DK164709B

DK164709B - Enzymatisk detergentkomposition og enzymatisk detergentadditiv

Info

Publication number: DK164709B
Application number: DK098090A
Authority: DK
Inventors: Mette Uve Jars
Original assignee: Novo Nordisk As
Priority date: 1987-11-02
Filing date: 1990-04-20
Publication date: 1992-08-03
Also published as: DK571587D0; EP0395678A1; DE3872398D1; JP2744268B2; DK164709C; DK98090D0; ATE77650T1; EP0395678B1; US5078898A; JPH03501031A; DK98090A; DE3872398T2; WO1989004361A1

Description

i

DK 164709 B

Denne opfindelse angår en detergentkomposition omfattende tensider, en protease og en lipase samt et enzymatisk detergentadditiv omfattende ovennævnte enzymer.

Enzymatiske detergentkompositioner er velkendte.

5 Mange typer af enzymer er blevet foreslået som bestanddel i detergentkompositioner, men den største opmærksomhed har været koncentreret om protease. Blandt de mange proteaser, der er foreslået til anvendelse i detergenter, er de nedenstående to særligt relevante for denne opfindelse: 10 - Subtilisin Novo, en alkalisk serin-protease, der er afledt fra Bacillus amyloliquefaciens, se EP 130,756 (Genentech).

- Alkalisk protease fra Fusarium, se f.eks. US 3,652,399 (Takeda) og DK 86/5640 (Novo-Nordisk).

Lipaser er også blevet foreslået som deter-

15 gentbestanddele, men der er stadig relativt lidt kendt teknik, der omhandler lipaser til denne anvendelse. Af særlig relevans for denne opfindelse er den foreslåede anvendelse af Pseudomonas lipase, se f.eks. GB 1,372,034 (Unilever) og EP

214.761 (Novo-Nordisk).

20 Detergenter, der indeholder lipase og protease, er også kendt. Da lipasen er et protein, er proteasen i detergentopløsningen dog tilbøjelig til at nedbryde lipasen og reducere dens aktivitet. Således viser data i EP 205,208 (Unilever) og EP 206,390 (Unilever), at stabiliteten af 25 lipase fra Pseudomonas fluorescens i detergentopløsning reduceres betydeligt ved tilsætning af protease fra Bacillus licheniformis (Alcalase®) eller fra alkalofile Bacillus sp. (Savinase® og Esperase®, der er varemærker fra Novo-Nordisk A/S).

30 Endvidere beskriver EP 130,064 (Novo-Nordisk), EP

214.761 (Novo-Nordisk) og WO 87/00859 (Gist-Brocades N.V.) detergenter med protease fra Bacillus licheniformis (beskrevet som ALCALASE® og MAXATASE®, der er varemærker fra henholdsvis Novo og Gist-Brocades) og lipase fra Fusarium

DK 164709 B

2 oxysporum, Pseudomonas cepacia, Ps. pseudoalcaligenes eller Ps. stutzeri. Stabilitetsdata har ikke været offentliggjort, men data i eksemplerne i denne beskrivelse viser, at lipasestabiliteten i disse kompositioner er ringe på grund af 5 proteasens indvirkning.

Det er et formål med opfindelsen at tilvejebringe detergentkompositioner, der indeholder både lipase og protease, således at: - tilsætningen af hvert enzym forbedrer vaskevirkningen bety-10 deligt overfor henholdsvis fedt- og proteinholdig besmuds- ning, - hvert enzym tilsat separat udviser god stabilitet i en opløsning af detergentet, og - lipasen viser mindre nedgang i aktiviteten på grund af pro-15 teasen i detergentopløsningen, og at vaskevirkningen overfor fedtbesmudsninger derfor ikke reduceres væsentligt af proteasen.

Vi har nu overraskende fundet, at alle disse mål kan opnås ved at udvælge en bestemt gruppe lipaser og en be-20 stemt gruppe proteaser. Specielt udviser denne kombination af lipase og protease bedre lipasestabilitet i detergentopløsningen end hidtil kendt teknik.

Opfindelsen tilvejebringer en detergentkomposition omfattende en protease og en lipase. Proteasen er enten 25 Subtilisin Novo eller en Fusarium protease. Lipasen er afledt fra Pseudomonas.

