EA004644B1 - Способ получения яичного желтка, обогащенного натуральными антисекреторными белками, яичный желток, полученный данным способом, и продукты, содержащие указанный желток - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к способу получения яичного желтка, обогащенного натуральными антисекреторными белками (NASP), предусматривающему, что птице, например, отряда куриных, дают корм, индуцирующий образование NASP. Изобретение также касается яичного желтка, полученного данным способом, и продуктов, содержащих указанный желток. Изобретение может использоваться для изготовления обогащенных NASP функциональных пищевых продуктов и фармацевтических продуктов для лечения и профилактики патологических физиологических состояний, вызванных повышенным выделением жидкостей организмом.

Description

Настоящее изобретение в общих чертах относится к применению натуральных антисекреторных белков (ΝΑ8Ρ) для изготовления обогащенных ΝΑ8Ρ функциональных пищевых продуктов и фармацевтических продуктов для лечения и профилактики патологических физиологических состояний, вызванных повышенным выделением жидкостей организмом. В частности, настоящее изобретение относится к применению яичного желтка, обогащенного ΝΆ8Ρ, для изготовления указанных продуктов. Настоящее изобретение относится также к изготовленным таким образом пищевым продуктам и фармацевтическим продуктам, а также к способам их изготовления.

Ниже, термин ΝΆ8Ρ будет использоваться для обозначения натурального антисекреторного белка, в то время как термин Ά8Ρ будет использоваться для обозначения антисекреторного белка, который охватывает натуральный антисекреторный белок.

Из патента Швеции 8Е 9000028-2 (публикация № 466331) известно, что образование антисекреторного фактора или антисекреторного белка (Ά8Ρ: называемого также Е1Ь) можно стимулировать путем добавления в пищу животным определенных сахаров, аминокислот и амидов. Виды и количества этих веществ, которые следует использовать для образования нужного количества Ά8Ρ, определяют методом, изложенным в указанном патенте. Кратко, этот способ включает измерение стандартизованной секреторной реакции в тонком кишечнике крысы. Из патента следует, что индуцированные Ά8Ρ непосредственно влияли на секрецию жидкостей организма в кишечник. Благодаря этому диарейные состояния можно предотвращать или лечить, что означает более безопасное производство продуктов животного происхождения. В указанном патенте содержание или количество натуральных антисекреторных белков определяют по его воздействию на секрецию жидкости в тонкий кишечник лабораторных крыс с провокацией холерным токсином. Одна единица Ά8Ρ (единица ПЬ) соответствует 50% сокращению потока жидкости в кишечник по сравнению с контролем без Ά8Ρ. Антисекреторные белки являются активными в крайне малых количествах, и, следовательно, их легче определять по их действию, чем по их массе.

Из заявки ΡΟΤ/8Ε 96/01049 известны структуры некоторых антисекреторных белков, и описаны их активные части. Синтетические Α8Ρ, полученные с помощью рекомбинантной генной инженерии или твердофазной технологии и имеющие определенную структуру, как было показано, обладают общим контролирующим действием на поток жидкостей организма через мембраны живых клеток.

Из заявки ΡΟΤ/8Ε 97/01918 (публикация \νϋ 98/21978) известно, что образование Α8Ρ в организме может индуцироваться употреблени ем в пищу некоторых продуктов, обладающих ферментативной активностью. Благодаря этому эффекту индукции образование Α8Ρ варьирует в зависимости от индивидуума и его симптомов, а его выраженность и период индукции до сих пор невозможно предсказать. Тем не менее, их можно измерить и внести необходимые коррективы на основе указанных измерений.

