EA006209B1 - ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ГЕМОСТАТИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ФАКТОР vWF, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ - Google Patents
ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ГЕМОСТАТИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ФАКТОР vWF, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Download PDFInfo
- Publication number
- EA006209B1 EA006209B1 EA200201104A EA200201104A EA006209B1 EA 006209 B1 EA006209 B1 EA 006209B1 EA 200201104 A EA200201104 A EA 200201104A EA 200201104 A EA200201104 A EA 200201104A EA 006209 B1 EA006209 B1 EA 006209B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- vwf
- preparation
- fraction
- fviii
- drug
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 4
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims description 46
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 46
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 claims description 10
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 7
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 7
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 4
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 claims description 3
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 3
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical group OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims 2
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 claims 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 8
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 abstract 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 2
- HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO)C=C1 HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000012541 Fractogel® Substances 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 108010081391 Ristocetin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 208000027276 Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- BGTFCAQCKWKTRL-YDEUACAXSA-N chembl1095986 Chemical compound C1[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]1C(N[C@H](C2=CC(O)=CC(O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C2C=2C(O)=CC=C(C=2)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3C=4C=C(C(=C(O)C=4)C)OC=4C(O)=CC=C(C=4)[C@@H](N)C(=O)N[C@@H](C(=O)N3)[C@H](O)C=3C=CC(O4)=CC=3)C(=O)N1)C(O)=O)=O)C(C=C1)=CC=C1OC1=C(O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]5[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O5)O)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C4=CC2=C1 BGTFCAQCKWKTRL-YDEUACAXSA-N 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 208000012137 von Willebrand disease (hereditary or acquired) Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Способ получения препарата, содержащего гемостатически активный фактор Виллебранда (vWF), из фракции человеческой плазмы посредством хроматографической очистки фракции плазмы, содержащей vWF, на анионообменном материале, характеризующимся анионообменными группами на привитых полимерных структурах (Tentakel-материалы), накопления фракции, содержащей vWF, последующей очистки этой фракции посредством гельпроникающей хроматографии для получения препарата, содержащего очищенный термостабильный фактор vWF, и нагревания препарата для инактивации вирусов.
Description
Объектом данного изобретения является способ получения препарата, содержащего инактивированный в отношении вирусов гемостатически активный фактор Виллебранда (vWF), из фракции человеческой плазмы, а также препарат, содержащий гемостатически активный vWF, полученный способом согласно изобретению.
Болезнью Виллебранда является нарушение свертываемости крови, которое встречается в виде гемофилии А или В, в виде кровотечения в мягкой ткани, особенно в слизистых оболочках. Причиной этого заболевания был признан недостаток так называемого фактора Виллебранда (vWF). Этот фактор до сих пор вводился пациентам посредством препаратов фактора VIII, в которых также содержался vWF, правда, часто лишь неудовлетворительного качества и в неудовлетворительном количестве. Хотя удалось получить фактор vWF с помощью генной инженерии, однако, существует потребность в усовершенствованных способах очистки для получения vWF из донорской крови или плазмы.
В заявке ЕР-А-0 934 748 описан высокочистый vWF с содержанием по крайней мере 15% мультимеров vWF, состоящих из 13 или больше протомеров (HMW-VWF мультимеры). Фактор получают с помощью многоступенчатой хроматографической очистки, причем изначально может быть проведена гельфильтрация в режиме разделения групп group separation mode, включая криоосаждение. Для инактивации вирусов описана, например, обработка растворителем и детергентом, а также тепловая обработка в лиофилизованном состоянии в течение 72 ч при 80°С.
Josic с courp.Purification of factor VIII and vWF factor from human plasma by anionexchange chromatography, Journal of Chromatography B, 662 (1994) 181-190; а также Schwinn et al. A Solvent 1 detergent Treated, Pasteurised and Highly Purified Factor VIII Concentrate, Arzneimittel-Forschung 1 Drug Research 44 (1), 2,188-191 (1994), касаются очистки комплекса фактор VIII-vWF. При этом проводится очистка через ионообменник и две независимые стадии для инактивации вирусов. Следует обработка сольвентом/детергентом и пастеризация (10 ч при 63 °С) в присутствии стабилизаторов. Хотя фактор VIII посредством пастеризации едва денатурируется (остаточная активность 95%), у фактора vWF изменяются активность и распределение мультимеров (85% остаточного антигена) и наблюдается потеря высокомолекулярных мультимеров. В результате этого получается соотношение антигена vWF к активности 2,2 (активность к антигену=0,5).
