EA018221B1 - АНТАГОНИСТЫ АКТИВИНА-ActRIIa И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА КОСТИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ - Google Patents
АНТАГОНИСТЫ АКТИВИНА-ActRIIa И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА КОСТИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ Download PDFInfo
- Publication number
- EA018221B1 EA018221B1 EA200970747A EA200970747A EA018221B1 EA 018221 B1 EA018221 B1 EA 018221B1 EA 200970747 A EA200970747 A EA 200970747A EA 200970747 A EA200970747 A EA 200970747A EA 018221 B1 EA018221 B1 EA 018221B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- bone
- fusion protein
- activin
- amino acid
- use according
- Prior art date
Links
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 title claims description 57
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 20
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 title abstract description 37
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title abstract 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 65
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 229
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 224
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 220
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 126
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 90
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 52
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 50
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 50
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 44
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 28
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 25
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 20
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 claims description 13
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 claims description 10
- 230000000123 anti-resoprtive effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 11
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims 2
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 67
- 230000037182 bone density Effects 0.000 abstract description 41
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 40
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 27
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 149
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 118
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 111
- 102100026818 Inhibin beta E chain Human genes 0.000 description 104
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 89
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 77
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 74
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 73
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 57
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 52
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 43
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 43
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 43
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 41
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 37
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 32
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 29
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 27
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 26
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 26
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 26
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 20
- -1 for example Substances 0.000 description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 19
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 19
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 19
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 19
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 18
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 18
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 17
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 17
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 17
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 16
- 230000018678 bone mineralization Effects 0.000 description 16
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 16
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 15
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 15
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 15
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 15
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 15
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 14
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 14
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 14
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 14
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 14
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 14
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 14
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 13
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 12
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 12
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 108010023082 activin A Proteins 0.000 description 11
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 11
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 11
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 10
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 10
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 9
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 9
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 9
- 230000010072 bone remodeling Effects 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 9
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 9
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 9
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 9
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 9
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 9
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 8
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 8
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 8
- 206010041569 spinal fracture Diseases 0.000 description 8
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 7
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 7
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 7
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 7
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 7
- 230000037118 bone strength Effects 0.000 description 7
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 7
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 7
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N (13-methyl-3-oxo-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl) 3-phenylpropanoate Chemical compound CC12CCC(C3CCC(=O)C=C3CC3)C3C1CCC2OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 6
- OGSPWJRAVKPPFI-UHFFFAOYSA-N Alendronic Acid Chemical compound NCCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O OGSPWJRAVKPPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 6
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 6
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 229940062527 alendronate Drugs 0.000 description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 6
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 210000003275 diaphysis Anatomy 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 6
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 6
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- MPBVHIBUJCELCL-UHFFFAOYSA-N Ibandronate Chemical compound CCCCCN(C)CCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O MPBVHIBUJCELCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 5
- IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N Risedronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CC1=CC=CN=C1 IIDJRNMFWXDHID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 229940015872 ibandronate Drugs 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 5
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- GZUITABIAKMVPG-UHFFFAOYSA-N raloxifene Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(C(=O)C=2C=CC(OCCN3CCCCC3)=CC=2)C2=CC=C(O)C=C2S1 GZUITABIAKMVPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960004622 raloxifene Drugs 0.000 description 5
- 229940089617 risedronate Drugs 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- 102100022146 Arylsulfatase A Human genes 0.000 description 4
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 4
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 4
- 108010004250 Inhibins Proteins 0.000 description 4
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 208000005652 acute fatty liver of pregnancy Diseases 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000003160 anti-catabolic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 239000000893 inhibin Substances 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 4
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 4
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 4
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 3
- 108010052946 Activin Receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000018918 Activin Receptors Human genes 0.000 description 3
- 102100022544 Bone morphogenetic protein 7 Human genes 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 3
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 3
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 3
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 3
- 101100179813 Drosophila melanogaster Actbeta gene Proteins 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 3
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 3
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N Phenytoin Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C1(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 3
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 3
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 3
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 3
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- GLGAUBPACOBAMV-DOFZRALJSA-N arachidonylcyclopropylamide Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)NC1CC1 GLGAUBPACOBAMV-DOFZRALJSA-N 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 3
- 238000001246 colloidal dispersion Methods 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 3
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 3
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 3
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 3
- 229960005460 teriparatide Drugs 0.000 description 3
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 3
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 3
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 3
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 3
- XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N zoledronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CN1C=CN=C1 XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004276 zoledronic acid Drugs 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 241000256844 Apis mellifera Species 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108010049870 Bone Morphogenetic Protein 7 Proteins 0.000 description 2
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920001268 Cholestyramine Polymers 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 229920002911 Colestipol Polymers 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 2
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 2
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 description 2
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 description 2
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 206010020100 Hip fracture Diseases 0.000 description 2
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 description 2
- 201000002980 Hyperparathyroidism Diseases 0.000 description 2
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 2
- 108010036176 Melitten Proteins 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 102000015094 Paraproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010064255 Paraproteins Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010067 Pituitary ACTH Hypersecretion Diseases 0.000 description 2
- 208000020627 Pituitary-dependent Cushing syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical class IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 108010023079 activin B Proteins 0.000 description 2
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 2
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 2
- 239000000305 astragalus gummifer gum Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 2
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012216 bentonite Nutrition 0.000 description 2
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000002617 bone density conservation agent Substances 0.000 description 2
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000022159 cartilage development Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005115 demineralization Methods 0.000 description 2
- 230000002328 demineralizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 229940064790 dilantin Drugs 0.000 description 2
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 238000009547 dual-energy X-ray absorptiometry Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 201000003617 glucocorticoid-induced osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 210000004349 growth plate Anatomy 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 2
- 210000001624 hip Anatomy 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- VDXZNPDIRNWWCW-UHFFFAOYSA-N melitten Chemical compound NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NCC(=O)NC(C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NCC(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 VDXZNPDIRNWWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 238000010603 microCT Methods 0.000 description 2
- 230000037257 muscle growth Effects 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000000010 osteolytic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 2
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 229960004063 propylene glycol Drugs 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Chemical compound [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 2
- 229940078499 tricalcium phosphate Drugs 0.000 description 2
- 229910000391 tricalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019731 tricalcium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- 229940058015 1,3-butylene glycol Drugs 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNODDICFTDYODH-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxytetrahydrofuran Chemical compound OC1CCCO1 JNODDICFTDYODH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100034111 Activin receptor type-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710105225 Activin receptor type-1 Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 208000000103 Anorexia Nervosa Diseases 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010051728 Bone erosion Diseases 0.000 description 1
- 102100028726 Bone morphogenetic protein 10 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006313 Breast tenderness Diseases 0.000 description 1
- MFYMBIZGFDNLPT-UHFFFAOYSA-N CTBT Chemical compound N1=NC2=NN=NN2C2=CC=C(Cl)C=C21 MFYMBIZGFDNLPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000003044 Closed Fractures Diseases 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102220606256 Cytosolic arginine sensor for mTORC1 subunit 2_E18A_mutation Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- ZAHDXEIQWWLQQL-IHRRRGAJSA-N Deoxypyridinoline Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCC[N+]1=CC(O)=C(C[C@H](N)C([O-])=O)C(CC[C@H](N)C(O)=O)=C1 ZAHDXEIQWWLQQL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 240000008570 Digitaria exilis Species 0.000 description 1
- 235000005459 Digitaria exilis Nutrition 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 101100291267 Drosophila melanogaster Miga gene Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102100029379 Follistatin-related protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 108700012941 GNRH1 Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 102100039939 Growth/differentiation factor 8 Human genes 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004705 High-molecular-weight polyethylene Substances 0.000 description 1
- 102100035833 Histo-blood group ABO system transferase Human genes 0.000 description 1
- 101710142776 Histo-blood group ABO system transferase Proteins 0.000 description 1
- 101000695367 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000899361 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 7 Proteins 0.000 description 1
- 101001062529 Homo sapiens Follistatin-related protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical group O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 102100025885 Inhibin alpha chain Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010024305 Leukaemia monocytic Diseases 0.000 description 1
- 108010000817 Leuprolide Proteins 0.000 description 1
- DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N Lewis A pentasaccharide Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(NC(C)=O)C(OC2C(C(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)OC(CO)C2O)O)OC1CO DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000489861 Maximus Species 0.000 description 1
- 206010027336 Menstruation delayed Diseases 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 206010027951 Mood swings Diseases 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 101100060131 Mus musculus Cdk5rap2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100354849 Mus musculus Pc gene Proteins 0.000 description 1
- 108010056852 Myostatin Proteins 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 206010030247 Oestrogen deficiency Diseases 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 208000002565 Open Fractures Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 208000003076 Osteolysis Diseases 0.000 description 1
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 208000035871 PIK3CA-related overgrowth syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 description 1
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical class C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 1
- 235000010575 Pueraria lobata Nutrition 0.000 description 1
- LCYXYLLJXMAEMT-SAXRGWBVSA-N Pyridinoline Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC1=C[N+](C[C@H](O)CC[C@H](N)C([O-])=O)=CC(O)=C1C[C@H](N)C(O)=O LCYXYLLJXMAEMT-SAXRGWBVSA-N 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- SSZBUIDZHHWXNJ-UHFFFAOYSA-N Stearinsaeure-hexadecylester Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCC SSZBUIDZHHWXNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000007591 Tartrate-Resistant Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010032050 Tartrate-Resistant Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102100036407 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046788 Uterine haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010046910 Vaginal haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000003655 absorption accelerator Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000011759 adipose tissue development Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004645 aluminates Chemical class 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940124325 anabolic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940070021 anabolic steroids Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 1
- 229940069428 antacid Drugs 0.000 description 1
- 239000003159 antacid agent Substances 0.000 description 1
- 230000001974 anti-anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 230000009831 antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000000823 artificial membrane Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960002903 benzyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003462 bioceramic Substances 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000005312 bioglass Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000037180 bone health Effects 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 235000019437 butane-1,3-diol Nutrition 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 230000002092 calcimimetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- XFWJKVMFIVXPKK-UHFFFAOYSA-N calcium;oxido(oxo)alumane Chemical compound [Ca+2].[O-][Al]=O.[O-][Al]=O XFWJKVMFIVXPKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 230000001925 catabolic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 229930183167 cerebroside Natural products 0.000 description 1
- 150000001784 cerebrosides Chemical class 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000019902 chronic diarrheal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097479 colestid Drugs 0.000 description 1
- GMRWGQCZJGVHKL-UHFFFAOYSA-N colestipol Chemical compound ClCC1CO1.NCCNCCNCCNCCN GMRWGQCZJGVHKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002604 colestipol Drugs 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002742 combinatorial mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000002920 convulsive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000021045 dietary change Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000447 dimerizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000004821 effect on bone Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 229940093499 ethyl acetate Drugs 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 210000002436 femur neck Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 208000020694 gallbladder disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012203 high throughput assay Methods 0.000 description 1
- 238000002657 hormone replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010032856 inhibin-alpha subunit Proteins 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229910052746 lanthanum Inorganic materials 0.000 description 1
- FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N lanthanum atom Chemical compound [La] FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N leuprolide acetate Chemical compound CC(O)=O.CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 229940087857 lupron Drugs 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 208000029791 lytic metastatic bone lesion Diseases 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 150000002741 methionine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009526 moderate injury Effects 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 201000006894 monocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- CQDGTJPVBWZJAZ-UHFFFAOYSA-N monoethyl carbonate Chemical compound CCOC(O)=O CQDGTJPVBWZJAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 1
- 229940051866 mouthwash Drugs 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- GACQNVJDWUAPFY-UHFFFAOYSA-N n'-[2-[2-(2-aminoethylamino)ethylamino]ethyl]ethane-1,2-diamine;hydrochloride Chemical compound Cl.NCCNCCNCCNCCN GACQNVJDWUAPFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 229940063121 neoral Drugs 0.000 description 1
- 230000004766 neurogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 239000002687 nonaqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 108091008104 nucleic acid aptamers Proteins 0.000 description 1
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000004824 osteo-anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001009 osteoporotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002036 phenytoin Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940073095 questran Drugs 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 201000010384 renal tubular acidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229940061969 rheumatrex Drugs 0.000 description 1
- 210000000614 rib Anatomy 0.000 description 1
- 229940063122 sandimmune Drugs 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- 229940095743 selective estrogen receptor modulator Drugs 0.000 description 1
- 239000000333 selective estrogen receptor modulator Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000022379 skeletal muscle tissue development Effects 0.000 description 1
- 230000012488 skeletal system development Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011775 sodium fluoride Substances 0.000 description 1
- 235000013024 sodium fluoride Nutrition 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000004901 spalling Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 159000000008 strontium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 208000005057 thyrotoxicosis Diseases 0.000 description 1
- 230000036964 tight binding Effects 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3061—Blood cells
-
- H—ELECTRICITY
- H04—ELECTRIC COMMUNICATION TECHNIQUE
- H04W—WIRELESS COMMUNICATION NETWORKS
- H04W8/00—Network data management
- H04W8/02—Processing of mobility data, e.g. registration information at HLR [Home Location Register] or VLR [Visitor Location Register]; Transfer of mobility data, e.g. between HLR, VLR or external networks
- H04W8/08—Mobility data transfer
- H04W8/082—Mobility data transfer for traffic bypassing of mobility servers, e.g. location registers, home PLMNs or home agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1796—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- H—ELECTRICITY
- H04—ELECTRIC COMMUNICATION TECHNIQUE
- H04W—WIRELESS COMMUNICATION NETWORKS
- H04W40/00—Communication routing or communication path finding
-
- H—ELECTRICITY
- H04—ELECTRIC COMMUNICATION TECHNIQUE
- H04W—WIRELESS COMMUNICATION NETWORKS
- H04W80/00—Wireless network protocols or protocol adaptations to wireless operation
- H04W80/04—Network layer protocols, e.g. mobile IP [Internet Protocol]
-
- H—ELECTRICITY
- H04—ELECTRIC COMMUNICATION TECHNIQUE
- H04W—WIRELESS COMMUNICATION NETWORKS
- H04W84/00—Network topologies
- H04W84/18—Self-organising networks, e.g. ad-hoc networks or sensor networks
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- H—ELECTRICITY
- H04—ELECTRIC COMMUNICATION TECHNIQUE
- H04L—TRANSMISSION OF DIGITAL INFORMATION, e.g. TELEGRAPHIC COMMUNICATION
- H04L2212/00—Encapsulation of packets
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Computer Networks & Wireless Communication (AREA)
- Signal Processing (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
Abstract
В конкретных аспектах настоящее изобретение относится к композициям и способам для стимуляции роста кости и увеличения плотности кости, а также для лечения множественной миеломы.
Description
Нарушения костной ткани, тяжесть которых колеблется от остеопороза до переломов, представляют собой набор патологических состояний, для которых существует лишь несколько эффективных фармацевтических средств. Вместо этого лечение сфокусировано на физические воздействия и изменение образа жизни, включая иммобилизацию, упражнения и изменение диеты. Лекарственные средства, которые стимулируют рост кости и повышают плотность кости, были бы полезны при лечении различных нарушений кости.
Рост и минерализация кости зависят от активности двух типов клеток, остеокластов и остеобластов, хотя хондроциты и клетки сосудистой сети также принимают участие в важных аспектах этих процессов. В ходе развития формирование кости происходит за счет двух механизмов, внутрихрящевого окостенения и окостенения в соединительно-тканной мембране, причем первое отвечает за формирование продольных костей, а последнее отвечает за формирование топологически плоских костей, таких как кости черепа. Для внутрихрящевого окостенения необходимы последовательное формирование и деградация хрящевых структур в пластинках роста, которые служат матрицами для образования остеобластов, остеокластов, сосудистой сети и последующей минерализации. Во время окостенения в соединительнотканной мембране кость формируется непосредственно из соединительных тканей. Для обоих процессов необходимы инфильтрация остеобластов и последующее накопление в матриксе.
Переломы и другие структурные нарушения кости заживают благодаря процессу, который по меньшей мере отчасти напоминает последовательность событий остеогенеза при развитии, включая формирование хрящевой ткани и последующую минерализацию. Процесс заживления перелома может происходить двумя путями. Непосредственное или первичное заживление кости происходит без образования костной мозоли. Непрямое или вторичное заживление кости происходит со стадией формирования предшественника костной мозоли. Первичное заживление переломов включает в себя восстановление механической целостности вокруг близко расположенного повреждения. В подходящих условиях резорбирующие костную ткань клетки, окружающие повреждение, оказывают туннельный резорбтивный ответ и образуют пути для проникновения кровеносных сосудов и последующего заживления. Вторичное заживление кости следует за процессом воспаления, образования мягкой костной мозоли, минерализации костной мозоли и перестройкой костной мозоли. На стадии воспаления происходит образование гематомы и кровоизлияния в результате нарушения периостальных и эндостальных кровеносных сосудов в участке повреждения. Воспалительные клетки проникают в эту область. На стадии образования мягкой костной мозоли клетки образуют новые сосуды, фибробласты, внутриклеточный материал и поддерживающие клетки, образуя грануляционную ткань в пространстве между фрагментами перелома. Клиническое срастание между краями повреждения образуется посредством фиброзной или хрящевой ткани (мягкая костная мозоль). Образуются остеобласты и опосредуют минерализацию мягкой костной мозоли, которая затем заменяется пластинчатой костью и подвергается нормальным процессам перестройки.
Кроме переломов и других физических повреждений структуры кости, потеря минерального содержания кости и костной массы может быть вызвана большим числом условий и может приводить к существенным медицинским проблемам. Изменения костной массы происходит относительно предсказуемым путем в течение жизни индивидуума. Приблизительно до 30 лет кости как мужчин, так и женщин растут до максимальной массы посредством линейного роста внутрихрящевых пластинок роста и радиального роста. Приблизительно после 30 лет (для губчатых костей, например плоских костей, таких как позвоночник и таз) и 40 лет (для трубчатой кости, например длинных костей, обнаруженных в конечностях) как у мужчин, так и у женщин происходит медленная потеря костной массы. У женщин происходит также конечная фаза существенной потери костной массы, вероятно, в результате постклимактерического дефицита эстрогена. Во время этой фазы женщина может потерять дополнительно 10% костной массы трубчатой кости и 25% губчатой части. Приведет ли прогрессирующая потеря костной массы к патологическому состоянию, такому как остеопороз, в значительной степени зависит от исходного состояния костной массы индивидуума и от наличия ухудшающих состояний.
Потерю костной массы иногда характеризуют как нарушение равновесия нормального процесса перестройки кости. Здоровая кость постоянно подвергается перестройке. Перестройка начинается с резорбции кости остеокластами. Затем резорбированная кость заменяется новой костной тканью, которая характеризуется образованием коллагена остеобластами и последующей кальцификацией. У здоровых индивидуумов скорость резорбции и формирования кости находятся в равновесии. Остеопороз представляет собой хроническое, прогрессирующее состояние с характерным сдвигом в сторону резорбции, что приводит к общему уменьшению костной массы и минерализации кости. Остеопорозу у человека предшествует клиническая остеопения (минеральная плотность кости, которая ниже среднего значения по сравнению с плотностью кости молодого организма более чем на одно стандартное отклонение, но менее
- 1 018221 чем на 2,5 стандартных отклонений). Во всем мире приблизительно 75 миллионов людей подвержены риску остеопороза.
Таким образом, способы контроля равновесия между активностью остеокластов и остеобластов могут быть используемы для заживления переломов и другого повреждения кости, а также для лечения нарушений, таких как остеопороз, связанных с потерей костной массы и минерализации кости.
Для лечения остеопороза использовали и эстроген, и кальцитонин, и остеокальцин с витамином К, и высокие дозы кальция в рационе. Другие способы лечения остеопороза включают бисфосфонаты, паратиреоидный гормон, кальцимиметики, статины, анаболические стероиды, соли лантана и стронция и фторид натрия. Однако указанные лекарственные средства часто вызывают нежелательные побочные эффекты.
Таким образом, объектом настоящего описания являются композиции и способы стимуляции роста и минерализации кости.
Краткое изложение сущности изобретения
Частично в описании показано, что молекулы, обладающие активностью антагониста активина или Ас1КПа (антагонисты активина и антагонисты Ас1КПа, обобщенно антагонисты активина-АсЖПа), можно использовать для повышения плотности кости, стимуляции роста кости и/или увеличения прочности кости. В частности, в описании показано, что растворимая форма АсЖИа действует как ингибитор передачи сигнала активина-АсЖИа и стимулирует повышение плотности кости, рост кости и прочность кости ίη νίνο. В то время как большинство фармацевтических средств, которые стимулируют рост кости или ингибируют потерю костной массы, действуют либо как антикатаболические средства (также обычно обозначаемые как катаболические средства) (например, бисфосфонаты), либо как анаболические средства (например, паратиреоидный гормон, РТН, в соответствующей дозе), растворимый белок Ас1К11а обладает двойной активностью, оказывая как антикатаболический, так и анаболический эффекты. Таким образом, в описании указано, что антагонисты пути передачи сигнала активина-Ас1К11а можно использовать для увеличения плотности кости и стимуляции роста кости. В то время как растворимый Ас1КПа может воздействовать на кость за счет механизма, отличного от антагонизма активина, в описании тем не менее показано, что желательные лекарственные средства могут быть выбраны на основе активности антагониста активина-Ас®11а. Таким образом, в конкретных вариантах осуществления в описании представлены способы использования антагонистов активина-АсЖПа, включая, например, связывающие активин полипептиды Ас1К11а, антитела против активина, антитела против Ас1К11а, нацеленные на активин или Ас1КПа малые молекулы и аптамеры, и нуклеиновые кислоты, уменьшающие экспрессию активина и Ас1КПа, для лечения нарушений, связанных с низкой плотностью кости или низкой прочностью кости, таких как остеопороз, или для стимуляции роста кости у пациентов, например с переломом кости. Кроме того, в описании показано, что антагонисты активина-Ас®11а являются эффективными для профилактики и/или восстановления кости при повреждении, вызванном множественными миеломами и опухолями молочной железы, и, кроме того, что антагонисты активина-Ас®11а уменьшают воздействие опухоли при множественной миеломе. Растворимый полипептид Ас1К11а стимулирует рост кости, не вызывая последовательного значительного увеличения мышечной массы.
В конкретных аспектах изобретение относится к полипептидам, содержащим растворимый, связывающий активин полипептид АсЖИа, который связывается с активином. Полипептиды Ас1К11а можно вводить в состав фармацевтического препарата, содержащего связывающий активин полипептид Ас1К11а и фармацевтически приемлемый носитель. Предпочтительно связывающий активин полипептид Ас1К11а связывает активин с К менее 1 мкМ или менее 100, 10 или 1 нМ. Необязательно, связывающий активин полипептид Ас1КПа селективно связывает активин по сравнению с ΟΌΡ-11 и/или ΟΌΡ-8, и предпочтительно с Кс, по меньшей мере в 10 раз, 20 раз или 50 раз меньшей по отношению к активину, чем по отношению к ΟΌΡ-11 и/или ΟΌΡ-8. Без желания быть связанными с конкретным механизмом действия, предполагают, что такая степень селективности для ингибирования активина по сравнению с ингибированием ΟΌΡ-11/ΟΌΡ-8 является причиной селективного эффекта на кость без согласованного поддающегося измерению эффекта на мышцу. Во многих вариантах осуществления полипептид АсЖПа выбирают как вызывающий менее 15, менее 10 или менее 5% увеличения мышцы в дозах, при которых достигается желательный эффект на кость. Предпочтительно чистота композиции составляет по меньшей мере на 95% по сравнению с другим полипептидным компонентом, как оценено эксклюзионной хроматографией, и более предпочтительно композиция является по меньшей мере на 98%. Связывающий активин полипептид Ас1КПа для использования в таком препарате может представлять собой любой из описанных в настоящем изобретении, такой как полипептид, обладающий аминокислотной последовательностью, выбранной из 8Еф ΙΌ N0: 2, 3, 7 или 12, или обладающий аминокислотной последовательностью, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 97 или 99% идентичной аминокислотной последовательности, выбранной из 8ЕО ΙΌ N0: 2, 3, 7, 12 или 13. Связывающий активин полипептид Ас1КПа может включать функциональный фрагмент природного полипептида Ас1К11а, такой как содержащий по меньшей мере 10, 20 или 30 аминокислот из последовательности, выбранной из 8Еф ΙΌ N0: 1-3 или последовательности 8Е0 ΙΌ N0: 2 с отсутствием от 10 до 15 С-концевых аминокислот (хвоста).
- 2 018221
Растворимый связывающий активин полипептид Ас1КЛа может включать одно или несколько изменений в аминокислотной последовательности (например, в связывающем лиганд домене) по сравнению с природным полипептидом Ас1Р11а. Примеры измененных полипептидов Ас1Р11а представлены в \νϋ 2006/012627, стр. 59-60, содержание которого приведено в настоящем описании в качестве ссылки. Изменение аминокислотной последовательности может, например, изменять гликозилирование полипептида при продукции клетками млекопитающих, насекомых или в других эукариотических клетках или изменять протеолитическое расщепление полипептида по сравнению с природным полипептидом Ас1Ш1а.
Связывающий активин полипептид АсЖНа может представлять собой слитый белок, который имеет в качестве одного домена полипептид Ас1КНа (например, связывающую лиганд часть Ас1КНа) и один или несколько дополнительных доменов, которые придают желаемое свойство, такое как улучшенную фармакокинетику, упрощенную очистку, нацеливание на конкретные ткани и т.п. Например, домен слитого белка может улучшать стабильность ίη νίνο, время полужизни ίη νίνο, поглощения/введения, локализацию или распределение в ткани, формирование комплексов белка, мультимеризацию слитого белка и/или очистку или одновременно несколько из этих параметров. Димеризация или мультимеризация может приводить к увеличению аффинности связывания лиганда. Связывающий активин слитый белок АсЖПа может включать домен Рс иммуноглобулина (дикого типа или мутантный) или часть сывороточного альбумина или другого полипептида, которые придают желательные свойства, такие как улучшенную фармакокинетику, улучшенную растворимость или улучшенную стабильность. Как правило, слитый белок Ас1К11а-Рс продуцируется в виде гомодимерного комплекса. Необязательно, слитый белок Ас1К11а-Рс содержит относительно неструктурированный линкер, расположенный между доменом Рс и внеклеточным доменом Ас1КЛа. Этот неструктурированный линкер может соответствовать неструктурированной области приблизительно из 15 аминокислот на С-конце внеклеточного домена Ас1КЛа (хвосте) или может представлять собой искусственную последовательность из 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот либо отрезок длиной между 5 и 15, 20, 30, 50 или более аминокислот, относительно свободных от вторичной структуры, или смесь из обоих. Линкер может быть богат остатками глицина и пролина и может, например, содержать единственную последовательность треонина/серина и глицинов или повторяющиеся последовательности треонина/серина и глицинов (например, синглеты или повторы ТС4 или 8С4). Слитый белок может включать субпоследовательность для очистки, такую как эпитоп-метка, метка РЬАС, полигистидиновая последовательность и слитый С8Т. Необязательно, растворимый полипептид АсЖЛа включает один или несколько модифицированных аминокислотных остатков, выбранных из гликозилированной аминокислоты, ПЭГилированной аминокислоты, фарнезилированной аминокислоты, ацетилированной аминокислоты, биотинилированной аминокислоты, аминокислоты, конъюгированной с липидной группой, и аминокислоты, конъюгированной с органическим дериватизирующим средством. Фармацевтический препарат может также включать одно или несколько дополнительных соединений, таких как соединение, которое используют для лечения нарушения кости.
Предпочтительно фармацевтический препарат является, по существу, апирогенным. Как правило, предпочтительно белок Ас1КЛа является экспрессированным в линии клеток млекопитающего, которая опосредует соответствующее природное гликозилирование белка Ас1КЛа, уменьшая вероятность неблагоприятного иммунного ответа у пациента. Линии клеток человека и СНО успешно использовали, что говорит о том, что другие экспрессирующие системы млекопитающих будут используемыми.
Как описано в настоящем изобретении, белки Ас1КНа, обозначенные как АсЖНа-Рс, обладают желательными свойствами, включая селективное связывание с активином по сравнению с СЭР-8 и/или СЭР-11, высокоаффинное связывание лиганда и время полужизни в сыворотке более 2 недель на моделях животных. В конкретных вариантах осуществления изобретение относится к полипептидам АсЕКЛа-Рс и фармацевтическим препаратам, содержащим такие полипептиды и фармацевтически приемлемый наполнитель.
В конкретных аспектах изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим растворимый связывающий активин полипептид АсЖНа. Выделенный полинуклеотид может содержать кодирующую последовательность растворимого связывающего активин полипептида Ас1КНа, такого как описано выше. Например, выделенная нуклеиновая кислота может включать последовательность, кодирующую внеклеточный домен (например, связывающий лиганд домен) Ас1КЛа, и последовательность, которая будет кодировать часть или весь трансмембранный домен и/или цитоплазматический домен Ас1КНа, кроме стоп-кодона, расположенного внутри трансмембранного домена или цитоплазматического домена или расположенного между внеклеточным доменом и трансмембранным доменом или цитоплазматическим доменом. Например, выделенный полинуклеотид может содержать полноразмерную полинуклеотидную последовательность Ас1КНа, такую как 8ЕС 1Э N0: 4 или 5, или частично усеченный вариант, где указанный выделенный полинуклеотид дополнительно содержит кодон терминации транскрипции по меньшей мере за 600 нуклеотидов до З'-конца или расположенного другим образом, так чтобы трансляция полинуклеотида приводила к внеклеточному домену, необязательно, слитому с усеченной частью полноразмерного Ас1КНа. Предпочтительная последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой 8ЕС !Э N0: 14. Нуклеиновые кислоты, описанные в настоящем изобретении, могут быть функ
- 3 018221 ционально связанными с промотором экспрессии, и изобретение относится к клеткам, трансформированным такими рекомбинантными полинуклеотидами. Предпочтительно клетка представляет собой клетку млекопитающего, такую как клетка СНО.