Краткое описание изобретения

В ходе длительной работы авторов данного изобретения по составлению рационов, стимулирующих образование антисекреторных белков, неожиданно было установлено, что способность к синтезу и концентрации образующихся натуральных антисекреторных белков в организме распределяется неравномерно. Очень высокое содержание ΝΑ8Ρ обнаруживают в некоторых органах, частях или жидкостях организма и, в частности, в желтке птичьих яиц. Настоящее изобретение основано на этом удивительном факте и, соответственно, относится к применению яичного желтка, обогащенного ΝΑ8Ρ, для изготовления обогащенных ΝΑ8Ρ пищевых продуктов и фармацевтических продуктов для лечения и профилактики патологических физиологических состояний, вызванных повышенным выделением жидкостей организмом. Таким образом, настоящее изобретение открывает возможности, до настоящего времени неизвестные, вводить ΝΑ8Ρ непосредственно с пищей или кормом путем потребления яичного желтка как такового или в форме пищевых продуктов.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение в общих чертах относится к применению натуральных антисекреторных белков для изготовления обогащенных ΝΑ8Ρ функциональных пищевых продуктов и фармацевтических продуктов для лечения и профилактики патологических физиологических состояний, вызванных повышенным выделением жидкостей организмом, и согласно одному из объектов настоящего изобретения относится к применению яичного желтка, обогащенного ΝΑ8Ρ, для изготовления пищевых продуктов, имеющих высокое содержание ΝΑ8Ρ. Согласно другому объекту настоящее изобретение относится к применению указанного желтка для изготовления продуктов для особых пищевых целей и фармацевтических продуктов, содержащих ΝΑ8Ρ.

Под функциональным пищевым продуктом в данном контексте подразумевается пищевой продукт, полезный для здоровья, т. е. оказывающий благоприятное действие на здоровье человека или животного.

Выражение пищевой продукт в данном контексте охватывает пищу, предназначенную для потребления человеком, а также корм, предназначенный для потребления животными. Пища может представлять собой пищевой продукт, для приготовления которого используется яичный желток, такой как блины (оладьи), омлет, мороженое и различные виды хлеба. Яичный желток также можно употреблять в пищу в виде различных яичных коктейлей или яиц, сваренных вкрутую или всмятку. Указанная пища может также быть в форме хлеба, бисквитов, пасты, круп и хлопьев, овсяной каши, или в форме смесей в различных напитках, содержащих или не содержащих электролиты, или в форме пищевого продукта, содержащего мясо и мясные продукты, жир и жировые продукты или молоко и молочные продукты, обогащенные ΝΑ8Ρ, согласно варианту выполнения настоящего изобретения, описанному ниже, согласно которому ΝΑ8Ρ примешивают в пищевой продукт в более или менее очищенной форме. Приготовление пищи может осуществляться весьма свободно, с использованием знаний среднего специалиста для выполнения требований к вкусу и разнообразию пищи.

Яичный желток происходит из птичьих яиц, которые может употреблять в пищу человек и животные и которые обогащены ΝΑ8Ρ. Предпочтительно, яйца получают от курнесушек, но их также можно получать, например, от перепелов и страусов.

Под обогащенным ΝΑ8Ρ пищевым продуктом или пищевым продуктом, имеющим высокое содержание ΝΑ8Ρ, подразумеваются пищевые продукты, содержащие ΝΑ8Ρ в такой концентрации, которая при потреблении указанного пищевого продукта оказывает желаемое и поддающееся оценке действие на здоровье. Особенно высокое содержание ΝΑ8Ρ можно найти в яйцах, как это следует из примера 1. При потреблении обогащенного ΝΑ8Ρ продукта уровень Α8Ρ в крови превышает 0,5 единицы Р1Ь/мл крови. У здоровых людей, как полагают, содержание Α8Ρ в крови находится в пределах от 0 до 0,5 единицы Р1Ь/мл крови.

При стимуляции продуцирования ΝΑ8Ρ согласно 8Е 9000028-2 было неожиданно установлено, что очень высокое содержание ΝΆ8Ρ можно индуцировать в птичьих яйцах. После такого индуцирования содержание ΝΆ8Ρ в крови в норме составляет 0,5-2 единицы Р1Ь/мл крови (1 единица Р1Ь равна количеству ΝΆ8Ρ, вызывающему 50%-ное ингибирование выделения жидкости в эксперименте с так называемой кишечной петлей у крыс; см. 8Е 9000028-2 и упомянутые здесь ссылки 3 и 4). Снабжая птицу через корм определенными комбинациями аминокислот, сахаров и амидов, согласно 8Е 9000028-2, можно достичь очень высоких уровней ΝΆ8Ρ, предпочтительно, в яичном желтке. В этом случае достигаются такие высокие уровни, как приблизительно 1000-10 000 единиц Р1Ь на мл. В этом контексте следует заметить, что содержание ΝΆ8Ρ в яичном желтке в норме, без предварительного индуцирования, составляет около 1 единицы Р1Ь на мл; см. 8. Ьапде с1 а1., ΒτίίίκΗ ΡοιιΙΙΐΎ 8с1епсе (1994) 35:615-620.