Opfindelsen tilvejebringer endvidere et enzymatisk detergentadditiv omfattende ovennævnte protease og ovennævnte lipase. Detergentkompositionen er således ejendommelig ved 30 det i den kendetegnende del af krav 1 angivne, og detergentadditivet er ejendommeligt ved det i den kendetegnende del af krav 8 angivne.

DK 164709 B

3

Protease

Klassen af proteaser, der kan anvendes i nærværende opfindelse, omfatter proteaser fra Fusarium sp., Subtilisin Novo og visse varianter af sidstnævnte.

5 Protease til anvendelse i denne opfindelsen kan fremstilles ved dyrkning af en stamme af Fusarium sp., specielt oxysporum og F_^ solani. Foretrukne stammer omfatter DSM 2672, IFO 5880, ATCC 659 samt andre stammer, angivet i US 3,652,399 (Takeda) så vel som mutanter og varianter af disse.

10 Dyrkning af disse stammer og udvinding af protease kan udføres ifølge de i teknikken kendte retningslinier, f.eks. i henhold til US 3,652,399.

Foretrukne Fusarium proteaser til anvendelse i opfindelsen er aktive i pH-området 7-12, især 8-10,5, og har 15 fortrinsvis pH-optimum i disse områder.

Stammen DSM 2672 blev deponeret 6. juni 1983 under Budapesttraktatens bestemmelser. Den er identificeret som F. oxysporum. De andre stammer er frit tilgængelige for offentligheden. DSM betegner Deutsche Sammlung von Mikroorganismen, 20 Vesttyskland (DSM), IFO står for Institute of Fermentation,

Osaka (IFO), og ATCC betegner American type Culture Collection, USA.

Subtilisin Novo er en alkalisk protease fra Bacillus amyloquefaciens. Den er tillige beskrevet under 25 Synonymerne BPN', Bacillus protease Nagarse, subtilopeptidase B og subtilopeptidase C. Se M. Ottesen og I. Svendsen,

Methods in Enzymology, bind 20, 199-210 (1971). Dens amino-syresekvens er angivet i EP 199,404 (Procter & Gamble).

Proteaserne er fortrinsvis inkluderet i en mængde, 30 således at den endelige detergentkomposition har en pro-teaseaktivitet på 0,001 - 0,5 AU(A)/g.

Proteaseaktiviteten i Ansonenheder Alcalase®, AU(A) bestemmes ved nedbrydning af dimethylcasein i forhold til en Alcalase-standard. Reaktionen efterfølges in situ af farve-35 dannelse med trinitrobenzensulfonsyre, hvor ændringen i

DK 164709 B

4 absorbans pr. tidsenhed måles. Betingelser er: 37°C, pH 8,3, bølgelængde 420 nm, reaktionstid 9 minutter, måletid 3 minutter, f.eks. på en Cobas Fara centrifugalanalysator.

Lipaser 5 De foretrukne Pseudomonas lipaser til anvendelse i opfindelsen er aktive i pH-området 7-12, især 8-10,5, og mest fortrinsvis har de pH-omtimum i et af disse områder.

De mest foretrukne lipaser er afledt af Ps. cepacia, Ps. fluorescens og Ps. fragi.

10 Foretrukne Ps. cepacia stammer er DSM 3333, DSM

3334, DSM 3335, DSM 3336, DSM 3337, DSM 3401, DSM 3959. De mest foretrukne af disse er DSM 3335, DSM 3401 og DSM 3959. Omtalte stammer blev deponeret under Budapesttraktatents bestemmelser på nedenstående datoer: 15 Deponeringsnr. Deponeringsdato DSM 3333-3336 28 maj 1985 DSM 3337 10 juni 1985 DSM 3401 22 juli 1985 DSM 3959 30 januar 1987 20 Andre foretrukne stammer er FRI 5494, der er depo-.

neret hos The Fermentation Research Institute, Japan, og som er tilgængelig derfra med reference til japansk fremlæggelsesskrift JP 57-59,753-B2 (Agency of Industrial Science & Technology). Ps. cepacia lipase kan fremstilles ved dyrkning 25 af disse stammer i henhold til nævnte japanske fremlæggersesskrift, til EP 214,761 (Novo-Nordisk) eller til et eksempel i denne beskrivelse.