Заявка US-A-5 714 590 описывает очистку комплекса фактора VIII посредством ионообменной хроматографии. Для этого в качестве материала колонки используют EMD-ТМАЕ-Fractogel, который также используется для гельпроникающей хроматографии. Для инактивации вирусов предложена обработка сольвентом/детергентом. Тепловая обработка не описана. Полученный продукт содержит также vWF, причем приведена только антигенность vWF.
Задачей изобретения является разработка нового способа очистки фактора vWF из человеческой плазмы. При этом способ обеспечивать получение vWF улучшенного качества и эффективности.
Поставленная задача решается способом получения препарата, содержащего гемостатически активный фактор Виллебранда (vWF) из фракции человеческой плазмы, характеризующимся тем, что, прежде всего, проводят хроматографическую очистку фракции плазмы, содержащей vWF, на анионообменном материале, имеющем анионообменные группы на привитых полимерных структурах (материалы Tentakel), накопление очищенной посредством гельпроникающей хроматографии фракции, содержащей vWF, и нагревание препарата для инактивации вирусов. Материалы Tentakel, используемые в способе согласно изобретению, прежде всего, описаны в заявке ЕР-А-0 337 144. Речь идет, предпочтительно, о привитых по диолам фрактогеля (Fractogel®) полиакриламидных полимерах Tentakel фирмы Merck, Darmschtadt, Deutschland.
На фиг. 1 показана стабильность продукта, полученного согласно изобретению по отношению к продуктам, очищенным посредством аниоонобменной хроматографии.
Этот способ неожиданным образом приводит к продукту с высоким содержанием фактора vWF в соотношении к фактору FVIII. Проведение способа согласно изобретению обеспечивает за счет стадии гельпроникающей хроматографии удаление ингибитора интер-а-трипсина, а также других факторов, которые в известных способах получения могут способствовать ухудшению качества продукта. Посредством последовательности хроматографических стадий согласно изобретению получают препарат vWF, который неожиданно является стабильным. Фракция vWF, полученная способом согласно изобретению, в водном растворе при комнатной температуре неожиданно является стабильной в течение длительного времени (измеряли вплоть до недели), в основном. Препарат согласно изобретению, сверх того, содержит vWF в нативной форме и свободeн от фрагментов.
Предпочтительно термостабильный препарат, а также нагретый препарат характеризуется только одним пиком в гель-фильтрационном анализе ВЭЖХ.
Прежде всего, термостабильный препарат согласно изобретению может быть нагрет в лиофилизированном состоянии при температуре более 80°С. В следующей форме выполнения способа согласно изобретению препарат нагревают при температуре более 90°С, особенно при 100°С. При этом нагревание согласно изобретению происходит, предпочтительно, в течение по крайней мере от 1 до 5 ч, особенно от 2 до 3 ч. При этом все релевантные к трансфузии вирусы, особенно вирусы, не покрытые липидной оболочкой, как парво-вирусы или вирусы гепатита А, инактивируются. Поразительным образом продукт,
- 1 006209 полученный согласно изобретению, выдерживает термообработку в этих условиях без существенных потерь активности.
Очистка фракции, содержащей vWF, согласно изобретению может дополнительно происходить посредством, по крайней мере, адсорбционной и/или афинной хроматографической обработки.
Согласно изобретению также может использоваться фракция, содержащая vWF, которую получают из объединенной человеческой плазмы, и она может быть очищена способом согласно изобретению.
Объектом данного изобретения также является препарат, содержащий гемостатически активный vWF, полученный способом согласно изобретению.
Препарат согласно изобретению является свободным от инфекционных вирусов, переносимых кровью, особенно HIV, HBV, HCV, HAV и парво-вирусов.
