EA011091B1

EA011091B1 - Производные пиразолопиримидинтиона, их соли и сольваты, способы их получения и использования

Info

Publication number: EA011091B1
Application number: EA200601172A
Authority: EA
Inventors: Шусинь Ли; Цзяньпин Жэнь; Яньцзинь Чжао; Цюцзюнь Лв; Цзиньхуа Гуо
Original assignee: ДЗЕ ИНСТИТЬЮТ ОФ РАДИЭЙШН МЕДСИН, ЭКЕДЕМИ ОФ МИЛИТАРИ МЕДИКАЛ САЙЕНСИЗ, ПиЭлЭй
Priority date: 2003-12-18
Filing date: 2004-11-18
Publication date: 2008-12-30
Also published as: CN1629163A; WO2005058899A1; EP1695976A1; US20070219220A1; CN100360531C; EP1695976A4; EA200601172A1

Abstract

Настоящее изобретение раскрывает производные пиразолопиримидинтиона, их соли и сольваты, их способы изготовления и использования. Производные пиразолопиримидинтиона согласно настоящему изобретению имеют структуру общей формулы I, в которой R, Rи Rявляются одинаковыми или различными и независимо представляют собой Cалкил; Rпредставляет собой Cалкил; Rпредставляет собой Cалкил; Rпредставляет собой водород, алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, алкенил, имеющий от 3 до 6 атомов углерода, циклоалкил, имеющий от 3 до 8 атомов углерода, или алкилацил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода. Лекарственные препараты, содержащие соединения настоящего изобретения и используемые для лечения импотенции и фригидности, обладают преимуществами, заключающимися в высокой селективности к ФДЭ, длительной продолжительности действия и в меньшем количестве побочных эффектов, и эти лекарственные препараты не имеют никаких побочных эффектов с точки зрения снижения артериального давления и повышения частоты сердечных сокращений и имеют широкие рыночные перспективы.

Description

Настоящее изобретение относится к ингибитору высокоселективной фосфодиэстеразы V, производным пиразолопиримидинтиона, их солям и сольватам для предотвращения и/или лечения импотенции и фригидности и способам их получения и применению их в медицине.

Уровень техники изобретения

Импотенцию можно определить как мужское половое бессилие, включающее в себя неспособность полового члена к эрекции или эякуляции или и к тому, и другому. Распространенность импотенции с возрастом увеличивается. Согласно публикациям частота импотенции у мужчин моложе 50 лет составляет от 2 до 7% и у мужчин от 55 до 80 лет - от 18 до 75%. Например, по приблизительным оценкам, в США до 10 млн мужчин являются импотентами, при этом большинство из них чаще страдает от импотенции по физиологическим причинам, а не от проблем психогенного происхождения.

Пенильная эрекция относится к расслаблению гладкой мускулатуры в согрик сауегпокит полового члена. Во время полового возбуждения из нервных окончаний и эндотелиальных клеток согрик сауегпоыпп полового члена высвобождается окись азота, активируя гуанилциклазу, что приводит к увеличению синтеза циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) в гладкомышечных клетках согрик сауегпокит. цГМФ вызывает расслабление гладкой мускулатуры и увеличение притока крови в половой член, что приводит к его эрекции. Концентрация цГМФ в тканях регулируется фосфодиэстеразами (ФДЭ). В наибольшем количестве в согрик сауегпокит полового члена находится цГМФ-специфическая фосфодиэстераза V (ФДЭ5). Ингибирование ФДЭ5 может повышать уровень цГМФ и усиливать эректильную функцию.

Существуют препараты для лечения импотенции, такие как феноламин, кетамин и простагландин Е1, некоторые из которых принадлежат к группе возбудителей нервной системы, являющихся проблемными с точки зрения лекарственной зависимости и т. д.

Силденафил является селективным ингибитором фосфодиэстеразы. Это соединение, способ его изготовления и использование, являющиеся сходными с таковыми для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, раскрываются в опубликованной патентной заявке на изобретение СИ 1057464А; использование соединения для изготовления лекарственных препаратов для лечения эректильной дисфункции у самцов животных раскрывается в патентной заявке СИ 1124926А; и в патентной заявке СИ 1168376А раскрывается новый способ изготовления силденафила. Силденафил имеет хороший потенциал для лечения эректильной дисфункции у мужчин, но, несмотря на это, в больших дозах (50 или 100 мг/однократно) он обладает очевидными побочными эффектами, такими как головная боль, головокружение, изменение цветоощущения (синее зрение), снижение артериального давления, увеличение частоты сердечных сокращений, и даже серьезными отрицательными эффектами на сердечнососудистую систему.

В патентной заявке СИ 1393444А раскрывается класс соединений.

Соединение 5- [2-этокси-5-(цис-3,5 -диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1 -метил-3 -н-пропил-

1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-б]пиримидин-7-он, которое имеет более высокую активность (30 мг/день) и более низкую токсичность по сравнению с силденафилом, при летальной дозе, вызывающей гибель 50% животных 1.ΙΓ. , составляющей от 772,5 до 1052,1 мг/кг.

В китайском патенте (СЫпеке 1пуеп1юп Ра1еп1 (АррНсайоп № 2003101016916)) раскрывается группа соединений 5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1 -сульфонил)фенил]-1 -этил-3 -н-пропил-1,6дигидро-7Н-пиразолопиримидин-7-он, которые по сравнению с силденафилом также имеют более высокую активность. Эксперимент проводился со здоровыми мышами, половину из которых составляли самцы и половину самки. После перорального введения мышам указанного лекарственного препарата в дозах 30 и 15 мг/кг, а также Силденафила в дозе 50 мг/кг в качестве контроля в течение 2 ч количество покрытий самок самцами было соответственно 53, 43 и 19 раз. Спаривание наступало в 62,5, 56,6 и 50% случаев. Значительное различие (Р<0,01) по сравнению с контрольной группой составляло по числу покрытий в 3 раза и по возникновению спаривания на 12,6%. В предварительном испытании на острую токсичность показано, что ΓΌ₅₀ указанного лекарственного препарата составляет более 2000 мг/кг, что резко выше, чем ЬП₅₀ Силденафила (ΓΌ₅₀ составляет 635 мг/кг). В тестах на собаках показано, что указанный лекарственный препарат способен резко снижать диастолическое давление и повышать частоту сердечных сокращений, и предложено, что клиническое использование указанного лекарственного препарата могло бы вызывать побочные эффекты, включающие в себя снижение артериального давления и повышение частоты сердечных сокращений. Побочные эффекты были связаны с изоферментами фосфодиэстеразы, главным образом с низкой селективностью фосфодиэстеразы 5 для органа зрения и фосфодиэстераз I и III для сердца.

Подробное описание изобретения

Первая цель изобретения заключается в обеспечении новых производных пиразолопиримидинтиона, их солей и сольватов.

