DK163502B - Racematet og den optiske (+)-isomer af den diastereomere alfa-form af 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3-(1-benzyl-3-piperidyl)ester-5-methylester og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling deraf samt farmaceutisk praeparat indeholdende disse - Google Patents

Description

i

DK 163502B

Denne opfindelse angår (+)-2,6-dimethyl-4-(3-nitrophe-nyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3-(l-benzyl-3-piperidyl)ester-5-methylester, hvis hydrochlorid har smeltepunktet 196-202 °C, betegnet som (+ )-a.-formen 5 blandt ‘ de diåstereomere af 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophe-nyl)-l,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3-(l-benzyl-3-piperidyl)ester-5-methylester med formlen (I).: ” _ «. XX Vr® 15 3 B 3 og dens optiske (+)-isomer, betegnet som (+)-a-formen, og salte deraf. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Forbindelserne ifølge opfindelsen har blodtryksænkende 2 virkning og dilaterende virkning på coronar-arterien og 3 de perifer blodkar og er nyttige som lægemidler for 4 cardiovasculær sygdom, f.eks. som hypotensiva, vasodila- 5 torer etc.

6 7 (+)-2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-l,4-dihydropyridin- 8 3,5-dicarboxylsyre-3-(l-benzyl-3-piperidyl)ester-5-me- 9 thylester, hvis hydrochlorid har smeltepunktet 236-242 10 °C, betegnes som (+ )-/5-formen.

11 12

Fra EP patentskrift nr. 63 365 Bl kendes blandt andet en 13 1,4-dihydropyridin-forbindelse svarende til den oven 14 stående formel I i form af en blanding af diåstereomere 15 [betegnet som α/5-formen]. Denne forbindelse er angivet at 16 have coronar og perifer vasodilaterende virkning og hypo-tensiv virkning.

2

DK 163502 B

Selv om det er kendt, at virkningen af blandinger af dia-stereomere ofte hovedsageligt kan tillægges den ene af de diastereomere, så er det meget overraskende, at (+)-a-formen og (+)-a-formen ifølge den foreliggende opfindelse 5 viser henholdsvis ca. 4,9 og ca. 6,2 gange så høj total vasodilaterende styrke og henholdsvis ca. 3,4 og ca. 3,0 gange længere virkningsvarighed end den kendte diastereo-merblanding, αβ-formen.

10 I det følgende anføres fremgangsmåder til fremstilling af (+)-a-formen.

Fremgangsmåde 1: 15 NO- c°r CHOC. λ. ΓΟ,Η + Ηθ/> * τί r 2 j—v JL JL VcH2“{o) •3 Η «3

III

II

25 .NO, (sOJ Ønsket reak- —* .sissr I {Diastereomerblanding [(+)-a-form, ( + )-/5-form] } 35 3

DK 163502 B

Esterificering af forbindelsen med formlen II (herefter betegnet som forbindelse II, ligesom de yderligere forbindelser med formlerne III-XI på tilsvarende måde betegnes som forbindelser III-XI) og forbindelsen III 5 udføres på konventionel måde, f.eks. ved: (a) en fremgangsmåde, hvorved forbindelsen II omdannes til et syrehalogenid under anvendelse af et halogene-ringsmiddel, og syrehalogenidet derpå omsættes med 10 forbindelsen III; (b) en fremgangsmåde, hvorved forbindelsen II omsættes med forbindelsen III i nærvær af et kondenseringsmiddel, såsom N,N'-dicyclohexylcarbodiimid; 15 idet fremgangsmåden (a), hvorved der anvendes et billigt halogeneringsmiddel (f.eks. thionylchlorid, phosphortri-chlorid, phosphorpentachlorid, phosphoroxychlorid eller phosphortribromid), er særlig fordelagtig.

20 I det følgende skal fremgangsmåden (a) under anvendelse af halogeneringsmidler forklares mere detaljeret.

Den fremgangsmåde, ved hvilken halogeneringsmidlet er 25 thionylchlorid, belyses ved følgende reaktionsligninger: NO NO.

