EA012453B1

EA012453B1 - Реверсивные (обратные) мицеллы на основе фитостеролов и ацилглицеролов и их терапевтическое использование

Info

Publication number: EA012453B1
Application number: EA200700993A
Authority: EA
Inventors: Жан-Клод Морель
Original assignee: Медзис Фарма Са
Priority date: 2004-11-02
Filing date: 2005-11-02
Publication date: 2009-10-30
Also published as: CA2584980A1; AU2005300252A1; DE602005027231D1; CN101102747B; PL1807046T3; PT1807046E; EP1652513A1; US8637314B2; CN101102747A; ATE503458T1; IL182747A0; EA200700993A1; WO2006048772A2; WO2006048772A3; IL182747A; JP2008519025A; US20090087406A1; AU2005300252B2; CA2584980C; JP4954079B2

Abstract

Настоящее изобретение относится в целом к реверсивно-мицеллярной системе, содержащей водорастворимое терапевтически активное вещество. Реверсивные мицеллы согласно изобретению используются, в частности, для доставки лекарств. Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей указанные мицеллы, и способам получения вышеупомянутых.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится в целом к реверсивно-мицеллярной системе, содержащей водорастворимое терапевтически активное вещество. Реверсивные мицеллы согласно изобретению, в частности, пригодны для доставки лекарств. Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей указанные реверсивные мицеллы, и способам получения вышеупомянутых лекарств.

Уровень техники

На протяжении последних лет предлагались различные подходы для улучшения доставки лекарств в места-мишени. Во-первых, лекарство должно вводиться подходящим и удобным путем, таким как, например, пероральный или ректальный пути, и, во-вторых, активный ингредиент должен быть доставлен в клетки-мишени в активной форме. Некоторые препараты, в частности белки и пептиды, плохо абсорбируются и являются нестабильными во время прохождения по гастроинтестинальному (желудочнокишечному) тракту (ЖКТ). До настоящего времени сделано много попыток для того, чтобы улучшить доставку, в частности, через пероральный путь полипептидов и пептидов, например, таких как инсулин (для лечения диабета), интерферонов (для лечения гепатитов), цитокинов (для лечения рака) и т.д. Однако в настоящее время применение этих препаратов осуществляется через парентеральные инъекции. В наши дни 40% новых лекарственных препаратов может применяться только через парентеральную инъекцию.

Несмотря на свойственные проблемы, возникающие при попытке введения белков и пептидов перорально, были предложены различные подходы для улучшения пероральной абсорбции. Вполне убедительные (внушающие доверие) стратегии включают химическую модификацию для стабилизации препарата и/или приведение его в более жирорастворимое состояние и, следовательно, улучшение возможности его диффузии через липидную мембрану или ЖКТ. Одни исследователи добавляют стабилизирующие вещества, такие как ингибиторы пептидазы (например, апротинин), для того, чтобы уменьшить метаболическую потерю, тогда как другие используют различные вещества, способствующие абсорбции, в виде неионных поверхностно активных агентов, соли желчи и их аналоги, фосфолипиды, хелатирующие агенты или ацилкарнитин. Многочисленные патенты и публикации описывают также способы для инкапсулирования активных ингредиентов в нано- и микрочастицы. Но до сих пор ни одна из разработанных систем доставки не является полностью удовлетворительной, в частности для инсулина. Например, открытые до сих пор системы доставки обеспечивают только от 2 до 5% абсорбции инсулина.

Субъектов (людей), страдающих от диабета 1 или 2 типа, часто лечат инсулином. Несмотря на то что инъекционные препараты и устройства совершенствуются и становятся менее инвазивными (например, перьевые устройства), инъекции все еще представляют собой неудобство и остаются очень непопулярными. Неинъекционные разработки будут представлять огромные преимущества. Кроме того, являясь более удобными для пациента, такие разработки обеспечивают согласие пациентов, приводя к лучшему лечению и уменьшению связанных с диабетом осложнений.

Изобретатели ранее обнаружили, что перемешивание двух типов липидов с некоторыми солями металлов позволяет увеличить биодоступность металла и, следовательно, получить ту же самую терапевтическую активность с уменьшенными в 1000-5000 раз; потенциальная токсичность указанных солей металла может быть затем уменьшена [см., например, И8 6129924, \УО 02/36134 и \УО 2004/075990].

Задачей настоящего изобретения является преодоление неудобств предшествующего уровня техники. Более конкретно задачей изобретения является обеспечение системы доставки препарата, содержащего активный ингредиент, который может применяться перорально и давать удовлетворительную биодоступность препарата.

Раскрытие изобретения

Настоящее изобретение относится к трансмембранной транспортной системе доставки представляющего интерес терапевтического вещества, а также композиций и способам получения системы доставки. Более конкретно, настоящее изобретение обеспечивает реверсивно-мицеллярную транспортную систему для распределения (распространения) представляющего интерес препарата. Более точно, реверсивные мицеллы согласно изобретению способствуют абсорбции биологически активных молекул через эпителиальные барьеры слизистой оболочки и позволяют активным ингредиентам усваиваться клеткамимишенями. Более конкретно, реверсивные мицеллы изобретения содержат по меньшей мере один водорастворимый терапевтически активный ингредиент, фитостерол, ацилглицерол и воду.

Более конкретно, настоящее изобретение относится к реверсивным мицеллам с водным ядром (центром), меньшим или равным 100 нм.

Реверсивные мицеллы могут быть получены согласно особому методу с применением фитостеролов и ацилглицеролов.

Более детально, указанные мицеллы получаются посредством следующего метода:

(а) контактирование (ί) фитостерола, (и) ацилглицерола, предпочтительно диацилглицерола жирных кислот, (ίίί) воды, в частности очищенной воды, и (ίν) по меньшей мере одного водорастворимого терапевтически активного ингредиента;

- 1 012453 (Ь) перемешивание смеси, полученной на стадии (а), при 40°С или менее и в течение времени, достаточного для формирования реверсивных мицелл, причем указанное перемешивание выполняется механически на скорости от приблизительно 1000 до приблизительно 5000 об/мин или с помощью ультразвука.

Более того, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей реверсивные мицеллы изобретения и фармацевтически приемлемый переносчик, эксципиент или подложку.

Осуществление изобретения

Следующее описание представляет собой предпочтительное воплощение изобретения в виде некоторых примеров, которые не предназначены для ограничения других комбинаций характерных черт (особенностей), необходимых для осуществления изобретения.

Реверсивные мицеллы.

