EA008763B1 - Standardised steroid saponin mixture, a method of its obtaining and application - Google Patents
Standardised steroid saponin mixture, a method of its obtaining and application Download PDFInfo
- Publication number
- EA008763B1 EA008763B1 EA200501170A EA200501170A EA008763B1 EA 008763 B1 EA008763 B1 EA 008763B1 EA 200501170 A EA200501170 A EA 200501170A EA 200501170 A EA200501170 A EA 200501170A EA 008763 B1 EA008763 B1 EA 008763B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- butanol
- extraction
- washing
- saponins
- water
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 150000005856 steroid saponins Chemical class 0.000 title abstract 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims abstract description 17
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 claims description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229930002600 steroidal saponin Natural products 0.000 claims description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 5
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 2
- 150000001348 alkyl chlorides Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims 1
- 241001533104 Tribulus terrestris Species 0.000 abstract 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 abstract 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 abstract 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 abstract 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 230000003641 microbiacidal effect Effects 0.000 description 5
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- LVTJOONKWUXEFR-UEZXSUPNSA-N protodioscin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)O)O[C@@H]1CC2=CC[C@H]3[C@@H]4C[C@@H]5O[C@]([C@H]([C@@H]5[C@@]4(C)CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)(O)CC[C@@H](C)CO[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O LVTJOONKWUXEFR-UEZXSUPNSA-N 0.000 description 3
- MHKGPHKABOLURA-JNVLQWCMSA-N protodioscin Natural products C[C@@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]3O)[C@H](O[C@H]4CC[C@]5(C)[C@H]6CC[C@@]7(C)[C@@H](C[C@@H]8O[C@](O)(CCCCO[C@@H]9O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]9O)[C@@H](C)[C@H]78)[C@@H]6CC=C5C4)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O MHKGPHKABOLURA-JNVLQWCMSA-N 0.000 description 3
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 2
- XIURVHNZVLADCM-IUODEOHRSA-N cefalotin Chemical compound N([C@H]1[C@@H]2N(C1=O)C(=C(CS2)COC(=O)C)C(O)=O)C(=O)CC1=CC=CS1 XIURVHNZVLADCM-IUODEOHRSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION
Данное изобретение относится к стандартизованной смеси стероидных сапонинов, полученной из надземной части ТпЬи1и5 (еггейпк Ь. для применения в приготовлении лекарственных средств, проявляющих уже известный эффект усиления полового влечения в дополнение к лекарственным средствам с новыми показаниями. Данное изобретение относится также к способу получения стандартизованной смеси стероидных сапонинов, полученной из надземной части ТпЬи1и5 (еггеЧгй Ь.The present invention relates to a standardized mixture of steroidal saponins obtained from the aerial part of Tb1i5 and 5 (eggebk b. For use in the preparation of drugs exhibiting the already known effect of enhancing sex drive in addition to drugs with new indications. This invention also relates to a method for producing a standardized mixture steroidal saponins obtained from the aerial part of Trb1i5
Предшествующий уровень техникиState of the art
Известно, что существует способ выделения стандартизованной смеси стероидных сапонинов, полученной из надземной части ТпЬи1и5 (еггейпк Ь. (патент ВС 52085). Задачей данного способа является достижение высокого уровня концентрации фуростаноловых сапонинов в стандартизованной смеси стероидных сапонинов. Способ включает проведение экстрагирования лекарственного материала с использованием раствора низкомолекулярного спирта с концентрацией до 70%, в частности этанола, затем обработки хлороформом и экстрагирования из водного раствора с использованием насыщенного водой нбутанола, с последующим концентрированием бутанольного экстракта до 1/8 объема, после чего полученный таким образом остаток отделяют и сушат, тогда как остатки из маточных жидкостей являются водорастворимыми, и их затем добавляют непосредственно в обрабатываемый хлороформом водный раствор. В соответствии с описанными примерами, таким образом, получают стандартизованную смесь, причем указанная смесь содержит от 50 до 55% фуростаноловых сапонинов, в расчете на основе протодиосцина. Выход составляет от 1,7 до 2%, в зависимости от содержания сапонинов в растительном материале.It is known that there is a method for isolating a standardized mixture of steroidal saponins obtained from the aerial part of Tb1i5 and 5 (ergap. (Patent Patent No. 52085). The objective of this method is to achieve a high concentration of furostanol saponins in a standardized mixture of steroidal saponins. The method involves extracting the medicinal material using a solution of low molecular weight alcohol with a concentration of up to 70%, in particular ethanol, then treatment with chloroform and extraction from an aqueous solution using using saturated with water nbutanol, followed by concentration of the butanol extract to 1/8 volume, after which the residue thus obtained is separated and dried, while the residues from the mother liquids are water soluble and then added directly to the aqueous solution treated with chloroform. examples, thus, get a standardized mixture, and this mixture contains from 50 to 55% of furostanol saponins, calculated on the basis of protodioscin. The yield is from 1.7 to 2%, depending on the content of saponins in the plant material.