Предпочтительно препарат согласно изобретению содержит фактор vWF в высокомолекулярной форме, который после электрофоретического анализа характеризуется по крайней мере 13-16 мультимерными полосами. Число мультимеров и характер их распределения является мерой сходства препарата vWF и нативного vWF в плазме. Далее, соотношение кофактора ристомицина как суррогатный маркер активности vWF к антигену vWF составляет для препарата согласно изобретению по крайней мере 0,8. Это представляет собой степень интеграции молекул vWF.
Препарат согласно изобретению предпочтительно содержит фактор VIII в нативной форме. Применение комплексов из FVIII и vWF оказалось особенно пригодным для лечения болезни Виллебранда.
В дальнейшем удаляют из препарата согласно изобретению следующие протеины: иммуноглобулины, фибриноген, фибронектин, а также ингибитор интер-а-трипсина - до предела ниже иммунохимического обнаружения. Этим, вероятно, обусловлена чрезвычайная стабильность продукта согласно изобретению.
Изобретение поясняется следующими примерами.
Примеры
Около 47 кг осадка, полученного криоосаждением, обрабатывают 15% (в./в.) 2%-ного (в./в.) раствора гидроксида алюминия. После центрифугирования пробу инактивируют в отношении вирусов посредством 0,3% ТпВР/1% Triton x 100. После экстракции масла проводят анионообменную хроматографию на Fractogel EMD TMAE (Tentakelgel, Fa Merck, Darmschtadt, Deutschland).
Буферные условия следующие:
Буфер AM, первая стадия промывания:
120 мМ NaCl, 10 мМ цитрата Na, 120 мМ глицина, 1 мМ CaCl2, рН 6,9-7,1; осмоляльность: 360-400 мосмоль/кг.
Буфер ВМ, вторая стадия промывания:
235 мМ NaCl, 10 мМ цитрата Na, 120 мМ глицина, 1 мМ CaCl2, рН 6,9-7,1; осмоляльность: 570-610 мосмоль/кг.
Буфер CM, элюирование:
700 мМ NaCl, 10 мМ цитрата Na, 120 мМ глицина, 1 мМ CaCl2, рН 6,9-7,1; осмоляльность: 13801480 мосмоль/кг.
Буфер DM, третья стадия промывания:
1,5 М NaCl.
Фракции с активностью vWF/FVIII подвергают высокоэффективной хроматографии на Fractogel EMD Bio SEC (Gel, Fa. Merck, Darmschtadt, Deutschland). После ультра/диафильтрации готовят препарат со следующим составом: 400 мМ NaCl, 10 мМ цитрата Na, 1 мМ CaCl2, 133 мМ глицина, 1 % сахарозы.
Далее следует фильтрация в стерильных условиях. Препарат дозируют и лиофилизируют. Затем происходит термообработка при температуре 100°С. Термообработка продолжается 120 мин.
На чертеже показана стабильность продукта, полученного согласно изобретению, по отношению к продуктам, очищенным только анионообменной хроматографией. Продукт согласно изобретению после анионообменной хроматографии обрабатывается посредством высокоэффективной хроматографии. Показано, что при хранении с гепарином или без него в водном растворе при комнатной температуре в течение 7 дней продукт согласно изобретению еще имеет активность 80%, в то время как продукт, не подвергавшийся высокоэффективной хроматографии, имеет активность лишь 20%.
Claims (15)
- формула изобретения1. Способ получения препарата из фракции человеческой плазмы, содержащего гемостатически активный фактор Виллебранда (vWF), посредствомI) хроматографической очистки фракции плазмы, содержащей vWF, на анионообменном материале, имеющим анионообменные группы на привитых полимерных структурах, накопления фракции, содержащей vWF, отличающийся тем, чтоII) очистка этой фракции происходит посредством гельпроникающей хроматографии для получения очищенного термостабильного препарата, содержащего vWF, иIII) препарат нагревают для инактивации вирусов.- 2 006209
- 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что термостабильный препарат, а также нагретый препарат характеризуется только одним пиком в гель-фильтрационном анализе ВЭЖХ.
- 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что термостабильный препарат нагревают в лиофилизированном состоянии при температуре более 80°С.