Ps. fluorescens lipase kan fremstilles i henhold til JP 53-20,487A (Amano), JP 57-42,312B (Agency of Ind.

30 Sci. & Tech.) eller SU 491,693 (AS USSR Microbiol.) og er kommercielt tilgængelig fra Amano Pharmaceutical Co. Ltd.,

Nagoya, Japan under varemærket Lipase P "Amano".

*

DK 164709 B

5

Ps. fragi lipase kan fremstilles i henhold til JP 56-28,517B og EP 204,284 (Sapporo) og er almindelig tilgængelig fra Sapporo Breweries Ltd., Japan under varemærket Lipase-B, afledt fra Ps. fragi 22-39B.

5 Pseudomonas lipaser til anvendelse i opfindelsen kan endvidere fremstilles i henhold til følgende referencer: - JP 56-28,516B (Sapporo): Ps. nitroreducens - JP 50-25,553B (Agency of Industrial Science & Technology):

Ps. mephitica var, lipolytica 10 - JP 48-103,791A (Amano) - JP 55-42,613B (Amano) - JP 49-45,592B (Amano) - JP 59-187,780A (Toyobo) - WO 87/00569 (Gist-Brocades): Ps. stutzeri og Ps.

15 pseudoalcoligenes - GB 1,372,034 (Unilever): Ps. stutzeri, senere omklassificeret til Ps. aeruginosa - lipase ex Ps. gladioli

Lipaserne inkluderes fortrinsvis i en sådan mængde, at det 20 endelige detergentpræparat har en lipaseaktivitet på 20 LU/g - 20.000 LU/g.

En lipaseenhed (LU) er mængden af lipase, der producerer 1 μπιοί titrerbar fedtsyre pr. minut i en pH stat ved følgende betingelser: 30°C, pH 7,0, tributyrin som substrat 25 og gummi arabicum som emulgeringsmiddel.

Overfladeaktivt stof

Detergentkompositionerne ifølge opfindelsen omfatter overfladeaktivt stof, som kan være af den anioniske, non-ioniske, kationiske eller zwitterioniske type eller en 30 blanding af disse.

DK 164709 B

6

Præparaterne vil sædvanligvis indeholde anioniske, overfladeaktive midler, typisk i en mængde af 5-30 vægt-%.

F.eks. kan alle overfladeaktive stoffer være anioniske eller en blanding af anionisk og non-ionisk overfladeaktivt stof 5 kan anvendes.

Typiske eksempler på anioniske overfladeaktive stoffer er lineær alkylbenzensulfonat (LAS), alphaolefin-sulfonat (AOS), alkoholethoxysulfat (AES) og alkalimetal-sæber.

10 I denne henseende har det overraskende vist sig, at de lipaser og proteaser, der anvendes i denne opfindelse, har god stabilitet i detergentopløsninger indeholdende anionisk overfladeaktivt stof.

Detergentkomposition 15 Kompositionerne ifølge denne opfindelse kan indeholde andre kendte detergentbestanddele, såsom builder, blegemidler, blegeaktivatorer, antikorrosionsmidler, sekvestre-ringsmiddel, antiredepositionsmidler, parfume, stabiliseringsmidler til enzymerne og blegemidlerne osv. De 20 kan også indeholde andre enzymer end lipaser og protease, såsom amylaser, cellulaser og oxidaser.

Detergentkompositionerne ifølge opfindelsen kan formuleres i enhver hensigtsmæssig form, såsom i pulverform, flydende form osv.

25 Detergentadditiv

Enzymerne kan inkluderes i detergentkompositionerne ifølge opfindelsen enten ved tilsætning af separate additiver indeholdende lipasen og proteasen, eller ved tilsætning af det kombinerede lipase/proteaseadditiv 30 ifølge opfindelsen.

DK 164709 B

7

Lipaserne og proteaserne inkluderes i en mængde således, at additivet ifølge opfindelsen fortrinsvis har en lipaseaktivitet på 500 til 500.000 LU/g og fortrinsvis har en proteaseaktivitet på 0,5 til 10,0 AU(A)/g.