В конкретных аспектах описание относится к способам получения растворимого связывающего активин полипептида АсЖНа. Такой способ может включать в себя экспрессию любой нуклеиновой кислоты (например, 8ЕО ΙΌ N0: 4, 5 или 14), описанных в настоящем изобретении, в подходящей клетке, такой как клетка яичника китайского хомячка (СНО). Такой способ может включать в себя а) культивирование клетки в условиях, подходящих для экспрессии растворимого полипептида Лс4К11а, где указанную клетку трансформируют растворимой экспрессирующей конструкцией ЛсЖНа; и Ь) выделение экспрессированного таким образом растворимого полипептида ЛсЖНа. Растворимые полипептиды ЛсЖНа можно выделять в виде неочищенных, частично очищенных или высокоочищенных фракций. Очистку можно проводить серией стадий очистки, включая, например, одно, два, или три, или более из следующего в любом порядке: хроматография с белком А, анионообменная хроматография (например, на О-сефарозе). хроматография гидрофобного взаимодействия (например, на фенилсефарозе), эксклюзионная хроматография и катионообменная хроматография.
В конкретных аспектах антагонист активина-АсЖНа, описанный в настоящем изобретении, такой как растворимый, связывающий активин полипептид Ас4КПа, можно использовать в способе стимуляции роста кости или увеличения плотности кости у индивида. В конкретных вариантах осуществления описание относится к способам лечения нарушения, связанного с низкой плотностью кости, или стимуляции роста кости у пациентов. Способ может включать введение индивиду эффективного количества антагониста активина-АсЖНа. В конкретных аспектах описание относится к применению антагониста активина-Ас4КПа для получения лекарственного средства для лечения нарушения или состояния, как описано в настоящем изобретении.
В конкретных аспектах описание относится к способу идентификации средства, стимулирующего рост или увеличивающего минерализацию кости. Способ включает: а) идентификацию тестируемого средства, которое связывается с активином или со связывающим лиганд доменом полипептида АсЖНа; и Ь) оценку эффекта средства на рост или минерализацию кости.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показана очистка Ас4К.Па-йРс, экспрессированного в клетках СНО. Белок очищают в виде одиночного, четко выраженного пика.
На фиг. 2 показано связывание Ас4К.Па-№с с активином и 0ΌΡ-11, как измерено анализом В1аСоте™.
На фиг. 3 показана схема анализа репортерного гена А-204, а также репортерный вектор: рОЬ3 (САОА12) (описанный в Ьепп1ег е! а1., 1998, ЕМВО, 17:3091-3100). Повтор САОА12 присутствует в генах, отвечающих на ΤΟΡ-β (ген РА1-1), так что этот вектор имеет основное применение для факторов, передающих сигнал через 8шаб 2 и 3.
На фиг. 4 показаны эффекты АсЖНа-ЬРс (ромбы) и АсЖНа-шРс (квадраты) на передачу сигнала ΟΌΡ-8 в анализе репортерного гена в А-204. Для обоих белков показали существенное ингибирование опосредованной ΟΌΡ-8 передачи сигналов в пикомолярных концентрациях.
На фиг. 5 показаны эффекты трех различных препаратов Ас4К.Па-№с на передачу сигнала СЬР-11 в анализе репортерного гена в А-204.
На фиг. 6 показаны примеры изображений ЭЕХЛ контрольных и обработанных АсЖНа-шРс мышей ВАЬВ/с, до (верхние панели) и после (нижние панели) 12-недельного периода обработки. Светлое окрашивание указывает на увеличенную плотность кости.
На фиг. 7 показано количественное определение эффектов АсЖНа-шРс на минеральную плотность кости у мышей ВАЬВ/с в течение 12-недельного периода. Обработки представляли собой контроль (ромбы), 2 мг/кг дозирование АсЖНа-шРс (квадраты), 6 мг/кг дозирование АсЖНа-шРс (треугольники) и 10 мг/кг дозирование Ас1К11а-шРс (круги).
На фиг. 8 показано количественное определение эффектов Ас4К.Па-шРс на минеральное содержание кости у мышей ВАЬВ/с в течение 12-недельного периода. Обработки представляли собой контроль (ромбы), 2 мг/кг дозирование АсЖНа-шРс (квадраты), 6 мг/кг дозирование АсЖНа-шРс (треугольники) и 10 мг/кг дозирование Ас1К11а-шРс (круги).
На фиг. 9 показано количественное определение эффектов АсЖНа-шРс на минеральную плотность кости для губчатой кости у мышей С57ВЬ6 после овариэктомии (ОУХ) или ложной операции (8НАМ) после 6-недельного периода. Обработки представляли собой контроль (РВ8) или 10 мг/кг дозирование Ас1К11а-шРс (Ас1КНа).
На фиг. 10 показано количественное определение эффектов Ас4К.Па-шРс на губчатую кость у мышей С57ВЬ6 после овариэктомии (ОУХ) в течение 12-недельного периода. Обработки представляли собой контроль (РВ8; светлые столбцы) или 10 мг/кг дозирование АсЖНа-шРс (Ас1КНа; темные столбцы).
На фиг. 11 показано количественное определение эффектов Ас4К.Па-шРс на губчатую кость у мышей С57ВЬ6 после ложной операции после периода обработки 6 или 12 недель. Обработки представляли
- 4 018221 собой контроль (РВБ; светлые столбцы) или 10 мг/кг дозирование АсЖНа-тРс (АсЖПа; темные столбцы).
На фиг. 12 показаны результаты анализа рОСТ плотности кости у мышей после овариэктомии в течение 12 недель обработки. Обработки представляли собой контроль (РВБ; светлые столбцы) или Ас1Ш1а-шЕс (темные столбцы), у - ось: мг/см3.
На фиг. 13 показаны результаты анализа рОСТ плотности кости у мышей после ложной операции в течение 12 недель обработки. Обработки представляли собой контроль (РВБ; светлые столбцы) или Ас1Ш1а-шЕс (темные столбцы), у - ось; мг/см3.
На фиг. 14А и 14В показан анализ ΌΕΧΑ всего организма после 12 недель обработки (А) и анализ ех νίνο бедренной кости (В). Светлые области показывают области высокой плотности кости.
На фиг. 15 показан анализ рОСТ ех νίνο середины диафиза бедренной кости после 12 недель обработки. Обработки представляли собой контроль - носитель (РВБ, темные столбцы) и АсЖНа-тРс (светлые столбцы). Четыре столбца слева показывают общую плотность кости, тогда как четыре столбца справа показывают плотность трубчатой кости. Первая пара столбцов в каждом наборе из четырех столбцов представляет данные для мышей после овариэктомии, тогда как вторая пара столбцов представляет данные для мышей после ложной операции.
На фиг. 16 показан анализ рОСТ ех νίνο и диафизарное содержание кости середины диафиза бедренной кости после 12 недель обработки. Обработки представляли собой контроль - носитель (РВБ, темные столбцы) или АсЖНа-тРс (светлые столбцы). Четыре столбца слева показывают общее содержание кости, тогда как четыре столбца справа показывают содержание трубчатой кости. Первая пара столбцов в каждом наборе из четырех столбцов представляет данные для мышей после овариэктомии, тогда как вторая пара столбцов представляет данные для мышей после ложной операции.
На фиг. 17 показан анализ рОСТ ех νίνο толщины середины диафиза бедренной кости и толщины кортикального слоя бедренной кости. Обработки представляли собой контроль (РВБ, темные столбцы) и АсЖНа-тРс (светлые столбцы). Четыре столбца слева показывают эндостальную окружность, тогда как четыре столбца справа показывают периостальную окружность. Первая пара столбцов в каждом наборе из четырех столбцов представляет данные для мышей после овариэктомии, тогда как вторая пара столбцов представляет данные для мышей после ложной операции.
На фиг. 18 показаны результаты механического тестирования бедренной кости после 12 недель обработки. Обработки представляли собой контроль (РВБ, темные столбцы) и АсЖНа-тРс (светлые столбцы). Два столбца слева представляют данные для мышей после овариэктомии, тогда как остальные два столбца представляют данные для мышей после ложной операции.
На фиг. 19 показаны эффекты АсЖНа-тРс на объем губчатой кости.
На фиг. 20 показаны эффекты Ас®11а-тРс на губчатую архитектуру в дистальной части бедренной кости.
На фиг. 21 показаны эффекты АсЖНа-тРс на трубчатую кость.
На фиг. 22 показаны эффекты АсЖИа-тРс на механическую прочность кости.
На фиг. 23 показаны эффекты различных доз АсЖИа-тРс на характеристики кости при трех различных дозах.
На фиг. 24 показана гистоморфометрия кости, показывающая, что АсЖИа-тРс обладает двойной анаболической и антирезорбтивной активностью.
На фиг. 25 показаны дополнительные гистоморфометрические данные.
На фиг. 26 показаны изображения бедренной кости мыши от наивных и несущих опухоль мышей и эффекты обработки АсЖНа-тРс на морфологию костей на модели множественной миеломы. Для мышей, несущих опухоли - множественные миеломы (5Т2), показали заметное выкрашивание и деградацию кости по сравнению с нормальными мышами (наивными). Обработка Ас®11а-тРс прекращает этот эффект.
На фиг. 27 показаны результаты клинического испытания на людях, описанного в примере 5, где площадь под кривой (АИС) и введенная доза Ас®Иа-№с обладали линейной корреляцией, независимо от того, вводили ли Ас®11а-№с внутривенно (IV) или подкожно (8С).
На фиг. 28 показано сравнение уровней Ас®На-№с в сыворотке у пациентов после введения IV или 8С.
На фиг. 29 показаны уровни костной щелочной фосфатазы кости (ВАР) в ответ на различные уровни дозы Ас®На-№с. ВАР является маркером анаболического роста кости.
На фиг. 30 показаны суммарные эффекты АсЖНа-тРс (ВАР-011) и бисфосфонатного средства (золедроната) у мышей.
- 5 018221
Подробное описание изобретения
1. Обзор.
Суперсемейство трансформирующего фактора роста-бета (ΤΟΡ-β) содержит множество факторов роста, разделяющих общие элементы последовательности и структурные повторы. Известно, что эти белки оказывают биологические эффекты на большое множество типов клеток как позвоночных, так и беспозвоночных. Члены суперсемейства выполняют важные функции в процессе эмбрионального развития для образования структур и спецификации тканей и могут влиять на множество процессов дифференцировки, включая адипогенез, миогенез, хондрогенез, кардиогенез, гемопоэз, нейрогенез и дифференцировку эпителиальных клеток. Семейство разделено на две основные ветви: ветви ΒΜΡ/ΟΌΡ и ΤΟΡв/активина/ВМР10, члены которых оказывают разнообразные, часто комплементарные эффекты. Посредством манипуляции активностью члена семейства ΤΟΡ-β, часто возможны значительные физиологические изменения в организме. Например, породы крупного рогатого скота Пьемонтская и Бельгийская голубая несут мутацию с потерей функции в гене ΟΌΡ-8 (называемом также миостатином), которая вызывает заметное увеличение мышечной массы. СгоЬе! е! а1., ΝηΙ Сспс1. 1997, 17(1):71-4. Более того, у человека неактивные аллели ΟΌΡ-8 связаны с увеличенной мышечной массой и, по имеющимся сообщениям, исключительной силой. 8сйие1ке е! а1., Ν. Епд1. ί. Меб. 2004, 350:2682-8.
Активины представляют собой димерные полипептидные факторы роста, относящиеся к суперсемейству ΤΟΡ-β. Существует три главные формы активина (А, В, и АВ), которые представляют собой гомо/гетеродимеры из двух близкородственных β-субъединиц (βΑβΑ, βΒβΒ, и βΑβΒ). Геном человека кодирует также активин С и активин Е, которые, в первую очередь, экспрессируются в печени. В суперсемействе ΤΟΡ-β активины представляют собой уникальные и многофункциональные факторы, которые могут стимулировать продукцию гормонов в клетках яичника и плаценты, поддерживать жизнеспособность нейрональных клеток, влиять на прогрессирование клеточного цикла, положительно или отрицательно, в зависимости от типа клеток, и индуцировать мезодермальную дифференцировку, по крайней мере, у эмбрионов земноводных (ЭеРао1о е! а1., 1991, Ргос. 8ос. Ер. Βίοί. Меб. 198:500-512; Эукон е! а1., 1997, Сигг Βώΐ. 7:81-84; ХУообгиГГ. 1998, ΒΟΟ^η Рйагтасо1. 55:953-963). Более того, было обнаружено, что фактор эритроидной дифференцировки (ΕΌΡ), выделенный из стимулированных моноцитарных лейкозных клеток человека, идентичен активину Α (Мига!а е! а1., 1988, ΡΝΑ8, 85:2434). Было сделано предположение, что активин Α действует как природный положительный регулятор эритропоэза в костном мозге. В некоторых тканях передачу сигнала от активина ингибирует родственный ему гетеродимер, ингибин. Например, во время высвобождения фолликулостимулирующего гормона (Ρ8Η) из гипофиза активин стимулирует секрецию и синтез Ρ8Η, тогда как ингибин предотвращает секрецию и синтез Ρ8Η. К другим белкам, которые могут регулировать биоактивность активина и/или связывать активин, относятся фоллистатин (Ρ8), родственный фоллистатину белок (Ρ8ΒΡ) и а2-макроглобулин.
Сигналы ΤΟΡ-β опосредованы гетеромерными комплексами рецепторов серин/треонинкиназы типа I и типа II, которые фосфорилируют и активируют нижележащие белки 8таб при стимуляции лигандом (Маккадие, 2000, №11. Вес. Мо1. Се11 Βωΐ. 1:169-178). Эти рецепторы типа I и типа II представляют собой трансмембранные белки, состоящие из связывающего лиганд внеклеточного домена с богатой цистеином областью, трансмембранного домена и цитоплазматического домена с рассчитанной специфичностью к серину/треонину. Рецепторы типа I необходимы для передачи сигнала; и рецепторы типа II необходимы для связывания лигандов и экспрессии рецепторов типа I. Рецепторы активина типа I и II образуют стабильный комплекс после связывания лиганда, что приводит к фосфорилированию рецепторов типа I рецепторами типа II.
Два родственных рецептора типа II, ЛщВПа и ЛсШИЕ были идентифицированы как рецепторы типа II для активинов (МаШехск апб Уа1е, 1991, Се11. 65:973-982; Αώ^^ е! а1., 1992, Се11. 68:97-108). Помимо активинов, ЛсШИа и ΑΛΚΠΒ могут биохимически взаимодействовать с несколькими другими белками семейства ΤΟΡ-β, включая ВМР7, №бак ΟΌΡ-8 и ΟΌΡ-11 (Уатакййа е! а1., 1995, I. Се11 ΒΟΙ. 130:217-226; Бее апб МсРйеггоп, 2001, Ргос. №111. Αсаб. 8ск 98:9306- 9311; Уео апб ^ййтап, 2001, Мо1. Се11. 7:949-957; Ой е! а1., 2002, Оепек Эеу. 16:2749-54). ΑΕΚ-4 представляет собой первичный рецептор типа I активинов, в частности активина А, и ΑΕΚ-7 может также служить рецептором активинов, в частности активина Β.
Как показано в настоящем описании, растворимый полипептид ΑсίΚIIа (кΑсίЯIIа), для которого продемонстрирована значительная предпочтительность связывания с активином Α в отличие от других членов семейства ΤΟΡ-β, таких как ΟΌΡ-8 или ΟΌΡ-11, является эффективным для стимуляции роста кости и увеличения плотности кости т у1уо. Не ограничиваясь каким-либо конкретным механизмом, предполагают, что эффект ^сЖНа вызван, в первую очередь, эффектом антагониста активина, принимая во внимание крайне сильное связывание активина (пикомолярная константа диссоциации), показанное для конкретной конструкции κΑ^ΗΠι, используемой в этих исследованиях. Независимо от механизма, из представленных в настоящем описании данных очевидно, что антагонисты ΑсίВIIа-активина действительно повышают плотность кости у нормальных мышей, на моделях остеопороза у мышей и модели множественной миеломы у мышей. Следует отметить, что кость является динамической тканью, расту
- 6 018221 щей или уменьшающейся, с увеличивающейся или уменьшающейся плотностью в зависимости от равновесия факторов, образовывающих кость и стимулирующих минерализацию (в первую очередь, остеобластов), и факторов, разрушающих и деминерализующих кость (в первую очередь, остеокластов). Рост и минерализацию кости можно усилить, увеличивая количество образующих факторов, уменьшая количество разрушающих факторов или и тем, и другим. Термины стимулировать рост кости и увеличивать минерализацию кости относятся к наблюдаемым физическим изменениям в кости, и эти термины являются нейтральными по отношению к механизму, благодаря которому происходят изменения в кости.
Считается, что модели остеопороза у мышей и модели роста/плотности кости, которые использовали в описанных в настоящем изобретении исследованиях, имеют высокую прогностическую способность в отношении эффективности у человека, и, таким образом, это описание относится к способам использования полипептидов Ас1КЛа и других антагонистов активина-Ас1КЛа для стимуляции роста кости и увеличения плотности кости у человека. Антагонисты активина-АеЖЛа включают, например, связывающие активин растворимые полипептиды Ас1КЛа, антитела, которые связывают активин (в частности, субъединицы А или В активина, обозначаемые также как βΑ или βΒ) и нарушают связывание Ас1КЛа, антитела, которые связывают Ас1КЛа и нарушают связывание активина, не относящиеся к антителу белки, выбранные по связыванию активина или АсЖЛа (см., например, в νθ 2002/088171, νθ 2006/055689 и \νϋ 2002/032925 примеры таких белков и способы для конструирования и отбора таких реагентов со связыванием, не относящимся к аффинности антитела), и случайные пептиды, выбранные по связыванию активина или Ас1КЛа, часто прикрепленные к домену Рс. Два различных белка (или другие молекулы) с активностью связывания активина или Ас1КЛа, особенно связывающие активин вещества, которые блокируют участки связывания типа I (например, растворимый рецептор активина типа I) и типа II (например, растворимый рецептор активина типа II) соответственно, можно соединять вместе для создания бифункциональной связывающей молекулы. Аптамеры нуклеиновой кислоты, малые молекулы и другие средства, которые ингибируют ось передачи сигнала активина-Ас1КЛа. Различные белки обладают активностью антагониста активина-АсЖЛа, включая ингибин (т.е. альфа-субъединицу ингибина), хотя ингибин не является универсальным антагонистом активина во всех тканях, фоллистатин (например, фоллистатин-288 и фоллистатин-315), Е8КР, активин С, альфа(2)-макроглобулин и мутантный активин А М108А (с заменой метионина на аланин в положении 108). Как правило, альтернативные формы активина, в частности формы с изменениями в связывающем рецептор типа I домене, могут связывать рецепторы типа II и не могут образовывать активный трехкомпонентный комплекс, таким образом действуя как антагонисты. Кроме того, нуклеиновые кислоты, такие как антисмысловые молекулы, миРНК или рибозимы, ингибирующие экспрессию активина А, В, С или Е или, в частности, Ас1КЛа, можно использовать в качестве антагонистов активина-АсЖЛа. Предпочтительно следует использовать антагонист активинаАсЖЛа, обладающий селективностью для ингибирования опосредованной активином передачи сигнала по сравнению с другими членами семейства ТСР-β, в частности, по отношению к СЭЕ-8 и СЭЕ-11. Растворимые белки Ас1КЛЬ действительно связывают активин, однако белок дикого типа не обладает значительной селективностью для связывания активина по сравнению с СЭЕ-8/1Е и предварительные эксперименты позволяют предполагать, что этот белок не обеспечивает желательные эффекты на кость, тогда как вызывает также существенный рост мышц. Однако идентифицировали измененные формы Ас1КЛЬ с различными связывающими свойствами (см., например, νϋ 2006/012627, стр. 55-59, содержание которого приведено в настоящем описании в качестве ссылки), и с этими белками можно достигать желательных эффектов на кость. Природному или измененному Ас1КЛЬ можно придавать дополнительную специфичность в отношении активина благодаря присоединению второго селективного для активина связывающего вещества.
Термины, используемые в описании, как правило, имеют обычное в данной области значение, в контексте этого изобретения и в конкретном контексте, где используют каждый термин. Конкретные термины описаны ниже или в другом месте описания, чтобы обеспечить дополнительное руководство специалисту в данной области в описании композиций и способов по изобретению и того, как их получать и использовать. Объем или значение любого использования термина очевидны из конкретного контекста, в котором используют термин.
Около и приблизительно, как правило, означают приемлемую степень ошибки для количественного измерения с учетом характера или точности измерений. Как правило, примерные степени ошибки составляют 20%, предпочтительно 10% и более предпочтительно 5% данного значения или диапазона значений.
Альтернативно, и особенно в биологических системах, термины около и приблизительно могут обозначать значения, находящиеся в пределах порядка величины, предпочтительно в пределах 5-кратной и более предпочтительно в пределах 2-кратной данной величины. Числовые количества, приведенные в настоящем описании, являются приблизительными, если не указанно иначе, это означает, что термин около или приблизительно можно подразумевать, когда он не указан прямо.
- 7 018221
Способы по изобретению могут включать в себя стадии сравнения последовательностей друг с другом, включая сравнение последовательности дикого типа с одним или несколькими мутантами (вариантами последовательности). Такие сравнения, как правило, включают сравнение последовательностей полимеров, например, с использованием программ и/или алгоритмов выравнивания последовательности, которые хорошо известны в данной области (например, ВЬА8Т, РЛ8ТЛ и ΜΕΟΑΤΙΟΝ, чтобы указать немногие). Специалисту в данной области ясно понятно, что при таких выравниваниях, где мутация содержит вставку или делецию остатка, в выравнивание последовательности будут вносить пропуск (как правило, представленный штрихом, или А) в последовательности полимера, не содержащей вставленного или делетированного остатка.
Гомологичный, во всех его грамматических формах и вариантах написания, относится к родству между двумя белками, обладающими общим эволюционным происхождением, включая белки из суперсемейств одних и тех же организмов, а также гомологичные белки из различных видов организмов. Такие белки (и кодирующие их нуклеиновые кислоты) обладают гомологией последовательности, как отражено сходством их последовательности, по отношению к процентной идентичности или по присутствию специфических остатков или повторов и консервативных положений.
Термин сходство последовательности, во всех его грамматических формах, относится к степени идентичности или соответствия между последовательностями нуклеиновой кислоты или аминокислот, которые могут разделять или не разделять общее эволюционное происхождение.
Однако, как принято, и в настоящем описании термин гомологичный, при модификации наречиями, такими как высоко, может относиться к сходству последовательности и может относиться или не относиться к общему эволюционному происхождению.
2. Полипептиды Ас1РПа.
В конкретных аспектах настоящее изобретение относится к полипептидам Ас®На. Как используется в настоящем описании, термин АсЖНа относится к белкам семейства рецепторов активина типа 11а (АсЖПа) любых видов и к вариантам, полученным из таких белков Ас1РПа посредством мутагенеза или другой модификации. Ссылку на АсЖНа в настоящем описании следует понимать как ссылку на любую из идентифицированных в настоящее время форм. Члены семейства ΑοίΡΙΙη. как правило, представляют собой трансмембранные белки, состоящие из связывающего лиганд внеклеточного домена с богатой цистеином областью, трансмембранного домена и цитоплазматического домена с предсказанной активностью серина/треонинкиназы.
Термин полипептид Ас®На включает в себя полипептиды, содержащие любой природный полипептид из членов семейства АсЖПа, а также из любых их вариантов (включая формы мутантов, фрагментов, слитых белков и пептидомиметиков), которые сохраняют применимую активность. Например, полипептиды АсЖНа включают полипептиды, полученные из последовательности любого известного АсЖЛа, обладающего последовательностью, по меньшей мере приблизительно на 80% идентичной последовательности полипептида АсЖПа и предпочтительно идентичной по меньшей мере на 85, 90, 95, 97, 99% или более. Например, полипептид АсЖПа по изобретению может связывать белок АсЖНа и/или активин и ингибировать его функцию. Предпочтительно полипептид Ас®На стимулирует рост кости и минерализацию кости. Примеры полипептидов АсЖПа включают в себя полипептид-предшественник АсЖЛа человека (8ΕΟ ΙΌ N0: 1) и растворимые полипептиды АсЖНа человека (например, 8ΕΟ ΙΌ N0: 2, 3, 7 и 12).
Последовательность белка-предшественника Ас®На человека является следующей:
МСАААКЬАЕАУГЫЗСЗЗСА!ЦОНЗЕТСЕСЬГЕЫАТГНЕКГКТЦСТСУЕР С¥СОКОКВКНСЕАТИКИ1ЗС51Е1УК0ССИ1ЯЖΙΝΟХЦЙТПСУЕККОЗР еухесссеоммстекгзугремеутсртзырутркррууы ιьъузьу рь МЕ1АС1У1САГИУУВННКМАУРРУЬУРТС0РС;РРРРЗРЦЪСЬКРЬ0ЬЬЕ νΚΑΒΟΒΡ6θνΗΚΑΟΙΙ,ΝΕΥνΑνΚΙΓΡΙΟΟΚ<23ΚΟΝΕΥΕνΥ8ΒΡ6ΜΚΗΕΝ 1Ь0Г16АЕККеТ5У0У0ЬИЬ1ТАЕНЕК63Ь5РЕЪКАА1УУЗИЫЕЬСН1АЕ ΤΜΑΚΟΙΑΥΙΛΕΡΙРСЬК0СЯКРА13ΗΚΡΙΚ5ΚΝУЬЬКНЫЬТАСIΑϋΓΟΕ АЬКГЕАСКЗАеОТНСОУеТВКУМАРЕУЬЕСА1ЫГОВОАГЬВ1РМУАМСЗЬ УЬИЕЬА8ВСТААОСРУОЕУМЬРЕЕЕЕ1СОНР5ЪЕОМ(2ЕУУУНКККВРУЬ КОУНОКНАСМАМЬСЕТ1ЕЕСЫОНОАЕАКЪЗА6СУ6ЕВ1ТОМОВЬТЫ11Т ΤΕ0ΐντννΤΜνΤΝνϋΓΡΡΚΕ35Σ (5Ε13ΙΟΝΟ: 1)
Сигнальный пептид подчеркнут одной линией; внеклеточный домен отмечен жирным шрифтом и потенциальные участки Ν-связанного гликозилирования подчеркнуты дважды.
Последовательность растворимого (внеклеточного) полипептида АсЖПа человека после процессинга является следующей:
1ЬСКЗЕТ12ЕСЬЕГМАКИЕК0ВТН2ТСУЕРСУС0К0КВВНСГАТНКЫ15С 31Е1УК0ССИЬО01ЫС¥ОКТОСУЕККОЗРЕУУГСССЕОКМСЫЕКЕ8УГР ЕМЕУТОРТЗМРУТРКРР (5Е<2 Π) ΝΟ: 2)
С-концевой хвост внеклеточного домена подчеркнут. Последовательность с делетированным хвостом (последовательность Δ15) является следующей:
- 8 018221
ΙΣεΚΞΕΤΟΕϋΙ,ΓΓΝΆΝΗΕΚΟΒΤΝΟΤΟνΕΡςΥδΟΚΟΚΒΕΗΟΓΑΤΗΚΝΙδΟ ЗТЕ^КФССИЬООТКСУОВТОСУЕККОЗРЕУУЕСССЕСКМСМЕКГЗУГР ЕМ (5Ер ГО N0:3)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей белок-предшественник АсШПа человека, является следующей (нуклеотиды 164-1705 из записи ΝΜ_001616 в СепЬапк):
АТБССАеСТСС'ГССАААСТТСССБТТТССССТСТТТСТТАТСТССТСТТСТТСАбСТеС ТАТАСТТССТАСАТСАСАААСТСАСйАйТСТСТТТТСТТТААТССТААТТСбСАААААС АСАСААССААТСАААСТССТЗТТСААСССТ6ТТАТС6ТБАСААА6АТАААС66СС6САТ ТсттттССТАССТССААСААТАТТТСТССТТССАТТСАААТАСТСАААСААбаТТСТТб
ССТССАТСАТАТСААСТССТАТСАСАБСАСТСАТТСТСТАСААААААААСАСАССССТЗ
АА5ТАТАТТТТТ6ТТеСТСТЗАССССААТАТСТСТААТ6ААААСТТТТСТТАТТТТССА ЗАСАТБЗААЗТСАСАСАССССАСТТСАААТССАСТТАСАССТААСССАСССТАТТАСАА САТССТЗСТСТАТТССТТбСТЗССАСТТАТСТТААТТССССССАТТСТСАТТТСТССАТ ТТТСбСТСТАСАСбСАТСАСААСАТСЗССТАСССТССТСТАСТТЗТТССААСТСААСАС ССАССАССАСССССАССТТСТССАТТАСТАСССТТСАААССАСТССАСТТАТТАСААЗТ САААССААССССААБАТТТбСТТСТСТСТСЗАААССССАСТТеСТТААССААТАТЗТбС СТЗТСААААТАТ'ГТССААТАСАССАСАААСАСТСАТСССААААтеААТАСЗААСТСТАС АСТТТСССТССААТСАЛЗСАТСАеААСАТАТТАСАСТТСАТТЗЗТбСАСАААААССАСС САССАЗТСТТСАТСТСЗАТСТТТбССТСАТСАСАССАТТТСАТСААААЗССТТСАСТАТ САбАСТТТСТТААббСТААТСТССТСТСТТССААТСААСТСТЗТСАТАТТССАСАААСС АТСССТАСАСЗАТТСССАТАТТТАСАТ6АССАТАТАССТССССТААААСАТ6СССАСАА АССТСССАТАТСТСАСАЗССАСАТСААААЗТАААААТСТЗСТСТТСАААААСААССТЗА САЗСТТССАТТбСТЗАСТТТССбТТССССТТААААТТТЙАСССТЗССААбТСТССАССС ЗАТАСССАТССАСАССТТССТАСССССА6СТАСАТ6ССТССАЗА0СТАТТАСАССЗТСС ТАТАААСТТССАААЗССАТЗСАТТТТТ6АССАТАСАТАТСТАТЗССАТССЗАТТАСТСС ТАТБбеААСТБбСТТСТСеСТСТАСТССТЗСАБАТССАССТСТАеАТЙААТАСАТСТТе ССАТТТСАССАЗСАААТТСЗССАССАТССАТСТСТТЗДАСАСАТЗСАЗСААОТТЗТТбТ ССАТААААААААСАССССТСТТТТААСАОАТТАТТСССАСАААСАТССТСЙААТСССАА ТбСТСТСТСАААССАТТЗААСААТСТТЗЗСАТСАССАСЗСАЗААСССАССТТАТСАССТ ССАТСТ6ТАСЗТСАААСААТТАСССАСАТ6САСАСАСТААСАААТАТТАТТАССАСАСА ббАСАТТЗТААСАСТССТСАСААТССТСАСАААТСТТСАСТТТССТСССДААСААТСТА отстатса (5Е<2 ГО ΝΟ: 4)
Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей растворимый (внеклеточный) полипептид АсГКИа человека, является следующей:
АТАСТТССТАСАТСАСАААСТСАССАСТСТСТТТТСТТТААТССТААТТЗССАААААСА
САСААССААТСАААСТСЗТСТТ5ААСССТСТТАТССТЗДСАААСАТАААССЗС6ССАТТ СТТТТССТАССТССААСААТАТТТСТССТТССАТТСАААТАСТСАААСААСЗТТЗТТ6С СТСаАТСАТАТСААСТССТАТЗАСАЗСАСТСАТТСТСТДЗААААААААСАСАССССТСА АСТАТАТТТТТСТТССТЗТСАЗСССААТАТСТСТААТСААААСТТТТСТТАТТТТССАС АСАТССААСТСАСАСАССССАСТТСАААТССАСТТАСАССТААСССАССС (ЗЕО ГО
ΝΟ: 5)
В конкретном варианте осуществления изобретение относится к растворимым полипептидам АсЖПа. Как описано в настоящем изобретении, термин растворимые полипептиды Лс1К11а. как правило, относится к полипептидам, содержащим внеклеточный домен белка АсШПа. Термин растворимый полипептид АсГКПа, как используется в настоящем описании, включает любой природный внеклеточный домен белка Лс1КИа, а также любые его варианты (включая формы мутантов, фрагментов и пептидомиметиков).
