EA004735B1 - Сульфонамиды и их производные, модулирующие активность эндотелина - Google Patents

Abstract

Представлены тиенил-, фурил-, пирролил- и фенилсульфонамиды, препараты на основе их фармацевтически приемлемых производных и способы модулирования или изменения активности пептидов эндотелинового семейства. В частности, представлены N-(изоксазолил)тиенилсульфонамиды, N-(изоксазолил)фурилсульфонамиды, N-(изоксазолил)пирролилсульфонамиды и N-(изоксазолил)фенилсульфонамиды, препараты на их основе и способы использования этих сульфонамидов для ингибирования связывания эндотелинового пептида с эндотелиновым рецептором путем контакта рецептора с сульфонамидом. Также представлены способы лечения нарушений, связанных с эндотелином, заключающиеся во введении эффективных количеств одного или более сульфонамидов или их фармацевтически приемлемых производных, ингибирующих активность эндотелина.

Description

Приоритет данной заявки на изобретение должен быть установлен по дате приоритета предварительной заявки США серийный № 60/174,104, поданной 31 декабря 1999 г. на имя Ши и др. под названием δυΕΕΟΝΑΜΙΌΕδ ΑΝΏ ΌΕΚίνΑΤίνΕδ ΤΗΕΚΕΟΕ ΤΗΑΤ ΜΟΌυЬАТЕ ΤΗΕ ΑСΤIVIΤΥ ΟΕ ΕΝΌΟΤΗΕΕΙΝ (Сульфонамиды и их производные, модулирующие активность эндотелина), включенной в данное изобретение во всей полноте.

Область техники

Настоящее изобретение относится к соединениям, модулирующим активность пептидов эндотелиновой группы. В частности, изобретение относится к использованию сульфонамидов и производных сульфонамидов в качестве агонистов и антагонистов эндотелина.

Уровень техники

Сосудистый эндотелий выделяет множество вазоактивных веществ, включая пептид эндотелиумного происхождения, эндотелин (ЭТ), обладающий сосудосуживающей активностью (см., например, ναηΐιοιιΐΐο и др. (1986) Αηηυαΐ Реу. Рйукюк 48: 307-320; Ригсйдой и Ζα\ναά51<ί (1980) №Шге 288: 373-376). Эндотелин, который первоначально был идентифицирован в супернатанте культуры эндотелиальных клеток свиной аорты (см. Уапащ5а\\'а и др. (1988) №1Шгс 332: 411-415), представляет собой пептид, состоящий из двадцати одной аминокислоты, являющийся сильным сосудосуживающим агентом. Он является очень сильным известным агентом, вызывающим повышение давления, который продуцируется многими типами клеток, включая клетки эндотелия, трахеи, почек и мозга. Эндотелин синтезируется в виде предшественника препроэндотелина, состоящего из 203 аминокислот, содержащего сигнальную последовательность, расщепляемую эндогенной протеазой с образованием пептида, состоящего из тридцати восьми (человеческий) или тридцати девяти (свиной) аминокислот. Этот интермедиат, называемый большим эндотелином, превращается ίη νίνο в сформировавшуюся биологически активную форму предположительно под действием эндотелин-конвертирующего фермента (ЭКФ), который, по-видимому, является металлозависимой нейтральной протеазой (см., например, КакЫ^аЬага и др. (1989) ΕΕΒ8 Ьйгк. 247: 337-340). Расщепление необходимо для получения физиологических ответов (см., например, νοη Сс1йсгп и др. (1991) Рерйбе Кек. 4: 32-35). В эндотелиальных клетках свиной аорты интермедиат, большой эндотелин, состоящий из тридцати девяти аминокислот, гидролизуется по связи Пр^Ша^² с образованием эндотелина-1 и С-концевого фрагмента. Аналогичное расщепление интермедиата, состоящего из тридцати восьми аминокислот, происходит в человеческих клетках. Идентифицированы три различных эндотелиновых изопептида - эндотелин-1, эндотелин-2 и эндотелин-3, обладающие сильной сосудосуживающей активностью.

Семейство трех изопептидов, включающее эндотелин-1, эндотелин-2 и эндотелин-3, кодируется семейством трех генов (см. 1иоие и др. (1989) Ргос. Νοί1. Αсаά. 8с1. υ8Α 86: 2863-2867; см. также 8а16а и др. (1989) 1. Вю1. Сйет. 264: 14613-14616). Нуклеотидные последовательности трех человеческих генов высоко консервативны в пределах области, кодирующей активные пептиды, состоящие из двадцати одной аминокислоты, а С-концевые участки пептидов вообще идентичны. Эндотелин-2 является (Тгр⁶,Ьеи⁷) эндотелином-1 и эндотелин-3 является (ΤΗγ/Ρ^,ΤΗι^^γ⁶^^⁷^?⁴) эндотелином-1. Таким образом, эти пептиды высоко консервативны в области С-концевых фрагментов. Высвобождение эндотелинов из культивированных эндотелиальных клеток подвержено воздействию множества химических и физических факторов (стимуляторов) и, по-видимому, регулируется на уровне транскрипции и/или трансляции. Экспрессия гена, кодирующего эндотелин-1, увеличивается под действием химических стимуляторов, включая адреналин, тромбин и Са²⁺ ионофор. Продуцирование и высвобождение эндотелина из эндотелия стимулируется ангиотензином ΙΙ, вазопрессином, эндотоксином, циклоспорином и другими факторами (см. Вгоокк и др. (1991) Επτ. 1. Рйагт. 194:115-117) и ингибируется окисью азота. В том случае, если эндотелиальные клетки стимулируют вазоактивными агентами, такими как ацетилхолин и брадикинин, они, по-видимому, секретируют коротко живущие факторы релаксации эндотелиумного происхождения (ФРЭП), включая окись азота или родственное соединение (Ра1тег и др. (1987) №1Шге 327: 524-526). Сужение сосудов, вызванное эндотелином, ослабляется также и натрийуретическим пептидом предсердия ЩУНН, ΑΝΡ).

Эндотелиновые пептиды обладают многочисленными биологическими активностями ίη νίύΌ и ίη νί\Ό. Эндотелин вызывает сильное и продолжительное сужение сосудов ίη νί\Ό у крыс и в изолированных препаратах гладких мускулов сосудов; он также вызывает высвобождение эйкозаноидов и фактора релаксации эндотелиумного происхождения (ФРЭП) из перфузированного сосудистого ложа. Внутривенное введение эндотелина-1 оказывает продолжительное сосудосуживающее действие, а добавление его ίη νίΙΐΌ к культурам тканей сосудов и других гладких мускулов вызывает контракцию (см., например, Во1дег и др. (1991) Саи. 1. РЬ.у8ю1. Рйагтасо1. 69: 406-413). Например, на изолированные полоски сосудов эндотелин-1 действует как сильный (ЕС₅₀=4х10^-10М), медленно действующий, но устойчивый контрактирующий агент ίη νί\Ό. одна доза повышает кровяное давление приблизительно через двадцатьтридцать минут. Вызванное эндотелином суже3 ние сосудов не подвержено влиянию антагонистов к известным нейротрансмиттерам или гормональным факторам, но подавляется антагонистами кальциевых каналов. Однако влияние антагонистов кальциевых каналов, по всей видимости, является результатом ингибирования кальциевого притока, так как приток кальция вероятно необходим для длительной контракции в ответ на введение эндотелина.

Эндотелин также медиирует высвобождение ренина, стимулирует высвобождение НУНН и вызывает положительное инотропное действие на предсердие морской свинки. В легких эндотелин-1 действует как сильный бронхоспазматический агент (Мадд1 и др. (1989) Еиг I. Рйагтасо1. 160: 179-182). Эндотелин повышает резистентность сосудов почек, уменьшает почечный ток крови и скорость гломерулофильтрации. Он является потенциальным митогеном для гломеруло-мезангиальных клеток и инициирует фосфоинозидный каскад в таких клетках (81топзоп и др. (1990) I. С1ш. 1пус51. 85: 790-797).

Существуют специфические места связывания, обладающие высоким сродством к эндотелину (константы диссоциации в пределах 26х10^-10М) в тканях сосудистой системы и других тканях, включая ткани кишечника, сердца, легких, почек, селезенки, надпочечников и мозга. Связывание не ингибируется катехоламинами, вазоактивными пептидами, нейротоксинами или антагонистами кальциевых каналов. Эндотелин связывается и взаимодействует с рецепторами, которые отличаются от других автономных рецепторов и рецепторов кальциевых каналов, зависимых от разности потенциалов. Исследования конкурентного связывания указывают на то, что существует множество классов рецепторов с различным сродством к эндотелиновым изопептидам. Сарафотоксины, группа пептидных токсинов из яда змеи Л1гас1а8рщ С1пдабсп515. вызывающего тяжелый спазм коронарных сосудов у жертв змеиного укуса, структурно и функционально гомологичны эндотелину-1 и конкурентно связываются с теми же мембранными рецепторами сердца (К1оод и др. (1989) Тгепбз Рйагтасо1. 8сг 10: 212-214).

Идентифицированы два различных рецептора эндотелина, обозначенные как ЕТ_А и ЕТ_В, и выделены два ДНК-клона, кодирующие каждый рецептор (Ага1 и др. (1990) Иа1иге 348: 730-732; 8акшш и др. (1990) №Ш1ге 348: 732-735). Исходя из аминокислотных последовательностей белков, кодируемых клонируемой ДНК, представляется вероятным, что каждый рецептор содержит семь трансмембранных стягивающих доменов и обладает структурным сходством с мембранными белками, связанными с О-белком. Информационная РНК, кодирующая оба рецептора, обнаружена во многих тканях, включая ткани сердца, легких, почек и мозга. Распределение субтипов рецепторов является тканеспе цифичным (Магйп и др. (1989) Вюсйет. Вюрйуз. Кез. Соттип. 162: 130-137). ЕТ_А рецепторы, по-видимому, селективны по отношению к эндотелину-1 и преобладают в тканях сердечнососудистой системы. ЕТВ рецепторы, преобладающие в других тканях (не являющихся тканями сердечно-сосудистой системы), включая ткани центральной нервной системы и почек, взаимодействуют с тремя эндотелиновыми изопептидами (8акшш и др. (1990) Иа1иге 348: 732734). Кроме того, ЕТ_А рецепторы, существующие в гладких мышцах сосудов, связаны с сужением сосудов, с ними связывают сердечнососудистые, почечные заболевания и заболевания центральной нервной системы, в то время как ЕТ_В рецепторы расположены в сосудистом эндотелии, связанном с расширением сосудов (Такауапащ и др. (1991) РЕВ8 Ьйгз. 282: 103106), с ними связывают бронхоспазматические нарушения.

Вследствие распределения рецепторов разных типов и различного сродства каждого изопептида к рецептору каждого типа, активность эндотелиновых изопептидов различается в разных тканях. Например, эндотелин-1 ингибирует связывание ¹²⁵1-меченого эндотелина-1 тканями сердечно-сосудистой системы в 40-700 раз более сильно, чем эндотелин-3. Связывание ¹²⁵1-меченого эндотелина-1 другими тканями (не являющимися тканями сердечно-сосудистой системы), такими как ткани почек, надпочечников и мозжечка, в одинаковой степени ингибируется эндотелином-1 и эндотелином-3, что указывает на преобладание ЕТА рецепторов в тканях сердечно-сосудистой системы и преобладание ЕТ_В рецепторов в других тканях.

При некоторых заболеваниях уровни эндотелина в плазме повышаются (см., например, международную публикацию заявки РСТ XVО 94/27979 и патент США № 5,382,569, включенные в данное изобретение во всей своей полноте в виде ссылок). По данным радиоиммунологического анализа (РИА) уровни эндотелина-1 в плазме здоровых индивидуумов составляют порядка 0,26-5 пг/мл. Уровни эндотелина-1 и его предшественника, большого эндотелина, в крови повышаются при шоке, инфаркте миокарда, вазоспастической ангине, почечной недостаточности, а также при ряде нарушений соединительных тканей. У пациентов, подвергающихся гемодиализу или пересадке почки, или страдающих от кардиогенного шока, инфаркта миокарда или легочной гипертензии, эти уровни достигают 35 пг/мл (см. 81е\\'аг1 и др. (1991) Аппа1з 1п1егпа1 Меб. 114: 464-469). В связи с тем, что эндотелин является, по-видимому, локальным, а не системным регулирующим фактором, вполне вероятно, что уровни эндотелина на границе эндотелий/гладкая мышца значительно выше, чем в кровеносной системе.

Повышенные уровни эндотелина выявлены также у пациентов, страдающих от ишеми5 ческой болезни сердца (Уакиба и др. (1990) Атег. Неай 1. 119:801-806, Вау и др. (1992) Вг. Неай 1. 67:383-386). Иммунореактивность эндотелина в кровеносной системе и в тканях возрастает более чем в два раза у пациентов с запущенным атеросклерозом (Ьеттаи и др. (1991) Иете Епд1. 1. Меб. 325:997-1001). Повышенную иммунореактивность эндотелина связывают также с болезнью Бюргера (Каппо и др. (1990) 1. Атег. Меб. Аккос. 264:2868) и феноменом Рейно (2атога и др. (1990) Ьапсе! 336: 1144-1147). Повышенные уровни эндотелина в кровеносной системе наблюдали также у пациентов, перенесших чрезкожную внутрисосудистую коронарную ангиопластику (РТСА) (Табага и др. (1991) Ме1аЬ. СНп. Ехр. 40:1235-1237; 8ащау и др. (1991) С1гси1а1юп 84 (8ирр1. 4):726), и у индивидуумов с легочной гипертензией (М1уаисЫ и др. (1992) 1рп. 1. Рйагтасо1. 58:279Р; 81е\саг( и др. (1991) Апп. 1п1ета1 Мебкше 114:464-469). Таким образом, существуют данные клинических испытаний для людей, подтверждающие наличие корреляции между повышенными уровнями эндотелина и рядом болезненных состояний.

Агонисты и антагонисты эндотелина

Поскольку эндотелин связан с рядом болезненных состояний и вовлечен во многие физиологические эффекты, представляют интерес соединения, которые могут ослаблять или усиливать активности, связанные с эндотелином, такие как взаимодействие эндотелина с рецептором или сосудосуживающую активность. Идентифицированы соединения, обладающие антагонистической активностью по отношению к эндотелину. Например, продукт ферментации 81гер1отусек тщактепкк, обозначенный как ВЕ-18257В, идентифицирован как антагонист ЕТ_а рецептора. ВЕ-18257В представляет собой циклический пентапептид цикло(П-С1и-Ь-А1аалло-П-Пе-Е-Ееи-О-Тгр), который оказывает концентрационно-зависимое ингибирующее действие на связывание ¹²⁵1-меченого эндотелина-1 тканями сердечно-сосудистой системы (1С₅₀ 1,4 мкМ в гладких мышцах аорты, 0,8 мкМ в мембранах желудочка и 0,5 мкМ в культуре клеток гладких мышц аорты). При концентрации вплоть до 100 мкМ он не ингибирует связывание с рецепторами тканей, в которых преобладают ЕТ_в рецепторы. Были синтезированы циклические пентапептиды, близкие ВЕ18257В, такие как цикло(П-Акр-Рго-О-Уа1-ЕеиΌ-Тгр) (ВО-123), которые, как было показано, обладают антагонистической активностью по отношению к ЕТ_а рецепторам (см. патент США № 5,114,918 на имя 1к1ика\\'а и др.; см. также Европейский патент А1 0436189, принадлежащий ΒΑΝΥυ РНАВМАСЕиТ1САЬ СО., ЕГО. (7 октября 1991 г.)). Исследования, в которых проводили измерение ингибирования этими циклическими пептидами связывания эндотелина-1 с эндотелин-специфическими рецепторами, показывают, что эти циклические пептиды связываются преимущественно с ЕТ_а рецепторами.

Идентифицированы и другие пептидные и непептидные ЕТ_а антагонисты (см., например, патенты США №№ 5,352,800, 5,334,598,

5,352,659, 5,248,807, 5,240,910, 5,198,548,

5,187,195, 5,082,838). Они включают другие циклические пентапептиды, ацилтрипептиды, гексапептидные аналоги, некоторые антрахиноновые производные, инданкарбоновые кислоты, некоторые Ν-пириминилбензолсульфонамиды, некоторые бензолсульфонамиды и некоторые нафталинсульфонамиды (№1карта и др. (1991) 1. АпбЬю!. 44:1348-1356; М1уа1а и др. (1992) 1. АпНЬю!. 45:74-8; 1кЫка^а и др. (1992)

ТМеб.Сйет. 35:2139-2142; патент США № 5,114,918, на имя 1кЫка^а и др.; Европейский патент А1 0569193; Европейский патент А1 0558258; Европейский патент А1 0436189, принадлежащий ΒΑΝΥυ РНАВМАСЕиТ1САЬ СО., ЬТБ. (7 октября 1991 г.); заявка на патент Канады 2,067,288; заявка на патент Канады 2,071,193; патент США № 5,208,243, патент США № 5,270,313; патент США № 5,612,359, патент США № 5,514,696, патент США № 5,378,715; Собу и др. (1993) Меб. С1ет. Век. 3:154-162; М1уа1а и др. (1992) 1. АпНЫо! 45:1041-1046; М1уа1а и др. (1992) 1. АпНЫо! 45:1029-1040, Рирто1о и др. (1992) РЕВ8 Бей. 305:41-44; ОкйакЫ и др. (1002) 1. АпНЫо! 45:1684-1685; Европейский патент А1 0496452; С1охе1 и др. (1993) №11иге 365:759-761; публикация международной патентной заявки XVО 93/08799; \1к1ик1Ье и др. (1993) Ь1£е 8οΐ. 52:717724; и Вешдш и др. (1993) К1бпеу 1п1. 44:440444). Многочисленные сульфонамиды, являющиеся пептидными антагонистами эндотелина, описаны также в патентах США №№ 5,464,853, 5,594,021, 5,591,761, 5,571,821, 5,514,691, международной заявке РСТ № 96/31492 и публикации международной заявки РСТ VО 97/27979. Обычно идентифицированные соединения в исследованиях ш νίΙΐΌ проявляют активность как ЕТ_а антагонисты при концентрациях порядка 50-100 мкМ или меньше. Показано, что ряд таких соединений обладает активностью также и в исследованиях ш у1уо на животных-моделях.

Антагонисты и агонисты эндотелина в качестве терапевтических агентов Было признано, что соединения, обладающие активностью при концентрации 1С₅₀ или ЕС50 порядка 10^-4 или ниже в стандартных исследованиях антагонистической или агонистической активности по отношению к эндотелину щ уйго, находят применение в фармакологии (см., например, патенты США №№ 5,352,800, 5,334,598, 5,352,659, 5,248,807, 5,240,910,

5,198,548, 5,187,195 и 5,082,838). Благодаря этой активности такие соединения представляются полезными для лечения гипертензии, такой как недостаточность периферического кровообращения, болезни сердца, такой как стенокардия,

Ί кардиомиопатия, атеросклероз, инфаркт миокарда; легочной гипертензии, вазоспазма, рестеноза сосудов, болезни Рейно, церебрального паралича, такого как церебральный артериальный спазм, церебральная ишемия, церебральный спазм в последней стадии после субарахноидального кровотечения, астмы, бронхоабструкции, почечной недостаточности, в частности пост-ишемической почечной недостаточности, циклоспорин нейротоксикоза, такого как острая почечная недостаточность, колита, а также других воспалительных заболеваний, эндотоксического шока, вызванного или связанного с эндотелином, и других заболеваний, в которых эндотелин играет определенную роль.

Ввиду многочисленных физиологических эффектов эндотелина и его связи с определенными заболеваниями, эндотелин, по всей видимости, играет критическую роль в этих патофизиологических состояниях (см., например, δαίΐο и др. (1990) Нурейеикюп 15: 734-738; ТошИа и др. (1989) N. Епф. 1. Меб. 321: 1127; КипЬага и др. (1989) 1. Сатбюуаке. РйагшасоБ 13 (8ирр1. 5): 813-817; ОоВеПх (1992) 1. Меб. Сйеш. 35: 14931508: Моге1 и др. (1989) Еиг. 1. РйатшасоБ 167: 427-428). Более детальное знание действия и структуры пептидов эндотелинового семейства могло бы обеспечить более глубокое понимание процесса развития и лечения таких состояний.

Для достижения более глубокого понимания и для разработки способов лечения эндотелин-медиируемых или связанных с эндотелином заболеваний, необходимо идентифицировать соединения, которые модулируют или изменяют активность эндотелина. Идентификация соединений, модулирующих активность эндотелина, таких как специфические антагонисты или агонисты, может не только помочь выяснить функцию эндотелина, но и привести к получению терапевтически полезных соединений. В частности, соединения, которые специфически препятствуют взаимодействию эндотелиновых пептидов с ЕТ_а или ЕТ_В рецепторами, могли бы быть использованы для идентификации существенных характеристик эндотелиновых пептидов, могли бы помочь при разработке терапевтических агентов и могли бы быть использованы в качестве терапевтических агентов, обладающих специфичностью к заболеванию. Как уже было отмечено выше, многие из соединений, в частности сульфонамидные соединения, являются сильными антагонистами эндотелина и, таким образом, являются идеальными кандидатами для клинического использования. Для клинического использования требуются сильнодействующие соединения, оптимизированные по активности ίη у|уо. а также устойчивые препараты и препараты, подходящие для различных способов введения.

Цель изобретения состоит в создании соединений, обладающих способностью модулировать биологическую активность одного или более эндотелиновых изопептидов и обладающих активностью ίη νί\Ό. Другая цель состоит в создании соединений, используемых в качестве антагонистов эндотелина ίη νί\Ό. Цель изобретения состоит также в использовании соединений, которые специфически взаимодействуют с ЕТ_а рецепторами или ингибируют взаимодействие эндотелиновых пептидов с ЕТ_а рецепторами. Целью данного изобретения является также разработка препаратов (рецептур) таких соединений, которые могут использоваться для лечения заболеваний, связанных с эндотелином. Такие соединения должны применяться в качестве терапевтических агентов для лечения заболеваний и нарушений, связанных с эндотелином.

Сущность изобретения

Представлены сульфонамиды, препараты сульфонамидов и способы воздействия на взаимодействие эндотелинового пептида с ЕТ_а и/или ЕТ_в рецепторами. В частности, представлены сульфонамиды, препараты сульфонамидов и способы ингибирования связывания эндотелинового пептида с ЕТ_а или ЕТ_в рецепторами. Сульфонамиды являются замещенными или незамещенными тиенил- и фенилсульфонамидами.

Особенно предпочтительными сульфонамидами являются Ν-изоксазолил тиенил- и фенилсульфонамиды, в которых тиофен или бензольное кольцо имеют арильную группу, предпочтительно фенильную группу, в качестве заместителя, имеющего в свою очередь только один или два атома водорода в качестве заместителей. Эти соединения являются чрезвычайно сильнодействующими, обладают исключительно высокими селективностью, эффективностью, биодоступностью и временем полужизни ίη νί\Ό и/или стабильностью по сравнению с соединениями, в которых арильная группа имеет более двух атомов водорода (в качестве заместителей), причем удается избежать токсикологических эффектов, связанных с гидрофобностью. Кроме того, эти соединения обладают хорошими профилями в стандартных тестах ίη У11то и ίη νί\Ό на токсичность.

В изобретении показано, что для введения ίη у|уо желательно получить нужную степень гидрофильности представленного сульфонамида с целью уменьшения возможных гемолитических свойств соединений. Это достигается, например, в соединениях, в которых арильная группа, являющаяся заместителем у тиофена или бензольного кольца, является тетра-, пентаили гексазамещенной, предпочтительно тетраили пентазамещенной. В тех случаях, когда арильная группа является тетразамещенной, она предпочтительно замещена в 1, 2, 4 и 6 положениях. Заместитель в 1 положении - это связь с тиофеном или бензольным кольцом. Один из заместителей во 2, 4 или 6 положениях предпочтительно является полярной группой, такой как гидроксил, ацетокси, карбоксил, сульфонил, ацил, гетероарил, оксим, галогенид, псевдогалогенид и карбоксамид.

Такое замещение усиливает антагонистическую активность по отношению к эндотелину и гидрофильность соединений.

Если арильная группа имеет три неполярных заместителя, такие как алкильные группы, в частности метильные группы, то арильная группа предпочтительно является пента- или гексазамещенной. В таких пентазамещенных арильных группах четвертый заместитель представляет собой связь с тиофеном, фураном, пирролом или бензольным кольцом, а пятый заместитель предпочтительно является полярной группой, такой как гидроксил, ацетокси, карбоксил, сульфонил, ацил, гетероарил, оксим, галогенид, псевдогалогенид и карбоксамид. Такое замещение является предпочтительным для достижения наивысших уровней активности при терапевтическом использовании.

Приведенные выше принципы введения заместителей обеспечивают получение соединений, обладающих хорошей биодоступностью, длительным временем полужизни ΐη νίνο и/или хорошей эффективностью ΐη νίνο. На основании приведенного в данном изобретении описания могут быть эмпирически с использованием подходящих моделей на животных определены другие оптимальные принципы введения заместителей и сами заместители.

Соединения, предназначенные для исполь зования в представленных препаратах и способах, представляют собой сульфонамиды формулы I

и их фармацевтически приемлемые производные, в которых Аг¹ является арильной или гетероарильной группой, незамещенной или замещенной одним или более заместителями, вклю чая алкильную группу, арильную группу, замещенную арильную группу, нитрогруппу, аминогруппу или галогенид; или является алкильной группой. В частности, Аг¹ является арилом или 5- или 6-членным замещенным или незамещенным ароматическим или гетероароматическим кольцом, в частности 3- или 5-изоксазолилом, пиридазинилом, пиразинилом, включая 2пиразинил, тиазолилом, включая 2-тиазолил, бензотиадиазолилом, включая 2,1,3-бензотиадиазол-5-ил, бензоксадиазолилом, включая 2,1,3-бензоксадиазол-5-ил, пиримидинилом, включая 2-пиримидинил, или замещенными бензольными группами, включая арилоксизамещенные бензольные группы, или является бициклическим или трициклическим углеродным или гетероциклическим кольцом.

Более предпочтительными для Аг¹ являются 3- или 5-изоксазолил группы. В этих вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу II

ИЛИ где К¹ и К² являются (ΐ), (ίί) или (ш) следующим образом:

(ί) К¹ и К², каждый независимо, выбран из

Н, ΝΗ₂, ΝΟ₂, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, алкилокси, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, арилокси, ариламино, арилтио, арилсульфинила, арилсульфонила, галоалкила, галоарила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, аминокарбонила, арилкарбонила, формила, замещенной или незамещенной амидогруппы и замещенной или незамещенной уреидогруппы, в которых алкильные, алкенильные и алкинильные фрагменты содержат от 1 до примерно 14 атомов углерода и являются линейными, разветвленными или циклическими, а арильные фрагменты содержат от примерно 4 до 16 атомов углерода, за исключением того, что К² не является галогенидом или псевдогалогенидом;

или (ϊϊ) К¹ и К² вместе образуют -(СН₂)_П-, где η число от 3 до 6; или (ΐϊί) К¹ и К² вместе образуют 1,3бутадиенил (-СН=СН-СН=СН-).

В предпочтительных вариантах осуществления изобретения К¹ и К², каждый независимо, выбран из алкила, низшего алкенила, низшего алкинила, низшего галоалкила, галогенида, псевдогалогенида или Н, за исключением того, что К² не является галогенидом.

В соединениях, предназначенных для использования в представленных композициях и способах, Аг² является тиофеном, фураном, пирролом или фенильной группой и имеет фор-

где М является -С(У)-№-, (СН2)_тС(У)(СН2)_г, (ОЫЛ ίΥ)ΝΗ(.ΊΙ·.).. (СН2)т(СН=СН)(СН2)_г, (СН2)тС(У)(СН2)^Н(СН2)_г, С=ХОН)(СН₂)_Г, (СН2)тС(У)(СН=СН)^Н(СН2)_г, СН(ОН)(СН2)_Г, СН(СНз)С(У)(СН2)_г, СН(СНз)С(У)(СН2)т(СН= СН)(СН2)_Г, (СН₂)г, (СН2)_ГО или (СН2)8(О)п; где η является числом от 0 до 2; т, 8 и г, каждое независимо, является числом от 0 до 6, предпочтительно от 0 до 3; является О, NΗ или (СН₂)₂, где ζ является числом от 0 до 6, предпочтительно от 0 до 3, более предпочтительно 1; и Υ является О, 8, или совместно с К⁸ и атомами, к которым они присоединены, образуют незамещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, содержащее от 3 до 16 членов, предпочтительно 5- или 6-членное не11 замещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, более предпочтительно 6-членное незамещенное или замещенное гетероциклическое кольцо; М предпочтительно является -С(У)-А- или (СН₂)_Х;

К³ и К⁴ независимо выбраны из водорода, галогенида, циано, цианоалкила, С(О)К⁴¹, алкила, алкенила, циклоалкила и арила, или вместе образуют алкилен или алкенилен, где К⁴¹ является алкилом, арилом, гетероарилом, аралкилом, гетероаралкилом, циклоалкилом, алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино, алкилсульфониламино, арилсульфониламино, алкилсульфонилалкиламино, алкилсульфонилариламино, арилсульфонилалкиламино или арилсульфонилариламино;

Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом; а и Ь, каждое независимо, равно 0 или 1;

К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹, каждый независимо, выбран из (ί) или (и) следующим образом:

(ί) К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹, каждый независимо, выбран из Н, ОН, ИНК³⁸, СОИК³⁸К³⁹, ΝΟ2, циано, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, алкенилтио, алкениламино, алкенилокси, алкенилсульфинила, алкенилсульфонила, алкоксикарбонила, ариламинокарбонила, алкиламинокарбонила, аминокарбонила, (алкиламинокарбонил)алкила, ацетокси, гидроксила, карбоксила, карбоксиалкила, карбоксиалкенила, алкилсульфониламиноалкила, цианоалкила, ацетила, ацетоксиалкила, гидроксиалкила, алкоксиалкокси, гидроксиалкила, (ацетокси)алкокси, (гидрокси)алкокси, формила, сульфонилхлорида, аминокислот, гексоз, Огликозидов, рибоз, низшего алкила, СИ, -(СН2)хС(О)(СН2)уСН3, -(СН2)хСН3, ((ΊΙ+.ΝΊΙнизшего алкила, -(СН2)хС(О)ИН2, Ό-, Ь- или рацемической аминокислоты, первичного или вторичного амида, О-гликозида, гексозы или рибозы, -8(О)2ИН2, гидрокси, алкокси, алкоксикарбонила, ацетоксиалкила, -(СН2)ХСООН, -(СН2)хСН(СООН)(СН2)уСН3, СО2-низшего алкила, СИ, гетероарила, С(О)(СН2)Х8(О)2(СН2)уСН3, С(=И-ОК³⁸)(СН2)_уСН₃, -С(О)С(О)(СН₂)_УСН₃, -(СН₂)_ХИ(СН₃)₂, сульфонилхлорида, 8(О)₂ИНК⁵⁰, О8(О)₂ИК³⁸К³⁹, алкиларила, алкилгетероарила, С(О)ИНК⁵⁰, -(СН2)ХОН и -С(О)И(Н)И(Н)К⁵⁰;

причем К³⁸ и К³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, галоалкила, алкиларила, гетероциклила, арилалкила, арилалкокси, алкокси, арилокси, циклоалкила, циклоалкенила и циклоалкинила, и каждый предпочтительно выбран из водорода, низшего алкила, низшей алкокси и низшего галоалкила; х и у, каждый независимо, является числом от 0 до 14 и К⁵⁰ является заместителем, таким как водород, низший алкил, низшая алкокси или гетероарил; или (ΐΐ) по крайней мере два из К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹, являющиеся заместителями у соседних атомов углерода в кольце, вместе образуют алкилендиокси, алкилентиооксиокси или алкилендитиоокси (т.е. -О-(СН₂)_П-О-, -8-(СН₂)_п-О-, -8(СН₂)_п-8-, где п является числом от 1 до 4, предпочтительно 1 или 2), которые могут быть незамещенными или замещенными путем замещения одного или более атомов водорода галогенидом, низшим алкилом, низшей алкокси или низшим галоалкилом, а другие из К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹ выбраны как (ί); и

X является -С(К³)=С(К⁴)-, 8, О или ИК¹¹, где К¹¹ является водородом или содержит примерно до 30 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 10, более предпочтительно от 1 до 6 и выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, алкиларила, гетероциклила, аралкила, аралкокси, циклоалкила, циклоалкенила, циклоалкинила, С(О)К¹⁵ и 8(О)пК¹³, где п является числом от 0 до 2; К¹⁵ является водородом, алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, алкиларилом, гетероциклилом, аралкилом, аралкокси, циклоалкилом, циклоалкенилом или циклоалкинилом; К¹¹ и К¹⁵ являются незамещенными или замещенными одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы Ζ, которая согласно данному изобретению содержит водород, галогенид, псевдогалогенид, алкил, алкокси, алкенил, алкинил, арил, аминокислоты, первичные и вторичные амиды, О-гликозиды, гексозы, рибозы, алкиларил, алкилгетероарил, гетероциклил, аралкил, аралкокси, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкинил, ОН, СИ, С(О)К¹⁶, ОС(О)К¹⁶, СО2К¹⁶, ОСО2К¹⁶, 8Н, 8(О)пК¹⁶ в которых п является числом от 0 до 2, ИНОН, ИК¹²К¹⁶, ИО2, И3, ОК¹⁶, К¹²ИСОК¹⁶ и СОИК¹²К¹⁶; К¹⁶ является водородом, алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, алкиларилом, гетероциклилом, аралкилом, аралкокси, циклоалкилом, циклоалкенилом, циклоалкинилом, хлоридом, ИНК⁵⁰, алкиларилом, алкилгетероарилом или -(СН2)хОН; К⁵⁰ является заместителем, таким как водород, низший алкил, низшая алкокси или гетероарил; х является числом от 0 до 14; К¹², который независимо выбран из К¹¹ и Ζ, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, алкиларила, гетероциклила, аралкила, аралкокси, циклоалкила, циклоалкенила, циклоалкинила, С(О)К¹⁷ и 8(О)пК¹⁷, в которых п является числом от 0 до 2; К¹⁷ является водородом, алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, алкиларилом, гетероциклилом, аралкилом, аралкокси, циклоалкилом, циклоалкенилом или циклоалкинилом; К¹² и К¹⁶ могут вместе образовывать алкилен; каждый из К¹¹, К¹², К¹⁵ и К¹⁶ в свою очередь может быть замещен любой из подходящих групп, входящих в состав Ζ.