Согласно одному варианту выполнения применения по изобретению обогащенные ΝΑ8Ρ пищевые продукты можно приготовить путем примешивания в пищу ΝΑ8Ρ как таковых, полученных в более или менее чистом виде из обогащенного ΝΑ8Ρ яичного желтка.

Так, можно стимулировать образование ΝΑ8Ρ в организме птицы, как описано в 8Е 9000028-2, а затем выделение или концентрирование ΝΑ8Ρ, как описано также в указанном шведском патенте, из продуктов ферментативного расщепления яичного желтка на колонке с агарозой и последующего элюирования их раствором альфа-метилгликозида в физиологическом растворе, предпочтительно, с фосфатным буфером. Затем элюат можно подвергнуть дальнейшей очистке, и перед введением изготовить из него композицию, например, в форме раствора (κοί).

В этом случае выделенные или концентрированные ΝΑ8Ρ затем можно вводить животным или человеку, смешанными с кормом или пищей, соответственно, или в виде более или менее отдельных продуктов, изготовленных и составленных в форме фармацевтических препаратов или других полезных для здоровья продуктов. Указанные фармацевтические продукты изготавливают известными специалистам способами, с использованием принятых наполнителей, включая носители и разбавители, и составляют из них препараты в виде твердых или жидких форм, в зависимости от намеченного пути введения.

Согласно другому варианту применения по изобретению для изготовления обогащенных ΝΑ8Ρ пищевых продуктов применяют яичный желток как таковой или целое яйцо, возможно, в обработанном виде, для смешивания с пищей или кормом. Обработка может включать измельчение, выщелачивание, экстрагирование, выпаривание, ультрафильтрование, высушивание и другие стандартные операции, с целью получения продукта из обогащенного ΝΑ8Ρ яичного желтка, подходящего для практических целей, для смешивания с пищей или кормом.

Согласно настоящему изобретению открыты новые пути достижения благоприятных эффектов, связанных с потреблением ΝΑ8Ρ. Эффект ΝΑ8Ρ может использоваться в силу высокой концентрации ΝΑ8Ρ в яичном желтке, которая может быть индуцирована без задержки, вызываемой известным индуцированием ΝΑ8Ρ.

Таким образом, согласно еще одному объекту настоящее изобретение относится к способу получения из птичьих яиц яичного желтка, обогащенного ΝΑ8Ρ, который характеризуется стимуляцией образования ΝΑ8Ρ путем кормления птиц, от которых получают яйца, кормом, индуцирующим образование ΝΑ8Ρ, согласно 8Е 9000028-2. В частности, способ по изобретению применим для кормления птиц отряда куриных, поскольку, как было сказано выше, неожиданно было установлено, что в яйцах указанных птиц можно индуцировать очень высокое содержание ΝΑ8Ρ. Путем кормления кур кормом с определенными комбинациями аминокислот, сахаров и амидов можно добиться очень высоких уровней (около 100-1000 единиц Р1Б) ΝΑ8Ρ, как также указывалось выше, предпочтительно, в яичном желтке. Благодаря этому открыта особая возможность приготовления яичного желтка, согласно изобретению, описанному в указанном патенте, с чрезвычайно высоким содержанием ΝΑ8Ρ. Путем примешивания указанного яичного желтка или его продуктов в пищу или корм, ΝΑ8Ρ можно добавлять в рацион человека или животных удобным, безопасным и экономичным путем. Таким образом, весьма удивительным и неизвестным ранее является тот факт, что можно добиться таких высоких уровней ΝΑ8Ρ в продуктах питания. Благодаря этому, таким образом, можно использовать эффект ΝΑ8Ρ, как упомянуто выше, без задержки, вызываемой известным индуцированием ΝΑ8Ρ. Удивительно также, что ΝΑ8Ρ сохраняют свое действие даже при пероральном введении.