Связывающий активин полипептид АсШПа представляет собой полипептид, который сохраняет способность связывать активин, в частности активин АА, АВ или ВВ. Предпочтительно связывающий активин полипептид АсШПа будет связывать активин АА с константой диссоциации 1 нМ или менее. Аминокислотные последовательности белка-предшественника АсШПа человека представлены ниже. Внеклеточный домен белка АсШПа связывает активин и, как правило, является растворимым, и, таким образом, его можно обозначать как растворимый связывающий активин полипептид АсГКПа. Примеры растворимых связывающих активин полипептидов АсГКПа включают растворимый полипептид, проиллюстрированный на 8Εβ ΙΌ N0: 2, 3, 7, 12 и 13. Пептид, проиллюстрированный на 8Εβ ΙΌ N0: 7, обозначен АсГКПа-КЕс и дополнительно описан в примерах. Другие примеры растворимых связывающих
- 9 018221 активин полипептидов ЛеЖИа, кроме внеклеточного домена белка АсЖПа, содержат сигнальную последовательность, например лидерную последовательность меллитина пчелы медоносной (8ЕО ΙΌ N0: 8), лидер тканевого активатора плазминогена (ТРА) (8Е0 ΙΌ N0: 9) или лидер природного Ас1Р11а (8Е0 ΙΌ N0: 10). В полипептиде АсЖПа-йЕс, проиллюстрированном в 8Е0 ΙΌ N0: 13, использован лидер ТРА.
Функционально активные фрагменты полипептидов Ас1Р11а могут быть получены скринингом полипептидов после рекомбинантной продукции с соответствующего фрагмента нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид АсЖПа. Кроме того, фрагменты можно химически синтезировать с использованием известных в данной области способов, таких как общепринятый твердофазный химический способ синтеза полипептидов по Меррифилду с ί-Мос или ί-Вос. Фрагменты могут быть получены (рекомбинантно или химическим синтезом) и тестированы для идентификации тех пептидильных фрагментов, которые могут функционировать как антагонисты (ингибиторы) белка Ас1Р11а или передачи сигнала, опосредованной активином.
Функционально активные варианты полипептидов Ас®Па могут быть получены скринингом библиотек модифицированных полипептидов после рекомбинантной продукции с соответствующих подвергнутых мутагенезу нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид Ас1Р11а. Варианты могут быть получены и тестированы для идентификации тех, которые могут функционировать как антагонисты (ингибиторы) белка Ас1Р11а или передачи сигнала, опосредованной активином. В конкретных вариантах осуществления функциональный вариант полипептидов АсЖПа содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из 5>Е0 ΙΌ N0: 2 или 3. В конкретных случаях функциональный вариант обладает аминокислотной последовательностью, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99 или 100% идентичной аминокислотной последовательности, выбранной из 8Е0 ΙΌ N0: 2 или 3.
Функциональные варианты могут быть получены модификацией структуры полипептида Ас®Па для таких целей, как увеличение терапевтической эффективности или стабильности (например, срока хранения ех νίνο и устойчивости к протеолитической деградации ίη νίνο). Такие модифицированные полипептиды АсЖПа при отборе по сохранению связывания активина считают функциональными эквивалентами природных полипептидов АсЖПа. Модифицированные полипептиды Ас1РИа могут также быть получены, например, посредством замены, делеции или добавления аминокислоты. Например, можно предположить, что отдельная замена лейцина на изолейцин или валин, аспартата на глутамат, треонина на серин или подобной замены аминокислоты на структурно родственную аминокислоту (например, консервативные мутации) не оказывают основного эффекта на биологическую активность полученной молекулы. Консервативные замены представляют собой такие замены, которые имеют место внутри семейства аминокислот, являющихся родственными по их боковым цепям. Приводит ли изменение в аминокислотной последовательности полипептида АсЖПа к функциональному гомологу, можно легко определить оценкой способности варианта полипептида АсЖПа вызывать ответ клеток сходным образом с полипептидом Ас1РИа дикого типа.
В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к конкретным мутациям полипептидов АсЖПа, изменяющим гликозилирование полипептида. Такие мутации могут быть выбраны так, чтобы вводить или исключать один или несколько участков гликозилирования, таких как участки 0-связанного или ^связанного гликозилирования. Участки распознавания аспарагин-связанного гликозилирования, как правило, содержат трипептидную последовательность, аспарагин-Х-треонин (или аспарагины-Х-серин) (где X представляет собой любую аминокислоту), которую специфически распознают соответствующие клеточные ферменты гликозилирования. Изменение можно осуществлять также добавлением или заменой одного или нескольких остатков серина или треонина в последовательности полипептида АсЖПа дикого типа (в случае участков 0-связанного гликозилирования). Множество замен или делеций аминокислот в одном или обоих из первого или третьего положений аминокислот участка распознавания для гликозилирования (и/или делеция аминокислоты во втором положении) приводит к отсутствию гликозилирования в модифицированной трипептидной последовательности. Другими способами увеличения числа углеводных групп на полипептиде АсЖПа являются химическое или ферментативное присоединение гликозидов к полипептиду АсЖПа. В зависимости от используемого способа присоединения, сахар(а) можно присоединять к (а) аргинину и гистидину; (Ь) свободным карбоксильным группам; (с) свободным сульфгидрильным группам, таким как группы цистеина; (б) свободным гидроксильным группам, таким как группы серина, треонина или гидроксипролина; (е) ароматическим остаткам, таким как остатки фенилаланина, тирозина или триптофана; или (ί) амидной группе глутамина. Такие способы описаны в \У0 87/05330, опубликованном 11 сентября 1987 г., и в статье Арйп апб ХУгМоп (1981), СНС СпЕ Веу. Вюсйет., р. 259-306, содержание которых приведено в настоящем описании в качестве ссылки. Удаление одного или нескольких углеводных групп, присутствующих на полипептиде Ас®Па, можно осуществлять химически и/или ферментативно. Химическое дегликозилирование может включать, например, воздействие на полипептид АсЖПа соединением трифторметансульфоновой кислоты или эквивалентным соединением. Эта обработка приводит к отщеплению большинства или всех сахаров, за исключением связывающего сахара (№ацетилглюкозамина или №ацетилгалактозамина), в то же
- 10 018221 время оставляя аминокислотную последовательность интактной. Химическое дегликозилирование дополнительно описано в статье Накшиббш с1 а1. (1987), Агск. Вюскет. Вюркуз. 259:52 и Ебде с1 а1. (1981), Апа1. Вюскет. 118:131. Ферментативное отщепление групп углевода на полипептидах АсШПа можно осуществлять использованием множества эндо- и экзогликозидаз, как описано в статье Т1ю1акига е1 а1. (1987), МеШ Еп7уто1. 138:350.
Последовательность полипептида Ас®Иа можно регулировать, по необходимости, в зависимости от типа используемой экспрессирующей системы, поскольку клетки млекопитающих, дрожжей, насекомых и растений - все могут вводить различающиеся типы гликозилирования, на которые может влиять аминокислотная последовательность пептида. Как правило, белки Ас®Ла для использования у человека, экспрессируют в линии клеток млекопитающего, которая обеспечивает подходящее гликозилирование, такой как линии клеток НЕК293 или СНО, хотя предполагают, что другие экспрессирующие линии клеток млекопитающих, линии клеток дрожжей с модифицированными ферментами гликозилирования и клетки насекомых также можно использовать.
Кроме того, описание относится к способу получения мутантов, в частности наборов комбинаторных мутантов полипептида Ас®Ла, а также усеченных мутантов; пулы комбинаторных мутантов являются особенно эффективными для идентификации функциональных вариантов последовательности. Целью скрининга таких комбинаторных библиотек может быть получение, например, вариантов полипептида Ас®Ла, которые могут действовать либо как агонисты, либо как антагонист или, альтернативно, которые обладают всеми вместе новыми активностями. Множество анализов скрининга представлены ниже, и такие анализы можно использовать для оценки вариантов. Например, можно проводить скрининг вариантов полипептида Ас®Ла по способности связывать лиганд Ас®Ла для предотвращения связывания лиганда АсШЛа с полипептидом Ас®Ла или чтобы помешать передаче сигнала, вызванной лигандом АсШПа.
Активность полипептида АсЖЛа или его вариантов также можно тестировать в анализе на основе клеток или в анализе ίη νίνο. Например, можно оценить эффект варианта полипептида Ас®Ла на экспрессию генов, вовлеченных в образование кости или разрушение кости. Можно, по необходимости, проводить в присутствии одного или нескольких белков - лигандов рекомбинантного АсШЛа (например, активина), и клетки можно трансфицировать для получения полипептида Ас®Ла и/или его вариантов и, необязательно, лиганда Ас®Ла. Подобным образом, полипептид АсЖЛа можно вводить мыши или другому животному и можно оценивать одно или несколько свойств кости, таких как плотность или объем. Можно оценивать также скорость заживления для переломов кости. Двухэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (ВЕХА) представляет собой хорошо разработанный, неинвазивный, количественный способ оценки плотности кости у животного. У человека системы центральной ВЕХА можно использовать для оценки плотности костей в позвоночнике и тазе. Они являются наилучшим прогностическим параметром общей плотности костей. Системы периферической ВЕХА можно использовать для оценки плотности костей в периферических костях, включая, например, кости кисти, запястья, голеностопа и ступни. Традиционные системы рентгеновского изображения, включая сканирования САТ, можно использовать для оценки роста костей и заживления переломов. Можно оценивать также механическую прочность кости.
Могут быть получены варианты комбинаторного происхождения, обладающие селективной или в целом увеличенной активностью по сравнению с природным полипептидом Ас®Ла. Подобным образом, мутагенез может приводить к вариантам, обладающим временем полужизни внутри клетки, существенно отличающимся от соответствующего полипептида Ас®Ла дикого типа. Например, измененному белку можно придавать либо большую стабильность, либо меньшую стабильность к протеолитической деградации или другим клеточным процессам, приводящим к разрушению или инактивации другим образом природного полипептида АсЖЛа. Такие варианты и кодирующие их гены можно использовать для изменения уровней полипептида Ас®Ла модуляцией времени полужизни полипептидов АсЖЛа. Например, короткое время полужизни может приводить к более временным биологическим эффектам и может позволять более жесткий контроль уровней рекомбинантного полипептида Ас®Ла у пациента. В слитом с Ес белке мутации можно вводить или в линкер (при его наличии), и/или в Ес часть для изменения времени полужизни белка.
Комбинаторная библиотека может быть получена посредством вырожденной библиотеки генов, кодирующих библиотеку полипептидов, каждый из которых включает по меньшей мере часть потенциальных последовательностей полипептида АсЖЛа. Например, смесь синтетических олигонуклеотидов можно ферментативно лигировать в последовательности генов, так что вырожденный набор нуклеотидных последовательностей потенциальных полипептидов Ас®Ла можно экспрессировать в виде отдельных полипептидов или, альтернативно, в виде набора более крупных слитых белков (например, для фагового дисплея).
Существует много способов, которыми библиотека потенциальных гомологов может быть получена из вырожденной олигонуклеотидной последовательности. Можно проводить химический синтез вырожденной последовательности гена на автоматическом синтезаторе ДНК и затем синтетические гены лигировать в подходящий вектор для экспрессии. Синтез вырожденных олигонуклеотидов хорошо известен в
- 11 018221 данной области (см., например, №1гапд. Б.А. (1983), Те!гайебгоп. 39:3; Йакига е! а1. (1981), КесотЫпап! ΌΝΆ, Ргос. 3гб С1еуе1апб Бутрок. Масгото1еси1е8, еб. Л.С. ХУаНом, Лтйегбат: Е1кеу1ег, р. 273-289; Иакига е! а1. (1984), Лили. Кеу. ВюсНет. 53:323; Иакига е! а1. (1984), Бс1епсе. 198:1056; 1ке е! а1. (1983), М.1с1е1с Ас1б Кез. 11:477). Такие способы применяли для направленной эволюции других белков (см., например, Бсо!! е! а1. (1990), Баепсе. 249:386-390; КоЬейк е! а1. (1992), ΡΝΑ8 ИБА. 89:2429-2433; Оеуйп е! а1. (1990), Бшепсе. 249:404-406; Сшг1а е! а1. (1990), ΡΝΑ8 ИБА. 87:6378-6382; а также патенты США № 5223409, 5198346 и 5096815).
Альтернативно, другие формы мутагенеза можно использовать для получения комбинаторной библиотеки. Например, варианты полипептида Ас!К11а могут быть получены и выделены из библиотеки посредством скрининга с использованием, например, мутагенеза со сканированием аланином и т.п. (Ки! е! а1. (1994), Вюсйет1к!гу. 33:1565-1572; \\апд е! а1. (1994), 1. Вю1. Сйет. 269:3095-3099; Ва1ш! е! а1. (1993), Сепе. 137:109-118; СгобЬегд е! а1. (1993), Еиг. 1. ВюсНет. 218:597-601; №1дак1шпа е! а1. (1993), 1. Вю1. С’Нет. 268:2888-2892; Бо\гтап е! а1. (1991), ВюсНетМгу. 30:10832-10838 и Сипптдйат е! а1. (1989), Бс1епсе. 244:1081-1085), мутагенеза со сканированием линкером (Сик!ш е! а1. (1993), Упо1оду. 193:653660; Вго\уп е! а1. (1992), Мо1. Се11 Вю1. 12:2644-2652; МсКшдй! е! а1. (1982), Бс1епсе. 232:316); насыщающего мутагенеза (Меуегк е! а1. (1986), Бс1епсе. 232:613); ПЦР-мутагенеза (Беипд е! а1. (1989), Ме!1об Се11 Мо1. Вю1. 1:11-19); случайного мутагенеза, включая химический мутагенез и т.п. (МШег е! а1. (1992), А Б1юг1 Соигке ш Вас!епа1 СепеИск, СБНЬ Ргекк, Со1б Брппд НагЬог, ΝΥ и Сгеепег е! а1. (1994), Б!га!ед1ек ш Мо1. Вю1. 7:32-34). Мутагенез со сканированием линкером, в частности, при комбинаторных параметрах представляет собой привлекательный способ для идентификации усеченных (биоактивных) форм полипептидов Ас!К11а.
Широкий диапазон способов известен в данной области для скрининга продуктов генов из комбинаторных библиотек, полученных посредством точечных мутаций и усечений, и в связи с этим для скрининга библиотек кДНК по продуктам генов, обладающим конкретными свойствами. Такие способы можно будет в основном адаптировать для быстрого скрининга библиотек генов, полученных комбинаторным мутагенезом полипептидов Ас1КНа. Наиболее широко используемые способы скрининга больших библиотек генов, как правило, включают клонирование библиотеки генов в реплицирующихся экспрессирующих векторах, трансформацию подходящих клеток полученной библиотекой векторов и экспрессию комбинаторных генов в условиях, при которых детекция желательной активности облегчает относительно простое выделение вектора, кодирующего ген, продукт которого детектировали. Предпочтительные анализы включают анализы связывания активина и анализы опосредованной активином передачи сигнала клеток.
В конкретных вариантах осуществления полипептиды Ас!К11а по изобретению могут дополнительно содержать посттрансляционные модификации в дополнение к любым, которые естественным образом присутствуют в полипептидах Ас!К11а. Такие модификации включают в качестве неограничивающих примеров ацетилирование, карбоксилирование, гликозилирование, фосфорилирование, присоединение липидов и ацилирование. В результате модифицированные полипептиды Ас1КНа могут содержать не относящиеся к аминокислотам элементы, такие как полиэтиленгликоли, липиды, поли- или моносахариды и фосфаты. Эффекты таких не относящихся к аминокислотам элементов на функциональность полипептида Ас!К11а можно тестировать, как описано в настоящем изобретении для других вариантов полипептида АсЖНа. Когда полипептид Ас!К11а продуцируют в клетках посредством расщепления растущей формы полипептида АсЖНа, посттрансляционный процессинг также может быть важным для правильного сворачивания и/или функционирования белка. Различные клетки (такие как СНО, НеЬа, МОСК, 293, ^138, МН-3Т3 или НЕК293) обладают специфическими клеточными аппаратами и характерными механизмами для таких посттрансляционных видов активности, и их можно выбирать, чтобы убедиться в правильной модификации и процессинге полипептидов Ас1КНа.
В конкретных аспектах функциональные варианты или модифицированные формы полипептидов Ас!КНа включают слитые белки, обладающие по меньшей мере частью полипептидов Ас1КНа и одним или несколькими слитыми доменами. Хорошо известные примеры таких слитых доменов включают в качестве неограничивающих примеров полигистидин, С1и-С1и, глутатион-Б-трансферазу (СБТ), тиоредоксин, белок А, белок С, константную область тяжелой цепи иммуноглобулина (Ес), связывающий мальтозу белок (МБР) или человеческий сывороточный альбумин. Слитый домен может быть выбран так, чтобы придавать желательное свойство. Например, некоторые слитые домены являются особенно эффективными для выделения слитых белков аффинной хроматографией. Для цели аффинной очистки используют соответствующие матрицы для аффинной хроматографии, такие как конъюгированные с глутатионом, амилазой и никелем или кобальтом смолы. Многие из таких матриц доступны в форме набора, такого как система очистки СБТ РНагтааа и система 01Аехргекк™ (Р1адеп), используемые с партнерами для слияния (Н1Б6). В качестве другого примера слитый домен может быть выбран так, чтобы облегчать детекцию полипептидов Ас1КНа. Примеры таких доменов для детекции включают различные флуоресцентные белки (например, СЕР), а также эпитопы-метки, которые обычно представляют собой короткие пептидные последовательности, для которых доступно специфическое антитело. Хорошо известные эпитопы-метки, для которых легко доступны специфические моноклональные антитела, вклю
- 12 018221 чают в себя метки РЬАС, гемагглютинин (НА) вируса гриппа и с-тус. В некоторых случаях слитые домены имеют участок расщепления протеазой, такой как фактор Ка или тромбин, который позволяет соответствующей протеазе частично расщеплять слитые белки и, таким образом, высвобождать из них рекомбинантные белки. Затем высвобожденные белки можно отделять от слитого домена последующим хроматографическим разделением. В конкретных предпочтительных вариантах осуществления полипептид Ас®На сливают с доменом, который стабилизирует полипептид Ас£КНа ίη νίνο (стабилизирующий домен). Под стабилизацией обозначают все, что увеличивает время полужизни в сыворотке, независимо от того, происходит ли это из-за уменьшения разрушения, уменьшения клиренса почками или другого фармакокинетического эффекта. Известно, что слияние с частью Рс иммуноглобулина сообщает желательные фармакокинетические свойства широкому диапазону белков. Подобным образом, слияние с сывороточным альбумином может придавать желательные свойства. Другие типы слитых доменов, которые могут быть выбраны, включают мультимеризующие (например, димеризующие, тетрамеризующие) домены и функциональные домены (придающие биологическую функцию, такую как стимуляция роста костей или роста мышц, как желательно).
В качестве конкретного примера настоящее изобретение относится к слитому белку, содержащему растворимый внеклеточный домен АсЖПа, слитый с доменом Рс (например, 8ЕЦ ГО N0: 6).
ТНТСРРСРАРЕЬЬССРЗУГЪГРРКРКОТЪМТЗКТРЕУТСУУУр(Α)νδΗΕϋΡΕνΚΓΝΗΥνΟΟ νΕνΗΝΑΚΤΚΡΒΕΕ0ΥΝ5ΤΥΗνν5νΐ,Τνΐ,Η0Ι)ΗΙ.Ν6ΚΕΥΚΟΚ (А) У5ЫКАЬРУР1ЕКТ13КАК
СОРКЕРОУУТЬРРЗПЕЕМТКНОУЗЬТСЬУКСГУРЭОМУЕИЕЗМбОРЕЫМУКТТРРУЬРЗРС
РГЕЬУЗКЪТУОКЗВИООСНУГЗСЗУМНЕАЬНМ(А)НУТОКЗЬЗЬЗРБК*
Необязательно, домен Рс обладает одной или несколькими мутациями в таких остатках, как Акр-265, лизин 322 и Акп-434. В конкретных случаях мутантный домен Рс, обладающий одной или несколькими из этих мутаций (например, мутацией Акр-265), обладает уменьшенной способностью связывания с рецептором Рсу относительно домена Рс дикого типа. В других случаях мутантный домен Рс, обладающий одной или несколькими из этих мутаций (например, мутацией Акп-434), обладает увеличенной способностью связывания родственного МНС класса I Рс-рецептора (^ΡΝ) по сравнению с доменом Рс дикого типа.
Понятно, что различные элементы слитых белков могут быть расположены любым образом, согласующимся с желательной функциональностью. Например, полипептид АсЖНа можно располагать на С-конце от гетерологичного домена или, альтернативно, гетерологичный домен можно помещать на С-конце от полипептида АсЖНа. Домен полипептида Ас®Па и гетерологичный домен не обязательно являются соседними в слитом белке, и дополнительные домены или аминокислотные последовательности можно включать с С- или Ν-конца от любого домена или между доменами.
В конкретных вариантах осуществления полипептиды Ас®Па по настоящему изобретению содержат одну или несколько модификаций, способных стабилизировать полипептиды Ас1Р11а. Например, такие модификации увеличивают время полужизни полипептидов АсЖНа ίη νίίτο, увеличивают время полужизни в кровотоке полипептидов Ас1Р11а или уменьшают протеолитическую деградацию полипептидов Ас®На. Такие стабилизирующие модификации включают в качестве неограничивающих примеров слитые белки (включая, например, слитые белки, содержащие полипептид Ас®Па и стабилизирующий домен), модификации участка гликозилирования (включая, например, добавление участка гликозилирования к полипептиду Ас®Па) и модификации углеводной группы (включая, например, удаление углеводных групп из полипептида АсЖНа). В случае слитых белков полипептид Ас®Па сливают со стабилизирующим доменом, таким как молекула 1дС (например, домен Рс). Как используется в настоящем описании, под термином стабилизирующий домен понимают не только слитый домен (например, Рс), как в случае слитых белков, но также понимают небелковые модификации, такие как углеводородная группа, или небелковый полимер, такой как полиэтиленгликоль.
В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение делает доступными выделенные и/или очищенные формы полипептидов Ас®Па, которые являются отделенными от других белков, или иным образом, по существу, свободными от них. Полипептиды Ас1Р11а. как правило, получают экспрессией с рекомбинантных нуклеиновых кислот.
3. Нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептиды Ас®На.
В конкретных аспектах изобретение относится к выделенным и/или рекомбинантным нуклеиновым кислотам, кодирующим любой полипептид Ас®Па (например, растворимых полипептидов Ас®Па), включая фрагменты, функциональные варианты и слитые белки, описанные в настоящем изобретении. Например, 8ЕЦ ГО N0: 4 кодирует природный полипептид-предшественник Ас®Па человека, в то время как 8ЕЦ ГО N0: 5 кодирует внеклеточный домен Ас®На после процессинга. Рассматриваемые нуклеиновые кислоты могут являться одноцепочечными или двухцепочечными. Такие нуклеиновые кислоты могут представлять собой молекулы ДНК или РНК. Эти нуклеиновые кислоты можно использовать, например, в способах получения полипептидов Ас®Па или в качестве непосредственных лекарственных средств (например, в способе генотерапии).
- 13 018221
В конкретных аспектах под рассматриваемыми нуклеиновыми кислотами, кодирующими полипептиды АеГКПа, дополнительно понимают как включающие нуклеиновые кислоты, являющиеся вариантами 8ЕО ΙΌ N0: 4 или 5. Варианты нуклеотидных последовательностей включают последовательности, отличающиеся одной или несколькими заменами, добавлениями или делециями нуклеотидов, такие как аллельные варианты.
В конкретных вариантах осуществления изобретение относится к выделенным или рекомбинантным последовательностям нуклеиновой кислоты, которые по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99 или 100% идентичны 8ЕС ΙΌ N0: 4 или 5. Специалисту в данной области понятно, что последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарные 8ЕС ΙΌ N0: 4 или 5 и вариантам 8ЕС ΙΌ N0: 4 или 5, также входят в объем этого изобретения. В следующих вариантах осуществления последовательности нуклеиновой кислоты по изобретению могут быть выделенными, рекомбинантными и/или слитыми с гетерологичной нуклеотидной последовательностью или могут присутствовать в библиотеке ДНК.
В других вариантах осуществления нуклеиновые кислоты по изобретению включают в себя также нуклеотидные последовательности, которые гибридизуются в условиях высокой жесткости с нуклеотидной последовательностью 8ЕС ΙΌ N0: 4 или 5, последовательностью, комплементарной 8ЕС ΙΌ N0: 4 или 5, или их фрагментами. Как обсуждают выше, специалисту в данной области ясно понятно, что подходящие условия жесткости, способствующие гибридизации ДНК, можно изменять. Например, можно проводить гибридизацию в 6,0х хлориде натрия/цитрате натрия (88С) приблизительно при 45°С, с последующей отмывкой 2х88С при 50°С. Например, концентрация соли на стадии отмывки может быть выбрана от низкой жесткости приблизительно 2х88С при 50°С до высокой жесткости приблизительно 0,2х88С при 50°С. Кроме того, температуру на стадии отмывки можно увеличивать от условий низкой жесткости при комнатной температуре, приблизительно 22°С, до условий высокой жесткости приблизительно при 65°С. Как температуру, так и соль можно изменять либо температуру или концентрацию соли можно поддерживать постоянными, в то время как другую переменную изменяют. В одном из вариантов осуществления изобретение относится к нуклеиновым кислотам, гибридизующимся в условиях низкой жесткости при 6х88С при комнатной температуре с последующей промывкой при 2х88С при комнатной температуре.
Выделенные нуклеиновые кислоты, которые отличаются от нуклеиновых кислот с последовательностями 8ЕС ΙΌ N0: 4 или 5 в результате вырожденности генетического кода, также входят в объем изобретения. Например, ряд аминокислот определяется более чем одним триплетом. Кодоны, которые задают ту же аминокислоту, или синонимы (например, САИ и САС являются синонимами для гистидина), могут приводить к молчащим мутациям, которые не влияют на аминокислотную последовательность белка. Однако предполагают, что полиморфизмы последовательности ДНК, которые действительно приводят к изменениям аминокислотных последовательностей рассматриваемых белков, будут существовать в клетках млекопитающих. Специалисту в данной области будет известно, что эти варианты одного или нескольких нуклеотидов (вплоть до приблизительно 3-5% нуклеотидов) нуклеиновых кислот, кодирующих конкретный белок, могут существовать у индивидуумов данного вида из-за естественной аллельной изменчивости. Все и любые такие варианты нуклеотидов и полученные полиморфизмы аминокислот входят в объем этого изобретения.
В конкретных вариантах осуществления рекомбинантные нуклеиновые кислоты по изобретению могут являться функционально связанными с одной или несколькими регуляторными нуклеотидными последовательностями в экспрессирующей конструкции. Регуляторные нуклеотидные последовательности, как правило, являются подходящими для клетки-хозяина, используемой для экспрессии. Многочисленные типы подходящих экспрессирующих векторов и подходящих регуляторных последовательностей известны в данной области для множества клеток-хозяев. Как правило, указанные одна или несколько регуляторных нуклеотидных последовательностей могут включать в качестве неограничивающих примеров промоторные последовательности, лидерные или сигнальные последовательности, участки связывания рибосомы, последовательности старта и терминации транскрипции, последовательности старта и терминации трансляции и последовательности энхансера или активатора. Конститутивные или индуцибельные промоторы, как известно в данной области, относятся к изобретению. Промоторы могут представлять собой либо природные промоторы, либо гибридные промоторы, сочетающие элементы более одного промотора. Экспрессирующая конструкция может присутствовать в клетке на эписоме, такой как плазмида, или экспрессирующую конструкцию можно вставлять в хромосому. В предпочтительном варианте осуществления экспрессирующий вектор содержит ген селективного маркера, чтобы обеспечить отбор трансформированных клеток-хозяев. Гены селективных маркеров хорошо известны в данной области и могут меняться с используемой клеткой-хозяином.