Во всех вариантах осуществления изобретения X предпочтительно является 8 или

-СН=СН-, более предпочтительно 8.

В некоторых вариантах осуществления изобретения соединения выбраны с условием, что максимум два из В⁵, В⁶, В⁷, В⁸ и В⁹ являются водородом. В других вариантах осуществления изобретения соединения выбраны с условием, что максимум один из В⁵, В⁶, В⁷, В⁸ и В⁹ является водородом.

В других вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу I или II, при условии, что конкретное соединение специально не раскрыто в международных публикациях заявок на выдачу патента XVО 94/27979, νθ 96/31492, νθ 98/13366 и νθ 98/49162, включенных в данное изобретение в виде ссылки.

В других вариантах осуществления изобретения соединения выбраны с условием, что В⁸ не является СООН, ΟΟΝΗ₂ или фенилом.

Среди всех описанных здесь соединений предпочтительными являются соединения, ингибирующие или повышающие активность, связанную с эндотелином, примерно на 50% при концентрациях менее порядка 10 мкМ. Более предпочтительными являются те соединения, которые ингибируют или повышают активность, связанную с эндотелином, примерно на 50% при концентрациях менее порядка 1 мкМ, более предпочтительно менее примерно 0,1 мкМ, еще более предпочтительно менее примерно 0,01 мкМ и наиболее предпочтительно менее примерно 0,001 мкМ. Следует отметить, что, как описано ниже, 1С₅₀ концентрация, определенная с помощью исследований ίη νίίτο, является нелинейной функцией температуры инкубации. Предпочтительные приведенные здесь значения относятся к исследованиям, проведенным при 4°С. В тех случаях, когда исследования проводят при 24°С, получают несколько более высокие значения 1С₅₀ концентраций (см. табл. 1). Соответственно, предпочтительные 1С₅₀ концентрации являются примерно в 10 раз выше. Кроме того, более предпочтительными среди этих соединений являются те соединения, которые по данным исследований с использованием стандартных моделей на животных, обладают наибольшей биодоступностью и стабильностью.

Одними из наиболее предпочтительных соединений, предназначенных для использования согласно представленным здесь способам, являются ЕТ_а селективные соединения, т.е. такие соединения, которые взаимодействуют с ЕТ_а рецепторами при значительно более низких концентрациях (1С₅₀ по крайней мере примерно в 10 раз меньше, предпочтительно в 100 раз меньше), чем с ЕТ_в рецепторами. В частности, предпочтительными являются соединения, которые взаимодействуют с ЕТ_а рецепторами при 1С₅₀ менее примерно 10 мкМ, предпочтительно менее 1 мкМ, более предпочтительно менее 0,1 мкМ, а с ЕТ_в рецепторами при 1С₅₀ более примерно 10 мкМ, или соединения, которые взаимодействуют с ЕТ_в рецепторами при 1С₅₀ менее мкМ, предпочтительно менее 1 мкМ, более предпочтительно менее 0,1 мкМ, а с ЕТ_а рецепторами при 1С₅₀ более примерно 10 мкМ.

Также представляют интерес любые фармацевтически приемлемые производные, включая соли, эфиры, кислоты и основания, сольваты, гидраты и пролекарства сульфонамидов. Предпочтительными являются фармацевтически приемлемые соли, включая, но не ограничиваясь только этими, соли аминов, такие как, но не ограничиваясь только ими, Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, соли аммония, диэтаноламин и другие гидроксиалкиламины, этилендиамин, Ν-метилглюкамин, прокаин, Ν-бензилфенэтиламин, 1-парахлорбензил-2пирролидин-1'-илметилбензимидазол, диэтиламин и другие алкиламины, пиперазин, трис(гидроксиметил)аминометан, соли щелочных металлов, такие как, но не ограничиваясь только ими, соли лития, калия и натрия, соли щелочно-земельных металлов, такие как, но не ограничиваясь только ими, соли бария, кальция и магния, соли переходных металлов, такие как, но не ограничиваясь только ими, соли цинка, а также соли других металлов, такие как, но не ограничиваясь только ими, динатрий фосфат и кислый фосфат натрия, предпочтительно натриевые соли, более предпочтительно натриевую соль, включая также, но не ограничиваясь только ими, соли минеральных кислот, такие как, но не ограничиваясь только ими, гидрохлориды и сульфаты, соли органических кислот, такие как, но не ограничиваясь только ими, ацетаты, лактаты, малаты, тартраты, цитраты, аскорбаты, сукцинаты, бутираты, валераты и фумараты. Предпочтительными являются соли щелочных металлов, в частности соли натрия. Наиболее предпочтительными солями являются натриевые соли.

Представлены фармацевтические препараты (рецептуры), предназначенные для введения подходящим способом и средствами, содержащие эффективные концентрации одного или более представленных соединений или фармацевтически приемлемых производных сульфонамидов, таких как соли, эфиры, кислоты и основания, сольваты, гидраты и пролекарства, предпочтительно соли, более предпочтительно соли натрия, включая, но не ограничиваясь только ими, кислый фосфат натрия, наиболее предпочтительно натриевую соль, и обеспечивающие доставку количеств, эффективных для лечения гипертензии, инсульта, сердечнососудистых заболеваний, заболеваний сердца, включая инфаркт миокарда, легочной гипертензии, легочной гипертензии новорожденных, эритропоэтин-зависимой гипертензии, респираторных заболеваний, воспалительных заболеваний, включая астму, сужения просвета бронхов, офтальмологических заболеваний, включая глаукому и недостаточность перфузии сетчатки, гастроэнтерологических заболеваний, почечной недостаточности, эндотоксического шока, менструальных расстройств, осложнений при родах, ранений, ламинита, нарушений половой функции, менопаузы, остеопороза и заболеваний костей, связанных с нарушениями структуры костной ткани, климактерических нарушений, включая приливы, нарушения системы свертывания крови, урогенный дискомфорт и повышенный риск сердечно-сосудистого заболевания, а также других заболеваний, связанных с пониженной функцией яичников у женщин среднего возраста, преэклампсии, состояний, связанных с контролем и управлением усилиями во время беременности, анафилактического шока, геморрагического шока, нарушений, ослабляемых под действием окиси азота, а также других заболеваний, в которые вовлечены физиологические ответы, связанные с эндотелином, или заболеваний, которые сопровождаются сужением сосудов, или заболеваний, симптомы которых могут быть ослаблены при введении антагониста или агониста эндотелина.

Препараты являются композициями, подходящими для введения любым желаемым способом, и представляют собой растворы, суспензии, эмульсии, таблетки, диспергируемые таблетки, драже, капсулы, порошки, сухие порошки для ингаляции, препараты пролонгированного действия, аэрозоли для носового и респираторного введения, пластыри для трансдермального введения, а также для любого другого подходящего способа введения. Композиции должны подходить для перорального введения, парентерального введения путем инъекций, включая подкожные, внутримышечные или внутривенные, в виде инъектируемого водного или масляного раствора или эмульсии, трансдермального введения и других выбранных способов введения.

Также представлены лиофилизированные порошки производных сульфонамидов, способы их получения и препараты, содержащие растворенные формы лиофилизированных порошков. Также представлены пузырьки, ампулы, шприцы и другие подходящие емкости, содержащие порошки.

Предпочтительные препараты представляют собой стерильный лиофилизированный порошок, содержащий фармацевтически приемлемые соли сульфонамида, предпочтительно натриевые соли, более предпочтительно натриевую соль, а также могут быть выполнены в виде капсул и таблеток. Количества и концентрации эффективны для ослабления любых симптомов любого из нарушений.

В одном варианте осуществления изобретения препараты представляют собой сухие лиофилизированные вещества, содержащие одну или более солей, предпочтительно кислые фосфатные натриевые соли или натриевые соли, более предпочтительно натриевую соль, одного или более сульфонамидных соединений форму лы I, и также содержат один или более из следующих компонентов: буфер, такой как натрий или калий фосфатный или нитратный; солюбилизирующий агент, такой как ЕАВКА.8ОЬ (полиэтиленгликоль-8-каприловые/каприновые глицериды, продаваемые Са11сГо55С 8А, Франция), диметилсульфоксид (ДМСО), бис(триметилсилил)ацетамид, этанол, пропиленгликоль (ПГ) или поливинилпирролидин (ПВП); и сахар или другой углевод, такой как сорбит или декстроза.

В других вариантах осуществления изобретения препараты представляют собой твердые формы дозировок, предпочтительно капсулы или таблетки. В предпочтительном варианте осуществления изобретения препараты представляют собой сухие формы дозировок, предпочтительно капсулы или таблетки, содержащие 10-100%, предпочтительно 50-95%, более предпочтительно 75-85%, наиболее предпочтительно 80-85% по весу одной или более солей, предпочтительно кислых фосфатных солей натрия или солей натрия, более предпочтительно натриевых солей, одного или более сульфонамидных соединений формулы I; порядка 0-25%, предпочтительно 8-15% наполнителя или связующего, такого как лактоза или микрокристаллическая целлюлоза; примерно от 0 до 10%, предпочтительно порядка 3-7%, дезинтегрирующего агента, такого как модифицированный крахмал или полимер на основе целлюлозы, в частности, под названием АС-О1-8ОЬ, ТМС Сотрогайои, Филадельфия, Пенсильвания) или крахмал гликолят натрия; и 0-2% смазывающего вещества, такого как стеарат магния, тальк и стеарат кальция. Дезинтегрирующий агент, такой как кросскармеллоза натрия или крахмал гликолят натрия, обеспечивает быстрое рассасывание целлюлозной матрицы для немедленного высвобождения активного агента вслед за растворением полимерного покрытия. Во всех вариантах осуществления изобретения точное количество активного ингредиента и вспомогательных ингредиентов может быть определено эмпирически и зависит от способа введения и нарушения, подвергающегося лечению.

Изобретение также включает твердые формы для применения в виде таблеток. Понятно, что точные количества и состав композиции препарата могут быть определены специалистами эмпирически.

Представлены способы использования таких соединений и препаратов для изменения (модулирования) взаимодействия эндотелинового пептида с ЕТ_А и/или ЕТ_В рецепторами. Способы осуществляют посредством контакта рецепторов с одним или более сульфонамидом или с его фармацевтически приемлемыми производными, в частности с солями, до, одновременно или после взаимодействия рецепторов с эндотелиновым пептидом.

Представлены способы ингибирования связывания эндотелинового пептида с эндотелиновым рецептором. Эти способы осуществляют путем контакта рецептора с одним или более соединениями или их фармацевтически приемлемыми производными, в частности с солями, одновременно, до или после контакта рецептора с эндотелиновым пептидом.

Также представлены способы лечения заболеваний, связанных с эндотелином, включая, но не ограничиваясь только ими, гипертензию, астму, шок, глазную гипертензию, глаукому, недостаточность перфузии сетчатки и другие состояния, которые каким-либо образом зависят от эндотелинового пептида, или для лечения расстройства, сопровождающегося сужением сосудов, или таких заболеваний, симптомы которых ослабляются при введении антагонистов или агонистов эндотелина.

В частности, представлены способы лечения заболеваний, связанных с эндотелином, путем введения эффективных количеств сульфонамидов или фармацевтически приемлемых производных сульфонамидов. В частности, представлены способы лечения заболеваний, связанных с эндотелином, включая гипертензию, сердечно-сосудистые заболевания, заболевания сердца, включая инфаркт миокарда, легочную гипертензию, легочную гипертензию новорожденных, эритропоэтинзависимую гипертензию, респираторные заболевания и воспалительные заболевания, включая астму, бронхоабструкцию, офтальмологические заболевания, включая глаукому и нарушения перфузии сетчатки, гастроэнтерологические заболевания, почечную недостаточность, эндотоксический шок, менструальные нарушения, осложнения при родах, ранения, ламинит, нарушения половой функции, менопаузу, остеопороз и заболевания костей, связанные с нарушениями структуры костной ткани, климактерические нарушения, включая приливы, нарушения системы свертывания крови, урогенный дискомфорт и повышенный риск сердечно-сосудистого заболевания, а также другие заболевания, связанные с пониженной функцией яичников у женщин среднего возраста, преэклампсию, состояния, связанные с контролем и управлением усилиями во время беременности, нарушения, ослабляемые под действием окиси азота, анафилактический шок, геморрагический шок и другие заболевания, в которые вовлечены связанные с эндотелином физиологические ответы, путем введения эффективных количеств одного или более представленных соединений в фармацевтически приемлемых носителях. Предпочтительными способами лечения являются способы лечения гипертензии и почечной недостаточности.

Более предпочтительными способами лечения являются такие способы, в которых используется по крайней мере одно соединение, ингибирующее взаимодействие эндотелина-1 с

ЕТ_а рецепторами при 1С₅₀ менее примерно 10 мкМ и предпочтительно менее примерно 5 мкМ, более предпочтительно менее примерно 1 мкМ, еще более предпочтительно менее 0,1 мкМ и наиболее предпочтительно менее 0,05 мкМ. Другими предпочтительными способами являются такие, в которых используются препараты, содержащие фармацевтически приемлемые соли одного или более соединений, которые являются ЕТ_а селективными, или фармацевтически приемлемые соли одного или более соединений, которые являются ЕТ_В селективными. Способы, в которых соединения являются ЕТ_а селективными, предназначены для лечения нарушений, требующих расширения сосудов, таких как гипертензия; в то время как способы, в которых соединения являются ЕТ_в селективными, предназначены для лечения расстройств, требующих бронходилятации, таких как астма.

В ходе практического использования способов эффективные количества препаратов, содержащих терапевтически эффективные концентрации соединений, разработанных для перорального, внутривенного, локального и местного применения для лечения гипертензии, сердечно-сосудистых заболеваний, заболеваний сердца, включая инфаркт миокаода, респираторных заболеваний, включая астму, воспалительных заболеваний, офтальмологических заболеваний, включая глаукому и нарушение перфузии сетчатки, гастроэнтерологических заболеваний, почечной недостаточности, зависимого от иммунодепрессантов сужения сосудов почек, эритропоэтинзависимого сужения сосудов, эндотоксического шока, анафилактического шока, геморрагического шока, легочной гипертензии, легочной гипертензии новорожденных, ламинита, нарушений половой функции, нарушений, ослабляемых под действием окиси азота, менопаузы, остеопороза и заболеваний костей, связанных с нарушениями структуры костной ткани, климактерических нарушений, включая приливы, нарушения системы свертывания крови, урогенный дискомфорт и повышенную частоту сердечно-сосудистого заболевания, а также другие заболевания, связанные с пониженной функцией яичников у женщин среднего возраста преэклампсии, состояний, связанных с контролем и управлением усилиями во время беременности, а также других заболеваний, в которые вовлечены физиологические ответы, связанные с эндотелином, назначают индивидууму, имеющему симптомы одного или более из этих нарушений. Количества являются эффективными для ослабления или устранения одного или более симптомов этих нарушений.

Также представлены способы идентификации и выделения субтипов эндотелиновых рецепторов. В частности, представлены способы обнаружения распознавания и выделения эндотелиновых рецепторов с использованием опи19 санных соединений. Кроме того, представлены способы обнаружения распознавания и выделения эндотелиновых рецепторов с использованием представленных в описании соединений.

Кроме того, представлены также способы идентификации соединений, подходящих для лечения конкретных заболеваний, основанные на их предпочтительном сродстве к эндотелиновым рецепторам определенного субтипа.

Также представлены готовые изделия, содержащие упаковочный материал, находящееся внутри упаковочного материала представленное здесь соединение или его фармацевтически приемлемое производное, эффективное для ослабления симптомов связанного с эндотелином заболевания, обладающего антагонистическим действием по отношению к эндотелину или ингибирующее связывание эндотелинового пептида с ЕТ рецептором при 1С₅₀ ниже примерно 10 мкМ, и этикетку, указывающую на то, что соединение или его фармацевтически приемлемое производное используется для ослабления симптомов заболевания, связанного с эндотелином, подавления действия эндотелина или для ингибирования связывания эндотелинового пептида с ЕТ рецептором.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Определения

За исключением оговоренных особо, все использованные технические и научные термины употребляются в том значении, которое является общепринятым среди специалистов в области техники, к которой принадлежит данное изобретение. Все патенты и публикации, на которые имеются указания в настоящем описании, включены в изобретение в виде ссылок.

Эндотелиновые (ЕТ) пептиды включают пептиды, имеющие аминокислотные последовательности, по существу, эндотелина-1, эндотелина-2 или эндотелина-3, и которые действуют как сильные эндогенные сосудосуживающие пептиды.

Состояние, связанное с эндотелином - это состояние, вызванное аномальной активностью эндотелина, или такое состояние, при котором соединения, ингибирующие активность эндотелина, имеют терапевтическое значение. Такие состояния (заболевания) включают, но не ограничены только ими, гипертензию, сердечнососудистые заболевания, астму, воспалительные заболевания, офтальмологические заболевания, менструальные нарушения, осложнения при родах, гастроэнтерологические заболевания, почечную недостаточность, легочную гипертензию, эндотоксический шок, анафилактический шок или геморрагический шок. Связанные с эндотелином состояния также включают состояния, которые являются результатом терапии агентами, повышающими уровни эндотелина, такими как эритропоэтин и иммунодепрессанты.

Эффективное количество соединения для лечения конкретного заболевания - это количество, достаточное для улучшения состояния или в определенной мере ослабления симптомов, связанных с заболеванием. Такое количество может быть введено в виде одной дозы или может быть введено согласно режиму (прописи) в зависимости от того, что является более эффективным. Такое количество может вылечить болезнь, но обычно вводится для ослабления симптомов заболевания. Обычно для достижения желаемого ослабления симптомов требуется повторное введение.

Антагонист эндотелина представляет собой соединение, которое обладает биологической активностью, которую связывают с эндотелиновым пептидом или которой обладает эндотелиновый пептид, или соединение, которое усиливает такую биологическую активность.

Антагонист эндотелина - это соединение, такое как лекарство или антитело, которое ингибирует вызванное эндотелином сужение сосудов, контракцию и другие связанные с эндотелином физиологические ответы. Антагонист может действовать, препятствуя взаимодействию эндотелина с эндотелин-специфическим рецептором или подавляя физиологический ответ (на такое взаимодействие) или биологическую активность эндотелинового изопептида, такую как сужение сосудов. Таким образом, антагонист эндотелина подавляет вызванное эндотелином сужение сосудов или другой ответ, или препятствует взаимодействию эндотелина с эндотелин-специфическим рецептором, таким как ЕТ_а рецепторы, что может быть определено способами, известными специалистам.

Эффективность потенциальных агонистов и антагонистов может быть определена с использованием способов, известных специалистам. Например, активность агониста эндотелина может быть определена по его способности вызывать сужение сосудов изолированной грудной аорты крыс или круглых сегментов воротной вены (Вогдек и др. (1989) Тйше ке1есЦуЦу о! епйо111е1т (Тканевая селективность эндотелина), Еиг. 1. Рйагшасо1. 165, 223-230). Активность антагониста эндотелина может быть определена по его способности подавлять сужение сосудов, вызванное эндотелином. Типичные эксперименты описаны в примерах. Как было отмечено выше, предпочтительные диапазоны концентраций 1С₅₀ приведены со ссылкой на исследования, в которых тестируемое соединение инкубируют с клетками, содержащими ЕТ рецепторы, при 4°С. Представлены также данные исследований, в которых стадия инкубации была проведена при менее предпочтительной температуре 24°С. Понятно, что эти концентрации несколько выше, чем концентрации, определенные при 4°С.

Термины «биодоступность» или «пероральная доступность» относятся к скорости и степени абсорбции. Способы определения биодоступности или пероральной доступности хорошо известны специалистам. Например, биодоступность или пероральная доступность любого из описанных здесь соединений может быть определена эмпирически путем введения этого соединения животному с последующим отбором проб крови через некоторые промежутки времени и измерением концентрации этого соединения в крови. Время полужизни ίη νίνο (ί_1/2) определяется как время, необходимое для уменьшения концентрации вещества в крови в два раза. Оценки площади под кривой для внутривенного введения могут быть использованы для оценки площади под кривой для перорального введения, что дает возможность получения данных по биодоступности. См., например Μίΐο 01Ьа1 (1991), Вюрйагшасеийск апб Рйагшасо1оду, 4-ое издание (Ьеа и 8еб1§ет).

Термин «эффективность» относится к максимальному эффекту, который может быть вызван соединением. Эффективность может быть определена способами, известными специалистам. Например, эффективность можно определить по свойствам соединения и его рецепторно-эффекторной системы как выход на плато кривой концентрация-эффект (воздействие). Термин «эффективность ίη νίνο» относится к эффективности, определенной на животныхмоделях. Например, эффективность описанных здесь соединений ίη νίνο может быть определена по ослаблению легочной гипертензии, вызванной гипоксией у крыс. См., например, ΌίСагк и др. (1995) Ат. 1. РЬу8ю1. 269:Е690-Ь697.

Утверждение, что соединение обладает хорошими данными в стандартных тестах на токсичность ίη νίίτο или ίη νίνο означает, что соединение проявляет улучшенную переносимость по сравнению с известными антагонистами эндотелина. В частности, как описано в данном изобретении, соединения, имеющие более высокие значения 1С₅₀ при ингибировании ферментов Р450, в частности, СР4502С9, 2С19 и 3А4 ферментов, обладают хорошими профилями в стандартных тестах на токсичность ίη νίίτο. Соединения, для которых доза, необходимая для получения ингибирования повышения среднего легочного артериального давления (МРАР) на 50% при использовании стандартной модели острой гипоксии ίη νίνο, является более низкой, обладают хорошими профилями ίη νίνο.

Биологическая активность или биоактивность эндотелина включает любую активность, вызванную, усиленную или подверженную влиянию эндотелина ίη νίνο. Она также включает способность связываться со специфическими рецепторами и вызывать функциональный ответ, такой как сужение сосудов. Она может быть определена в исследованиях ίη νίνο или ίη νίίτο, таких, как описанные в качестве примеров. Существенные активности включают, но не ограничены только этими, сужение сосудов, расши рение сосудов и бронхолитическую активность (бронходилятацию). Например, ЕТ_В рецепторы, очевидно, экспрессируются эндотелиальными клетками сосудов и могут опосредованно влиять на расширение сосудов и другие аналогичные ответы, в то время как ЕТ_А рецепторы, являющиеся специфическими по отношению к эндотелину-1, расположены на гладких мышцах и связаны с сужением сосудов. Любые известные специалистам исследования по измерению или распознаванию подобной активности могут быть использованы для ее определения (см., например, 8рοке8 и др. (1989) 1. Сагбюуа8с. ΡΙκιπιγκοΙ. 13(8ирр1.5):8191-8192; 8рше11а и др. (1991) Ргос. ЫаЙ Асаб. 8ά. И8А 88: 7443-7446; Сагбе11 и др. (1991) Ыеигосйет. Ιηί. 18:571-574): и примеры).

1С₅₀ относится к количеству, концентрации или дозе конкретного тестируемого соединения, вызывающей 50% ингибирование максимального ответа, такого как связывание эндотелина с рецепторами тканей, в исследованиях по измерению такого ответа.

ЕС₅₀ относится к дозе, концентрации или количеству конкретного тестируемого соединения, вызывающему дозозависимый ответ, соответствующему проявлению 50% от максимального конкретного ответа, вызванного, спровоцированного или усиленного конкретным тестируемым соединением.

Термин «ЕТ_А-селективный сульфонамид» относится к сульфонамидам, обладающим 1С₅₀ по отношению к ЕТА рецепторам по крайней мере в 10 раз меньшей, чем 1С₅₀ по отношению к ЕТВ рецепторам.

Термин «ЕТ_В-селективный сульфонамид» относится к сульфонамидам, обладающим 1С₅₀ по отношению к ЕТ_В рецепторам по крайней мере в 10 раз меньшей, чем 1С₅₀ по отношению к ЕТА рецепторам.

Фармацевтически приемлемые соли, эфиры, гидраты, сольваты или другие производные соединений включают любую из таких солей, эфиров и других производных, которые могут быть получены специалистами с использованием известных способов получения таких производных, приводящих в результате к получению соединений, которые могут быть введены животным или людям без значительных токсических эффектов, и которые являются либо фармацевтически-активными средствами, либо пролекарствами. Фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничены только ими, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, включая, но не ограничиваясь только ими, соли натрия, калия, лития, кальция и магния; соли переходных металлов, такие как соли цинка, меди и алюминия; соли с поликатионными противоионами, такие как, но не ограничиваясь только ими, соли аммония и замещенные аммонийные соли, и соли органических аминов, такие как гидроксиалкиламины и алкиламины;

соли минеральных кислот, такие как, но не ограничиваясь только ими, гидрохлориды и сульфаты; соли органических кислот, такие как, но не ограничиваясь только ими, ацетаты, лактаты, малаты, тартраты, цитраты, аскорбаты, сукцинаты, бутираты, валераты и фумараты. Также следует учитывать соответствующие эфиры.

Термин «натриевые соли» относится к любым натриевым солям соединений, в которых противоион включает Να' и может включать другие ионы, такие как НРО₄ ^2-; термин «натриевая соль» (в отличие от термина «натриевые соли») относится к соли, в которой именно Να' является противоионом.

Термин «лечение» означает любой подход, с помощью которого симптомы состояний, нарушения или заболевания ослабляются или каким-то другим способом благотворно изменяются. Лечение также включает любое фармацевтическое использование представленных композиций, такое как использование в качестве противозачаточных средств.

Термин «ослабление» симптомов конкретного расстройства при введении конкретной фармацевтической композиции относится к любому их уменьшению как постоянному, так и временному, прочному или непродолжительному, которое может быть отнесено к введению композиции или связано с ним.

Термин «в основном чистые» означает достаточно гомогенные вещества, в которых не выявляется содержание легко детектируемых примесей при исследовании стандартными способами анализа, такими как тонкослойная хроматография (ТСХ), гель-электрофорез и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), используемыми специалистами для определения такой чистоты, или достаточно чистые вещества, такие, что дальнейшая очистка не приводит к фиксируемым изменениям физических и химических свойств вещества, таких как ферментативная и биологическая активность. Способы очистки соединений для получения в основном химически чистых соединений известны специалистам. В основном химически чистое соединение, может, однако, представлять собой смесь стереоизомеров. В таких случаях, дальнейшая очистка может увеличивать специфическую активность соединения.

Термин «биологическая активность» относится к активностям вещества ίη νίνο или к физиологическим ответам, которые являются результатом введения соединения, композиции или другой смеси ίη νίνο. Таким образом, биологическая активность включает терапевтические эффекты и фармацевтическую активность таких соединений, композиций и смесей.

Повышенная стабильность препарата означает, что процент активного компонента, присутствующего в препарате, определенный с помощью исследований, известных специалистам, таких как высокоэффективная жидкостная хро матография, газовая хроматография и другими, через определенное время после приготовления препарата существенно выше, чем процент активного компонента в другом препарате через то же время после его приготовления. В этом случае говорят, что первый препарат обладает повышенной стабильностью по сравнению с последним.

Пролекарство - это соединение, которое при введении ίη νίνο в результате метаболизма или каким-либо другим способом превращается в биологически, фармацевтически или терапевтически активную форму вещества. Для того чтобы получить пролекарство, фармацевтически активное соединение модифицируют таким образом, чтобы активное соединение регенерировалось в ходе метаболических процессов. Пролекарство может быть разработано для изменения метаболической стабильности или транспортных характеристик лекарства, для маскировки побочных эффектов или токсичности, для улучшения вкуса лекарства или для изменения других характеристик или свойств лекарства. Зная фармакодинамические процессы и метаболизм лекарства ίη νίνο, специалисты могут разработать пролекарства на основе фармацевтически активного вещества, если известно само это вещество (см., например, ΝοβΓαάν (1985) Меάίοίηαΐ СИепиШу Α Βίοοίκιηίοαΐ АрргоаеН. Охίοτά Ишуегайу Рге55. Нью-Йорк, стр. 388-392). Например, сукцинил-сульфатиазол является пролекарством 4-амино-Ы-(2-тиазоил)бензолсульфонамида (сульфатиазола), обладающим измененными транспортными характеристиками.