При некоторых состояниях могут потребоваться высокие дозы ΝΑ8Ρ. В указанных случаях ΝΑ8Ρ, полученные из яиц, можно добавлять в пищевой продукт или ΝΑ8Ρ можно изготавливать для потребления в форме таблеток или суспензий.

Особенно предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения включает изготовление порошка яичного желтка путем сушки распылением. Указанный продукт особенно удобен в промышленном производстве различных пищевых продуктов, когда желательно получить благоприятный эффект ΝΑ8Ρ при потреблении определенного пищевого продукта. Порошок яичного желтка легко примешивать в такие сильно отличающиеся друг от друга продукты, как колбаса и мороженое, благодаря чему можно добиться большого разнообразия в характере пищи.

Порошок яичного желтка также является наиболее удобным промежуточным продуктом в случае, если желательно изготовить продукт, обогащенный или содержащий концентрированные ΝΑ8Ρ, посредством выщелачивания или экстракции для дальнейшего изготовления, например, лекарственных средств.

Благодаря своей относительно низкой молекулярной массе ΝΑ8Ρ являются сравнительно термостабильными и могут, следовательно, содержаться в пище уже до ее приготовления для употребления.

ΝΑ8Ρ, как было показано, оказывают общее контролирующее действие на поток жидкостей организма через мембраны живых клеток, благодаря чему можно облегчать, излечивать или предупреждать не только состояния диареи, но также дискомфорт из-за физиологического дисбаланса или болезненные состояния, вы званные повышенным выделением жидкостей организма, такие как воспаление, отек, артрит, глаукома и другие изменения в организме, такие как мигрень, ожоги и травматические повреждения внутри и на поверхности тела. Пищевые продукты и фармацевтические продукты по изобретению, таким образом, могут применяться для указанных целей.

Настоящее изобретение ниже иллюстрируется следующими неограничивающими примерами.

Пример 1.

Кур-несушек (белых леггорнов в возрасте около 32 недель) кормили кормом для курнесушек, составленным согласно 8Е 9000028-2, а в качестве контроля использовали кур, которые получали корм традиционного типа, 11,4 мДж/кг корма, 170 г сырого белка на кг корма. После двухнедельного периода индуцирования собирали яйца.

От каждой группы собрали по 10 яиц, и желток и белок этих яиц отделяли друг от друга вручную. После разбавления равным объемом ΡΒ8 (физиологического раствора с фосфатным буфером) желток подвергали аффинной хроматографии в соответствии с методикой, описанной ранее (I. ЬопитоИ аиб 8. Банде. ВюсЫш1са Вюрйуыеа Лс1а (1986) 883:138-144). Кратко, яичный желток, разбавленный ΡΒ8, помещали на маленькую колонку, содержащую сефарозу 6В (Гкаттас1а ЬКВ Вю1ес1шо1оду АВ, 8о11еи1ииа, 8теебеи), предварительно уравновешенную ΡΒ8. После промывания ΡΒ8 ΝΑ8Ρ элюировали метил-альфа-Э-гликозидом, 1,0 М в ΡΒ8. После диализа против ΡΒ8 образец хранили при -20°С до проведения теста на ΝΑ8Ρ в соответствии с моделью кишечной петли на крысах, описанной Банде (8. Ьаиде, РЕМ8 ΜίстоЫо1оду Ье11ет8 (1982) 15:239, 242) .

Уровень ΗΑ8Ρ в яичном желтке (единицы РГБ/г)
Контрольная группа	Тест-группа
1,20	2,0 (после разведения 1:100)
	1,0 (после разведения 1:1000

Пример 2.

Женщина 42 лет, оперированная по поводу стомы и остатком около 0,5 м, страдала тяжелой диареей. В среднем около 1,5 л висцерального содержимого выделялось 4 раза в день. По истечении 1 недели, в течение которой пациентка ежедневно употребляла мороженое, изготовленное из сахара, сливок и яичных желтков по примеру 1, что соответствовало ежедневному потреблению 4 г сухого вещества яичного желтка, частота дефекации снизилась до 1 раза в день, а ее объем сократился приблизительно до 350 мл. В течение 3 недель лечения вес пациентки увеличился на 3,5 кг. Еще 1 неделю она стала потреблять такое же количество мороженого, изготовленного из обычных яиц по тому же рецепту. Через 3 дня частота и объем дефекации возросли до величин, которые имели место до проведения теста. Еще через неделю тест возобновили, и в течение 2 дней дефекация снизилась до величин, которые имели место во время проведения предыдущего теста.