- 4. Способ по п.3, отличающийся тем, что препарат нагревают при температуре более 90°С, предпочтительно при 100°С.
- 5. Способ по п.3 или 4, отличающийся тем, что препарат нагревают, по крайней мере, в течение 1-5 ч, предпочтительно 2-3 ч.
- 6. Способ по пп.1-5, отличающийся тем, что фракцию дополнительно очищают посредством, по крайней мере, адсорбционной и/или афинной хроматографии.
- 7. Способ по пп.1-6, отличающийся тем, что на заключительной стадии очистки протеина проводят очистку посредством гельпроникающей хроматографии.
- 8. Способ по пп.1-7, отличающийся тем, что очищают фракцию из объединенной человеческой плазмы.
- 9. Препарат, содержащий гемостатически активный фактор vWF, полученный способом по пп.1-8.
- 10. Препарат по п.9, отличающийся тем, что препарат свободен от инфекционных вирусов, переносимых кровью, в частности HIV, HBV, HCV, HAV и парво-вирусов.
- 11. Препарат по п.9 или 10, отличающийся тем, что он содержит высокомолекулярный vWF и после электрофоретического анализа характеризуется по крайней мере 13-16 полосами мультимеров.
- 12. Препарат по пп.9-11, отличающийся тем, что соотношение активности vWF, измеренной как кофактор ристоцитина, к антигену vWF составляет по крайней мере 0,8.
- 13. Препарат по пп.9-12, отличающийся тем, что дополнительно он содержит фактор VIII в нативной форме.
- 14. Препарат по пп.9-13, отличающийся тем, что он содержит иммуноглобулины, фибриноген, фибронектин, а также ингибитор интер-а-трипсина ниже иммунохимического предела обнаружения.
- 15. Препарат по пп.9-14, отличающийся тем, что он содержит vWF в нативной форме и свободен от фрагментов.Сравнение концентратов FVIII: FVIII ТМАЕ и FVIII ТМАЕ-SEC при хранении в инфузионной емкостиКонцентраты FVIII растворяли в воде для инъекций или в воде для инъекций, содержащей 5 иммунизирующих единиц гепарина/мл. После перенесения в инфузионную емкость пробы хранили при комнатной температуре. Через определенное время отбирали пробы и определяли активность FVIII:C (хромогенно). Значение FVIII дается в процентном отношении к начальной активности.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP00108430A EP1148063A1 (de) | 2000-04-18 | 2000-04-18 | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| PCT/EP2001/003819 WO2001079260A1 (de) | 2000-04-18 | 2001-04-04 | Haemostatisch aktives vwf enthaltendes präparat und verfahren zu seiner herstellung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200201104A1 EA200201104A1 (ru) | 2003-04-24 |
| EA006209B1 true EA006209B1 (ru) | 2005-10-27 |
Family
ID=8168496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200201104A EA006209B1 (ru) | 2000-04-18 | 2001-04-04 | ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ГЕМОСТАТИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ФАКТОР vWF, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7166709B2 (ru) |
| EP (2) | EP1148063A1 (ru) |
| JP (1) | JP4976634B2 (ru) |
| KR (1) | KR100685448B1 (ru) |
| CN (1) | CN100448888C (ru) |
| AT (1) | ATE306494T1 (ru) |
| AU (2) | AU2001263835B2 (ru) |
| BR (1) | BR0110193A (ru) |
| CA (1) | CA2406626C (ru) |
| CZ (1) | CZ303932B6 (ru) |
| DE (1) | DE50107689D1 (ru) |
| DK (1) | DK1274721T3 (ru) |
| EA (1) | EA006209B1 (ru) |
| EE (1) | EE200200595A (ru) |
| ES (1) | ES2247117T3 (ru) |
| HU (1) | HU225992B1 (ru) |
| IL (2) | IL152173A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA02010017A (ru) |
| NO (1) | NO324773B1 (ru) |
| RS (1) | RS50835B (ru) |
| SI (1) | SI1274721T1 (ru) |
| UA (1) | UA76714C2 (ru) |
| WO (1) | WO2001079260A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200208396B (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9290561B2 (en) | 2008-06-24 | 2016-03-22 | Csl Behring Gmbh | Factor VIII, von Willebrand factor or complexes thereof with prolonged in vivo half-life |