Термин «кислая изостера» означает группу, которая в значительной степени ионизована при физиологическом рН. Примеры подходящих кислых изостер включают группы: сульфо, фосфоно, алкилсульфонилкарбамоил, тетразолил, арилсульфонилкарбамоил или гетероарилсульфонилкарбамоил.

Термин «гало-» или «галогенид» относится к атомам галогенов: Р, С1, Вг и I.

Псевдогалогениды - это соединения, которые ведут себя в значительной степени так же, как галогениды. Такие соединения могут быть использованы тем же способом и обработаны таким же образом, как галогениды (X^-, где X является галогеном, таким как С1 или Вг). Псевдогалогениды включают, но не ограничены только ими, цианид, цианат, тиоцианат, селеноцианат и азид.

Термин «галогеналкил» относится к радикалам низших алкилов, где один или более атомов водорода замещены на галоген, включая, но не ограничиваясь только этими, хлорметил, трифторметил, 1-хлор-2-фторэтил и другие соединения.

Термин «алкил» означает алифатическую углеводородную группу, которая может иметь линейную или разветвленную цепь, предпочти25 тельно имеющую от 1 до 12 углеродных атомов в цепи. Предпочтительными алкильными группами являются низшие алкильные группы, содержащие от 1 до примерно 6 углеродных атомов в цепи. Термин «разветвленные» означает, что одна или более низших алкильных групп, таких как метил, этил или пропил, присоединены к линейной алкильной цепочке. Алкильная группа может быть незамещенной или независимо замещенной одной или более группами, такими как, но не ограничиваясь только ими: гало, карбокси, формил, сульфо, сульфино, карбамоил, амино и имино. Примеры алкильных групп включают метил, этил, пропил, муравьиную кислоту, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, этансульфиновую кислоту и этансульфоновую кислоту.

Термин «низший» может относиться к алкильным, алкенильным и алкинильным группам, содержащим порядка 6 атомов углерода или меньше. Он также используется для характеристики арильных групп или гетероарильных групп, содержащих 6 или менее атомов в кольце. Термины «низший алкил», «низший алкенил» и «низший алкинил» относятся к углеродным цепям, содержащим менее 6 углеродных атомов. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения представленные соединения, которые содержат алкильные, алкенильные или алкинильные фрагменты, включают фрагменты низших алкилов, низших алкенилов и низших алкинилов.

Термин «алкенил» означает алифатическую углеводородную группу, которая содержит углерод-углеродную двойную связь и которая может быть линейной или разветвленной, и содержит примерно от 2 до 10 атомов углерода в цепи. Предпочтительные алкенильные группы содержат от 2 до примерно 4 атомов углерода в цепи. Термин «разветвленные» означает, что одна или более низших алкильных или низших алкенильных групп присоединена к линейной алкенильной цепочке. Алкенильная группа может быть незамещенной или независимо замещенной одной или более группами, такими как гало, карбокси, формил, сульфо, сульфино, карбамоил, амино и имино. Примеры алкенильных групп включают этенил, пропенил, карбоксиэтенил, карбоксипропенил, сульфиноэтенил и сульфоноэтинил.

Термин «алкинил» означает алифатическую углеводородную группу, которая содержит углерод-углеродную тройную связь, может быть линейной или разветвленной и иметь примерно от 2 до 10 атомов углерода в цепи. Термин «разветвленная» означает, что одна или более низших алкильных, алкенильных или алкинильных групп присоединены к линейной алкинильной цепочке. Примером алкинильной группы является этинил.

Термин «арил» означает ароматическую моноциклическую или полициклическую угле водородную систему, содержащую от 3 до 15 или 16 атомов углерода, предпочтительно от 5 до 10. Арильные группы включают, но не ограничены только ими, такие группы, как фенил, замещенный фенил, нафтил, замещенный нафтил, в которых заместитель является низшим алкилом, галогеном или низшей алкоксигруппой. Предпочтительными арильными группами являются низшие арильные группы, содержащие менее 7 атомов углерода в циклической структуре.

Термины «алкил», «алкокси», «карбонил» и другие используются в значениях, общепринятых среди специалистов. Например, термин «алкил» относится к насыщенным углеродным цепям, содержащим один или более атом углерода; цепи могут быть линейными или разветвленными, или содержать циклические фрагменты, или быть циклическими. Термин «алициклический» относится к арильным группам, которые являются циклическими.

Термин «циклоалкил» относится к насыщенным циклическим углеродным цепям; термины «циклоалкиенил» и «циклоалкинил» относятся к циклическим углеродным цепям, которые содержат по крайней мере одну ненасыщенную двойную или тройную связь соответственно. Циклические фрагменты углеродных цепей могут содержать одно кольцо или два или более конденсированных колец.

Термин «циклоалкенил» означает неароматическую моноциклическую или полициклическую систему колец, содержащую углеродуглерод двойную связь и имеющую от примерно 3 до 10 атомов углерода. Примеры моноциклических циклоалкенильных колец включают циклопентенил или циклогексенил; предпочтительным является циклогексенил. Примером полициклического циклоалкенила является норборниленил. Циклоалкенильная группа может быть независимо замещена одним или более галогеном или алкилом.

Термин «галоалкил» относится к радикалам низших алкилов, в которых один или более атомов водорода замещены на галоген, включая, но не ограничиваясь только ими, хлорметил, трифторметил, 1-хлор-2-фторэтил и подобные соединения.

Термин «галоалкокси» относится к группе ВО-, в которой В является алоалкильной группой.

Термин «карбоксамид» относится к группам, имеющим формулу Β_ΡΟΟΝΕ₂, в которых В выбран из алкила или арила, предпочтительно низшего алкила или низшего арила, и р равно 0 или 1.

Термин «алкиламинокарбонил» относится к группам -0(Ο)ΝΗΒ, в которых В является водородом, алкилом, предпочтительно низшим алкилом или арилом, предпочтительно низшим арилом.

Термин «диалкиламинокарбонил» относится к группам -С(О)ЫК'К, в которых К' и К независимо выбраны из алкила или арила, предпочтительно низшего алкила или низшего арила; карбоксамид относится к группам, имеющим формулу ЫК'СОК.

Термин «алкоксикарбонил» относится к -С(О)ОК, в которых К является алкилом, предпочтительно низшим алкилом или арилом, предпочтительно низшим арилом.

Термины «алкокси» и «тиоалкокси» относятся к группам КО- и К8-, в которых К является алкилом, предпочтительно низшим алкилом или арилом, предпочтительно низшим арилом.

Термин «галоалкокси» относится к группам КО- , в которых К является галоалкильной группой.

Термин «аминокарбонил» относится к -С(О)ИН2.

Термин «алкиламинокарбонил» относится к группам -С(О)ИНК, в которых К является алкилом, предпочтительно низшим алкилом или арилом, предпочтительно низшим арилом.

Термин «алкоксикарбонил» относится к -С(О)ОК, в которых К является алкилом, предпочтительно низшим алкилом.

Термин «циклоалкил» относится к насыщенным циклическим углеродным цепям; термины «циклоалкиенил» и «циклоалкинил» относятся к циклическим углеродным цепям, которые содержат по крайней мере одну ненасыщенную тройную связь. Циклические фрагменты углеродных цепей могут включать одно кольцо или два или более конденсированных колец.

Термин «алкилендиокси» означает -Оалкил-О-группу, в которой алкильная группа соответствует приведенному выше описанию. Термин «замещенный аналог алкилендиокси» означает, что один или оба атома кислорода в алкилендиоксигруппе замещены на атомы или группы атомов, обладающие сходными свойствами, такие как δ, Ν, ΝΗ, 8е. Примером замещенной алкилендиоксигруппы является этиленбис(сульфандиил). «Алкилентиооксиокси» - это -δ-алкил-О-, -О-алкил-δ- и алкилендитиоокси это -8-алкил-8-.

Термин «гетероарил» означает ароматическую моноциклическую систему или систему конденсированных колец, в которых один или более атомов углерода в циклической системе замещен(ы) элементом(ами), отличным от углерода, например, азотом, кислородом или серой. Предпочтительные циклические группы содержат одно или два конденсированных кольца и содержат от 3 до 7 атомов в каждом кольце. По аналогии с «арильными» группами, гетероарильные группы могут быть незамещенными или замещенными одним или более заместителями. Примеры гетероарильных групп включают пиразинил, пиразолил, тетразолил, фуранил, (2- или 3-)тиенил, (2-, 3- или 4-)пиридил, имида зоил, пиримидинил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, хинолинил, индолил, изохинолинил, оксазолил и 1,2,4-оксадиазолил. Предпочтительные гетероарильные группы включают азотсодержащие кольца, содержащие 5-6 атомов в кольце, такие как пиримидинил.

Термин «алкоксикарбонил» означает алкил-О-СО-группу. Примеры алкоксикарбонильных групп включают метокси- и этоксикарбонил.

Термин «карбамоил» означает -ί.ΌΝΗ₂. Как и все описанные здесь группы, эта группа также может быть незамещенной или замещенной. Замещенные карбамоильные группы включают в себя такие, как -ί.ΌΝΥ²Υ³. в которых Υ² и Υ³ независимо являются водородом, алкилом, циано(низшим алкилом), аралкилом, гетероаралкилом, карбокси(низшим алкилом), карбокси(арилзамещенным низшим алкилом), карбокси(карбоксизамещенным низшим алкилом), карбокси(гидроксизамещенным низшим алкилом), карбокси(гетероарилзамещенным низшим алкилом), карбамоил(низшим алкилом), алкоксикарбонил(низшим алкилом) или алкоксикарбонил(арилзамещенным низшим алкилом), при условии, что только один из Υ² и Υ³ является водородом, и если один из Υ² и Υ³ представляет собой карбокси(низший алкил), карбокси(арилзамещенный низший алкил), карбамоил(низший алкил), алкоксикарбонил(низший алкил) или алкоксикарбонил(арилзамещенный низший алкил), то другой из Υ² и Υ³ является водородом или алкилом. Предпочтительными для Υ² и Υ³ независимо являются водород, алкил, циано(низший алкил), аралкил, гетероаралкил, карбокси(низший алкил), карбокси(арилзамещенный низший алкил) и карбамоил (низший алкил).

Термин «любые соответствующие N-(4гало-3-метил-5-изоксазолил), №(4-гало-5метил-3-изоксазолил), №(3,4-диметил-5-изоксазолил), №(4-гало-5-метил-3-изоксазолил), Ν(4-гало-3-метил-5-изоксазолил), №(4,5-диметил3-изоксазолил) производные соединений» относится к соединениям, в которых Аг² соответствует приведенному ниже определению, а Аг¹ представляет собой №(4-гало-3-метил-5изоксазолил), №(4-гало-5-метил-3-изоксазолил), №(3,4-диметил-5-изоксазолил), №(4-гало-5метил-3-изоксазолил), №(4-гало-3-метил-5изоксазолил) или №(4,5-диметил-3-изоксазолил), в которых «гало» является любым галогеном, предпочтительно С1 или Вг.

Аббревиатуры любых защитных групп, аминокислот и других соединений, за исключением оговоренных особо случаев, используются в соответствии с их обычным употреблением, признанными аббревиатурами или соответствуют Биохимической Номенклатуре ГОРАС-ГОВ (см. (1972) ВюсНет. 11:942-944).

А. Соединения, используемые при лечении заболеваний, связанных с эндотелином Представлены соединения, композиции и способы лечения заболеваний, связанных с эндотелином, включающие использование соединений формулы I. В частности, представленные соединения являются арилзамещенными тиенил-, фуранил-, пирролил- или фенилсульфонамидами, в которых арильная группа является тетра-, пента- или гексазамещенной, предпочтительно тетра- или пентазамещенной. Особенно предпочтительными сульфонамидами являются Ν-изоксазолилтиофенсульфонамиды, в которых тиофен имеет в качестве заместителя арильную группу, содержащую только один или два атома водорода в качестве заместителей. Если арильная группа является тетразамещенной, предпочтительно она имеет заместителей в 1, 2, 4 и 6 положениях, и одним из этих заместителей является полярная группа, такая как гидроксил, ацетокси, карбоксил, сульфонил, ацил, гетероарил, оксим, галогенид, псевдогалогенид и карбоксамид. Если арильная группа во 2, 4 и 6 положениях содержит неполярные заместители, такие как алкильные группы, особенно метальные группы, тогда арильная группа предпочтительно является пента- или гексазамещенной. В пентазамещенных арильных группах четвертым заместителем является связь с тиофеном, фураном, пирролом или бензольным кольцом, а пятый заместитель предпочтительно является полярной группой, такой как гидроксил, ацетокси, карбоксил, сульфонил, ацил, гетероарил, оксим, галогенид, псевдогалогенид и карбоксамид.

Описанные соединения обладают хорошей биодоступностью, относительно большим временем полужизни ίη у1уо, хорошей переносимостью и хорошей эффективностью ίη у1уо при исследовании с использованием моделей на животных и других подходящих моделей.

В детально описанных вариантах осуществления изобретения Аг¹ является 3- или 5изоксазолилом и сульфонамиды имеют формулы

представляют собой (ί), (ίί) или (ίίί) следующим образом:

(ΐ) К¹ и К², каждый независимо, выбран из Н, ΝΗ₂, ΝΟ₂, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, алкилокси, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, арилокси, ариламино, арилтио, арилсульфинила, арилсульфонила, галоалкила, галоарила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, аминокарбонила, арилкарбонила, формила, замещенных или незамещенных амидо и замещенных или незамещенных уреидогрупп, в которых алкильные, алкенильные и алкинильные фрагменты содержат от 1 до примерно 14 атомов углерода и являются линейными, разветвленными или циклическими, а арильные фрагменты содержат примерно от 4 до 16 атомов углерода, за исключением того, что К² не является галогенидом или псевдогалогенидом; или, (ίί) К¹ и К² вместе образуют -(СН₂)_п-, где η является числом от 3 до 6; или (ίίί) К¹ и К² вместе образуют 1,3бутадиенил (-СН=СН-СН=СН-);

М является -С(У)-Ж (СН₂)_тС(У)(СН₂)_г, (СН₂)тС(У)1ЧН(СН₂)г, (СН2)т(СН=СН)(СН2)_г, (СН2)тС(У)(СН2)да(СН2)_г, С=ЖОН)(СН2)_Г, (СН2)тОД(СН=СН)^(СН2)_г, СН(ОН)(СН2)_Г, СН(СНэ)С(У)(СН2)_г, СН(СНэ)С(У)(СН2)т(СН= СН)(СН2)_Г, (СН2)_Г, (СН2)_ГО, (СН2)8(О)п , где η это число от 0 до 2; т, 8 и г, каждый независимо, является числом от 0 до 6, предпочтительно от 0 до 3; является О, ΝΉ или (СН₂)_а где ζ является числом от 0 до 6, предпочтительно от 0 до 3, более предпочтительно 1; и У является О, 8 или вместе с К⁸ и атомами, к которым они присоединены, образует незамещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, содержащее от 3 до 16 атомов, предпочтительно 5- или 6-членное незамещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, более предпочтительно 6-членное незамещенное или замещенное гетероциклическое кольцо; М предпочтительно является -С(У)-№- или (СЩЦ;

К³ и К⁴ независимо выбраны из водорода, гало, циано, цианоалкила, С(О)К⁴¹, алкила, алкенила, циклоалкила и арила, или вместе образуют алкилен или алкенилен, где К⁴¹ является алкилом, арилом, гетероарилом, аралкилом, гетероаралкилом, циклоалкилом, алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино, алкилсульфониламино, арилсульфониламино, алкилсульфонилалкиламино, алкилсульфонилариламино, арилсульфонилалкиламино или арилсульфонилариламино;

У¹ и У², каждый независимо, является углеродом или азотом; а и Ь, каждое независимо, равно 0 или 1;

К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹, каждый независимо, выбран из (ί) или (ίί) следующим образом:

или или являются фармацевтически приемлемыми производными этих соединений, причем К¹ и К² (ί) В⁵, В⁶, В⁷, В⁸ и В⁹, каждый независимо, выбран из Н, ОН, Ν ПС⁸. СОИК^В³⁹, ΝΟ₂, циано, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, алкенилтио, алкениламино, алкенилокси, алкенилсульфинила, алкенилсульфонила, алкоксикарбонила, ариламинокарбонила, алкиламинокарбонила, аминокарбонила, (алкиламинокарбонил)алкила, ацетокси, гидроксила, карбоксила, карбоксиалкила, карбоксиалкенила, алкилсульфониламиноалкила, цианоалкила, ацетила, ацетоксиалкила, гидроксиалкила, алкоксиалкокси, гидроксиалкила, (ацетокси)алкокси, (гидрокси)алкокси, формила, сульфонилхлоридов, аминокислот, гексоз, Огликозидов, рибоз, низшего алкила, ΟΝ, -(СН2)хС(О)(СН2)уСНз, -(СН2)хСНз, №)_ΧΝΗнизшего алкила, -(СН₂)_хС(О)ХН₂, Ό-, Ь- или рацемической аминокислоты, первичного или вторичного амида, О-гликозида, гексозы или рибозы, -δ(Ο)₂ΝΗ₂, гидрокси, алкокси, алкоксикарбонила, ацетоксиалкила, -(СН2)хСООН, -(СН2)хСН(СООН)(СН2)уСН3, СО2-низшего алкила, ΟΝ, гетероарила,

С(О)(СН2)_х8(О)2(СН2)_уСНз, С(=КОВ³⁸)(СН₂)_уСН₃, -С(О)С(О)(СН₂)_УСН₃,

-(СН₂)_хК(СН₃)₂, 8(О)_;\НВ'⁰, О8(О)₂ХК³⁸В³⁹, алкиларила, алкилгетероарила, С(О)ЯНВ⁵⁰, -(СН2)хОН и -С(О)НН)НН)В⁵⁰, где В³⁸ и В³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, галоалкила, алкиларила, гетероциклила, арилалкила, арилалкокси, алкокси, арилокси, циклоалкила, циклоалкенила и циклоалкинила, и предпочтительно каждый выбран из водорода, низшего алкила, низшей алкокси и низшего галоалкила; х и у, каждый независимо, является числом от 0 до 14; и В⁵⁰ является заместителем, таким как водород, низший алкил, низшая алкокси или гетероарил; или (ίί) по крайней мере два из В⁵, В⁶, В⁷, В⁸ и В⁹, являющиеся заместителями у соседних атомов углерода в кольце, вместе образуют алкилендиокси, алкилентиооксиокси или алкиллендитиоокси (т.е. -О-(СН₂)_П-О-, -8-(СН₂)_п-О-, -8(СН₂)_п-8-, где η - число от 1 до 4, предпочтительно 1 или 2), являющиеся незамещенными или замещенными путем замещения одного или более атомов водорода галогенидом, низшим алкилом, низшей алкокси или низшим галоалкилом, а оставшиеся из В⁵, В⁶, В⁷, В⁸ и В⁹ выбраны как в (ί), и

X является -С(В³)=С(В⁴)-, 8, О или ΝΚ¹¹, где В¹¹ является водородом или содержит вплоть до примерно 30 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 10, более предпочтительно от 1 до 6, и выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, алкиларила, гетероциклила, аралкила, аралкокси, циклоалкила, циклоалкенила, циклоалкинила, С(О)В¹⁵ и 8(О)_пВ¹⁵, в ко торых η является числом от 0 до 2, В¹⁵ является водородом, алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, алкиларилом, гетероциклилом, аралкилом, аралкокси, циклоалкилом, циклоалкенилом или циклоалкинилом; В¹¹ и В¹⁵ являются незамещенными или замещенными одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из Ζ, которая включает водород, галогенид, псевдогалогенид, алкил, алкокси, алкенил, алкинил, арил, аминокислоты, первичные и вторичные амиды, О-гликозиды, гексозы, рибозы, алкиларил, алкилгетероарил, гетероциклил, аралкил, аралкокси, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкинил, ОН, ΟΝ, С(О)В¹⁶, ОС(О)В¹⁶, СО2В¹⁶, ОСО2В¹⁶, 8Н, 8(О)пВ¹⁶, в которых η является числом от 0 до 2, ЯНОН, ΝΚ.^|:Κ.¹⁶, NΟ₂, Ν₃, ОВ¹⁶, В^СОВ¹⁶ и СО\К 'К ', В¹⁶ является водородом, алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, алкиларилом, гетероциклилом, аралкилом, аралкокси, циклоалкилом, циклоалкенилом, циклоалкинилом, хлоридом, МНВ⁵⁰, алкиларилом, алкилгетероарилом или -(СН2)хОН, В⁵⁰ является заместителем, таким как водород, низший алкил, низшая алкокси или гетероарил, х является числом от 0 до 14; В¹², независимо выбранный из В¹¹ и Ζ, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, алкиларила, гетероциклила, аралкила, аралкокси, циклоалкила, циклоалкенила, циклоалкинила, С(О)В¹⁷ и 8(О)пВ¹⁷, в которых п является числом от 0 до 2; В¹⁷ является водородом, алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, алкиларилом, гетероциклилом, аралкилом, аралкокси, циклоалкилом, циклоалкенилом или циклоалкинилом; В¹² и В¹⁶ могут вместе образовать алкилен; каждый из В¹¹, В¹², В¹⁵ и В¹⁶ может, в свою очередь, быть замещен любыми подходящими группами, выбранными из Ζ. Во всех вариантах осуществления X предпочтительно является 8 или -С(В³)=С(В⁴)-, более предпочтительно 8 или -СН=СН-, наиболее предпочтительно 8.

В одном варианте осуществления изобретения М предпочтительно является -Ο(Υ)-ν-, и соединения, предназначенные для использования в представленных композициях и способах, имеют формулу IV

лом от 0 до 14; и К⁵⁰ является водородом, низшим алкилом, низшей алкокси или гетероарилом;

Υ и К⁸ выбраны из (1) или (и) следующим образом:

(ί) Υ является О; а К⁸ является СОЫК³⁸К³⁹, СЫ, гетероарилом, алкилсульфонилом, (СН2)хС(О)(СН2)уСН3, алкилом, галогенидом, псевдогалогенидом, гидроксиалкилом,

С(О)(СН2)х8(О)2(СН2)уСН3 или С(=Ы-ОК³⁸) (СН2)уСН3; или ₈ (ίί) Υ и К⁸ вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют незамещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, содержащее от 3 до 16 членов, предпочтительно 5- или 6-членное незамещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, более предпочтительно 6членное незамещенное или замещенное гетероциклическое кольцо; предпочтительно Υ и К⁸ вместе образуют -СО-Ы= или -СО-С(СЫ)=;

К⁹ является Н; Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом; а равно 1, если Υ² является углеродом; а равно 0, если Υ² является азотом; Ь равно 1, если Υ¹ является углеродом; Ь равно 0, если Υ¹ является азотом и является ЫН.

В особенно предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения формулы IV являются 2-замещенными-3-сульфонамидами формулы

или являются их фармацевтически приемлемыми производными, в которых КЗ-К⁹, X, Υ, Υ¹, Υ², а и Ь определены выше.

В этих вариантах осуществления изобретения соединения предпочтительно имеют формулу IV, где X является 8 или -СН=СН-, предпочтительно 8; К¹ является галогенидом или низшим алкилом; К² является низшим алкилом; К³ и К⁴ каждый является водородом; К⁵ является низшим алкилом или -(СН2)хС(О)(СН2)уСН3; К⁶ является низшим алкилом, -(СН2)_хС(О) (СН2)уСН3 или гетероарилом; К⁷ является водородом, гидрокси, алкокси, низшим алкилом, 8(О)2ЫНК⁵⁰ и О8(О)2ЫК³⁸К³⁹;

где К³⁸ и К³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, галоалкила, алкиларила, гетероциклила, арилалкила, арилалкокси, алкокси, арилокси, циклоалкила, циклоалкенила и циклоалкинила, и предпочтительно каждый выбран из водорода, низшего алкила, низшей алкокси и низшего галоалкила; х и у, каждый независимо, является чис и их фармацевтически приемлемыми производными, в которых X является 8 или -СН=СН-, предпочтительно 8; К¹ является галогеном или низшим алкилом; К² является низшим алкилом; К³ и К⁴ каждый является водородом; К⁵ является низшим алкилом или -(СН2)хС(О)(СН2)уСН3; К⁶ является низшим алкилом, -(СН2)хС(О) (СН2)уСН3 или гетероарилом; К⁷ является водородом, гидрокси, алкокси, низшим алкилом, 8(О)2ЫНК⁵⁰ и О8(О)2ЫК³⁸К³⁹;

где К³⁸ и К³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, галоалкила, алкиларила, гетероциклила, арилалкила, арилалкокси, алкокси, арилокси, циклоалкила, циклоалкенила и циклоалкинила, и предпочтительно каждый выбран из водорода, низшего алкила, низшей алкокси и низшего галоалкила; х и у, каждый независимо, является числом от 0 до 14; и К⁵⁰ является водородом, низшим алкилом, низшей алкокси или гетероарилом;

Υ и К⁸ выбраны из (ί) или (ίί) следующим образом:

(ί) Υ является О; и К⁸ является СОЫК³⁸К³⁹, СЫ, гетероарилом, алкилсульфонилом, (СН₂)_хС(О)(СН₂)_уСН₃, алкилом, галогенидом, псевдогалогенидом, гидроксиалкилом,

С(О)(СН2)_х8(О)2(СН2)уСН₃ или С(=ЫОК³⁸)(СН₂)_уСН₃; или (ίί) Υ и К⁸ вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют незамещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, включающее от 3 до 16 атомов, предпочтительно 5- или 6-членное незамещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, более предпочтительно 6членное незамещенное или замещенное гетероциклическое кольцо, предпочтительно Υ и К⁸ вместе образуют -СО-Ы= или -СО-С(СЫ)=;

К⁹ является Н; Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом; а равно 1, если Υ² является углеродом; а равно 0, если Υ² является азотом; Ь равно 1, если Υ¹ является углеродом; Ь равно 0, если Υ¹ является азотом и V является ЫН.

В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу V, где К¹ является галогенидом или низшим алкилом; предпочтительно С1 или Ме; более предпочтительно Ме. В этих вариантах осуществления изобретения К² является низшим алкилом, предпочтительно Ме; и К³ и К⁴ оба являются Н.

В детально описанных вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу V, где К⁵ является Ме или ацетилом, предпочтительно Ме; К⁶ является Ме, ацетилом или 2оксазолилом, предпочтительно Ме; К⁷ является Н, Ме, О8О₂ЫМе₂, ОСН₂-циклопропилом, гидрокси или 8О₂МН-(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)ом, предпочтительно Н;

Υ и К⁸ выбраны из (ί) или (ίί), предпочтительно из (ί), следующим образом:

(ί) Υ является О; и К⁸ является С(О)СН28О2СН₃, С(О)Ме, СЫ, С(О)Ы(Ме)(СЩтрет-Ви), 8О₂Ме, 2-оксазолилом, 8О₂изопропилом, 8О₂-н-пропилом, СН(ОН)Ме, С(О)ЫМе2, С(=Ы-ОМе)Ме, Ме, С(О)Е1, С1, нпропилом или этилом; или (ίί) Υ и К⁸ вместе образуют -СО-Ы= или -СО-С(СЫ)=;

К⁹ является Н; Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом, предпочтительно углеродом; а равно 1, если Υ² является углеродом; а равно 0, если Υ² является азотом; Ь равно 1, если Υ¹ является углеродом; Ь равно 0, если Υ¹ является азотом и V является ЫН.

Таким образом, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу V, где X является 8; К¹ является С1 или Ме, предпочтительно Ме; К² является Ме; К³, К⁴ и К⁹ являются Н; Υ является О;

V является ЫН; и Υ¹ и Υ² каждый является углеродом.

В этих вариантах осуществления изобретения соединения являются тиофенсульфонамидами, имеющими формулу VI

или являются их фармацевтически приемлемыми производными, в которых К¹ является С1 или Ме, предпочтительно Ме; К⁵ является Ме или ацетилом, предпочтительно Ме; К⁶ является Ме, ацетилом или 2-оксазолилом, предпочтительно Ме; К⁷ является Н, Ме, О8О2ЫМе2, ОСН2циклопропилом, гидрокси или 8О2ЫН-(4-хлор3-метил-5-изоксазолил)ом, предпочтительно Н; и К⁸ является С(О)СН28О₂СН₃, С(О)Ме, СЫ, С(О)Ы(Ме)(СН₂-трет-Ви), 8О₂Ме, 2-оксазолилом, 8О₂-изопропилом, 8О₂-н-пропилом, СН(ОН)Ме, С(О)ЫМе2, С(=Ы-ОМе)Ме, Ме,

С(О)Е1, С1, н-пропилом или этилом.

В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения К¹, К⁵ и К⁶ являются Ме; К⁷ является водородом и К⁸ является С(О)Ме.

В другом варианте осуществления изобретения соединения имеют формулу I, где Υ¹ и Υ² каждый являются азотом. В этом варианте осуществления изобретения а и Ь каждое предпочтительно равно 0; а значения других переменных соответствуют описанным выше. В пред почтительных вариантах осуществления изобретения К⁵, К⁶ и К⁸ являются алкилом, предпочтительно низшим алкилом, более предпочтительно Ме; Υ является О; и V является ЫН. В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения К³ и К⁴ оба являются Н; и X является 8. Таким образом, согласно этому варианту осуществления изобретения соединения являются Ы-(5-изоксазолил)-2-(5-пиримидиниламинокарбонил)тиофенсульфонамидами или Ы(5-изоксазолил)-3-(5-пиримидиниламинокарбонил)тиофенсульфонамидами.