Пример 3.

Четырех телят с живым весом 50 кг разделили на две группы по два теленка. Телятам контрольной группы давали корм для телят в форме коммерческого заменителя молока. В тест-группе к корму примешивали яичный желток по экспериментальному примеру 1, в количестве, соответствующем суточной дозе два яичных желтка. Кормление продолжали 7 дней. Уровень А8Р в крови измеряли до и после эксперимента.

Уровень А8Р (единицы Б1Ь/мл плазмы)

	Контрольная группа	Тестгруппа
До эксперимента	0,3	0,1
После эксперимента	0,1	0,9

Пример 4.

Диарея является довольно частым состоянием у собак, особенно у тех из них, которые имеют возможность, живя за городом, самостоятельно выбирать себе пищу. Такая собака, кобель немецкой овчарки возрастом 1,5 года и весом около 40 кг, страдала в течение некоторого времени тяжелой диареей с водянистым, периодически кровавым, стулом. Периодически у этой собаки была также рвота. Вызванный ветеринарный врач назначил антибиотики, перорально, в форме таблеток, в течение 1 недели. В течение этого периода собака ела коммерческий сухой корм для собак в меньших количествах. Диарея не уменьшалась. После этого лечения антибиотиками собаку кормили намоченным сухим кормом, в который примешивали порошок яичного желтка из примера 6 в количестве, соответствующем одному яичному желтку в день, в течение 4 дней. Через 1 сутки у собаки был твердый стул, а через 3 дня животное признали абсолютно здоровым. Никогда ранее владелец собаки не наблюдал столь быстрого выздоровления.

Пример 5.

Яйца из тест-группы примера 1 разбивали и подвергали сепарации на аппарате для сепарации яиц. Желток и белок яиц собирали по отдельности. Яичный желток высушивали распылением на распылительной сушилке Лпйубго с температурой на входе 150°С и температурой на выходе 75°С.

Яичный порошок собирали и, после полного высушивания, собирали порошок со стенок распылительной сушилки. Эти пристеночные отложения находились в сушильной камере в среднем в течение 4 ч. Яичный порошок растворяли в воде и собирали А8Р известным спосо бом на колонке с агарозой. Элюат разбавляли и измеряли в нем содержание А8Р.

Единицы Б1Ь после разбавления 1:100 Яичный порошок, средний образец Х

Яичный порошок со стенки сушильной камеры Υ

Таким образом, с точки зрения пищевой технологии, ИА8Р является достаточно термостабильным.

Технический эффект

С помощью настоящего изобретения создаются полностью новые и ранее неизвестные возможности введения ИА8Р при полностью новых, ранее неизвестных степенях независимости. Индуцирование ИА8Р, описанное в заявке РСТ/8Е 97/01918 (№О 98/21978), может быть затруднительно поддерживать в течение длительного времени, в силу того факта, что диета воспринимается скорее как монотонная. С помощью настоящего изобретения можно изготавливать пищевые продукты с высокими вкусовыми качествами и хорошей приемлемостью при умеренных производственных затратах. В случае длительного течения заболевания или слабой реакции на пищу, индуцирующую образование ИА8Р, ИА8Р можно вводить в форме продуктов питания, содержащих предопределенные более высокие или низкие дозы, адаптированные для получения желаемого эффекта в отношении качества жизни или желаемой физиологической эффективности. В случае длительного введения можно избежать появления отвращения к пище, поскольку можно изготавливать множество продуктов с различным вкусом и пищевыми свойствами. Пищевые продукты можно изготавливать промышленным способом в виде полуфабрикатов или готовых блюд или в виде товара, подходящего в качестве сырого продукта для изготовления фармацевтических препаратов или для производства концентратов ИА8Р. Концентрат можно получать из яичного желтка или, предпочтительно, из порошка яичного желтка, путем экстракции или выщелачивания.