- 1 011091

Производные пиразолопиримидинтиона по настоящему изобретению имеют структуру формулы

в которой Κι, К₂ и К₃ являются одинаковыми или различными и независимо представляют собой С1_₆алкил;

К₄ представляет собой С₁.₆алкил;

К₅ представляет собой С₁_₆алкил;

К₆ представляет собой водород, алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, алкенил, имеющий от 3 до 6 атомов углерода, циклоалкил, имеющий от 3 до 8 атомов углерода, или алкилацил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода.

Предпочтительные соединения настоящего изобретения имеют структуру формулы (II), в которой Κ₁, Κ₂, Κ₃, Κ₄ и Κ₅ являются одинаковыми или различными и представляют собой алкил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, такой как метил, этил, пропил, бутил и т.п.

Более конкретно, соединения настоящего изобретения включают в себя следующие соединения: 5-[2-метокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро7Н-пиразоло [4,3-6] пиримидин-7-тион;

5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло [4,3 -б] пиримидин-7 -тион;

5-[2-пропокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1 -метил-3 -н-пропил-1,6-дигидро7Н-пиразоло [4,3-б]пиримидин-7-тион;

5-[2-метокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-этил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло [4,3 -б] пиримидин-7 -тион;

5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-этил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло[4,3-б]пиримидин-7-тион; или

5-[2-пропокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1 -этил-3-н-пропил-1,6-дигидро7Н-пиразоло[4,3-б]пиримидин-7-тион и т.д.

Соединения настоящего изобретения содержат основной центр, который может образовывать соли с кислотой. Фармацевтически приемлемые соли предпочтительно представляют собой нетоксичные кислые аддитивные соли, например метансульфонат, трифторметансульфонат, образованные реакцией с низшей алкилзамещенной сульфоновой кислотой, такой как метансульфоновая кислота, трифторметансульфоновая кислота и т.д.;

п-толуолсульфонат, бензолсульфонат, образованные реакцией с арилсульфоновой кислотой, такой как бензолсульфоновая кислота или п-толуолсульфоновая кислота;

соответствующие соли, образованные реакцией с органической карбоновой кислотой, такой как уксусная, фумаровая, виннокаменная, щавелевая, малеиновая, яблочная, янтарная или лимонная кислоты, или с подобными кислотами;

глутамат или аспартат, образованные реакцией с аминокислотой, такой как глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота.

Соединения настоящего изобретения могут образовывать соответствующие соли посредством реакции с неорганической кислотой, такой как соляная кислота (например, фтористо-водородная, бромистоводородная, йодисто-водородная и соляная кислоты), азотная кислота, серная кислота или фосфорная кислота, или с подобными им кислотами. Соединение формулы (II) также обеспечивает фармацевтически приемлемые соли металлов, особенно соли щелочных металлов, таких как соли натрия или соли калия.

- 2 011091

Производные пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения или сольваты их солей находятся под охраной объема настоящего изобретения. Их растворители предпочтительно представляют собой воду, этанол или метанол.

Вторая цель настоящего изобретения состоит в обеспечении первого способа получения производных пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения.

Первый способ получения по настоящему изобретению состоит в осуществлении реакции соединения формулы (III) с соединением формулы (IV) в растворителе для получения соединения формулы (VI)

в которых в соединениях К_ь К₂ и К₃ представляют собой С1_-6алкил;

К₄ представляет собой С_1-6алкил;

К₅ представляет собой С_1-6алкил;

К₆ представляет собой водород, алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, алкенил, имеющий от 3 до 6 атомов углерода, циклоалкил, имеющий от 3 до 8 атомов углерода, или алкилоил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода; и

Υ является С1, Е, Вг или I.

Реакцию обычно осуществляют при комнатной температуре и необязательно возможно использование растворителя, такого как органические растворители, включающие в себя хлороформ, дихлорметан, тетрагидрофуран, диоксан, 1,2-диметоксиэтан, этанол, ксилол, толуол, диметилсульфоксид, триэти ламин и т. д.

Соли производных пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения можно получать реакцией производных пиразолопиримидинтиона с фармацевтически приемлемыми кислотами.

Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает другой способ изготовления соединений формулы (I), содержащий реакцию соединения формулы (V) с соединением формулы (IV) в растворителе с получением соединения формулы (VI) и дальнейшим производством продукта сульфирования соединения формулы (VI)

(ΐν) (VI) в которых К₁, К₂, К₃, К₄, К₅ и К₆ являются теми же, что определены в соединениях формулы (I), и

Υ представляет собой С1, Е, Вг и I.

При сульфировании соединения (VI) работоспособными сульфирующими реактивами являются пентасульфид фосфора или 2,4-бис-(п-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфид (реактив Лоуссона) и их производные и т.п. Сульфирование соединения (VI) осуществляется в подходящем растворителе, таком как органические растворители, включающие в себя хлороформ, дихлорметан, тетрагидрофуран, диоксан, 1,2-диметоксиэтан, этанол, ксилол, толуол, диметилсульфоксид, триэтиламин. Реакционная температура находится в температурном диапазоне от -20 до 200°С.

Исходные материалы, используемые соединения (III) и (V) синтезируются согласно следующему пути со ссылкой на способ, раскрытый в патенте ЕР 463752:

- 3 011091 ϊ ?2 й Λ ^Η* ι > ТХ? ^маос^^/сгН8он

ΗϊΝ-^^/ ЕкзИ/СНгСЦ

в которых определения для Κι, Κ₂ и Κ₃ являются сходными с теми, что даны для соединения формулы (I), и Υ представляет собой С1.

Соединение (IV) может быть коммерчески доступно или получено общепринятым способом синтеза.

Третья цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы обеспечить лекарственный препарат, в котором в качестве активного компонента для предотвращения или лечения импотенции и сексуальной фригидности используются производные пиразолопиримидинтиона, их соли и сольваты по настоящему изобретению.

Авторы настоящего изобретения экспериментально подтвердили, что соединения настоящего изобретения могут сокращать латентный период пенильной эрекции у крыс с удаленными яичками и удлинять время наполнения полового члена. Соединения настоящего изобретения увеличивают количество покрытий самцами мышей самок мышей. Преимуществами соединений настоящего изобретения являются незначительность побочных эффектов со стороны сердечно-сосудистой системы и то, что они не вызывают снижения артериального давления и повышения частоты сердечных сокращений. Каждое из соединений настоящего изобретения, а также их соли и сольваты действуют в качестве активного компонента лекарственного препарата для предотвращения и/или лечения импотенции и фригидности (у женщин).

Дополнительно в вышеописанном лекарственном препарате могут содержаться один или более фармацевтически приемлемых носителей. Указанные носители включают в себя общепринятый разбавитель, формообразующее вещество, наполнитель, адгезивное вещество, смачивающее вещество, дезинтегрирующее вещество, сурфактант, адсорбционный носитель, смазывающее вещество и т.д., известные в данной области техники. Ароматизаторы, подсластители и т. д. могут быть добавлены при необходимости. Лекарственный препарат настоящего изобретения может быть изготовлен в виде различных форм таблеток, порошка, гранул, капсул, жидкой пероральной формы и раствора для инъекций. Различные формы указанного лекарственного препарата можно изготовлять согласно общепринятым способам в области медицины.

Предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения

Пример 1. Синтез 5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-этил-3-нпропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло [4,3-6] пиримидин-7-тиона.

(По формуле (II), в которой Κ₁ является н-пропилом, К₂ является этилом, К₃ является этилом и К₄ и К₅ являются метилом, соединение (1).

Стадия 1. Синтез 4-(2-этоксибензамидо)-1-этил-3-н-пропилпиразол-5-формамида.

г 1-этил-3-н-пропил-4-аминопиразол-5-формамида растворяли в 250 мл сухого дихлорметана, добавляли 10 мл триэтиламина в трехгорлой круглодонной колбе объемом 500 мл в атмосфере Ν₂ и охлаждали до температуры ниже 5°С на ледяной бане. К этому раствору по капле добавляли 11,3 г о-этоксибензоила хлорид со скоростью, не допускающей повышения температуры выше чем 5°С. После добавления реагенты перемешивали в течение последующих 3 ч, для того чтобы произошла реакция. Реакционную смесь оставляли на ночь при комнатной температуре. После завершения реакции реакционную смесь промывали водой, водным раствором карбоната натрия и затем водой. После этого ее высушивали и выпаривали. Реакционную смесь подвергали перекристаллизации со спиртом н-пропилом до получения 13,0 г указанного в заголовке соединения.

Выход составлял 74,0%.

- 4 011091

Точка плавления (т.п.) этого продукта 136-138°С.

Масс-спектрометрия с бомбардировкой ускоренными атомами МС (ТЛБ) составляла 345 (М+1).

Стадия 2. Синтез 5-(2-этоксифенил)-1-этил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-6]пиримидин7-она.

1,0 г натрия добавляли к 75 мл абсолютного этанола. После того как натрий полностью прореагировал, добавляли 8,0 г продукта со стадии 1 и кипятили с обратным холодильником в течение 4-5 ч. После завершения реакции растворитель удаляли выпариванием. Для отделения сухого остатка после охлаждения добавляли концентрированную соляную кислоту. Сухой остаток фильтровали, промывали водой и высушивали на воздухе.

Сухой остаток перекристаллизовывали с метанолом до получения 6,5 г указанного в заголовке соединения.

Выход составлял 85,7%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 114-115°С.

МС (ТАВ) составляла 327 (М+1).

Данные ядерного магнитного резонанса высокого разрешения ¹Н ЯМР (ДМСО-6₆) (м.д.) δ: 0,94 (т, 3Н), 1,34 (т, 3Н), 1,40 (т, 3Н), 1,75 (м, 2Н), 2,79 (т, 2Н), 4,14 (кв, 2Н), 4,53 (кв, 2Н), 7,06 (т, 1Н), 7,15 (д, 1Н), 7,46 (м, 1Н), 7,68 (м, 1Н).

Стадия 3. Синтез 5-(2-этоксифенил)-1-этил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-6]пиримидин7-тиона.

В трехгорлой круглодонной колбе объемом 100 мл в 30 мл толуола растворяли 3,5 г продукт стадии 2. К раствору добавляли 10 г пентасульфида фосфора и затем кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. После завершения реакции толуол удаляли в вакууме. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворяли добавлением хлороформа.

Раствор промывали 2н. ΝαΟΗ, а затем водой. Органический слой высушивали с Ыа₂8О₄, выпаривали и перекристаллизовывали с метанолом. На выходе получали 3,1 г сухого остатка желтого цвета.

Выход составлял 84,4%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 130-131°С.

Ή ЯМР (ДМСО-6₆) (м.д.) δ: 0,94 (т, 3Н), 1,39 (т, 3Н), 1,40 (т, 3Н), 1,77 (кв, 2Н), 2,84 (т, 2Н), 4,19 (кв, 2Н), 4,95 (кв, 2Н), 7,11 (т, 1Н), 7,20 (д, 1Н), 7,53 (т, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 13,31 (с, 1Н).

МС (РАВ) составляла 343 (М+1).

Стадия 4. Синтез 5-(5-хлоросульфонил-2-этоксифенил)-1-этил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло [4,3-6] пиримидин-7 -тиона.

В трехгорлую круглодонную колбу объемом 100 мл с магнитогидродинамическим (МГД) перемешиванием добавляли 5 мл хлорсульфоновой кислоты. После охлаждения до 10°С на ледяной бане порциями добавляли 3,0 г продукта со стадии 3. По окончании добавления реагент оставляли для осуществления реакции в течение 7 ч при комнатной температуре и затем добавляли 5,0 мл тионилхлорида. Как только реакционные смеси опускали в дробленый лед, немедленно образовывался сухой остаток желтого цвета. Сухой остаток желтого цвета экстрагировали хлороформом, промывали водой, высушивали с Мд8О₄ и выпаривали до получения 3,3 г указанного в заголовке соединения.

Выход составлял 84,5%.

Стадия 5. Синтез 5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-этил-3-н-пропил-

1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-6]пиримидин-7-тиона (соединение (1)).

В 5 мл хлороформа растворяли 1,2 г цис-2,6-диметилпиперазина, к которому добавляли 3,0 г продукта со стадии 4 с охлаждением на ледяной бане. По окончании реакции все промывали водным раствором №₂СО₃. затем водой, высушивали с Ν;·ι₂8Ο₄ и перекристаллизовывали с этилацетатом до получения 3,2 г сухого остатка желтого цвета.

Выход составлял 81,2%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 202-203°С.

МС (РАВ) составляла 519,2 (М+1).

Ή ЯМР (ДМСО-6₆) (м.д.) δ: 0,92-0,96 (м, 9Н), 1,34-1,40 (м, 6Н), 1,72-1,78 (м, 4Н), 2,75-2,86 (м, 4Н), 3,47 (д, 2Н), 4,23 (кв, 2Н), 4,96 (кв, 2Н), 7,39 (д, 1Н), 7,89 (кв, 1Н), 7,94 (д, 1Н).

Подтверждали, что полученный продукт является желательным продуктом.

Пример 2. Синтез 5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-нпропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло 14,3-61 пиримидин-7 -тиона.

(По формуле (II), в которой Βι представляет собой н-пропил, К₂ является метилом, К₃ является этилом и К₄ и К₅ являются метилом), соединение (2).

Стадия 1. Синтез 4-(2-этоксибензоиламидо)-1-метил-3-н-пропилпиразолил-5-формамида.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества 1-метил-3-нпропил-4-амино-пиразолил-5-формамид, согласно стадии 1 из примера 1.

Выход составил 75,1%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 155,5-156,5°С.

- 5 011091

МС (РАВ) составляла 331 (М+1).

Стадия 2. Синтез 5-(2-этоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3б| пиримидин-7-она.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества

4- (2-этоксибензоиламидо)-1-метил-3-н-пропилпиразол-5-формамид, согласно стадии 2 из примера 1.

Выход составил 82,6%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 147-149°С.