Предпочтительные соединения согласно описанным выше вариантам осуществления изобретения включают Ы-(2-ацетил-4,6-диметилфенил)-3-{[(3,4-диметил-5-изоксазолил) амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид, Ы-(2циано-3,4,6-триметилфенил)-3-{[(3,4-диметил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид, 3-{ [(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил) амино]сульфонил}-Ы-(3,4,6-триметил-2-пропаноилфенил)-2-тиофенкарбоксамид, 3 -{[(4-хлор3-метил-5 -изоксазолил)амино] сульфонил }-Ы-[237 (1-гидроксиэтил)-4,6-диметилфенил]-2-тиофенкарбоксамид, 3-{ [(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил }-Ы-{2-[(диметиламино) карбонил]-4,6-диметилфенил)-2-тиофенкарбоксамид, 3-{ [(4-хлор-3 -метил-5-изоксазолил)амино] сульфонил}-Ы-{2,4-диметил-6-[(метилокси) этанимидоил] фенил }-2-тиофенкарбоксамид, 3 {[(3-{ [(4-хлор-3 -метил-5-изоксазолил)амино] сульфонил }-2-тиофенил)карбонил] амино }-2,4,6триметилфенил-Н^диметилсульфамат, 3-{ [(4хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино] сульфонил }№{3-[(циклопропилметил)окси]-2,4,6-триметилфенил}-2-тиофенкарбоксамид, 3-{ [(4-хлор-3метил-5 -изоксазолил)амино] сульфонил }-Ν(2,4,6-триметил-5-пиримидинил)-2-тиофенкарбоксамид, №(2-ацетил-3,4,6-триметилфенил)-3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид, 3-{ [(4-хлор-3метил-5-изоксазолил)амино] сульфонил }-Ν-(2циано-3,4,6-триметилфенил)-2-тиофенкарбоксамид, №(2-хлор-4,6-диметилфенил)-3-{[(4-хлор3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2тиофенкарбоксамид, 3-{[(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-И-(4,6-диацетил-3-гидрокси-2-пропилфенил-2-тиофенкарбоксамид, 3 - {[(4-хлор-3 -метил-5-изоксазолил) амино] сульфонил }-И-(2,4-диметил-6-[2-(метилсульфонил)ацетил]фенил}-2-тиофенкарбоксамид, 3-{ [(4-хлор-3 -метил-5-изоксазолил)амино] сульфонил}-И-(2,4-диметил-6-{[метил-(2,2диметилпропил)амино]карбонил}фенил)-2-тиофенкарбоксамид, 3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-И-[2,4-диметил-6(метилсульфонил)фенил]-2-тиофенкарбоксамид,

3- { [(4-хлор-3 -метил-5-изоксазолил)амино] суль- фонил}-И-[2,4-диметил-6-(1,3-оксазол-2-ил) фенил]-2-тиофенкарбоксамид, 3-{[(4-хлор-5изоксазолил)амино]сульфонил}-И-[2-(2-пропилсульфонил)-4,6-диметилфенил]-2-тиофенкарбоксамид, 3 - {[(4-хлор-3 -метил-5-изоксазолил) амино] сульфонил)-И-[2,4-диметил-6-(пропилсульфонил)фенил]-2-тиофенкарбоксамид, 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-И-(2-этил-4,6-диметилфенил)-2-тиофенкарбоксамид, 3-{ [(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-И-[2,6-диметил-4-(1,3оксазол-2-ил)фенил]-2-тиофенкарбоксамид, Ν(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-(6,8-диметил-

4- гидрокси-2-бензопиримидинил)тиофен-3сульфонамид и №(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-(3-циано-4-гидрокси-6,8-диметилбензо [Ъ]пиридин-2-ил)тиофен-3-сульфонамид.

В других вариантах осуществления изобретения X является -С(К³)=С(К⁴)- и соединения являются бензолсульфонамидами формулы VII

и их фармацевтически приемлемыми производными, где К¹ и К² являются (ΐ), (ΐΐ) или (ΐΐΐ) следующим образом:

(ΐ) К¹ и К², каждый независимо, выбран из Н, ΝΙΥ. ΝΟ₂, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, алкилокси, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, арилокси, ариламино, арилтио, арилсульфинила, арилсульфонила, галоалкила, галоарила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, аминокарбонила, арилкарбонила, формила, замещенной или незамещенной амидо и замещенной или незамещенной уреидогрупп, в которых алкильные, алкенильные и алкинильные фрагменты содержат от 1 до примерно 14 атомов углерода, являются линейными, разветвленными или циклическими, а арильные фрагменты содержат примерно от 4 до 16 атомов углерода, за исключением того, что К² не является галогенидом или псевдогалогенидом; или (ΐΐ) К¹ и К² вместе образуют -(СН₂)_п-, где η число от 3 до 6; или (ΐΐΐ) К¹ и К² вместе образуют 1,3бутадиенил (-СН=СН-СН=СН-);

является О, ИН или (СН₂)^ причем ζ является числом от 0 до 6, предпочтительно от 0 до 3, более предпочтительно 1; и Υ является О, 8, или совместно с К и атомами, к которым они присоединены, образуют незамещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, содержащее от 3 до 16 атомов, предпочтительно 5- или 6-членное незамещенное или замещенное циклическое или гетероциклическое кольцо, более предпочтительно 6членное незамещенное или замещенное гетероциклическое кольцо; М предпочтительно является -С(Х)-№- или (С11₂)_ζ;

К³ и К⁴ независимо выбраны из водорода, галогенида, циано, цианоалкила, С(О)К⁴¹, алкила, алкенила, циклоалкила и арила или вместе образуют алкилен или алкенилен, где Я⁴¹ является алкилом, арилом, гетероарилом, аралкилом, гетероаралкилом, циклоалкилом, алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино, алкилсульфониламино, арилсульфониламино, алкилсульфонилалкиламино, алкилсульфонилариламино, арилсульфонилалкиламино или арилсульфонилариламино;

Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом; а и Ь, каждое независимо, равно 0 или 1;

Я⁵, Я⁶, Я⁷, Я⁸ и Я⁹, каждый независимо, выбран из (ί) или (ίί) следующим образом:

(ί) Я⁵, Я⁶, Я⁷, Я⁸ и Я⁹, каждый независимо, выбран из Н, ОН, ЯНЯ³⁸, СОН1Я³⁸Я³⁹, ΝΟ2, циано, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, алкенилтио, алкениламино, алкенилокси, алкенилсульфинила, алкенилсульфонила, алкоксикарбонила, ариламинокарбонила, алкиламинокарбонила, аминокарбонила, (алкиламинокарбонил)алкила, ацетокси, гидроксила, карбоксила, карбоксиалкила, карбоксиалкенила, алкилсульфониламиноалкила, цианоалкила, ацетила, ацетоксиалкила, гидроксиалкила, алкоксиалкокси, гидроксиалкила, (ацетокси)алкокси, (гидрокси)алкокси, формила, сульфонилхлоридов, аминокислот, гексоз, Огликозидов, рибоз, низшего алкила, СН, -(СН2)хС(О)(СН2)уСНз, -(СН2)хСНз, №)ΧΝΗнизшего алкила, -(СН2)ХС(О)НН2, Ό-, Ь- или рацемической аминокислоты, первичного или вторичного амида, О-гликозида, гексозы или рибозы, -δ(Ο)2ΝΗ2, гидрокси, алкокси, алкоксикарбонила, ацетоксиалкила, -(СН2)ХСООН, -(СН2)хСН(СООН)(СН2)уСН3, СО2-низшего алкила, СН гетероарила, С(О)(СН2)Х8(О)2 (СН2)уСН3 С(=Н-ОЯ³⁸)(СН2)_уСН₃, -С(О)С(О) (СН2)_уСНз3 -№)χΝ№), 8(О)_;\НЯ\

О8(О)₂НЯ³⁸Я³⁹, алкиларила, алкилгетероарила, С(О)Н1НЯ⁵⁰, -(СН₂)_ХОН и -С(О)\(Н)\(Н)Я' ;

где Я³⁸ и Я³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, галоалкила, алкиларила, гетероциклила, арилалкила, арилалкокси, алкокси, арилокси, циклоалкила, циклоалкенила и циклоалкинила, и предпочтительно каждый выбран из водорода, низшего алкила, низшей алкокси и низшего галоалкила; х и у, каждый независимо, является числом от 0 до 14; и Я⁵⁰ является заместителем, таким как водород, низший алкил, низшая алкокси или гетероарил; или (ίί) по крайней мере два из Я⁵, Я⁶, Я⁷, Я⁸ и Я⁹, являющиеся заместителями у соседних атомов углерода в кольце, вместе образуют алкилендиокси, алкилентиооксиокси или алкилендитиоокси (т.е. -О-(СН₂)_П-О-, -8-(СН₂)_п-О-, -8(СН₂)_п-8-, где п - это число от 1 до 4, предпочтительно 1 или 2), являющуюся незамещенной или замещенной путем замещения одного или более атомов водорода на галогенид, низший алкил, низшую алкокси или низший галоалкил, а остальные из Я⁵, Я⁶, Я⁷, Я⁸ и Я⁹ выбраны как в (ί).

В некоторых вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу VII, где Я³, Я⁴ и Я⁹ являются Н; Υ является О; и является ΝΗ.

В предпочтительных вариантах осуществления изобретения Я¹ и Я², каждый независимо, выбран из алкила, низшего алкенила, низшего алкинила, низшего галоалкила, галогенида, псевдогалогенида или Н, за исключением того, что Я² не является галогенидом. Я¹ предпочтительно является низшим алкилом или галогенидом, более предпочтительно Ме или С1. Я² предпочтительно является низшим алкилом, более предпочтительно Ме.

В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу VIII

или являются их фармацевтически приемлемыми производными, в которых Я¹ является низшим алкилом или галогенидом, предпочтительно Ме или С1; Я⁵ является низшим алкилом или -(СН2)хС(О)(СН2)уСН3; Я⁶ является низшим алкилом, -(СН2)хС(О)(СН2)уСН3 или гетероарилом; Я⁷ является водородом, гидрокси, алкокси, низшим алкилом, 8(О)2ННЯ⁵⁰ или О8(О)₂ЯЯ³⁸Я³⁹; и О оо о О

Я является СОНЯ Я , СН, гетероарилом, алкилсульфонилом, (СН2)хС(О)(СН2)уСН3, алкилом, галогенидом, псевдогалогенидом, гидроксиалкилом, С(О)(СН₂)_Х8(О)₂(СН₂)_уСН₃ или С(\-О1к⁸)(СН_;).СН_;.

В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу VIII, где Я⁵ является Ме или ацетилом, предпочтительно Ме; Я⁶ является Ме, ацетилом или 2-оксазолилом, предпочтительно Ме; Я⁷ является Н, Ме, О8О2ЯМе2, ОСН2-циклопропилом, гидрокси или 8О2ИН-(4-хлор-3метил-5-изоксазолил)ом, предпочтительно Н; и Я⁸ является С(О)СН28О2СН3, С(О)Ме, СН, С(О)Н(Ме)(СН2-трет-Ви), 8О₂Ме, 2-оксазолилом, 8О₂-изопропилом, 8О₂-н-пропилом, СН(ОН)Ме, С(О)\\1е_;, С( \-О\1е)\1е, Ме, С(О)Е1, С1, н-пропилом или этилом. Таким образом, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу VIII, где Я⁵ и Я⁶ являются Ме; и Я⁷ является Н. В этих вариантах осуществления изобретения Я⁸ наиболее предпочтительно является С(О)Ме.

Предпочтительные соединения формулы VIII включают Ы-(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-(2-ацетил-4,6-диметилфениламинокарбонил)бензолсульфонамид.

В других вариантах осуществления изобретения соединения имеют формулу I, где М является (СН₂)₂, где ζ является числом от 0 до 6, предпочтительно от 0 до 3, более предпочтительно 1.

Таким образом, в более предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения формулы I имеют формулу IX

или являются их фармацевтически приемлемыми производными, в которых К¹ и К² представляют собой (ί), (ίί) или (ίίί) следующим образом:

(ί) К¹ и К², каждый независимо, выбран из Н, ΝΗ₂, ΝΟ₂, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, алкилокси, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, арилокси, ариламино, арилтио, арилсульфинила, арилсульфонила, галоалкила, галоарила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, аминокарбонила, арилкарбонила, формила, замещенной или незамещенной амидо, и замещенной или незамещенной уреидогруппы, в которых алкильные, алкенильные и алкинильные фрагменты содержат от 1 до примерно 14 атомов углерода и являются линейными, разветвленными или циклическими, а арильные фрагменты содержат примерно от 4 до 16 атомов углерода, за исключением того, что К² не является галогенидом или псевдогалогенидом; или (ίί) К¹ и К² вместе образуют -(СН₂)_п-, где п число от 3 до 6; или (ίίί) К¹ и К² вместе образуют 1,3бутадиенил (-СН=СН-СН=СН-);

К³ и К⁴ независимо выбраны из водорода, галогенида, циано, цианоалкила, С(О)К⁴¹, алкила, алкенила, циклоалкила и арила или вместе образуют алкилен или алкенилен, где К⁴¹ является алкилом, арилом, гетероарилом, аралкилом, гетероаралкилом, циклоалкилом, алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино, алкилсульфониламино, арилсульфониламино, алкилсульфонилалкиламино, алкилсульфонилариламино, арилсульфонилалкиламино или арилсульфонилариламино;

Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом; а и Ь, каждое независимо, равно 0 или 1;

К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹, каждый независимо, выбран из (ί) или (ίί) следующим образом:

(ί) К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹, каждый независимо, выбран из Н, ОН, ΝΗΙΓ, (ΌΝΗΊΥ' , ΝΟ2, циано, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, алкенилтио, алкениламино, алкенилокси, алкенилсульфинила, алкенилсульфонила, алкоксикарбонила, ариламинокарбонила, алкиламинокарбонила, аминокарбонила, (алкиламинокарбонил)алкила, ацетокси, гидроксила, карбоксила, карбоксиалкила, карбоксиалкенила, алкилсульфониламиноалкила, цианоалкила, ацетила, ацетоксиалкила, гидроксиалкила, алкоксиалкокси, гидроксиалкила, (ацетокси)алкокси, (гидрокси)алкокси, формила, сульфонилхлоридов, аминокислот, гексоз, Огликозидов, рибоз, низшего алкила, СН -(СН2)хС(О)(СН2)уСНэ, -(СН2)хСН3, №)ΧΝΗнизшего алкила, ΑΗ2)Α(Ο)ΝΗ2, Ό-, Ь- или рацемической аминокислоты, первичного или вторичного амида, О-гликозида, гексозы или рибозы, -8(Ο)2ΝΗ2, гидрокси, алкокси, алкоксикарбонила, ацетоксиалкила, -(СН2)хСООН, (СН2)хСН(СООН)(СН2)уСН3, СО2-низшего алкила, СН гетероарила, ίΤΟχίΉ2),.8(ΟΗί.Ή;);£Ή3,. С(=N-ΟК³⁸)(СΗ2)_уСΗ₃, -С(О)С(О)(СН₂)_уСН₃,

ΑΗΧΝ^ΗΑ, 8(Ο)2NΗК⁵⁰, Οδ^^Ν^^³⁹, алкиларила, алкилгетероарила, С^НИК⁵⁰, -(СН₂)_ХОН и -С^НЩНЩК⁵⁰;

где К³⁸ и К³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, галоалкила, алкиларила, гетероциклила, арилалкила, арилалкокси, алкокси, арилокси, циклоалкила, циклоалкенила и циклоалкинила, и предпочтительно каждый выбран из водорода, низшего алкила, низшей алкокси и низшего галоалкила; х и у, каждый независимо, является числом от 0 до 14; и К⁵⁰ является заместителем, та ким как водород, низший алкил, низшая алкокси или гетероарил; или (ίί) по крайней мере два из К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹, являющиеся заместителями у соседних атомов углерода в кольце, вместе образуют алкилендиокси, алкилентиооксиокси или алкилендитиоокси (т.е. -О-(СН₂)_п-О-, -8-(СН₂)_п-О-, -8(СН2)п-8-, где п является числом от 1 до 4, предпочтительно 1 или 2), являющихся незамещенными или замещенными за счет замещения одного или более атомов водорода на галогенид, низший алкил, низшую алкокси или низший галоалкил, а остальные из К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹ выбраны как в (ί); и

X является -С(К³)=С(К⁴)-, 8, О или ИК¹¹, где К¹¹ является водородом или содержит до примерно 30 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 10, более предпочтительно от 1 до 6, и выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, алкиларила, гетероциклила, аралкила, аралкокси, циклоалкила, циклоалкенила, циклоалкинила, С(О)К¹⁵ и 8(О)пК¹⁵, в которых п является числом от 0 до 2; К¹⁵ является водородом, алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, алкиларилом, гетероциклилом, аралкилом, аралкокси, циклоалкилом, циклоалкенилом или циклоалкинилом; К¹¹ и К¹³ являются незамещенными или замещенными одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из Ζ, которая в соответствии с определением включает водород, галогенид, псевдогалогенид, алкил, алкокси, алкенил, алкинил, арил, аминокислоты, первичные и вторичные амиды, Огликозиды, гексозы, рибозы, алкиларил, алкилгетероарил, гетероциклил, аралкил, аралкокси, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкинил, ОН, СИ, С(О)К¹⁶, ОС(О)К¹⁶, СО₂К¹⁶, ОСО2К¹⁶, 8Н, 8(О)пК¹⁶, где п является числом от 0 до 2, ИНОН, ИК¹²К¹⁶, ИО₂, И₃, ОК¹⁶, К¹²ИСОК¹⁶ и СОИК¹²К¹⁶; К¹⁶ является водородом, алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, алкиларилом, гетероциклилом, аралкилом, аралкокси, циклоалкилом, циклоалкенилом, циклоалкинилом, хлоридом, ИНК⁵⁰, алкиларилом, алкилгетероарилом или -(СН2)хОН; К⁵⁰ является заместителем, таким как водород, низший алкил, низшая алкокси или гетероарил; х является числом от 0 до 14; К¹², выбранный независимо из К¹¹ и Ζ, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, алкиларила, гетероциклила, аралкила, аралкокси, циклоалкила, циклоалкенила, циклоалкинила, С(О)К¹⁷ и 8(О)_пК¹⁷, в которых п - число от 0 до 2; К¹⁷ является водородом, алкилом, алкенилом, алкинилом, арилом, алкиларилом, гетероциклилом, аралкилом, аралкокси, циклоалкилом, циклоалкенилом или циклоалкинилом; К¹² и К¹⁶ могут вместе образовывать алкилен; каждый из К¹¹, К¹², К¹⁵ и К¹⁶ может, в свою очередь, быть замещен любой из подходящих групп, заданных для Ζ.

В этих вариантах осуществления изобретения К³ и К⁴ предпочтительно образуют

-СН=СН-СН=СН- и X предпочтительно является 8.

В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения формулы IX являются бензотиофен-3-сульфонамидами, замещенными во 2 положении бензильной группой. Таким образом, в более предпочтительных вариантах осуществления изобретения соединения формулы IX имеют формулу

или являются их фармацевтически приемлемыми производными, где К¹ и К² выбраны как в (ί), (ίί) или (ίίί) следующим образом:

(ί) К¹ и К², каждый независимо, выбран из Н, ИН2, ИО2, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, алкилокси, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, арилокси, ариламино, арилтио, арилсульфинила, арилсульфонила, галоалкила, галоарила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, аминокарбонила, арилкарбонила, формила, замещенной или незамещенной амидо и замещенной или незамещенной уреидогрупп, в которых алкильные, алкенильные и алкинильные фрагменты содержат от 1 до примерно 14 атомов углерода и являются линейными, разветвленными или циклическими, а арильные фрагменты содержат примерно от 4 до 16 атомов углерода, за исключением того, что К² не является галогенидом или псевдогалогенидом; или (ίί) К¹ и К² вместе образуют -(СН₂)_п-, где п число от 3 до 6; или (ίίί) К¹ и К² вместе образуют 1,3бутадиенил (-СН=СН-СН=СН-);

Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом; а и Ь, каждое независимо, равно 0 или 1;

К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹, каждый независимо, выбран из (ί) или (ίί) следующим образом:

(ί) К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹, каждый независимо, выбран из Н, ОН, ИНК³⁸, СОИК³⁸К³⁹, ИО2, циано, галогенида, псевдогалогенида, алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, гетероарила, алкокси, алкиламино, алкилтио, галоалкила, алкилсульфинила, алкилсульфонила, алкоксикарбонила, алкилкарбонила, алкенилтио, алкениламино, алкенилокси, алкенилсульфинила, алкенилсульфонила, алкоксикарбонила, ариламинокарбонила, алкиламинокарбонила, аминокарбонила, (алкиламинокарбонил)алкила, ацетокси, гидроксила, карбоксила, карбоксиалкила, карбоксиалкенила, алкилсульфониламиноалки45 ла, цианоалкила, ацетила, ацетоксиалкила, гидроксиалкила, алкоксиалкокси, гидроксиалкила, (ацетокси)алкокси, (гидрокси)алкокси, формила, сульфонилхлоридов, аминокислот, гексоз, Огликозидов, рибоз, низшего алкила, ΟΝ, -(СН2)хС(О)(СН2)уСНз, -(СН2ХСН3, (СН_;).\Ннизшего алкила, -(ΟΗ₂)_ΧΟ(Ο)ΝΗ₂, Ό-, Ь- или рацемических аминокислот, первичного или вторичного амида, О-гликозида, гексозы или рибозы, -8(Ο)₂ΝΗ₂, гидрокси, алкокси, алкоксикарбонила, ацетоксиалкила, -(СН2)хСООН, -(СН2)хСН(СООН)(СН2)уСН3, СО2-низшего алкила, ΟΝ, гетероарила, 0(Ο)(ΟΗ₂)_Χ8(Ο)₂(ΟΗ₂)_ΥΟΗ₃, 0(=Ν-ΟΒ³⁸)(ΟΗ2)_ΥΟΗ3, -С(О)С(О)(СН2)уСНз,

-(ΟΗ₂)_ΧΝ(ΟΗ₃)₂, 8(Ο)₂ΝΗΒ³⁰, Ο8(Ο)2ΝΒ³⁸Β³⁹, алкиларила, алкилгетероарила, Ο(Ο)ΝΗΒ⁵⁰, -(СН2)_ХОН и -Ο(Ο)Ν(Η)Ν(Η)Β⁵⁰;

где Β³⁸ и Β³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, галоалкила, алкиларила, гетероциклила, арилалкила, арилалкокси, алкокси, арилокси, циклоалкила, циклоалкенила и циклоалкинила, и предпочтительно каждый выбран из водорода, низшего алкила, низшей алкокси и низшего галоалкила; х и у, каждый независимо, является числом от 0 до 14; и Β⁵⁰ является заместителем, таким как водород, низший алкил, низшая алкокси или гетероарил; или (ίί) по крайней мере два из Β⁵, Β⁶, Β⁷, Β⁸ и Β⁹, являющиеся заместителями у соседних атомов углерода в кольце, вместе образуют алкилендиокси, алкилентиооксиокси или алкилендитиоокси (т.е. -Ο-(ΟΗ₂)_η-Ο-, -8-(ΟΗ₂)_η-Ο-, -8(ΟΗ₂)_η-8-, где η - число от 1 до 4, предпочтительно 1 или 2), являющуюся незамещенной или замещенной путем замещения одного или более атомов водорода на галогенид, низший алкил, низшую алкокси или низший галоалкил, а другие из Β⁵, Β⁶, Β⁷, Β⁸ и Β⁹ выбраны как в (ί).

В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения у соединений формулы X Β¹ является галогенидом или низшим алкилом; Β² является низшим алкилом; Β⁵ является низшим алкилом или (СН2)хС(О)(СН2)уСН3; Β⁶ является низшим алкилом, -(СН2)хС(О)(СН2)уСН3 или гетероарилом; Β⁷ является водородом, гидрокси, алкокси, низшим алкилом, 8(Ο)2ΝΗΒ⁵⁰ и Ο8(Ο)₂ΝΒ³⁸Β³⁹;

где Β³⁸ и Β³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, алкила, алкенила, алкинила, арила, галоалкила, алкиларила, гетероциклила, арилалкила, арилалкокси, алкокси, арилокси, циклоалкила, циклоалкенила и циклоалкинила, и предпочтительно каждый выбран из водорода, низшего алкила, низшей алкокси и низшего галоалкила; х и у, каждый независимо, является числом от 0 до 14; и Β⁵⁰ является водородом, низшим алкилом, низшей алкокси или гетероарилом;

Β⁸ является ΟΟΝΒ³⁸Β³⁹, ΟΝ, гетероарилом, алкилсульфонилом, (СН2)хС(О)(СН2)уСН3, алкилом, галогенидом, псевдогалогенидом, гидроксиалкилом, ϋ(Ο)(ΟΗ₂)_Χ8(Ο)₂(ΟΗ₂)γΟΗ₃ или

Ο(=Ν-ΟΒ³⁸)(ΟΗ₂)_γΟΗ₃;

Β⁹ является Н; Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом; а равно 1, если Υ² является углеродом; а равно 0, если Υ² является азотом; Ь равно 1, если Υ¹ является углеродом; и Ь равно 0, если Υ¹ является азотом.

В этих вариантах осуществления изобретения Υ¹ и Υ² предпочтительно являются углеродом; а и Ь каждое равно 1; Β⁵, Β⁶ и Β⁸ предпочтительно являются низшим алкилом, более предпочтительно Ме; и Β⁷ предпочтительно является Н или 8Ο₂ΝΗΒ⁵⁰, где Β⁵⁰ является гетероарилом, более предпочтительно изоксазолилом, наиболее предпочтительно 4-хлор-3метил-5-изоксазолилом.

В этом варианте осуществления изобретения предпочтительные соединения включают Ν(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-(2,4,6-триметилбензил)бензо[Ь]тиофен-3-сульфонамид и Ν(4-хлор-3 -метил-5-изоксазолил)-2-(3 -(4-хлор-3метил-5-изоксазолил)аминосульфонил-2,4,6триметилбензил)бензо[Ь]тиофен-3-сульфонамид.

Также представляют интерес любые фармацевтически приемлемые производные, включая соли, эфиры, кислоты и основания, сольваты, гидраты и пролекарства сульфонамидов. Предпочтительными являются фармацевтически приемлемые соли, особенно соли щелочных металлов, наиболее предпочтительны натриевые соли.

Особенно предпочтительными соединениями являются соли описанных здесь соединений, в которых является алкиленом, а именно СН₂. Предпочтительными солями этих производных являются натриевые соли.

Для всех вариантов осуществления изобретения предпочтительные заместители могут быть определены по табл. 1, в которой приведены примеры соединений.

Из всех соединений, приведенных в табл. 1, предпочтительными являются те соединения, которые обладают максимальными активностями, а предпочтительными заместителями являются заместители тех соединений, которые обладают максимальными активностями (активностью при самой низкой концентрации).

Таблица 1

СОЕДИНЕНИЕ	ЕТЛ активность
№(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-([3,4-(метипендиокси)-6метилфенил)ацетил]-тиофен-3-сульфонамид	10
№(2-ацетил-4,6-диметилфенил)-3-([(3,4 диметил-5изоксазолил)амино]сульфонил)-2-тиофенкарбоксамид	18.1
И-(2-ацетил-4>6-диметилфенил)-3-{[(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино]сульфонил)-2-тиофенсульфонамид	38.0
Ν-(2-ηΗβΗο-3,4,6-тримет ил фенил)-3-{[(3,4-димегил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид	18 6
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксаэолил)амино]^льфонил >-N-(3,4,6триметил-2-пропаноилфенил)-2-тиофенкарбоксамид	23.9
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил]-1Ч-[2-(1гидроксиэтил)-4,б-диметилфенил]-2-тиофенкарбоксамид	26.4
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-И-]2[(диметиламино)карбонил]-4,6-димегилфенил)-2*тиофенкарбоксамид	14.4
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]о'льфонил)-К-{2,4-диметил- 6-[(метилокси)этанимидоил]фенил>-2-тиофенкарбоксамид	23.6
3-{[(3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2тиенил)карбонил]амино>-2,4,6-триметилфенил-М,И-диметилсульфамат	0.3
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-Б1-{3[(циклопропилметил)окси]-2,4,6-триметилфенил}-2тиофенкарбоксамид	9.4

СОЕДИНЕНИЕ	ЕТА АКТИВНОСТЬ*
3-{ [(4-хл ор-З-метил-5-изохсазол ил )амино]сульфонил >-N-(2,4,6триметил-5-пиримидинил)-2-тиофенкарбоксамнд	2.0
Ы-(2-ацетил-3,4,6-триметилфенил)-3-{[(4-хлор-3-метил-5- изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид	103.8
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил}амико]сульфонил|-М-(2-циано- 3,4,6-триметилфенил)-2-тиофенкарбоксамид	55.7
К-(2-хлор-4,6-диметилфенил)-3-{[(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбохсамид	20.7
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-Н-(4,6-диацетил- 3-гидрокси-2-пропилфеннл-2-тиофенкарбоксамид	0.1
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-И-(2,4-диметил- 6-[2-( метилсульфонил )ацетил]фенил)-2-тиофенкарбоксамид	13.7
3-{[(4-хлор-3-метил-5-нзоксазолил)амино]сульфонил}-М-(2,4-диметил- 6-{[метил(2,2-диметилпропил)амино]карбонил}фенил)-2тиофенкарбоксамид	2.7
3-{[(4-хлор-3-мегил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-Н-[2,4-диметил- 6-(мет ил сульфонил )фенил]-2-тиофенкарбоксамид	64.1
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-Н-[2,4-диметил- 6-( 1,3-оксазол-2-ил)фенил]-2-тиофенкарбоксамид	179
3-{[(4-хлор-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-И-[2-(2пропил сульфонил )-4,6-диметилфенил]-2-тиофенкарбоксамид
3-{[(4-хлор-3-мегил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-М-[2,4-диметил- 6-(пролилсульфонил)фенил]-2-тиофенкарбоксамид
3-{[(3,4-диметил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-М-(2-ацетил-4,5- метилендиоксифенил)-2-тиофенкарбоксамид	0.05
3-{[(4-хлор-3-метил-5-кзоксазолил)амино]сульфонил >-N-(2,4,6тримегилфенил)-2*тиофенкарбоксамид	2.4
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2-(2,4,6триметилфенилацетил)тиофен	6.4
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-Х-(3метоксикарбонил-2,4,6-триметилфенил)-2-тиофенхарбоксамид	4.7

СОЕДИНЕНИЕ	ЕТ* АКТИВНОСТЬ’
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-М-(2-ацетил-4,5метилендиоксифенил)-2-тиофенкарбоксамид	0.15
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолнл)амино]сульфонил)-И-(2-карбамоил- 4,6-диметилфенил)-2 -тиофенкарбоксамид	1.04
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-М-(2-карбоксил- 4,6-диметилфенил)-2-тиофенкарбоксамид	0.05
3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-М-(2-этил-4,6- диметилфенил)-2-тиофенкарбоксамид	3.8
3- [[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолнл)амино]сульфонил}-М-[2,6-диметил- 4- (1,3-оксазол-2-ил)фенил]-2-тиофенкарбоксамид	1.1

Представленные соединения также обладают улучшенными фармакокинетическими свойствами по сравнению с известными антагонистами эндотелина (см. табл. 2 ниже). Как видно из табл. 2, представленные соединения обладают повышенной доступностью при пероральном введении и повышенной селективностью по сравнению с известными антагонистами эндотелина. Например, №(2-ацетил-4,6диметилфенил)-3-{[(3,4-диметил-5-изоксазолил) амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид обладает доступностью при пероральном введении 148,1%, в то время как доступность №(4-хлор-3метил-5-изоксазолил)-2-{[3,4-(метилендиокси)6-метилфенил)ацетил]тиофен-3-сульфонамида при пероральном введении составляет 43,6%. Кроме того, №(2-ацетил-4,6-диметилфенил)-3{[(3,4-диметил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид показывает селективность по отношению к Е^ рецепторам в 441000 раз больше, чем по отношению к ЕТ_В рецепторам (ЕТ_А селективен), в то время как селективность №(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-{[3,4-(метилендиокси)-6-метилфенил) ацетил]тиофен-3-сульфонамида в тех же исследованиях составляет 20950.