В конкретных аспектах изобретения рассматриваемая нуклеиновая кислота представлена в экспрессирующем векторе, содержащем нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид АеГКПа и функционально связанную по меньшей мере с одной регуляторной последовательностью. Регуляторные последовательности известны в данной области, и их выбирают, чтобы управлять экспрессией полипептида АеГКПа. Соответственно, термин регуляторная последовательность включает промоторы, энхан
- 14 018221 серы и другие элементы контроля экспрессии. Примерные регуляторные последовательности описаны в Соеббек Сспс Ехртеззюи Тсе1то1оду: Мебюбз ίη Епхуто1оду. Асабетк Ргезз, 8аи Όίοβο. СА (1990). Например, любую из широкого множества последовательностей для контроля экспрессии, которые контролируют экспрессию последовательности ДНК, когда функционально связаны с ней, можно использовать в этих векторах для экспрессии последовательностей ДНК, кодирующих полипептид АскКНа. Такие используемые последовательности для контроля экспрессии включают, например, ранний и поздний промоторы 8У40, промотор 1е(, немедленный ранний промотор аденовируса или цитомегаловируса, промоторы К8У, систему 1ас, систему ίτρ, систему ТАС или ТКС, промотор Т7, экспрессией с которого управляет Т7 РНК-полимераза, главные области промотора и оператора фага лямбда, контрольные области для белка оболочки Гб, промотор для 3-фосфоглицераткиназы или других гликолитических ферментов, промоторы кислой фосфатазы, например Р1о5, промоторы факторов α-скрещивания дрожжей, промотор многогранника бакуловирусной системы и другие последовательности, известные для контроля экспрессии генов прокариотических или эукариотических клеток или их вирусов, и различные их комбинации. Следует понимать, что конструирование экспрессирующего вектора может зависеть от таких факторов, как выбор клетки-хозяина, подлежащей трансформации, и/или типа белка, желательного для экспрессии. Более того, следует учитывать также число копий вектора, способность контролировать это число копий и экспрессию любых других белков, кодируемых вектором, таких как маркерные антибиотики.
Рекомбинантная нуклеиновая кислота по изобретению может быть получена лигированием клонированного гена или его части в вектор, подходящий для экспрессии либо в прокариотических клетках, либо в эукариотических клетках (дрожжей, птиц, насекомых или млекопитающих), либо и в тех, и в других. Экспрессирующие носители для получения рекомбинантного полипептида АскКНа включают плазмиды и другие векторы. Например, подходящие векторы включают плазмиды типов: полученные из рВК322 плазмиды, полученные из рЕМВЬ плазмиды, полученные из рЕХ плазмиды, полученные из рВТас плазмиды и полученные из рИС плазмиды для экспрессии в прокариотических клетках, таких как Е.со11.
Некоторые экспрессирующие векторы для млекопитающих содержат как прокариотические последовательности для облегчения размножения вектора в бактериях, так и одну или несколько эукариотических транскрипционных единиц, которые экспрессируются в эукариотических клетках. Векторы, полученные из рсПХА1/атр, рсПХА1/иео, рКс/СМУ, р8У2др1, р8У2иео, р8У2-бШт, рТк2, рКБУиео, рМ8С, р8УТ7, рко-иео и рНуд, являются примерами экспрессирующих векторов для млекопитающих, подходящих для трансфекции эукариотических клеток. Некоторые из этих векторов модифицируют последовательностями из бактериальных плазмид, таких как рВК322, для облегчения репликации и отбора по устойчивости к лекарственным средствам как в прокариотических, так и в эукариотических клетках. Альтернативно, производные вирусов, таких как вирус бычьей папилломы (ВРУ-1) или вирус ЭпштейнаБарр (рНЕВо, полученный из рКЕР и р205), можно использовать для временной экспрессии белков в эукариотических клетках. Примеры других вирусных (включая ретровирусные) систем экспрессии можно обнаружить ниже в описании систем доставки для генотерапии. Различные способы, применяемые в получении плазмид и в трансформации организмов-хозяев, хорошо известны в данной области. Другие подходящие экспрессирующие системы как для прокариотических, так и для эукариотических клеток, а также общие рекомбинантные способы, см. в Мо1еси1аг Оошпд А БаЬога1огу Маииа1, 3гб Еб., еб. Ьу 8атЬтоок, Етйзсй аиб Машабз (Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬогаЮту Ртезз, 2001). В некоторых случаях желательно экспрессировать рекомбинантные полипептиды посредством использования бакуловирусной экспрессирующей системы. Примеры таких бакуловирусных экспрессирующих систем включают в себя полученные из рУЪ векторы (такие как рУЪ1392, рУЪ1393 и рУЪ941), полученные из рАсЬУ векторы (такие как рАси\У1) и полученные из рВ1иеВас векторы (такие как содержащий (3-да1 рВ1иеВас III).
В предпочтительном варианте осуществления конструируют вектор для получения рассматриваемых полипептидов АскКНа в клетках СНО, такой как вектор Рсшу-8спр1 (81га1адеие, Ьа 1о11а, Са11Г), векторы рсЭХА4 (Шубю^еи, Саг1зЬаб, Са11Г.) и векторы рС1-иео (Рготеда, Маб1зои, \У1зе). Как будет очевидно, рассматриваемые генные конструкции можно использовать для индукции экспрессии рассматриваемых полипептидов Ас1К11а в клетках, размножаемых в культуре, например, для получения белков, включая слитые белки или варианты белков, для очистки.
Изобретение также относится к клетке-хозяину, трансфицированной рекомбинантным геном, включая кодирующую последовательность (например, 8ЕО Ш N0: 4 или 5) для одного или нескольких из рассматриваемых полипептидов АскКНа. Клетка-хозяин может представлять собой любую прокариотическую или эукариотическую клетку. Например, полипептид АсЖНа по изобретению можно экспрессировать в бактериальных клетках, таких как Е.сой, клетках насекомых (например, с использованием бакуловирусной экспрессирующей системы), дрожжах или клетках млекопитающих. Другие подходящие клетки-хозяева известны специалистам в данной области.
Соответственно, настоящее изобретение, кроме того, относится к способам получения рассматриваемых полипептидов АскКНа. Например, клетку-хозяина, трансфицированную экспрессирующим вектором, кодирующим полипептид АскКНа, можно культивировать в соответствующих условиях, делаю
- 15 018221 щих возможной экспрессию полипептида АскКНа. Полипептид АскКЛа можно секретировать и выделять из смеси клеток и среды, содержащей полипептид АскКЛа. Альтернативно, полипептид АсЖНа может оставаться в цитоплазматической или в мембранной фракции, а клетки собирают, лизируют и выделяют белок. Культура клеток включает клетки-хозяева, среду и другие побочные продукты. Подходящие среды для культивирования клеток хорошо известны в данной области. Рассматриваемые полипептиды АсЖЛа можно выделять из среды для культивирования клеток, клеток-хозяев или и того, и другого с использованием способов, известных в данной области для очистки белков, включая ионообменную хроматографию, гель-фильтрационную хроматографию, ультрафильтрацию, электрофорез, иммуноаффинную очистку с помощью антител, специфических для конкретных эпитопов полипептидов Ас1Я11а. и аффинную очистку с помощью средства, связывающего домен, слитый с полипептидом АсЖПа (например, колонку с белком А можно использовать для очистки слитого белка АскКНа-Рс). В предпочтительном варианте осуществления полипептид АскКЛа представляет собой слитый белок, содержащий домен, облегчающий очистку. В предпочтительном варианте осуществления очистки достигают сериями стадий колоночной хроматографии, включая, например, три или более из следующего, в любом порядке: хроматография с белком А, хроматография на 0-сефарозе, хроматография на фенилсефарозе, эксклюзионная хроматография и катионообменная хроматография. Очистку можно завершать фильтрацией вирусов и заменой буфера. Как показано в настоящем описании, белок Ас®Ла-№с очищали до чистоты >98%, как определяли эксклюзионной хроматографией, и >95%, как определяли посредством 8Ό8 РАСЕ. Этот уровень чистоты являлся достаточным для достижения желательных эффектов на кость у мышей и приемлемого профиля безопасности у мышей, крыс и не относящихся к человеку приматов.
В другом варианте осуществления слитый ген, кодирующий лидерную последовательность для очистки, такую как поли-(Н1к)/последовательность участка расщепления энтерокиназой на Ν-конце желательной части рекомбинантного полипептида АсЖПа, может позволять очистку экспрессированного слитого белка аффинной хроматографией с использованием смолы с металлом Νί2+. Лидерную последовательность для очистки можно затем удалять обработкой энтерокиназой для получения очищенного полипептида АскВИа (см., например, ΗοΟιιιΙί е! а1. (1987), 1. СНготаЮдгарку. 411:177 и 1апкпес111 е! а1., РХ'АБ И8А. 88:8972).
Способы получения слитых генов хорошо известны. По существу, соединение различных фрагментов ДНК, кодирующих различные полипептидные последовательности, проводят согласно общепринятым способам, применяя тупые или выступающие концы для лигирования, расщепление ферментом рестрикции для получения подходящих концов, достраивание липких концов по необходимости, обработку щелочной фосфатазой для избегания нежелательного соединения и ферментативное лигирование. В другом варианте осуществления слитый ген можно синтезировать общепринятыми способами, включая использование автоматических синтезаторов ДНК. Альтернативно, можно проводить ПЦР-амплификацию фрагментов генов с использованием якорных праймеров, образующих комплементарные выступающие концы между двумя последовательными фрагментами гена, которые затем можно гибридизовать для получения последовательности химерного гена (см., например, Сиггеи! Рю^ток ίη ΜοΚαιΙηΓ Вю^^у, ебк. АикиЬе1 е! а1., 6ο1ιπ \Убеу & δοηκ, 1992).
4. Альтернативные антагонисты активина и АсЖНа.
Данные, представленные в настоящем описании, показывают, что антагонисты передачи сигнала активином-АскКЛа можно использовать для стимуляции роста кости и минерализации кости. Хотя растворимые полипептиды АскКНа, в частности АскКНа-Рс, являются предпочтительными антагонистами, и хотя такие антагонисты могут влиять на кость посредством механизма, отличного от антагонизма активина (например, ингибирование активина может быть показателем тенденции средства ингибировать активность спектра молекул, включая, возможно, другие члены суперсемейства ТСР-β, и такое совместное ингибирование может приводить к желательному эффекту на кость), предполагают, что другие типы антагонистов активина-АскКНа будут используемыми, включая антитела против активина (например, А, В, С или Е), антитела против АскКНа, нуклеиновые кислоты: антисмысловые, РНКи или рибозимы, ингибирующие продукцию АскКЛа, и другие ингибиторы активина или АскКНа, в частности те, которые нарушают связывание активина-АскКНа.
Антитело, которое специфически реагирует с полипептидом АскКЛа (например, растворимым полипептидом АскКЛа) и которое либо конкурирует с лигандом за связывание с полипептидом АскКЛа, либо другим способом ингибирует опосредованную АскКЛа передачу сигнала, можно использовать в качестве антагониста активности полипептида АскКНа. Подобным образом, антитело, которое специфически реагирует с полипептидом активина А и которое нарушает связывание АскКНа, можно использовать в качестве антагониста.
С использованием иммуногенов, полученных из полипептида АскКНа или полипептида активина, антисыворотки или моноклональные антитела против белка/против пептида можно получить общепринятыми способами (см., например, Αηί^Ьοб^ек: А ^аЬο^аΐο^у Мапиа1 еб. Ьу ΗηιΊο\ν апб Ьапе (С.о1б Брппд ΗπΛογ Ргекк: 1988)). Млекопитающее, такое как мышь, хомяк или кролик, можно иммунизировать иммуногенной формой полипептида АскКЛа, антигенным фрагментом, способным вызывать ответ антитела, или слитым белком. Способы придания иммуногенности белку или пептиду включают в себя конъюга
- 16 018221 цию с носителями или другие способы, хорошо известные в данной области. Иммуногенную часть полипептида АсЕКЛа или активина можно вводить в присутствии адъюванта. Прогрессирование иммунизации можно мониторировать детекцией титров антитела в плазме или сыворотке. Общепринятый ЕЬ18А или другие иммуноанализы можно использовать с иммуногеном в качестве антигена для оценки уровней антител.
После иммунизации животного антигенным препаратом полипептида АсЕКЛа может быть получена антисыворотка и, если желательно, поликлональные антитела можно выделить из сыворотки. Для получения моноклональных антител продуцирующие антитело клетки (лимфоциты) можно собирать из иммунизированного животного и сливать общепринятыми способами слияния с иммортализованными клетками, такими как клетки миеломы, чтобы получить клетки гибридомы. Такие способы хорошо известны в данной области и включают в себя, например, способ гибридомы (исходно разработанный КоЫет апб Μίΐκίοίη (1975), №11игс. 256:495-497), способ гибридомы В-клеток человека (КохЬаг еЕ а1. (1983), 1ттипо1оду Тобау, 4:72) и способ ЕВУ-гибридомы для получения моноклональных антител человека (Со1е еЕ а1. (1985), Мопос1опа1 АпЕ1Ьоб1е8 апб Сапсег ТНегару, А1ап К. Ь188, 1пс. р. 77-96). Можно проводить иммунохимический скрининг клеток гибридомы для получения антител, специфически реагирующих с полипептидом АсЕКЛа, и выделять моноклональные антитела из культуры, содержащей такие клетки гибридомы.
Под термином антитело, как используется в настоящем описании, понимают его фрагменты, которые также специфически реагируют с рассматриваемым полипептидом. Антитела можно фрагментировать с использованием общепринятых способов и проводить скрининг фрагментов по эффективности таким же образом, как описано выше для полноразмерных антител. Например, Р(аЬ)2-фрагменты могут быть получены обработкой антитела пепсином. Полученный Р(аЬ)2-фрагмент можно обработать для восстановления дисульфидных мостиков для получения РаЬ-фрагментов. Кроме того, антитело по настоящему изобретению включает биспецифические, одноцепочечные, химерные, гуманизированные и полностью человеческие молекулы, обладающие аффинностью для полипептида АсЕКЛа или активина, придаваемой по меньшей мере одной областью СЭК антитела. Кроме того, антитело может содержать присоединенную к нему метку и обладать способностью к детекции (например, метка может представлять собой радиоактивный изотоп, флуоресцентное соединение, фермент или кофактор фермента).
В конкретных вариантах осуществления антитело представляет собой рекомбинантное антитело, причем термин охватывает любое антитело, частично полученное способами молекулярной биологии, включая СЭК-привитые или химерные антитела, человеческие или другие антитела, собранные из отобранных из библиотеки доменов антитела, одноцепочечные антитела и однодоменные антитела (например, белки Ун человека или белки Унн верблюжьих). В конкретных вариантах осуществления антитело по изобретению представляет собой моноклональное антитело, и в конкретных вариантах осуществления изобретение делает доступными способы получения новых антител. Например, способ получения моноклонального антитела, которое специфически связывается с полипептидом АсЕКЛа или полипептидом активина, может включать в себя введение мыши количества иммуногенной композиции, содержащей антигенный полипептид, эффективного для стимуляции поддающегося детекции иммунного ответа, получение продуцирующих антитело клеток (например, клеток из селезенки) из мыши и слияние продуцирующих антитело клеток с клетками миеломы для получения продуцирующих антитело гибридом, а также тестирование продуцирующих антитело гибридом для идентификации гибридомы, продуцирующей моноклональное антитело, специфически связывающееся с антигеном. После получения гибридому можно размножать в культуре клеток, необязательно, в условиях культивирования, где происходящие из гибридомы клетки продуцируют моноклональное антитело, специфически связывающееся с антигеном. Моноклональное антитело можно очищать из культуры клеток.
Определение специфически реагирующий с, как используют по отношению к антителу, обозначает, как это в основном понимают в данной области, что антитело является достаточно селективным между интересующим антигеном (например, полипептидом АсЕКЛа) и другими антигенами, не представляющими интерес, чтобы антитело являлось используемым, как минимум, для детекции присутствия интересующего антигена в конкретном типе биологического образца. В конкретных способах, использующих антитело, таких как терапевтические применения, может быть желательна более высокая степень специфичности связывания. Моноклональные антитела, как правило, проявляют более сильную тенденцию (по сравнению с поликлональными антителами) к эффективной дискриминации между желательными антигенами и перекрестно реагирующими полипептидами. Одной из характеристик, влияющих на специфичность взаимодействия антитело:антиген, является аффинность антитела для антигена. Хотя желаемой специфичности можно достигать в диапазоне различных аффинностей, предпочтительные в основном антитела будут обладать аффинностью (константой диссоциации) приблизительно 10-6, 10-7, 10-8, 10-9 или менее. Принимая во внимание чрезвычайно тесное связывание между активином и АсЕКЛа, предполагают, что нейтрализующее антитело против активина или АсЕКЛа будет, как правило, обладать константой диссоциации 10-10 или менее.
- 17 018221
Кроме того, способы, используемые для скрининга антител, чтобы идентифицировать желательное антитело, могут влиять на свойства полученного антитела. Например, если антитело предназначено для использования для связывания антигена в растворе, может быть желательно протестировать связывание в растворе. Множество различных способов доступно для тестирования взаимодействия между антителами и антигенами для идентификации особенно желательных антител. Такие способы включают ЕЫ8А, анализы связывания поверхностным плазмонным резонансом (например, анализ связывания В1асоге™, В1асоге АВ, Ирр8а1а, 8^ебеи), сэндвич-анализы (например, система парамагнитных бусин из ΙΟΕΝ 1п1егпайопа1, 1пс., баИйегаЬитд, Магу1аиб), вестерн-блоттинг, анализы иммунопреципитации и иммуногистохимию.
Примеры категорий соединений нуклеиновой кислоты, которые являются антагонистами активина или Ас®Ла, включают антисмысловые нуклеиновые кислоты, конструкции для РНКи и каталитические конструкции нуклеиновой кислоты. Соединение нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечным или двухцепочечным. Двухцепочечное соединение может также включать области выступания или некомплементарности, где одна или другая из нитей является одноцепочечной. Одноцепочечное соединение может включать области самокомплементарности, что означает, что соединение формирует структуру так называемой шпильки или стебля-петли, с областью двухспиральной структуры. Соединение нуклеиновой кислоты может содержать нуклеотидную последовательность, комплементарную области, состоящей из не более 1000, не более 500, не более 250, не более 100 или не более 50, 35, 30, 25, 22, 20 или 18 нуклеотидов из последовательности нуклеиновой кислоты полноразмерного Ас®Ла или последовательности нуклеиновой кислоты активина β..\ или активина βΒ. Область комплементарности будет предпочтительно составлять по меньшей мере 8 нуклеотидов, и, необязательно, по меньшей мере 10 или по меньшей мере 15 нуклеотидов, и, необязательно, между 15 и 25 нуклеотидами. Область комплементарности может попадать внутрь интрона, кодирующей последовательности или некодирующей последовательности намеченного транскрипта, например части кодирующей последовательности. Как правило, соединение нуклеиновой кислоты будет обладать длиной от приблизительно 8 до приблизительно 500 нуклеотидов или пар оснований, и, необязательно, длина будет составлять от приблизительно 14 до приблизительно 50 нуклеотидов. Нуклеиновая кислота может представлять собой ДНК (в частности, для применения в качестве антисмысловой), РНК или гибрид РНК:ДНК. Любая одна цепь может включать смесь ДНК и РНК, а также модифицированные формы, которые нельзя легко классифицировать как ДНК или РНК. Подобным образом, двухцепочечное соединение может представлять собой ДНК:ДНК, ДНК:РНК или РНК:РНК, и любая одна цепь также может включать смесь ДНК и РНК, а также модифицированные формы, которые нельзя легко классифицировать как ДНК или РНК. Соединение нуклеиновой кислоты может включать любую из множества модификаций, включая одну из модификаций части остова (сахаро-фосфатной части природной нуклеиновой кислоты, включая межнуклеотидные связи) или основания (пуриновой или пиримидиновой части природной нуклеиновой кислоты). Соединение антисмысловой нуклеиновой кислоты будет предпочтительно обладать длиной от приблизительно 15 до приблизительно 30 нуклеотидов и часто будет содержать одну или несколько модификаций для улучшения таких характеристик, как стабильность в сыворотке, в клетке или на месте, куда соединение, вероятно, будут доставлять, таком как желудок в случае перорально доставляемых соединений и легкое для вдыхаемых соединений. В случае конструкции для РНКи цепь, комплементарная намеченному транскрипту, будет, как правило, представлять собой РНК или ее модификации. Другая цепь может представлять собой РНК, ДНК или любой другой вариант. Дуплексная часть двухцепочечной или одноцепочечной шпилечной конструкции РНКи предпочтительно будет иметь длину 18-40 нуклеотидов и, необязательно, приблизительно 21-23 нуклеотидов, пока она служит субстратом для Ьюег. Каталитические или ферментативные нуклеиновые кислоты могут представлять собой рибозимы или ДНК-ферменты и могут также содержать модифицированные формы. Соединения нуклеиновых кислот могут ингибировать экспрессию мишени приблизительно на 50, 75, 90% или более при контакте с клетками в физиологических условиях и при концентрации, когда антисмысловой или смысловой контроль оказывает малый эффект или не оказывает эффекта. Предпочтительными концентрациями для тестирования эффекта соединений нуклеиновой кислоты являются 1, 5 и 10 мкМ. Соединения нуклеиновой кислоты можно также тестировать по эффектам, например на рост и минерализацию кости.
5. Анализы скрининга.
В конкретном аспекте настоящее изобретение относится к использованию полипептидов Ас®Ла (например, растворимых полипептидов Ас®На) и полипептидов активина для идентификации соединений (средств), которые являются агонистами или антагонистами пути передачи сигнала активинаАс®Ла. Соединения, идентифицированные посредством этого скрининга, можно тестировать для оценки их способности модулировать рост или минерализацию кости ш νίΐϊΌ. Необязательно, эти соединения можно дополнительно тестировать на моделях животных для оценки их способности модулировать рост тканей ш у1уо.
- 18 018221
Существуют многочисленные способы скрининга лекарственных средств для модуляции роста тканей посредством нацеливания на полипептиды активина и Ас®Ла. В конкретных вариантах осуществления высокопроизводительный скрининг соединений можно проводить для идентификации средств, которые мешают опосредованным активином или Ас®Ла эффектам на кость. В конкретных вариантах осуществления анализ проводят для скрининга и идентификации соединений, которые специфически ингибируют или уменьшают связывание полипептида Ас®На с активином. Альтернативно, анализ можно использовать для идентификации соединений, усиливающих связывание полипептида Ас®Ла с активином. В следующем варианте осуществления соединения можно идентифицировать по их способности взаимодействовать с полипептидом активина или Ас®На.
Множество форматов анализа будут подходящими и, в свете настоящего описания, те, которые не описаны в настоящем изобретении явно, тем не менее будут понятны специалисту в данной области. Как описано в настоящем изобретении, тестируемые соединения (средства) по изобретению могут быть получены любым комбинаторным химическим способом. Альтернативно, рассматриваемые соединения могут представлять собой встречающиеся в природе биомолекулы, синтезированные ίη νίνο или ίη νίΐτο. Соединения (средства), подлежащие тестированию по их способности действовать как модуляторы роста тканей, могут быть получены, например, посредством бактерий, дрожжей, растений или других организмов (например, природные продукты), получать химически (например, малые молекулы, включая пептидомиметики) или получать рекомбинантным образом. Тестируемые соединения, предусматриваемые по настоящему изобретению, включают в себя непептидильные органические молекулы, пептиды, полипептиды, пептидомиметики, сахара, гормоны и молекулы нуклеиновой кислоты. В конкретном варианте осуществления тестируемое средство представляет собой малую органическую молекулу, обладающую молекулярной массой менее приблизительно 2000 Да.
Тестируемые соединения по изобретению могут быть получены как одиночные, отдельные объекты или могут быть получены в библиотеках большей сложности, таких как полученные комбинаторной химией. Эти библиотеки могут содержать, например, спирты, алкилгалиды, амины, амиды, сложные эфиры, альдегиды, простые эфиры и другие классы органических соединений. Представление тестируемых соединений тестовой системе может происходить либо в выделенной форме, либо в виде смесей соединений, особенно на начальных стадиях скрининга. Необязательно, соединения могут являться, необязательно, дериватизированными с помощью других соединений и обладать дериватизирующими группами, облегчающими выделение соединений. Дериватизирующие группы включают в себя в качестве неограничивающих примеров биотин, флуоресцеин, дигоксигенин, зеленый флуоресцентный белок, изотопы, полигистидин, магнитные бусины, глутатион-8-трансферазу (С8Т), фотоактивируемые перекрестно сшивающие средства или любые их сочетания.
Во многих программах скрининга лекарственных средств, в которых тестируют библиотеки соединений и природных экстрактов, являются желательными высокопроизводительные анализы, чтобы максимизировать число соединений, исследованных в данный период времени. Анализы, которые проводят в бесклеточных системах, таких, какие можно получить с помощью очищенных или полуочищенных белков, часто являются предпочтительными в качестве первичных скринингов, поскольку их можно получать, чтобы позволять быстрое развитие и относительно простую детекцию изменения в молекулярной мишени, опосредованного тестируемым соединением. Более того, эффекты клеточной токсичности или биодоступности тестируемого соединения, как правило, можно игнорировать в системе ίη νίΐτο, вместо этого анализ в первую очередь сфокусирован на эффекте лекарственного средства на молекулярную мишень, что может проявляться в изменении аффинности связывания между полипептидом Ас®На и активином.
Просто для иллюстрации, в примерном анализе скрининга по настоящему изобретению интересующее соединение приводят в контакт с выделенным и очищенным полипептидом Ас®На, который обычно способен связывать активин. Затем к смеси соединения и полипептида Ас®Ла добавляют композицию, содержащую лиганд Ас®Ла. Детекция и количественное определение комплексов АсЖЛа/активин обеспечивает средства для определения эффективности соединения для ингибирования (или стимуляции) формирования комплекса между полипептидом АсЖНа и активином. Эффективность соединения можно оценивать получением кривых зависимости эффекта от дозы по данным, полученным с использованием различных концентраций тестируемого соединения. Более того, можно проводить также контрольный анализ для предоставления фона для сравнения. Например, в контрольном анализе выделенный и очищенный активин добавляют к композиции, содержащей полипептид Ас®Ла, и формирование комплекса Ас®Ла/активин количественно оценивают в отсутствие тестируемого соединения. Как правило, порядок, в котором можно смешивать реагенты, можно изменять, и их можно смешивать одновременно. Более того, вместо очищенных белков клеточные экстракты и лизаты можно использовать для предоставления подходящей бесклеточной системы анализа.
Формирование комплекса между полипептидом Ас®Ла и активином можно детектировать множеством способов. Например, модуляцию формирования комплексов можно количественно оценивать с использованием, например, меченных поддающейся детекции меткой белков, таких как радиоактивно
ОС 1/1 о меченые (например, Р, 8, С или Н), флуоресцентно меченые (например, ЕПС) или ферментативно
- 19 018221 меченые полипептид Ас4КЛа или активин, посредством иммуноанализа или посредством хроматографической детекции.
В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к использованию флуоресцентных поляризационных анализов и анализов резонансного переноса энергии флуоресценции (РВЕТ) для измерения, либо напрямую, либо опосредованно, степени взаимодействия между полипептидом Ас®Ла и связывающим его белком. Кроме того, другие способы детекции, такие как основанные на оптических волноводах (публикация РСТ \У0 96/26432 и патент США № 5677196), поверхностном плазмонном резонансе (8РВ), сенсорах поверхностного заряда и сенсорах поверхностных сил, являются совместимыми со многими вариантами осуществления изобретения.
Более того, настоящее изобретение относится к использованию анализа взаимодействия с ловушкой, известного также как двугибридный анализ, для идентификации средств, которые нарушают или стимулируют взаимодействие между полипептидом АсЖПа и связывающим его белком. См., например, патент США № 5283317; Ζβτνοδ е! а1. (1993), Се11, 72:223-232; Майша е! а1. (1993), 1. Бю1. СНет. 268:12046-12054; ВаЛе1 е! а1. (1993), Вю!есЬшдиек, 14:920-924 и 1\\аЬис1п е! а1. (1993), 0псодепе, 8:16931696). В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к использованию обратных двугибридных систем для идентификации соединений (например, малых молекул или пептидов), которые приводят к диссоциации взаимодействий между полипептидом Ас1ВЛа и связывающим его белком. См., например, У1йа1 апй Ьедтат (1999), №.1с1е1с Ас1йк Век, 27:919-29; У1йа1 апй Ьедгаш (1999), Ттепйк Вю!есЬпо1. 17:374-81 и патенты США № 5525490; 5955280 и 5965368.
В конкретных вариантах осуществления рассматриваемые соединения идентифицируют по их способности взаимодействовать с полипептидом АсЖПа или активина по изобретению. Взаимодействие между соединением и полипептидом Ас4КПа или активина может быть ковалентным или нековалентным. Например, такое взаимодействие можно идентифицировать на уровне белка с использованием биохимических способов ш νίίτο, включая фотоперекрестное сшивание, связывание радиоактивно меченого лиганда и аффинную хроматографию (1акоЬу \У.В. е! а1., 1974, Ме!йойк ш Епхуто1оду. 46:1). В конкретных случаях можно проводить скрининг соединений в анализе на основе механизма, таком как анализ для детекции соединений, которые связываются с полипептидом активина или Ас4КПа. Это может включать в себя событие связывания в твердой фазе или в жидкой фазе. Альтернативно, ген, кодирующий полипептид активина или Ас!В11а, можно трансфицировать с репортерной системой (например, β-галактозидазой, люциферазой или зеленым флуоресцентным белком) в клетку и проводить скрининг против библиотеки, предпочтительно посредством высокопроизводительного скрининга, или с отдельными членами библиотеки. Можно использовать анализы связывания на основе другого механизма, например анализы связывания, детектирующие изменения в свободной энергии. Анализы связывания можно проводить с мишенью, фиксированной на лунке, бусине или чипе, или захваченной иммобилизованным антителом, или разделенной капиллярным электрофорезом. Связанные соединения можно детектировать, обычно с использованием колориметрии или флуоресценции или поверхностного плазмонного резонанса.