| US9878017B2 (en) | 2013-04-22 | 2018-01-30 | Csl Ltd. | Covalent complex of von Willebrand Factor and factor VIII, compositions, and uses relating thereto |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| ITLU20070007A1 (it) * | 2007-05-07 | 2008-11-08 | Kedrion Spa | Processo cromatografico per l'ottenimento di un complesso fviii/vwf con differenti rapporti tra le due proteine da utilizzare nella terapia della emofilia a e nella malattia di von willebrand. |
| FR2920429B1 (fr) * | 2007-08-30 | 2012-10-05 | Lfb Biotechnologies | Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand |
| AR069989A1 (es) | 2007-12-28 | 2010-03-03 | Baxter Int | Formulaciones de vwf recombinantes |
| US11197916B2 (en) | 2007-12-28 | 2021-12-14 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Lyophilized recombinant VWF formulations |
| SI2349314T1 (sl) | 2008-10-21 | 2013-05-31 | Baxter International Inc. | Liofilizirane rekombinantne VWF formulacije |
| IT1396528B1 (it) * | 2009-01-19 | 2012-12-14 | Kedrion Spa | Nuovo processo di purificazione altamente selettivo di due proteine plasmatiche: von willebrand factor (vwf) e fibronectina (fn). |
| BR112012030455B1 (pt) * | 2010-06-01 | 2021-08-17 | Baxter Healthcare S.A. | Processo para fabricar uma composição hemostática seca e estável, recipiente acabado final, e, kit para administrar uma composição hemostática |
| CN103328503B (zh) | 2010-09-20 | 2016-08-24 | 欧克塔医药公司 | 纤维蛋白原生产方法 |
| JP6088435B2 (ja) | 2010-12-15 | 2017-03-01 | バクスアルタ ゲーエムベーハー | 導電率グラディエントを用いる溶出液収集 |
| US10064406B2 (en) * | 2011-01-06 | 2018-09-04 | Cytosorbents Corporation | Polymeric sorbent for removal of impurities from whole blood and blood products |
| US10112972B2 (en) | 2012-03-13 | 2018-10-30 | Octapharma Ag | Process for production of fibrinogen and fibrinogen produced thereby |
| CN104411716B (zh) | 2012-04-24 | 2018-09-07 | 诺和诺德股份有限公司 | 适用于治疗血友病的化合物 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| DE3878245D1 (de) | 1988-11-05 | 1993-03-18 | Octapharma Ag | Verfahren zur herstellung eines hochreinen, nicht infektioesen antihaemophiliefaktors mittels chromatographie. |
| FR2673632A1 (fr) * | 1991-03-08 | 1992-09-11 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique. |
| FR2681867B1 (fr) * | 1991-09-26 | 1993-12-31 | Pasteur Merieux Serums Vaccins | Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues. |
| DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| WO1994013329A1 (de) * | 1992-12-16 | 1994-06-23 | Immuno Aktiengesellschaft | Verfahren zur herstellung eines virussicheren biologischen präparates |
| DE4435392B4 (de) * | 1994-10-04 | 2008-02-07 | Immuno Ag | Verfahren zur Trennung von vWF in hochmolekularen vWF und niedermolekularen vWF |
| DE4437544A1 (de) * | 1994-10-20 | 1996-04-25 | Behringwerke Ag | Einsatz von vWF-enthaltenden Konzentraten als Kombinationstherapie bei Therapie mit Antithrombotika und Fibrinolytika |
| US6005077A (en) * | 1995-11-10 | 1999-12-21 | Immuno Aktiengesellschaft | Use of von willebrand factor and pharmaceutical formulation |
| AT403764B (de) * | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| AT404358B (de) * | 1997-02-04 | 1998-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur chromatographischen reinigung bzw. fraktionierung von von willebrand-faktor aus einem vwf-hältigen ausgangsmaterial |
| US6531577B1 (en) | 1997-12-15 | 2003-03-11 | Hemasure Denmark A/S | von Willebrand factor (vWF)-containing preparation, process for preparing vWF-containing preparations, and use of such preparations |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
-
2000
- 2000-04-18 EP EP00108430A patent/EP1148063A1/de not_active Withdrawn
-
2001
- 2001-04-04 EA EA200201104A patent/EA006209B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-04-04 EE EEP200200595A patent/EE200200595A/xx unknown