В табл. 2 также приведены данные, показывающие, что представленные соединения обладают улучшенной переносимостью как ίη νί1го, так и ίη νί\Ό, по сравнению с известными антагонистами эндотелина, см. пример 24. Например, №(2-ацетил-4,6-диметилфенил)-3{[(3,4-диметил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид в исследованиях по ингибированию ферментов СР4502С9, 2С19 и 3А4 ίη νίΙΐΌ характеризуется значениями 1С₅₀ 7,6, 126,3 и 28,0 соответственно, в то время как №(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-{[3,4(метилендиокси)-6-метилфенил)ацетил]тиофен3-сульфонамид в тех же исследованиях характеризуется значениями 1С₅₀ 0,03, 0,2 и 0,09 соответственно. Более того, №(2-ацетил-4,6диметилфенил)-3-{[(3,4-диметил-5-изоксазолил) амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид на

50% ингибирует повышение среднего легочного артериального давления (МРАР) на модели острой гипоксии ίη νί\Ό при концентрации порядка 1 мг/кг, в то время как №(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)-2-{[3,4-(метилендиокси)-6-метилфенил)ацетил]тиофен-3-сульфонамид на 50% ингибирует повышение среднего легочного артериального давления (МРАР) в том же исследовании при концентрации 2,5 мг/кг. Дополнительные данные приведены в табл. 2.

Таким образом, представленные соединения обладают улучшенными фармакокинетическими свойствами и улучшенной переносимостью в исследованиях как ίη νίίΐΌ, так и ίη νί\Ό, по сравнению с известными антагонистами рецепторов эндотелина.

* ЕТа - антагонистическая активность по отношению к активности №(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-{[3,4(метилендиокси)-6-метил-фенил)ацетил]тиофен-3-сульфонамида

- данные не доступны или измерены в виде % ингибирования при концентрации 100 мкМ

Таблица 2

СОЕДИНЕНИЕ	Доступность пероральном введении	Селективность''	полувывед. (час)
М-(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-{[3,4(метилендиокси)-6-метилфенил)ацетил]-тиофен-3сульфонамид	43.6	20 950	4.5
М-(2-ацетил-4,6-диметилфенил)-3-{[(4-хлор-3метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-2гиофенсульфонамид	25.1	442 000	4.0

СОЕДИНЕНИЕ	Доступность пероральном введении1	Селективность	(час)
М-(2-метансульфонилацетил-4,6-диметилфевил)-3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил} -2-тиофенсулъфонамид	167	66 500	12.2
М-(2-ацетил-4,6-диметилфенил)-3-{[(3,4-димегил-5изоксазолил)амино]сульфокил}-2гиофенкарбоксамид	148 1	441 000	6.0
М-(2-метансульфонил-4,6-диметилфенил)-3-{[(4клор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2гиофенсульфонамид		456 000	1.5
К-(2-(2-оксазолил)-4,6-диметилфенил)-3-{[(4-хлор- 3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2гиофенсульфонамид		119 000	5.3
М-(2-циано-3,4.6-триметилфенил)-3-{[(4-хлор-3метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил} -2гиофенсульфонамид	-	549 800	5 1
М-(2-хлор-4,6-диметилфенил)-3-{[(4-хлор-3-метил5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2гиофенсульфонамид		166 000	2.6
М-(2-циано-3,4,6-триметилфенил)-3-{((3,4-диметил5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2тиофенсульфонамид		330 000	5.3

- 1С₅₀ по отношению к ЕТ_В/1С₅₀ по отношению к ЕТ_А

Таблица 2 (продолжение)

СОЕДИНЕНИЕ	СР450 2С9'	СР450 2С19*	СР450 ЗА4*
М-(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил )-2-((3,4(метилендиокси)-6-метилфенил)ацетил]-тиофен-3сульфонамид	0.03	0.2	0.09

СОЕДИНЕНИЕ	СР450 2С9*	СР450 2С19*	СР450 ЗА4*
И-(2-ацетил-4,6-диметилфенил}-3- ([(4-хлор-З-метил- 5-изоксазолил)аммно]сульфонил}-2гиофенсульфонамид	1.67	48.8	3.3
1Ч-(2-метансульфонилацетил-4,6-диметилфенил)-3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}2-тиофенсулъфонамид	5.1	50.6	4.0
М-(2-ацетил-4,6-диметилфенил)-3-{[(3,4-диметил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-2гиофенкарбоксамид	7.6	126.3	28.0
М-(2-метансульфонил-4,6-диметилфенил )-3-(((4хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2тиофенсульфонамид	5.3	6.2	137
М-(2-(2-оксазолил)-4,6-диметнлфенил)-3- {[(4-хлор-Зметил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2гиофенсульфонамид
М-(2-циано-3,4,6-тримет ил фенил)-3-{ [(4-хлор-Зметил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2гиофенсульфонамид	0.77	13.53	1.44
М-(2-хлор-4,6-диметилфенил)-3-{[(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-2гиофенсульфонамид	0.56	4.60	3.86
М-(2-циано-3,4,6-триметилфенил)-3-{[(3,4-диметил· 5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2гиофенсульфонамид	2.38	14.36	3.30

Таблица 2 (продолжение)

СОЕДИНЕНИЕ	Си» (мкг)	Острая гипоксия*
М-(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)-2-([3,4-(метилендиокси)-6-	133.2	2.5

СОЕДИНЕНИЕ	Сн.» (мкг)	Острая гипоксия*
метилфенил)ацетил]-тиофен-3-сульфонамид
Ы-(2-ацетил-4,6-диметилфенил)-3-{[(4-хлор-3-метил-5- изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенсульфонамид	58.8	1
М-(2-метансульфонилацетил-4,6-диметилфенил)-3-([(4-хлор-3метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2тиофенсульфонамид	37.3	>5
М-(2-ацетил-4,6-диметилфенил)-3 - {[(3,4-диметил-5изоксазолил)амино]сульфонил)-2-тиофенкарбоксамид	157.2	1
М-(2-метансульфонил-4,6-диметилфенил)-3-(((4-хлор-3-метил- 5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенсульфонамид	10.3	-
М-(2-(2-оксазолил)-4,6-диметилфенил)-3-([(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино]сульфонил)-2-тиофенсульфонамид	66
М-(2-циано-3,4,6-триметилфенкл)-3-([(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенсульфонамид	45.7	от 1 до 5
(4-(2-хлор-4,6-димегилфенил)-3-{[(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенсульфонамид	49.5	--
Ы-(2-циано-3,4,6-триметилфенил)-3-([(3,4-димегил-5изоксазолил)амино]сульфонил)-2-тиофенсульфонамид	85.8	от 1 до 5

- доза (мг/кг), необходимая для ингибирования на 50% повышения среднего легочного артериального давления с использованием модели ίη νίνο

Б. Получение соединений

Способы получения некоторых упомянутых выше, а также других соединений, обладающих требуемыми активностями, приведены ниже в примерах. Соединения, синтез которых не описан подробно в качестве примера, могут быть получены стандартной модификацией одного или более способов, детально описанных в примерах, путем замены соответствующих легкодоступных реагентов.

Многие из описанных в изобретении соединений являются производными 3-сульфамоил-2-ариламинокарбонилтиофена. Как правило, эти соединения могут быть получены присоединением соответствующей 3-сульфамоилтиенилкарбоновой кислоты к замещенному или незамещенному анилину.

3-Сульфамоилтиенилкарбоновые кислоты можно получить множеством способов, известных специалистам. Как правило, большинство синтезов включают конденсацию карбоалкокситиенилсульфонилхлорида с аминоизоксазолом в абсолютном пиридине или в тетрагидрофуране (ТГФ) в присутствии гидрида натрия. Последующий гидролиз карбоалкоксигруппы приводит к получению желаемых кислот. Сульфонилхлориды и аминоизоксазолы могут быть либо приобретены как коммерчески доступные готовые реактивы, либо могут быть синтезированы способами, описанными в примерах, или другими способами, известными специалистам (см., например, патенты США №№ 4,659,369,

4,861,366 и 4,753,672).

Например, тиенилсульфонилхлориды можно получить следующими способами.

Предшественник 3-сульфамоилтиофена можно бромировать во 2 положении реакцией, например, с бромом или с Ν-бромсукцинимидом. По- значения 1С₅₀ в мкМ следующий обмен галогена на металл реакцией с алкиллитием, например, н-бутиллитием, и реакция с диоксидом углерода приводят к получению желаемой кислоты. Альтернативно, производное 2-тиенилкарбоновой кислоты можно сульфировать по 3 положению реакцией, например, с триоксидом серы в серной кислоте. Превращение полученной в результате сульфоновой кислоты в сульфонилхлорид (реакцией с пятихлористым фосфором, треххлористым фосфором, хлорокисью фосфора, хлористым тионилом или хлористым оксалилом) и последующая реакция с соответствующим амином приводят к получению желаемого производного сульфамоилтиенилкарбоновой кислоты. Являющийся полупродуктом сульфонилхлорид можно также получить напрямую по реакции производного тиенилкарбоновой кислоты с хлорсульфоновой кислотой.

Ы-(алкилизоксазолил)сульфонамиды можно получить конденсацией аминоизоксазола с сульфонилхлоридом в абсолютном пиридине в присутствии катализатора 4-(диметиламино) пиридина или без него. Ы-(3,4-диметил-5изоксазолил)сульфонамиды и Ы-(4,5-диметил-3изоксазолил)сульфонамиды можно получить из соответствующих аминодиметилизоксазолов, таких как 5-амино-3,4-диметилизоксазол. Например, Ы-(3,4-диметил-5-изоксазолил)-2(карбометокси)тиофен-3-сульфонамид был получен из 2-метоксикарбонилтиофен-3-сульфонилхлорида и 5-амино-3,4-диметилизоксазола в абсолютном пиридине.

Ы-(4-галоизоксазолил)сульфонамиды можно получить конденсацией амино-4-галоизоксазола с сульфонилхлоридом в ТГФ в присутствии гидрида натрия в качестве основания. Например, Ы-(4-бром-3-метил-5-изоксазолил) тиофен-2-сульфонамид был получен из 5амино-4-бром-3-метилизоксазола и тиофен-2сульфонилхлорида в ТГФ в присутствии гидрида лития.

Эти сульфонамиды можно также получить из соответствующих сульфонилхлорида и аминоизоксазола в пиридине в присутствии каталитического количества 4-диметиламинопиридина (ДМАП) или без него. В некоторих случаях биссульфонильное соединение получают как главный или единственный продукт. Биссульфированные соединения легко гидролизуются водным раствором гидроксида натрия в подходящем сорастворителе, таком как метанол или тетрагидрофуран, обычно при комнатной температуре, с получением сульфонамида.

Замещенные анилины можно синтезировать нитрованием, например, смесью азотной и серной кислот или тетрафторборатом нитроновой кислоты, соответствующего предшественника - замещенного бензола. Восстановление полученного ароматического нитросоединения, например, цинковой пылью, каталитическим гидрированием, хлоридом олова(11) или любым другим способом, известным специалистам, приводит к получению желаемого анилина.

Присоединение тиенилкарбоновой кислоты к анилину может быть осуществлено превращением кислоты в соответствующий ацилимидазол (реакцией, например, с карбонилдиимидазолом) или ацилхлорид (реакцией, например, с хлористым оксалилом или хлористым тионилом) и последующей реакцией с анилином, приводящей к получению желаемых ариламинокарбонилтиофеновых соединений.

Некоторые из описанных в данном изобретении соединений являются производными 3сульфамоил-2-бензиламинокарбонилтиофена. Для получения этих соединений используют приведенные выше способы, за исключением того, что анилин заменяют на бензиламин. Подходящие бензиламины можно синтезировать реакцией соответствующего бензилгалогенида с азидом с последующим восстановлением полученного бензилазида, например, каталитическим гидрированием или обработкой триалкилили триарилфосфином.

Другие описанные в изобретении соединения являются производными 3-сульфамоил-2арилацетилтиофена. Эти соединения можно получить добавлением подходящего магнийгалоидбензила к производному 3-сульфамоил-2тиенилкарбоновой кислоты, такому как Νметил-Ы-метоксиамид. Такой амид можно получить реакцией кислоты с карбонилдиимидазолом и последующей реакцией с Ν-метил-Ыметоксиамином.

Некоторые из описанных в изобретении соединений можно получить способом, приведенным на схеме 1

где Я¹ является галогеном или низшим алкилом, причем хлор и метил являются предпочтительными заместителями.

Для соединений формулы А Я⁶⁰ вместе с СО образует карбоновую кислоту или ее производное. В этом случае Я⁶⁰ предпочтительно является ОЯ⁴, где Я⁴ является низшим алкилом или алкоксиалкилом, причем метил или метоксиметил являются предпочтительными, или любой другой группой, согласующейся с намеченной схемой химических превращений. Для соединений, имеющих формулы С или Ό, Я⁶⁰ является ОЯ⁴, ОН, галогеном или другой реакцио носпособной группой, активирующей карбоновую кислоту, согласующейся с намеченными химическими превращениями, причем особенно предпочтительным является хлор.

Для соединений, имеющих формулы Ό и Б, В⁶¹ является любой защитной группой сульфонамида, согласующейся с намеченной схемой химических превращений, например метоксиметильной группой.

Для соединений формулы Е Аг может быть любым ароматическим или гетероциклическим кольцом, причем предпочтительными являются бензол и пиримидин.

Способами, известными специалистам, могут быть также разработаны и получены пролекарства и другие производные соединений, подходящие для введения людям (см., например, йодгабу (1985) Мебюша1 Сйеш1к1гу А Вюсйеть са1 Арргоасй, ОхБогб ишуегкйу Ргекк, Νο\ν Υо^к, стр. 388-392).

Описанные в изобретении соединения были синтезированы и протестированы на активность в исследованиях ш уйго и в некоторых случаях ш у1уо с использованием моделей на животных. Исследования с помощью спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР), масс-спектрометрии, ИК-спектроскопии и высокоэффективной жидкостной хроматографии показали, что синтезированные соединения обладают ожидаемыми структурами, и их чистота, как правило, превышает 95%. Все соединения, приведенные в качестве примеров или указанные в описании изобретения, обладают антагонистической активностью по отношению к эндотелину.

В. Определение биологической активности соединений

Для тестирования с целью идентификации таких соединений, которые обладают любыми биологическими активностями эндотелинового пептида или обладают способностью подавлять или ингибировать эндотелиновые пептиды, используют стандартные физиологические, фармакологические и биохимические процедуры. Соединения, обладающие активностями ΐπ уйго, такими как способность связываться с эндотелиновыми рецепторами или конкурировать с одним или более эндотелиновым пептидом за связывание с эндотелиновыми рецепторами, могут быть использованы в способах выделения эндотелиновых рецепторов и способах распознавания особенностей эндотелиновых рецепторов, и являются кандидатами для использования при лечении заболеваний, связанных с эндотелином.

Таким образом, с помощью такого скрининга могут быть идентифицированы другие предпочтительные соединения формулы I и II, помимо описанных ранее, которые являются антагонистами или агонистами эндотелина.

1. Идентификация соединений, модулирующих активность эндотелинового пептида.

Соединения тестируют на способность модулировать активность эндотелина-1. Многочисленные исследования, направленные на определение способности соединений модулировать активность эндотелина, известны специалистам (см., например, патент США № 5,114,918 на имя 1к1ика\\'а и др.; Европейский патент А1 0436189, принадлежащий ΒΑΝΥυ РНАВМАСЕиТ1САЬ СО., ЬТБ. (7 октября 1991 г.); Вогдек и др. (1989) Еиг. I. Рйагт. 165: 223230; Бйер и др. (1991) Вюсйет. Вюрйук. Век. Соттип. 177: 171-176). Исследования т уйго могут быть подтверждены исследованиями ш У1уо (см., например, патент США № 5,114,918 на имя 1к1ака\\'а и др.; Европейский патент А1 0436189, принадлежащий ΒΑΝΥυ РНАВМАСЕБ'ПСАБ СО., ЬТБ. (7 октября 1991 г.)) и таким образом может быть определена фармацевтическая активность. Такие исследования описаны в примерах и включают способность конкурировать за связывание с ЕТ_а и ЕТ_в рецепторами, находящимися в мембранах, выделенных из линий клеток, в которые при помощи генной инженерии была заложена способность экспрессировать на своей клеточной поверхности ЕТ_а или ЕТ_в рецепторы.

Свойства потенциальных антагонистов могут быть определены как функция от их способности ингибировать активность, вызванную эндотелином 1п уйго, используя определенную ткань, такую как воротная аорта и аорта крыс, а также матку, трахею и семенные протоки крыс (см., например, Вогдек, В., Уоп 6гаГепк1еш, Н. и КшдЫ, Б.Е. Тйкие ке1есйуйу оГ епбоИейп, Еиг. I. Рйагтасо1 165:223-230. (1989)). Способность функционировать в качестве антагониста эндотелина ш у1уо может быть протестирована на крысах, страдающих гипертензией, ббу-мышах или других известных моделях на животных (см. КаЙепЬгопп и др. (1990) I. Меб. СНет. 33:838-845, см. также патент США № 5,114,918 на имя 1к1ика\\'а и др.; и Европейский патент А1 0436189, принадлежащий ΒΑΝΥυ РНАВМАСЕС'ПСАБ СО., 1.Т1А (7 октября 1991 г.), см. также Во1дег и др. (1983) I. РНагшасоН Ехр. Тбег. 225:291-309). С использованием результатов таких исследований на животных, может быть определена фармацевтическая эффективность и определены фармацевтически эффективные дозировки. Потенциальный агонист может быть также оценен с использованием исследований ш уйго и 1п у1уо, известных специалистам.

Эндотелиновая активность может быть идентифицирована по способности тестируемого соединения стимулировать сокращение изолированных клеток грудной аорты крыс (Вогдек и др. (1989) Тйкие ке1есйуйу оГ епбоИейп Еиг. I. РНагшасоН 165: 223-230). Для проведения исследования соскабливают эндотелий, круглые сегменты закрепляют с напряжением в клеточной ванне и обрабатывают эндотелином в присутствии тестируемого соединения. Регистри руют изменения напряжения, вызванные эндотелином. Можно построить кривые зависимости ответа от дозы и использовать их для получения информации об относительной ингибирующей способности тестируемого соединения. Для того чтобы оценить влияние конкретного тестируемого соединения на сокращение ткани, могут быть использованы другие ткани, включая сердце, скелетные мышцы, почки, матку, трахею и семенные протоки.

Антагонисты, специфические к эндотелину определенного изотипа, можно идентифицировать по способности тестируемого соединения препятствовать связыванию эндотелина с различными тканями или клетками, экспрессирующими различные субтипы эндотелиновых рецепторов, или по способности подавлять биологическое влияние эндотелина или изотипа эндотелина (Такауапад1 и др. (1991) Кед. Рер. 32: 23-37, Рапек и др. (1992) Вюсйет. Вюрйук. Кек. Соттип. 183: 566-571). Например, ЕТ_В рецепторы, которые экспрессируются эндотелиальными клетками сосудов, вероятно связаны с высвобождением простациклина и фактора релаксации эндотелиумного происхождения (Ие Ыисс1 и др. (1988), Ргос. ЫаД. Асаб. 8с1. И8А 85:9797). ЕТ_А рецепторы не выявлены в культивированных эндотелиальных клетках, экспрессирующих ЕТВ рецепторы.

Связывание соединений или ингибирование связывания эндотелина с ЕТВ рецепторами можно определить, измеряя ингибирование высвобождения простациклина, вызванное эндотелином-1, по его основному стабильному метаболиту 6-кето РСР1_а из культуры эндотелиальных клеток бычьей аорты (см., например, Рйер и др. (1991) Вюсйет. апб Вюрйук Кек. Соттип. 177: 171-176). Таким образом, относительное сродство соединения по отношению к различным эндотелиновым рецепторам может быть оценено по зависимостям доза ингибитора - ответ, используя ткани, различающиеся по субтипам рецепторов.

Используя такие исследования, было и может быть оценено относительное сродство соединений к ЕТ_А и ЕТ_В рецепторам. Выбраны те соединения, которые обладают желаемыми свойствами, такими как специфическое ингибирование связывания эндотелина-1. Выбранные соединения, обладающие желаемыми активностями, могут быть терапевтически полезны, и они были протестированы для использования в этих целях с помощью описанных ранее исследований, позволяющих оценить эффективность щ νίνο (см., например, патент США № 5,248,807; патент США № 5,240,910; патент США № 5,198,548; патент США № 5,187,195; патент США № 5,082,838; патент США № 5,230,999; опубликованные заявки Канады №№ 2,067,288 и 2071193; опубликованную заявку Великобритании № 2,259,450; публикацию международной заявки РСТ ©О 93/08799; Вешд1 и др. (1993) Клбпеу 1п1егпа1юпа1 44:440-444; и N1ге1 и др. (1993) Ь1Ре 8с1епсек 52:1869-1874). Соединения, обладающие активностями ш νίίΐΌ. которые коррелируют с эффективностью ш νίνο, впоследствие были включены в состав подходящих фармацевтических композиций и использованы в качестве терапевтических агентов.

Соединения также могут быть использованы в способах идентификации и выделения специфических эндотелиновых рецепторов, а также могут помочь в разработке соединений, являющихся более сильными антагонистами или агонистами эндотелина или таких соединений, которые являются более специфическими по отношению к определенному эндотелиновому рецептору.

2. Выделение эндотелиновых рецепторов.

Представлен способ идентификации эндотелиновых рецепторов. Осуществляя этот способ на практике, одно или более соединений связывают с носителем и используют в способах аффинной очистки рецепторов. Выбирая соединения, обладающие определенной специфичностью(тями), можно идентифицировать отдельные подклассы ЕТ рецепторов.

Одно или более соединений можно присоединить к подходящему полимерному носителю, такому как Аффи-гель, ковалентно или какой-либо другой связью, способами, известными специалистам для присоединения эндотелина к подобным полимерным носителям (см. 8с11уаг1х и др. (1990) Епбосппо1оду 126: 32183222). Можно связать соединения, специфичные по отношению к ЕТ_А или к ЕТ_В рецепторам или по отношению к рецепторам других подклассов.

Полимерную основу предварительно уравновешивают подходящим буфером обычно при физиологическом рН (7-8). Композицию, включающую солюбилизированные рецепторы из выбранной ткани, смешивают с полимерным носителем, к которому присоединено вещество, и рецепторы селективно элюируют. Рецепторы могут быть идентифицированы тестированием на связывание с эндотелиновым изопептидом или аналогом, или другими способами, которые позволяют идентифицировать и характеризовать белки. Способы получения рецепторов, полимерного носителя и способ элюции могут быть осуществлены с помощью модификации стандартных процедур, известных специалистам (см., например 8с11уаг1х и др. (1990) Епбосгшо1оду 126: 3218-3222).

Представлены другие способы распознавания типа рецепторов, основанные на их различном сродстве к любому из представленных соединений. Для распознавания субтипов рецепторов можно также использовать любое из указанных в данном описании исследований по измерению сродства выбранных соединений к эндотелиновым рецепторам, основываясь на известном сродстве конкретных представлен ных в изобретении соединений. В частности, неизвестный рецептор можно идентифицировать как ЕТА или как ЕТВ рецептор с помощью измерения сродства связывания неизвестного рецептора с представленным соединением, для которого известно соотношение сродства к одному и другому типу рецепторов. Такие предпочтительные взаимодействия являются весьма полезными для определения конкретного заболевания, которое можно лечить соединением, полученным согласно данному изобретению. Например, соединения с высоким сродством к ЕТ_А рецепторам и низким или нулевым сродством к ЕТВ рецепторам, являются кандидатами для использования в качестве агентов для лечения гипертензии; в то время как соединения, которые предпочтительно взаимодействуют с ЕТВ рецепторами, являются кандидатами для использования в качестве антиастматических средств.

Г. Препараты (рецептуры) и введение композиций

Представлены препараты на основе сульфонамидов. Препараты представляют собой композиции, разработанные для введения представленных в изобретении фармацевтически приемлемых производных, в частности, солей сульфонамидных соединений. В связи с тем, что для солей наблюдается исключительно высокая стабильность по сравнению с нейтральными формами, такие соли, в частности, натриевые соли, являются особенно подходящими для перорального и парентерального введения. Такие композиции включают растворы, суспензии, таблетки, диспергируемые таблетки, пилюли, капсулы, порошки, препараты пролонгированного действия и любые другие подходящие препараты. Предпочтительными являются композиции в форме пилюль или таблеток. Способы производства таблеток, капсул и других подобных препаратов известны специалистам (см., например, Лп5с1. Н.С. (1985) !п1гобис11оп 1о РйаттасеиИса1 Эокаде Еоттк, 4-е издание, стр. 126-163).

В препаратах эффективные концентрации одного или более фармацевтически приемлемого производного смешаны с подходящим фармацевтическим носителем или растворителем. Предпочтительно, чтобы до введения в препарат сульфонамидные соединения были переведены в соответствующую солевую форму, предпочтительно в форму натриевых солей, как описано выше. Концентрации солей соединений в препаратах являются эффективными, если введение препарата обеспечивает доставку количества, ослабляющего симптомы заболевания, связанного с эндотелином. Обычно композиции включают в состав препарата, предназначенного для введения в виде одной (разовой) дозы. Для создания препарата на основе композиции, определенное количество вещества по весу растворяют, суспендируют, диспергируют, или каким либо другим способом смешивают с выбранным носителем (растворителем) в эффективной концентрации таким образом, чтобы состояние, подвергающееся лечению, было облегчено или улучшено. Фармацевтические носители или растворители, подходящие для введения представленных соединений, включают любые носители, известные специалистам, подходящие для конкретного способа введения.

Кроме того, соединения могут быть включены в препарат в качестве единственного фармацевтически активного ингредиента композиции или могут быть скомбинированы с другими активными ингредиентами. Липосомальные суспензии, включая тканеспецифичные (11ккие1атде1еб) липосомы, также могут быть использованы в качестве фармацевтически приемлемых носителей. Они могут быть получены согласно способам, известным специалистам. Например, липосомальные препараты могут быть получены, как описано в патенте США № 4,522,811.

Активное соединение, такое как соль, предпочтительно натриевую соль, включают в фармацевтически приемлемый носитель в количестве, достаточном, чтобы вызвать терапевтически полезный эффект при отсутствии нежелательных побочных эффектов у пациента, подвергающегося лечению. Терапевтически эффективную концентрацию можно определить эмпирически, путем тестирования соединений на известных системах ίη уйто и ίη у1уо (см., например, патент США № 5,114,918 на имя Εΐιίка\та и др.; Европейский патент А1 0436189, принадлежащий ВАЫУИ РНАКМАСЕиПСЛЬ СО., ЬТО. (7 октября 1991 г.); Вогдек и др. (1989) Еиг. 1. Рйатт. 165: 223-230; Ейер и др. (1991) Вюсйет. Вюрйук. Кек. Соттип. 177: 171-176) и последующей экстраполяцией на дозировки, предназначенные для людей.

Концентрация натриевой соли активного соединения в лекарственной композиции будет зависеть от скоростей абсорбции, инактивации и выведения активного соединения, физикохимических свойств соединения, расписания приема доз и введенного количества, а также от других факторов, известных специалистам. Например, доставляемое количество достаточно для лечения симптомов гипертензии. Эффективные количества для лечения заболеваний, связанных с эндотелином, как ожидается, будут выше, чем количество сульфонамидного соединения, которое необходимо ввести для лечения бактериальных инфекций.

Обычно терапевтически эффективная доза должна создавать концентрацию активного компонента в сыворотке примерно от 0,1 нг/мл до примерно 50-100 мкг/мл. Фармацевтические композиции обычно должны обеспечивать дозу примерно от 0,001 мг до примерно 2000 мг соединения на килограмм веса тела в день. Фармацевтические формы, содержащие разовые дозы, выполняют таким образом, чтобы они содержали примерно от 1 до примерно 1000 мг и предпочтительно приблизительно от 10 до примерно 500 мг существенного активного ингредиента или комбинации существенных ингредиентов в каждой разовой форме дозировки.

Активный ингредиент может быть введен сразу полностью или может быть разделен на несколько меньших доз, предназначенных для введения через некоторые промежутки времени. Очевидно, что точная дозировка и длительность лечения зависят от заболевания, которое подвергается лечению, и могут быть определены эмпирически с использованием известных протоколов тестирования или экстраполяцией результатов тестирования ш νίνο или ίο νίΐτο. Необходимо отметить, что значения концентраций и дозировок могут также варьироваться в зависимости от тяжести состояния, которое необходимо облегчить. Необходимо также понимать, что в каждом конкретном случае, специфические схемы приема дозировок должны быть скорректированы через некоторое время согласно индивидуальной необходимости и профессиональному мнению врача, осуществляющего введение или наблюдающего за введением композиции, а также что приведенные в изобретении диапазоны концентраций приведены лишь в качестве примеров и не подразумевают ограничения рамок изобретения или практического применения представленных композиций.

Предпочтительные фармацевтически приемлемые производные включают кислотные, солевые, эфирные, гидратные, сольватные и пролекарственные формы. Производное выбирается как наиболее стабильная форма по сравнению с соответствующим нейтральным соединением. Предпочтительными являются фармацевтически приемлемые соли. Более предпочтительные соли включают соли щелочных металлов, в частности, натриевые соли, такие как, но не ограничиваясь только этими, кислый фосфат натрия и натриевую соль, наиболее предпочтительно натриевую соль.

Таким образом, для формирования фармацевтических композиций эффективные концентрации или количества одного или более представленных в изобретении соединений или их фармацевтически приемлемых производных смешивают с подходящим фармацевтическим носителем для систематического, местного или локального введения. Соединения включают в количестве, эффективном для ослабления симптомов или лечения заболевания, связанного с эндотелином и являющегося объектом лечения. Концентрация активного соединения в композиции будет зависеть от скоростей абсорбции, инактивации и выведения активного соединения, расписания приема доз, введенного количества, конкретного препарата, а также от других факторов, известных специалистам.

Предполагается, что композиции должны быть введены подходящим способом, включая пероральный, парентеральный, ректальный, местный и локальный, в зависимости от расстройства, которое подвергается лечению. Например, для лечения офтальмологических нарушений, таких как глаукома, предусмотрен препарат для внутриглазного введения и также для инъекции непосредственно в стекловидное тело. Для перорального введения в настоящее время предпочтительными являются капсулы и таблетки. Для парентерального введения предпочтительными являются препараты на основе лиофилизированных порошков, приготовленные, как описано в изобретении. Соединения могут быть в жидкой, полужидкой или твердой форме и могут быть включены в препараты способом, подходящим для каждого способа введения. Предпочтительные способы введения включают парентеральный и пероральный.

Растворы или суспензии, используемые для парентерального, внутрикожного, подкожного или местного применения, могут содержать любой из следующих компонентов: стерильные разбавитель, такой как вода для инъекций, солевой раствор, стабилизированное масло, полиэтиленгликоль, глицерин, пропиленгликоль или другой синтетический растворитель; антимикробные агенты, такие как бензиловый спирт и метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновую кислоту и бисульфит натрия; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА); буферы, такие как ацетатные, цитратные и фосфатные; и агенты для регулирования осмотического давления, такие как хлорид натрия или декстрозу. Препараты для парентерального введения могут быть заключены в ампулы, одноразовые шприцы или пузырьки на одну или несколько доз, выполненные из стекла, пластика или другого подходящего материала.

В тех случаях, когда соединения обладают недостаточной растворимостью, могут быть использованы способы солюбилизации соединений. Такие способы известны специалистам и включают, но не ограничены только ими, использование сорастворителей, таких как диметилсульфоксид (ДМСО), использование поверхностно-активных веществ, таких как твин, или растворение в водном растворе бикарбоната натрия. Производные соединений, такие как пролекарства, также могут быть использованы для создания препаратов на базе эффективных фармацевтических композиций.

При смешивании или добавлении натриевой соли сульфонамидного соединения(й) получившаяся смесь может представлять собой раствор, суспензию, эмульсию или что-то подобное. Форма получившейся смеси зависит от ряда факторов, включая предполагаемый способ введения и растворимость соединения в выбранном носителе или растворителе. Эффективная концентрация является достаточной для ослабления симптомов заболевания, нарушения или состояния, подвергающегося лечению, и может быть определена эмпирически.

Представлены препараты для введения людям и животным в виде однократных (разовых) форм дозировок, таких как таблетки, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, стерильные растворы или суспензии для парентерального введения, растворы или суспензии для перорального введения, и масляно-водные эмульсии, содержащие подходящие количества соединений, в частности, фармацевтически приемлемых солей, предпочтительно натриевых солей, таких соединений. Фармацевтически терапевтически активные соединения и их производные обычно включают в препараты и вводят либо в формах, содержащих одну дозу, либо в формах, содержащих множество доз. Форма, содержащая одну (разовую) дозу, относится к физически дискретным единицам, подходящим для людей и животных, и отдельно упакованным, как это известно из уровня техники. Каждая единичная (разовая) доза содержит заранее определенное количество терапевтически активного соединения, достаточное для того, чтобы вызвать желаемый терапевтический эффект, вместе с требуемым фармацевтическим носителем, растворителем или разбавителем. Примеры разовых форм дозировок включают ампулы и шприцы, индивидуально упакованные таблетки или капсулы. Формы, содержащие одну дозу, можно вводить дробно (по частям) или по несколько штук. Формы, содержащие множество доз, представляют собой множество идентичных разовых форм дозировок, упакованных в единый контейнер и предназначенных для введения в виде отдельных разовых доз. Примеры форм, содержащих множество доз, включают пузырьки и бутылочки с таблетками или капсулами или бутылки объемом пинта или галлон. Таким образом, формы, содержащие множество доз, представляют собой множество разовых доз, которые не упакованы раздельно.

Наряду с активными ингредиентами, композиция может содержать: разбавитель, такой как лактозу, сахарозу, кислый фосфат кальция или карбоксиметилцеллюлозу; смазочное вещество, такое как стеарат магния, стеарат кальция и тальк; и связующее, такое как крахмал, натуральные смолы, такие как вещества, полученные из акации, глюкозу, кормовую патоку (мелассу), поливинилпирролидин, целлюлозы и их производные, повидон, поперечно-сшитые повидоны и другие аналогичные связующие, известные специалистам. Жидкие композиции, предназначенные для фармацевтического введения, могут быть, например, получены растворением, диспергированием или каким-либо другим описанным выше способом смешения с получением раствора или суспензии активного компонента с необязательными фармацевтическими вспомогательными средствами (адьювантами) в носителе, таком как, например, вода, солевой раствор, водный раствор декстрозы, глицерин, гликоли, этанол и так далее. При желании фармацевтическая композиция, предназначенная для введения, может также содержать незначительные количества нетоксичных дополнительных соединений, таких как увлажняющие агенты, эмульгирующие агенты или солюбилизирующие агенты, рН-поддерживающие агенты (буферы) и так далее, например, ацетат, цитрат натрия, производные циклодекстрина, монолаурат сорбита, триэтаноламиннатрийацетат, олеат триэтаноламина и другие подобные агенты. Существующие способы получения таких форм дозировок известны специалистам, см., например, Кеттдойк Рйагтасеийса1 Заенсе^, Маск РиЫЫинд Со траву, ЕаЧов, Ра., 15-е издание, 1975. Композиция или препарат для введения в любом случае содержит активное соединение в количестве, достаточном для облегчения симптомов заболевания или состояния, являющегося объектом лечения.

Могут быть получены формы дозировок или композиции, содержащие активный ингредиент в количестве от 0,005 до 100% вместе с наполнителем, изготовленным из нетоксичного носителя. Для перорального введения фармацевтически приемлемую нетоксичную композицию формируют путем включения любых традиционно используемых наполнителей, таких как, например, фармацевтические количества маннита, лактозы, крахмала, стеарата магния, талька, производных целлюлозы, кросскармеллозы натрия, глюкозы, сахарозы, карбоната магния или сахарината натрия. Такие композиции включают растворы, суспензии, таблетки, капсулы, порошки и препараты пролонгированного действия, такие как, но не ограничиваясь только ими, имплантанты и микроинкапсулированные системы доставки, и биодеградируемые, биосовместимые полимеры, такие как коллаген, сополимер этилена с винилацетатом, полиангидриды, полигликолевую кислоту, полиортоэфиры, полимолочную кислоту и другие. Способы получения этих препаратов известны специалистам. Представленные композиции могут содержать 0,001-100% активного ингредиента, предпочтительно 0,1-85%, обычно 75-95%.

Соли, предпочтительно натриевые соли активных соединений, могут быть объединены с носителями, защищающими соединение от быстрого выведения из организма, например, в виде препаратов пролонгированного действия или препаратов с покрытиями.

Препараты могут содержать другие активные соединения для получения желательной комбинации свойств. Для терапевтических или профилактических целей соединения формулы I или их фармацевтически приемлемые соли и производные также можно успешно вводить совместно с другими фармакологическими агентами, такими как бета-адренергический блокатор (например, атенолол), блокатор каль цивых каналов (например, нифдипин), ингибитор ангиотензин-конвертирующего фермента (АКФ) (например, лизиноприл), диуретик (например, фуросемид или гидрохлортиазид), ингибитор эндотелин-конвертирующего фермента (ЭКФ) (например, фосфорамидон), ингибитор нейтральной эндопептидазы (НЭП), ингибитор редуктазы НМССоА, донор оксида азота, антиоксидант, сосудорасширяющий агент, агонист допамина, нейропротектор, стероид, бетаагонист, антикоагулянт или тромболитический агент, которые, как известно из уровня техники, представляют ценность при лечении одного или более заболеваний или медицинских состояний, относящихся к данному изобретению. Следует понимать, что такая комбинированная терапия закладывает основу дальнейшей перспективы использования представленных в изобретении композиций и способов лечения.

1. Препараты для перорального введения.

Фармацевтические формы дозировок, предназначенные для перорального введения, могут быть твердыми, жидкими или выполненными в виде гелей. Твердые формы дозировок представляют собой таблетки, капсулы, гранулы и сыпучие порошки. Типы таблеток включают прессованные таблетки, жевательные таблетки и таблетки, которые могут быть покрыты энтеросолюбильной оболочкой, сахаром или пленкой. Капсулы могут быть выполнены из твердой или мягкой желатины, в то время как гранулы и порошки могут быть приготовлены в нешипучей или шипучей форме в комбинации с другими ингредиентами, известными специалистам.

В некоторых вариантах осуществления изобретения препараты являются твердыми формами дозировок, предпочтительно капсулами или таблетками. Таблетки, пилюли, капсулы, пастилки и другие формы могут содержать любой из следующих ингредиентов или соединений сходной природы: связующее, разбавитель, диспергирующий агент, смазочное вещество, глидант, подсластитель и ароматизирующий агент (вкусовую добавку).

Примеры связующих агентов включают микрокристаллическую целлюлозу, смолу трагаканта, раствор глюкозы, растительный клей из акации, раствор желатины, сахарозу и крахмальную пасту. Смазочные вещества включают тальк, крахмал, стеарат магния или кальция, ликоподий и стеариновую кислоту. Разбавители включают, например, лактозу, сахарозу, крахмал, каолин, соль, маннит и кислый фосфат кальция. Глиданты включают, но не ограничены только им, коллоидный диоксид кремния. Диспергирующие агенты включают кросскармеллозу натрия, крахмалгликолят натрия, альгиновую кислоту, кукурузный крахмал, картофельный крахмал, бентонит, метилцеллюлозу, агар и карбоксиметилцеллюлозу. Окрашивающие агенты включают, например, любой из утвержденных сертифицированных водорастворимых пищевых и коммерческих красителей и их смеси; а также нерастворимые в воде пищевые и коммерческие красители, суспендированные на гидроокиси алюминия. Подсластители включают сахарозу, лактозу, маннит и искусственные подсластители, такие как цикламат натрия и сахарин, а также любые ароматизаторы (вкусовые добавки), высушенные на распылительной сушке. Ароматизирующие (вкусовые) агенты включают натуральные ароматизаторы, экстрагированные из растений, таких как фрукты, и синтетические смеси соединений, которые обладают приятным запахом (вкусом), такие как, но не ограничиваясь только этими, мята перечная и метил салицилат. Увлажняющие агенты включают моностеарат пропиленгликоля, моноолеат сорбита, монолаурат диэтиленгликоля и лауриновый эфир полиоксиэтилена. Оболочки, обладающие эметическим действием, включают жирные кислоты, жиры, парафины, шеллак, насыщенный аммиаком шеллак и ацетатфталат целлюлозы. Пленочные покрытия включают гидроксиэтилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу натрия, полиэтиленгликоль 4000 и ацетатфталат целлюлозы.

В тех случаях, когда желательно пероральное введение, соли соединений могут быть получены в виде композиции, защищающей их от кислотного окружения в желудке. Например, препарат на основе композиции может быть заключен в энтеросолюбильную оболочку, которая сохраняет свою целостность внутри желудка и высвобождает активное соединение лишь в кишечнике. Также в препараты на основе композиции может быть введено вещество, нейтрализующее кислоту, или другой подобный ингредиент.

В тех случаях, когда форма, содержащая единичную (разовую) дозу, представляет собой капсулу, она может, кроме веществ вышеописанного типа, содержать жидкий носитель, такой как жирное растительное масло. Кроме того, формы, содержащие одну дозу, могут содержать другие различные материалы, модифицирующие физическую форму дозировок, например, покрытия из сахара и энтеросолюбильные агенты. Соединения также могут быть введены в виде компонента эликсира, суспензии, сиропа, облатки, капель, жевательной резинки и так далее. Помимо активного компонента сироп может содержать сахарозу в качестве подсластителя и определенные консерванты, красители, окрашивающие вещества и ароматизаторы (вкусовые добавки).

Активные материалы также могут быть смешаны с другими активными материалами, которые не ослабляют желаемое воздействие, или с материалами, которые дополняют желаемое воздействие, такими как вещества, нейтрализующие кислоты, Н2-блокаторы и диуретики. Например, если соединение используют для лечения астмы или гипертензии, оно может быть использовано вместе с другими бронходилятаторами и агентами, препятствующими повышению давления соответственно. Активный ингредиент представляет собой соединение или его соль, как описано в изобретении. В препарат могут быть включены более высокие концентрации активного ингредиента, вплоть до 98 вес.%.

Фармацевтически приемлемые носители, включенные в состав таблеток, представляют собой связующие, смазывающие вещества, разбавители, дезинтегрирующие агенты, окрашивающие агенты, ароматизаторы (вкусовые добавки) и увлажняющие агенты. Таблетки, покрытые энтеросолюбильной оболочкой, благодаря своему покрытию противостоят действию кислоты в желудке и растворяются или размельчаются в нейтральной или щелочной средах в кишечнике. Покрытые сахаром таблетки представляют собой спрессованные таблетки, покрытые различными слоями фармацевтически приемлемых веществ. Таблетки с пленочным покрытием представляют собой прессованные таблетки, покрытые полимером или другими подходящими оболочками. Многократно спрессованные таблетки представляют собой прессованные таблетки, полученные в результате более чем одного цикла прессования фармацевтически приемлемых упомянутых ранее веществ. Окрашивающие агенты также могут быть использованы в упомянутых ранее формах дозировок. Ароматизаторы (вкусовые добавки) и подсластители используются в прессованных таблетках, покрытых сахаром, многократно спрессованных и жевательных таблетках. Ароматизаторы (вкусовые добавки) и подсластители в основном применяются при изготовлении жевательных таблеток и леденцов.

Жидкие формы дозировок для перорального введения включают водные растворы, эмульсии, суспензии, растворы и/или суспензии на основе не шипучих гранул и шипучие препараты на основе шипучих гранул. Водные растворы включают, например, эликсиры и сиропы. Эмульсии могут быть типа масло-в-воде или вода-в-масле.

Эликсиры представляют собой прозрачные, подслащенные водно-спиртовые препараты. Фармацевтически приемлемые носители, используемые в эликсирах, включают растворители. Сиропы представляют собой концентрированные водные растворы сахара, например, сахарозы, и могут содержать консерванты. Эмульсия представляет собой двухфазную систему, в которой одна жидкость диспергирована в объеме другой жидкости в виде маленьких капель. Фармацевтически приемлемые носители, используемые в эмульсиях, представляют собой неводные жидкости, эмульгирующие агенты и консерванты. В суспензиях используются фармацевтически приемлемые суспендирующие агенты и консерванты. Фармацевтиче ски приемлемые вещества, используемые в нешипучих гранулах, которые предполагается перевести в жидкую форму дозировки для перорального введения, включают разбавители, подсластители и увлажняющие агенты. Фармацевтически приемлемое вещество, используемое в шипучих гранулах, которые предполагается перевести в жидкую форму дозировки для перорального введения, включает органические добавки и источник диоксида углерода. Окрашивающие и ароматизирующие агенты используются во всех перечисленных выше формах дозировок.

Растворители включают глицерин, сорбит, этиловый спирт и сироп. Примеры консервантов включают глицерин, метил- и пропилпарабен, бензойную кислоту, бензоат натрия и спирт. Примеры неводных жидкостей, используемых в эмульсиях, включают минеральное и хлопковое масло. Примеры эмульгирующих агентов включают желатин, вещества, полученные из акации, трагакант, бентонит и поверхностно-активные вещества, такие как сорбитмоноолеат полиоксиэтилена. Суспендирующие агенты включают карбоксиметилцеллюлозу натрия, пектин, трагакант, Веегум ^еедцт) и вещества, полученные из акации. Разбавители включают лактозу и сахарозу. Подсластители включают сахарозу, сиропы, глицерин и искусственные подсластители, такие как цикламат натрия и сахарин. Увлажняющие агенты включают моностеарат пропиленгликоля, моноолеат сорбита, монолаурат диэтиленгликоля и лауриловый эфир полиоксиэтилена. Органические добавки включают лимонную и винную кислоты. Источники диоксида углерода включают бикарбонат натрия и карбонат натрия. Окрашивающие агенты включают любые утвержденные сертифицированные водорастворимые пищевые и коммерческие красители и их смеси. Ароматизаторы (вкусовые добавки) включают натуральные ароматизаторы, экстрагированные из растений, таких как фрукты, и синтетические смеси соединений, которые обладают приятным вкусом.

Для получения твердой формы дозировок раствор или суспензию, например, в пропиленкарбонате, растительных маслах или триглицеридах предпочтительно инкапсулируют в желатиновой капсуле. Такие растворы, их получение и инкапсулирование описано в патентах США №№ 4,328,245; 4,409,239 и 4,410,545. Для жидких форм дозировок раствор, например, раствор в полиэтиленгликоле, для облегчения измерения дозировок при введении может быть разбавлен подходящим количеством фармацевтически приемлемого жидкого носителя, например водой.

Альтернативный способ получения жидких или полутвердых препаратов для перорального введения заключается в растворении или диспергировании активного компонента или соли в растительных маслах, гликолях, тригли67 церидах, пропиленгликолевых эфирах (например, в пропиленкарбонате) и других подобных носителях, и инкапсулировании этих растворов или суспензий в капсулы из твердых или мягких желатиновых оболочек. Другие препараты включают описанные в патентах США №№ Ве 28,819 и 4,358,603.

В одном варианте осуществления изобретения препараты представляют собой твердые формы дозировок, предпочтительно капсулы или таблетки. В предпочтительном варианте осуществления препараты представляют собой твердые формы дозировок, предпочтительно капсулы или таблетки, содержащие 10-100%, предпочтительно 50-95%, более предпочтительно 75-85%, наиболее предпочтительно 80-85 вес.% одного или более сульфонамидов или солей сульфонамидов, предпочтительно солей кислого фосфата натрия или натриевых солей, более предпочтительно натриевых солей, одного или более сульфонамидных соединений формулы I, порядка 0-25%, предпочтительно 8-15%, разбавителя или связующего, такого как лактоза или микрокристаллическая целлюлоза; примерно от 0 до 10%, предпочтительно порядка 0-7%, дезинтегрирующего агента, такого как полимер на основе модифицированного крахмала или целлюлозы, в частности поперечно-сшитая карбоксиметилцеллюлоза натрия, такая как кросскармеллоза натрия (кросскармеллоза натрия ΝΡ является коммерчески доступным продуктом под названием АС-О[-8ОБ, корпорация БМС, Филадельфия, Пенсильвания) или крахмалгликолят натрия; и 0-2% смазывающего вещества, такого как стеарат магния, тальк и стеарат кальция. Дезинтегрирующий агент, такой как кросскармеллоза натрия или крахмалгликолят натрия, обеспечивает быстрое разрушение целлюлозной матрицы и немедленное высвобождение активного агента вслед за растворением покрывающего полимера. Во всех вариантах осуществления точное количество активного ингредиента и вспомогательных веществ зависит от способа введения и заболевания, подвергающегося лечению, и может быть определено эмпирически.

В приведенном в качестве примера варианте осуществления изобретения препараты представляют собой капсулы, содержащие порядка 50-100%, предпочтительно порядка 7090%, более предпочтительно порядка 80-90%, наиболее предпочтительно около 83% одной или более натриевых солей одного или более сульфонамидных соединений формулы I; примерно 0-15%, предпочтительно порядка 11% разбавителя или связующего, такого как лактоза или микрокристаллическая целлюлоза; примерно 0-10%, предпочтительно около 5% дезинтегрирующего агента, такого как кросскармеллоза натрия или крахмалгликолят натрия; и примерно от 0 до 5%, предпочтительно около 1% смазывающего вещества, такого как стеарат магния. Также в данном изобретении представлены твердые формы, предназначенные для введения в виде таблеток.

В приведенном в качестве примера предпочтительном варианте осуществления изобретения препараты представляют собой капсулы, содержащие 83% одной или более натриевых солей одного или более сульфонамидных соединений; 11% микрокристаллической целлюлозы; 5% дезинтегрирующего агента, такого как кросскармеллоза натрия или крахмалгликолят натрия; и 1% стеарата магния.

Описанные выше варианты осуществления изобретения могут быть выполнены в форме таблеток, которые при желании могут быть покрыты оболочкой. Таблетки содержат приведенные в описании композиции.

Во всех вариантах осуществления изобретения препараты в виде таблеток и капсул могут быть покрыты оболочкой, как это известно специалистам, с целью изменения или пролонгирования растворения активного ингредиента. Так, например, они могут быть покрыты обычными оболочками, которые легко усваиваются в тонком кишечнике, такими как фенилсалицилат, парафины и ацетатфталат целлюлозы.

2. Растворы и эмульсии для инъекций.

В изобретении также предусмотрено парентеральное введение, обычно путем инъекций - подкожных, внутримышечных или внутривенных. Препараты для инъекций могут быть получены в виде стандартных форм, либо в виде жидких растворов, либо в виде суспензий, или в виде твердых форм, подходящих для растворения или суспендирования в жидкости перед инъекцией, или в виде эмульсий. Подходящими растворителями являются, например, вода, солевой раствор, декстроза, глицерин или этанол. Кроме того, при желании, фармацевтические композиции, предназначенные для введения, могут также содержать незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как увлажняющие или эмульгирующие агенты, рН-буферы, стабилизаторы, вещества, увеличивающие растворимость, и другие подобные агенты, такие как, например, ацетат натрия, монолаурат сорбита, олеат триэтаноламина и циклодекстрины. Также в данном изобретении рассматривается имплантация системы медленного высвобождения или пролонгированного действия, такой как система, поддерживающая постоянный уровень дозировки (см., например, патент США № 3,710,795). Процент активного соединения, содержащегося в такой композиции для парентерального введения, в значительной степени зависит от ее специфической природы, а также от активности соединения и потребностей субъекта (пациента).

Парентеральное введение препаратов включает внутривенное, подкожное и внутримышечное введение. Препараты для парентерального введения включают стерильные готовые для инъекций растворы, стерильные сухие растворимые продукты, такие как приведенные в описании лиофилизированные порошки, готовые к смешению с растворителем непосредственно перед использованием, включая таблетки для подкожного введения, стерильные суспензии, готовые для инъекций, стерильные сухие нерастворимые продукты, готовые к смешению с носителем непосредственно перед использованием и стерильные эмульсии. Растворы могут быть либо водными, либо неводными.

В случае внутривенного введения подходящие носители включают физиологический раствор или фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБР) и растворы, содержащие загустители и солюбилизирующие агенты, такие как глюкоза, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль и их смеси.

Фармацевтически приемлемые носители, используемые в препаратах для парентерального введения, включают водные носители, неводные носители, антимикробные агенты, изотонические агенты, буферы, антиоксиданты, локальные анестетики, суспендирующие и диспергирующие агенты, эмульгирующие агенты, секвестирующие или хелатирующие агенты и другие фармацевтически приемлемые вещества.

Примеры водных носителей включают раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, изотонический раствор декстрозы для инъекций, стерильную воду для инъекций, раствор Рингера для инъекций с декстрозой и лактозой. Неводные парентеральные носители включают стабилизированные масла растительного происхождения, хлопковое масло, кукурузное масло, кунжутное масло и арахисовое масло. Антимикробные агенты, включающие фенолы или крезолы, ртутные соединения, бензиловый спирт, хлорбутанол, метиловые и пропиловые эфиры п-гидроксибензойной кислоты, тримерозал, бензалконий хлорид и бензэтоний хлорид, в бактериостатических или фунгистатических концентрациях должны быть добавлены в препараты для парентерального введения, упакованные в контейнеры, содержащие множество доз. Изотонические агенты включают хлорид натрия и декстрозу. Буферы включают фосфатный и цитратный буферы. Антиоксиданты включают бисульфат натрия. Локальные анестетики включают гидрохлорид прокаина. Суспендирующие и диспергирующие агенты включают карбоксиметилцеллюлозу натрия, гидроксипропилметилцеллюлозу и поливинилпирролидон. Эмульгирующие агенты включают Полисорб 80 (Твин 80). Секвестирующие агенты или агенты, образующие комплексы с атомами металлов (хелатирующие агенты), включают ЭДТА. Фармацевтические носители также включают этиловый спирт, полиэтиленгликоль и пропиленгликоль для носителей, смешивающихся с водой, и гидроокись натрия, соляную кислоту, лимонную кислоту или молочную кислоту для доведения рН.

Концентрация фармацевтически активного соединения регулируется таким образом, чтобы инъекция обеспечивала эффективное количество для получения желаемого фармакологического эффекта. Как известно из уровня техники, точная дозировка зависит от возраста, веса и состояния пациента или животного.

Препараты для парентерального введения, содержащие одну дозу, упаковываются в ампулу, пузырек или шприц с иглой. Все препараты для парентерального введения должны быть стерильными, как известно из уровня техники и используется на практике.

В качестве иллюстрации можно привести пример внутривенного или внутриартериального введения стерилыюго водного раствора, содержащего активное соединение, которые являются эффективными способами введения. Другой вариант осуществления изобретения состоит в том, что для получения желаемого фармакологического эффекта необходимо введение путем инъекции стерильного водного или масляного раствора или суспензии, содержащей активный компонент.

Препараты для инъекций разработаны для локального и систематического введения. Как правило, терапевтически эффективная доза, входящая в состав препарата, содержит концентрацию активного компонента, по крайней мере, примерно от 0,1 до примерно 90 вес.% или больше, предпочтительно более 1% активного компонента по весу по отношению к весу ткани(ней), подвергающихся лечению. Активный ингредиент может быть введен сразу полностью или может быть разделен на ряд меньших доз, вводимых через некоторые промежутки времени. Понятно, что точная доза и длительность лечения зависят от того, какие именно ткани подвергаются лечению, и может быть определена эмпирически, используя известные протоколы тестирования или экстраполяцией результатов тестирования ίη νίνο или ίη νίίΓο. Необходимо подчеркнуть, что величины концентраций и дозировок могут также варьироваться в зависимости от возраста конкретного пациента. Необходимо также понимать, что в каждом конкретном случае специфическая схема приема дозировок должна быть скорректирована через некоторое время, согласно индивидуальной необходимости и профессиональному мнению врача, осуществляющего введение или наблюдающего за введением препаратов, и что приведенные в изобретении диапазоны концентраций приведены лишь в качестве примеров, и не подразумевают ограничения рамок изобретения или практического применения представленных препаратов.

Соединение может быть суспендировано в микроионизованном виде или в другой подходящей форме, или может быть использовано его производное с целью получения более растворимого активного продукта или пролекарства.

Форма конечной смеси зависит от ряда факторов, включая предполагаемый способ введения и растворимость соединения в выбранном носителе или растворителе. Эффективная концентрация является достаточной для ослабления симптомов состояния и может быть определена эмпирически.

Во многих случаях растворы натриевых солей, включая натриевую соль и кислый фосфат натрия, обладают большей стабильностью по сравнению с нейтральным соединением. В водной среде эти соли обладают более высокой по сравнению с нейтральным соединением растворимостью. Было установлено, что в некоторых водных препаратах натриевая соль обладает такой же стабильностью, как кислый фосфат натрия.

3. Лиофилизированные порошки.

Особый интерес в рамках данного изобретения представляют лиофилизированные порошки, на основе которых могут быть получены растворы, эмульсии и другие смеси, предназначенные для введения. На их основе также могут быть получены твердые препараты или гели.

В отдельных вариантах осуществления изобретения представлены препараты на основе солей кислого фосфата натрия или солей натрия, предпочтительно натриевых солей, сульфонамидных соединений, обладающих повышенной стабильностью по сравнению с препаратами на основе нейтральных сульфонамидов. В частности, представлен препарат на основе натриевых солей сульфонамидов в виде стерильного, лиофилизированного порошка. Было обнаружено, что эти порошки обладают повышенной стабильностью по сравнению с препаратами на основе нейтральных сульфонамидов.

Стерильный лиофилизированный порошок получают растворением натриевой соли в растворе натрий фосфатного буфера, содержащем декстрозу или другой подходящий наполнитель. Последующее стерильное фильтрование раствора и лиофильная сушка в стандартных условиях, известных специалистам, обеспечивают получение желаемого препарата. Лиофилизированный порошок получают растворением порядка 120%, предпочтительно примерно от 5 до 15% декстрозы, сорбита, фруктозы, кукурузного сиропа, ксилита, глицерина, глюкозы, сахарозы или другого подходящего агента в подходящем буфере, таком как цитратный, натрий или калий фосфатный или другом аналогичном буфере, известном специалистам, обычно при рН, близком к нейтральному. Затем выбранную соль, предпочтительно натриевую соль сульфонамида (около 1 г соли на 10-100 г буферного раствора, обычно порядка 1г/30г) добавляют к полученной смеси, предпочтительно при температуре выше комнатной, более предпочтительно при температуре порядка 30-35°С и перемешивают до растворения. Образовавшуюся смесь разбавляют, добавляя буфер (таким образом, чтобы конечная концентрация соли уменьшилась примерно на 10-50%, обычно примерно на 15-25%). Полученную смесь подвергают стерильной фильтрации или обрабатывают для удаления микрочастиц и для обеспечения стерильности и равномерно разливают по пузырькам для лиофильной сушки. Каждый пузырек содержит одну дозу (100-500 мг, предпочтительно 250 мг) или несколько доз соли сульфонамида. Лиофилизированный порошок может храниться в соответствующих условиях, например, при температуре от 4°С до комнатной. Детали типовой процедуры приведены далее в примерах.

Перевод лиофилизированного порошка в воду для инъекций приводит к получению препарата на основе натриевых солей сульфонамидов, предназначенного для парентерального введения. Для этого на 1 мл стерильной воды или другого подходящего носителя добавляют порядка 1-50 мг, предпочтительно 5-35, более предпочтительно порядка 9-30 мг порошка. Точное количество зависит от заболеваний, подвергающихся лечению, и выбранного соединения. Такое количество может быть определено эмпирически.

В одном варианте осуществления изобретения препараты включают лиофилизированные порошки, содержащие одну или более солей кислого фосфата натрия или соль натрия, предпочтительно натриевую соль, одного или более сульфонамидных соединений формулы I и также содержат один или более из следующих компонентов:

буфер, такой как натрий или калий фосфатный или цитратный;

солюбилизирующий агент, такой как ΤΑΒΡΑδΟΕ, ДМСО, бис(триметилсилил)ацетамид, этанол, пропиленгликоль (ПГ) или поливинилпирролидин (ПВП); и сахар, такой как сорбит или декстроза.

В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения препараты содержат одну или более соль кислого фосфата натрия или натрия, предпочтительно натриевую соль, одного или более сульфонамидных соединений формулы I; буфер, такой как натрий или калий фосфатный или цитратный; и сахар, такой как сорбит или декстроза.

В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения препараты содержат одну или более натриевые соли одного или более сульфонамидных соединений формулы I, натрийфосфатный буфер и декстрозу.

4. Местное введение.

Смеси для местного введения получают так же, как описано для локального и систематического введения. Полученная смесь может представлять собой раствор, суспензию, эмульсию и другие формы, а препараты на их основе могут быть кремами, гелями, мазями, эмульсиями, растворами, эликсирами, лосьонами, суспензиями, настойками, пастами, мылами, аэро73 золями, препаратами для спринцевания, спреями, свечами, повязками, кожными пластырями или любыми другими препаратами, подходящими для местного введения.

Препараты на основе натриевых солей и других производных соединений могут представлять собой аэрозоли, предназначенные для местного применения, такого как ингаляция (см., например, патенты США №№ 4,044,126, 4,414,209 и 4,364,923, в которых описаны аэрозоли для введения стероида, используемого при лечении воспалительных заболеваний, в частности, астмы). Эти препараты, предназначенные для введения в дыхательные пути, могут быть представлены в форме аэрозоля или раствора для распылителя или в виде очень мелкого порошка для вдувания, в чистом виде или в комбинации с инертным носителем, таким как лактоза. В этом случае частицы препарата обычно имеют диаметр менее 50 мкм, предпочтительно менее 10 мкм.

Натриевые соли соединений могут входить в состав препаратов для локального или местного применения, такого как местное применение на кожу и мембраны слизистых, таких как глаз, в форме гелей, кремов и лосьонов, и для введения в глаз, или для интрацистернального или интраспинального применения. Представлено местное введение для трансдермальной доставки, а также для введения в глаза или в слизистую оболочку или для ингаляционной терапии. Растворы одного активного соединения или в комбинации с другими фармацевтически приемлемыми наполнителями также могут быть введены в нос.

Эти растворы, в частности растворы, предназначенные для офтальмологического применения, могут вместе с подходящими солями входить в состав препаратов, представляющих собой 0,01-10% изотонические растворы, рН порядка 5-7.

5. Готовые изделия.