Продукт, полученный при помощи данного способа и содержащий 50-55% фуростаноловых сапонинов, оказывает стимулирующее действие на функции репродуктивной системы. Согласно описанию изобретения полученная стандартизованная смесь стероидных сапонинов используется в приготовлении таблеток с покрытием, содержащих вещество трибестан.The product obtained using this method and containing 50-55% of furostanol saponins has a stimulating effect on the functions of the reproductive system. According to the description of the invention, the obtained standardized mixture of steroidal saponins is used in the preparation of coated tablets containing the substance tribestan.
В литературе не описано других экспериментов, направленных на достижение более высокой концентрации фуростаноловых сапонинов в экстракте, полученном из надземной части ТпЬи1и5 1егге51п5 Ь., для усиления его известной биологической активности.No other experiments have been described in the literature aimed at achieving a higher concentration of furostanol saponins in the extract obtained from the aerial part of Trb1i5 and 5Ge51n5b5 to enhance its known biological activity.
Задача, решенная данным изобретением, состоит в экстрагировании из надземной части ТпЬи1и5 1епе51г15 Ь. вещества, содержащего высокий уровень фуростаноловых сапонинов, которые можно использовать для получения новых лекарственных средств с новыми показаниями для применения.The problem solved by this invention is to extract from the above-ground part of Tbu1i5 1epe51r15 b. substances containing a high level of furostanol saponins, which can be used to obtain new drugs with new indications for use.
Сущность изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION
В соответствии с данным изобретением задача решена путем получения стандартизованной смеси стероидных сапонинов, содержащей более 80% фуростаноловых сапонинов. Способ получения состоит в том, что измельченный растительный материал из надземной части ТпЬи1и5 1егге51г15 Ь. подвергают экстрагированию с использованием водного метанольного растворителя с соотношением воды/метанола, находящимся в интервале от 1:1 до 1:99 при температуре от 50 до 55°С. Экстракт затем обрабатывают активированным углем и после фильтрования концентрируют под вакуумом до тех пор, пока метанол не удалится полностью. Водный концентрат затем подвергают экстрагированию дихлорметаном. Дихлорметан затем отгоняют и регенерируют для дальнейшего использования при данном способе. Очищенный таким образом водный раствор подкисляют соляной кислотой до рН 3-5 и подвергают экстрагированию насыщенным водой н-бутанолом известным способом. Бутанольные экстракты затем очищают с использованием двух методик. Первая методика состоит в промывании бутанольных экстрактов хлорида натрия и концентрировании под вакуумом с получением сухого остатка, который растворяют в низкомолекулярном спирте. Раствор, полученный таким образом, добавляют каплями в ацетон и оставляют при температуре 10-15°С в течение 24 ч, затем фильтруют, промывают ацетоном и сушат. Вторая методика состоит в том, что бутанольные экстракты промывают 0,5-1,5%-ным раствором гидроксида натрия и после разделения двух слоев бутанольный слой промывают водой до достижения рН 7, затем бутанольные экстракты концентрируют под вакуумом до тех пор, пока органический растворитель не будет полностью удален, и остаток сушат. Таким образом, получают мягкий и светло-желтый порошок, содержащий более 80% фуростаноловых сапонинов. Выход из высушенного на воздухе растительного материала составляет приблизительно 3%.In accordance with this invention, the problem is solved by obtaining a standardized mixture of steroidal saponins containing more than 80% furostanol saponins. The production method consists in the fact that the crushed plant material from the aerial part of Tbl1i5 1gge51g15 b. subjected to extraction using an aqueous methanol solvent with a water / methanol ratio in the range from 1: 1 to 1:99 at a temperature of from 50 to 55 ° C. The extract is then treated with activated carbon and, after filtration, concentrated in vacuo until methanol is completely removed. The aqueous concentrate is then extracted with dichloromethane. Dichloromethane is then distilled off and regenerated for further use in this method. The aqueous solution thus purified is acidified with hydrochloric acid to a pH of 3-5 and subjected to extraction with n-butanol saturated with water in a known manner. The butanol extracts are then purified using two methods. The first technique consists in washing the butanol extracts of sodium chloride and concentrating in vacuo to give a dry residue, which is dissolved in low molecular weight alcohol. The solution thus obtained was added dropwise to acetone and left at a temperature of 10-15 ° C. for 24 hours, then filtered, washed with acetone and dried. The second method consists in washing the butanol extracts with a 0.5-1.5% sodium hydroxide solution and after separating the two layers, the butanol layer is washed with water until pH 7 is reached, then the butanol extracts are concentrated in vacuo until the organic solvent will not be completely removed and the residue dried. Thus, a soft and light yellow powder is obtained containing more than 80% of furostanol saponins. The yield of air-dried plant material is approximately 3%.