5 Additivet ifølge opfindelsen kan formuleres, f.eks. som støvfrie granulater, væsker, slurry osv. Støvfrie granulater kan fremstilles f.eks. i henhold til GB 1,362,365 (Novo-Nordisk) eller US 4,106,991 (Novo-Nordisk). Lipasen og proteasen kan blandes før eller efter granuleringen.

10 I tilfældet med et flydende additiv kan enzym stabiliseringsmidler inkluderes, eller enzymerne kan beskyttes i henhold til EP 238,216 (Novo-Nordisk og Albright &

Wilson).

EKSEMPLER

15 Nedenstående enzymer blev anvendt i eksemplerne: - Fusarium oxysporum lipase: Fremstillet i henhold til EP 130,064 (Novo-Nordisk) - Alcalase®: Produkt fra Novo-Nordisk A/S, protease fremstillet ved dyrkning af Bacillus licheniformis 20 - Savinase® og Esperase®: Produkter fra Novo-Nordisk A/S, proteaser fremstillet ved dyrkning af alkalofil Bacillus sp. i henhold til US 3,723,250.

- Penicillium lipase: Fremstillet ved dyrkning af P. cyclopium i henhold til SU 906,180.

25 -Aspergillus lipase: Amano AP 6 ex A. niger - Ps, fluorescens lipase: Lipase P "Amano” - Ps. fragi lipase: Lipase-B, produkt fra Sapporo Breweries Ltd.

Nedenstående to detergenter blev anvendt i 30 eksemplerne:

DK 164709 B

8

Detergent 1 Detergent 2 LAS 6,9% w/w 5,7% w/w AE (alkoholethoxylat) 4,3%- 4,0% - Sæbe 1,3 % - 0,8 % - 5 Natriumtripolyphosphat 36,5%- 29,7% -

Natriumcarbonat 6,4%- 3,8% -

Natriumsulfat 22,3% - 33,0% -

Natriumsilicat 1,8% - 1,9% -

Natriumperborat, 10 tetrahydrat 18,1% - 19,5% - TAED 1,5% - 1,5% CMC 0,9% - - TOTAL 100,0% w/w 99,9% w/w

Opløsningerne i eksemplerne blev udført med poste-15 vand med hårdheden ca. 18°dH.

Fremstillingseksempel

Lipase fra Pseudomonas cepacia DSM 3959 og DSM 3401

En kultur af hver stamme på et agar skrårør blev overført til en 2000 ml rystekolbe med 800 ml medium med 20 nedenstående sammensætning:

Pepton 6 g/1

Trypsinopløst kasein 4 g/1 Gærekstrakt 3 g/1 Kødekstrakt 1,5 g/1 25 Dextrose 1 g/1

Autoklaveret ved 121°C i 60 minutter

DK 164709 B

9 «

Efter rystning ved 30°C i 1 dag blev kulturvæsken anvendt til at pode en konventionel omrørt og beluftet gæringstank indeholdende 300 liter medium med nedenstående sammensætning: 5 Gærekstrakt 1 g/1 KH2P04 0,67 g/1

Na2HP04.12H20 0,67 g/1

Glucose 0,1 g/1

Pluronic® 60L 0,4 ml/1

10 Autoklaveret i 1 time ved 120°C

Efter 1 dags gæring blev 200 liter kulturvæske anvendt til at pode en konventionel omrørt beluftet gæringstank med 1500 liter medium med nedenstående sammensætning: Gærekstrakt 20 g/1 15 Tween-81 24 g/1

CaCl2-2H20 0,1 g/1

MgS04.7H20 2 g/1

Pluronic® 60L 0,4 ml/1 Gæringstiden var 2 dage for DSM 3959 og 3 dage for 20 DSM 3401. Yderligere skumdæmpningsmiddel (Nalco 4302/9) blev tilsat. Efter at gæringen blev stoppet blev cellerne dræbt ved varmebehandling i en time ved 55°C, pH 9,5 (indstilling med soda). pH blev indstillet til ca. 7,5 (med fosforsyre) før kulturvæsken blev inddampet ved 35°C til ca. 200 liter.

25 Lipasen blev derefter udvundet ved en fraktioneret ethanol-fældning mellem 50% w/w og 86% w/w ethanol og vakuumtørret.

EKSEMPEL 1

DK 164709B

ίο

Lipasestabilitet i detergentopløsning med protease

Opløsninger på 4,8 g/1 detergent No. .1 og 4 LU/ml lipase blev inkuberet i 30 minutter ved 30°C med eller uden 5 0,032 AU/1 protease. Lipaseaktivitet blev målt før og efter inkubation og er udtrykt i % af den tilsatte aktivitet.

DK 164709 B

11 ø C ^ o m m o m σ 0 O ·Η H CM rH in its ro g i—i

n c o to <—i i—i oor-tD

Sqr-iO-H Or-lOO Cl !~~

as <C g H rH ιΗ (M

cn

Its

CD

"8% C ο ο o oo m; cm S-Itno-H rH rH CM rH I—i a id n g ω Sh c a β iHCTitHrH CM rH σ

Hi οι oh oooo o rH r-

B W g rH r-t H

CD

4H

CD

^ ø β 0'S η η o cm cm rH

U] Ο -Η rH rH rH 00 Ή i-1 rH

its oo g

C

> c oo m cm m σι •m· m* fOO-H σι rH O CD σ> rH r~

CO 6 H rH rH

d ui o C Ο'^'Γ-Ο' oovoLTi

rH > Ο ·Η σΟΟΊιΗ H

CD 0 oo B rH CM

τ> z c il n β ro vd oo cm m cm o Q. "3 Ο -Η Οι—I O rH O rH 00

CO g rH rH rH OH

CD

CT> r—) o m 1-1 β CO 00 CO O CO CO r-j

SHgO-H CO O CO 00 rH rH

CD 3 oo g CM

ω ή as sy

ii 111 β r- co o 'cr CM 00 CO

OOO-H σοοοοο I—rHcO

Sh in g i-ι ^ _________________________ 4J β IT) 00 CM U1

β Ο -Η Ο Ο Ο Μ* ΓΗ σ CM

ØOOfc rH rH CM Ή rH

as cn tn sh as cd 04J β 00 Μ* -ΐΟ CO ^ _ 4JCDO-H σ rH O O 00 o o

OQ g rH rH CM σι rH OO

y § § 03 > DCD C oooo ooo

+JO-H OOOO OOO

in £ rHrHrHH H rH rH

0 _P__________________________ Η σ om -3< o g

oo oo ·· P

y y

2 S cn CD Q

CD co co c cn a CP P Q CD £ cn rH U & r .

® β as as cn -h g cn X

4H0-H-HCD r-ι P P 0 •H cn U 0 y -Η φ -H r-1 rHOSOSOCn Ur-lf-lg

U CD Or CL O 03 β rH ·Η P

CD To CD CD rH Sh CD -Η p --H

cncuu<+H>+H

Its -H CD -Η CD as ο, m · · · · i« c Oj tn -HQicncncncn øcpcnp ,ρ 0 P P (¾ (¾ «PCuh tn o m o m

rH rH CM CM

DK 164709 B

12

Det fremgår heraf, at Pseudomonas lipase ifølge opfindelsen har god aktivitet og stabilitet i detergentopløsninger. Ps. fragi lipase aktiveres stærkt af detergent, hvilket også fremgik af EP 204,284. Stabiliteten er næsten 5 upåvirket af proteaser ifølge opfindelsen (Fusarium og Subtilisin Novo), men stabiliteten af disse lipaser forringes ved tilsætning af andre proteaser.

Andre testede detergentlipaser udviser ringe stabilitet i detergentopløsninger selv uden protease.

10 EKSEMPEL 2

Proteasestabilitet i detergentopløsning

En opløsning af Detergent 1 (5 g/1) og en protease som nedenfor angivet (0,03 AU/1) blev inkuberet ved 22°C i det nedenfor angivne tidsrum. Proteaseaktivitet før og efter 15 inkubation blev målt på en Titertek Multiscan under anvendelse af et syntetisk oligopeptidsubstrat (Sigma No. S7388, Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA).

I Inkubations | % rest- | tid, timer | aktivitet

20 1 I

Proteaser ifølge | j opfindelsen: | j

I I

Fusarium | 1 | 105 25 Sub. Novo I 2,5 j 94

! I

Referenceproteaser: | |

I I

Alcalase® | 2,5 | 90 30 Savinase® j 1 | 91

Esperase® j 1 j 99

Det fremgår heraf, at alle proteaserne udviser god stabilitet.

EKSEMPEL 3

DK 164709 B

13

Lipasestabilitet ved vaskebetingelser

Vaskeflotte indeholdende 5 g/1 Detergent 1 eller 2, 0,03 AU/1 protease og 4 LU/ml lipase fra Ps. cepacia DSM 5 3401 i postevand blev anvendt.

Besmudsede lapper blev fremstillet ved at påføre 50 μΐ olivenolie (Sigma No. 0 1500) ved 60°C på en 7x7 cm ren bomuldslap. Lapperne blev ældet i 3 dage før brug.

I hvert forsøg blev 1000 ml vaskeflotte og 7 lap-10 per tilsat til et Terg-O-Tometerbæger og omrørt i 30 minutter ved 30°C. Lipaseaktiviten i opløsningen blev målt før og efter denne behandling. Terg-O-Tometeret er beskrevet i Jay C. Harris: Detergency Evaluation and Testing, Interscience Publishers Ltd. (1954), side 60-61.

15 Resultater er udtrykt i % af den tilsatte lipase- aktivitet.

I [ Detergent 1 |j Detergent 2

Protease j Lap jo min |30 minj|0 min 30 min 1 I 1 Π 20 Ingen | ren j 114 [ 112 j j 110 106

Ingen jbesmudsetj 113 [ 116 jj 104 93 i I I ΓΊ

Protease ifølge | | | II- opfindelsen j j j j j

25 I I I I I

Fusarium jbesmudsetj 100 j 94 jj 104 94

Sub. Novo jbesmudsetj 100 j 93 j j 86 76 j | j η

Referenceproteaser:| | | ||

30 I I I I I

Alcalase® |besmudset| 108 | 20 || 92 5

Savinase® jbesmudsetj 94 j 14 j j 71 3

Esperase®_jbesmudsetj 70 | 12 j j 7 3 j 2

Resultaterne uden protease viser, at lipasen ikke i 35 nævneværdig grad fjernes fra vaskeflotten ved adsorption på lappen eller besmudsningen med olivenolie.

DK 164709 B

14

Endvidere viser resultaterne, at lipasen har udmærket stabilitet i detergentopløsning uden protease, og omtrent den samme stabilitet, når protease ifølge opfindelsen tilsættes. Tilsætning af andre proteaser reducerer lipase-5 stabiliteten kraftigt.

EKSEMPEL 4

Proteasers vaskevirkning

Vaskeforsøg blev udført med Detergent 1 (5 g/1 i postevand) i et Terg-O-Tometer ved 30°C i 20 minutter med 10 omrøring på 100 omdrejninger pr. minut. Forsøg blev udført med 0 eller 0,03 AU/1 af den angivne protease, og med 0 eller 6000 LU/1 lipase fra Ps. cepacia DSM 3401.

Besmudsede spinatlapper blev fremstillet på en "Mathis' vaske- og tørreenhed" (Werner Mathis AG, Schweiz) i 15 kontinuerlig drift, hvorved bomuldsstof passerer gennem spinatsaft, presses mellem to ruller og derefter blæses tørt med 30°C termostateret luft. Lapperne blev ældet i 3 uger ved 20°C og blev opbevaret ved -18°C indtil brug.

Efter vask blev lapperne renset i koldt vand og 20 lufttørret, og vaskevirkningen blev fundet ved at måle re-flektionsværdien ved 460 nm.

I R46o ve<^ lipaseaktivitet I 0 LU/1 I 6000 LU/1 i-1 25 Protease: | |

I I

Ingen | 57,0 | 56,1

Fusarium (opfindelse) j . 76,5 I 76,1

Savinase (reference) j 73,8 j 73,1 30 Det fremgår heraf, at proteaserne er effektive, og at lipasen ingen indflydelse har på proteasevirkningen.

EKSEMPEL 5

DK 164709 B

15

Lipasers vaskevirkning

Vaskeforsøg med kombinationer af Pseudomonas cepacia DSM 3410 lipase og diverse proteaser under anvendelse 5 af 4-cyklus-besmudsningsvaskeprocedure blev udført som følger: 50 x 7 cm bomuldslapper blev anvendt.

Lipid/protein/ler besmudsning blev anvendt med en emulsion indeholdende (i vægt-%): 10 Olivenolie 14.4%

Stearinsyre 1.80

Monoglycerid (Grindtek MSP90) 1.80

Gelatin 0.90

Kaolin 1.35 15 Kønrøg (Degussa spez. schwarz 4) 0.18

Tusch (Rotring) 0.18

Vand 79.4

Lapperne henstod i mindst 2 dage efter hver besmudning.

20 Nedenstående vaskeprocedure blev anvendt:

Udstyr: Terg-O-Tometer

Detergent: Det. Nr. 1, 5 g/1

Temperatur: 30°C

Tid: 30 minutter

25 Hårdhed af vand: 18°dH

pH: ikke indstillet (ca. 9,5)

Lipasedosering: 0 eller 10.000 LU/1

Proteasedosering: 0 eller 0,3 AU/1

Stof/væske-forhold: 7 lapper/1000 ml

DK 164709 B

16

Efter 4 besmudsnings-/vaske cykluser blev det resterende fedtstof ekstraheret ved Soxhlet-ekstraktion, og indholdet af fedtstof (g fedtstof/g tekstil x 100) blev bestemt ved vejning, og sammensætningen af det ekstraherede 5 fedtstof blev analyseret ved TLC/FID. (TG = triglycerid, DG = diglycerid, MG = monoglycerid, FFA = fri fedtsyre, alle angivet i vægt-% af fedtstoffet).

Lipase Protease % resterende Sammensætning af fedtstof fedtstof (%)

10 TG DG MG FFA

4.81 75 6 14 4 3.28 40 24 14 21

Reference:

Alcalase® 4.32 86 15 10 8 15 Pseudomonas Savinase® 4.33 67 16 9 8 cepacia Esperase® 4.57 73 12 8 6 DSM 3401 _

Opfindelse:

Fusarium 3.55 49 24 12 15 20 Sub. Novo 3.49 51 22 12 15

Det fremgår, at i fraværelse af protease tjener lipase til at reducere mængden af resterende fedtstof og til at ændre dets sammensætning henimod en relativ stor mængde fri fedtsyre og en mindre mængde triglycerid. Lipaseeffekten 25 reduceres kun lidt ved tilsætning af protease ifølge opfindelsen, men effekten reduceres stærkt ved tilsætning af andre proteaser.

Claims

1. En detergentsammensætning, omfattende tensider, en protease og en lipase, kendetegnet ved, at lipasen er afledt af Pseudomonas, og at proteasen er afledt af Fusarium eller 5 er Subtilisin Novo.

2. Sammensætningen ifølge krav 1, kendetegnet ved, at proteasen er afledt fra oxysporum eller solani.

3. Sammensætningen ifølge krav 1-2, kendetegnet ved, at lipasen er afledt fra Ps. cepacia, Ps. fluorescens, Ps. 10 fragi, Ps. nitroreducens, Ps. mephitica, Ps. stutzeri, Ps. pseudoalcaligenes, Ps. gladioli eller Ps. aeruginosa, fortrinsvis fra Ps. cepacia, Ps. fluorescens eller Ps. fragi.

4. Sammensætningen ifølge krav 1 - 3, kendetegnet ved, at proteaseaktiviteten er over 0,001 AU(A)/g.

5. Sammensætningen ifølge krav 1-4, kendetegnet ved, at lipaseaktiviteten er over 20 LU/g.

6. Sammensætningen ifølge krav 1-5 omfattende anionisk overfladeaktivt materiale, fortrinsvis 5-30 vægt-%.

7. Sammensætningen ifølge krav 6, kendetegnet ved, at det 20 anioniske materiale er alkylbenzensulfonat, alphaolefinsulfo- nat eller alkoholethoxysulfat. 1 Et enzymatisk detergentadditiv omfattende en protease og en lipase, kendetegnet ved, at proteasen og lipasen er som defineret i krav 1-3. DK 164709B

9. Additivet ifølge krav 8, kendetegnet ved, at lipase-aktiviteten er over 500 LU/g.

10. Additivet ifølge krav 8 og 9, kendetegnet ved, at ! proteaseaktiviteten er over 0,5 AU(A)/g.