Производные, в частности соли, кислоты, эфиры и пролекарства, предпочтительно натриевые соли соединений, могут быть представлены в виде готовых изделий, содержащих упаковочный материал, представленную в изобретении соль, кислоту, эфир или пролекарство, предпочтительно натриевую соль, соединения, эффективную для подавления действия эндотелина, ослабления симптомов заболевания, связанного с эндотелином, или для ингибирования связывания эндотелинового пептида с ЕТ рецептором при 1С₅₀ менее примерно 10 мкМ, помещенные в упаковочный материал, и этикетку, которая указывает на то, что соединение или его соль используются в качестве антагонистов воздействия эндотелина, для лечения заболеваний, связанных с эндотелином, или для ингибирования связывания эндотелинового пептида с ЕТ рецептором.

Представленные в изобретении готовые изделия содержат упаковочные материалы. Упаковочные материалы, использующиеся для упаковки фармацевтических препаратов, хорошо известны специалистам. См., например, патенты США №№ 5,323,907, 5,052,558 и

5,033,352. Примеры упаковочных материалов, используемых в фармацевтике, включают, но не ограничены только ими, блистерные упаковки, бутыли, тюбики, ингаляторы, зонды, пакеты, пузырьки, контейнеры, шприцы, флаконы и любой упаковочный материал, подходящий для выбранного препарата и предполагаемого способа введения и лечения. Изобретение предусматривает множество препаратов (рецептур) представленных соединений и композиций, поскольку существует множество способов лечения любого нарушения, в которое ΡΑΙ, в частности ΡΑΙ-1, вовлечен как медиатор или участник возникновения симптомов или как их причина.

6. Препараты для других способов введения.

В данном изобретении представлены также другие способы введения, зависящие от состояния, которое подвергается лечению, такие как местное применение, трансдермальные пластыри, ректальное введение.

Например, фармацевтические формы дозировок, предназначенные для ректального введения, представляют собой ректальные свечи, капсулы и таблетки для систематического воздействия. Ректальные свечи представляют собой твердые тела, предназначенные для введения в прямую кишку, которые плавятся или размягчаются при температуре тела, высвобождая один или более фармакологически или терапевтически активных ингредиентов. Фармацевтически приемлемые вещества, используемые в ректальных свечах, представлюят собой основу или носители, а также агенты, повышающие температуру плавления. Примеры веществ, используемых в качестве основы, включают масло какао (теобромное масло), глицерин-желатин, карбопарафин (полиоксиэтиленгликоль) и подходящие смеси моно-, ди- и триглицеридов жирных кислот. Могут быть использованы комбинации различных основ. Агенты, повышающие точку плавления свечей, включают спермацет и воск. Ректальные свечи могут быть получены как прессованием, так и отливкой. Типичный вес ректальной свечи составляет примерно от 2 до 3 г.

Таблетки и капсулы для ректального введения изготавливаются с использованием тех же фармацевтически приемлемых веществ и теми же способами, как и препараты для перорального введения.

Представленные ниже примеры приведены исключительно для иллюстрации, и не ограничивают рамки изобретения.

Пример 1. Получение соединения 7: И-(2ацетил-4,6-диметилфенил)-3-{[(3,4-диметил-575 изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамида.

Стадия 1. Получение соединения 1.

В круглодонную колбу объемом 250 мл, снабженную магнитной мешалкой, помещают 20,0 г 5-амино-3,4-диметилизоксазола, 50 мл пиридина и 2,0 г (каталитическое количество) диметиламинопиридина. Добавляют порциями 21,5 г 2-карбоксиметил-3-тиофенсульфонил хлорида, охлаждая смесь на ледяной бане. Колбу герметично закрывают, убирают ледяную баню и перемешивают реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. Большую часть пиридина удаляют выпариванием на роторном испарителе, оставшуюся смесь разделяют между этилацетатом и 2Ν ΗΟ1. Слои отделяют друг от друга, после чего водный слой дважды экстрагируют этилацетатом. Объединенные экстракты дважды промывают разбавленной ЫС1, раствором соли (дважды), после чего высушивают над сульфатом магния. После фильтрации и концентрирования упариванием на роторном испарителе получают 23,2 г соединения 1 в виде масла.

Стадия 2 А. Получение соединения 2.

В круглодонную колбу объемом 1 л, снабженную магнитной мешалкой и капельной воронкой, помещают 23,1 г соединения 1, 500 мл метиленхлорида и 28,4 г диизопропиламина. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане и по каплям добавляют 6,0 мл метилового эфира бромистого метила. Убирают ледяную баню и перемешивают реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. Затем добавляют 200 мл воды и перемешивают реакционную смесь в течение 30 мин. Слои отделяют друг от друга, водный слой дважды экстрагируют хлористым метиленом. Объединенный органический слой промывают 0,5Ν НС1, водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, раствором соли и, наконец, высушивают над сульфатом магния. Фильтрование и удаление растворителя на роторном испарителе приводят к получению масла, которое подвергают дальнейшей очистке хроматографией на сикагеле, используя 25-30% этилацетат/гексан в качестве элюирующего раствора. Получают 21,5 г соединения 2 в виде масла.

Стадия 2В. Получение соединения 3.

В круглодонную колбу объемом 500 мл, снабженную магнитной мешалкой, помещают 21,4 г. соединения 2, 120 мл тетрагидрофурана и 120 мл 1Ν гидроксида натрия. Реакционную смесь интенсивно перемешивают до завершения реакции (приблизительно 3-4 ч). Большую часть тетрагидрофурана удаляют выпариванием на роторном испарителе, остаток смешивают с 50 мл воды. Смесь подкисляют, добавляя 130 мл 1Ν Η^, после чего дважды экстрагируют 200 мл этилацетата. Объединенные экстракты промывают водой (50 мл), раствором соли (50 мл) и высушивают над сульфатом магния. После фильтрования и концентрирования упариванием на роторном испарителе получают 20,1 г соединения 3 в виде масла желтого цвета, которое застывает при стоянии.

Стадия 2С. Получение соединения 4.

В круглодонную колбу объемом 1 л, снабженную магнитной мешалкой и капельной воронкой, помещают 19,7 г. соединения 3, 200 мл хлористого метилена и 5 капель пиридина. По каплям добавляют раствор 128 мл хлористого оксалила в 100 мл хлористого метилена. Капельную воронку заменяют на обратный холодильник и нагревают реакционную смесь до состояния слабого кипения в течение 3 ч, после чего концентрируют упариванием на роторном испарителе. Получают 20,9 г соединения 4 в виде твердого вещества коричневого цвета. Соединение используют на стадии 3 без дополнительной очистки.

Стадия 3. Получение соединения 6.

В круглодонную колбу объемом 1 л, снабженную магнитной мешалкой и капельной воронкой, помещают 18,5 г 2-ацетил-4,6диметиланилина (5) и 150 мл хлористого метилена. К смеси по каплям добавляют раствор 20,7 г соединения 4, растворенного в 350 мл хлористого метилена. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, после чего концентрируют упариванием на роторном испарителе. К остатку добавляют 200 мл эфира, смесь фильтруют. Осадок на фильтре трижды промывают 100 мл эфира. Объединенный фильтрат трижды промывают 100 мл 1Ν НС1, а затем водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и раствором соли (по 100 мл каждого). Раствор высушивают сульфатом магния, фильтруют и концентрируют упариванием на роторном испарителе. Получают полукристаллический продукт, который растирают в порошок в 200 мл эфира, в результате чего получают 23,7 г соединения 6 в виде твердого вещества белого цвета.

Стадия 4А. Получение соединения 7.

В круглодонную колбу объемом 500 мл, снабженную магнитной мешалкой и обратным холодильником, помещают 23,7 г соединения 6, 180 мл метанола и 90 мл концентрированной НС1. Смесь нагревают до состояния слабого кипения в течение 4 ч. Нагревание прекращают и реакционную смесь при перемешивании охлаждают на бане со льдом. Приблизительно через 30 мин реакционную смесь фильтруют, осадок на фильтре промывают смесью воды и метанола и получают 18,3 г соединения 7. Соеди нение перекристаллизовывают из смеси этилацетат/гексан с получением 16,8 г твердого вещества белого цвета. Т.пл. 158-160°С.

Стадия 4В. Получение натриевой соли соединения 7.

К 16,8 г соединения 7, растворенного в смеси 800 мл этилацетата и 200 мл тетрагидрофурана добавляют 100 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Слои отделяют друг от друга и органический слой дополнительно дважды промывают 100 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Объединенные бикарбонатные промывки снова экстрагируют этилацетатом, после чего объединенный органический раствор сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют упариванием на роторном испарителе до получения пены. Полученный продукт растворяют в 300 мл воды, полученный раствор фильтруют и лиофильно сушат. Получают 15,5 г натриевой соли соединения 7 в виде твердого белого вещества.

Пример 2. Получение соединения 9: Ν-(2циано-3,4,6-триметилфенил)-3-{[(3,4-диметил-5изоксазолил)амино] сульфонил }-2-тиофенкар-

№(2-Циано-3,4,6-триметилфенил)-3-{[(3,4диметил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2тиофенкарбоксамид получали по методике, описанной в примере 1, за исключением того, что на стадии 3 вместо 2-ацетил-4,6-диметиланилина используют 2-циано-3,4,6-триметиланилин (8).

Пример 3. Получение соединения 16: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-№(3,4,6-триметил-2-пропаноилфенил)-2тиофенкарбоксамида.

Стадия 1. Получение соединения 10: 3{[(4хлор-3-метил-5-изоксазолнл)амино] сульфонил }2-тиофенкарбоновой кислоты.

В круглодонную колбу объемом 500 мл, содержащую 46,5 г метилового эфира 3-{[(4хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино] сульфонил}2-тиофенкарбоновой кислоты, добавляют 250 мл 1Ν гидроксида натрия. Смесь перемешивают до тех пор, пока в ней не остается исходного соединения. Реакционную смесь подкисляют 2Ν соляной кислотой и экстрагируют этилацетатом (3 х 100 мл). Объединенный экстракт высушивают над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют упариванием на роторном испарителе с получе нием 42,5 г соединения 10 в виде твердого вещества.

Стадия 2А. Получение соединения 11: метоксиметилового эфира 3{[(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино] сульфонил}-Ν-метоксиметил-2-тиофенкарбоновой кислоты.

В круглодонную колбу объемом 2 л, снабженную магнитной мешалкой и капельной воронкой, помещают 42,5 г соединения 10, 500 мл хлористого метилена и 40,1 г диизопропилэтиламина. Реакционную смесь охлаждают на бане со льдом и по каплям добавляют 21,5 мл метилового эфира бромистого метила. Убирают ледяную баню и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Добавляют 200 мл воды и перемешивают реакционную смесь в течение 30 мин. Слои отделяют друг от друга, водный слой промывают 100 мл хлористого метилена. Объединенный органический слой последовательно промывают 0,5Ν НС1, водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и раствором соли (по 50 мл каждого), после чего высушивают над сульфатом магния. Смесь фильтруют, фильтрат концентрируют упариванием на роторном испарителе. Получают масло, которое дополнительно очищают хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюирующего раствора 2530% этилацетат/гексан. Получают 38,1 г соединения 11 в виде масла.

Стадия 2В. Получение соединения 12.

В круглодонную колбу объемом 1 л, снабженную магнитной мешалкой, помещают 38 г соединения 11, 250 мл тетрагидрофурана и 250 мл 1Ν гидроксида натрия. Реакционную смесь интенсивно перемешивают до завершения реакции (приблизительно 4 ч). Большую часть тетрагидрофурана удаляют выпариванием на роторном испарителе, остаток смешивают с 50 мл воды. Полученный раствор подкисляют, добавляя 260 мл 1Ν НС1. Смесь дважды экстрагируют 200 мл этилацетата. Объединенные экстракты промывают водой и раствором соли (по 50 мл каждого), после чего высушивают над сульфатом магния. После фильтрования и концентрирования упариванием на роторном испарителе получают 30,8 г соединения 12 в виде желтого масла, застывающего при стоянии.

Стадия 2С. Получение соединения 13.

В круглодонную колбу объемом 1 л, снабженную магнитной мешалкой и капельной воронкой, помещают 30 г соединения 12, 200 мл хлористого метилена и 5 капель пиридина. По каплям добавляют раствор 29,2 г хлористого тионила в 200 мл хлористого метилена. Капельную воронку заменяют на обратный холодильник и реакционную смесь нагревают до состояния слабого кипения в течение 4 ч. После этого реакционную смесь концентрируют упариванием на роторном испарителе с получением 31,4 г соединения 13 в виде твердого вещества коричневого цвета, которое напрямую, без дополнительной очистки, используют на стадии 3.

Стадия 3. Получение соединения 15.

15

В круглодонную колбу объемом 1 л, снабженную магнитной мешалкой и капельной воронкой, помещают 19,8 г соединения (14) и 150 мл хлористого метилена. К смеси по каплям добавляют раствор 20,0 г соединения 13, растворенного в 350 мл хлористого метилена. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, после чего концентрируют упариванием на роторном испарителе. К остатку добавляют 200 мл эфира, смесь фильтруют. Осадок на фильтре промывают 100 мл эфира, а затем горячим этилацетатом (2 х 200 мл). Объединенную промывку промывают (3 х 100 мл) 1Ν НС1, а затем последовательно водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и раствором соли (по 100 мл каждого). Затем раствор высушивают сульфатом магния, фильтруют, концентрируют упариванием на роторном испарителе и получают полукристаллический материал. Полученный продукт растирают в порошок в 100 мл эфира и получают 20,1 г соединения 15 в виде твердого белого вещества.

Стадия 4. Получение соединения 16.

Соединение 15 превращают в соединение 16, твердое вещество, т.пл. 166-170°С, по методике, приведенной в примере 1, стадия 4 А.

Пример 4. Получение соединения 18: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил {-Ν-|2-( 1-гидроксиэтил)-4,6-диметилфенил]2-тиофенкарбоксамида.

К водному раствору 100 мг натриевой соли соединения 17 добавляют 100 мг боргидрида натрия. Через 3 ч добавляют дополнительно еще 100 мг боргидрида натрия и перемешивают раствор при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь смешивают с избытком насыщенного раствора хлорида аммония, экстрагируют этилацетатом (3 х 50 мл). Экстракты промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и упаривают. Получают соединение 18 (Να-соль) в виде твердого вещества. Т.пл. 147-154°С.

Пример 5. Получение соединения 20: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-N-{2-[(диметиламино)карбонил]-4,6-диметилфенил)-2-тиофенкарбоксамида.

сн₃

Н₃С СН₃ Н₃с сн₃

Соединение 20 получают по методике, приведенной в примере 3, за исключением того, что на стадии 3 вместо соединения 12 используют 2-[(диметиламино)карбонил]-4,6-диметиланилин (19). Соединение 20 получают в виде твердого белого вещества.

Пример 6. Получение соединения 22: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-N-{2,4-диметил-6-[(метилокси)этанимидоил]фенил}-2-тиофенкарбоксамида.

Соединение 22 в виде твердого белого вещества, т.пл. 140-145°С, получают реакцией соединения 17 с метоксиамином (21) в этаноле.

Пример 7. Получение соединения 24: 3{[(3-{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино] сульфонил}-2-тиофенил)карбонил]амино}-2,4,6триметилфенил-N,N-диметилсульфамата.

К раствору 700 мг 3-{[(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-N-{3-гидрокси2,4,6-триметилфенил}-2-тиофенкарбоксамида (23) в 15 мл диметилформамида, охлажденному на ледяной бане, добавляют 247 мг третбутоксида калия. Через короткий промежуток времени добавляют 317 мг хлористого диметиламиносульфонила. После завершения реакции реакционную смесь разбавляют водой и подкисляют 1Ν соляной кислотой. Смесь экстрагируют этилацетатом (3 х 30 мл), объединенные экстракты сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Получают соединение 24 в виде твердого белого вещества. Т.пл. 169-174°С.

Пример 8. Получение соединения 26: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-N-{3-[(циклопропилметил)окси]-2,4,6триметилфенил }-2-тиофенкарбоксамида.

К раствору 700 мг 3-{[(4-хлор-3-метил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-N-{3-гидрокси2,4,6-триметилфенил}-2-тиофенкарбоксамида (23) в 15 мл диметилформамида, охлажденному на ледяной бане, добавляют 247 мг третбутоксида калия. Через короткий промежуток времени добавляют 135 мг циклопропилметилбромида (25). После завершения реакции реакционную смесь разбавляют водой и подкисляют 1Ν соляной кислотой. Смесь экстрагируют этилацетатом (3 х 30 мл), объединенные экстракты сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Получают соединение 26 в виде твердого белого вещества. Т.пл. 155-158°С.

Пример 9. Получение соединения 28: 3{[(4-хлор-3 -метил-5 -изоксазолил)амино] сульфонил}-Ы-(2,4,6-триметил-5-пиримидинил)-2-

Соединение 28 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 5-амино-2,4,6-триметилпиримидин (27). Соединение 28 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 170-175°С.

Пример 10. Получение соединения 30: Ν(2-ацетил-3,4,6-триметилфенил)-3-{[(4-хлор-3метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2-

Соединение 30 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2-ацетил-3,4,6-триметиланилин (29). Соединение 30 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 223-225°С.

Пример 11. Получение соединения 32: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфоннл}-Ы-(2-циано-3,4,6-триметилфенил)-2тиофенкарбоксамида.

Соединение 32 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2-циано-3,4,6-триметиланилин (31). Соединение 32 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 218-220°С.

Пример 12. Получение соединения 34: Ν(2-хлор-4,6-диметилфенил)-3-{[(4-хлор-3-метил5-изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофен-

Соединение 34 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2-хлор-4,6-диметиланилин (33). Соединение 34 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 174-176°С.

Пример 13. Получение соединения 36: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-Ы-(4,6-диацетил-3-гидрокси-2-пропил-

описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 4,6-диацетил-3-гидрокси-2-пропиланилин (35). Соединение 36 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 163-167°С.

Пример 14. Получение соединения 38: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-Ы-(2,4-диметил-6-[2-метилсульфонил) ацетил]фенил}-2-тиофенкарбоксамида.

Промежуточное соединение 53 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2,4-диметил-6-(2-хлорацетил) анилин (37).

Раствор 400 мг соединения 53 и 1,2 г метансульфоната натрия в 10 мл диметилформамида перемешивают при комнатной температуре. После завершения реакции реакционную смесь разбавляют водой, подкисляют 2Ы соляной кислотой и экстрагируют этилацетатом (3 х 30 мл). Объединенный экстракт сушат над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют упариванием на роторном испарителе. Соединение 38 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 172-175°С.

Пример 15. Получение соединения 40: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-Ы-(2,4-диметил-6-{[метил(2,2-диметилпропил)амино]карбонил}фенил)-2-тиофенкар-

Соединение 40 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2-{[метил-(2,2-диметилпропил)амино] карбонил}-4,6-диметиланилин (39). Соединение 40 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 174-176°С.

Пример 16. Получение соединения 42: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-Ы-[2,4-диметил-6-(метилсульфонил)фенил]-2-тиофенкарбоксамида.

Соединение 42 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2,4-диметил-6-(метилсульфонил)анилин (41). Соединение 42 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 208-210°С.

Пример 17. Получение соединения 44: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил }-Ы-[2,4-диметил-6-( 1,3 -оксазол-2-ил) фе нил]-2-тиофенкарбоксамида.

Соединение 44 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2,4-диметил-6-(1,3-оксазол-2-ил)анилин (43). Соединение 44 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 176-178°С.

Пример 18. Получение соединения 46: 3{[(4-хлор-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-Ы[2-(2-пропилсульфонил)-4,6-диметилфенил]-2тиофенкарбоксамида.

Соединение 46 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2-(2-пропилсульфонил)-4,6-диметиланилин (45). Соединение 46 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 190-192°С.

Пример 19. Получение соединения 48: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил)-Ы-[2,4-диметил-6-(пропилсульфонил)фенил]-2-тиофенкарбоксамида.

описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2,4-диметил-6-(пропилсульфонил)анилин (47). Соединение 48 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 152-155°С.

Пример 20. Получение соединения 50: 3{[(4-хлор-3-метил-5-изоксазолил)амино]сульфонил}-И-(2-этил-4,6-диметилфенил)-2-тиофен-

Соединение 50 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2-этил-4,6-диметиланилин (49). Соединение 50 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 152-154°С.

Пример 21. Получение соединения 52: 3{{(4-хлор-3 -метил-5 -изоксазолил)амино] сульфонил}-И-[2,6-диметил-4-(1,3-оксазол-2-ил) фенил]-2-тиофенкарбоксамида.

Соединение 52 получают по методике, описанной в примере 3, за исключением того, что вместо соединения 12 на стадии 3 используют 2,6-диметил-4-(1,3-оксазол-2-ил)анилин (51). Соединение 52 получают в виде твердого белого вещества. Т.пл. 205-207°С.

Пример 22. Препараты на основе натриевых солей сульфонамидов.

А. Препараты на основе натриевых солей сульфонамидов, предназначенные для внутривенного введения.

Для приготовления фосфатного буфера в мерный цилиндр объемом 4 л наливают 3200 мл стерильной воды для инъекций, И8Р (в соответствии со стандартами, предъявляемыми Фармакопеей США). В стерильную воду добавляют 21,44 г гептагидрата гидрофосфата натрия (№ьНО₄ 7Н₂О), И8Р и смесь перемешивают в течение 5 мин или до тех пор, пока все не растворится. Добавляют 11,04 г дигидрофосфата натрия (NаΗ₂РΟ₄), И8Р и перемешивают смесь до тех пор, пока все не растворится. Раствор доводят до 4,0 л и перемешивают. 3000 г натрий фосфатного буфера помещают в химический стакан объемом 8 л. Добавляют 200,0 г декстрозы, И8Р и нагревают смесь до 30-35°С на водяной бане и перемешивают до полного растворения. При интенсивном перемешивании добавляют натриевую соль сульфонамида (100,0 г). Эту смесь перемешивают минимум в течение 10 мин или до полного растворения. После растворения натриевой соли сульфонамида раствор снимают с водяной бани. Раствор разбавляют до 4000 г натрий фосфатным буфером и перемешивают в течение 5 мин. Затем раствор подвергают стерильному фильтрованию через стерильный фильтр Эигароге М1Шрак 200 с размером пор 0,22 мкм. Фильтрованный раствор разливают в стерильные пузырьки и лиофильно высушивают в стандартных условиях. Пузырьки закрывают. Лиофилизированный продукт затем вновь растворяют в 9,4 мл или в 19,4 мл воды для инъекций для получения конечной концентрации соединения 25 мг/мл или 12,5 мг/мл соответственно.

Б. Препараты на основе натриевых солей сульфонамидов, предназначенные для перорального введения.

Такие препараты можно получить способами, известными специалистам (см., например, Ап§е1 [ηίΓοάιιοΙίοη ίο РЫаттасеиЛса1 Эо^аде Рогтк (4-е издание) 1985 (Беа & РеЫдег)). Как правило, таблетки можно получить влажным или сухим измельчением ингредиентов с последующим прессованием. Альтернативно, объединенным ингредиентам можно придать форму таблеток прямым прессованием. При получении капсул смесью натриевой соли сульфонамида, наполнителя (разбавителя), связующего, дезинтегрирующего агента и смазывающего агента заполняют непосредственно оболочку капсулы. Оптимальное количество активных и инертных ингредиентов в этих препаратах можно определить эмпирически, способами, известными специалистам. Как правило, количество активного ингредиента (т.е. натриевой соли сульфонамида) должно быть достаточным для получения терапевтически эффективной дозы активного ингредиента. Терапевтически эффективную дозу можно определить эмпирически, тестируя соединения на известных системах ίη νίίτο и ίη νίνο (см., например, патент США № 5,114,918 на имя НЫкатеа и др.; Европейский патент А1

0436189, принадлежащий ВΑNΥυ РНАКМАСЕЕТСАЬ СО., ЬТО. (7 октября 1991 г.); Вогде§ и др. (1989) Еиг. 1. РЪагш. 165: 223-230; Ейер и др. (1991) ВюсЪет. ВюрЪуз. Ке§. Сошшип. 177: 171-176) и экстраполируя полученные данные на дозировки, предназначенные для людей.

Пример 23. Исследования для идентификации соединений, обладающих активностью антагонистов и/или агонистов эндотелина.

Соединения, являющиеся потенциальными антагонистами эндотелина, идентифицированы путем тестирования на способность конкурировать с ¹²⁵1-меченным эндотелином-1 за связывание с человеческими ЕТ_а или ЕТ_в рецепторами, находящимися на изолированных клеточных мембранах. Эффективность тестируемого соединение в качестве антагониста или агониста биологического ответа ткани на эндотелин также может быть исследована путем измерения воздействия на вызванную эндотелином контракцию изолированных круглых сегментов грудной аорты крыс. Способность соединений действовать в качестве антагонистов или агонистов по отношению к ЕТ_в рецепторам может быть изучена путем тестирования способности соединений ингибировать вызванное эндотелином-1 высвобождение простациклина культивированными эндотелиальными клетками бычьей аорты.

А. Ингибирование связывания эндотелина - Тест на связывание #1: Ингибирование связывания с ЕТ_а рецепторами.

Клетки линии ТЕ 671 (регистрационный АТСС №. НТВ 139) экспрессируют ЕТ_а рецепторы. Клетки выращивают в Т-175 колбах до монослоя. Клетки из ряда колб собирают с помощью скребка, объединяют и центрифугируют в течение 10 мин при 190 д. Клетки ресуспендируют в фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБР), содержащем 10 мМ ЭДТА, используя гомогенизатор ТепЬгоеск. Суспензию центрифугируют при 4°С при 57800 д в течение 15 мин, осадок ресуспендируют в 5 мл буфера А (5 мМ НЕРЕ8, рН 7,4, содержащий апротинин (100 К1и/мл)), а затем однократно замораживают и оттаивают. Добавляют 5 мл буфера В (5 мМ НЕРЕ8, рН 7,4, содержащий 10 мМ МпС1₂ и 0,001% дезоксирибонуклеазы 1 типа), суспензию перемешивают, переворачивая колбу, и инкубируют при 37°С в течение 30 мин. Смесь центрифугируют при 57800 д, как описано выше, осадок дважды промывают буфером А, после чего ресуспендируют в буфере С (30 мМ НЕРЕ8, рН 7,4, содержащий апротинин (100 К1и/мл)) так, чтобы конечная концентрация белка составляла 2 мг/мл, и хранят препарат при -70°С до использования.

Суспензию мембран разбавляют буфером, в котором проводят реакцию связывания (30 мМ НЕРЕ8, рН 7,4, содержащий 150 мМ №С1, 5 мМ МдС1₂, 0,5% бацитрацин) до концентрации 8 мкг/50 мкл. Добавляют ¹²⁵1-эндотелин-1 (3000 имп./мин, 50 мл) к 50 мкл либо: (А) эндотелина1 (для определения неспецифического связывания) до конечной концентрации 80 нМ); либо (В) буфера, в котором проводят реакцию связывания (для определения общего связывания); или (С) тестируемого соединение (конечная концентрация от 1 нМ до 100 мкМ). Суспензию мембран (50 мкл), содержащую до 8 мкг мембранного белка, добавляют к каждому из (А), (В) или (С). Смеси встряхивают и инкубируют при 4°С в течение 16-18 ч, а затем центрифугируют при 4°С в течение 25 мин при 2500 д. Альтернативно, инкубацию проводят при 24°С. В том случае, если инкубацию проводят при 24°С, 1С₅₀ концентрации оказываются в 2-10 раз выше, чем в том случае, если инкубацию проводят при 4°С. Это обстоятельство необходимо иметь в виду при сравнении 1С₅₀ концентраций представленных в изобретении соединений.

Супернатант, содержащий несвязанную радиоактивность, декантируют и осадок исследуют с помощью многоканального гаммасчетчика Сечтедахх. Степень ингибирования связывания (Ό) вычисляют согласно следующему уравнению:

Каждый тест обычно повторяют трижды.

Б. Ингибирование связывания эндотелина Тест на связывание #2: Ингибирование связывания с ЕТ_в рецепторами.

Клетки линии СО87 трансфицируют ДНК, кодирующей ЕТ_в рецептор. Полученные клетки, экспрессирующие человеческий ЕТ_в рецептор, выращивают до монослоя в колбах Т-150. Мембраны получают, как описано выше. Исследования связывания проводят, как описано выше, используя мембранные препараты, разбавленные до концентрации 1 мкг/50 мкл буфером, в котором проводят реакцию связывания.

Клетки линии СО87, описанные выше, которые были трансфицированы ДНК, кодирующей ЕТ_в рецептор, и экспрессирующие человеческий ЕТ_в рецептор на своей поверхности, выращивают до монослоя в Т-175 колбах. Клетки из множества колб собирают с помощью скребка, объединяют и центрифугируют в течение 10 мин при 190 д. Клетки ресуспендируют в фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБР), содержащем 10 мМ ЭДТА, используя гомогенизатор ТешЬгое'ск. Суспензию центрифугируют при 4°С при 57800 д в течение 15 мин, осадок ресуспендируют в 5 мл буфера А (5мМ НЕРЕ8, рН 7,4, содержащий апротинин (100 К1и/мл)), а затем однократно замораживают и оттаивают. Добавляют 5 мл буфера В (5 мМ НЕРЕ8, рН 7,4, содержащий 10 мМ МпС1₂ и 0,001% дезоксирибонуклеазы 1 типа), суспензию перемешивают, переворачивая колбу, и инкубируют при 37°С в течение 30 мин. Смесь центрифугируют при 57800 д, как описано выше, осадок дважды про мывают буфером А, после чего ресуспендируют в буфере С (30мМ НЕРЕ8, рН 7,4, содержащий апротинин (100 К1и/мл)) так, чтобы конечная концентрация белка составляла 2 мг/мл.

Исследование связывания проводили, как описано выше, используя мембранный препарат, разбавленный буфером, в котором проводят связывание, до концентрации 1 мкг/50 мкл.

В. Тест на активность по подавлению вызванной эндотелином контракции изолированных круглых сегментов грудной аорты крыс.

Эффективность тестируемого соединения в качестве антагониста или агониста биологического ответа тканей на эндотелии также исследована путем измерения воздействия на вызванную эндотелином контракцию изолированных круглых сегментов грудной аорты крыс (см., например, Βογ^8 и др. (1989) Еиг. I, Ρ1ι;·ιηη;κο1. 165:223-230) или с помощью измерения способности вызвать контракцию ткани в том случае, когда вводится исключительно тестируемое соединение.

Соединения, которые предполагается протестировать, готовят в виде 100 мкМ исходных растворов. Если необходимо специально провести растворение, то соединения сначала растворяют в минимальном объеме ДМСО, а затем разбавляют 150 мМ ЫаС1. В связи с тем, что ДМСО может вызвать релаксацию круглых сегментов аорты, тестированию подвергают контрольные растворы, содержащие различные концентрации ДМСО.

Вырезают фрагменты грудной аорты взрослой крысы, эндотелий удаляют аккуратным соскабливанием, после чего разрезают на 3 мм круглые сегменты. Сегменты суспендируют под предварительной нагрузкой 2 г в 10 мл ванне для органов, наполненной раствором КребсаХензелейта, насыщенным смесью газов, состоящей из 95% О₂ и 5% СО₂ (118 мМ ЫаС1, 4,7 мМ КС1, 1,2 мМ Мд§О₄, 1,2 мМ КН₂РО₄, 25 мМ ЫаНСО₃, 2,5 мМ СаС1₂, 10 мМ Ό-глюкозы).