Элементный анализ: С|-Н₂ОМ-|О₂ рассчитанные данные: С составляет 65,38%, Н составляет 6,41%, N составляет 17,95%, выявленные данные: С составляет 65,47%, Н составляет 6,28%, N составляет 17,74%.

МС (РАВ) составляла 313 (М+1).

Стадия 3. Синтез 5-(2-этоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3б] пиримидин-7 -тиона.

5- (2-этоксифенил)-1-метил-3 -н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло [4,3-б] пиримидин-7-он, согласно стадии 3 из примера 1.

Выход составил 78,7%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 156-158°С.

Ή ЯМР (ДМСО-б₆) (м.д.) δ: 0,94 (т, 3Н), 1,39 (т, 3Н), 1,77 (кв, 2Н), 2,83 (т, 2Н), 4,19 (кв, 2Н), 4,44 (с, 3Н), 7,11 (т, 1Н), 7,19 (д, 1Н), 7,53 (т, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 13,29 (с, 1Н).

МС (РАВ) составляла 329 (М+1).

Стадия 4. Синтез 5-(5-хлорсульфонил-2-этоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло[4,3-б]пиримидин-7-тиона.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества 5-(2-этоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-б]пиримидин-7-тион со стадии 4 из примера 1.

Выход составил 74,9%.

Стадия 5. Синтез 5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-нпропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-б]пиримидин-7-тиона (соединение (2)).

В трехгорлой круглодонной колбе объемом 100 мл в 10 мл хлороформа растворяли 1,5 г цис-2,6-диметилпиперазина, к которому добавляли 3,0 г продукта со стадии 4 с охлаждением на ледяной бане. После добавления реагенты непрерывно перемешивали в течение 1 ч. По окончании реакции все промывали водным раствором Ν;·ι₂ί.Ό₂,. затем водой, высушивали, выпаривали и перекристаллизовывали с этилацетатом до получения 2,8 г сухого остатка светло-желтого цвета.

Выход составлял 79,0%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 196-199°С.

МС (РАВ) составляла 505 (М+1).

Ή ЯМР (ДМСО-б₆) (м.д.) δ: 0,92-0,96 (м, 9Н), 1,36 (т, 3Н), 1,71-1,79 (м, 4Н), 2,74-2,78 (м, 2Н), 2,82 (т, 2Н), 3,47 (м, 2Н), 4,24 (кв, 2Н), 4,45 (с, 3Н), 7,38 (д, 1Н), 7,84 (дд, 1Н), 7,94 (д, 1Н).

Элементным анализом подтверждали, что продукт является С^Н^НзО^.

Пример 3. Синтез 5-[2-метокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-нпропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-б]пиримидин-7-тиона.

(По формуле (II), в которой Κι представляет собой н-пропил, К₂ является метилом, Κ₃, является метилом и К₃ и К₅ являются метилом), соединение (3).

Стадия 1. Синтез 4-(2-метоксибензоиламидо)-1-метил-3-н-пропилпиразол-5-формамида.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества 1-метил-3-нпропил-4-аминопиразол-5-формамид и о-метоксибензоила хлорид со стадии 1 из примера 1.

Выход составил 74,9%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 125-126°С.

Ή ЯМР (ДМСО-б₆) (м.д.) δ: 0,93 (т, 1=7,3 Гц, 3Н), 1,73 (кв, 1=7,3 Гц, 2Н), 2,77 (т, 1=7,5 Гц, 2Н), 3,84 (с, 3Н), 4,15 (с, 3Н), 7,07 (т, 1=7,5 Гц, 1Н), 7,16 (д, 1=8,3 Гц, 1Н), 7,50 (т, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,61 (д, 1=7,5 Гц, 1Н), 11,95 (шир., 1Н).

МС (РАВ) составляла 317 (М+1).

Стадия 2. Синтез 5-(2-метоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3б]пиримидин-7-она.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества продукт стадии (1), со стадии 2 из примера 1.

Выход составил 83,8%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 140-141°С.

МС (РАВ) составляла 299 (М+1).

- 6 011091

Стадия 3. Синтез 5-(2-метоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-й]пиримидин-7-тиона.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества 5-(2-метоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-й]пиримидин-7-он со стадии 3 из примера 1.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 160-161°С.

МС (ТАВ) составляла 315 (М+1).

Ή ЯМР (ДМСО-й₆) (м.д.): δ: 0,93 (т, 3Н), 1,74 (м, 2Н), 2,8 (т, 2Н), 3,87 (с, 3Н), 4,44 (с, 3Н), 7,10 (т, 1Н), 7,20 (д, 1Н), 7,54 (т, 1Н), 7,68 (д, 1Н), 13,38 (с, 1Н).

Стадия 4. Синтез 5-(5-хлорсульфонил-2-метоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло [4,3-й] пиримидин-7 -тиона.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества продукт со стадии 3 по стадии 4 из примера 1.

Выход составил 83,8%.

Стадия 5. Синтез 5-[2-метокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-нпропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло [4,3-й] пиримидин-1-тиона (соединение (3)).

В 5 мл хлороформа растворяли 2,0 г цис-2,6-диметилпиперазина, к которому добавляли 3,0 г продукта со стадии 4 с охлаждением на ледяной бане. По окончании реакции реакционную смесь промывали водным раствором Ыа₂СО₃, высушивали с Ыа₂8О₄ и перекристаллизовывали с этанолом до получения 2,8 г сухого остатка желтого цвета.

Выход составлял 78,5%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 214-215°С.

Ή ЯМР (ДМСО-й₆) (м.д.) δ: 0,91-0,96 (м, 9Н), 1,72-1,83 (м, 4Н), 2,79-2,89 (м, 4Н), 3,53 (д, 2Н), 3,94 (с, 3Н), 4,44 (с, 3Н), 7,39-7,42 (м, 1Н), 7,87-7,89 (м, 2Н).

МС (РАВ) составляла 491 (М+1).

Пример 4. Синтез 5-[2-пропокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-нпропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло [4,3-й] пиримидин-7 -тиона.

(По формуле (II), в которой К представляет собой н-пропил, К₂ является метилом, К₃ является пропилом и К₄ и К₅ являются метилом), соединение (4).

Стадия 1. Синтез 4-(2-пропоксибензоиламидо)-1-метил-3-н-пропилпиразол-5-формамида.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества 1-метил-3-нпропил-4-аминопиразол-5-формамид и о-пропоксибензоила хлорид со стадии 1 из примера 1.

Выход составил 71,4%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 150-151°С.

МС (РАВ) составляла 345 (М+1).

Стадия 2. Синтез 5-(2-н-пропоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-й]пиримидин-7-она.

4- (2-пропоксибензоиламидо)-1-метил-3-н-пропилпиразол-5-формамид по стадии 2 из примера 1.

Выход составил 86,0%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 115-116°С.

МС (РАВ) составляла 327 (М+1).

Стадия 3. Синтез 5-(2-н-пропоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3й] пиримидин-7 -тиона.