Новый продукт согласно изобретению представляет собой стандартизованную смесь стероидных сапонинов, полученную из надземной части ТпЬи1и5 1егге51г15 Ь. и содержащую более 80% фуростаноловых сапонинов. Неожиданно этот новый продукт проявил качественно новые свойства в сравнении с известным продуктом, т. е. он обладает иммуномодулирующим и/или иммуностимулирующим действием.The new product according to the invention is a standardized mixture of steroidal saponins, obtained from the aerial part of Tpu1i5 5gge51g15 b. and containing more than 80% of furostanol saponins. Unexpectedly, this new product showed qualitatively new properties in comparison with a well-known product, i.e., it has an immunomodulating and / or immunostimulating effect.
Согласно данному изобретению способ его получения включает новую последовательность приемов, а также включает новые приемы и экстрагенты, представляя собой технологию, которая легко применима в промышленных условиях и позволяет обеспечить высокое содержание фуростаноловых сапонинов при вполне удовлетворительном выходе в промышленных масштабах.According to this invention, the method for its preparation includes a new sequence of methods, and also includes new methods and extractants, representing a technology that is easily applicable in an industrial environment and allows you to provide a high content of furostanol saponins at a very satisfactory yield on an industrial scale.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретенияInformation confirming the possibility of carrying out the invention
ПримерыExamples
Пример 1.Example 1
т измельченного растительного материала из надземной части ТпЬи1и5 1егге51г15 Ь. подвергаютt of crushed plant material from the aerial part of Trb1i5 5egge51g15 b. subject
- 1 008763 экстрагированию с использованием 70%-ного метанольного водного раствора при 50°С до истощения. Экстракт отцеживают, затем к нему добавляют активированный уголь. Полученное пропускают через фильтр-пресс. Экстрагированный раствор концентрируют под вакуумом при 60°С до полного удаления метанола. Водный концентрат, полученный таким образом, подвергают тройному экстрагированию дихлорметаном в соотношении к воде 1:2, 1:1 и 1:1, соответственно. Органический растворитель отгоняют и регенерируют, тогда как кубовой остаток отбрасывают. Очищенный таким образом водный экстракт подкисляют соляной кислотой до рН 4 и подвергают восьмикратному экстрагированию н-бутанолом, насыщенным водой, в соотношении 1:1. Бутанольные экстракты промывают 5%-ным раствором хлорида натрия и концентрируют до получения сухого остатка под вакуумом при 60°С и затем остаток растворяют в метаноле. Полученный раствор медленно капают в ацетон, оставляют при температуре 10°С в течение 20 ч и в конце фильтруют через нутч-фильтр, промывают ацетоном и сушат.- 1 008763 extraction using a 70% methanol aqueous solution at 50 ° C until depletion. The extract is drained, then activated carbon is added to it. The resulting is passed through a filter press. The extracted solution was concentrated in vacuo at 60 ° C until methanol was completely removed. The aqueous concentrate thus obtained is subjected to triple extraction with dichloromethane in a ratio of 1: 2, 1: 1 and 1: 1 to water, respectively. The organic solvent is distilled off and regenerated, while the bottom residue is discarded. The aqueous extract thus purified was acidified with hydrochloric acid to pH 4 and subjected to eight-fold extraction with n-butanol saturated with water in a ratio of 1: 1. The butanol extracts are washed with 5% sodium chloride solution and concentrated to obtain a dry residue in vacuo at 60 ° C and then the residue is dissolved in methanol. The resulting solution was slowly dropped into acetone, left at 10 ° C for 20 hours, and finally filtered through a suction filter, washed with acetone and dried.
В результате получают мягкий светло-желтый порошок, содержащий 85% фуростаноловых сапонинов. Выход составляет 3% от высушенного на воздухе растительного материала.The result is a soft, light yellow powder containing 85% furostanol saponins. The yield is 3% of the air-dried plant material.
Анализ продукта выполняют, исходя из протодиосцина (В. Оуц1ете1оуа, М. Тотоуа, М. Б1тоуа, Т. Рапдагоуа, Р11агта/1е. 37, Н.4 1982).Product analysis is performed based on protodioscin (V. Outseteouaoua, M. Totoua, M. Btoua, T. Rapdagoua, P11agta / 1e. 37, H.4 1982).