& (gr

30 «bVvAcOjH S OCX 2 OjOjC 1 OOQ

GB^gAcHj α3^5λ(ΐ3

II TV

35 4

DK 163502 B

hoO /~\ ΓΗ Vn\ ch-°2c ^ . cor( ) 5 IIt ^Λ°> Υγ Ve-ch2-(5\ -> CH./YnY^CH ' V-/

3 H J

I {Diastereomerblanding [(+)-a-form, (+)-0-form]} 10 -> Ønsket reaktionsprodukt [(+)-a-form]

Reaktionen gennemføres med eller uden tilstedeværelsen af 15 halogenerede carbonhydrider, såsom dichlormethan, chloroform, carbontetrachlorid og chlorbenzen; aromatiske carbonhydrider, såsom benzen og toluen; ethere,· såsom tetra-hydrofuran og dioxan; aprotiske polære opløsningsmidler, såsom acetonitril, N,N-dimethylformamid og hexame- 20 thylphosphortriamid; eller aminer, såsom pyridin og tri-ethylamin. Reaktionen gennemføres fortrinsvis under anvendelse af thionylchlorid som halogeneringsmiddel i nærvær af Ν,Ν-diraethylformamid eller hexamethylphosphor-triamid som reaktionsopløsningsmiddel alene eller i 25 kombination med de ovennævnte opløsningsmidler.

Det molære forhold mellem carboxylsyren og thionylchlori-det er i området fra 1,0:0,8 til 1,0:2,0, fortrinsvis fra 1,0:0,9 til 1,0:1,2.

30

Det molære forhold mellem thionylchlorid og N,N-dimethyl-formamid eller hexamethylphosphortriamid er fra 1:1 til 1:100, fortrinsvis fra 1:5 til 1:50. 1

Reaktionen gennemføres ved temperaturer på fra -70 til 100 °C, fortrinsvis fra -20 til 50 °C.

5

DK 163502 B

Derpå omsættes den resulterende forbindelse IV (som ikke behøver at isoleres) med forbindelsen III til opnåelse af diastereomerblandingen {(+)-a-form og (+)-0-form} med formlen I.

5

Som opløsningsmiddel anvendes det samme opløsningsmiddel, som er anvendt ved fremstillingen af forbindelsen IV ud fra forbindelsen II.

10 Det molære forhold mellem forbindelsen II og forbindelsen III er i området fra 1,0:0,1 til 1,0:2,0, fortrinsvis fra 1,0:0,9 til 1,0:1,2, og reaktionstemperaturen er fra -70 til 100 °C, fortrinsvis fra -20 til 50 °C.

15 Fremgangsmåde 2: foT^ N°2 20 ra3°2CY^Y C02"O + (2)^2' *

V

25 r^VN°2 /—y Ønsket reak- CH,0~C T C0o—( ) -> tionsprodukt 3 2 VY 2 /~\ [ (-) -α-form] ao ΧΛ CH3^I <=3 I {Diastereomerblanding [(+)-a-form, (+ )-/)-form]} hvori Y betyder et halogenatom.

35

DK 163502B

6

Forbindelsen V, der anvendes som udgangsmateriale ved denne fremgangsmåde, opnås ved den fremgangsmåde, som er belyst ved de følgende reaktionsligninger, når det anvendte halogeneringsmiddel er thionylchlorid.

5 N0_ /V 2 ψ ^ ca3o2cXæ2B ch3o2c-^ coci 10 ch3^^-ch3 ch3 ch3

IV

TT

11 ^ H Cp2

CH, CH

-5 fi ^ 20

V

Det molære forhold mellem forbindelsen V og forbindelsen VI er i området fra 1,0:0,5 til 1,0:4,0, fortrinsvis fra 1,0:0,9 til 1,0:2,0.

25

Reaktionen gennemføres med eller uden tilstedeværelse af alkoholer, såsom isopropylalkohol og isobutylalkohol; aromatiske carbonhydrider, såsom benzen og toluen? halogenerede carbonhydrider, såsom chloroform, carbontetra-30 chlorid og chlorbenzen; ethere, såsom tetrahydrofuran, dioxan og dimethoxyethan? aprotiske polære opløsningsmidler, såsom acetonitril og Ν,Ν-dimethylformamid; eller vand med eller uden tilsætning af organiske baser, såsom triethylamin, n-butylamin og pyridin, eller uorganiske 35 baser, såsom natriumhydroxid, kaliumhydroxid og kalium-carbonat, til reaktionsblandingen, ved fra stuetemperatur til 200 °C, fortrinsvis 30-150 °C.