Claims (20)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ получения от яйценесущей птицы яичного желтка, обогащенного натуральными антисекреторными белками (ИА8Р), предусматривающий, что яйценесущей птице дают корм, индуцирующий образование ИА8Р.
2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что птица представляет собой птицу отряда куриных.
3. 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что корм, индуцирующий образование ИА8Р. содержит аминокислоты, сахара и амиды в количестве, стимулирующем образование ИА8Р.
4. 4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что корм содержит продукты, обладающие ферментативной активностью, стимулирующей образование ΝΆ8Ρ.
5. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что продукты, обладающие ферментативной активностью, представляют собой соложеные злаки.
6. 6. Яичный желток, имеющий высокое содержание натурального антисекреторного белка (ΝΆ8Ρ), составляющее по меньшей мере 1000 ед. МЬ/мл, полученный способом по любому из пп.1-5.
7. 7. Яичный желток по п.6, в котором содержание ΝΆ8Ρ составляет от 1000 до 10000 ед. МЬ/мл.
8. 8. Яичный желток по п.6 или 7, полученный из яиц птиц отряда куриных.
9. 9. Применение яичного желтка по любому из пп.6-8 для изготовления обогащенных ΝΆ8Ρ пищевых продуктов.
10. 10. Применение яичного желтка по любому из пп.6-8 для изготовления фармацевтических продуктов для лечения и профилактики болезненных состояний, вызванных крайне высоким выделением жидкостей тела.
11. 11. Применение по п.9 или 10 яичного желтка как такового или в форме, полученной в результате обработки, такой как измельчение, выщелачивание, экстрагирование, выпаривание, мембранное фильтрование, высушивание и подобные стандартные операции.
12. 12. Применение концентрата ΝΆ8Ρ из яичного желтка по любому из пп.6-8 для изготовления обогащенных ΝΆ8Ρ пищевых продуктов или фармацевтических продуктов для лечения и профилактики болезненных состояний, вызванных крайне высоким выделением жидкостей тела.
13. 13. Пищевой продукт, имеющий высокое содержание натуральных антисекреторных белков (ΝΆ8Ρ), отличающийся тем, что он содержит яичный желток по любому из пп.6-8 или концентрат ΝΆ8Ρ из указанного яичного желтка в более или менее очищенной форме.
14. 14. Пищевой продукт по п.13, отличающийся тем, что высокое содержание ΝΆ8Ρ получено примешиванием к пищевому продукту при его изготовлении обогащенного ΝΆ8Ρ яичного желтка по любому из пп.6-8, или его обработанных форм в качестве источника ΝΆ8Ρ.
15. 15. Пищевой продукт по п.13, отличающийся тем, что высокое содержание ΝΆ8Ρ получено примешиванием к пищевому продукту при его изготовлении концентрата ΝΆ8Ρ из яичного желтка с высоким содержанием ΝΆ8Ρ по любому из пп.6-8.
16. 16. Пищевой продукт по п.13, отличающийся тем, что он состоит из яичного желтка как такового.
17. 17. Пищевой продукт по любому из пп.1315, отличающийся тем, что он представляет собой блины (оладьи), омлет, мороженое, яйца, сваренные вкрутую или всмятку и т.п.
18. 18. Фармацевтический продукт для лечения и профилактики болезненных состояний, вызванных повышенным выделением жидкостей организмом, отличающийся тем, что помимо традиционных наполнителей и вспомогательных веществ, он имеет высокое содержание натуральных антисекреторных белков (ΝΆ8Ρ), полученное при использовании обогащенного ΝΆ8Ρ яичного желтка по любому из пп.6-8.
19. 19. Способ изготовления пищевого продукта, имеющего высокое содержание натуральных антисекреторных белков (ΝΆ8Ρ) по любому из пп.13-17, отличающийся тем, что в пищу или корм добавляют обогащенный ΝΆ8Ρ яичный желток по любому из пп.6-8, или его обработанные формы или более или менее очищенные концентраты ΝΆ8Ρ из указанного яичного желтка.
20. 20. Способ по п.19, отличающийся тем, что обработанные формы яичного желтка получают путем измельчения, выщелачивания, экстрагирования, выпаривания, мембранного фильтрования, высушивания и подобных стандартных операций.