Пример 2.Example 2
т измельченного растительного материала из надземной части Тг|Ьн1н5 1еггез1г15 Ь. подвергают экстрагированию с использованием 70%-ного метанольного водного раствора при 50°С до истощения. Экстракт отцеживают, затем к нему добавляют активированный уголь. Полученное пропускают через фильтр-пресс. Экстрагированный раствор концентрируют под вакуумом при 60°С до полного удаления метанола. Водный концентрат, полученный таким образом, подвергают тройному экстрагированию дихлорметаном в соотношении к воде 1:2, 1:1 и 1:1, соответственно. Органический растворитель отгоняют и регенерируют, тогда как кубовой остаток отбрасывают. Полученный очищенный водный экстракт подкисляют соляной кислотой до рН 4 и подвергают восьмикратному экстрагированию н-бутанолом, насыщенным водой, в соотношении 1:1. Бутанольные экстракты промывают 1%-ным раствором гидроксида натрия, при этом отношение щелочной воды к бутанольному экстракту составляет 1:1, и после разделения двух слоев бутанольный слой промывают водой до достижения рН 7. Бутанольные экстракты затем концентрируют под вакуумом до тех пор, пока не удалят бутанол полностью, после чего остаток сушат.t of crushed plant material from the aerial part of Tg | Ln1n5 1ggez1g15 b. subjected to extraction using a 70% methanol aqueous solution at 50 ° C until depletion. The extract is drained, then activated carbon is added to it. The resulting is passed through a filter press. The extracted solution was concentrated in vacuo at 60 ° C until methanol was completely removed. The aqueous concentrate thus obtained is subjected to triple extraction with dichloromethane in a ratio of 1: 2, 1: 1 and 1: 1 to water, respectively. The organic solvent is distilled off and regenerated, while the bottom residue is discarded. The resulting purified aqueous extract was acidified with hydrochloric acid to pH 4 and subjected to eight-fold extraction with n-butanol saturated with water in a ratio of 1: 1. The butanol extracts are washed with a 1% sodium hydroxide solution, the ratio of alkaline water to butanol extract is 1: 1, and after the separation of the two layers, the butanol layer is washed with water until pH 7 is reached. The butanol extracts are then concentrated in vacuo until completely removed butanol, after which the residue is dried.
В результате получают мягкий и светло-желтый порошок, содержащий 83% фуростаноловых сапонинов. Выход составляет 3% от высушенного на воздухе растительного материала.The result is a soft and light yellow powder containing 83% furostanol saponins. The yield is 3% of the air-dried plant material.
Анализ продукта выполняют, исходя из протодиосцина (К. Оуц1ете1оуа, М. Тотоуа, М. Б1тоуа, Т. Рапдагоуа, Рйагта71е, 37, Н.4 1982).Product analysis is performed based on protodioscin (K. Outseteouaoua, M. Totoua, M. Btoua, T. Rapdagoua, Ryagta71e, 37, H.4 1982).
Результаты испытания воздействия смеси стероидов по данному изобретению на иммунную систему экспериментальных животныхThe test results of the effects of the steroid mixture of this invention on the immune system of experimental animals
Материал и методMaterial and Method
Растительный материал.Plant material.
Вещество, содержащее фуростаноловые сапонины (ФС), выделяли из Тг|Ьн1н5ЮггеЩй Ь. (21дорйу11асеае) в соответствии с данным изобретением. Лиофилизированные ФС хранили при 4°С защищенными от света и влаги. Раствор, используемый при экспериментах, готовили по мере потребности в физиологическом растворе.A substance containing furostanol saponins (PS) was isolated from Tg | (21doryu11aseae) in accordance with this invention. Lyophilized PSs were stored at 4 ° C protected from light and moisture. The solution used in the experiments was prepared as needed in physiological saline.
Экспериментальные животные и методика.Experimental animals and methods.
Самцам мышей 1СК (средний вес тела от 18 до 20 г) давали перорально разные дозы ФС в соответствии с описанием, представленным в табл. 1.Male 1SK mice (average body weight from 18 to 20 g) were given orally different doses of PS in accordance with the description presented in table. one.
Экспериментальная инфекция.Experimental infection.
Экспериментальную инфекцию вызывали у мыши путем подкожного введения 25-30 бактериальных клеток из 18-часовой выращенной на агаре культуры К1. Риеитошае (штамм № 52145, Институт Пастера, Париж). Доза заражения была выбрана после предварительных экспериментов, предназначенных для определения 50%-ного уровня выживаемости. Инфекция следовала в течение до 8 дней, причем учитывали общее состояние субъекта, уровень смертности (процент), уровень выживаемости и среднюю продолжительность выживания (СПВ8 в днях). Защитный эффект ФС оценивали по повышению уровня выживаемости и среднюю продолжительность выживания рассчитывали как разницу между результатами для экспериментальных групп и контрольных групп.An experimental infection was caused in the mouse by subcutaneous injection of 25-30 bacterial cells from an 18-hour K1 agar culture. Rieitoschae (strain No. 52145, Pasteur Institute, Paris). The dose of infection was chosen after preliminary experiments designed to determine a 50% survival rate. Infection followed for up to 8 days, taking into account the general condition of the subject, mortality rate (percentage), survival rate and average survival time (SST 8 in days). The protective effect of FS was evaluated by increasing the survival rate and the average survival time was calculated as the difference between the results for the experimental groups and control groups.
Испытание ίη уйго на антибактериальное подавляющее действие.Antimicrobial Suppressive Test ίη ugo.