- 2001-04-04 BR BR0110193-5A patent/BR0110193A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-04-04 JP JP2001576857A patent/JP4976634B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-04 AU AU2001263835A patent/AU2001263835B2/en not_active Ceased
- 2001-04-04 KR KR1020027013892A patent/KR100685448B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-04-04 DE DE50107689T patent/DE50107689D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-04 SI SI200130460T patent/SI1274721T1/sl unknown
- 2001-04-04 UA UA2002108257A patent/UA76714C2/ru unknown
- 2001-04-04 MX MXPA02010017A patent/MXPA02010017A/es active IP Right Grant
- 2001-04-04 DK DK01938084T patent/DK1274721T3/da active
- 2001-04-04 CN CNB018082297A patent/CN100448888C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-04 WO PCT/EP2001/003819 patent/WO2001079260A1/de active IP Right Grant
- 2001-04-04 CA CA2406626A patent/CA2406626C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-04 EP EP01938084A patent/EP1274721B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-04 US US10/257,375 patent/US7166709B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-04 RS YUP-784/02A patent/RS50835B/sr unknown
- 2001-04-04 CZ CZ20023454A patent/CZ303932B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-04-04 HU HU0301211A patent/HU225992B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-04-04 AT AT01938084T patent/ATE306494T1/de active
- 2001-04-04 IL IL15217301A patent/IL152173A0/xx active IP Right Grant
- 2001-04-04 ES ES01938084T patent/ES2247117T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-04 AU AU6383501A patent/AU6383501A/xx active Pending
-
2002
- 2002-10-08 IL IL152173A patent/IL152173A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-10-17 ZA ZA200208396A patent/ZA200208396B/en unknown
- 2002-10-17 NO NO20025007A patent/NO324773B1/no not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-01-04 US US11/649,357 patent/US7985846B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9290561B2 (en) | 2008-06-24 | 2016-03-22 | Csl Behring Gmbh | Factor VIII, von Willebrand factor or complexes thereof with prolonged in vivo half-life |
| US9878017B2 (en) | 2013-04-22 | 2018-01-30 | Csl Ltd. | Covalent complex of von Willebrand Factor and factor VIII, compositions, and uses relating thereto |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7985846B2 (en) | Hemostatically active vWF-containing preparation and process for the preparation thereof | |
| JP3094167B2 (ja) | 免疫血清グロブリンの精製方法 | |
| EP0322786B1 (en) | Extraction of process chemicals from labile biological mixtures with halogenated hydrocarbons | |
| CA2192683C (en) | Filtration | |
| US5151499A (en) | Production method for protein-containing composition | |
| US4495175A (en) | Preparation of highly purified human antihemophilic factor | |
| NO177188B (no) | Fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner | |
| CZ287186B6 (en) | Process for preparing concentrate free of aggregation of immunoglobulins G | |
| EP0176926B1 (en) | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate | |
| JP4250771B2 (ja) | カチオン交換クロマトグラフィーによる因子ＶＩＩＩ／ｖＷＦ複合体の精製方法 | |
| EP0252392B1 (en) | Viral inactivation and purification of active proteins | |
| DK1632501T3 (en) | A process for the preparation of a concentrate of von Willebrand factor (FVW) by means of chromatography, and the concentrate of FVW and may therefore be obtained | |
| US4774323A (en) | Purification of von Willebrand Factor solutions using gel permeation chromatography | |
| EP1240200A1 (en) | Separation of fibrinogen from plasma proteases | |
| WO1998030230A1 (fr) | Compositions proteinees et procede de production | |
| PL203508B1 (pl) | Sposób uzyskiwania z frakcji osocza ludzkiego preparatu aktywnego hemostatycznie oraz preparat aktywny hemostatycznie otrzymany tym sposobem | |
| JPH1053534A (ja) | α２プラスミンインヒビターの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |