipoic acid, L-carnitine, succinic acid, as well as, optionally, at least one excipient selected from the group of stabilizers, prolongators, buffering agents, emulsifiers, solubilizers, solvents, fillers, preservatives and others excipients approved for medical use in the following ratio of components, wt.%:

гептапептид антиоксидант вспомогательное веществоheptapeptide antioxidant excipient

0,0002 - 99,999980.0002 - 99.99998

0,00002- 99,9998.0.00002-99.9998.

до 100up to 100

2. Инъекционная лекарственная форма по п.1, отличающаяся тем, что в качестве стабилизатора содержит по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей трилон Б, натрия метабисульфит, натрия тиосульфат, глицин, аргинин, гистидин, лизин или их физиологически приемлемые соли, например гидрохлорид, сульфат, ацетат, глутамат, аспартат и малеат, в качестве пролонгатора - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей поливинилпирролидон с молекулярной массой 10-60 кДа, декстран с молекулярной массой 10-100 кДа, например полиглюкин или реополиглюкин, поливиниловый спирт, натрий карбоксиметилцеллюлозу, в качестве буферирующей добавки по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей натрия хлорид, натрия/калия гидрои/или дигидрофосфат, натрия или аммония ацетат, в качестве эмульгатора-солюбилизатора - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей соевый лецитин для инъекций, полисорбат-20, полисорбат-60, полисорбат-80, спан-20, спан-40, спан-60, спан-85, додецилсульфат натрия, в качестве растворителя - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей воду для инъекций, масло оливковое, масло персиковое, масло подсолнечное, в качестве наполнителя - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей сорбит, маннит, ксилит, лактозу, сахарозу, декстрозу, сополимер И,Ь-молочной и гликолевых кислот, в качестве консерванта - по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей хлорбутанолгидрат, спирт этиловый, спирт бензиловый, фенол, хлоркрезол, кислоту бензойную, кислоту сорбиновую, мертиолат, нипагин, нипазол, бензалкония хлорид, бензэтония хлорид, цетилпиридиния хлорид, диметилдодецилбензиламмония хлорид.2. The injection dosage form according to claim 1, characterized in that the stabilizer contains at least one substance selected from the group consisting of Trilon B, sodium metabisulfite, sodium thiosulfate, glycine, arginine, histidine, lysine or their physiologically acceptable salts for example, hydrochloride, sulfate, acetate, glutamate, aspartate and maleate, as a prolongator is at least one substance selected from the group consisting of polyvinylpyrrolidone with a molecular weight of 10-60 kDa, dextran with a molecular weight of 10-100 kDa, for example poly yukin or reopoliglukin, polyvinyl alcohol, sodium carboxymethyl cellulose, as a buffering agent, at least one substance selected from the group consisting of sodium chloride, sodium / potassium hydroi / or dihydrogen phosphate, sodium or ammonium acetate, at least as an emulsifier-solubilizer one substance selected from the group consisting of soya lecithin for injection, polysorbate-20, polysorbate-60, polysorbate-80, span-20, span-40, span-60, span-85, sodium dodecyl sulfate, at least as a solvent at least one substance selected from the group comprising water for injection, olive oil, peach oil, sunflower oil, at least one substance selected from the group consisting of sorbitol, mannitol, xylitol, lactose, sucrose, dextrose, copolymer I, L-milk is used as a filler and glycolic acids, as a preservative - at least one substance selected from the group consisting of chlorobutanol hydrate, ethyl alcohol, benzyl alcohol, phenol, chlorocresol, benzoic acid, sorbic acid, merthiolate, nipagin, nipazole, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, etilpiridiniya chloride dimetildodetsilbenzilammoniya chloride.

3. Инъекционная лекарственная форма по любому из пп.1 и 2, отличающаяся тем, что может быть выполнена в виде лиофилизированного порошка, сухой рассыпки, эмульсии, раствора для внутримышечного или внутривенного введения или инъекционного раствора для инфузий.3. Injectable dosage form according to any one of claims 1 and 2, characterized in that it can be made in the form of lyophilized powder, dry powder, emulsion, solution for intramuscular or intravenous administration or injection solution for infusion.

4. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:4. Injection dosage form according to claim 2, characterized in that it contains in each ampoule or vial, wt.%:

гептапептид Ме1-О1и-Н15-РНе-Рго-О!у-Рго 0,1 -5,0 рутин 0,05- 5,0 глицин 0,00 — 5,0 лактоза до 100,0 и выполнена в виде сухой рассыпки.heptapeptide Ме1-О1и-Н15-РНе-Рго-О! у-Рго 0.1 -5.0 rutin 0.05-5.0 glycine 0.00 - 5.0 lactose up to 100.0 and is made in the form of dry powder .