Чувствительность клеток К1. Рпеитошае к ФС определяли, используя адаптированный вариант метода Бауэра (Ваиег) (4). В чашки Петри (100 мм), содержащие агар, засевали 0,2 мл бактериальной суспензии (10 клеток/мл). Делали лунки (10 мм) и заполняли 0,2 мл раствора ФС с разными концентрациями. Области подавления измеряли после инкубации в течение 24 ч при 37°С. В качестве положительного контроля использовали кефлин (Ь111у, США) с минимальными подавляющими концентрациями, равными 0,150 мг/мл.The sensitivity of K1 cells. Species to FS were determined using an adapted version of the Bauer (Waieg) method (4). 0.2 ml of bacterial suspension (10 cells / ml) were seeded in Petri dishes (100 mm) containing agar. Wells were made (10 mm) and filled with 0.2 ml of a FS solution with different concentrations. Inhibition regions were measured after incubation for 24 hours at 37 ° C. Keflin (L111y, USA) with minimal inhibitory concentrations of 0.150 mg / ml was used as a positive control.
Фагоцитарная и микробицидная активность альвеолярных макрофагов аМа.Phagocytic and microbicidal activity of alveolar macrophages aMa.
Альвеолярные макрофаги были получены промыванием легких ίη δίΐιι путем вливания и извлечения 0,1-1,0 мл раствора ТСМ 199, содержащего 20 мМ НЕРЕБ, 100 Ед/мл пенициллина и 0,1 мг/мл стрептоAlveolar macrophages were obtained by washing the ίη δίιι lungs by infusion and extraction of 0.1-1.0 ml of TCM 199 solution containing 20 mM NEREB, 100 U / ml penicillin and 0.1 mg / ml strepto
- 2 008763 мицина (ТЧахх РаЬ., иК) плюс 3 Ед/мл гепарина (О. КзсЫег, Нипдагу). Определяли среднее число вымытых аМа из каждой группы, и затем клетки помещали в инкубационные планшеты (ΒΏ8Ε, Шотландия) в концентрации 3х10 клеток/мл для оценки их фагоцитарной и микробицидной активности с использованием 3Н-тимидинового радиометрического метода (5).- 2 008763 mitsin (Tchakhkh Rab., IK) plus 3 U / ml of heparin (O. Kzsyeg, Nipdagu). The mean number of washed AMAs from each group was determined, and then the cells were placed in incubation plates (ΒΏ8Ε, Scotland) at a concentration of 3 × 10 cells / ml to assess their phagocytic and microbicidal activity using the 3 H-thymidine radiometric method (5).
Результатыresults
Защитное действие от инфекции.Protective effect against infection.
Результаты, полученные таким образом, показывают, что ФС влияют на ход и исход экспериментальной инфекции у мышей, вызванной К1. Рпеишотае. У леченых животных уровень смертности достигал максимума 30-40% на 4-ый - 5-ый день после инфицирования (см. нижеследующую фигуру). Пик уровня смертности в контрольных группах был значительно выше (70-80%) и наблюдался на 2-ой - 3-ий день после инфицирования. Подводя итог, введение ФС приводит к сниженной тяжести клинической картины, более низкому уровню смертности, пролонгированному времени выживания леченых животных.The results obtained in this way show that FS affect the course and outcome of experimental infection in mice caused by K1. Repeishotai. In treated animals, the mortality rate reached a maximum of 30-40% on the 4th - 5th day after infection (see the following figure). The peak mortality rate in the control groups was significantly higher (70-80%) and was observed on the 2nd - 3rd day after infection. To summarize, the introduction of FS leads to a reduced severity of the clinical picture, a lower mortality rate, and a prolonged survival time for the treated animals.
Противоинфекционное действие ФС меняется в соответствии с дозировкой и режимом введения (табл. 1). Наивысшая вводимая доза (625,0 мг/кг) давала самый сильный защитный эффект при всех 10дневных режимах введения, начиная с 35, 25 или 15 дня перед инфицированием; пик эффекта наблюдали, когда последнюю дозу ФС вводили за 15 дней перед инфицированием.The anti-infectious effect of FS varies in accordance with the dosage and mode of administration (Table 1). The highest administered dose (625.0 mg / kg) gave the strongest protective effect in all 10-day administration regimens, starting from 35, 25, or 15 days before infection; a peak effect was observed when the last dose of PS was administered 15 days before infection.
В противоположность заметной активности ίη νίνο, ФС не проявлял антибактериальной активности ίη νΐΐΓο. Раствор ФС в физиологической сыворотке при концентрациях 0,01; 0,025; 0,05; 0,1; 2,0; 5,0; 10,0; 25,0; 50,0; 100,0; 250,0 и 500,0 мг/мл не подавлял рост К1. Рпеишошае, в отличие от заметного подавления, наблюдаемого в группе, получавшей кефлин, со средним диаметром 21,5±1,0 мм.In contrast to the marked activity of ίη νίνο, the FS did not show antibacterial activity of ίη νΐΐΓο. A solution of FS in physiological serum at concentrations of 0.01; 0.025; 0.05; 0.1; 2.0; 5.0; 10.0; 25.0; 50.0; 100.0; 250.0 and 500.0 mg / ml did not inhibit K1 growth. Rpeishoshaye, in contrast to the marked suppression observed in the group of keflin, with an average diameter of 21.5 ± 1.0 mm
Стимуляция аМа.Stimulation of aMa.
Дозы в 625,0 мг/кг вызывают увеличение числа аМа и повышение их фагоцитарной и микробицидной активности с максимумом на 20-ый день после последнего введения ФС (табл. 2).Doses of 625.0 mg / kg cause an increase in the number of aMa and an increase in their phagocytic and microbicidal activity with a maximum on the 20th day after the last administration of PS (Table 2).
ОбсуждениеDiscussion
В отличие от других сапонинов (3), ФС не проявляют бактерицидного эффекта. ФС влияют на главные эффекторные механизмы клеточного и гуморального иммунитета, обеспечивая, таким образом, существенную защиту от инфекции. Оптимальная доза в 625,0 мг/кг, вводимая в течение последовательных 10 дней, является очень близкой к режиму (6), применяемому у людей. Самый сильный эффект, полученный при этом режиме, когда интервал между последним приемом ФС и инфицированием составляет 15 дней, можно объяснить динамикой активации аМа. Максимальное повышение их функциональной активности наблюдается на 20-ый день, что совпадает с острой фазой инфекции (день с 3 по 5). Большое число аМа с повышенной фагоцитарной и микробицидной способностью предотвращает прогрессирование инфекции и снижает уровень смертности, одновременно повышая уровень выживаемости. Очевидно, защитный эффект ФС полностью достигается только после данного периода времени, необходимого для реакции иммунной системы. ФС активирует аМа, которые играют значительную роль в антибактериальной защите легких, в частности излечении инфекций, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, такими как К1. Рпеишотае (6).Unlike other saponins (3), PS do not exhibit a bactericidal effect. FS affect the main effector mechanisms of cellular and humoral immunity, thus providing significant protection against infection. The optimal dose of 625.0 mg / kg, administered for consecutive 10 days, is very close to the regimen (6) used in humans. The strongest effect obtained in this mode, when the interval between the last administration of PS and infection is 15 days, can be explained by the dynamics of aMa activation. The maximum increase in their functional activity is observed on the 20th day, which coincides with the acute phase of infection (day 3 to 5). A large number of AMA with increased phagocytic and microbicidal ability prevents the progression of infection and reduces mortality, while increasing survival. Obviously, the protective effect of FS is fully achieved only after a given period of time necessary for the reaction of the immune system. PS activates AMA, which play a significant role in the antibacterial protection of the lungs, in particular the treatment of infections caused by opportunistic microorganisms such as K1. Repeishotai (6).
Иммуностимулирующие свойства ФСImmunostimulating properties of FS
Таблица 1Table 1
ФС-индуцированный противоинфекционный эффект в отношении экспериментальной инфекции, вызванной К1. РпеишотаеFS-induced anti-infection effect in relation to experimental infection caused by K1. Rpeishotai
Ь Дни. B days.
с Доза (мг/кг). c Dose (mg / kg).
ά Изменение (□) уровня выживаемости (%). ά Change (□) in survival rate (%).
е Изменение (□) средней продолжительности выживания (дни). e Change (□) in median survival (days).
- 3 008763- 3 008763
Представленные выше результаты являются типичными данными, полученными из трех независимых экспериментов с использованием разных экспериментальных животных.The results presented above are typical data obtained from three independent experiments using different experimental animals.
Иммуномодулирующие свойства ФСImmunomodulating properties of FS
Таблица 2table 2
Активация аМа у мышей, получавших ФСAMA activation in mice treated with FS
а Дни от последнего введения ФС в течение 10 последовательных дней в дозах 62,5 мг/кг перорально. ь В тысячах (х103). and Days from the last administration of PS for 10 consecutive days at doses of 62.5 mg / kg orally. l In thousands (x10 3 ).
с Процентное содержание фагоцитарных аМа бактериальных клеток. c Percentage of phagocytic AMA bacterial cells.
б Процентное содержание бактериальных клеток, убитых через 1 ч после фагоцитоза аМа. b The percentage of bacterial cells killed 1 hour after phagocytosis aMa.
е Статистически недостоверно (р>0,05 по критерию Стьюдента). f Statistically unreliable (p> 0.05 by student criterion).
г В контроли вводили только физиологическую сыворотку. d Only physiological serum was introduced into the controls.
Данные результаты представляют средние арифметические данных из четырех независимых экспериментов с использованием 10 экспериментальных животных для каждой группы.These results represent arithmetic means of four independent experiments using 10 experimental animals for each group.
ЛитератураLiterature
1. Уатайа, Н. (1991) Сигг. Θρίπ. Вю1есйпо1., 2, 203.1. Huataya, N. (1991) Sigg. Θρίπ. Vyuyesipo1., 2, 203.
2. Аацпег, Н. (1990) Риге Αρρί. Сйет. 131 ς 117.2. Aatspeg, N. (1990) Riga Αρρί. Siet. 131 ς 117.
3. СатЬе11, 1.В., Вебе ТС. (1989) Ε.Α.Ο. БеИ., 5, 12.3. Sat 11, 1. B., Web TS. (1989) Ε.Α.Ο. Bei., 5, 12.
4. Ваиег, А.^., К1гЬу, А.М.М., Зйетз, ТС, Тгиск, М. (1966) Ат. 1. С1т.4. Waieg, A. ^., K1bb, A.M.M., Zyetz, TS, Tgisk, M. (1966) At. 1. C1t.
5. И1тоу, V., Папоузка, Ν., Вапкоуа, У.У., №ко1оу, Ν., Ρορον, 8. (1991) Ар1бо1о§1е 22, 155.5. I1tou, V., Papouzka, Ν., Vapkoua, U.W., No. koou, Ν., Ρορον, 8. (1991) Ar1bo1o1, 22, 155.
Claims (3)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BG107499A BG65737B1 (en) | 2003-01-24 | 2003-01-24 | Standardized mixture of steroid saponins, method for the preparation and apllication thereof |
| PCT/BG2003/000043 WO2004064852A1 (en) | 2003-01-24 | 2003-12-11 | Standardised steroid saponin mixture, a method of its obtaining and application |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200501170A1 EA200501170A1 (en) | 2005-12-29 |
| EA008763B1 true EA008763B1 (en) | 2007-08-31 |
Family
ID=32739195
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200501170A EA008763B1 (en) | 2003-01-24 | 2003-12-11 | Standardised steroid saponin mixture, a method of its obtaining and application |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU2003286011A1 (en) |
| BG (1) | BG65737B1 (en) |
| EA (1) | EA008763B1 (en) |
| EE (1) | EE05443B1 (en) |
| GB (1) | GB2412867B (en) |
| HR (1) | HRPK20050614B3 (en) |
| LV (1) | LV13366B (en) |
| PL (1) | PL377142A1 (en) |
| UA (1) | UA80182C2 (en) |
| WO (1) | WO2004064852A1 (en) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080182801A1 (en) | 2003-12-22 | 2008-07-31 | Btg International Limited | Core 2 glcnac-t inhibitors |
| GB0329667D0 (en) | 2003-12-22 | 2004-01-28 | King S College London | Core 2 GlcNAc-T inhibitor |
| GB0513881D0 (en) | 2005-07-06 | 2005-08-10 | Btg Int Ltd | Core 2 GLCNAC-T Inhibitors III |
| GB0513888D0 (en) | 2005-07-06 | 2005-08-10 | Btg Int Ltd | Core 2 GLCNAC-T Inhibitors II |
| CN103040880B (en) * | 2012-12-13 | 2017-10-10 | 大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司 | A kind of isolation and purification method of tribuloside |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020082780A1 (en) * | 1999-08-13 | 2002-06-27 | ALEXIS Brian | Natural, anti-bacterial, anti-virus, anti-herpes cream |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BG52085B2 (en) * | 1985-01-18 | 1996-06-28 | Tomova | Method for the isolation of standardized mixture of steroid saponins |
-
2003
- 2003-01-24 BG BG107499A patent/BG65737B1/en unknown
- 2003-11-12 UA UAA200508283A patent/UA80182C2/en unknown
- 2003-12-11 GB GB0513893A patent/GB2412867B/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-12-11 PL PL377142A patent/PL377142A1/en unknown
- 2003-12-11 AU AU2003286011A patent/AU2003286011A1/en not_active Abandoned
- 2003-12-11 EE EEP200500024A patent/EE05443B1/en unknown
- 2003-12-11 WO PCT/BG2003/000043 patent/WO2004064852A1/en not_active Application Discontinuation
- 2003-12-11 EA EA200501170A patent/EA008763B1/en unknown
-
2005
- 2005-07-01 HR HR20050614A patent/HRPK20050614B3/en not_active IP Right Cessation
- 2005-08-16 LV LVP-05-96A patent/LV13366B/en unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020082780A1 (en) * | 1999-08-13 | 2002-06-27 | ALEXIS Brian | Natural, anti-bacterial, anti-virus, anti-herpes cream |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| ACHENBACH H. ET AL.: "CARDIOACTIVE STEROID SAPONINS AND OTHER CONSTITUENTS FROM THE AERIAL PARTS OF TRIBULUS CISTOIDES" PHYTOCHEMISTRY, PERGAMON PRESS, GB, vol. 35, no. 6, 1 April 1994 (1994-04-01), pages 1527-1543, XP000576854, ISSN: 0031-9422, page 1529; table 1 * |
| ADAIKAN P.G. ET AL.: "HISTORY OF HERBAL MEDICINES WITH AN INSIGHT ON THE PHARMACOLOGICAL PROPERTIES OF TRIBULUS TERRESTRIS", AGING MALE, PARTHENON, LONDON, GB, vol. 4, no. 3, 2001, pages 163-169, XP009015949, ISSN: 1368-5538, page 166, left-hand column, paragraph 2 * |
| GJULEMETOWA R. ET AL.: "UEBER DIE BESTIMMUNG VON FUROSTANOLSAPONINEN IM PRAEPARAT TRIBESTAN", PHARMAZIE, VEB VERLAG VOLK UND GESUNDHEIT. BERLIN, DD, vol. 37, no. 4, 1982, page 296 XP00U54500, ISSN: 0031-7144, the whole document * |