Реверсивная мицеллярная система согласно изобретению характеризуется как микроэмульсия, содержащая дисперсию микрокапелек воды-в-масле. Дисперсия стабилизируется сурфактантом (поверхностно-активным веществом) (ацилглицерол, более предпочтительно диглицерол жирных кислот) на границе раздела вода/масло. Реверсивная мицеллярная фаза может быть определена как система, в которой вода образует (формирует) дисперсную фазу, а гидрофобные хвосты липидов формируют непрерывную фазу. Реверсивные мицеллы, содержащие масло(а), сурфактант(ы) и водную фазу, также характеризуются как микроэмульсии вода-в-масле.

Размер мицелл, по-видимому, изменяется линейным образом с весовым коэффициентом В (вода)/(сурфактант) (растворенная вода в смеси/сурфактант в смеси). Как отмечено выше, относительный вес воды в смеси (В) предпочтительно ниже или равен 2,5 и предпочтительно ниже или равен 1 количества ацилглицерола, предпочтительно диглицерида жирных кислот. Более точно, В составляет от 0,01 до 0,2. Согласно отдельному осуществлению отношение В составляет предпочтительно от 0,05 до 0,18.

Реверсивные мицеллы, например размер их ядра, могут быть охарактеризованы различными методами:

рассеиванием рентгеновских лучей;

рассеиванием нейтронов; просвечивающей (трансмиссионной) электронной микроскопией (ПЭМ); динамическим рассеиванием света (ДРС).

Отношения липидных компонентов (фитостеролов и ацилглицерола) в реверсивно-мицеллярной системе согласно изобретению могут варьировать в больших пределах, например весовое отношение фитостерол/ацилглицерол может колебаться от 0,01 до 1 (включительно). Согласно отдельному осуществлению может применяться избыток ацилглицерола (предпочтительно диглицерид жирных кислот) по сравнению с фитостеролом (предпочтительно ситостерол). Более детально, весовое отношение фитостерол/ацилглицерол больше или равно 0,1, более предпочтительно от 0,1 до 0,2.

Соединения (состав) реверсивно мицеллярной системы можно проанализировать соответствующим способом. Более конкретно, фитостерол можно определить (идентифицировать) газовохроматографическим анализом, а ацилглицерол - высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), в частности, с помощью детектора светового рассеивания, на кварцевых колонках (кромасил С18), в присутствии элюента, например изократического ацетонитрила. Для определения диацилглицеридов можно также использовать газовую хроматографию.

Реверсивные мицеллы и динамические системы.

Броуновское движение вызывает постоянные столкновения мицелл, которые приводят к слиянию мицелл и обмену водных ядер. Происходит восстановление и обновление мицелл, что допускает прохождение химических реакций между различными растворами. Скорость обмена между мицеллами увеличивается в особенности с температурой, длиной углеводородных цепей сурфактанта и отношением В (свободная вода увеличивает упомянутый обмен). В контексте изобретения и в противоположность (вопреки) тому, что ожидается в нанотехнологии, водное ядро мицелл должно иметь особый (характерный) размер, позволяющий одной или более молекулам терапевтически активного ингредиента, введенного при получении мицелл, быть стабильными в нем. Размер водного ядра предпочтительно меньше или равен приблизительно 100 нм и предпочтительно больше или равен 5 нм. Отношение В, как определено выше, предпочтительно меньше или равно приблизительно 2,5.

Исследование (анализ) продукта рассеиванием рентгеновских лучей, как описано в примере 1, обнаруживает реверсивные мицеллы в микроэмульсии.

Основным преимуществом настоящего изобретения над предшествующим уровнем техники является применение фитостерола, более предпочтительно ситостерола для получения реверсивных мицелл. Соответственно, изобретение обеспечивает абсорбцию соединений для доставки через слизистую оболочку, предпочтительно через слизистую оболочку рта и ректальную слизистую оболочку, более предпочтительно через слизистую оболочку рта. Также реверсивные мицеллы настоящего изобретения обеспечивают существенную биодоступность с низкой изменчивостью абсорбции. Другой полезный аспект реверсивных мицелл настоящего изобретения состоит в том, что они могут быть получены с переменными (меняющимися) размерами, для того чтобы приспосабливать их к включенным в них активным ингредиентам.

- 2 012453

Способ получения реверсивных мицелл.

В отдельном осуществлении изобретение относится к способу получения реверсивных мицелл, содержащих водное ядро, меньшее или равное 100 нм, и включающих (содержащих) по меньшей мере один водорастворимый терапевтически активный ингредиент, фитостерол, ацилглицерол и воду, где указанный способ содержит следующие стадии:

(a) контактирование (1) фитостерола, (п) ацилглицерола, предпочтительно диацилглицерола жирных кислот, (ш) воды, в частности очищенной воды, и (ίν) по меньшей мере одного водорастворимого терапевтически активного ингредиента, где отношение В = [вода]/[ацилглицерол] предпочтительно меньше или равно около 2,5;

(b) перемешивание смеси, полученной на стадии (а), при 40°С или менее и в течение времени, достаточного для формирования реверсивных мицелл, причем указанное перемешивание выполняется механически на скорости от около 1000 до около 5000 об/мин или с помощью ультразвука.

Полученные и выделенные реверсивные мицеллы являются затем особенно полезными (пригодными) в качестве системы доставки препарата. Стадия (Ь) процесса имеет особое значение, поскольку она позволяет получить реверсивные мицеллы, которые затем используются в качестве транспортной системы для доставки лекарства в целевое место.

Соединения, использованные на стадии (а), будут описаны ниже более детально.

Более детально перемешивание смеси, полученной на стадии (а), выполняется при температуре, меньшей или равной 40°С, предпочтительно в пределах от 30 до 38°С, более предпочтительно от 30 до 35°С в течение времени, достаточного для формирования реверсивных мицелл. Достаточное (необходимое) время может изменяться в особенности в зависимости от используемой техники перемешивания, т.е. механического перемешивания или перемешивания с помощью ультразвука. Время механического перемешивания или обработки ультразвуком является так или иначе временем, необходимым для того, чтобы превратить исходную смесь в монофазный реверсивный мицеллярный раствор.

В конкретном осуществлении терапевтически активный ингредиент первым растворяется в воде (предпочтительно в очищенной воде), которая затем контактирует с другими компонентами (стадия (а)).

Специалисты в данной области техники знают, как выбрать эксципиенты или компоненты для использования наряду (вместе) с составом согласно настоящему изобретению, для того чтобы сохранить их полезные свойства. В частности, присутствие глицерола может, при введении в большом количестве, предотвращать формирование реверсивных мицелл или разрушать реверсивную мицеллярную систему. Предпочтительно не больше чем 1% и предпочтительно не больше глицерола (процент выражается как вес глицерола/общее количество воды композиции) используется для приготовления реверсивных мицелл настоящего изобретения.

Обработка ультразвуком.

Ультразвуковая обработка приводит к акустической кавитации в жидкостях, т.е. образованию в жидкости пузырьков. Ультразвук производит гомогенное перемешивание во всех частях реакционной камеры и вызывает небольшую турбулентность в жидкости. Это наиболее надежный и пригодный способ для получения наночастиц. Полученные микроэмульсии являются стабильными, в частности, благодаря ацилглицеролу (предпочтительно диглицериду жирных кислот), действующему как сурфактант.

Могут применяться различные типы ультразвуковых материалов в лабораторных или промышленных масштабах. Высокоинтенсивный ультразвуковой процесс является наиболее подходящим процессом. Для приготовления небольших количеств дают удовлетворительные результаты материалы 400 В или 600 В с ультразвуками при 20 кГц и являются, таким образом, предпочтительными. С таким типом устройств также возможен электронный контроль температуры и эмиссионной продолжительности процесса. Существуют материалы такого же типа для промышленного применения.

Физические параметры, в частности время (3-5 мин, за один или больше раз), зависят от применяемого материала, объемов смеси и их вязкости. Специалист в данной области техники может легко определить такие параметры. Более конкретно, температура смеси не должна превышать 40°С, для того чтобы избежать деградации реагентов. Температура предпочтительно ниже чем около 38°С, даже более предпочтительно ниже чем около 35°С.

Механическое перемешивание.

Обычные материалы (вещества) используют (применяют) пропеллеры, быстрое движение которых вызывает турбулентности и водовороты, допускающие взаимное проникновение частиц и образование наночастиц в смеси. Скорость перемешивания находится предпочтительно в интервале от 1000 до 5000 об/мин. Осуществляемые объемы, устройства, скорость перемешивания и В отношение зависят и должны согласовываться (быть адаптированы) с терапевтической активностью ингредиента.

Как описано выше, температура смеси не должна превышать 40°С для того, чтобы избежать деградации реагентов. Температура является предпочтительно ниже чем приблизительно 38°С, даже более предпочтительно меньше чем приблизительно 35°С.

- 3 012453

Реверсивные мицеллярные соединения.

Ацилглицерол.

Ацилглицериды, более предпочтительно ацилглицериды жирных кислот, пригодные для приготовления реверсивно-мицеллярной системы согласно изобретению, могут быть выделены из большинства животных и более предпочтительно растений.

Ацилглицеролы включают моно-, ди- или триацилглицеролы. В отдельном осуществлении моно-, ди- или триглицериды, предпочтительно применяющиеся в настоящем изобретении, представлены следующей формулой (I):

СН₂ОК,

СНОКз <*₂О*з _(|) в которой В! - остаток ацила, линейной или разветвленной, насыщенной или ненасыщенной жирной кислоты, имеющей от 14 до 24 атомов углерода, атом водорода или моно-, ди- или три-галактоза или глюкоза;

В₂ - остаток ацила, линейной или разветвленной, насыщенной или ненасыщенной жирной кислоты, имеющей от 2 до 18 атомов углерода;

В₃ - остаток ацила, линейной или разветвленной, насыщенной или ненасыщенной жирной кислоты, имеющей от 14 до 24 атомов углерода, или атом водорода.

Согласно предпочтительному осуществлению по меньшей мере один из В₁ и В₃, предпочтительно только один, представляет собой ацильный остаток олеиновой кислоты (С18:1[цис]-9).

Согласно отдельному аспекту В₂ имеет одну ненасыщенную связь (например, этиленовую связь) и имеет преимущественно 18 атомов углерода, предпочтительно В₂ является остатком олеиновой кислоты (олеоиловая группа), одним из его позиционных изомеров, что касается двойной связи (цис-6,7,9,11 и 13), или одним из его изоразветвленных изомеров.

Согласно другому отдельному аспекту В1 представляет собой олеоиловую группу.

Согласно другому особому аспекту В2 представляет собой ацетиловую группу.

Согласно предпочтительному аспекту В3 представляет собой атом водорода.

В качестве источника ацилглицеролов преимущественно используются ненасыщенные растительные масла, особенно оливковое масло после первого холодного отжима.

В качестве основного правила масло, содержащее высокую концентрацию олеиновой кислоты, должно быть выбрано как пригодный источник ацилглицеролов согласно изобретению. Такое масло обычно содержит высокую долю ацилглицеролов, пригодных согласно изобретению.

Согласно отдельному аспекту изобретения предпочтительные диглицериды жирных кислот отобраны в группу, состоящую из 1,2-диолеин и 1-олеоил-2-ацетилглицерола.

Определенное число из них и более конкретно те, которые наиболее активно пользовались спросом в применении, также существуют коммерчески. Особенно это относится к 1-олеоил-2-ацетилглицеролу и 1,2-диолеилглицеролу, которые существуют как коммерческие продукты с высокой чистотой содержания. В особенности глицерид моноолеат, содержащий около 44% диолеиновых глицеридов, из которых около 14% составляет 1,2-диолеин. Такое соединение является фармацевтически приемлемым (Европейская фармакопея (4-й выпуск), И8Р 25/ΝΡ20, и Японский стандарт пищевых добавок). Такой продукт является коммерчески доступным, например, от СаНеГоззе Сотрапу под названием РЕСЕОЬ®.

Фитостеролы.

Стеролами, пригодными для приготовления реверсивно-мицеллярной системы согласно изобретению, являются фитостеролы (растительные стеролы). Ситостерол является предпочтительным фитостеролом, пригодным для реверсивно-мицеллярной системы согласно изобретению. Фитостерол имеет много преимуществ над холестеролом, фитостерол способен проникать через слизистую оболочку, в частности слизистую оболочку рта и ректальную слизистую оболочку. Следовательно, реверсивные мицеллы настоящего изобретения обеспечивают способ для того, чтобы обойти неудобный или неприятный парентеральный путь и в то же самое время предотвратить введение вещества через желудок, который является враждебной средой для многих веществ, включая белки. Соответственно, как средство доставки реверсивные мицеллы настоящего изобретения являются очень выгодными тем, что они допускают важную и гомогенную абсорбцию активного ингредиента, предназначенного для применения.

Ситостеролом, включенным в реверсивно-мицеллярную систему изобретения, может быть [бета]или [гамма]-ситостерол, предпочтительно [бета]-ситостерол, или он может быть включен в виде растительного экстракта, содержащего по меньшей мере одну из этих двух форм ситостерола.

В частности, возможно применение различных коммерческих продуктов. Более детально, может применяться коммерческий ситостерол, который экстрагируется из сои. В таком продукте ситостерол обычно составляет от 50 до 70% веса продукта и находится обычно в смеси с кампестеролом и ситоста

- 4 012453 нолом в соответствующей пропорции, примерно 15% каждый. Может также использоваться коммерческий ситостерол, который экстрагируется из ряда сосен, так называемое талловое масло. Вообще возможно применять ситостерол в смеси с ситостанолом. Предпочтительно упомянутая смесь содержит по меньшей мере 50% ситостерола от веса смеси.

Можно будет получить бета-ситостерол, имеющий чистоту выше, чем 95% или даже 99%, действуя следующим образом: выполнив несколько последовательных рекристаллизаций коммерческой смеси с ацетоном, которые дают предварительную очистку бета-ситостерола посредством элиминации кампестанола и ситостанола, присутствующего в смеси. Затем, подвергнув очищенный таким образом продукт от 1 до 3 стадий очистки посредством жидкостной хроматографии под высоким давлением на препаративной колонке С18 с применением элюирующих смесей, например метанола, в частности метанола 100%, или смеси метанола и ацетонитрила, в частности смесей 80-20 или любой промежуточной смеси, дающей возможность получить ситостерол с чистотой выше чем 95 или даже 99%. Чистота определяется с помощью газовой хроматографии.

Ситостерол и, таким образом, ситостанол можно также получить экстакцией из растений согласно методикам, описанным в литературе, например с. 95 тезисов, представленных в МоШрсШсг Клаудом Кердоном, озаглавленных «Мойи1а1юи йе 1а ргойисйои йе кародешиек Чего1йк.|иек еп героике а ПиЫЫйои йе 1а купФеке йе Меток».

Эта экстракция выполняется преимущественно посредством комплексообразования с металлами согласно методу, описанному, в частности, во Французском патенте РК 2 316 247, в котором описывается способ выделения 3-гидроксистероидов и 3-оксостероидов из смеси, содержащей данные соединения.

Для выполнения данной экстракции можно использовать любое растение или продукт растительного происхождения, известный своим относительно высоким содержанием ситостерола.

В качестве примера растений или продуктов растительной природы с относительно высоким содержанием свободного ситостерола можно упомянуть, в частности, оливковое масло, масло соевых бобов, листья хлопка, кофейные листья, пшеничные зародыши, для которых содержание свободного фитостерола и процент ситостерола во фракции свободного фитостерола приведены в таблице.

виды	содержание/кг	% от фракции фитостерола
оливковое масло	1310мг	91%
масло сои	1908 мг	53%
листья хлопка	3961 мг	93%
листья кофе	9914 мг	51%
пшеничные зародыши 17336 мг	67%
% выражается по весу.

Относительное содержание ситостанола не исследовалось. Также необходимо указать, что свободная фракция фитостерола содержит часть 24 К- и 24 8-изомеров, которые изменяются соответственно растению. Это количественное соотношение плохо известно, поскольку мало исследовано, если вообще исследовано.

Это количественное соотношение, так же как и относительное количество ситостанола, который не может быть отделен от ситостерола во время очистки, может объяснить относительно лучшую активность фракции фитостерола некоторых растений и, особенно, избыток ситостерола, необходимый для получения реверсивно-мицеллярной системы, описанной в изобретении.

Как отмечено выше, соотношения фитостерола и ацилглицерола могут изменяться в больших пределах, например весовое отношение фитостерол/ациллицерол может колебаться от 0,01 до 1 (включительно). Согласно отдельному осуществлению избыток ацилглицерола (предпочтительно диглицерида жирных кислот) может использоваться по сравнению с фитостеролом (предпочтительно ситостеролом). Более конкретно весовое отношение фитостерол/ацилглицерол больше или равно 0,1, более предпочтительно от 0,1 до 0,2.

Терапевтические активное соединение.

Любое водорастворимое терапевтическое средство может применяться в данном изобретении. Это включает, но не ограничивается, полипептиды, белки, полисахариды, нуклеиновые кислоты [ДНК или РНК (более предпочтительно иРНК) или их фрагменты] и водные фармацевтические композиции.

В настоящем изобретении наиболее предпочтительно применяются протеины, представляющие особый терапевтический интерес. Поскольку такие активные ингредиенты нестабильны в биологической среде, в частности они могут быть разрушены эндогенными ферментами, присутствующими в ЖКТ, обычно они вводятся инъекционным путем.

Веществами, представляющими интерес согласно изобретению, являются любые терапевтические белки или гликопротеины, например инсулин, эритропоэтин, лептин, ростовые факторы, рилизинггормоны ростового гормона, колониестимулирующие факторы, водорастворимые гормоны (паращитовидный гормон или его фракции или аналоги, лютеинизирующего гормона высвобождающий гормон

- 5 012453 (ЛГ-ВГ) или его аналоги (например, нафарелин, бусерелин, госерелин), полисахариды (например, гепарин), интерфероны, гепарин-подобные вещества и цитокины. Это включает также ДНК, РНК фрагменты или плазмиды, интерференционную РНК, иммуногенные и/или вакцинные агенты и т.д.

Такое вещество, внедренное в реверсивно-мицеллярную систему согласно изобретению, проникает через слизистую оболочку эпителиального барьера и проявляет таким образом свой терапевтический эффект в целевом месте.

Водорастворимый активный ингредиент более предпочтительно присутствует (находится) в водном ядре реверсивных мицелл.

Стабильность и активность терапевтического агента могут контролироваться в основном посредством водной концентрации в смеси. Исследования выполнены с ферментами, растворенными в водной фазе, и показывают, что активность фермента можно оптимизировать, причем кинетика реакции зависит от относительной концентрации воды.

Количество активных ингредиентов, внедренных в реверсивную мицеллярную систему, определяется их растворимостью в гидрофильной фазе (водное ядро).

Предпочтительно количество терапевтического агента, включенного в реверсивную мицеллярную систему, зависит от активного ингредиента.

Применение реверсивно-мицеллярной системы.

Реверсивные мицеллы изобретения улучшают биодоступность активного ингредиента, включенного в них, предоставляя возможность его терапевтического применения в целевых местах с уменьшенной токсичностью. Благодаря микроэмульсионной природе, реверсивно-мицеллярная система позволяет обеспечивать различные типы редакций (ГогтикШопЦ. включая эксципиенты, переносчики или различные поддержки, которые могут применяться различными путями, включая путь через слизистую оболочку, например, введением через рот или ректально.

В настоящее время известно, что реверсивно-мицеллярная система применяется для получения наноматериалов, которые действуют как микрореакторы. Они могут принимать белки аналогично ферментам. Каталитические реакции с водой нерастворимых субстратов происходят на большой внутренней границе раздела вода-масло внутри микроэмульсии. Активность и стабильность биомолекул контролируются, главным образом, посредством концентрации воды в этой среде.

Внедрение терапевтических агентов в реверсивно-мицеллярную систему обеспечивает следующие преимущества: указанные агенты являются более стабильными, они могут абсорбироваться через слизистую оболочку, транспорт мицелл в кровяную среду не изменяется и оптимальный биологический эффект активных ингредиентов имеет место (достигается) в целевых местах.

Объект изобретения касается фармацевтической композиции, содержащей реверсивные мицеллы, как описано выше, и фармацевтически приемлемый переносчик, эксципиент или подложку.

Другой объект изобретения касается применения реверсивных мицелл, как определено выше, для получения фармацевтической композиции, предназначенной для доставки, более точно доставки через слизистую оболочку, одного или больше водорастворимых терапевтически активных веществ. Более детально, фармацевтическая композиция предназначена для того, чтобы предотвращать или лечить один или больше симптомов, связанных с болезнью или расстройством.

Другой объект изобретения касается способов доставки одного или больше водорастворимых терапевтически активных веществ млекопитающим (в частности, человеку) указанными способами, включая применение указанных реверсивных мицеллярных композиций, как описано выше. В специальном воплощении настоящее изобретение предоставляет способы для слизистой доставки (через слизистую оболочку) одного или больше водорастворимых терапевтически активных веществ указанными способами, включая введение через слизистую указанным млекопитающим (в частности, человеку) реверсивной мицеллярной композиции, как определено выше. Настоящее изобретение предоставляет способы предотвращения, лечения или улучшения одного или больше симптомов, связанных с болезнью или расстройством у человека, указанными способами, включая введение указанному человеку, нуждающемуся в них, эффективного количества реверсивной мицеллярной композиции, как описано выше, и включающей одно или больше водорастворимых терапевтических веществ, пригодных для предотвращения, лечения или улучшения одного или больше симптомов, связанных с указанной болезнью или расстройством. В специальном воплощении настоящее изобретение предоставляет способы предотвращения, лечения или улучшения одного или больше симптомов, связанных с болезнью или расстройством, указанными способами, включая введение (применение) через слизистую оболочку субъекту, нуждающемуся в них, эффективного количества реверсивной мицеллярной композиции, как описано выше, содержащей один или больше водорастворимых терапевтических веществ, пригодных для предотвращения, лечения или улучшения одного или больше симптомов, связанных с указанной болезнью или расстройством.

В частности, водорастворимое терапевтически активное вещество является, как определено выше, в том числе белком, полипептидом, пептидом, гликопротеином, полисахаридом, нуклеиновой кислотой, как установлено выше, или их смесью.

- 6 012453

В случае, когда полипептидами и пептидами являются, например, инсулин, интерфероны и цитокины, болезнями для лечения являются, конкретнее, диабет, гепатит и раки соответственно.

В случае, когда применяются антигенные и/или вакцинные вещества, реверсивная мицеллярная система изобретения, полученная с ними, может применяться в качестве вакцины.

Как фармацевтически приемлемый эксципиент, посредник или переносчик может использоваться любой эксципиент, посредник или переносчик, хорошо известный специалисту в данной области техники. В качестве примеров неограниченных путей можно привести следующие: лактоза, кукурузный крахмал, глюкоза, сахароза, подслащивающие вещества, например малитол, клей акации (дит агаЫс), желатин, сатгйадепаик, стеариновая кислота, стеарат магния, декстрин, мальтодекстрины, маннитол, тальк, жиры природного происхождения, особенно масла растительной природы, богатые ненасыщенными жирными кислотами и фитостеролами. В частности, в конце концов, если необходимо, могут применяться другие добавки, хорошо известные специалистам в данной области техники, например стабилизаторы, высушивающие вещества, связующие вещества или рН буферы. Предпочтительные эксципиенты в соответствии с изобретением способствуют сцеплению окончательного продукта со слизистой оболочкой.

Композиция изобретения может применяться различными путями, в частности через оральный путь, с буккальной (щечной) или пищеварительной абсорбцией, или в целом через слизистую оболочку рта.

Используемые здесь термины слизистая оболочка и слизистый относятся к слизистой ткани, например эпителию, 1ашша рторпа, и слою гладких мышц в пищеварительном тракте. Доставка через слизистую, применение (введение) через слизистую и аналогичные термины, использованные здесь, относятся к применению композиции к слизистой ткани. Доставка через слизистую, применение через слизистую и аналогичные термины включают, но не ограничиваются, доставку композиции через бронхиальную, десневую (гингвальную), язычную (лингвальную), носовую (назальную), ротовую (оральную), влагалищную (вагинальную), прямокишечную (ректальную) и кишечную (интестенальную) слизистую ткань.

В предпочтительном воплощении изобретения реверсивно-мицеллярные композиции изобретения являются применяемыми через слизистую в качестве капсулы, таблетки в виде капсулы, аэрозоля, спрея, раствора, суспензии, эмульсии, облатки, таблетки, мягкой желатиновой капсулы, аэрозоля, порошка или гранулы. Композиции изобретения могут вводиться в жидком виде в капсулы, которые высвобождают свое содержимое во рту. Предпочтительно реверсивные мицеллярные композиции изобретения применяются на млекопитающих, более предпочтительно на человеке для того, чтобы предотвратить или лечить болезнь или расстройство.

Следующие примеры предназначены для того, чтобы проиллюстрировать действие настоящего изобретения, но не ограничивают его пределы.

Примеры

Пример 1. Получение транспортной системы доставки для применения инсулина ректальным путем у животных.

К 1 г ситостерола, растворенного в 2 мл этанола, добавляется 1 мл очищенной воды, содержащей 100 МЕ инсулина (долго действующий умулин Ζη), затем 40 мл Пецеола 1® (глицерид моноолеат, коммерчески доступный от Са11еГо55е).

Обработка смеси ультразвуком выполняется 2 раза (3 мин каждый) при мониторинге (контролировании) температуры на уровне меньше чем 35°С.

Полученный продукт представляет гомогенную смесь стабильных реверсивных наномицелл, содержащих инсулин.

Затем он может быть введен животному в дозе 2 мл/кг ректальным путем (5 МЕ инсулин Ζη/24 ч/кг).

Пример 2. Получение транспортной системы доставки для перорального применения инсулина у человека.

К 10 г ситостерола, растворенного в 10 мл этанола, добавляется 2 мл очищенной воды, содержащей 200 МЕ д'инсулина (долго действующий умулин), затем 28 мл Пецеола®.

Полученный продукт представляет гомогенную смесь стабильных реверсивных наномицелл, содержащих инсулин. Он вводится в капсулы, каждая из которых содержит 1 г полученного продукта (5 МЕ быстро действующего инсулина на капсулу). Затем он может быть введен человеку (субъекту), нуждающемуся в инсулине. Указанный субъект ломает капсулу во рту и держит полученную из капсулы жидкость во рту в течение примерно 1 мин (так, что ситостерол в смеси прилипает к слизистой оболочке рта, и происходит быстрая абсорбция).

- 7 012453

Пример 3. Получение транспортной системы доставки для перорального применения эритропоэтина у человека.

Смешивается 10 г ситостерола, растворенного в 10 мл этанола, 2 мл водного раствора, содержащего 80000 МЕ эритропоэтина (ЕРКЕХ 40000 МЕ/мл), затем 28 мл Пецеола®.

Смесь перемешивается на нагревательной плите при 1200 об/мин при контролировании температуры на уровне меньше чем 35°С.

Полученный продукт представляет гомогенную смесь стабильных реверсивных наномицелл, содержащих эритропоэтин. Он вводится в капсулы, каждая из которых содержит 1 г полученного продукта (1000 МЕ эритропоэтина на капсулу). Затем он может быть введен человеку, нуждающемуся в эритропоэтине. Указанный человек ломает капсулу во рту и держит полученную из капсулы жидкость во рту в течение примерно 1 мин (так, что ситостерол в смеси прилипает к слизистой оболочке рта, и происходит быстрая абсорбция).

Пример 4. Получение реверсивных мицелл, содержащих эритропоэтин.

КЗ г ситостерола, растворенного в 4,5 мл этанола, добавляется 1 мл ЕРКЕХ®, содержащего 2000 МЕ ЕРО и 72 мл Пецеола ®.

Смесь перемешивается на магнитной мешалке при 35°С в течение 15 мин.

Отношение В составляет 0,04.

Затем он может вводиться крысам в дозе 2 мл/кг ректальным путем (50 МЕ/кг).

Пример 5. Получение реверсивных мицелл, содержащих эритропоэтин.

КЗ г ситостерола, растворенного в 4,5 мл этанола, добавляется 2 мл ЕРКЕХ®, содержащего 4000 МЕ ЕРО и 72 мл Пецеола ®.

Отношение В составляет 0,08.

Затем он может вводиться крысам в дозе 2 мл/кг ректальным путем (100 МЕ/кг).

Пример 6. Получение транспортной системы доставки для внутриректального применения реверсивных мицелл, содержащих плазмиду, и ее применение.

Смешивается 125 мг ситостерола, растворенного в 200 мкл этанола, 250 мкл водного раствора, содержащего 3 мг плазмиды рЕОЕР-М, затем 4,75 мл Пецеола ®.

Смесь перемешивается на нагревательной плите при 1200 об/мин, при контролировании температуры на уровне меньше чем 35°С.

Полученный продукт представляет собой гомогенную смесь стабильных реверсивных наномицелл, содержащих плазмиду.

Примененные продукты.

Содержащие рЕОЕР-ΝΤ реверсивные мицеллы получаются, как описано выше. Используются рЕОЕР-Ы1 (закупленные у С1ои1есй), вектор экспрессии еийаисеб дгееп Диогексеи! белка (еОЕР) млекопитающих, после трансформации в соответствующие клетки ЕксйепсЫа сой Тор 10 (1иуйгодеи) и очистки с применением ЕибоЕгее Р1акт1б Меда Кй от О1адеи Ь1б согласно инструкции изготовителя.

Методы.

крысам (Вистар, 250-300 г) вводится ректальным путем 500 мкл продукта.

Образцы крови отбирали через 1, 2, 4 и 8 мин после инъекции (2 крысы на точку) в пробирки, содержащие антикоагулянт. После центрифугирования при 1500 об/мин в течение 25 мин плазму использовали для трансфекционных исследований.

НерО2 (линия клеток гепатомы человека) и СУ1 (клеточная линия фибробластов почки обезьяны) поддерживались в среде Дульбекко, дополненной (модифицированной) средой Игла, с добавлением 10% эмбриональной сыворотки (Инвитроген, Карлсбад, СА) и высевали при плотности 5х10⁴ клеток/лунку в 24-луночные чашки за 24 ч до трансфекционных исследований.

Для трансфекции культуральную среду удаляли и добавляли 200 мкл крысиной плазмы, содержащей реверсивные мицеллы, содержащие плазмиду рЕОЕР-ΝΓ, к различным чашкам в течение 20 мин при комнатной температуре. После добавления 500 мкл свежей среды клетки культивировали в течение 48 ч до измерения генной экспрессии с помощью флуоресцентного микроскопа определением процента флуоресцирующих клеток.

Отрицательная контрольная плазма соответствует образцу крысы, которой не вводились реверсивные мицеллы, содержащие плазмиду рЕОЕР-ΝΓ. В качестве положительного контроля трансфекции использовали ЕиОЕNЕ™6 (Косйе), как предложено изготовителем.

Результаты.

% полученной трансфекции (% флуоресцирующих клеток)

Клеточная линия 1' 2¹ 4’ 8' ΕιιΟΕΝ Е™

Гепатома человека(НерО2) 0 8% 18% 6% _____10%

Фибробласт почки θ _{и% 28% ш% 25%} обезьяны (СУ!)

- 8 012453

Пример 7. Фармакологический тест: биоактивность эритропоэтина.

Эритропоэтин (ЭПО) является основным регулятором эритропоэза человека. Молекулярная масса ЭПО 30-34 кДа.

Рекомбинантный ЭПО коммерчески производится экспрессией клонов ЭПО кДНК в эукариотической клеточной линии яичника китайского хомячка.

Ранее определение эффективности гйЕРО было выполнено у нормальных крыс и мышей последующим увеличением некоторых параметров, например гематокрита, объема красных кровяных клеток и числа ретикулоцитов. Недавние исследования установили, что число ретикулоцитов в циркуляции является ранним признаком функционального статуса эритропоэза, и оценка процента ретикулоцитов в периферической крови используется для оценки ЭПО биоактивности.

Продукты.

ЕРКЕХ, производимый 1А№8ЕН-С1ЬАО лабораторией 2 000 МЕ/мл

Партия А: ЕРО 50 МЕ/кг: одноразовая доза подкожно.

Партия В: ЕРО 100 МЕ/кг: одноразовая доза подкожно.

Партия С; ЕРО 50 МЕ/кг: одноразовая доза ректальным путем (пример 4).

Партия И: ЕРО 100 МЕ/кг: одноразовая доза ректальным путем (пример 5).

Протокол.

Нормоцитемические (погтосу1йет1с) мыши возраста 8 недель получали одноразовое введение продукта с последующим взятием образцов крови через 96 ч. Эксперименты выполнены с использованием 3 крыс на партию.

Подсчет ретикулоцитов произведен с использованием автоматической жидкостной цитометрии.