В конкретных аспектах настоящее изобретение относится к способам и средствам для модуляции (стимуляции или ингибирования) формирования кости и увеличения костной массы. Таким образом, любое идентифицированное соединение можно тестировать в целых клетках или тканях, ш νίΙΐΌ или ш νί\Ό, для подтверждения их способности модулировать рост или минерализацию кости. Различные способы, известные в данной области, можно использовать для этой цели.
Например, эффект полипептидов АсЖПа, или активина, или тестируемых соединений на рост кости или хряща можно определять измерением индукции Мкх2 или дифференцировки клетокостеопредшественников в остеобласты в анализах на основе клеток (см., например, Па1шкк1 е! а1., №11. Сепе!. 2001, 27(1):84-8; Ншо е! а1., Ргоп! ВюксГ 2004, 9:1520-9). Другой пример анализов на основе клеток включает в себя анализ остеогенной активности рассматриваемых полипептидов Ас4КПа или активина и тестируемых соединений в мезенхимальных клетках-предшественниках и остеобластах. Для иллюстрации, можно сконструировать рекомбинантные аденовирусы, экспрессирующие полипептид активина или Ас4КЛа, для инфекции плюрипотентных мезенхимальных клеток-предшественников С3Н10Т1/2, клеток-преостеобластов С2С12 и клеток-остеобластов ТЕ-85. Затем остеогенную активность определяют измерением индукции щелочной фосфатазы, остеокальцина и минерализации матрикса (см., например, СНепд е! а1., 1 Ьопе .Тот! 8итд Ат. 2003, 85-А(8):1544-52).
Настоящее изобретение относится также к анализам ш νί\Ό для измерения роста кости или хряща. Например, в №ткипд-Ма!!Ьа1 е! а1., Вопе, 28:80-86 (2001) описана модель остеопороза на крысах, на которой изучают репарацию кости во время раннего периода после перелома. В КиЬо е! а1., 81егснй ВюсНетМгу & Мо1еси1аг Вю1о§у, 68:197-202 (1999) описана также модель остеопороза на крысах, на которой изучают репарацию кости во время позднего периода после перелома. В Апйетккоп е! а1., ί. Епйостто1. 170:529-537 описана модель остеопороза на мышах, в которой мышей подвергают овариэктомии, что вызывает у мышей потерю значительного минерального содержания кости и минеральной плотности кости, где губчатая кость теряет приблизительно 50% минеральной плотности кости. Плотность кости можно увеличивать у мышей после овариэктомии введением таких факторов, как паратирео
- 20 018221 идный гормон. В конкретных аспектах настоящего изобретения используют анализы заживления переломов, известные в данной области. Эти анализы включают в себя способы разлома, гистологический анализ и биомеханические анализы, описанные, например, в патенте США № 6521750, содержание которого приведено полностью для описания экспериментальных способов с индукцией переломов и процесса репарации, а также для измерения их степени.
6. Примерные терапевтические применения.
В конкретных вариантах осуществления антагонисты активина-ΑсΐΚIIа (например, полипептиды ΑΛΚΠι) по настоящему изобретению можно использовать для лечения или предотвращения заболевания или состояния, связанного с разрушением кости, например, из-за перелома, утраты или деминерализации. Как показано в настоящем описании, антагонисты активина-ΑсΐΚIIа, в частности конструкции ΑΛΗΠι-Εο, являются эффективными для лечения или предотвращения связанной с раком потери костной массы. В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения или предотвращения повреждения кости индивидуума посредством введения индивидууму терапевтически эффективного количества антагониста активина-ΑсЖIIа, в частности полипептида ΑΛΚΠι. В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам стимуляции роста или минерализации кости у индивидуума посредством введения индивидууму терапевтически эффективного количества антагониста активина-Αс!ШIа, в частности, полипептида ΑοΙΚΡη. Эти способы предпочтительно имеют целью терапевтические и профилактические обработки животных, более предпочтительно человека. В конкретных вариантах осуществления описание относится к использованию антагонистов активина-ΑсΐΚIIа (в частности, растворимых полипептидов ЛсШПа и нейтрализующих антител, нацеленных на активин или ΑοϊΗΠι) для лечения нарушений, связанных с низкой плотностью кости или уменьшенной прочностью кости.
Как используется в настоящем описании, терапевтическое средство, которое предотвращает нарушение или состояние, относится к соединению, которое, в статистической выборке, уменьшает частоту возникновения нарушения или состояния в обработанной выборке по сравнению с необработанной контрольной выборкой, или задерживает начало, или уменьшает тяжесть одного или нескольких симптомов нарушения или состояния по сравнению с необработанной контрольной выборкой. Термин обработка, как используется в настоящем описании, включает в себя профилактику указанного состояния или облегчение или прекращение состояния после его развития. В любом случае предотвращение или лечение можно различать по диагнозу, представленному врачом, и предполагаемому результату введения лекарственного средства.
Описание относится к способам индукции формирования кости и/или хряща, предотвращения потери костной массы, увеличения минерализации кости или предотвращения деминерализации кости. Например, рассматриваемые антагонисты активина-ΑсЖIIа имеют применение для лечения остеопороза и заживления переломов кости и дефектов хряща у человека и других животных. Полипептиды ΑοϊΗΠι или активина могут использоваться у пациентов с диагнозом субклиническая низкая плотность кости в качестве защитной меры против развития остеопороза.
В одном конкретном варианте осуществления способы и композиции по настоящему изобретению могут найти применение в медицине для заживления переломов кости и дефектов хряща у человека и других животных. Рассматриваемые способы и композиции могут также иметь профилактическое применение для уменьшения закрытых, а также открытых переломов, а также для улучшенной фиксации искусственных суставов. Формирование кости бе поуо, индуцированное остеогенным средством, приводит к репарации врожденных, индуцированных травмой или онкологической резекцией черепно-лицевых дефектов, а также используется в косметической пластической хирургии. В конкретных случаях рассматриваемые антагонисты активина-ΑсЖIIа могут обеспечивать окружение для привлечения формирующих кость клеток, стимулировать рост формирующих кость клеток или индуцировать дифференцировку предшественников формирующих кость клеток. Антагонисты активина-ΑсΐΚIIа по изобретению могут также использоваться для лечения остеопороза.
Способы и композиции по изобретению можно применять для состояний, характеризующихся или вызванных потерей костной массы, таких как остеопороз (включая вторичный остеопороз), гиперпаратиреоз, болезнь Кушинга, болезнь Педжета, тиреотоксикоз, хроническое диарейное состояние или малабсорбция, почечный канальцевый ацидоз или нервная анорексия.
Остеопороз может быть вызван различными факторами или связан с различными факторами. Женский пол, особенно после менопаузы, низкая масса тела и ведение сидячего образа жизни - все представляют собой факторы риска для остеопороза (потери минеральной плотности кости, приводящие к риску перелома). Лица, обладающие одной из следующих характеристик, могут являться кандидатами на лечение антагонистом ΑοϊΚΠι: женщина после менопаузы, не принимающая эстроген или другое гормонзаместительное лекарственное средство; лицо с собственным или переломом шейки бедра в наследственном анамнезе или курением в анамнезе; женщина после менопаузы, являющаяся высокой (выше 5 футов 7 дюймов (170 см)) или худой (менее 125 фунтов (57 кг)); мужчина с клиническими состояниями, связанными с потерей костной массы; лицо, использующее лекарственные средства, известные как вызывающие потерю костной массы, включая кортикостероиды, такие как Преднизон™, различные противо
- 21 018221 судорожные лекарственные средства, такие как Дилантин™ и конкретные барбитураты, или высокую дозу замещающих гормоны щитовидной железы лекарственных средств; лицо, страдающее диабетом 1 типа, заболеванием печени, заболеванием почек или имеющее семейный анамнез остеопороза; лицо с высокой перестройкой кости (например, с избыточным коллагеном в образцах мочи); лицо с таким состоянием щитовидной железы, как гипертиреоз; лицо, пережившее перелом после только умеренной травмы; лицо с переломом позвонка или другими признаками остеопороза по данным рентгеновского анализа.
Как указано выше, остеопороз может также возникать как состояние, связанное с другим нарушением, или в результате использования конкретных лекарственных средств. Остеопороз, возникающий изза лекарственных средств или другого медицинского состояния, известен как вторичный остеопороз. При состоянии, известном как болезнь Кушинга, избыточное количество кортизона, продуцируемое в организме, приводит к остеопорозу и переломам. Наиболее распространенными лекарственными средствами, связанными с вторичным остеопорозом, являются кортикостероиды, класс лекарственных средств, которые действуют подобно кортизону, гормону, естественно продуцируемому надпочечниками. Хотя адекватные уровни гормонов щитовидной железы (продуцируемых щитовидной железой) необходимы для развития скелета, избыток гормона щитовидной железы может уменьшать костную массу с течением времени. Антациды, содержащие алюминий, могут приводить к потере костной массы при введении в больших дозах людям с проблемами почек, в частности, подвергавшимся диализу. Другие лекарственные средства, которые могут вызывать вторичный остеопороз, включают в себя фенитоин (дилантин) и барбитураты, которые используют для предотвращения судорог; метотрексат (ревматрекс, иммунекс, фолекс РЕ8), лекарственное средство против некоторых форм артрита, рака и иммунных нарушений; циклоспорин (сандиммун, неорал), лекарственное средство, используемое для лечения некоторых аутоиммунных заболеваний и для супрессии иммунной системы у пациентов с трансплантатами органов; агонисты гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон (люпрон, золадеке), используемые для лечения рака предстательной железы и эндометриоза; гепарин (кальципарин, ликваемин), противосвертывающее лекарственное средство и холестирамин (квестран) и колестипол (колестид), используемые для лечения высокого уровня холестерина. Потеря костной массы в результате противораковой терапии широко известна и названа индуцированной противораковой терапией потерей костной массы (СТГВЬ). Метастазы в кости могут образовывать полости в кости, которые можно корректировать лечением антагонистами активина-АсЖПа.
В предпочтительном варианте осуществления антагонисты активина-Ас®Ла, в частности растворимый АсЖЛа, описанный в настоящем изобретении, можно использовать для больных раком. Пациенты, страдающие определенными опухолями (например, опухолями предстательной железы, молочной железы, множественной миеломой или любой опухолью, вызывающей гиперпаратиреоз), подвержены высокому риску потери костной массы из-за индуцированной опухолью потери костной массы, а также из-за метастазов кости и лекарственных средств. Таких пациентов можно лечить антагонистами активина-Ас®Ла даже в отсутствие признаков потери костной массы или метастазов в кости. Можно также проводить мониторинг пациентов по признакам потери костной массы или метастазов в кости и можно лечить антагонистами активина-АсЖПа в случае, если показатели позволяют предполагать увеличенный риск. Как правило, используют сканирование ЭЕХА для оценки изменений в плотности кости, в то время как показатели перестройки кости можно использовать для оценки вероятности метастазов в кости. Можно проводить мониторинг сывороточных маркеров. Специфическая костная щелочная фосфатаза (В8АР) представляет собой фермент, присутствующий в остеобластах. Уровни В8АР в крови повышены у пациентов с метастазами в кости и другими состояниями, приводящими к увеличению перестройки кости. Пептиды остеокальцин и проколлаген также связаны с формированием кости и метастазами в кости. Увеличение уровня В8АР детектировали у пациентов с метастазами в кости, вызванными раком предстательной железы, и в меньшей степени при метастазах кости из-за рака молочной железы. Уровни костного морфогенетического белка-7 (ВМР-7) являются высокими при раке предстательной железы, который метастазирует в кость, но не при метастазах в кости из-за рака мочевого пузыря, кожи, печени или легкого. Карбоксиконцевой телопептид типа Ι (ЮТР) представляет собой сшивку, обнаруженную в коллагене, которая формируется во время резорбции кости. Поскольку кость постоянно разрушается и переформируется, ЮТР будут обнаруживать повсюду в организме. Однако в участке метастазов в кости уровень будет значительно выше, чем в области нормальной кости. Высокие уровни ЮТР обнаружили в метастазах кости из-за рака предстательной железы, легкого и молочной железы. Другая сшивка коллагена, Юконцевой телопептид типа Ι (ЛТх), продуцируется вместе с ЮТР во время перестройки кости. Количество №Тх увеличено в метастазах кости, вызванных многими различными типами рака, включая рак легкого, предстательной железы и молочной железы. Уровни №Тх увеличиваются также при прогрессировании метастазирования в кости. Таким образом, этот маркер можно использовать как для детекции метастазов, так и для измерения степени заболевания. Другие маркеры резорбции включают в себя пиридинолин и дезоксипиридинолин. Любое увеличение уровня маркеров резорбции или маркеров метастазов в кости указывает на необходимость терапии антагонистом активина-АсЖПа для пациента.
- 22 018221
Антагонисты активина-Ас®Иа можно вводить совместно с другими фармацевтическими средствами. Совместное введение можно осуществлять введением одного совместного состава, одновременным введением или введением в разное время. Антагонисты активина-Ас®Ла могут являться особенно эффективными при введении с другими активными по отношению к кости средствами. Пациент может получать преимущество от совместного введения антагониста активина-Ас®Ла и введения пищевых добавок с кальцием, витамином Ό, доступных упражнений и/или в некоторых случаях другого лекарственного средства. Примеры других лекарственных средств включают бисфосфонаты (алендронат, ибандронат и ризедронат), кальцитонин, эстрогены, паратиреоидный гормон и ралоксифен. Бисфосфонаты (алендронат, ибандронат и ризедронат), кальцитонин, эстрогены и ралоксифен действуют на цикл перестройки кости, и их классифицируют как антирезорбтивные лекарственные средства. Перестройка кости состоит из двух отдельных стадий: резорбции кости и формирования кости. Антирезорбтивные лекарственные средства замедляют или останавливают часть резорбции кости из цикла перестройки кости, но не замедляют части формирования кости из цикла. В результате новое формирование продолжается с более высокой скоростью, чем резорбция кости, и плотность кости может увеличиваться с течением времени. Терипаратид, форма паратиреоидного гормона, увеличивает скорость формирования кости в цикле перестройки кости. Алендронат одобрен как для предотвращения (5 мг в сутки или 35 мг один раз в неделю), так и для лечения (10 мг в сутки или 70 мг один раз в неделю) остеопороза после менопаузы. Алендронат уменьшает потерю костной массы, увеличивает плотность кости и уменьшает риск переломов позвоночника, запястья и бедра. Алендронат одобрен также для лечения индуцированного глюкокортикоидом остеопороза у мужчин и женщин в результате долговременного использования этих лекарственных средств (т.е. преднизона и кортизона) и для лечения остеопороза у мужчин. Алендронат плюс витамин Ό одобрен для лечения остеопороза у женщин после менопаузы (70 мг один раз в неделю плюс витамин Ό) и для лечения для улучшения костной массы у мужчин с остеопорозом. Ибандронат одобрен для предотвращения и лечения остеопороза после менопаузы. При введении пилюли (150 мг) раз в месяц ибандронат следует вводить в одни и те же сутки каждый месяц. Ибандронат уменьшает потерю костной массы, увеличивает плотность кости и уменьшает риск переломов позвоночника. Ризедронат одобрен для предотвращения и лечения остеопороза после менопаузы. При введении ежесуточно (доза 5 мг) или еженедельно (доза 35 мг или доза 35 мг с кальцием) ризедронат замедляет потерю костной массы, увеличивает плотность кости и уменьшает риск переломов позвоночника и не относящихся к позвоночнику переломов. Ризедронат одобрен также для использования у мужчин и женщин для предотвращения и/или лечения индуцированного глюкокортикоидами остеопороза в результате долговременного использования этих лекарственных средств (т.е. преднизона или кортизона). Кальцитонин представляет собой природный гормон, вовлеченный в регуляцию кальция и метаболизм кости. У женщин через более 5 лет после менопаузы кальцитонин замедляет потерю костной массы, увеличивает плотность кости позвоночника и может облегчать боль, связанную с переломами кости. Кальцитонин уменьшает риск переломов позвоночника. Кальцитонин доступен в виде инъекции (50-100 МЕ ежесуточно) или назального спрея (200 МЕ ежесуточно). Эстрогенная терапия (ЕТ)/гормональная терапия (НТ) одобрена для предотвращения остеопороза. Показано, что ЕТ уменьшает потерю костной массы, увеличивает плотность кости как в позвоночнике, так и в бедре и уменьшает риск переломов бедра и позвоночника у женщин после менопаузы. ЕТ чаще всего вводят в форме пилюли или чрескожного пластыря, доставляющих низкую дозу приблизительно 0,3 мг ежесуточно или стандартную дозу приблизительно 0,625 мг ежесуточно, и она является эффективной даже при начале после возраста 70 лет. Когда эстроген вводят отдельно, он может увеличивать у женщин риск развития рака слизистой оболочки матки (рака эндометрия). Чтобы избежать этого риска, работники здравоохранения прописывают гормон прогестин в сочетании с эстрогеном (гормонозаместительная терапия или НТ) для женщин, имеющих интактную матку. ЕТ/НТ облегчает симптомы менопаузы, и показано, что она оказывает благоприятный эффект на здоровье кости. Побочные эффекты могут включать в себя вагинальное кровотечение, болезненность молочных желез, перепады настроения и заболевание желчного пузыря. Ралоксифен, 60 мг в сутки, одобрен для предотвращения и лечения остеопороза после менопаузы. Он принадлежит к классу лекарственных средств, называемых избирательными модуляторами рецепторов эстрогена (8ЕКМ), разработанных для обеспечения благоприятных эффектов эстрогенов без их потенциальных недостатков. Ралоксифен увеличивает костную массу и уменьшает риск переломов позвоночника. До сих пор не доступны данные, чтобы продемонстрировать, что ралоксифен может уменьшать риск переломов бедра и других не относящихся к позвоночнику переломов. Терипаратид, форма паратиреоидного гормона, одобрена для лечения остеопороза у женщин после менопаузы и у мужчин, подверженных высокому риску переломов. Это лекарственное средство стимулирует формирование новой кости и значительно увеличивает минеральную плотность кости. У женщин после менопаузы уменьшение переломов отмечено для позвоночника, бедра, стопы, ребер и запястья. У мужчин уменьшение переломов отмечено для позвоночника, однако существовало недостаточно данных для оценки уменьшения переломов в других участках. Терипаратид вводят самостоятельно в виде ежесуточной инъекции в течение вплоть до 24 месяцев.
- 23 018221
7. Фармацевтические композиции.
В конкретных вариантах осуществления антагонисты активина-АсШПа (например, полипептиды АсЖПа) по настоящему изобретению составляют с фармацевтически приемлемым носителем. Например, полипептид Лс1В11а можно вводить отдельно или в качестве компонента фармацевтического состава (терапевтической композиции). Рассматриваемые соединения можно составлять для введения любым удобным способом для применения в медицине или ветеринарии.
В конкретных вариантах осуществления терапевтический способ по изобретению включает введение композиции системно или местно в виде имплантата или устройства. При введении терапевтическая композиция для применения по этому изобретению представляет собой апирогенную физиологически приемлемую форму. Терапевтически применимые средства, отличные от антагонистов Ас1В11а. которые можно, необязательно, включать в композицию, как описано выше, можно вводить одновременно или последовательно с рассматриваемыми соединениями (например, полипептидами АсЖПа) в способах по изобретению.
Как правило, антагонисты Ас1КПа будут вводить парентерально и, в частности, внутривенно или подкожно. Фармацевтические композиции, подходящие для парентерального введения, могут содержать один или несколько полипептидов Ас®Па в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми стерильными изотоническими водными или неводными растворами, дисперсиями, суспензиями или эмульсиями или стерильными порошками, которые можно разводить в стерильных подходящих для инъекции растворах или дисперсиях непосредственно перед использованием, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты, растворенные вещества, придающие составу изотоничность с кровью намеченного реципиента, или суспендирующие средства или загустители. Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые можно применять в фармацевтических композициях по изобретению, включают в себя воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т.п.) и их подходящие смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и пригодные для инъекции органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Подходящую текучесть можно поддерживать, например, использованием покрывающих материалов, таких как лецитин, поддержанием необходимого размера частиц в случае дисперсий и использованием поверхностно-активных веществ.
Кроме того, композицию можно инкапсулировать или инъецировать в форме для доставки к намеченному участку ткани (например, кости). В конкретных вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению могут включать матрикс, способный доставлять одно или несколько терапевтических соединений (например, полипептидов Ас®Па) к намеченному участку ткани (например, кости) и предоставлять структуру для развития ткани и оптимально, способный резорбироваться в организме. Например, матрикс может обеспечивать медленное высвобождение полипептидов Ас®Па. Такие матриксы можно формировать из материалов, в настоящее время применяемых для других применений медицинской имплантации.
Выбор материала матрикса основан на биосовместимости, биоразлагаемости, механических свойствах, косметическом внешнем виде и свойствах поверхности. Конкретное применение рассматриваемых композиций будет определять подходящий состав. Потенциальные матриксы для композиций могут представлять собой биоразлагаемые и химически определенные сульфат кальция, трикальцийфосфат, гидроксиапатит, полимолочную кислоту и полиангидриды. Другие потенциальные материалы являются биоразлагаемыми и хорошо определенными биологически, такие как костный или дермальный коллаген. Дополнительные матриксы состоят из чистых белков или компонентов внеклеточного матрикса. Другие потенциальные матриксы являются не биоразлагаемыми и химически определенными, такими как спеченный гидроксиапатит, биостекло, алюминаты или другие виды керамики. Матриксы могут состоять из сочетаний любых из вышеупомянутых типов материала, таких как полимолочная кислота и гидроксиапатит или коллаген и трикальцийфосфат. Биокерамику можно изменять по составу, такому как кальцийалюминат-фосфат, и перерабатывать для изменения размера пор, размера частиц, формы частиц и биоразлагаемости.
В конкретных вариантах осуществления способы по изобретению могут представлять собой введение пероральное, например в форме капсул, облаток, пилюль, таблеток, пастилок (с использованием вкусовой основы, обычно сахарозы и гуммиарабика или трагакантовой камеди), порошков, гранул, или в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, или в виде жидкой эмульсии масло-вводе или вода-в-масле, или в виде эликсира или сиропа, или в виде пастилок (с использованием инертной основы, такой как желатин и глицерин, или сахароза и гуммиарабик) и/или в виде жидкости для полоскания рта и т.п., где каждое содержит предопределенное количество средства в качестве активного ингредиента. Средство можно вводить также в виде болюса, электуария или пасты.
В твердых лекарственных формах для перорального введения (капсулах, таблетках, пилюлях, драже, порошках, гранулах и т.п.) одно или несколько терапевтических соединений по настоящему изобретению можно смешивать с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, такими как цитрат натрия или фосфат дикальция, и/или любым из следующего: (1) наполнители или разбавители, такие как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и/или кремниевая кислота; (2) связующие вещества, такие как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон,
- 24 018221 сахароза и/или гуммиарабик; (3) смачивающие средства, такие как глицерин; (4) дезинтегрирующие вещества, такие как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или маниоковый крахмал, альгиновая кислота, конкретные силикаты и карбонат натрия; (5) замедляющие растворение средства, такие как парафин; (6) ускорители всасывания, такие как соединения четвертичного аммония; (7) увлажняющие вещества, такие как, например, цетиловый спирт и глицеринмоностеарат; (8) абсорбирующие вещества, такие как каолин и бентонитовая глина; (9) смазывающие вещества, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси; и (10) окрашивающие средства.
В случае капсул, таблеток и пилюль фармацевтические композиции могут также содержать забуферивающие средства. Твердые композиции подобного типа можно также применять в качестве наполнителей в мягких и твердых заполненных желатиновых капсулах с использованием таких наполнителей, как лактоза или молочные сахара, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и т.п.
Жидкие формы дозирования для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к активному ингредиенту, жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, общепринятые в данной области, такие как вода или другие растворители, солюбилизирующие средства и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное масла, масло проростков, оливковое, касторовое, и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот и сорбитана и их смеси. Помимо инертных разбавителей, пероральные композиции могут также включать в себя адъюванты, такие как увлажняющие вещества, эмульгирующие и суспендирующие вещества, подсластители, вкусовые вещества, окрашивающие средства, ароматизаторы и консервирующие средства.
Суспензии, в дополнение к активным соединениям, могут содержать суспендирующие вещества, такие как этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные эфиры сорбитана, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакантовая камедь и их смеси.
Композиции по изобретению могут также содержать адъюванты, такие как консерванты, увлажняющие вещества, эмульгаторы и диспергирующие средства. Предупреждение действия микроорганизмов можно обеспечивать включением различных антибактериальных и противогрибковых средств, например парабена, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты и т.п. Может также являться желательным включать изотонические средства, такие как сахара, хлорид натрия и т.п., в композиции. Кроме того, замедленное всасывание пригодной для инъекции фармацевтической формы можно вызывать включением средств, задерживающих всасывание, таких как моностеарат алюминия и желатин.
Понятно, что режим дозирования будет определять лечащий врач с учетом различных факторов, модифицирующих действие рассматриваемых соединений по изобретению (например, полипептидов Ас(КЛа). Различные факторы включают в качестве неограничивающих примеров количество массы кости, которое желательно сформировать, степень потери плотности кости, участок повреждения кости, состояние поврежденной кости, возраст, пол и диету пациента, тяжесть любого заболевания, которое может вносить вклад в потерю костной массы, время введения и другие клинические факторы. Необязательно, доза может меняться с типом используемого для реконструирования матрикса и типами соединений в композиции. Добавление других известных факторов роста к конечной композиции также может влиять на дозу. Прогресс можно мониторировать периодической оценкой роста и/или репарации кости, например, рентгеновскими лучами (включая ОЕХА), гистоморфометрическими определениями и тетрациклиновым мечением.
Эксперименты на приматах и людях показали, что эффекты АсЖПа-Рс на кость поддаются детекции, когда соединение дозируют в интервалах и количествах, достаточных для достижения концентраций в сыворотке приблизительно 200 нг/мл, при возникновении половины от максимальных эффектов на анаболические биомаркеры кости при дозе 0,3 мг/кг или эквивалентной, в переводе на площадь под кривой. У человека уровней в сыворотке 200 нг/мл можно достигать при однократной дозе 0,1 мг/кг или более и уровней в сыворотке 1000 нг/мл можно достигать при однократной дозе 0,3 мг/кг или более. Наблюдаемое время полужизни молекулы в сыворотке составляет между приблизительно 25 и 35 сутками, по существу, дольше, чем для большинства слитых с Рс белков, и, таким образом, можно достигать продолжительного эффективного уровня в сыворотке, например дозированием приблизительно 0,05-0,5 мг/кг на основе дозирования один раз в неделю или два раза в неделю, или можно использовать более высокие дозы с более длительными интервалами между дозами. Например, дозы 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 1, 2 или 3 мг/кг или промежуточные значения можно использовать на основе дозирования один раз в месяц или один раз в два месяца, и эффект на кость может быть достаточно стойким, чтобы дозирование являлось необходимым только один раз в каждые 3, 4, 5, 6, 9, 12 или более месяцев. Более длительные интервалы между дозами дополнительно поддержаны продолжительностью фармакодинамического эффекта, которая является более длительной, чем продолжительность присутствия лекарственного средства в сыворотке. ΡΌ эффекты наблюдали в течение по меньшей мере 120 суток у пациентов-людей.
- 25 018221
В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение также относится к генотерапии для получения полипептидов АсЕКПа ш νί\Ό. Терапевтического эффекта такой терапии будут достигать введением полинуклеотидных последовательностей Ас1.К11а в клетки или ткани, обладающие нарушениями, как перечислено выше. Доставки полинуклеотидных последовательностей АсЕКЛа можно достигать с использованием рекомбинантного экспрессирующего вектора, такого как химерный вирус, или коллоидной дисперсионной системы. Предпочтительным для терапевтической доставки полинуклеотидных последовательностей АсЕКЛа является использование нацеленных липосом.
Различные вирусные векторы, которые можно использовать для генотерапии, как объясняют в настоящем описании, включают в себя аденовирус, вирус герпеса, вирус осповакцины или предпочтительно РНК-вирус, такой как ретровирус.
Предпочтительно ретровирусный вектор представляет собой производное ретровируса мышей или птиц. Примеры ретровирусных векторов, в которые можно вставлять отдельный чужеродный ген, включают в себя в качестве неограничивающих примеров вирус лейкоза мышей Молони (МоМиЬУ), вирус саркомы мышей Харви (НаМи8У), вирус опухоли молочной железы мышей (МиМТУ) и вирус саркомы Рауса (К8У). Ряд дополнительных ретровирусных векторов могут включать несколько генов. Все эти векторы могут переносить или включать ген селективного маркера, так чтобы трансдуцированные клетки можно было идентифицировать и получать. Ретровирусные векторы можно сделать специфическими для мишени присоединением, например, сахара, гликолипида или белка. Предпочтительное нацеливание осуществляют с использованием антитела. Специалистам в данной области известно, что специфические полинуклеотидные последовательности можно вставлять в ретровирусный геном или присоединять к оболочке вируса, чтобы позволять специфическую для мишени доставку ретровирусного вектора, содержащего полинуклеотид АсЕКЛа. В предпочтительном варианте осуществления вектор нацелен на кость или хрящ.
Альтернативно, культуру клеток ткани можно непосредственно трансфицировать плазмидами, кодирующими структурные гены ретровирусов дад, ро1 и спу, посредством общепринятой трансфекцией с фосфатом кальция. Затем эти клетки трансфицируют векторной плазмидой, содержащей интересующие гены. Полученные клетки высвобождают ретровирусный вектор в культуральную среду.
Другой системой для нацеленной доставки полинуклеотидов АсЕКЛа является коллоидная дисперсионная система. Коллоидные дисперсионные системы включают макромолекулярные комплексы, нанокапсулы, микросферы, бусины и системы на основе липидов, включая эмульсии типа масло-в-воде, мицеллы, смешанные мицеллы и липосомы. Предпочтительной коллоидной системой по этому изобретению является липосома. Липосомы представляют собой везикулы с искусственной мембраной, которые используются в качестве носителей для доставки ίη У11го и ίη νί\Ό. РНК, ДНК и интактные вирионы можно инкапсулировать внутри водного внутреннего пространства и доставлять в клетки в биологически активной форме (см., например, Рга1еу, еЕ а1., Тгепбк ВюсЬет. 8с1, 6:11, 1981). Способы эффективного переноса генов с использованием липосомного носителя известны в данной области, см., например, Мапшпо, еЕ а1., В|о1есНп1цне5, 6:682, 1988. Состав липосомы обычно представляет собой сочетание фосфолипидов, обычно в сочетании со стероидами, особенно холестерином. Можно использовать также другие фосфолипиды или другие липиды. Физические характеристики липосом зависят от рН, ионной силы и присутствия двухвалентных катионов.
Примеры липидов, используемых при получении липосом, включают фосфатидильные соединения, такие как фосфатидилглицерин, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, сфинголипиды, цереброзиды и ганглиозиды. Примерные фосфолипиды включают фосфатидилхолин яйца, дипальмитоилфосфатидилхолин и дистеароилфосфатидилхолин. Возможно и известно в данной области также нацеливание липосомы на основе, например специфичности для органа, специфичности для клетки и специфичности для органеллы.
- 26 018221
Примеры
Изобретение, в настоящее время описанное в общем, будет более легко понятно со ссылкой на следующие примеры, которые включены только для целей иллюстрации конкретных вариантов осуществления и вариантов осуществления настоящего изобретения и не предназначены для ограничения изобретения.
Пример 1. Слитые белки АсЖПа-Рс.
Авторы настоящего изобретения сконструировали растворимый слитый белок АсЖПа, обладающий внеклеточным доменом Ас£КПа человека, слитым с доменом Рс человека или мыши с минимальным линкером между ними. Конструкции обозначены как АсЖПа-№с и Ас®Па-тЕс соответственно.
Ас£КПа-№с показан внизу, как выделено из линий клеток СНО (8ЕЦ ГО N0: 7):
ΙΕΟΒ8ΕΤρΕ€ΕΡΡΝΑΝΧνΕΚϋΒΤΝρτανΕΡΟΥΟΟΚϋΚΚΒΗΟΡΑΤ\νΚΝΙ8αδΙΕ]νΚΟ<3
ΟλνΕΡΡΙΝΟ ΥΡΚΤΡΟνΕΚΚΡδΡΕνΥΡΟΟΟΕΟΝΜΟΝ ЕКР8 ΥΡΡΕΜ Е УТЦРТК N Р УТРК РРТСООТНТСРРСРАРЕЬБСаР8УРЕРРР1СРКРТЕМ18КТРЕУТСУУУРУ8НЕРРЕУКР ΝλνγνΡΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟΥΜδΤΥΚννδνΕΤνΕΗΟΡΧνΕΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡ УР1ЕКТ18КАКСОРКЕРОУУТ1РР5КЕЕМТККОУ5ЕТСЕУКС;РУР5Р1АУЕ\УЕ8НСОР ЕНМУКТТРРУЬР8РС£РРЕУ8КЬТУРКЗКАУООСНУР8С8УМНЕАЕНЫНУТОК8ЬЗЬ 8РСК
Белки АсЖЛа-йРс и Ас1К11а-тРс экспрессировали в линиях клеток СНО. Рассматривали три различные лидерные последовательности:
(ί) меллитина пчелы медоносной (НВМЬ):
МКБЬУКУАЬУБМУУУ18У1УА (8ЕО ГО N0: 8);
(ίί) тканевого активатора плазминогена (ТРА):
МПЛМКВ6ЬССУЪЬЬС6АУБУ8Р (8ЕО ГО N0: 9);
(ίίί) природный:
М6АААКЬАБАУБЬ18С88ОА (8ЕО ГО N0: 10).
Выбранная форма содержит лидер ТРА и обладает следующей непроцессированной аминокислотной последовательностью:
ΜΡΑΜΚΚΟΕΟθνΕΕΕΟΟΑνΓν8Ρ6ΑΑΙΕϋΚ8ΕΤΟΕΟΕΡΡΝΑΝ\νΕΚ.ΡΚΤΝ(?ΤθνΕΡΟΥ СРКРКККНСРАТ\УКЫ15681Е1УК<?ОС\УЕРР1МСУРКТРСУЕКК.Р8РЕУУРСССЕС ΝΜσΝΕΚΓδΥΕΡΕΜΕντρΡΤδΝΡντΡΚΡΡΤΟαΟΤΗΤΌΡΡΟΡΑΡΕΙΛΟΟΡδνΓΕΓΡΡΚΡΚ ΟΤΕΜΙ8ΒΤΡΕνΤθνννρν8ΗΕΡΡΕνΚΕΝ\νΥνΡθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ<}ΥΝ8ΤΎΒνν8 νΕΤνΕΗρΡν/ΕΝΟΚΕΥΚΟΚν8ΝΚΑΕΡνΡ1ΕΚΤΙ8ΚΑΚαθΡΕΕΡςνΥΤΕΡΡ8ΕΕΕΜΤΚΝ ΟνδΕΤΟΕνΚΌΡΥΡδΡΙΑνΕλνΕδΝΟΟΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδΡΟδί'ΕΕΥδΚΧΤνΡΚΒΕΆΌ <?0Ν УЕ8С8 νΜΗΕΑί.ΗΝΗΥΤ<3Κ81_3Ε8ΡαΚ {5 ЕС? ΙΡ ΝΟ: 13)
Этот полипептид кодирует следующая последовательность нуклеиновой кислоты:
АТООАТОСААТОААОАОАССОСТСТОСТОТОТаСТОСТОСТОТОТООАОСАОТСТ ТСОТТТСОССС06ССССОСТАТАСТТС6ТАСАТСА6АААСТСАОСАСТСТСТТТТ ТТТААТОСТААТТСССАААААСАСАОААССААТСАААСТССТСТТ6ААСС6ТСТТ АТОСТСАСАААОАТАААССССОССАТТСТТТТОСТАССТСОААСААТАТТТСТСО ТТССАТТОААТАСТСАААСААСОТТОТТСОСТСОАТСАТАТСААСТОСТАТОАСА ССАСТ0АТТСТСТАСАААААААА0АСАССССТ6ААСТАТАТТТСТСТТ6СТ6ТСА СООСААТАТОТаТААТОААААОТТТТСТТАТТТТСССОАСАТСОААОТСАСАСАО СССАСТТСАААТССАСТТАСАССТААСССАСССАССОСТОСТССААСТСАСАСАТ ОСССАССОТОСССАОСАССТСААСТССТСОООСаАССаТСАОТСТТССТСТТССС СССААААСССААОбАСАСССТСАТСАТСТСССССАССССТСАОСТСАСАТССОТО ОТС6ТССАСОТСАСССАССААОАСССТ6АС6ТСААОТТСААСТОСТАССТОСАС СССОТОСАООТОСАТААТОССААОАСАААОСССССОСАССАССАСТАСААСАС САСОТАССОТСТООТСАОССТССТСАССОТССТОСАССАССАСТаССТбААТСОС ААОСАСТАСААСТССААСОТСТССААСАААССССТСССАСТССССАТС6АОААА АССАТСТССАААСССАААООССАОСССССАОААССАСАООТОТАСАСССТСССС ССАТСССОООАаОАОАТОАССААСААССАООТСАОССТаАССТаССТаСТСААА СССТГСТАТСССАаССАСАТСОССОТООАОТСаОАОАССААТССОСАСССССАС ААСААСТАСААОАССАСОССТСССОТССТСОАСТССОАССССТССТТСТТССТСТ АТАОСААССТСАССОТССАСААСАССАССТСОСАССАООСОААССТСТТСТСАТ ОСТССОТСАТаСАТСАбССТСТОСАСААССАСТАСАСОСАОААОАСССГСТСССТ СТСТССОССТАААТСАОААТТС (8Е<? ΙΡ N0:14)
- 27 018221
Как Ас®На-йРс, так и АсЖНа-шРс замечательно поддавались рекомбинантной экспрессии. Как показано на фиг. 1, белок очищали в виде отдельного, хорошо определенного пика белка. Ν-концевым секвенированием выявили отдельную последовательность - ГЬСКБТЦЕ (8ЕЦ ΙΌ N0: 11). Очистки можно достигать серией стадий колоночной хроматографии, включая, например, три или более из следующего, в любом порядке: хроматография с белком А, хроматография на Ц-сефарозе, хроматография на фенилсефарозе, эксклюзионная хроматография и катионообменная хроматография. Очистку можно завершать фильтрацией вирусов и заменой буфера. Белок АсЖЛа-йРс очищали до чистоты >98%, как определяли эксклюзионной хроматографией, и >95%, как определяли посредством 8Ь8 РАСЕ.
Ас®На-йРс и Ас®На-тРс показали высокую аффинность к лигандам, в частности активину А. СЬР-11 или активин А (Ас1А) иммобилизовали на чипе В1асоге СМ5 с использованием общепринятого способа присоединения по аминогруппам. Белки Ас®Ла-йРс и Ас®На-тРс вводили в систему и измеряли связывание. Ас®На-№с связывался с активином с константой диссоциации (Кс) 5х10-12, и белок связывался с СЬР-11 с Кс 9,96х 10-9, см. фиг. 2. Поведение АсЖПа-тРс являлось сходным.
Анализ репортерного гена А-204 использовали для оценки эффектов белков АсЖПа-йРс на передачу сигнала посредством СЬР-11 и активина А. Линия клеток: Рабдомиосаркома человека (полученная из мышцы). Репортерный вектор: рСЬ3(САСА)12 (описанный в Ьепп1ег е1 а1., 1998, ЕМВО. 17:3091-3100), см. фиг. 3. Повтор САСА12 присутствует в отвечающих на ТСР-β генах (ген РА1-1), так что этот вектор находит основное применение для факторов, передающих сигналы посредством 8шаб2 и 3.
Сутки 1: Распределяли клетки А-204 в 48-луночном планшете.
Сутки 2: Клетки А-204 трансфицировали 10 мкг рСЬ3(САСА)12 или рСЬ3(САСА)12 (10 мкг) + рКЬСМУ (1 мкг) и Ридепе.
Сутки 3: Добавляли факторы (разведенные в среде + 0,1% В8А). Ингибиторы необходимо предварительно инкубировать с факторами в течение 1 ч перед добавлением к клеткам. Через 6 ч клетки промывали РВ8 и лизировали.
За этим следовал анализ люциферазы. Как правило, в этом анализе в отсутствие каких-либо ингибиторов для активина А показывают приблизительно 10-кратную стимуляцию экспрессии репортерного гена и ЕЬ50 ~2 нг/мл. СЬР-11: 16-кратную стимуляцию, ЕЬ50: ~1,5 нг/мл. Для СЬР-8 показали эффект, сходный с СЬР-11.
Как показано на фиг. 4, АсЖНа-йРс и АсЖПа-тРс ингибируют опосредованную СЬР-8 передачу сигналов в пикомолярных концентрациях. Как показано на фиг. 5, три различных препарата Ас®Ла-йРс ингибировали передачу сигналов СЬР-11 с 1С50 приблизительно 200 пМ.
Ас®На-йРс был очень стабильным при фармакокинетических исследованиях. Крысам вводили дозы 1, 3 или 10 мг/кг белка АсЖНа-йРс и уровни белка в плазме измеряли через 24, 48, 72, 144 и 168 ч. В отдельном исследовании крысам вводили дозы 1, 10 или 30 мг/кг. У крыс Ас®На-йРс обладал временем полужизни в сыворотке 11-14 суток, и уровни лекарственного средства в кровотоке являлись довольно высокими через 2 недели (11, 110 или 304 мкг/мл для исходных введений 1, 10 или 30 мг/кг соответственно). У яванских макак время полужизни в сыворотке составляло, по существу, более 14 суток, и уровни лекарственного средства в кровотоке составляли 25, 304 или 1440 мкг/мл для исходных введений 1, 10 или 30 мг/кг соответственно. Предварительные результаты у человека позволяют предполагать, что время полужизни в сыворотке составляет между приблизительно 20 и 30 сутками.
Пример 2. Ас®На-тРс стимулирует рост кости ш у1уо.
Нормальным самкам мышей (ВАЬВ/с) вводили дозы Ас®Ла-шРс на уровне 1, 3 или 10 мг/кг/дозу, с введением доз дважды в неделю. Минеральную плотность кости и минеральное содержание кости определяли посредством ЬЕХА, см. фиг. 6.
У самок мышей ВАЬВ/с сканированиями ЬЕХА показали значительное увеличение (>20%) минеральной плотности и содержания кости в результате обработки Ас®Ла-тРс, см. фиг. 7 и 8.
Таким образом, антагонизм Ас®Ла вызывал увеличение плотности и содержания кости у нормальных самок мышей. В качестве следующего шага, тестировали эффект Ас®На-тРс на кость на модели остеопороза у мышей.
Апбетккоп е1 а1. (2001) определили, что мыши после овариэктомии страдают значительной потерей костной массы (приблизительно 50% потери губчатой кости через 6 недель после операции) и что потерю костной массы у этих мышей можно корректировать лекарственными средствами-кандидатами, такими как паратиреоидный гормон.
Авторы настоящего изобретения использовали самок мышей С57ВЬ6 после овариэктомии (ОУХ) или ложной операции в возрасте 4-5 недель. Через 8 недель после хирургической операции начинали обработку Ас®Ла-тРс (10 мг/кг, дважды в неделю) или контрольную обработку (РВ8). Плотность кости измеряли сканером СТ.
Как показано на фиг. 9, для мышей после овариэктомии без обработки показали значительную потерю плотности губчатой кости по сравнению с контролями после ложной операции через 6 недель. Обработка Ас®На-тРс восстанавливала плотность кости до такого уровня, как у мышей после ложной операции. Через 6 и 12 недель обработки Ас®На-тРс вызывал существенное увеличение губчатой кости
- 28 018221 у мышей ОУХ, см. фиг. 10. После 6 недель обработки плотность кости увеличивалась на 24% по сравнению с контролями после РВБ. Через 12 недель увеличение составляло 27%.
У мышей после ложной операции Ас®Ла-тЕс также вызывал существенное увеличение губчатой кости, см. фиг. 11. Через 6 и 12 недель обработка приводила к 35% увеличению по сравнению с контролями.
В дополнительном наборе экспериментов мышей после овариэктомии (ОУХ) или после ложной операции, как описано выше, обрабатывали Ас®Ла-тЕс (10 мг/кг, дважды в неделю) или контролем (РВБ) в течение 12 недель. Подобно результатам, описанным выше для Ас®Ла-тЕс, для мышей ОУХ после введения Ас®Ла-тЕс показали увеличение плотности губчатой кости на 15% настолько рано, как через 4 недели, и на 25% через 12 недель обработки (фиг. 12). Подобным образом, для мышей после ложной операции после введения Ас®Ла-тЕс показали увеличение плотности губчатой кости на 22% настолько рано, как через 4 недели, и на 32% через 12 недель обработки (фиг. 13).
Через 12 недель обработки Ас®Иа-тЕс анализ всего организма и анализ ЭЕХА бедренной кости ех У1уо показали, что обработка индуцирует увеличение плотности кости у мышей как после овариэктомии, так и после ложной операции (фиг. 14А и 14В соответственно). Эти результаты поддержаны также анализом рОСТ ех у1уо середины диафиза бедренной кости, который показал значительное увеличение как общей плотности кости, так и плотности трубчатой кости через 12 недель после обработки Ас®Ла-тЕс. Обработанные носителем мыши после овариэктомии показали плотности кости, сравнимые с плотностями у обработанных носителем мышей после ложной операции (фиг. 15). В дополнение к плотности кости, содержание костной ткани увеличивалось после обработки АсЖЛа-тЕс. Анализы рОСТ ех у1уо середины диафиза бедренной кости показали значительное увеличение как общего содержания кости, так и содержания трубчатой кости через 12 недель обработки Ас!КЛа-тЕс, тогда как для обработанных контролем-носителем мышей как после овариэктомии, так и после ложной операции показали сравнимое содержание кости (фиг. 16). Анализ рОСТ ех у1уо середины диафиза бедренной кости также показал, что обработанные Ас®Ла-тЕс мыши не обладали изменениями периостальной окружности; однако обработка Ас®Ла-тЕс приводила к уменьшению эндостальной окружности, указывая на увеличение толщины кортикального слоя из-за роста внутренней поверхности бедренной кости (фиг. 17).
Механическим тестированием бедренной кости определили, что Ас®Иа-тЕс являлся способным увеличивать внешние характеристики кости (максимальную нагрузку, прочность и работу для разлома), которые вносят вклад в значительное увеличение внутренних свойств (предела прочности) костей. Для мышей после овариэктомии, обработанных Ас®Ла-тЕс, показали увеличение прочности кости до уровней выше, чем у контролей после ложной операции после обработки носителем, что указывает на полное обращение остеопорозного фенотипа (фиг. 18).
Эти данные показывают, что антагонист активина-Ас®Ла может увеличивать плотность кости у нормальных самок мышей и, более того, корректировать дефекты плотности кости, содержания кости и в конечном счете - прочности кости на модели остеопороза у мышей.
В дополнительных экспериментах мышей подвергали овариэктомии или ложной операции на 4 неделе и начиная с 12 недель вводили либо плацебо, либо Ас!К11а-тЕс (2 раза/неделю, 10 мг/кг) (обозначены также как КАР-11 на фиг. 19-24) в течение дополнительного периода 12 недель. Оценивали ряд параметров кости. Как показано на фиг. 19, Ас®Ла-тЕс увеличивал соотношения объема губчатой кости позвоночника к общему объему (ВУ/ТУ) у мышей, после операции как ОУХ, так и БНАМ. Ас!К11а-тЕс также улучшал губчатую архитектуру (фиг. 20), увеличивал толщину кортикального слоя (фиг. 21) и улучшал прочность кости (фиг. 22). Как показано на фиг. 23, АсШПа-тЕс оказывал желательные эффекты в диапазоне доз от 1 до 10 мг/кг.
Гистоморфометрию кости проводили во временной точке 2 недели у мышей после ложной операции. Эти данные, представленные на фиг. 24, показывают, что Ас®Ла-тЕс оказывает двойной эффект, как ингибируя резорбцию кости, так и стимулируя рост кости. Таким образом, Ас®Ла-тЕс стимулирует рост кости (анаболический эффект) и ингибирует резорбцию кости (антикатаболический эффект). ВУ = объем кости; ТУ = общий объем ткани. ВУ/ТУ представляет собой меру процента объема кости, который является минерализованным. ЕБ = эродированная поверхность; ВБ = поверхность кости. ЕБ/ВБ является мерой эрозии кости, и уменьшение, вызванное КАР-011, показывает антирезорбтивный или антикатаболический эффект. Мк/Вк представляет собой соотношение минерализованной поверхности/поверхности кости, что является показателем роста кости или анаболического эффекта. Подобным образом, уровень аппозиции минералов (МАК) и скорость формирования кости на поверхность кости в сутки (ВЕК/ВБб) указывают на рост кости. Измерения остеобластов (ШЬ/ВРщ) и остеокластов (Нос/ВРт) проводили для исследования механизма действия.
Второй эксперимент по гистоморфометрии проводили на самках мышей С57ВБ/6 начиная с возраста 12 недель. Мышам дважды в неделю вводили внутрибрюшинно 10 мг/кг Ас®Ла-тЕс в течение 2, 4, 8 или 12 недель.
Каждую группу умерщвляли через 5 суток после последней дозы и отбирали кости для анализа. Мышей метили кальцеином за 9 и 2 суток до эвтаназии. Как показано на фиг. 25, измерения показывают, что Ас®Ла-тЕс стимулирует рост и минерализацию кости и оказывает как анаболический, так и антика
- 29 018221 таболический эффекты. См., например, соотношение ВУ/ТУ, соотношение Е8/В8 и соотношение М5/В5. Анаболические эффекты, по-видимому, сохраняются на протяжении режима дозирования, тогда как антирезорбтивные эффекты, по-видимому, являются недолговечными у мышей.
Пример 3. АсЖЛа-тЕс облегчает или предотвращает повреждение кости на модели множественной миеломы у мышей.
Пациенты с множественной миеломой обладают нарушением с потерей костной массы, характеризующимся увеличенной активностью остеокластов и уменьшенным формированием кости остеобластами. Модель миеломы на мышах 5Т2ММ основана на использовании опухолевых клеток (клеток 5Т2ММ) из типа спонтанной опухоли, которая развивается у старых мышей и вызывает у мышей эффекты, сходные с эффектами, наблюдаемыми у пациентов-людей с множественной миеломой. См., например, Уапбегкегкеп с1 а1., Мс11юб5 Мо1. Меб. 2005; 113:191-205. Эффекты Ас£КПа-тЕс тестировали на этой модели.
Клетки 5Т2ММ, инъецированные мышам С57ВЬ/КаЬ^К1], стимулировали увеличение поверхности остеокластов, образование остеолитических очагов и вызывали уменьшение площади кости. Заболевание кости являлось связанным с уменьшением числа остеобластов, поверхности остеобластов и с уменьшением минерализации.
Мышей, несущих клетки 5Т2ММ, обрабатывали Ас£КПа-тЕс (КАР-011) (10 мг/кг, ί.ρ. дважды в неделю) или носителем со времени инъекции 5Т2ММ всего в течение 12 недель. Анализ микро-СТ проксимальной большой берцовой кости и поясничных позвонков показал уменьшение объема губчатого вещества кости на 39 и 21% (р<0,001 и р<0,01) и уменьшение числа трабекул на 37 и 15% (р<0,01 и р<0,05) у несущих 5Т2ММ мышей по сравнению с наивными мышами. КАР-011 полностью предотвращает индуцированные 5Т2ММ уменьшения объема губчатой ткани и числа трабекул как в большой берцовой кости (р<0,001 и р<0,05), так и в позвоночнике (р<0,01 и р<0,05) при сравнении с обработанными носителем мышами. Объем кости был на 19% выше для большой берцовой кости (р=168) и на 12% выше для позвоночника (р<0,05) у обработанных КАР-011 мышей по сравнению с наивными мышами. КАР-011 предупреждал развитие остеолитических очагов в кости (р<0,05). Этот эффект проиллюстрирован на фиг. 26. В то время как предварительной оценкой данных не удалось идентифицировать значительные эффекты парапротеина в сыворотке (биомаркера опухолевых клеток множественной миеломы) или нагрузки миеломы в этом исследовании, дальнейший анализ показал, что уровень парапротеина в сыворотке являлся, по существу, пониженным у всех обработанных животных, кроме одного, и, кроме того, что объем здорового костного мозга являлся, по существу, увеличенным, что указывает на уменьшение нагрузки опухолевых клеток миеломы.
Таким образом, Ас®Ла-тЕс можно использовать для уменьшения эффектов заболевания кости, возникающего из-за множественной миеломы, и для лечения собственно от опухолевых клеток.
Пример 4. Характеризация белка Ас£КПа-ЬЕс.
Слитый белок АсЖНа-ЬЕс экспрессировали в стабильно трансфицированных клетках СНО-ЭИКХ В11 с вектора рАГО4 (8У40 οτί/энхансер, промотор СМУ), с использованием лидерной последовательности тканевого плазминогена из 8ЕО Ш N0: 9. Белок, очищенный, как описано выше в примере 1, обладает последовательностью 8Е0 Ш N0: 7. Часть Ес представляет собой последовательность Ес [дС] человека, как показано на 8Е0 Ш N0: 7. Анализ сиаловой кислоты показал, что белок содержал, в среднем, между приблизительно 1,5 и 2,5 моль сиаловой кислоты на молекулу слитого белка АсЖЛа-ЬЕс.
Для этого очищенного белка показали существенно долгое время полужизни в сыворотке для всех тестируемых животных, включая время полужизни 25-32 суток для пациентов-людей (см. пример 5). Кроме того, экспрессированный в клетках СНО материал обладал более высокой аффинностью для лиганда активина В, чем опубликовано для слитого белка АсЖНа-ЬЕс, экспрессированного в клетках 293 человека (бе1 Ке еΐ а1., 1. Вю1. СЬет. 2004 Эес. 17; 279(51):53126-35). Кроме того, использование лидерной последовательности ΐРа обеспечивало более высокую продукцию, чем другие лидерные последовательности, и, в отличие от Ас®Ла-Ес, экспрессированного с природным лидером, обеспечивало высокочистую Ν-концевую последовательность. Применение природной лидерной последовательности приводило к двум главным видам Ас£КПа-Ес, где каждый обладал различной Ν-концевой последовательностью.
Пример 5. Клинические испытания на людях.
Белок, описанный в примере 4, вводили пациентам-людям в рандомизированном двойном слепом контролируемом плацебо исследовании, которое проводили для оценки, в первую очередь, безопасности белка для здоровых женщин после менопаузы. 48 индивидов случайным образом распределяли в когорты по 6 для введения либо однократной дозы АсЖНа-ЬЕс, либо плацебо (5 активное вещество: 1 плацебо). Уровни дозы лежали в диапазоне от 0,01 до 3,0 мг/кг внутривенно (IV) и от 0,03 до 0,1 мг/кг подкожно (8С). Всех индивидов наблюдали в течение 120 суток. Индивидов исключали из участия в исследовании, если они принимали лекарственные средства, влияющие на метаболизм кости, в пределах 6 месяцев от начала исследования. Проводили исследования безопасности, наблюдая каждую когорту для определения увеличения дозы. В дополнение к фармакокинетическим (РК) анализам, оценивали также биологическую активность АсЖЛа-ЬЕс измерением биохимических маркеров формирования и резорбции кости и уровней Е8Н.
- 30 018221
В этом исследовании не опубликовано тяжелых неблагоприятных событий. Неблагоприятные события (ΑΕ) в основном являлись умеренными и временными. Предварительный анализ ΑΕ включал в себя головную боль, повышенные лабораторные показатели, симптомы простуды, рвоты или тошноты, внутривенную инфильтрацию и гематому в участке инъекции.
Анализ РК ΑοΙΚ^ι-ΠΕο показал линейный профиль для дозы, и среднее время полужизни приблизительно 25-32 суток. Площадь под кривой (Αυί.') для ΑοΙΚ^ι-ΠΕο линейно зависела от дозы, и поглощение после 8С дозирования являлось, по существу, полным (см. фиг. 27 и 28). Эти данные показывают, что 8С является желательным способом для дозирования, поскольку он обеспечивает эквивалентную биодоступность и время полужизни в сыворотке для лекарственного средства, в то же время избегая всплеска концентраций лекарственного средства в сыворотке, связанного с первыми несколькими сутками IV дозирования (см. фиг. 28). ΑοΙΚΡι-ΗΡο вызывал быстрое, продолжительное зависимое от дозы увеличение уровней в сыворотке специфической костной щелочной фосфатазы (ΒΑΓ), которая является маркером анаболического роста кости, и зависимое от дозы уменьшение уровней С-концевого телопептида коллагена 1 типа и устойчивой к тартрату кислой фосфатазы 5Ь, которые являются маркерами резорбции кости. Для других маркеров, таких как РЮТ, показали неопределенные результаты. Для уровней ΒΑΓ показали почти насыщающие эффекты при наиболее высокой дозе лекарственного средства, показывая, что половины максимальных эффектов на эти анаболические биомаркеры кости можно достигать при дозе 0,3 мг/кг, с увеличением в диапазоне вплоть до 3 мг/кг. Рассчитанная как отношение фармакодинамического эффекта к ΑυС для лекарственного средства, ЕС50 составляет 51,465 (суткихнг/мл), см. фиг. 29. Изменения уровня этих биомаркеров кости сохранялись в течение приблизительно 120 суток при наиболее высоких тестируемых уровнях дозы. Присутствовало также зависимое от дозы уменьшение уровней Ρ8Η в сыворотке, согласующееся с ингибированием активина.
Однократная доза ΑΛΗΠι-ΗΕο, вводимая здоровым женщинам после менопаузы, являлась безопасной и хорошо переносимой в диапазоне тестируемых уровней дозы. Продолжительные РК и фармакодинамические эффекты позволяют предполагать, что прерывистое дозирование будет подходящим для будущих исследований. Например, дозирование на основании времени полужизни в сыворотке можно проводить на основании дозирования один раз в месяц, или по порядку один раз в каждые 2, 3, 4, 5 или 6 недель. Кроме того, поскольку фармакодинамический эффект продолжается далеко за пределами пребывания лекарственного средства в сыворотке, дозирование можно проводить на основании фармакодинамического эффекта, подразумевая, что дозирование каждые 3 месяца или каждые 2, 3, 4, 5, 6 или даже 12 месяцев может быть эффективным для получения желательного эффекта у пациентов. Это клиническое испытание показывает, что для человека ΑοϊΚ-Πι-ΗΕο является остеоанаболическим средством с биологическим доказательством как увеличения формирования кости, так и уменьшения резорбции кости.
Пример 6. Совместное введение ΑсΐΚIIа-тΕс и бисфосфоната.
Бисфосфонаты представляют собой класс лекарственных средств, которые широко используют для лечения нарушений, связанных с низкой минеральной плотностью кости, включая остеопороз и связанную с раком потерю костной массы. Бисфосфонаты обладают сильной антирезорбтивной активностью, ингибируя остеокласты. Возможно, поскольку остеокласты необходимы как для разрушения кости, так и для роста кости, бисфосфонаты, по-видимому уменьшают эффекты паратиреоидного гормона (РТН), одного из единственно известных средств для анаболического роста кости (Ыаск е! а1., Ν. Епд1. ί. Меб. 2003 8ер. 25; 349(13):1207-15; 8атабГат е! а1., Епбосппо1оду. 2007 ,1ип; 148(6):2778-87).
Для тестирования эффективности лечения ΑοϊΚΠι-Ρο у пациентов, которым ранее вводили или одновременно вводили бисфосфонат или другое антирезорбтивное лекарственное средство, мышей тестировали с помощью комбинированных ΑсΐΚIIа-тΕс и золедроната, бисфосфонатного соединения. Мышей ί.’57Βυ6Ν в возрасте 12 недель обрабатывали следующим образом:
Группа 1: ΡΒ8.
Группа 2: ΑсΐΚIIа-тΕс (ΚЛΡ-0I1) (10 мг/кг) дважды в неделю (с группами 3 и 4).
Группа 3: Золедроновая кислота (ΖΟΕ), однократная доза (20 мг/кг).
Группа 4: ΖΟΕ (1 доза), 3 суток после ΑсΐΚIIа-тΕс (ΚЛΡ-01I) (1 мг/кг) дважды в неделю.
Группа 5: ΖΟΕ (1 доза), 3 суток после ΑсΐΚIIа-тΕс (ΚЛΡ-01I) (10 мг/кг) дважды в неделю.
Общую ΒΜ^ определяли сканированием ^ΕXΑ (Р!Х1) перед дозированием и на 3 и 8 неделе обработки.
Как показано на фиг. 30, общая ΒΜ^ значительно увеличивалась во всех группах обработки, причем с комбинацией ΖΟΕ и ΑсΐΚIIа-тΕс получали самые большие эффекты. Эти результаты показывают, что белки ΑοϊΚΠι-Ρο можно использовать для увеличения плотности кости даже у пациентов, получающих терапию бисфосфонатом.
Пример 7. ΑοΙΚ^ι-Εο облегчает или предотвращает потерю костной массы, вызванную метастазированием рака молочной железы.
Предполагают, что 65-75% рака молочной железы метастазирует в кость, вызывая существенное повреждение структуры кости, увеличение риска переломов и вызывая боль и другие побочные эффекты. Авторы настоящего изобретения тестировали эффекты ΑсΐΚIIа-Ρс на модели на мышах рака молочной железы, метастазирующего в кость.
- 31 018221
Сублинию линии клеток рака молочной железы человека МЭА-МВ-231 (клон 2287) культивировали 1и уйго, и клетки собирали при плотности 5х106 клеток/мл. МОА-МВ-231 представляет собой линию клеток, которые являются высококомпетентными для засева в кость и вызывают повреждение кости, сходное с повреждением, вызванным метастазами в кости. 10 мл клеток инъецировали в большую берцовую кость бестимусной мыши иибе в возрасте 6 недель на сутки исследования 0. На сутки исследования 10 мышам вводили АсЕКНа-тРс (10 мг/кг/дважды в неделю/подкожно) (и=8) или носитель - РВ8 (и=7). Прогрессирование заболевания оценивали двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрией (Р1Х1Миз) с недельными интервалами. Мышей обрабатывали АсЕКПа-тРс в течение 4 недель, затем умерщвляли и большие берцовые кости (как после инъекции опухоли, так и без опухоли) собирали от каждого животного. Затем большие берцовые кости обрабатывали и подготавливали для микро-СТ и гистологического анализа.
Инъекция клеток МОА-МВ-231 в большую берцовую кость бестимусной мыши иибе стимулировала развитие остеолитических очагов в большой берцовой кости после инъекции по сравнению с контралатеральной ногой. Анализ микро-СТ проксимальной большой берцовой кости показал уменьшение на 62% объема губчатой ткани кости в несущих МОА-МВ-231 больших берцовых костях по сравнению с большой берцовой костью без опухоли у мышей после обработки носителем - РВ8. Обработка АсЕКПа-тРс приводила к увеличению на 70 или 147% в наивной или несущей опухоль большой берцовой кости соответственно по сравнению с носителем (р<0,01 для обеих). Несущие опухоль большие берцовые кости обработанных АсЕВПа-тРс мышей обладали плотностью губчатой ткани кости, сходной с наивными большими берцовыми костями обработанных УЕН мышей (р=0,39).
Таким образом, АсЕВПа-тРс является способным устранять повреждение кости, связанное с присутствием опухолевых клеток молочной железы в кости.
Пример 8. Альтернативные белки ЛсίКIIа-Рс.
Альтернативная конструкция может обладать делецией С-концевого хвоста (последних 15 аминокислот внеклеточного домена АсЕКПа). Последовательность для такой конструкции представлена ниже (часть Рс подчеркнута) (8ЕО ΙΌ N0: 12):
ΙΕΟΚδΕΤΟΕΟΕΗΡΝΑΝλνΕΚβΚΤΝρτσνΕΡΟΥαΟΚΟΚΚΚΗσΡΑΤΧνΚ.ΝΙδΟδΙΕίνΚΟα С\УГ.РР1ЫСУРКТРСУЕККР8РЕУУРСССЕПКМСКЕКР8УРРЕМТООСТНТСРРСРА РЕЕЕООР8УРЕГРРКРКРТЕМ18КТРЕУТСУУУРУ8НЕРРЕУКГК1УУУРСУЕУШАК ТКРКЕЕОУ№ТУКУУ8УЕТУЕНОР\УЕКСКЕУКСКУ8ЫКАЕРУР1ЕКТ18КАКаОРКЕ Ρ0νΥΤΕΡΡ8ΚΕΕΜΤΚΝ0ν8ΕΤαΕνΚ0ΡΥΡ8Π1ΑνΕ1Λ,Ε8Ν<30ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΡ8Ρϋ 5ΡΓΕΥ5ΚΕΤνΡΚ8ΚΐνθΟΟΝνΡ8Ο8νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤΟΚ$Ε8Ε8ΡΟΚ
Включение в качестве ссылки.
Полное содержание всех публикаций и патентов, упомянутых в настоящем описании, таким образом, приведено в качестве ссылки, как если бы было конкретно и отдельно указано, что каждая отдельная публикация или патент приведены в качестве ссылки.
В то время как обсуждали конкретные варианты осуществления объекта, приведенное выше описание является иллюстративным, а не ограничивающим. Множество вариантов будут очевидными для специалистов в данной области после обзора этого описания и следующей ниже формулы изобретения. Полный объем изобретения следует определять исходя из пунктов формулы изобретения, вместе с полным объемом эквивалентов в них, и из описания, вместе с такими вариантами.
Claims (22)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение Ас®Ла-Ес слитого белка для получения лекарственного средства для лечения или профилактики множественной миеломы у больного.
- 2. Применение по п.1, где слитый белок Ас®Ла-Ес выбран из группы, состоящей из:a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90 или 95% идентичную 8Е0 ГО N0: 2;b) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90 или 95% идентичную 8Е0 ГО N0: 3;c) полипептида, содержащего по меньшей мере 50 последовательных аминокислот из 8Е0 ГО N0: 2;б) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90 или 95% идентична 8Е0 ГО N0: 7; ие) полипептида с последовательностью 8Е0 ГО N0: 7.
- 3. Применение по п.2, где слитый белок АсЖПа-Ес обладает одной или несколькими из следующих характеристик:ί) связывает лиганд Ас®Ла с Кс по меньшей мере 10-7 М и ίί) ингибирует передачу сигнала Ас®Па в клетке.
- 4. Применение по пп.1-3, где указанный слитый белок АсЖЛа-Ес содержит один или несколько модифицированных аминокислотных остатков, выбранных из гликозилированной аминокислоты, пэгилированной аминокислоты, фарнезилированной аминокислоты, ацетилированной аминокислоты, биотинилированной аминокислоты, аминокислоты, конъюгированной с липидной группой, и аминокислоты, конъюгированной с органическим дериватизирующим агентом.
- 5. Применение по любому из пп.1-4, где слитый белок АсЖЛа-Ес представляет собой димер, сформированный из двух полипептидов, каждый из которых содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0: 2, и где слитый белок Ас®Ла-Ес содержит три или более группы сиаловой кислоты.
- 6. Применение по любому из пп.1-5, где слитый белок Ас®Ла-Ес содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична 8Е0 ГО N0: 3.
- 7. Применение по любому из пп.1-5, где слитый белок Ас®Ла-Ес содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 3.
- 8. Применение по любому из пп.1-5, где слитый белок Ас®Ла-Ес содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична 8Е0 ГО N0: 2.
- 9. Применение по любому из пп.1-5, где слитый белок Ас®Ла-Ес содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 2.
- 10. Применение по любому из пп.1-5, где слитый белок Ас®Ла-Ес содержит от трех до пяти групп сиаловой кислоты.
- 11. Применение по любому из пп.1-10, где слитый белок Ас®Ла-Ес повышает массу скелетной мускулатуры больного по меньшей на 10%.
- 12. Применение по любому из пп.1-11, где слитый белок Ас®Па-Рс вводят до достижения его концентрации в сыворотке больного по меньшей мере до 200 нг/мл.
- 13. Применение по п.12, где слитый белок Ас®Па-Рс вводят до достижения его концентрации в сыворотке больного по меньшей мере 1000 нг/мл.
- 14. Применение по любому из пп.1-13, где слитый белок Ас®Па-Рс содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична 8Е0 ГО N0: 7.
- 15. Применение по любому из пп.1-13, где слитый белок Ас®Па-Рс содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 7.
- 16. Применение по любому из пп.1-15, где слитый белок Ас®Ла-Ес обладает временем полужизни в сыворотке от 15 до 40 суток у нормальных здоровых людей.
- 17. Применение по любому из пп.1-15, где слитый белок АсЖПа-Ес вводят пациенту не чаще чем один раз в неделю, один раз в месяц или один раз в три месяца.
- 18. Применение по любому из пп.1-17, где пациент в течение года до введения слитого белка Ас®Па-Ес получал или получает терапию антирезорбтивным средством.
- 19. Применение по любому из пп.1-18, где слитый белок Ас®Па-Рс вводят одновременно с введением антирезорбтивного средства.
- 20. Применение по п.18 или 19, где антирезорбтивное средство выбрано из группы, состоящей из бисфосфонатного средства, антагониста лиганда КАИК и антагониста остеопротегрина.
- 21. Применение по любому из пп.1-20, где слитый белок Ас®Па-Рс вводят в состав для введения одновременно с радиационной терапией цитотоксическим или химиотерапевтическим средством.
- 22. Применение по любому из пп.1-21, где слитый белок Ас®Ла-Ес снижает тяжесть течения миеломной опухоли у пациента.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US90058007P | 2007-02-09 | 2007-02-09 | |
US93276207P | 2007-05-31 | 2007-05-31 | |
US93736507P | 2007-06-26 | 2007-06-26 | |
US52807P | 2007-10-25 | 2007-10-25 | |
PCT/US2008/001354 WO2008100384A2 (en) | 2007-02-09 | 2008-02-01 | Activin-actriia antagonists and uses for promoting bone growth in cancer patients |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200970747A1 EA200970747A1 (ru) | 2010-02-26 |
EA018221B1 true EA018221B1 (ru) | 2013-06-28 |
Family
ID=39690668
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200970747A EA018221B1 (ru) | 2007-02-09 | 2008-02-01 | АНТАГОНИСТЫ АКТИВИНА-ActRIIa И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА КОСТИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ |
EA201690994A EA201690994A1 (ru) | 2007-02-09 | 2008-02-01 | Антагонисты активина-actriia и применение для стимуляции роста кости у больных раком |
EA201300116A EA025371B1 (ru) | 2007-02-09 | 2008-02-01 | АНТАГОНИСТЫ АКТИВИНА-ActRIIa И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА КОСТИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201690994A EA201690994A1 (ru) | 2007-02-09 | 2008-02-01 | Антагонисты активина-actriia и применение для стимуляции роста кости у больных раком |
EA201300116A EA025371B1 (ru) | 2007-02-09 | 2008-02-01 | АНТАГОНИСТЫ АКТИВИНА-ActRIIa И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА КОСТИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US8173601B2 (ru) |
EP (3) | EP2120999B1 (ru) |
JP (6) | JP5574711B2 (ru) |
KR (7) | KR101670417B1 (ru) |
CN (3) | CN104548056B (ru) |
AR (1) | AR065289A1 (ru) |
AU (1) | AU2008216896B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0807506B1 (ru) |
CA (3) | CA2913992C (ru) |
CY (1) | CY1113963T1 (ru) |
DK (1) | DK2120999T3 (ru) |
EA (3) | EA018221B1 (ru) |
ES (2) | ES2756725T3 (ru) |
HK (1) | HK1137366A1 (ru) |
HR (1) | HRP20120947T1 (ru) |
IL (3) | IL200242B (ru) |
ME (1) | ME02333B (ru) |
MX (2) | MX2009008510A (ru) |
PL (1) | PL2120999T3 (ru) |
PT (1) | PT2120999E (ru) |
RS (1) | RS52535B (ru) |
SI (1) | SI2120999T1 (ru) |
TR (1) | TR200906329T1 (ru) |
TW (7) | TWI459963B (ru) |
WO (1) | WO2008100384A2 (ru) |
Families Citing this family (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2332977B1 (en) | 2004-07-23 | 2015-11-25 | Acceleron Pharma Inc. | ActRII receptor polypeptides |
DK1973559T3 (da) | 2005-11-23 | 2013-03-25 | Acceleron Pharma Inc | Activin-ActRIIa antagonister samt anvendelser til fremme af knoglevækst |
US8128933B2 (en) | 2005-11-23 | 2012-03-06 | Acceleron Pharma, Inc. | Method of promoting bone growth by an anti-activin B antibody |
US20100028332A1 (en) * | 2006-12-18 | 2010-02-04 | Acceleron Pharma Inc. | Antagonists of actriib and uses for increasing red blood cell levels |
US8895016B2 (en) | 2006-12-18 | 2014-11-25 | Acceleron Pharma, Inc. | Antagonists of activin-actriia and uses for increasing red blood cell levels |
CN104524548A (zh) | 2006-12-18 | 2015-04-22 | 阿塞勒隆制药公司 | 活化素-actrii拮抗剂及在提高红细胞水平中的用途 |
CN103920139B (zh) * | 2007-02-01 | 2018-02-02 | 阿塞勒隆制药公司 | 活化素‑actriia拮抗剂及在治疗或预防乳腺癌中的用途 |
TWI782836B (zh) | 2007-02-02 | 2022-11-01 | 美商艾瑟勒朗法瑪公司 | 衍生自ActRIIB的變體與其用途 |
TWI459963B (zh) | 2007-02-09 | 2014-11-11 | Acceleron Pharma Inc | 包含ActRIIa-Fc融合蛋白的醫藥組合物;ActRIIa-Fc融合蛋白於治療或預防與癌症相關的骨質流失之用途;ActRIIa-Fc融合蛋白於治療或預防多發性骨髓瘤之用途 |
CN107412734A (zh) * | 2007-09-18 | 2017-12-01 | 阿塞勒隆制药公司 | 活化素‑actriia拮抗剂和减少或抑制fsh分泌的用途 |
KR20190049912A (ko) | 2008-06-26 | 2019-05-09 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | 액티빈-actriia의 길항물질 및 적혈구 수준을 증가시키기 위한 이들의 용도 |
KR20190128002A (ko) | 2008-06-26 | 2019-11-13 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | 액티빈-actriia 길항물질을 투약하는 방법 및 치료된 환자의 모니터링 |
US8216997B2 (en) | 2008-08-14 | 2012-07-10 | Acceleron Pharma, Inc. | Methods for increasing red blood cell levels and treating anemia using a combination of GDF traps and erythropoietin receptor activators |
TWI626945B (zh) | 2008-08-14 | 2018-06-21 | 艾瑟勒朗法瑪公司 | 使用gdf阱以增加紅血球水平 |
AU2010204985A1 (en) | 2009-01-13 | 2011-08-04 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for increasing adiponectin |
EP2440576A4 (en) * | 2009-06-08 | 2013-11-20 | Acceleron Pharma Inc | PROCESS FOR INCREASING THE NUMBER OF THERMOUS ADIPOCYTES |
KR20210034684A (ko) | 2009-06-12 | 2021-03-30 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | 절두된 ActRIIB-FC 융합 단백질 |
KR20120062874A (ko) * | 2009-09-09 | 2012-06-14 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | ActRIIb 길항제들와 이의 투약 및 용도 |
US20110129469A1 (en) * | 2009-11-03 | 2011-06-02 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for treating fatty liver disease |
EP2501400B1 (en) | 2009-11-17 | 2017-11-01 | Acceleron Pharma, Inc. | Actriib proteins and variants and uses therefore relating to utrophin induction for muscular dystrophy therapy |
DK3284818T3 (da) | 2010-01-26 | 2022-06-20 | Celularity Inc | Behandling af knoglerelateret kræft ved hjælp af placenta stamceller |
JP2014502260A (ja) | 2010-11-08 | 2014-01-30 | アクセルロン ファーマ, インコーポレイテッド | Actriia結合剤およびその使用 |
US9809636B2 (en) | 2012-04-06 | 2017-11-07 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for increasing red blood cell levels comprising administering BMP9 |
KR102279522B1 (ko) | 2012-11-02 | 2021-07-19 | 셀진 코포레이션 | 골 및 다른 장애를 치료하기 위한 액티빈-actrii 길항제 및 용도 |
CA2898467C (en) | 2013-01-18 | 2024-06-11 | Biomeme Incorporated | Analytic device |
HRP20181939T4 (hr) * | 2013-03-20 | 2022-05-13 | Genzyme Corporation | Postupci za liječenje osteogenesis imperfecta |
JP2015159766A (ja) * | 2014-02-27 | 2015-09-07 | 国立大学法人京都大学 | クッシング症候群の検査方法、検査用バイオマーカー及び治療剤 |
ES2845650T3 (es) | 2014-04-18 | 2021-07-27 | Acceleron Pharma Inc | Procedimientos para aumentar los niveles de glóbulos rojos y tratar la drepanocitosis |
EP3154566B1 (en) | 2014-06-13 | 2022-08-03 | Acceleron Pharma Inc. | Actrii antagonist for the treatment or prevention of a cutaneous ulcer in a subject that has anemia |
MA41052A (fr) | 2014-10-09 | 2017-08-15 | Celgene Corp | Traitement d'une maladie cardiovasculaire à l'aide de pièges de ligands d'actrii |
HUE062189T2 (hu) | 2014-12-03 | 2023-09-28 | Celgene Corp | Aktivin-ACTRII-antagonisták és alkalmazások mielodiszpláziás szindróma kezelésére |
EP3298034A4 (en) | 2015-05-20 | 2019-02-13 | Celgene Corporation | IN VITRO CELL CULTURE PROCEDURE FOR BETA THALASSEMIA BY MEANS OF ACTIVIN TYPE II RECEPTOR LIGANDS |
CA3005975A1 (en) * | 2015-11-23 | 2017-06-01 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for treating eye disorders |
EP3496739B1 (en) * | 2016-07-15 | 2021-04-28 | Acceleron Pharma Inc. | Compositions comprising actriia polypeptides for use in treating pulmonary hypertension |
CN110461349A (zh) * | 2016-11-10 | 2019-11-15 | 科乐斯疗法公司 | 激活素受体iia型变体及其使用方法 |
GB201620119D0 (en) | 2016-11-29 | 2017-01-11 | Pharmafox Therapeutics Ag | Compounds |
CN110494155A (zh) * | 2017-02-01 | 2019-11-22 | 阿塞勒隆制药公司 | 用于提高免疫活性的TGFβ和ActRII拮抗剂 |
KR20240014600A (ko) | 2017-03-24 | 2024-02-01 | 노바르티스 아게 | 심장질환 예방 및 치료 방법 |
WO2019055875A2 (en) | 2017-09-15 | 2019-03-21 | Biomeme, Inc. | METHODS AND SYSTEMS FOR AUTOMATIC SAMPLE PROCESSING |
JP7258021B2 (ja) * | 2017-11-09 | 2023-04-14 | ケロス セラピューティクス インコーポレイテッド | アクチビンIIa型受容体変異体を含む医薬組成物 |
CA3087008A1 (en) | 2018-01-12 | 2019-07-18 | Keros Therapeutics, Inc. | Activin receptor type iib variants and methods of use thereof |
CN112543644A (zh) * | 2018-07-24 | 2021-03-23 | 古德T细胞有限公司 | 一种预防和治疗免疫相关疾病的组合物 |
JP7483745B2 (ja) | 2019-03-21 | 2024-05-15 | バイオミーム インコーポレイテッド | 多機能性分析デバイス |
CA3192080A1 (en) | 2020-09-18 | 2022-03-24 | Marc DEJOHN | Portable devices and methods for analyzing samples |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005094871A2 (en) * | 2004-03-26 | 2005-10-13 | Acceleron Pharma Inc. | Bmp-3 propeptides and related methods |
WO2006012627A2 (en) * | 2004-07-23 | 2006-02-02 | Acceleron Pharma Inc. | Actrii receptor polypeptides, methods and compositions |
WO2007062188A2 (en) * | 2005-11-23 | 2007-05-31 | Acceleron Pharma Inc. | Activin-actriia antagonists and uses for promoting bone growth |
Family Cites Families (206)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0637520B2 (ja) * | 1985-07-03 | 1994-05-18 | 味の素株式会社 | ポリペプチド |
US4956282A (en) * | 1985-07-29 | 1990-09-11 | Calgene, Inc. | Mammalian peptide expression in plant cells |
AU597574B2 (en) | 1986-03-07 | 1990-06-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for enhancing glycoprotein stability |
US4973577A (en) * | 1986-04-04 | 1990-11-27 | The Salk Institute For Biological Studies | FSH-releasing peptides |
US5080891A (en) | 1987-08-03 | 1992-01-14 | Ddi Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
US5096815A (en) | 1989-01-06 | 1992-03-17 | Protein Engineering Corporation | Generation and selection of novel dna-binding proteins and polypeptides |
US5198346A (en) | 1989-01-06 | 1993-03-30 | Protein Engineering Corp. | Generation and selection of novel DNA-binding proteins and polypeptides |
AU8761391A (en) | 1990-09-13 | 1992-04-15 | Children's Hospital Medical Center Of Northern California | Method for increasing red blood cell production by treatment with activin or activin-related peptides |
US5208219A (en) * | 1991-02-14 | 1993-05-04 | Celtrix Pharmaceuticals Inc. | Method for inducing bone growth |
US5118667A (en) * | 1991-05-03 | 1992-06-02 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Bone growth factors and inhibitors of bone resorption for promoting bone formation |
EP0542971A1 (en) | 1991-05-10 | 1993-05-26 | The Salk Institute For Biological Studies | CLONING AND RECOMBINANT PRODUCTION OF RECEPTOR(S) OF THE ACTIVIN/TGF-$g(b) SUPERFAMILY |
US6162896A (en) * | 1991-05-10 | 2000-12-19 | The Salk Institute For Biological Studies | Recombinant vertebrate activin receptors |
US5885794A (en) * | 1991-05-10 | 1999-03-23 | The Salk Institute For Biological Studies | Recombinant production of vertebrate activin receptor polypeptides and identification of receptor DNAs in the activin/TGF-β superfamily |
US20050186593A1 (en) | 1991-05-10 | 2005-08-25 | The Salk Institute For Biological Studies | Cloning and recombinant production of CRF receptor(s) |
US6287816B1 (en) | 1991-06-25 | 2001-09-11 | Genetics Institute, Inc. | BMP-9 compositions |
KR100255415B1 (ko) | 1991-06-25 | 2000-05-01 | 브루스 엠. 에이센 | 비엠피-9 조성물 |
US6692925B1 (en) * | 1992-11-17 | 2004-02-17 | Ludwig Institute For Cancer Research | Proteins having serine/threonine kinase domains, corresponding nucleic acid molecules, and their use |
EP1475440A3 (en) * | 1993-01-12 | 2004-11-17 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-3 |
US5637480A (en) | 1993-05-12 | 1997-06-10 | Genetics Institute, Inc. | DNA molecules encoding bone morphogenetic protein-10 |
KR100231640B1 (ko) | 1993-05-12 | 1999-12-01 | 토마스 제이 데스로저 | Bmp-10 조성물 |
US5677196A (en) | 1993-05-18 | 1997-10-14 | University Of Utah Research Foundation | Apparatus and methods for multi-analyte homogeneous fluoro-immunoassays |
US5831050A (en) | 1993-06-07 | 1998-11-03 | Creative Biomolecules, Inc. | Morphogen cell surface receptor |
ATE355369T1 (de) | 1993-10-14 | 2006-03-15 | Harvard College | Verfahren zur induzierung und zur erhaltung neuronalen zellen |
US5525490A (en) | 1994-03-29 | 1996-06-11 | Onyx Pharmaceuticals, Inc. | Reverse two-hybrid method |
US5658876A (en) | 1994-04-28 | 1997-08-19 | The General Hospital Corporation | Activin antagonists as novel contraceptives |
US5545616A (en) * | 1994-09-22 | 1996-08-13 | Genentech, Inc. | Method for predicting and/or preventing preterm labor |
US5760010A (en) | 1995-01-01 | 1998-06-02 | Klein; Ira | Method of treating liver disorders with a macrolide antibiotic |
US5814565A (en) | 1995-02-23 | 1998-09-29 | University Of Utah Research Foundation | Integrated optic waveguide immunosensor |
NZ306767A (en) | 1995-04-11 | 2000-03-27 | Univ Johns Hopkins | Method of identifying molecular interactions employing counterselection and at least two hybrid molecules or two hybrid systems |
EP0771873A3 (en) * | 1995-10-27 | 1998-03-04 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Neuronal cell-specific receptor protein |
GB9526131D0 (en) | 1995-12-21 | 1996-02-21 | Celltech Therapeutics Ltd | Recombinant chimeric receptors |
US6004780A (en) * | 1996-03-26 | 1999-12-21 | Human Genome Sciences, Inc. | Growth factor HTTER36 |
US20050244867A1 (en) * | 1996-03-26 | 2005-11-03 | Human Genome Sciences, Inc. | Growth factor HTTER36 |
EP0939816A1 (en) | 1996-10-25 | 1999-09-08 | G.D. SEARLE & CO. | Circularly permuted erythropoietin receptor agonists |
US6605699B1 (en) * | 1997-01-21 | 2003-08-12 | Human Genome Sciences, Inc. | Galectin-11 polypeptides |
US6034062A (en) | 1997-03-13 | 2000-03-07 | Genetics Institute, Inc. | Bone morphogenetic protein (BMP)-9 compositions and their uses |
US6231880B1 (en) * | 1997-05-30 | 2001-05-15 | Susan P. Perrine | Compositions and administration of compositions for the treatment of blood disorders |
ATE417927T1 (de) | 1997-07-30 | 2009-01-15 | Univ Emory | Neue knochenmineralisierungsproteine, dna, vektoren, expressionssysteme |
US6891082B2 (en) | 1997-08-01 | 2005-05-10 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Transgenic non-human animals expressing a truncated activintype II receptor |
US6656475B1 (en) | 1997-08-01 | 2003-12-02 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor receptors, agonists and antagonists thereof, and methods of using same |
WO1999006559A1 (en) | 1997-08-01 | 1999-02-11 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Methods to identify growth differentiation factor (gdf) receptors |
US6696260B1 (en) * | 1997-08-01 | 2004-02-24 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Methods to identify growth differentiation factor (GDF) binding proteins |
CA2302525A1 (en) | 1997-08-29 | 1999-03-04 | Human Genome Sciences, Inc. | Follistatin-3 |
US6953662B2 (en) * | 1997-08-29 | 2005-10-11 | Human Genome Sciences, Inc. | Follistatin-3 |
WO1999018212A1 (fr) | 1997-10-03 | 1999-04-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anticorps humain naturel |
US6696411B1 (en) * | 1998-04-22 | 2004-02-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Canine erythropoietin gene and recombinant protein |
EP1113799A4 (en) | 1998-09-17 | 2004-06-09 | Lilly Co Eli | PROTEIN-BASED PREPARATION |
DE69934995T2 (de) * | 1998-09-22 | 2007-11-22 | Long Yu | Für den menschlichen wachstums-differenzierungsfaktor kodierende sequenz und polypeptid, welches durch solche dna-sequenz kodiert wird und verfahren zur herstellung |
US6472179B2 (en) | 1998-09-25 | 2002-10-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Receptor based antagonists and methods of making and using |
US6548634B1 (en) | 1998-09-30 | 2003-04-15 | Chiron Corporation | Synthetic peptides having FGF receptor affinity |
US6238860B1 (en) | 1998-11-05 | 2001-05-29 | Dyax Corp. | Binding moieties for human parvovirus B19 |
US6777205B1 (en) * | 1998-11-06 | 2004-08-17 | Sterrenbeld Biotechnologie North America, Inc. | Host cells expressing recombinant human erythropoietin |
US20040009535A1 (en) | 1998-11-27 | 2004-01-15 | Celltech R&D, Inc. | Compositions and methods for increasing bone mineralization |
CN100567322C (zh) | 1999-01-21 | 2009-12-09 | 梅塔莫菲克斯公司 | 抑制生长分化因子活性的多肽及表达该多肽的细胞 |
US6914128B1 (en) | 1999-03-25 | 2005-07-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing |
CN1163262C (zh) * | 1999-04-01 | 2004-08-25 | 上海益众生物技术有限公司 | 成骨生长肽药物组合物及制备方法和应用 |
AU777783B2 (en) | 1999-04-19 | 2004-10-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Proliferation inhibitor for androgen-independent tumor |
US6468543B1 (en) * | 1999-05-03 | 2002-10-22 | Zymogenetics, Inc. | Methods for promoting growth of bone using ZVEGF4 |
SK8292002A3 (en) | 1999-11-12 | 2002-12-03 | Maxygen Holdings Ltd | A conjugate exhibiting interferon gamma activity, nucleotide sequence encoding for a polypeptide fraction of conjugate, an expression vector and a host cell containing nucleotide sequence, pharmaceutical composition comprising the same and use thereof |
AU777166B2 (en) | 1999-12-15 | 2004-10-07 | Research Development Foundation | Betaglycan as an inhibin receptor and uses thereof |
US20030224501A1 (en) | 2000-03-17 | 2003-12-04 | Young Paul E. | Bone morphogenic protein polynucleotides, polypeptides, and antibodies |
JP4487376B2 (ja) * | 2000-03-31 | 2010-06-23 | 味の素株式会社 | 腎疾患治療剤 |