5- (2-н-пропоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-й]пиримидин-7-он со стадии 3 из примера 1.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 111-112°С.

МС (РАВ) составляла 343 (М+1).

Ή ЯМР (ДМСО-й₆) (м.д.) δ: 0,94 (т, 3Н), 0,999 (т, 3Н), 1,77 (м, 4Н), 2,83 (т, 2Н), 4,09 (т, 2Н), 4,44 (с, 3Н), 7,11 (т, 1Н), 7,20 (д, 1Н), 7,53 (т, 1Н), 7,81 (т, 1Н), 13,26 (с, 1Н).

Стадия 4. Синтез 5-(5-хлорсульфонил-2-н-пропоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло[4,3-й]пиримидин-7-тиона.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества 5-(2-н-пропоксифенил)-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-й]пиримидин-7-тион по стадии 4 из примера 1.

Стадия 5. Синтез 5-[2-пропокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-нпропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-й]пиримидин-7-тиона (соединение (4)).

В 5 мл хлороформа растворяли 2,0 г цис-2,6-диметилпиперазина, к которому добавляли 3,5 г продукта со стадии 4 с охлаждением на ледяной бане. По окончании реакции реакционную смесь промывали

- 7 011091 водным раствором №ьСО₃. высушивали с Иа₂8О₄ и перекристаллизовывали с этанолом до получения 3,2 г сухого остатка желтого цвета.

Выход составлял 76,8%.

Точка плавления этого продукта (т.п.) 222-226°С.

'|| ЯМР (ДМСО-6₆) (м.д.) δ: 0,89-0,99 (м, 12Н), 1,71-1,83 (м, 6Н), 2,80-2,84 (м, 4Н), 3,51 (д, 2Н), 4,15 (т, 2Н), 4,45 (с, 3Н), 7,39 (д, 1Н), 7,85 (дд, 1Н), 7,95 (д, 1Н).

МС (РАВ) составляла 519 (М+1).

Пример 5. Синтез 5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-этил-3-нпропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло 14,3-61 пиримидин-7 -тиона.

(По формуле (II), в которой Κι представляет собой н-пропил, К₂ является этилом, К₃ является этилом и Р₃ и К₅ являются метилом), соединение (1).

Стадия 1. Синтез 5-(5-хлорсульфонил-2-этоксифенил)-1-этил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло [4,3 -б| пиримидин-7-она.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества 5-(2-этоксифенил)-1-этил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-6]пиримидин-7-он, продукт стадии 2 из примера 1 в соответствии со стадией 4 из примера 1.

Выход составил 80,2%.

Стадия 2. Синтез 5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-этил-3-н-пропил-

1,6-дигидро-7Н-пиразоло [4,3-6] пиримидин-7-она.

Указанное в заголовке соединение синтезировали, взяв в качестве исходного вещества продукт стадии 1 по стадии 5 из примера 1.

Выход составил 82,3%.

Стадия 3. Синтез 5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-этил-3-н-пропил-

1,6-дигидро-7Н-пиразоло [4,3-6] пиримидин-7-тиона.

В 30 мл толуола растворяли 4,5 г продукта стадии (2) и в трехгорлую круглодонную колбу объемом 100 мл добавляли 1,5 г 2,4-бис-(п-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфида (реагента Лоуссона) и кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Контроль за реакцией осуществляли тонкослойной хроматографией (проявителем являлась смесь хлороформа/метанола в соотношении 100:1). После завершения реакции толуол удаляли в вакууме. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворяли добавлением хлороформа, растворяли и промывали 2н. ИаОН и дважды промывали водой. Органический слой высушивали с Иа₂8О₄, выпаривали и перекристаллизовывали с этанолом с получением сухого остатка желтого цвета.

Выход составлял 87,5%.

Пример 6. Приготовление 5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил3-н-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-6]пиримидин-7-тиона цитрата.

В 5 мл метанола растворяли 0,25 г моногидрата цитрата. К этому раствору при интенсивном перемешивании добавляли 0,5 г соединения 2, полученного в примере 2. Затем раствор перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, кристаллизовали, фильтровали и промывали до получения 0,6 г сухого остатка желтого цвета.

Точка его плавления т.п. 200-202°С.

Другие соли соединений настоящего изобретения можно получать, используя подобные способы.

Пример 7. Исследование влияния производных пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения на пенильную эрекцию у крыс с удаленными яичками.

Способы.

В исследовании использовали сорок здоровых взрослых самцов крыс линии Вистар с весом тела в пределах от 230 до 250 г. Крыс анестезировали фенобарбиталом натрия и в мошонке зажимали яички. С соблюдением стерильности мошонку рассекали скальпелем. Яички и придатки яичек в указанном порядке удаляли, затем накладывали лигатуры. На рану накладывали швы, и вводили 100000 единиц пенициллина каждой крысе в течение трех следующих дней. Крыс использовали для исследования после наблюдения в течение одной недели. Животных могли использовать неоднократно, с интервалом между каждыми двумя исследованиями в одну неделю. Крысам перорально вводили следующие соединения: соединение (1), соединение (2), соединение (3) и соединение (4), каждое в дозе 40 и 20 мг/кг соответственно. Силденафил в дозе 50 мг/кг использовали в качестве позитивного контроля. Контрольной группе вводили 1% натрия карбоксиметилцеллюлозу. Через 35 мин после введения проводили стимуляцию полового члена крыс стимулятором 8ΕΝ-3201 (МНОЙ КОНИЕИ, Япония) со следующими параметрами: напряжение стимуляции составляло 10У, интервал времени (Т1) 250 мс, время задержки (Т2) составляло 10 мс, продолжительность (Т3) составляла 500 мкс и скорость возбуждения (п) составляла 25. Одновременно трехканальным секундомером регистрировали латентный период пенильной эрекции (с) и время наполнения полового члена (мин).

- 8 011091

Результаты показаны в табл. 1. По результатам определяется, что соединения (1)-(4) несомненно сокращают латентный период пенильной эрекции (Р<0,001) и увеличивают время наполнения полового члена у крыс с удаленным яичком. По сравнению с другими соединениями у соединений (1) и (2) выявлены более значительные эффекты (Р<0,001). Наблюдались выраженные дозозависимые эффекты. Время наполнения полового члена у крыс, которым вводили соединения (1) и (2), более очевидно, чем это время у крыс, которым вводили лекарственный препарат Силденафил в качестве позитивного контроля.

Таблица 1

Влияние соединений настоящего изобретения на латентный период пенильной эрекции, вызванной стимуляцией электрическим током и время наполнения полового члена у крыс с удаленными яичками

Соединение	Доза (мг/кг)	Животное №	Латентный период (секунды)	Время наполнения полового члена (секунды)
Контроль	—	8	53,018,7	78116,4
Соединение (1)	20	8	28,811,7’	1305, 11588,8^*
Соединение (1)	40	8	29, 514,2”*	2943,11552, 'Г⁷¹¹
Соединение (2)	10	8	29,514,2*	1069,81621,З⁷
Соединение (2)	20	8	29,514,2*	1480,51469,7”’
Соединение (2)	40	8	30,113,9”*	2675,51769,2*”“
Соединение (3)	20	б	32,814,4***	551,81350,8’
Соединение(3)	40	8	30,412,6***	809,61247,5
Соединение (4)	20	б	31,813,Г”	304,51174,1”
Соединение (4)	20	8	31,9+4,5’	629,91550,2
Силденафил	50	8	28,911,7*“	2272,51326,.

*Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001 по сравнению с контрольной группой; *Р<0,05 по сравнению с Силденафилом.

Пример 8. Исследование продолжительности пенильной эрекции, вызванной соединением (2) у крыс с удаленными яичками.

Способы.

В исследовании использовали сорок здоровых взрослых самцов крыс линии Вистар с весом тела в пределах от 240 до 270 г. Крысам перорально вводили соединение (2) в дозах 40, 20 и 10 мг/кг соответственно. В качестве позитивного контроля вводили Силденафил в дозе 50 мг/кг. Контрольной группе вводили 1% натрия карбоксиметилцеллюлозу. Через 1, 3, 6 и 24 ч после введения проводили стимуляцию полового члена крыс стимулятором 8ΕΝ-3201 (Ν!ΗΟΝ ΚΟΗΌΕΝ, Япония) со следующими параметрами: напряжение стимуляции составляло 10У, интервал времени (Т1) 250 мс, время задержки (Т2) составляло 10 мс, продолжительность (Т3) составляла 500 мкс и скорость возбуждения (п) составляла 25. Одновременно трехканальным секундомером регистрировали латентный период пенильной эрекции (с) и время наполнения полового члена (мин).

Результаты показаны в табл. 2. По результатам определяется, что соединение (2) в дозах 40 и 20 мг/кг может достигать продолжительности наполнения полового члена у крыс с удаленным яичком до 24 ч. Наблюдались выраженные дозозависимые эффекты. Эффект был несомненно выше, чем таковой у Силденафила, используемого в качестве позитивного контроля. У крыс, которым вводили Силденафил, время наполнения полового члена составляло 1 ч и время наполнения полового члена было короче, чем это время у контрольной группы через 3 ч после введения.

- 9 011091

Таблица 2

Влияние соединения (2) на продолжительность пенильной эрекции у крыс с удаленными яичками

Группа	Доза (мг/мг)	Время наполнения полового члена (секунды)
		Значение до введения	Через 1 час после введения	Через 3 часа после введения	Через 6 часов после введения	Через 24 часа после введения
Контрольная группа		77,6+28,2	78,0+16,4	63,6+20,6	78,1±49,4	66,0116,8
Соединение (2)	ίο	67,7±12,3	679,6+513,2'	544,71166,9”'	268,71146,2'	98,6+57, 9
Соединение (2)	20	82,4126,6	1514,81258,9”'	906,0+406,7*”	275,81154,2”’	201,0±85,7
Соединение (2)	40	84,0118,4	2187,11547,8’	783,01329,2*”	678,71221,8”’	194,0±65,1
Силденафил	50	62,817,7	1067,01204,5”*	44,0±11,3*^и	38,8±5,6'··	61,0±8,7

*Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001 по сравнению с контрольной группой; ### р<0,05, Силденафил, по сравнению с соединением (2).

Пример 10. Влияние производных пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения на половую функцию у мышей с удаленными яичками.

Способы.

В исследовании использовали сорок здоровых самцов мышей КМ с весом тела в пределах от 28 до 32 г и сорок здоровых самок мышей КМ с весом тела в пределах от 24 до 28 г. Каждого самца мыши анестезировали фенобарбиталом натрия, и в мошонке зажимали яички. С соблюдением стерильности мошонку рассекали скальпелем. Яички и придатки яичек в указанном порядке удаляли, затем накладывали лигатуры. На рану накладывали швы, и вводили 100000 единиц пенициллина каждой мыши в течение трех следующих дней. После наблюдения в течение одной недели мышей использовали для исследования. Животных могли использовать неоднократно, с интервалом между каждыми двумя исследованиями в 72 ч. Мышам перорально вводили следующие соединения: соединение (1), соединение (2), соединение (3) и соединение (4), каждое в дозе 80 и 40 мг/кг соответственно. Силденафил в дозе 80 мг/кг использовали в качестве позитивного контроля. Контрольной группе вводили 1% натрия карбоксиметилцеллюлозу. Через 30 мин после введения самцов мышей, которым вводили вышеуказанные средства, помещали в клетки к самкам мышей, с соотношением самцов и самок 1:1. В каждой клетке находились три самца и три самки. Количество покрытий самцами самок мышей и процент спариваний наблюдали в течение 2 ч после введения.

Результаты показаны в табл. 3. По результатам определяется, что количество покрытий самок самцами составляло соответственно 11, 20 и 16 раз в течение 2 ч, после того как самцам мышей перорально вводили соединение (2) в дозе 40 и 80 мг/кг и контрольный лекарственный препарат Силденафил в дозе 80 мг/кг. Процент покрытий составлял 60, 80 и 70%. Выявлено значительное (Р<0,01) различие по сравнению с контрольной группой, в которой наблюдали одно покрытие и процент, равный 10%. Результаты, проявленные соединением (2), были сходны с результатами позитивного контроля лекарственным препаратом Силденафилом.

Таблица 3

Влияние производных пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения на половую функцию мышей с удаленными яичками

Соединение	Доза (мг/кг)	Номер животного	Количество животных, совершивших покрытие	Число покрытий	Процент (%)
Контрольная группа		10	1	1	10
Соединение (1)	80	10	4	7*	40
Соединение (1)	40	10	3	4	30
Соединение (2)	80	10	8³⁴	20	80
Соединение (2)	40	10	6*	11*	60
Соединение (3)	80	10	3	4	30
Соединение (3)	40	10	2	2	20
Соединение (4)	80	10	3	5	30
Соединение (4)	40	10	2	3	20
Силденафил	80	10	6*	16	70

*Р<0,05, **Р<0,01 по сравнению с контрольной группой.

- 10 011091

Пример 11. Влияние производных пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения на артериальное давление, частоту сердечных сокращений и частоту дыхания анестезированных собак.

Способы.

Использовали восемь здоровых кобелей с весом тела в пределах от 12 до 15 кг. Собак анестезировали фенобарбиталом натрия в дозе 30 мг/кг. Рассекали бедренную артерию и вставляли датчик артериального давления для его регистрации. В конечности вводили электроды для записи электрокардиограммы. Дыхательный пояс оборачивали вокруг грудной клетки, и регистрировали частоту дыхания. Использовали аппарат КМ-6000 Ро1удгарй зуйет (ΝΙΗΟΝ ΚΟΗΌΕΝ, Япония). После введения тестового соединения в желудок анестезированных собак посредством 14 катетера наблюдали изменения артериального давления, частоты сердечных сокращений и частоты дыхания.

Результаты показывают, что артериальное давление (систолическое давление и диастолическое давление), частота сердечных сокращений и дыхание (частота дыхания и глубина дыхания) испытуемых собак не претерпевают заметных изменений в пределах 3 ч после перорального приема соединения (1), соединения (2), соединения (3) и соединения (4) в дозе 40 мг/кг. Предполагается, что производные пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения не оказывают никакого значительного влияния на артериальное давление, частоту сердечных сокращений и дыхание собак. Вместе с тем, лекарственный препарат Силденафил (40 мг/кг) в качестве позитивного контроля имеет несомненный эффект уменьшения артериального давления, в основном за счет уменьшения диастолического давления у животных.

Пример 12. Влияние соединения (2) производных пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения на артериальное давление, частоту сердечных сокращений и частоту дыхания анестезированных крыс.

В исследовании использовали сорок здоровых самцов крыс линии Вистар с весом тела в пределах от 220 до 240 г. Использовали лекарственные препараты: соединение (2) и Силденафил, являвшиеся базовыми, затем вводили суспензию 1% натрия карбоксиметилцеллюлозы. Оборудование: Использовали аппарат с восьмиканальной системой КМ-6000 Ро1удгарй зуйет (ΝΙΗΟΝ ΚΟΗΌΕΝ, Япония). Вводимые дозы и разделение на группы было следующим: контрольной группе вводили растворитель (сокращенно указана как контрольная группа) и группы, которым вводили 20 мг/кг соединения (2), 40 мг/кг соединения (2), 80 мг/кг соединения (2) и 50 мг/кг Силденафила. Введение препаратов осуществляли через двенадцатиперстную кишку.

Способы.

Самцов крыс Вистар извлекали из клеток и анестезировали фенобарбиталом натрия в дозе 35 мг/кг, вводя его в брюшную полость в соответствии с весом тела. Крыс фиксировали на операционном столе и проводили операцию рассечения правой сонной артерии. Катетер с внешним диаметром 1 мм вводили в правую сонную артерию. Измеряли артериальное давление, и для записи электрокардиограммы с конечностей во ΙΙ отведении использовали электроды, помещенные на кожу четырех конечностей. Для введения лекарственных препаратов через разрез в эпигастральной области в двенадцатиперстную кишку вводили катетер со внешним диаметром 2 мм. Для регистрации данных использовали аппарат с восьмиканальной системой КМ-6000 (ΝΙΗΟΝ ΚΟΗΌΕΝ, Япония).

Время наблюдения: регистрировали значение показателей перед введением, значения на 15, 30, 60, 120 и 180 мин после введения.

1. Влияние соединения (2) на частоту сердечных сокращений анестезированных крыс показано в табл. 4. Результаты указывают, что соединение (2) в дозах 20, 40 и 80 мг/кг соответственно, вводимое через двенадцатиперстную кишку, не оказывает очевидного эффекта на частоту сердечных сокращений анестезированных крыс. Силденафил в дозе 50 мг/кг влияет на увеличение частоты сердечных сокращений крыс на 15 и 30 мин после введения.

Таблица 4

Влияние соединения (2) на частоту сердечных сокращений у анестезированных крыс

Группа	Доза (мг/кг)	№ животного	Частота сердечных сокращений (уд/мин)
Значение до введения	Через 15 мин после введения	Через 30 мин после введения	Через 60 мин после введения	Через 120 мин после введения
Контрольная группа		8	421132,6	423129,7	424+29,6	425+22,9	424+22,6
Соединение (2)	20	8	445±25,1	440±29,7	440±29,6	436+22,9	428122,6
Соединение (2)	40	8	429+42,8	422+29,7	427±29,6	425±22,9	424+22,6
Соединение (2)	80	8	439+22,6	439+29,7	442+29,6	436+22,8	438122,6
Силденафил	50	8	429126,1	445129,7	444129,6	437122,8	439+22,6

- 11 011091

Таблица 5

Влияние соединения (2) на систолическое давление у анестезированных крыс

	Группа	Доза (мг/кг)	№ животного	Систолическое давление (мм рт.ст Л
Значение до введения	Через 15 мин после введения	Через 30 мин после введения	Через 60 мин после введения	Через 120 мин после введения
Контрольная группа		8	130±13,7	132+29,7	131129,6	130122,9	134±22,6
Соединение(2)	20	8	134+7,2	132129,5	134+29,6	128+22,9	127+22,6
Соединение(2}	40	8	129+13,6	130+29,7	134129,6	122+22,9	133+22,6
Соединение(2)	80	8	126112,1	121+29,7	123+29,6	121+22,9	119+22,6

[	Силденафил \|	50 \|	8	120110,6	90129,7’”	90+29, 6'	88+22,9’”	\| 93122,6”

**Р<0,01, ***Р<0,01, по сравнению с контрольной группой и значениями до введения.

Таблица 6

Влияние соединения (2) на диастолическое давление у анестезированных крыс

Группа	Доза (мг/кг)	№ животного	Диастолическое давление (мм рт.ст.)
Значение до введения	Через 15 мин после введения	Через 30 мин после введения	Через 60 мин после введения	Через 120 мин после введения
Контрольная группа		8	109+14,1	110129,7	109+29,6	108+22,9	112+22,6
Соединение (2)	20	8	109+14,1	108129,7	104+29,6	101+22,9	102+22,6
Соединение (2)	40	8	109114,4	109+29,7	109129,6	109+22,9	112122,6
Соединение (2)	80	8	102+12,0	102129, 7	97+29,6	96122,9	94+22,6
Силденафил	50	8	98+16,0	68+29,7*	70+29,6*	68+22,9*	71+22, 6“

**Р<0,01, ***Р<0,01, по сравнению с контрольной группой и значениями до введения

2. Влияние соединения (2) на артериальное давление у анестезированных крыс показано в табл. 5 и 6. Результаты указывают, что соединение (2) в дозах 20, 40 и 80 мг/кг соответственно, вводимое через двенадцатиперстную кишку, не оказывает очевидного эффекта на систолическое давление и диастолическое давление у анестезированных крыс. Отмечено снижение артериального давления на 15 мин после введения Силденафила в дозе 50 мг/кг и у большинства животных показатели артериального давления не восстанавливались до уровня перед введением, при том что у некоторых отдельных животных наблюдалось снижение артериального давления, продолжавшееся до 4 или 5 ч.

Пример 13. Тест предварительной острой токсичности производных пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения.

Способы эксперимента: испытание на токсичность проводилось пероральным и интрагастральным введением производных пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения с использованием способа Блисса (Фе В1188 шсйюб). Доза лекарственного препарата, вызывающая гибель крыс в 50% случаев ЬП₅₀, составляла:

для соединения (1) ЬП₅₀>3000 мг/кг, доверительный интервал 95%>2500-3000 мг/кг;

для соединения (2) ЬП₅₀>3000 мг/кг, доверительный интервал 95%>3000 мг/кг;

для соединения (3) ЬП₅₀ 2500 мг/кг, доверительный интервал 95% 2500-3000 мг/кг;

для соединения (4) ЬП₅₀>3000 мг/кг, доверительный интервал 95%>3000 мг/кг.