Существует корреляция между антагонистической активностью по отношению к вызванной эндотелином контракции круглых сегментов грудной аорты и активностью в качестве ингибиторов связывания эндотелина с эндотелиновыми рецепторами. рА₂ является линейной функцией логарифма 1С₅₀.

Г. Исследование для идентификации соединений, обладающих агонистической и/или антагонистической активностью по отношению к ЕТ_В рецепторам.

1. Стимуляция высвобождения простациклина.

В связи с тем, что эндотелин-1 стимулирует высвобождение простациклина культивированными эндотелиальными клетками бычьей аорты, соединения, обладающие агонистической или антагонистической активностью, идентифицируют по их способности ингибировать вызванное эндотелином-1 высвобождение проста циклина из таких эндотелиальных клеток путем измерения 6-кето ΡΟΡι_σ, в основном как описано Р11ер и др. (1991) ВюсЬет. ВюрЬуз. Яез. Сеттла 177 171-176. Клетки бычьей аорты получают из бычьей аорты, обработанной коллагеназой, высевают на культуральные планшеты, выращивают в 199 среде с добавлением 15% термоинактивированной фетальной телячьей сыворотки и Ь-глютамина (2 мМ), пенициллина, стрептомицина и фунгизона и пересевают по крайней мере четыре раза. Затем клетки высевают в шестилуночные плашки в ту же среду. За 8 ч до начала исследования, после того как клетки достигают монослоя, среду заменяют. Клетки инкубируют с а) чистой средой, б) средой, содержащей эндотелин-1 (10 нМ), в) чистым тестируемым соединением и г) тестируемым соединением ' эндотелин-1 (10 нМ).

После 15 мин инкубации среду удаляют из каждой лунки и определяют концентрации 6кето ΡΟΡ_1σ прямым иммуноанализом. Высвобождение простациклина вычисляют как разницу между количеством 6-кето ΡΟΡ_1σ, высвобожденным клетками, нагруженными эндотелином1, минус количество, высвобожденное идентично обработанными, но ненагруженными клетками. Соединения, стимулирующие высвобождение 6-кето Ρ6Ρι_σ, обладают агонистической активностью, а те, которые ингибируют высвобождение 6-кето ΡΟΡ_1σ под действием эндотелина-1, обладают антагонистической активностью.

2. Ингибирование контракции, вызванной сафаротоксином 6с.

Сафаротоксин 6с является специфическим ЕТ_В антагонистом, вызывающим контракцию полосок дна желудка крыс. Эффективность тестируемого соединения в качестве ингибитора контракции полосок дна желудка крыс, вызванной сафаротоксином 6с, используется в качестве меры антагонистической активности по отношению к ЕТВ. Две изолированных полоски дна желудка крыс суспендируют под грузом 1 г в 10 мл ванне для органов, заполненной раствором Кребса-Хензелейта, содержащим 10 мкМ циклоЩ-Азр-Рго-О-УаЕЕеи-О-Тгр) (ВО-123; см. патент США № 5,114,918 на имя 1вЬ1катеа и др.), 5 мкМ индометацин и насыщенным смесью газов, состоящей из 95% О2 и 5% СО2. Изменения напряжения измеряют изометрически и регистрируют с использованием Огазз ΡοΕβηρΙι, снабженного силовым преобразователем. Суммарную дозу сафаротоксина 6с добавляют к одной полоске, в то время как следующую полоску перед добавлением суммарной дозы сафаротоксина 6с преинкубируют в течение 15 мин с тестируемым соединением. Исследуют влияние тестируемых соединений на зависимость ответа от концентрации сафаротоксина 6с.

Д. Модель гипертензии у крыс, вызванной ацетатом дезоксикортикостерона (ДКСА), для исследования активности выбранных соединений ш у1уо.

Выбранные соединения, описанные в изобретении, были протестированы на наличие активности на модели гипертензии у крыс, вызванной ацетатом дезоксикортикостерона (ДКСА). Для проведения этих тестов по способу ОгпткЬее и др. ((1973) I. Рйагт. 8сг 62:255-257) готовят имплантанты из силиконового эластомера МБХ4-4210, содержащие 47 мг (ДКСА). ДКСА помещают внутрь имплантантов из силиконового полимера для пролонгированного высвобождения. Для получения имплантантов ДКСА помещают в неполимеризованную силиконовую резину, добавляют катализатор и смеси придают форму полуцилиндра.

У крыс линии 8ргадие Ба\\'1еу (7-8 недельных) проводят одностороннюю нефректомию под анестезией кетамином и помещают ДКСАимплантант на левый дорзо-латеральный брюшной отдел животного. Крысам дают возможность выздоравливать в течение трех недель. В ходе выздоровления им открыт свободный доступ к нормальной крысиной еде и к питью, представляющему собой 0,9% раствор №1С1 вместо питьевой воды. У крыс в течение трех недель развивается гипертензия.

Все животные были использованы для тестов между 21 и 30 днем после хирургического вмешательства. Среднее артериальное кровяное давление у этих животных было в пределах 165200 мм рт.ст.

В день эксперимента под бревитальной анестезией вводят катетеры в правую бедренную артерию для измерения кровяного давления и в правую бедренную вену для введения выбранного соединения. Животных помещают в приспособления для фиксации тела и дают им возможность восстановиться в течение минимум 60 мин или до тех пор, пока не установится постоянный уровень артериального кровяного давления. Тем временем, внутривенно в виде капельницы в течение 60 мин или перорально через зонд вводят выбранное соединение или контрольный носитель. Кровяное давление регистрируют непрерывно в течение последующих 10 ч.

Е. Влияние внутривенного введения на вызванное эндотелином-1 повышение давления у находящихся в сознании крыс, подвергнутых автономной блокаде; модель для изучения активности выбранных соединений ш у1уо.

Самцам крыс линии 8ргадие Ба\\'1еу (250450 г) под анестезией (бревитал 50 мг/кг, в/б) вводят катетеры в бедренную артерию для измерения среднего артериального давления и вводят катетеры в бедренную вену для внутривенного введения лекарства. Животных помещают в приспособления для фиксации тела и дают им возможность прийти в сознание. Через мин проводят автономную блокаду (метилнитрат атропина, 3 мг/кг, IV, а затем пропранолол, 2 мг/кг, IV). Через час животным делают инъекцию ударной дозы носителя (0,5 мл), а спустя 30 мин внутривенно вводят ударную дозу эндотелина-1 (контроль, 1 мкг/кг). Когда животное восстанавливается после такого вмешательства, ему внутривенно вводят ударную дозу тестируемого соединения (0,5 мл) и а затем через 30 мин повторно вводят эндотелин-1. Результаты выражают в процентах ингибирования вызванного эндотелином-1 повышения давления после введения тестируемого соединения по сравнению с повышением давления в ответ на контрольное введение эндотелина-1. В некоторых случаях проводят третье введение эндотелина-1 через 90 мин после введения тестируемого соединения.

Ж. Результаты.

1. Ш уйго.

Были измерены ΚΑ, по отношению к ЕТ_а и ЕТ_в рецепторам для каждого соединения, описанного в предшествующих примерах. Практически все из этих соединений обладают КА, менее 10 мкМ либо по отношению к одному, либо по отношению к обоим ЕТ_а и ЕТ_в рецепторам. Многие соединения имеют КА, менее примерно 10 мкМ, другие - менее примерно 1мкМ, и некоторые соединения имеют КА, менее примерно 0,1 мкМ. Ряд соединений имеет КА, по отношению к ЕТ_а рецепторам существенно ниже (в 10100 раз или больше), чем по отношению к ЕТ_в рецепторам, и таким образом они являются селективными по отношению к ЕТ_а рецепторам. Другие соединения являются ЕТ_в селективными.

2. Ш у1уо.

Выбранные соединения, такие как Ν-(2ацетил-4,6-диметилфенил)-3-{[(3,4-диметил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид, были протестированы на модели гипертензии у крыс, и, как было показано, они эффективно снижали кровяное давление.

Пример 24. Исследования с целью определения токсикологических свойств соединений.

А. Исследования с цитохромами Р450.

Для определения концентрации представленных соединений, необходимой для ингибирования на 50% метаболизма субстрата ЦС₅₀) под действием различных форм человеческого цитохрома Р450 (2С9, 2С19, 3А4), были проведены исследования ш уйго, основанные на использовании человеческого рекомбинантного цитохрома Р450, разработанные Сеп1ек1 Согрогайоп. В этих исследованиях используется Сеп1ек1 8ирегкотек™ (специфический человеческий цитохром Р450, который экспрессируется совместно с редуктазой Р450 и цитохромом Ь₅), система регенерации ААБРН, субстрат и представленные соединения в некотором концентрационном диапазоне. Измеряемой величиной в этих исследованиях является флуоресцирующий продукт. Значения Η₅₀ вычисляли, используя логистическое уравнение с четырьмя параметрами и фиксированным минимумом, соответствующим 0% ингибирования, и фиксированным максимумом, соответствующим 100% ингибированию. (Значения являются средними Η₅₀ ± среднее квадратичное отклонение, при п больше 1).

1. Обычные условия проведения исследований.

Исследования проводили в 96-луночных микропланшетах, используя флуорометрические измерения, разработанные СеШеЦ Согрогайоп. Для получения одной кривой ингибирования использовали 12 лунок в каждом ряду. Лунки с 1 по 8 содержали тестируемое соединение, последовательно разбавленное в соотношении 1:3. Лунки с 9 по 12 не содержали ингибитора, и лунки 11 и 12 являются контрольными для измерения фоновой флуоресценции (перед добавлением фермента вводили останавливающий раствор). Все концентрационные кривые снимали дважды. Инкубацию инициировали добавлением фермента и субстрата в предварительно нагретую реакционную смесь. Через некоторое определенное время инкубации реакцию останавливали добавлением останавливающего раствора. Количество продукта превращения (метаболита) в каждой лунке определяли на основании измерения флуоресценции с помощью плашечного флуориметра (ДиогексеШ р1а1е геайег). Детальное описание эксперимента для каждого фермента приведено ниже. См. Ме111ойо1оду о! а Ыдй ΙΙιΐΌΐίβΙιριιΙ те11юй Гог теакигтд су!осЬготе Р450 тЫЬШоп (Методология способа высокой пропускной способности для измерения ингибирования цитохрома Р450) (СеШеЦ Согрогайоп, Тес11шса1 Ви11ейп); Сгекрц С.Ь.; Мй1ег, ν.Ρ.; и Рептап, Β.ν. (1997) Апа1. В1оскет. 248:188-190; и Сеипдепсй, Г.Р. (1997) Αάν. Рйагт. 43:7-35.

и. Исследование СΥΡ2С9.

0,2 мл/лунку реакционной смеси, содержащей 2 пмоль СΥΡ2С9 (Р258), 1,3 мМ ХАБР', 3,3 мМ глюкозо-6-фосфат, 3,3 мМ хлорид магния, 0,4 ед./мл глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы и 75 мкМ 7-метокси-4-трифторметилкумарин в 25 мМ калий фосфатном буфере (рН 7,4), инкубировали при 37°С в течение 45 мин. Сульфафеназол, стандартный ингибитор СΥΡ2С9, последовательно разбавляли, начиная с максимальной концентрации 10 мкМ и использовали в качестве «положительного» контроля. Тестируемое соединение последовательно разбавляли, начиная с максимальной концентрации 100 мкМ. После проведения инкубации реакцию останавливали добавлением 75 мкл останавливающего раствора (80% ацетонитрил/20% 0,5М трис (основание)) и измеряли флуоресценцию каждой лунки, используя плашечный флуориметр §ресйа Г1иог (Тесап) или СуЮПонг 2350 (Мййроге). Использовали длину волны возбуждения 409 нм (ширина полосы 30 нм) и длину волны испускания 535 нм (ширина полосы 25 нм) или длину волны возбуждения 400 нм (ширина полосы 30 нм) и длину волны испускания

460 нм (ширина полосы 40 нм) соответственно.

ίίί. Исследование СΥΡ2С19.

0,2 мл/лунку реакционной смеси, содержащей 2 пмоль СΥΡ2С19 (Р259), 1,3 мМ ХАБР⁴, 3,3 мМ глюкозо-6-фосфат, 3,3 мМ хлорид магния, 0,4 ед./мл глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы и 25 мкМ 3-циано-7-этоксикумарин в 50 мМ калий фосфатном буфере (рН 7,4) инкубировали при 37°С в течение 45 мин. Транилципромин Цгапукурготше), стандартный ингибитор СΥΡ2С19, последовательно разбавляли, начиная с максимальной концентрации 500 мкМ, и использовали в качестве «положительного» контроля. Тестируемое соединение последовательно разбавляли, начиная с максимальной концентрации 100 мкМ. После проведения инкубации реакцию останавливали добавлением 75 мкл останавливающего раствора (80% ацетонитрил/20% 0,5М трис (основание)) и в течение часа измеряли флуоресценцию каждой лунки, используя плашечный флуориметр §ресйа Г1иог (Тесап). Использовали длину волны возбуждения 409 нм (ширина полосы 30 нм) и длину волны испускания 465 нм (ширина полосы 25 нм).

ίν. Исследование СΥΡ3Α4.

0,2 мл/лунку реакционной смеси, содержащей 4 пм СΥΡ3Α4 (Р202), 1,3 мМ ХАБР', 3,3 мМ глюкозо-6-фосфат, 3,3 мМ хлорид магния, 0,4 ед./мл глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы, 0,01% плюроник Г68 и 50 мкМ бензиловый эфир резоруфина в 200 мМ калий фосфатном буфере (рН 7,4) инкубировали при 37°С в течение 30 мин. Кетоконазол (кеΐосоиаζо1е), стандартный ингибитор 3А4, последовательно разбавляли, начиная с максимальной концентрации 5 мкМ, и использовали в качестве «положительного» контроля. Тестируемое соединение последовательно разбавляли, начиная с максимальной концентрации 100 мкМ. После проведения инкубации реакцию останавливали добавлением 75 мкл останавливающего раствора (80% ацетонитрил/20% 0,5М трис (основание)), и в течение часа измеряли флуоресценцию каждой лунки, используя плашечный флуориметр 8ресйа Г1иог (Тесап). Использовали длину волны возбуждения 530 нм (ширина полосы 30 нм) и длину волны испускания 580 нм (ширина полосы 4 нм).

ν. Расчет.

Для каждого тестируемого соединения рассчитывали средние значения флуоресценции: по дублированным лункам для каждой концентрации, по четырем лункам, в которых не было тестируемого соединения (соответствует 0% ингибирования), и по четырем контрольным лункам (по которым определяли фоновую флуоресценцию, так как реакцию останавливали до введения фермента).

% Ингибирования рассчитывали следующим образом:

100-(среднее значение флуоресценции-фон)х100 (0% ингибирования-фон)

Построили зависимости концентрации от % ингибирования с помощью программы Рпкт (СгарНРаб. 1пс.). Данные анализировали, используя стандартную программу Тор & ВоРот Р1хеб. Использовали уравнение:

Υ-0+100/(1+10 ((Ьод 1С50-Х)*Ш1181оре)), в котором

X - логарифм концентрации;

Υ - ответ (% ингибирования) в пределах от 0 до 100%, зависимость имеет сигмоидальную форму.

Уравнение является «логистическим уравнением с четырьмя параметрами».

νΐ. Результаты.

Средние значения 1С₅₀ для тестированных соединений, измеренные по образованию продуктов превращения (метаболитов), медиируемому различными СУР ферментами, приведены в табл. 2. Достоверность полученных экспериментальных значений была проверена с использованием ингибитора, известного для каждого СΥР фермента («положительный» контроль). Экспериментальные данные считались достаточно достоверными, чтобы их можно было включить в табл. 2, если значение 1С₅₀ для «положительного» контроля укладывалось в одну единицу среднеквадратичного отклонения от среднего значения полученных ранее величин для «положительного» контроля по данному СΥР ферменту. Экспериментальные данные, в которых величина 1С₅₀ для «положительного» контроля выходила за рамки одной единицы среднеквадратичного отклонения, были исключены.

Б. Протоколы лечения гипоксии.

Выдерживание в условиях гипоксии (10,0 ± 0,5% О₂) осуществляли путем помещения крыс в ящик из оргстекла 3301 Р1ехщ1ак д1о\^ге Ьох (Маш^а!, Бруклин, Нью-Йорк, США). Камеру наполняли газом, порциями вводя Ν₂ из резервуара с жидким Ν₂. Абсорбер СО₂ Вага1уте (ЛШеб Иеа1111 Саге РгобисК Сант Луис, Миссури, США) позволял поддерживать концентрацию СО₂ на уровне <0,2%. Относительную влажность внутри камеры поддерживали на уровне <70% с помощью безводного Са8Ο₄. Для поддержания концентрации ЫН₃ внутри камеры на минимальном уровне использовали борную кислоту. См., ТШон и др. (2000) Ри1т. РНагт. ТЕег. 13:87-97.

1. Протокол лечения острой гипоксии.

В первоначальном эксперименте воздействия тестируемого соединения определяли по среднему легочному артериальному давлению (МРАР) у крыс, впоследствии подвергнутых острой гипоксии в течение 90 мин. Под анестезией пентобарбиталом натрия (50 мг/кг внутрибрюшинно) вводили катетеры в бедренную ар терию и бедренную вену, а также в легочную артерию через правую яремную вену, не вскрывая грудную клетку (с1океб-с11ек1 1ес1тк|ие). Все катетеры подсоединяли к полиэтиленовым (РЕ 20) трубкам и выводили на заднюю часть шеи с помощью проволоки из нержавеющей стали (диаметром 0,018 дюйма), проводя туннелизацию подкожно. Спустя два дня регистрировали среднее легочное артериальное давление (МРАР) через артериальные катетеры бедренной и легочной артерий с помощью преобразователей, подсоединенных к многоканальному самописцу. В тех случаях, когда получали стабильные сигналы, находящихся в сознании и не ограниченных в свободе перемещения крыс подвергали воздействию гипоксии (10% Ο2, 1 атм), и регистрировали воздействие гипоксии на данный параметр в течение 90 мин. В модель эксперимента включены протокол предотвращения наступления гипоксии тестируемым соединением (5 мг/кг вводят внутривенно в течение 10 мин и заканчивают за 10 мин до начала погружения в условия гипоксии) и протокол вмешательства тестируемого соединения (5 мг/кг вводят внутривенно в течение 10 мин, начиная вливание через 50 мин после наступления гипоксии).

ΐΐ. Результаты.

Резкое погружение в условия гипоксии при нормальном (атмосферном) давлении связано с двухфазным повышением среднего легочного артериального давления (МРАР) до 24,5 мм рт.ст. по сравнению с исходным уровнем 19 мм рт.ст. в течение 5 мин, после чего в течение последующих 10 мин наблюдается падение давления до 21 мм рт.ст., а затем давление вновь повышается до пиковых значений, составляющих порядка 25 мм рт.ст. до конца действия условий гипоксии. Легочное давление быстро возвращается на исходные уровни, когда в конце эксперимента группу возвращают в условия нормального комнатного воздуха. Как показано в табл. 2, представленные в изобретении соединения эффективно ингибируют вызванное гипоксией сужение сосудов в дозах, меньших, чем для известных антагонистов эндотелина.

Изобретение ограничено только приведенными ниже пунктами формулы, так как возможные изменения очевидны для специалистов.

Claims (35)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формул

   100

   X является 8; К³ и К⁴ каждый является Н;

   Υ¹ и Υ² каждый является углеродом и а и Ь каждое равно 1.

   3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что соответствует формуле IV или или их фармацевтически приемлемые производные или соли, где

   X является 8;

   К¹ является С₁-С₆алкилом;

   К² является С1-С6алкилом;

   К³ и К⁴ каждый является водородом;

   К⁵ является С1-С6алкилом или -(СН2)хС(О) (СЩ)уС Н₃;

   К⁶ является С1-С₆алкилом, -(СН₂)_хС(О) (СН2)уСН3 или 5-членным гетероарилом, содержащим от одного до двух гетероатомов, выбранных из О и Ы;

   К⁷ является водородом, гидрокси, алкокси, С1-С6алкилом, 8(О)2ЫНК⁵⁰ и О8(ОЬЫК³⁸К³⁹;

   где К³⁸ и К³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, С1-С₆алкила, х и у, каждый независимо, является числом от 0 до 14;

   К⁵⁰ является водородом, С1-С₆алкилом;

   Υ является О; К⁸ является СОЫК³⁸К³⁹, СЫ, 5-членным гетероарилом, содержащим от одного до двух гетероатомов, выбранных из О и Ы; алкилсульфонилом, галогенидом, псевдогалогенидом, гидроксиалкилом, С(О)(СН₂)_Х8(О)₂ (СН2)уСН3 или С(=Ы-ОК³⁸)(СН2)уСН3;

   К⁹ является Н;

   Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом;

   а равно 1, если Υ² является углеродом; а равно 0, если Υ² является азотом;

   Ь равно 1, если Υ¹ является углеродом; Ь равно 0, если Υ¹ является азотом; и

   V является ЫН.
2. 2. Соединение по п.1, отличающееся тем, и его фармацевтически приемлемые производные или соли, где

   X является 8;

   К¹ является С1-С6алкилом;

   К² является С1-С6алкилом;

   К³ и К⁴ каждый является водородом;

   К⁵ является С1-С₆алкилом или -(СН₂)_хС(О) (СЩ)уС Н₃;

   К⁶ является С1-С₆алкилом, -(СН₂)_хС(О) (СН2)уСН
3. 3 или 5-членным гетероарилом, содержащим от одного до двух гетероатомов, выбранных из О и Ы;

   К⁷ выбран из группы, включающей водород, гидрокси, алкокси, С1-С6алкил, 8(О)2ЫНК⁵⁰ и О8(О)2ЫК³⁸К³⁹;

   К³⁸ и К³⁹, каждый независимо, выбран из водорода, С1-С6алкила;

   х и у, каждый независимо, является числом от 0 до 14;

   К⁵⁰ является водородом, С1-С₆алкилом;

   Υ является О;

   К⁸ является СОЫК³⁸К³⁹, СЫ, 5-членным гетероарилом, содержащим от одного до двух гетероатомов, выбранных из О и Ы, алкилсульфонилом, галогенидом, псевдогалогенидом, гидроксиалкилом, С(О)(СН₂)_Х8(О)₂(СН₂)_уСН₃ или С(=Ы-ОК³⁸)(СН2)уСН3;

   К⁹ является Н;

   Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом;

   а равно 1, если Υ² является углеродом; а равно 0, если Υ² является азотом;

   Ь равно 1, если Υ¹ является углеродом; Ь равно 0, если Υ¹ является азотом; и

   V является ЫН.
4. 4. Соединение по п.3, отличающееся тем, что К¹ является Ме; и К² является Ме.
5. 5. Соединение по п. 3, отличающееся тем, что

   К⁵ является Ме или ацетилом;

   К⁶ является Ме, ацетилом или 2оксазолилом;

   К⁷ является Н, Ме, О8О2ЫМе2, ОСН2циклопропилом, гидрокси или 8О₂ЫН-(4-хлор3-метил-5-изоксазолил)ом;

   Υ является О и что

   101

   102

   К⁸ является С(О)СН28О2СН3, СИ, С(О)И(Ме)(СН₂-трет-Ви), 8О₂Ме, 2-оксазолилом, 8О2-изопропилом, 8О2-н-пропилом,

   СН(ОН)Ме, С(О)ИМе₂, С(=И-ОМе)Ме, или С1; или

   Υ и К⁸ вместе образуют -СО-И= или -СОС(СИ)=;

   К⁹ является Н;

   Υ¹ и Υ², каждый независимо, является углеродом или азотом;

   а равно 1, если Υ² является углеродом; а равно 0, если Υ² является азотом;

   Ь равно 1, если Υ¹ является углеродом; Ь равно 0, если Υ¹ является азотом; и

   А является ИН.
6. 6. Соединение по п.3, отличающееся тем, что

   X является 8;

   К¹ является Ме;

   К² является Ме;

   К³, К⁴ и К⁹ являются Н;

   Υ является О;

   А является ИН; и

   Υ¹ и Υ² каждый является углеродом.
7. 7. Соединение по п.6, отличающееся тем, что соответствует формуле VI или его фармацевтически приемлемые производные или соли, где

   К¹ является Ме;

   К⁵ является Ме или ацетилом;

   К⁶ является Ме, ацетилом или 2оксазолилом;

   К⁷ является Н, Ме, О8О₂ИМе₂, ОСН₂циклопропилом, гидрокси или 8О₂ИН-(4-хлор3-метил-5-изоксазолил)ом; и

   К⁸ является С(О)СН28О2СН3, СИ, С(О)И(Ме)(СН₂-трет-Ви), 8О₂Ме, 2-оксазолилом, 8О2-изопропилом, 8О2-н-пропилом, СН(ОН)Ме, С(О)ИМе2, С(=И-ОМе)Ме или С1.
8. 8. Соединение по п.7, отличающееся тем, что К¹, К⁵ и К⁶ являются Ме и К⁷ является водородом.
9. 9. Соединение по п.1, отличающееся тем, что выбрано из группы, включающей И-(2циано-3,4,6-триметилфенил)-3-{[(3,4-диметил-5изоксазолил)амино]сульфонил}-2-тиофенкарбоксамид или его фармацевтически приемлемые производные или соли.
10. 10. Соединение по п.1, отличающееся тем, что Υ¹ и Υ² каждый является азотом.
11. 11. Соединение по п.10, отличающееся тем, что а и Ь каждое равно 0.
12. 12. Соединение по п.10, отличающееся тем, что К⁵ и К⁶ являются алкилом; Υ является О и А является ИН.
13. 13. Фармацевтически приемлемая соль, отличающаяся тем, что является солью соединения по п.1.
14. 14. Соль по п.13, отличающаяся тем, что представляет собой натриевую соль.
15. 15. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемых производных в фармацевтически приемлемом носителе, причем количество является эффективным для ослабления симптомов заболевания, связанного с эндотелином.
16. 16. Композиция по п.15, отличающаяся тем, что представлена в виде препарата, предназначенного для введения в виде одной или множества доз.
17. 17. Изделие, содержащее упаковочный материал и соединение или его фармацевтически приемлемые производные по п.1, находящиеся внутри упаковочного материала, причем соединение является эффективным для подавления действия эндотелина, ослабления симптомов заболевания, связанного с эндотелином, или для ингибирования связывания эндотелинового пептида с ЕТ рецептором при 1С₅₀ менее примерно 10 мкМ, причем упаковочный материал содержит этикетку, указывающую на то, что сульфонамид или его производное используется для подавления действия эндотелина, для ингибирования связывания эндотелина с эндотелиновым рецептором или для лечения заболевания, связанного с эндотелином.
18. 18. Способ лечения заболеваний, связанных с эндотелином, включающий введение субъекту эффективного количества соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемых производных, причем эффективное количество является достаточным для ослабления одного или более симптомов заболевания.
19. 19. Способ по п.18, отличающийся тем, что заболевание выбрано из группы, включающей гипертензию, сердечно-сосудистые заболевания, заболевания сердца, включая инфаркт миокарда, легочную гипертензию, легочную гипертензию новорожденных, эритропоэтинзависимую гипертензию, респираторные заболевания и воспалительные заболевания, включая астму, бронхоабструкцию, офтальмологические заболевания, включая глаукому и недостаточность перфузии сетчатки, гастроэнтерологические заболевания, почечную недостаточность, эндотоксический шок, менструальные расстройства, осложнения при родах, ранения, ламиниты, нарушения половой функции, менопаузу, остеопороз и заболевания костей, связанные с нарушениями структуры костной ткани, климактерические нарушения, включая приливы, нарушения системы свертывания крови, урогенный дискомфорт и повышенный риск сердечно103

    104 сосудистого заболевания, а также другие заболевания, связанные с пониженной функцией яичников у женщин среднего возраста, преэклампсию, состояния, связанные с контролем и управлением усилиями во время беременности, нарушения, ослабляемые под действием окиси азота, анафилактический шок, геморрагический шок и сужение сосудов почек, связанное с иммунодепрессантами.
20. 20. Способ по п.19, отличающийся тем, что заболевание выбрано из группы, включающей астму и воспалительные заболевания.
21. 21. Способ по п.19, отличающийся тем, что заболевание является глаукомой.
22. 22. Способ ингибирования связывания эндотелинового пептида с эндотелин_А (ЕТ_А) или эндотелин_В (ЕТ_В) рецептором, включающий контакт рецептора с соединением по п.1 или с его фармацевтически приемлемым производным, отличающийся тем, что контакт осуществляют до, одновременно или после контакта рецептора с эндотелиновым пептидом.
23. 23. Способ изменения активности эндотелина, опосредованной рецептором, включающий контакт эндотелинового рецептора с соединением по п.1 или с его фармацевтически приемлемым производным.
24. 24. Фармацевтическая композиция по п.15, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель включает натрийфосфатный буферный раствор, содержащий сахар.
25. 25. Фармацевтическая композиция по п.24, отличающаяся тем, что соединение представляет собой фармацевтически приемлемую соль щелочного металла.
26. 26. Лиофилизированный порошок, отличающийся тем, что он содержит соль соединения по п.1.
27. 27. Лиофилизированный порошок по п.26, полученный способом, включающим (а) растворение фармацевтически приемлемой соли сульфонамидного соединения в натрийфосфатном буферном растворе, содержащем сахар или углевод;

    (б) стерильное фильтрование полученного раствора и (в) лиофильную сушку фильтрованного раствора в стандартных условиях с получением стерильного порошка.
28. 28. Порошок по п.27, отличающийся тем, что сахар или углевод содержат декстрозу.
29. 29. Изделие, содержащее упаковочный материал и порошок по п.26, находящийся внутри упаковочного материала, причем соединение является эффективным для подавления действия эндотелина, ослабления симптомов заболевания, связанного с эндотелином, или для ингибирования связывания эндотелинового пептида с ЕТ рецептором при Κ.'₅₀ менее примерно 1 мкМ, причем упаковочный материал содержит этикетку, указывающую на то, что сульфонамид или его соль используется для подавления действия эндотелина, для ингибирования связывания эндотелина с эндотелиновым рецептором или для лечения заболевания, связанного с эндотелином.
30. 30. Система, включающая стерильный пузырек, содержащий лиофилизированный порошок по п.26.
31. 31. Система по п.30, отличающаяся тем, что стерильный пузырек содержит количество порошка, предназначенное для введения в виде одной (разовой) дозы.
32. 32. Система по п.30, отличающаяся тем, что стерильный пузырек дополнительно содержит некоторое количество стерильной воды для инъекций; и конечная концентрация натриевой соли сульфонамида находится в пределах примерно от 1 до 250 мг/мл.
33. 33. Фармацевтическая композиция по п.15, отличающаяся тем, что представлена в виде таблетки или капсулы.
34. 34. Композиция по п.33, отличающаяся тем, что дополнительно содержит энтеросолюбильное покрытие.
35. 35. Композиция по п.34, отличающаяся тем, что покрытие выбрано из ацетатфталата целлюлозы, полиэтиленгликоля, полиоксиэтиленсорбита, касторового масла, псевдолатекса на основе этилцеллюлозы, фенилсалицилата, нбутилстеарата, стеариновой кислоты и карнаубского воска.