Результаты

Продукты Ретикулоциты (%)

Партия А:ЕР050 МЕ/кг 8С10,69

Партия В:ЕРО 100 МЕ/кг8С11,24

Партия С: ЕРО 50 МЕ/кг ЯК6,19

Партия 0:ЕР0100 МЕ/кгКК11,93

Коэффициент изменения (%)

15,79

18,51

13,67

16,70

Выводы.

Продукты С и Ό (реверсивные мицеллы, содержащие эритропоэтин) значительно влияют на эритропоэз, равноценно ЭПО, введенному подкожно.

Пример 8. 1п νίνο исследование модели диабетических 8ΤΖ крыс - долго действующий инсулин.

Использовали продукт, полученный согласно примеру 1.

Цель исследования.

Сравнить гипогликемическую активность долго действующего инсулина при введении подкожно с той же дозой инсулина, внедренного в реверсивные мицеллы согласно изобретению, примененного ректальным путем.

Комментарии по способам применения (путям введения).

Продукты, содержащие липидные наночастицы, разрушаются в желудке и двенадцатиперстной кишке, в частности, липазами. Применение на человеке предпочтительно осуществляется в ротовом местоположении (во рту) через абсорбцию на слизистой оболочке. Поскольку у крыс этот путь применения недоступен, был выбран ректальный путь, который дает такую же эффективную абсорбцию через слизистую оболочку, как пероральное применение. Вещества, абсорбированные ректальным путем, не проходят через печень, как вещества, примененные перорально, а доставляются через слизистую ткань в кровоток.

Путь применения (введения).

Партия 2: подкожно.

Партия 3: ректально.

Примененные продукты.

Партия 2: Умулин цинк 5 МЕ/кг.

Партия 3: ΝΡΧ: Умулин цинк 5 МЕ/кг в мицеллярном векторе (пример 1).

Введенное количество: 2 мл/кг/день через ректальный зонд.

Метод.

Введение стрептозотоцина (СТЗ) крысам самцам Вистар (вес: 250-300 г), внутривенно в дозе 50 мг/кг дает промежуточный диабет между инсулинозависимым и неинсулинозависимым диабетами (тип 1 и 2). Через 3 дня после введения гликемия составляет от 20 до 30 ммол/л и остается приблизительно стабильной в течение следующих 7 дней.

Вещества применялись ежедневно в течение 7 дней, гликемические биологические исследования выполнялись на отобранных образцах крови на Д 0, 72 ч и 7 дней от начала лечения.

- 9 012453

Результаты.

Партия 1 (контроль)

Крысы Д О	ДО	ДЗ	ДЗ	Д7	Д7
п°	Вес	Гликемия	Вес	Гликемия	Вес	Гликемия
25	261	24.96	234	28.13	223	23.05
31	226	28.56	194	29.21	191	24.22
32	262	11.36	259	15.31	260	13.30
34	288	19.64	208	19.63	199	18.54
50	252	22.99	250	22.39	256	26.46
66	255	18.62	242	16.69	240	14.59

Партия 2 (умулин Ζη)

Крысы	до	до	ДЗ	ДЗ	Д7	Д7
п°	Вес	Гликемия	Вес	Гликемия	Вес	Гликемия
52	264	25.41	301	5.99	302	6.01
72	220	28.66	201	3.97	221	4.30
73	239	28.25	221	5.28	210	5.21
74	221	28.45	210	4.48	220	4.78
75	227	29.20	215	4.51	213	4.64
77	230	30.77	221	5.06	220	5.05

Партия 3 ΝΡ X (наночастицы умулин Ζη)

Крысы	ДО	до	ДЗ	ДЗ	Д7	Д7
п°	Вес	Гликемия	Вес	Гликемия	Вес	Гликемия
60	242	22,56	230	6,09	225	7,43
61	213	27,45	200	12,78	195	7,08
62	258	21.63	241	9.36	238	7.71
63	241	19.27	231	7.85	228	15.79
64	224	26.12	215	21.41	215	15.30
65	235	14.44	219	8.68	218	9.39

Выводы.

Инсулин Ζη, введенный подкожно (партия 2) в ежедневной дозе 5 МЕ/кг, возвращает гликемию к нормальному уровню.

Продукт ΝΡ X (наночастицы инсулина Ζη, партия 3) значительно влияет на гликемию: через 72 ч после начала лечения, 4 животных из 6 возвращаются к нормальной гликемии равноценно инсулину, введенному подкожно. Биоактивность инсулина для указанных животных сходна с биоактивностью инсулина, примененного посредством инъекции.

Незначительные различия результатов для инсулина, примененного путем инъекции, у двух животных являются следствием затруднений, обычно встречающихся при ректальном применении у животных. Пероральное применение у человека позволяет избежать таких трудностей.

Пример 9. Ιη νίνο исследование: модели диабетических 8ΤΖ крыс - быстро действующий инсулин.

Цель исследования. Сравнение гипогликемической активности и биодоступности быстро действующего инсулина при применении подкожно с той же дозой инсулина, внедренного в реверсивные мицеллы согласно изобретению, примененного ректальным путем.

Протокол.

Диабет индуцируется у самцов крыс Вистар (вес 150-200 г) посредством IV инъекции стрептозотоцина (60 мг/кг). Через 4 дня обработанные мыши проявляют инсулинозависимый диабет, сопровождаемый через несколько дней инсулиновой резистентностью.

Эксперименты выполняли с использованием 3 крыс на партию.

Было сделано только одно применение, подкожно для исходного продукта и ректально для опытных мицеллярных (Мс) продуктов.

Доза инсулина одна и та же для исходного продукта и опытных Мс продуктов: 5 МЕ/кг.

Группы обработки контрольная группа - не обработанная СТЗ;

группа быстро действующий инсулин (быстро действующий умулин) - подкожное введение; группа быстро действующий инсулин (быстро действующий умулин) - ректальный путь;

группа быстро действующий инсулин Мс умулин - ректальный путь;

Мс Γοηηιιίαΐίοη группа без инсулина - ректальный путь.

Гликемию и инсулинемию получали за 7 временных точек: 15 мин, 30 мин, 60 мин, 120 мин, 180 мин, 360 мин и 24 ч.

- 10 012453

Результаты.

