DK2961839T3 - Alfa-amylasevarianter - Google Patents

Claims (14)

1. Polypeptidvariant med alfa-amylaseaktivitet, hvor varianten har en aminosyresekvens med mindst 70 % identitet med polypeptidsekvensen ifølge SEQ ID NO: 2, som, når den er rettet ind med sekvensen ifølge SEQ ID NO: 2, omfatter mindst én substitution af en aminosyrerest svarende til Q13E, I16T, M45L, W70Y, S72T, L75V, T94A, T94P, V129A, S133L, T134S, I174L, W177F, D178N, K186Q, L210F, N234P, V254F, V281L, L282F, L282M, L282T, D283N, D283S, F284W, T323N, I325F, F652I, hvilke positioner defineres ved henvisning til SEQ ID NO: 2; og hvor varianten har en forøget saccharosetolerans sammenlignet med referencepolypeptidet ifølge SEQ ID NO: 2.

2. Polypeptidvariant ifølge krav 1, hvor varianten har en forøget saccharosetolerans ved pH 5 sammenlignet med referencepolypeptidet ifølge SEQ ID NO: 2.

3. Nukleinsyresekvens, der kdoer for en polypeptidvariant ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav.

4. Nukleinsyrekonstruktion, der omfatter nukleinsyresekvensen ifølge krav 3, der er operabelt koblet til en eller flere kontrolsekvenser, der er i stand til at styre ekspressionen af en alfa-amylase i en egnet ekspressionsvært.

5. Rekombinant ekspressionsvektor, der omfatter nukleinsyrekonstruktionen ifølge krav 4.

6. Rekombinant værtscelle, der omfatter ekspressionsvektoren ifølge krav 5.

7. Fremgangsmåde til fremstilling af en alfa-amylase, som omfatter dyrkning af værtscellen ifølge krav 6 under betingelser, der bidrager til fremstillingen af alfa-amylasen, og indvinding af alfa-amylasen.

8. Sammensætningen, der omfatter polypeptidvarianten ifølge krav 1 eller 2 og en eller flere bestanddele valgt fra gruppen, der består af mælkepulver, gluten, granuleret fedt, et yderligere enzym, en aminosyre, et salt, oxidanter, reduktionsmidler, emulgeringsmidler, natriumstearoyllactylat, calciumstearoyllactylat, polyglycerolestere af fedtsyrer og diacetylvinsyreestere af mono- og diglycerider, gummiarter, smagsstoffer, syrer, stivelse, modificeret stivelse, fugtighedsbevarende stoffer og konserveringsmidler.

9. Forblanding, der omfatter mel og en polypeptidvariant, hvor varianten har en aminosyresekvens med mindst 70 % identitet med polypeptidsekvensen ifølge SEQ ID NO: 2, som, når den er rettet ind med sekvensen ifølge SEQ ID NO: 2, omfatter mindst én substitution af en aminosyrerest svarende til en hvilken som helst af aminosyrerne Q13E, I16T, M45L, W70Y, S72T, L75V, T94A, T94P, V129A, S133L, T134S, I174L, W177F, D178N, K186Q, L210F, N234P, V254F, L282F, L282M, L282T, D283N, D283S, F284W, V281L, T323N, I325F, S358A, F652I, hvilke positioner defineres ved henvisning til SEQ ID NO: 2; og hvor varianten har en forøget saccharosetolerans sammenlignet med referencepolypeptidet ifølge SEQ ID NO: 2.

10. Forblanding ifølge krav 9, der omfatter mindst ét yderligere enzym.

11. Anvendelse af polypeptidvarianten ifølge krav 1 eller 2; eller af en sammensætning, der omfatter polypeptidvarianten ifølge krav 8 og en eller flere bestanddele valgt fra gruppen, der består af mælkepulver, gluten, granuleret fedt, et yderligere enzym, en aminosyre, et salt, oxidanter, reduktionsmidler, emulgeringsmidler, natriumstearoyllactylat, calciumstearoyllactylat, polyglycerolestere af fedtsyrer og diacetylvinsyreestere af mono- og diglycerider, gummiarter, smagsstoffer, syrer, stivelse, modificeret stivelse, fugtighedsbevarende stoffer og konserveringsmidler, eller af forblandingen ifølge krav 9 eller 10 til fremstilling af en dej og/eller et bagt produkt.

12. Dej, der omfatter polypeptidvarianten ifølge krav 1 eller 2; sammensætningen ifølge krav 8; eller forblandingen ifølge et hvilket som helst af krav 9 eller 10.

13. Fremgangsmåde til fremstilling af en dej, som omfatter trinet inkorporering i dejen af en effektiv mængde af polypeptidvarianten ifølge krav 1 eller 2.

14. Fremgangsmåde til fremstilling af et bagt produkt, hvilken fremgangsmåde omfatter bagning af dejen ifølge krav 12 .