| MURAKAMI TOSHIYUKI ET AL.: "Medicinal foodstuffs. XVII. Fenugreek seed. (3): Structures of new furostanol-type steroid saponins, trigoneosides Xa, Xb, XIb, XIIa, XIIb, and XIIIa, from the seeds of Egyptian Trigonella foenum-graecum L", CHEMICAL AND PHARMACEUTICAL BULLETIN (TOKYO), vol. 48, no. 7, July 2000 (2000-07), pages 994-1000, XP000180963, ISSN: 0009-2363, page 994, left-hand column, line 5 * |
| PETIT PIERRE R. ET AL.: "Steroid saponins from fenugreek seeds: Extraction, purification, and pharmacological investigation on feeding behavior and plasma cholesterol", STEROIDS vol. 60, no. 10, 1995, pages 674-680, XP000876727, ISSN: 0039-128X, the whole document * |
| YAN W. ET AL.: "Steroidal saponins from fruits of Tribulus terrestris", PHYTOCHEMISTRY, PERGAMON PRESS, GB, vol. 45, no. 4, June 1997 (1997-06), pages 811-817, XP004293208, ISSN: 0031-9422, the whole document * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HRPK20050614B3 (en) | 2007-10-31 |
| PL377142A1 (en) | 2006-01-23 |
| BG107499A (en) | 2004-08-31 |
| GB2412867A (en) | 2005-10-12 |
| BG65737B1 (en) | 2009-09-30 |
| GB0513893D0 (en) | 2005-08-10 |
| EA200501170A1 (en) | 2005-12-29 |
| WO2004064852A1 (en) | 2004-08-05 |
| WO2004064852B1 (en) | 2004-10-07 |
| GB2412867B (en) | 2007-07-04 |
| HRP20050614A2 (en) | 2006-06-30 |
| EE200500024A (en) | 2005-10-17 |
| LV13366B (en) | 2006-03-20 |
| EE05443B1 (en) | 2011-08-15 |
| AU2003286011A1 (en) | 2004-08-13 |
| UA80182C2 (en) | 2007-08-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4948785A (en) | Plant polysaccharide fractions inducing prolactin in mammals | |
| KR100900725B1 (en) | A preparation method of artemisia extract containing high content of eupatilin | |
| JPH0335796A (en) | Cyclic depsipeptide substance, its production and anthelmintics containing the same | |
| WO2019190157A2 (en) | Adenosine-high production paecilomyces hepiali cs4 strain isolated from cordyceps sinensis | |
| JPH01157995A (en) | Internal ester of genglioside having analgesic-anti-inflammatory activity | |
| SU704431A3 (en) | Method of prepating polysacharides posessing antitumor activity | |
| LV13366B (en) | Standardised steroid saponin mixture, a method of its obtaining and application | |
| EP0441278A1 (en) | Polysaccharides with immunomodulating properties from astragalus membranaceus and pharmaceutical compositions containing them | |
| KR101703352B1 (en) | Artemisia extract | |
| US20150374776A1 (en) | Use of fermented wheat germ in the treatment of inflammatory bowel disease | |
| CN100335073C (en) | Process for preparing semen momordicae seed extract containing triterpene saponin component | |
| CN111840340A (en) | Application of pomegranate bark tannin in preparation of medicine for inhibiting bacterial quorum sensing system | |
| CN1288896A (en) | Quercetin derivative and its medicinal use | |
| CN102304178A (en) | Preparation method and application of African clawed toad antitumor polypeptide | |
| CN1209996A (en) | Medicinal composition containing ginsenoside Re, preparation and usage thereof | |
| JP2805564B2 (en) | New substance PF1101B substance and its manufacturing method | |
| RU2178709C2 (en) | Method to obtain a substance of immunomodulating activity | |
| RU2359972C1 (en) | Method of obtaining of agent possessing anti ulcerous activity | |
| CN106728252A (en) | A kind of water extraction preparation method and application of bamboo willow antibacterial active constituents | |
| WO2019154015A2 (en) | Argon-containing compound, and preparation method therefor and use thereof | |
| EA015943B1 (en) | Peptide compound with antimicrobial activity, obtained from bacillus clausii, and application thereof | |
| KR101888845B1 (en) | Artemisia extract | |
| US3502770A (en) | Preparation of composition from podophyllum extracts | |
| CN1256116C (en) | Method for extracting effective active component of rodgersia aesculifolia and use thereof | |
| CN103385898A (en) | Method for preparing MRSA (methicillin-resistant Staphylococcus aureus)-resistant andrographis extract |