Для Силденафила БО₅₀ доза составляла 635 мг/кг, с доверительным интервалом 95% в 50-672 мг/кг, по сообщению в журнале СЫиезе 1оигла1 οί С11шса1 РБаттасо1оду апб ТБегареибсз (1999, 4(3): 237-240).

Результаты показывают, что у соединения (2) БО₅₀ составляет более 3000 мг/кг, что указывает на то, что производные пиразолопиримидинтиона настоящего изобретения обладают очень низкой токсичностью, являющейся несомненно более низкой, чем токсичность контрольного лекарственного препарата Силденафил.

Промышленное применение

Соединения настоящего изобретения представляют собой мощные ингибиторы циклических гуанозин 3',5'-монофосфата фосфодиэстераз (цГМФ ФДЭ). Лекарственные препараты, в которых используются соединения настоящего изобретения для предотвращения и/или лечения импотенции и фригидности, обладают преимуществами, заключающимися в высокой селективности для фосфодиэстеразы 5, длительной продолжительности действия и незначительности побочных эффектов со стороны сердечнососудистой системы. Такие лекарственные препараты не снижают артериальное давление и не повышают частоту сердечных сокращений. Таким образом, такие лекарственные препараты будут обладать хорошими перспективами на рынке.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Производные пиразолопиримидинтиона, имеющие структуру формулы в которой

Κι, Κ₂ и Κ₃ являются одинаковыми или различными и независимо представляют собой С1_-6алкил; К₄ представляет собой С1_-6алкил;

К₅ представляет собой С1_-6алкил;

К₆ представляет собой водород, алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, алкенил, имеющий от 3 до 6 атомов углерода, циклоалкил, имеющий от 3 до 8 атомов углерода, или алкилацил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода.
2. Производные пиразолопиримидинтиона по п.1, отличающиеся тем, что указанные производные имеют структуру формулы в которой Κι, Κ₂, Κ₃, и Κ₅ независимо представляют собой алкил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода.
3. Производные пиразолопиримидинтиона по п.1, в которых указанные производные пиразолопиримидинтиона представляют собой

5-[2-метокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро7Н-пиразоло [4,3-б]пиримидин-7-тион;

5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-метил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло [4,3 -б] пиримидин-7 -тион;

5-[2-пропокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1 -метил-3 -н-пропил-1,6-дигидро7Н-пиразоло [4,3-б]пиримидин-7-тион;

5- [2-метокси-5 -(цис-3,5 -диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1 -этил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло [4,3 -б] пиримидин-7 -тион;

5-[2-этокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1-этил-3-н-пропил-1,6-дигидро-7Нпиразоло[4,3-б]пиримидин-7-тион или

5-[2-пропокси-5-(цис-3,5-диметилпиперазин-1-сульфонил)фенил]-1 -этил-3-н-пропил-1,6-дигидро7Н-пиразоло [4,3-б]пиримидин-7-тион.
4. Соли производных пиразолопиримидинтиона согласно любому из пп.1-3, отличающиеся тем, что указанные соли представляют собой соли органических кислот или неорганических кислот.
5. Соли по п.4, отличающиеся тем, что указанные соли органических кислот представляют собой цитрат, фумарат, оксалат, малат, лактат, камфоросульфонат, п-толуолсульфонат или метансульфонат; указанные соли неорганических кислот представляют собой соли галоидной кислоты, сульфат, фосфат или нитрат.
6. Сольваты соединений согласно любому из пп.1-5, отличающиеся тем, что растворителями являются вода, этанол или метанол.
7. Способ получения производных пиразолопиримидинтиона по п.1, содержащий реакцию соединения формулы (III) с соединением формулы (IV) до получения указанных производных пиразолопиримидинтиона

- 13 011091 в которой в соединениях формул (III) и (IV) Κι, К₂ и К₃ представляют собой С1_балкил;

К₄ представляет собой С₁_₆алкил;

К₅ представляет собой С₁_₆алкил;

К₆ представляет собой водород, алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, алкенил, имеющий от 3 до 6 атомов углерода, циклоалкил, имеющий от 3 до 8 атомов углерода, или алкилоил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода; и

Υ является С1, Е, Вг или I.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что растворителями, используемыми в реакции, являются хлороформ, тетрагидрофуран, диоксан, этанол, 1,2-диметоксиэтан, ксилол, толуол, диметилсульфоксид или триэтиламин.
9. Способ получения производных пиразолопиримидинтиона по п.1, содержащий в первую очередь реакцию соединения формулы (V) с соединением формулы (IV) до получения соединения формулы (VI) и затем сульфирование указанного соединения формулы (VI) до получения указанных производных пиразолопиримидинтиона в которых соединения формул (ГУ)-(У1) и К_ь К₂ и К₃ являются одинаковыми или различными и независимо представляют собой С_1-6алкил;

К₄ представляет собой С_1-6алкил;

К₅ представляет собой С_1-6алкил;

К₆ представляет собой водород, алкил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, алкенил, имеющий от 3 до 6 атомов углерода, циклоалкил, имеющий от 3 до 8 атомов углерода, или алкилоил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода; и

Υ является С1, Е, Вг или I.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что растворителем для реакции сульфирования является тетрагидрофуран, диоксан, 1,2-диметоксиэтан, этанол, ксилол, толуол, диметилсульфоксид или триэтиламин.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что сульфирующим реагентом для указанного сульфирования является пентасульфид фосфора или 2,4-бис-(п-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4дисульфид и их производные и температура составляет от 20 до 200°С.
12. Способ получения солей производных пиразолопиримидинтиона по п.4, включающий реакцию указанных производных пиразолопиримидинтиона по п.1 с фармацевтически приемлемыми кислотами до получения указанных солей.
13. Лекарственный препарат, содержащий производные пиразолопиримидинтиона по п.1, или 2, или 3 в качестве активного компонента для предотвращения и/или лечения импотенции.
14. Лекарственный препарат, содержащий производные пиразолопиримидинтиона по п.1, или 2, или 3 в качестве активного компонента для предотвращения и/или лечения фригидности.
15. Лекарственный препарат, содержащий соли производных пиразолопиримидинтиона по п.4 или 5 в качестве активного компонента для предотвращения и/или лечения импотенции.
16. Лекарственный препарат, содержащий соли производных пиразолопиримидинтиона по п.4 или 5 в качестве активного компонента для предотвращения и/или лечения фригидности.
17. Лекарственный препарат, содержащий сольваты производных пиразолопиримидинтиона по п.6 в качестве активного компонента для предотвращения и/или лечения импотенции.
18. Лекарственный препарат, содержащий сольваты производных пиразолопиримидинтиона по п.6 в качестве активного компонента для предотвращения и/или лечения фригидности.
19. Лекарственный препарат, содержащий производные пиразолопиримидинтиона по п.1, или 2, или 3 или их соли или сольваты в качестве активного компонента для предотвращения и/или лечения