- 14 019359- 14 019359

5. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:5. Injection dosage form according to claim 2, characterized in that it contains in each ampoule or vial, wt.%:

гептапептид Ме1-С1и-Н15-РЬе-Рго-О1у-Рго 0,1-5,0 аскорбиновая кислота 0,01 - 10,0 натрия хлорид 0,02 - 2,0 натрия гидрофосфат 0,01 - 1,00 натрия дигидрофосфат 0,01 - 0,50 маннит до 100,0 и выполнена в виде сухой рассыпки.heptapeptide Me1-C1i-H15-Rb-Rgo-O1u-Rgo 0.1-5.0 ascorbic acid 0.01 - 10.0 sodium chloride 0.02 - 2.0 sodium hydrogen phosphate 0.01 - 1.00 sodium dihydrogen phosphate 0.01 - 0.50 mannitol to 100.0 and is made in the form of dry powder.

6. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:6. The injection dosage form according to claim 2, characterized in that it contains in each ampoule or vial, wt.%:

гептапептид Ме1-С1и-НЬ-РЪе-Рго-01у-Рго 0,1 - 2,0 кверцетин 0,005 -1,0 поливинилпирролидон 0,005 - 5,0 трилон-Б 0,00-1,0 глицин 0,001-5,0 вода для инъекций до 100,0 и выполнена в виде раствора.heptapeptide Me1-C1i-Hb-Pbe-Pro-01u-Progo 0.1 - 2.0 quercetin 0.005 -1.0 polyvinylpyrrolidone 0.005 - 5.0 trilon-B 0.00-1.0 glycine 0.001-5.0 water for injection up to 100.0 and made in the form of a solution.

7. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждом флаконе или контейнере для инфузионных растворов, мас.%:7. Injection dosage form according to claim 2, characterized in that it contains in each bottle or container for infusion solutions, wt.%:

гептапептид МеЬСЦ-Ыз-РЬе-Рго-СИу-Рго аскорбиновая кислота янтарная кислота лизин декстран с молекулярной массой 10-100 к Да , раствор натрия хлорида 0,9% изотонический или раствор глюкозы 5-10% и выполнена в виде раствора для инфузии.the heptapeptide MeSCC-Li-Pb-Pro-Siu-Prgo ascorbic acid succinic acid lysine dextran with a molecular weight of 10-100 k Yes, sodium chloride solution 0.9% isotonic or glucose solution 5-10% and made in the form of a solution for infusion.

8. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:8. Injectable dosage form according to claim 2, characterized in that it contains in each ampoule or vial, wt.%:

гептапептид Ме1-СЛи-Н1з-РЬе-Рго-61у-Рго 0,05 -1,0 α-токоферола ацетат 0,0025 - 2,5 полисорбат-80 0,005 - 0,5 нипазол 0,0025-0,005 воду для инъекций 5,0 - 50,0 масло оливковое до 100,0 и выполнена в виде эмульсии.heptapeptide Me1-SLi-H1z-Pb-Rgo-61u-Rgo 0.05 -1.0 α-tocopherol acetate 0.0025 - 2.5 polysorbate-80 0.005 - 0.5 nipazole 0.0025-0.005 water for injection 5 , 0 - 50.0 olive oil up to 100.0 and is made in the form of an emulsion.

9. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:9. Injection dosage form according to claim 2, characterized in that it contains in each ampoule or vial, wt.%:

гептапептид Ме1-01и-Н1з-РЬе-Рго-С1у-Рго 0,50- 15,0 аскорбиновая кислота 0,25 - 35,0 α-липоевая кислота 0,25—17,5 глицин до 100,0 и выполнена в виде лиофилизированного порошка.heptapeptide Me1-01i-H1z-Pb-Rgo-C1u-Rgo 0.50-15.0 ascorbic acid 0.25-35.0 α-lipoic acid 0.25-17.5 glycine to 100.0 and is made in the form lyophilized powder.

10. Применение инъекционной лекарственной формы гептапептида Ме!-С1и-Н18-Рйе-Рго-С1у-Рго, охарактеризованной в любом из пп.1-9, для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы.10. The use of the injectable dosage form of the heptapeptide Me! -C1i-H18-Rie-Rgo-C1u-Rgo, described in any one of claims 1 to 9, for the treatment of acute ischemic stroke and traumatic brain injury.

0,0002 - 0,0040.0002 - 0.004

0,00002 - 0,10.00002 - 0.1

0,00002 - 0,060.00002 - 0.06

0,00 - 0,0060.00 - 0.006

0,0 - 6,0 до 100,00.0 - 6.0 to 100.0