Гликемия (ммол/л)

Время (мин)	0	15	30	60	120	180	360	1440
контроль	19.98	20.13	21.59	21.37	20.18	19.65	18.91	19,68
Стандартное отклонение	0.73	0.81	0.17	0.15	0.19	0.46	0.87	0.46
Подкожно быстрый У МУЛИН	21.76	17.57	9.25	4.82	3.59	4.44	19,22	21.91
Стандартное отклонение	1.22	1.19	2.33	0.94	0.72	1.41	2.37	1.02
Мс УМУЛИН	21.89	20.6	17.53	13.69	10.45	9.85	20.14	20.76
Стандартное отклонение	0.97	1.19	1.38	1.15	1.21	1.02	2.58	1.17

Инсулинемия

Время (мин)	0	15	30	60	120	180	360	1440
Контроль СТЗ	3.3	4	3.7	4.3	4.7	4.3	5	4.3
Стандартное отклонение	0.3	0.6	0.3	0.7	0.9	0-3	0.6	0.3
Подкожно быстрый УМУЛИН	4.3	12.3	52.7	67.7	84.3	79.3	11.7	4
Стандартное отклонение	0.7	1.5	2.8	7.4	4.4	7.5	1.5	0.6
кесы Ме имиьшЕ	4	4.7	9	16.7	29	31	10.3	5
Стандартное отклонение	0.6	0.9	1.2	1.9	5.6	2.1	1.3	1

Выводы.

Кинетика абсорбции ректальным путем сопоставима с кинетикой подкожным путем для быстрого инсулина: Т_тах=2-3 ч.

Кинетики элиминации (выведения) сопоставимы.

Относительная биодоступность Мс Γοηηιιΐοΐίοη по сравнению с подкожным путем составляет 55%, на основе АИС.

Пример 10. Оптимизация внедренного количества воды.

Протокол.

Посредством изменения количества воды, в которой были растворены белки, были приготовлены образцы, содержащие соответствующие количества пецеола, ситостерола и этанола, данные в примерах выше. Шкала разбавления получена посредством увеличения количества воды с приращением 0,3%.

Образцы гомогенизировали перемешиванием при 35°С, как описано выше.

Влияние количества воды на стабильность реверсивно-мицеллярной системы определялась визуально (мутность) и малоугловой дифракцией рентгеновских лучей.

Результаты.

От 6,9% воды в составе (композиции) (т.е. В около 0,175) и больше микроэмульсия становится более и более мутной и появляются две фазы там, где увеличивается количество воды. Процент воды выражается посредством отношения масса общей воды:общая масса композиции.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Реверсивно-мицеллярная система, содержащая по меньшей мере один водорастворимый терапевтически активный ингредиент, фитостерол, ацилглицерол и воду.
2. Реверсивно-мицеллярная система по п.1, где мицеллы представляют собой водное ядро, меньшее или равное 100 нм.
3. Реверсивно-мицеллярная система по п.1 или 2, получаемая следующим способом:

(a) контактирование (ί) фитостерола, (и) ацилглицерола, (ш) воды и (ίν) по меньшей мере одного водорастворимого терапевтически активного ингредиента, (b) перемешивание смеси, полученной на стадии (а), при 40°С или менее и в течение времени, достаточного для формирования реверсивных мицелл, причем указанное перемешивание выполняется механически на скорости от приблизительно 1000 до приблизительно 5000 об/мин или с помощью ультразвука.
4. Реверсивно-мицеллярная система по любому из предшествующих пунктов, где отношение В=(вода)/(ацилглицерол) предпочтительно меньше или равно приблизительно 2,5.
5. Реверсивно-мицеллярная система по любому из предшествующих пунктов, где весовое отношение фитостерол/ацилглицерол колеблется от 0,01 до 1.
6. Реверсивно-мицеллярная система по любому из предшествующих пунктов, где весовое отношение фитостерол/ацилглицерол больше или равно 0,1, более предпочтительно от 0,1 до 0,2.
7. Реверсивно-мицеллярная система по любому из пп.3-6, где перемешивание на стадии (Ь) выполняется при температуре, колеблющейся в пределах 30-38°С.
8. Реверсивно-мицеллярная система по любому из предшествующих пунктов, где отношение В=(вода)/(ацилглицерол) меньше или приблизительно равно 1.
9. Реверсивно-мицеллярная система по любому из предшествующих пунктов, где ацилглицерол представлен следующей формулой (I):

- 11 012453

СН₂ОК,

СНО!% сн,ок, ^{2 3} (О в которой Р| - остаток ацила, линейной или разветвленной, насыщенной или ненасыщенной жирной кислоты, имеющей от 14 до 24 атомов углерода, атом водорода или моно-, ди- или тригалактоза или глюкоза;

В₂ - остаток ацила, линейной или разветвленной, насыщенной или ненасыщенной жирной кислоты, имеющей от 2 до 18 атомов углерода;

В₃ - остаток ацила, линейной или разветвленной, насыщенной или ненасыщенной жирной кислоты, имеющей от 14 до 24 атомов углерода, или атом водорода.
10. Реверсивно-мицеллярная система по предшествующему пункту, где по меньшей мере один из е и В₃, предпочтительно только один из П₁ и В₃, представляет собой ациловый остаток олеиновой кислоты (С18:1[цис]-9).
11. Реверсивно-мицеллярная система по любому из пп.9 и 10, где В₂ является остатком олеиновой кислоты (олеоиловая группа), одним из его позиционных изомеров относительно двойной связи (цис6,7,9,11 и 13) или одним из его изоразветвленных изомеров.
12. Реверсивно-мицеллярная система по одному из пп.9 и 10, где В₂ представляет собой ацетиловую группу.
13. Реверсивно-мицеллярная система по любому из пп.9-12, где В₃ представляет собой атом водорода.
14. Реверсивно-мицеллярная система по любому из пп.9-13, где ацилглицерол выбран из группы, состоящей из 1,2-диолеина и 1-олеоил-2-ацетилглицерола.
15. Реверсивно-мицеллярная система по любому из пп.1-14, где фитостерол является ситостеролом.
16. Реверсивно-мицеллярная система по любому из пп.1-15, где водорастворимое терапевтическое вещество является пептидом, полипептидом, белком, нуклеиновой кислотой [ДНК или РНК (более предпочтительно иРНК) или их фрагментами] или водной фармацевтической композицией.
17. Реверсивно-мицеллярная система по п.16, где водорорастворимое терапевтическое вещество выбрано из группы, состоящей из инсулина, эритропоэтина, лептина, ростовых факторов, ростового гормона высвобождающих гормонов, колониестимулирующих факторов, водорастворимых гормонов (паратиреоидный гормон или его фракции или аналоги, лютеинизирующего гормона высвобождающий гормон (ЛГ -ВГ) или его аналоги (например, нафарелин, бусерелин, госерелин)), интерферонов, цитокинов, полисахаридов (например, гепарин), гепариноподобных веществ, ДНК, РНК фрагментов или плазмид, интерференционной РНК, иммуногенных и/или вакцинных агентов.
18. Фармакологическая композиция, содержащая реверсивные мицеллы, как описано в любом из предшествующих пунктов, и фармацевтически приемлемую поддержку.

Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2