US6627424B1 (en) | 2000-05-26 | 2003-09-30 | Mj Bioworks, Inc. | Nucleic acid modifying enzymes |
US20030215913A1 (en) | 2000-07-19 | 2003-11-20 | Enrique Alvarez | Nucleic acids, vectors, host cells, polypeptides, and uses thereof |
US6632180B1 (en) | 2000-09-07 | 2003-10-14 | John H. Laragh | Method for evaluating and treating hypertension |
DE10045591A1 (de) | 2000-09-15 | 2002-04-04 | Klaus Pfizenmaier | Ortsspezifische, antikörpervermittelte Aktivierung proapoptotischer Zytokine - AMAIZe (Antibody-Mediated Apoptosis Inducing Zytokine) |
CA2418835A1 (en) | 2000-10-16 | 2002-04-25 | Phylos, Inc. | Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins |
US7087224B2 (en) * | 2000-10-31 | 2006-08-08 | Amgen Inc. | Method of treating anemia by administering IL-1ra |
EP1345959B1 (en) | 2000-11-20 | 2011-05-25 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Membrane scaffold proteins |
EP1370287A2 (en) | 2000-12-01 | 2003-12-17 | Wyeth | Method and composition for modulating bone growth |
US20030082233A1 (en) | 2000-12-01 | 2003-05-01 | Lyons Karen M. | Method and composition for modulating bone growth |
TW200526779A (en) * | 2001-02-08 | 2005-08-16 | Wyeth Corp | Modified and stabilized GDF propeptides and uses thereof |
US20040132675A1 (en) * | 2002-02-08 | 2004-07-08 | Calvin Kuo | Method for treating cancer and increasing hematocrit levels |
US7294472B2 (en) | 2001-03-14 | 2007-11-13 | Caden Biosciences | Method for identifying modulators of G protein coupled receptor signaling |
WO2002074340A1 (fr) | 2001-03-16 | 2002-09-26 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Procede de fabrication d'une preparation a liberation continue |
AU2002256371B2 (en) | 2001-04-26 | 2008-01-10 | Amgen Mountain View Inc. | Combinatorial libraries of monomer domains |
DK1436003T3 (da) | 2001-05-24 | 2010-03-15 | Zymogenetics Inc | TACI-immunoglobulin-fusionsproteiner |
IL159015A0 (en) * | 2001-05-25 | 2004-05-12 | Genset Sa | Polypeptides, their preparation and use |
JP2003012699A (ja) | 2001-07-04 | 2003-01-15 | Japan Science & Technology Corp | 抗麻酔性貝毒抗体の製法、新規抗体、該抗体を用いるelisa測定キット、該製法による系標識毒標品 |
AUPR638101A0 (en) | 2001-07-13 | 2001-08-09 | Bioa Pty Limited | Composition and method for treatment of disease |
AU2002318743B2 (en) | 2001-07-17 | 2008-02-21 | Teijin Limited | Method of selecting substance characterized by assaying PPARD activating effect and drug |
US6855344B2 (en) * | 2001-07-17 | 2005-02-15 | Integrated Chinese Medicine Holdings, Ltd. | Compositions and methods for prostate and kidney health and disorders, an herbal preparation |
KR100453877B1 (ko) | 2001-07-26 | 2004-10-20 | 메덱스젠 주식회사 | 연쇄체화에 의한 면역 글로블린 융합 단백질의 제조 방법 및 이 방법에 의해 제조된 TNFR/Fc 융합 단백질, 상기 단백질을 코딩하는 DNA, 상기 DNA를 포함하는벡터, 및 상기 벡터에 의한 형질전환체 |
US7320789B2 (en) * | 2001-09-26 | 2008-01-22 | Wyeth | Antibody inhibitors of GDF-8 and uses thereof |
US6784154B2 (en) * | 2001-11-01 | 2004-08-31 | University Of Utah Research Foundation | Method of use of erythropoietin to treat ischemic acute renal failure |
US20060234918A1 (en) | 2001-12-19 | 2006-10-19 | Voyager Pharmaceutical Corporation | Methods for treating and preventing cancers that express the hypothalamic-pituitary-gonadal axis of hormones and receptors |
US20030144203A1 (en) | 2001-12-19 | 2003-07-31 | Voyager Pharmaceutical Corporation | Methods for slowing senescence and treating and preventing diseases associated with senescence |
US6998118B2 (en) | 2001-12-21 | 2006-02-14 | The Salk Institute For Biological Studies | Targeted retrograde gene delivery for neuronal protection |
US20030224397A1 (en) | 2002-02-11 | 2003-12-04 | Genentech, Inc. | Antibody variants with faster antigen association rates |
AU2003217612A1 (en) * | 2002-02-21 | 2003-09-09 | Wyeth | GASP1: a follistatin domain containing protein |
US20030219846A1 (en) | 2002-02-28 | 2003-11-27 | Pfizer Inc. | Assay for activity of the ActRIIB kinase |
AU2003232485A1 (en) | 2002-04-18 | 2003-10-27 | Mtm Laboratories Ag | Neopeptides and methods useful for detection and treatment of cancer |
KR20050083635A (ko) | 2002-08-16 | 2005-08-26 | 와이어쓰 | Bmp-2 에스트로겐 반응 요소 및 이의 사용 방법 |
US7261893B2 (en) * | 2002-10-22 | 2007-08-28 | Wyeth | Neutralizing antibodies against GDF-8 and uses therefor |
US20040223966A1 (en) | 2002-10-25 | 2004-11-11 | Wolfman Neil M. | ActRIIB fusion polypeptides and uses therefor |
AU2002953327A0 (en) | 2002-12-12 | 2003-01-09 | Monash University | Methods of diagnosing prognosing and treating activin associated diseases and conditions |
ES2255467T3 (es) | 2003-02-07 | 2009-05-01 | Prometic Biosciences Inc. | Acidos grasos de cadena de longitud media, gliceridos y analogos como estimuladores de eritropoyesis. |
US20040197828A1 (en) * | 2003-03-26 | 2004-10-07 | Gaddy Dana P. | Method for diagnosis and treatment of bone turnover |
US20070184052A1 (en) * | 2003-05-09 | 2007-08-09 | Lin Herbert Y | Soluble tgf-b type III receptor fusion proteins |
RU2322261C2 (ru) | 2003-06-02 | 2008-04-20 | Уайт | Применение ингибиторов миостатика (gdf8) в сочетании с кортикостероидами для лечения нервно-мышечных заболеваний |
EP1636270B1 (en) | 2003-06-16 | 2016-07-20 | UCB Pharma S.A. | Antibodies specific for sclerostin and methods for increasing bone mineralization |
WO2005009460A2 (en) | 2003-07-25 | 2005-02-03 | Medexis, S.A. | Pharmaceutical composition comprising activin a, alk-4 or derivatives thereof for the treatment of ophthalmic disorders or cancer |
US8895540B2 (en) | 2003-11-26 | 2014-11-25 | DePuy Synthes Products, LLC | Local intraosseous administration of bone forming agents and anti-resorptive agents, and devices therefor |
AU2005206277B2 (en) | 2004-01-22 | 2011-06-23 | Merck Patent Gmbh | Anti-cancer antibodies with reduced complement fixation |
US20050197292A1 (en) * | 2004-01-30 | 2005-09-08 | Glennda Smithson | Compositions and methods for treating T-cell mediated pathological conditions |
EP1730186A2 (en) | 2004-03-31 | 2006-12-13 | Xencor, Inc. | Bmp-7 variants with improved properties |
WO2005113590A2 (en) | 2004-05-12 | 2005-12-01 | Acceleron Pharma Inc. | Bmp10 propeptides and related methods |
EP1755648A2 (en) * | 2004-05-27 | 2007-02-28 | Acceleron Pharma Inc. | Cerberus/coco derivatives and uses thereof |
CA2572330A1 (en) | 2004-06-24 | 2006-01-05 | Acceleron Pharma Inc. | Gdf3 propeptides and related methods |
US8617815B2 (en) | 2004-08-05 | 2013-12-31 | The Regents Of The University Of California | Molecules with effects on cellular development and function |
EP1778275A2 (en) | 2004-08-12 | 2007-05-02 | Wyeth | Combination therapy for diabetes, obesity, and cardiovascular diseases using gdf-8 inhibitors |
EP1804824B1 (en) | 2004-09-29 | 2017-01-04 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | Fsh and fsh receptor modulator compositions and methods for inhibiting osteoclastic bone resorption and bone loss in osteoporosis |
US7358361B2 (en) * | 2004-10-08 | 2008-04-15 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Biophosphonate compounds and methods for bone resorption diseases, cancer, bone pain, immune disorders, and infectious diseases |
CA2587424A1 (en) | 2004-11-16 | 2006-05-26 | Avidia Research Institute | Protein scaffolds and uses thereof |
NZ538097A (en) | 2005-02-07 | 2006-07-28 | Ovita Ltd | Method and compositions for improving wound healing |
WO2006088972A2 (en) | 2005-02-16 | 2006-08-24 | The General Hospital Corporation | Use of modulatirs of compounds of tgf-beta superfamily to regulate hepcidin-mediated iron metabolism |
US20060213667A1 (en) * | 2005-03-28 | 2006-09-28 | Mashburn Benny D | Screen apparatus and method |
WO2006115274A1 (ja) | 2005-04-26 | 2006-11-02 | Ajinomoto Co., Inc. | 骨髄赤血球前駆細胞分化促進剤 |
CA2618482C (en) | 2005-08-19 | 2014-10-07 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobin and uses thereof |
JP2007099764A (ja) | 2005-09-09 | 2007-04-19 | Ajinomoto Co Inc | 血糖低下剤 |
EP1931697B1 (en) | 2005-09-28 | 2010-09-15 | ZymoGenetics, Inc. | Il-17a and il-17f antagonists and methods of using the same |
US8067562B2 (en) | 2005-11-01 | 2011-11-29 | Amgen Inc. | Isolated nucleic acid molecule comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 |
US8128933B2 (en) | 2005-11-23 | 2012-03-06 | Acceleron Pharma, Inc. | Method of promoting bone growth by an anti-activin B antibody |
CA2632544C (en) | 2005-12-06 | 2014-09-23 | Amgen Inc. | Use of myostatin antagonist for treating the effects of hypogonadism |
EP1966183A4 (en) | 2005-12-20 | 2010-12-29 | Merck Frosst Canada Ltd | HETEROAROMATIC COMPOUNDS AS INHIBITORS OF STEAROYL-COENZYME A-DELTA-9-DESATURASE |
CA2634940A1 (en) | 2005-12-21 | 2007-07-05 | Schering Corporation | Treatment of nonalcoholic fatty liver disease using cholesterol lowering agents and h3 receptor antagonist/inverse agonist |
WO2007076127A2 (en) | 2005-12-22 | 2007-07-05 | Biogen Idec Ma Inc | Condensed imidazoles or pyrazoles and their use as transforming growth factor modulators |
EP2016423B1 (en) * | 2006-01-20 | 2011-07-13 | Beckman Coulter, Inc. | Methods of detection of iron deficiency |
US7820721B2 (en) | 2006-01-25 | 2010-10-26 | Wellstat Therapeutics Corporation | Compounds for the treatment of metabolic disorders |
WO2007101060A2 (en) | 2006-02-28 | 2007-09-07 | Wellstat Therapeutics Corporation | Compounds for the treatment of metabolic disorders |
WO2007120767A2 (en) * | 2006-04-14 | 2007-10-25 | Amgen Inc. | Agonist erythropoietin receptor antibodies |
WO2007123391A1 (en) | 2006-04-20 | 2007-11-01 | Academisch Ziekenhuis Leiden | Therapeutic intervention in a genetic disease in an individual by modifying expression of an aberrantly expressed gene. |
CA2652235A1 (en) * | 2006-05-09 | 2007-11-22 | Hemaquest Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating blood disorders |
CN104095838A (zh) * | 2006-07-21 | 2014-10-15 | 莱因实验室公司 | 醋酸钙的液体组合物 |
GB0615129D0 (en) | 2006-07-29 | 2006-09-06 | Univ Cardiff | Anti-cancer activity of BMP-9 and BMP-10 and their use in cancer therapies |
CL2007002567A1 (es) | 2006-09-08 | 2008-02-01 | Amgen Inc | Proteinas aisladas de enlace a activina a humana. |
US7547781B2 (en) * | 2006-09-11 | 2009-06-16 | Curis, Inc. | Quinazoline based EGFR inhibitors containing a zinc binding moiety |
WO2008060139A1 (en) | 2006-11-17 | 2008-05-22 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Methods for controlling mineralization of extracellular matrix, therapeutic methods based thereon and medicaments for use therein |
US20100003190A1 (en) | 2006-12-08 | 2010-01-07 | Caritas St. Elizabeth's Medical Center Of Boston, Inc. | Method for protecting renal tubular epithelial cells from radiocontrast nephropathy (RCN) |
EP2103628A4 (en) | 2006-12-14 | 2012-02-22 | Forerunner Pharma Res Co Ltd | MONOCLONAL ANTIBODY ANTI-CLAUDIN 3, AND TREATMENT AND DIAGNOSIS OF CANCER USING SUCH ANTIBODY |
CN104524548A (zh) | 2006-12-18 | 2015-04-22 | 阿塞勒隆制药公司 | 活化素-actrii拮抗剂及在提高红细胞水平中的用途 |
US20100028332A1 (en) | 2006-12-18 | 2010-02-04 | Acceleron Pharma Inc. | Antagonists of actriib and uses for increasing red blood cell levels |
US8895016B2 (en) | 2006-12-18 | 2014-11-25 | Acceleron Pharma, Inc. | Antagonists of activin-actriia and uses for increasing red blood cell levels |
CN103920139B (zh) | 2007-02-01 | 2018-02-02 | 阿塞勒隆制药公司 | 活化素‑actriia拮抗剂及在治疗或预防乳腺癌中的用途 |
TWI782836B (zh) * | 2007-02-02 | 2022-11-01 | 美商艾瑟勒朗法瑪公司 | 衍生自ActRIIB的變體與其用途 |
TWI459963B (zh) | 2007-02-09 | 2014-11-11 | Acceleron Pharma Inc | 包含ActRIIa-Fc融合蛋白的醫藥組合物;ActRIIa-Fc融合蛋白於治療或預防與癌症相關的骨質流失之用途;ActRIIa-Fc融合蛋白於治療或預防多發性骨髓瘤之用途 |
TW201718635A (zh) | 2007-03-06 | 2017-06-01 | 安美基公司 | 變異之活動素受體多肽及其用途 |
US8501678B2 (en) | 2007-03-06 | 2013-08-06 | Atara Biotherapeutics, Inc. | Variant activin receptor polypeptides and uses thereof |
EP2150560A1 (en) | 2007-06-01 | 2010-02-10 | Wyeth | Methods and compositions for modulating bmp-10 activity |
WO2009009059A1 (en) | 2007-07-09 | 2009-01-15 | Biogen Idec Ma Inc. | Spiro compounds as antagonists of tgf-beta |
GB0715087D0 (en) | 2007-08-03 | 2007-09-12 | Summit Corp Plc | Drug combinations for the treatment of duchenne muscular dystrophy |
JP2010535708A (ja) | 2007-08-03 | 2010-11-25 | ビオマリン アイジーエー リミテッド | デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療のための薬物併用 |
GB0715938D0 (en) | 2007-08-15 | 2007-09-26 | Vastox Plc | Method of treatment of duchenne muscular dystrophy |
WO2009025651A1 (en) | 2007-08-17 | 2009-02-26 | University Of Maine System Board Of Trustees | Biologically active peptide and method of using the same |
US20100279409A1 (en) | 2007-09-13 | 2010-11-04 | Neil Robson | Method for modifying celluar immune resonse by modulating activin activity |
CN107412734A (zh) | 2007-09-18 | 2017-12-01 | 阿塞勒隆制药公司 | 活化素‑actriia拮抗剂和减少或抑制fsh分泌的用途 |
PE20091163A1 (es) * | 2007-11-01 | 2009-08-09 | Wyeth Corp | Anticuerpos para gdf8 |
KR20100099193A (ko) | 2007-11-21 | 2010-09-10 | 암젠 인크 | Wise 결합 항체 및 에피토프 |
CA2718403A1 (en) | 2008-03-13 | 2009-09-17 | The General Hospital Corporation | Inhibitors of the bmp signaling pathway |
FR2930460B1 (fr) * | 2008-04-25 | 2010-05-28 | Valois Sas | Distributeur de fragrance. |
US20110104133A1 (en) | 2008-05-06 | 2011-05-05 | Joslin Diabetes Center, Inc. | Methods and compositions for inducing brown adipogenesis |
WO2009137075A1 (en) | 2008-05-06 | 2009-11-12 | Acceleron Pharma Inc. | Anti-activin antibodies and uses for promoting bone growth |
KR20190128002A (ko) | 2008-06-26 | 2019-11-13 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | 액티빈-actriia 길항물질을 투약하는 방법 및 치료된 환자의 모니터링 |
KR20190049912A (ko) | 2008-06-26 | 2019-05-09 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | 액티빈-actriia의 길항물질 및 적혈구 수준을 증가시키기 위한 이들의 용도 |
TWI626945B (zh) * | 2008-08-14 | 2018-06-21 | 艾瑟勒朗法瑪公司 | 使用gdf阱以增加紅血球水平 |
US8216997B2 (en) | 2008-08-14 | 2012-07-10 | Acceleron Pharma, Inc. | Methods for increasing red blood cell levels and treating anemia using a combination of GDF traps and erythropoietin receptor activators |
WO2010059861A1 (en) | 2008-11-20 | 2010-05-27 | University Of Southern California | Compositions and methods to modulate hair growth |
NZ627111A (en) | 2008-11-26 | 2015-10-30 | Amgen Inc | Variants of activin iib receptor polypeptides and uses thereof |
AU2010204985A1 (en) | 2009-01-13 | 2011-08-04 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for increasing adiponectin |
US8110355B2 (en) | 2009-02-20 | 2012-02-07 | GenRemedy, LLC | Methods for identifying agents that inhibit cell migration, promote cell adhesion and prevent metastasis |
DK2424895T3 (en) | 2009-04-27 | 2017-12-18 | Novartis Ag | Compositions and Methods for Increasing Muscle Growth |
EP2440576A4 (en) | 2009-06-08 | 2013-11-20 | Acceleron Pharma Inc | PROCESS FOR INCREASING THE NUMBER OF THERMOUS ADIPOCYTES |
KR20210034684A (ko) | 2009-06-12 | 2021-03-30 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | 절두된 ActRIIB-FC 융합 단백질 |
EP3838919A1 (en) | 2009-08-13 | 2021-06-23 | Acceleron Pharma Inc. | Combined use of gdf traps and erythropoietin receptor activators to increase red blood cell levels |
KR20120062874A (ko) | 2009-09-09 | 2012-06-14 | 악셀레론 파마 인코포레이티드 | ActRIIb 길항제들와 이의 투약 및 용도 |
US20110129469A1 (en) | 2009-11-03 | 2011-06-02 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for treating fatty liver disease |
EP2501400B1 (en) | 2009-11-17 | 2017-11-01 | Acceleron Pharma, Inc. | Actriib proteins and variants and uses therefore relating to utrophin induction for muscular dystrophy therapy |
WO2012027065A2 (en) | 2010-08-27 | 2012-03-01 | Celgene Corporation | Combination therapy for treatment of disease |
US8580922B2 (en) | 2011-03-04 | 2013-11-12 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Peptide linkers for polypeptide compositions and methods for using same |
EP2726099B1 (en) | 2011-07-01 | 2018-07-25 | Novartis AG | Method for treating metabolic disorders |
EA034563B1 (ru) | 2011-10-17 | 2020-02-20 | Акселерон Фарма Инк. | Способ лечения или предотвращения перегрузки железом у пациента с талассемией |
US8765385B2 (en) | 2011-10-27 | 2014-07-01 | Ravindra Kumar | Method of detection of neutralizing anti-actriib antibodies |
WO2013063536A1 (en) | 2011-10-27 | 2013-05-02 | Acceleron Pharma, Inc. | Actriib binding agents and uses thereof |
CN104023731A (zh) | 2011-10-28 | 2014-09-03 | 帕仁塔生物科技有限公司 | 治疗粘液分泌亢进的方法 |
MX358358B (es) | 2011-12-19 | 2018-08-15 | Amgen Inc | Polipeptidos de receptores de activina variantes y sus usos. |
US10501512B2 (en) | 2012-04-02 | 2019-12-10 | Modernatx, Inc. | Modified polynucleotides |
US9663569B2 (en) | 2012-06-14 | 2017-05-30 | The Medical Research, Infrastructure, And Health Services Fund Of The Tel Aviv Medical Center | Use of blocking agents of bone morphogenic protein (BMP) signalling for the treatment of neuroinflammatory and neurodegenerative diseases |
JP6298762B2 (ja) | 2012-07-02 | 2018-03-20 | 協和発酵キリン株式会社 | 抗bmp9抗体を有効成分とする、腎性貧血、がん性貧血などの貧血に対する治療剤 |
CN112933223A (zh) | 2012-10-24 | 2021-06-11 | 细胞基因公司 | 用于治疗贫血的方法 |
CN113604550A (zh) | 2012-10-24 | 2021-11-05 | 细胞基因公司 | 用于治疗贫血症的生物标志物 |
WO2014064292A1 (en) | 2012-10-26 | 2014-05-01 | Universite Pierre Et Marie Curie (Paris 6) | A method for preventing or treating atrial fibrillation |
KR102279522B1 (ko) | 2012-11-02 | 2021-07-19 | 셀진 코포레이션 | 골 및 다른 장애를 치료하기 위한 액티빈-actrii 길항제 및 용도 |
MX2015005839A (es) | 2012-11-08 | 2015-12-17 | Clearside Biomedical Inc | Metodos y dispositivos para el tratamiento de trastornos oculares en sujetos humanos. |
WO2014093531A1 (en) | 2012-12-11 | 2014-06-19 | Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center | Modulation of myofiber repair by anti-myostatin in strategies with stem cells |
US20140220033A1 (en) | 2013-02-01 | 2014-08-07 | Santa Maria Biotherapeutics, Inc. | Administration of an Anti-Activin-A Compound to a Subject |
US20160184458A1 (en) | 2013-03-14 | 2016-06-30 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Mrna therapeutic compositions and use to treat diseases and disorders |
TW201920262A (zh) | 2013-07-30 | 2019-06-01 | 美商再生元醫藥公司 | 抗活化素a之抗體及其用途 |
SG11201600212VA (en) | 2013-08-14 | 2016-02-26 | Novartis Ag | Methods of treating sporadic inclusion body myositis |
JP2017505428A (ja) | 2013-12-16 | 2017-02-16 | パランタ バイオサイエンス リミテッド | 診断及び治療の方法 |
EP3094751A4 (en) | 2014-01-14 | 2017-06-07 | Santa Maria Biotherapeutics, Inc. | Activin inhibitor response prediction and uses for treatment |
CN105992951A (zh) | 2014-01-27 | 2016-10-05 | 诺华股份有限公司 | 预测肌萎缩的生物标志物、方法和用途 |
JP6601687B2 (ja) | 2014-03-31 | 2019-11-06 | 大日本住友製薬株式会社 | 進行性骨化性線維異形成症の予防剤及び治療剤 |
ES2845650T3 (es) | 2014-04-18 | 2021-07-27 | Acceleron Pharma Inc | Procedimientos para aumentar los niveles de glóbulos rojos y tratar la drepanocitosis |
TW201622746A (zh) | 2014-04-24 | 2016-07-01 | 諾華公司 | 改善或加速髖部骨折術後身體復原之方法 |
MX2016016281A (es) | 2014-06-13 | 2017-03-31 | Santa Maria Biotherapeutics Inc | Polipeptidos receptores formulados y metodos relacionados. |
-
2008
- 2008-02-01 TW TW097103895A patent/TWI459963B/zh active
- 2008-02-01 WO PCT/US2008/001354 patent/WO2008100384A2/en active Application Filing
- 2008-02-01 CA CA2913992A patent/CA2913992C/en active Active
- 2008-02-01 ME MEP-2016-80A patent/ME02333B/me unknown
- 2008-02-01 EP EP08725055A patent/EP2120999B1/en active Active
- 2008-02-01 KR KR1020097017745A patent/KR101670417B1/ko active IP Right Grant
- 2008-02-01 CA CA2677605A patent/CA2677605C/en active Active
- 2008-02-01 RS RS20120504A patent/RS52535B/en unknown
- 2008-02-01 EP EP11195151.3A patent/EP2481415B1/en active Active
- 2008-02-01 KR KR1020207012421A patent/KR20200054317A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-02-01 ES ES11195151T patent/ES2756725T3/es active Active
- 2008-02-01 TW TW108115081A patent/TW201934141A/zh unknown
- 2008-02-01 CN CN201410709284.1A patent/CN104548056B/zh active Active
- 2008-02-01 EA EA200970747A patent/EA018221B1/ru unknown
- 2008-02-01 JP JP2009549079A patent/JP5574711B2/ja active Active
- 2008-02-01 KR KR1020167029980A patent/KR20160129095A/ko active Search and Examination
- 2008-02-01 SI SI200830820T patent/SI2120999T1/sl unknown
- 2008-02-01 TW TW110125911A patent/TW202140531A/zh unknown
- 2008-02-01 KR KR1020157026929A patent/KR101672156B1/ko active IP Right Grant
- 2008-02-01 BR BRPI0807506-9A patent/BRPI0807506B1/pt active IP Right Grant
- 2008-02-01 KR KR1020187020332A patent/KR20180083967A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-02-01 TR TR2009/06329T patent/TR200906329T1/xx unknown
- 2008-02-01 US US12/012,525 patent/US8173601B2/en active Active
- 2008-02-01 KR KR1020197006082A patent/KR20190026047A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-02-01 AU AU2008216896A patent/AU2008216896B2/en active Active
- 2008-02-01 KR KR1020217019387A patent/KR20210082540A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-02-01 CN CN201410320444.3A patent/CN104189889A/zh active Pending
- 2008-02-01 TW TW107140000A patent/TWI667038B/zh active
- 2008-02-01 TW TW104142473A patent/TWI606062B/zh active
- 2008-02-01 PT PT87250551T patent/PT2120999E/pt unknown
- 2008-02-01 EA EA201690994A patent/EA201690994A1/ru unknown
- 2008-02-01 TW TW106129542A patent/TW201808334A/zh unknown
- 2008-02-01 EA EA201300116A patent/EA025371B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-02-01 PL PL08725055T patent/PL2120999T3/pl unknown
- 2008-02-01 EP EP11195134A patent/EP2484372A1/en not_active Withdrawn
- 2008-02-01 ES ES08725055T patent/ES2394123T3/es active Active
- 2008-02-01 CN CN200880011454.1A patent/CN101687016B/zh active Active
- 2008-02-01 DK DK08725055.1T patent/DK2120999T3/da active
- 2008-02-01 CA CA3039330A patent/CA3039330C/en active Active
- 2008-02-01 TW TW103133719A patent/TWI525102B/zh active
- 2008-02-01 MX MX2009008510A patent/MX2009008510A/es active IP Right Grant
- 2008-02-01 MX MX2014001010A patent/MX368173B/es unknown
- 2008-02-08 AR ARP080100573A patent/AR065289A1/es active IP Right Grant
-
2009
- 2009-08-05 IL IL200242A patent/IL200242B/en active IP Right Grant
-
2010
- 2010-05-25 HK HK10105092.4A patent/HK1137366A1/xx unknown
-
2012
- 2012-04-30 US US13/460,342 patent/US9572865B2/en active Active
- 2012-11-12 CY CY20121101076T patent/CY1113963T1/el unknown
- 2012-11-20 HR HRP20120947AT patent/HRP20120947T1/hr unknown
-
2013
- 2013-06-20 JP JP2013129708A patent/JP2013224317A/ja active Pending
-
2015
- 2015-01-28 JP JP2015013814A patent/JP6132861B2/ja active Active
-
2016
- 2016-11-25 JP JP2016228798A patent/JP2017071624A/ja active Pending
-
2017
- 2017-01-11 US US15/403,987 patent/US20170190784A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-03-04 IL IL257848A patent/IL257848B/en active IP Right Grant
- 2018-07-19 JP JP2018135446A patent/JP2018162312A/ja active Pending
-
2020
- 2020-07-22 JP JP2020125207A patent/JP2020176139A/ja active Pending
- 2020-10-15 US US17/071,791 patent/US20210261682A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-03-22 IL IL281715A patent/IL281715A/en unknown
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005094871A2 (en) * | 2004-03-26 | 2005-10-13 | Acceleron Pharma Inc. | Bmp-3 propeptides and related methods |
WO2006012627A2 (en) * | 2004-07-23 | 2006-02-02 | Acceleron Pharma Inc. | Actrii receptor polypeptides, methods and compositions |
US20060068468A1 (en) * | 2004-07-23 | 2006-03-30 | Acceleron Pharma Inc. | ActRII receptor polypeptides, methods and compositions |
WO2007062188A2 (en) * | 2005-11-23 | 2007-05-31 | Acceleron Pharma Inc. | Activin-actriia antagonists and uses for promoting bone growth |
US20070249022A1 (en) * | 2005-11-23 | 2007-10-25 | John Knopf | Activin-ActRIIa antagonists and uses for promoting bone growth |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
SAKAI ET AL.: "Activin release from bone coupled to bone resorption in organ culture of neonatal mouse calvaria". BONE, vol. 26, no. 3, 2000, pages 235-240, XP009105409, the whole document * |
SAKAI R. ET AL.: "Activin increases bone mass and mechanical strength of lumbar vertebrae in aged ovariectomized rats". BONE, PERGAMON PRESS., OXFORD, GB, vol. 27, no. 1, 1 July, 2000 (2000-07-01), pages 91-96, XP002294252, ISSN: 8756-3282, the whole document * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA018221B1 (ru) | АНТАГОНИСТЫ АКТИВИНА-ActRIIa И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА КОСТИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ | |
JP6195885B2 (ja) | アクチビン−ActRIIaアンタゴニストおよび骨成長を促進するための使用 | |
JP2021036916A (ja) | Bmp−alk3アンタゴニストおよび骨成長促進のためのその使用 | |
JP2009517051A5 (ru) | ||
WO2009137075A1 (en) | Anti-activin antibodies and uses for promoting bone growth | |
AU2019222887A1 (en) | Activin-ActRIIa antagonists and uses for promoting bone growth | |
EA042183B1 (ru) | АНТАГОНИСТЫ АКТИВИНА-ActRIIa И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА КОСТИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ | |
AU2013204959A1 (en) | Activin-actriia antagonists and uses for promoting bone growth in cancer patients |