7

DK 163502 B

Fremgangsmåde 3: [En fremgangsmåde i overensstemmelse med den fremgangsmåde, der er beskrevet af M. Iwanami et al., Chem. Pharm.

5 Bull, 27, 1426 (1979)] ^ CO.R1 · f.2

10 \0}~CE - c + ^3° = CHC02R

^ coch3

VII VIII

15 r-^N>T°2

fO I

f Ønsket reak- » ch3o2c Y^co2-Q ^ X C- ^

20 CEL

3 E 3 I {Diastereomerblanding [(+)-a-form, (+)-Æ-form]} 25 1 2 hvori en af R og R betyder em methylgruppe, og den anden betyder en benzylpiperidylgruppe.

Det molære forhold mellem forbindelsen VII og forbin-30 delsen VIII er i området fra 1,0:0,8 til 1,0:4,0, fortrinsvis fra 1,0:0,9 til 1,0:1,5.

Reaktionen gennemføres med eller uden tilstedeværelse af alkoholer, såsom methanol, ethanol og isopropylalkohol; 35 aromatiske carbonhydrider, såsom benzen og toluen; halogenerede carbonhydrider, såsom chloroform og carbonte-trachlorid; ethere, såsom tetrahydrofuran, dioxan og di- 8

DK 163502 B

methoxyethan; aprotiske polære opløsningsmidler, såsom acetonitril og Ν,Ν-dimethylformamid; eller vand ved fra stuetemperatur til 150 °C, fortrinsvis 30-100 °C.

5 Fremgangsmåde 4; [En fremgangsmåde i overensstemmelse med den fremgangsmåde, der er beskrevet af M. Iwanami et al., Chem. Pharm.

Bull, 27, 1426 (1979)] 10 (OVcH = C -*· CH3C0CH2C02R2 15 '—' ^ C0CK3

VII XX

20 + ΝΗ^ (eller ammoniumsalt) -.....................— .........> γ^Υν°2 25 Ønsket reak- —* ira

1 I

CT3 30 1 35 {Diastereomerblanding [(+)-a-form, (+)-0-form]} 1 2 hvori R og R har de tidligere anførte betydninger.

DK 163502 B

g

Som ammoniumsalte, der kan anvendes i stedet for ammoniak, foretrækkes ammoniumacetat, ammoniumcarbonat etc.

Det molære forhold mellem forbindelsen VII, forbindelsen 5 IX og ammoniak er i området fra 1,0:0,8:0,8 til 1,0:4,0:4,0, fortrinsvis fra 1,0:0,9:0,9 til 1,0:1,5:1,5.

Reaktionen gennemføres med eller uden tilstedeværelse af alkoholer, såsom methanol, ethanol og isopropylalkohol; 10 aromatiske carbonhydrider, såsom benzen og toluen; halogenerede carbonhydrider, såsom chloroform, carbontetra-chlorid og chlorbenzen; ethere, såsom tetrahydrofuran, dioxan og dimethoxyethan; aprotiske polære opløsningsmidler, såsom acetonitril og Ν,Ν-dimethylformamid; eller 15 vand ved fra stuetemperatur til 150 °C, fortrinsvis 30-100 °C.

Fremgangsmåde 5; 20 [En fremgangsmåde i overensstemmelse med den fremgangsmåde, der er beskrevet af H. Herbert Fox er al., J. Org.

Chem. 16, 1259 (1951)] 1 2 3 4 5 6 7 8 35

VIII

2 °2n 3 *N^O^-CH0 + ce3coce2co2?} + 4

X XI

5 30 6

HEL

7 I 2 2 8 CH3C = CHC02B --—> 10

DK 163502 B

Ϊ5°2 \ΓΛ\ Ønsket re- —--> aktionsprodukt i ’ λλ J \ ' [(-)-a-form] 5 CE-O^C /\/C02\ ' c~ ^n-^cbu n—

3 h J

10 I {Diastereomerblanding [(+)-ff-form, (+)-0-form]> 1 2 hvori R og R har de tidligere anførte betydninger.

Det molære forhold mellem forbindelserne X, XI og VIII er 15 i området fra 1,0:0,8:0,8 til 1,0:4,0:4,0, fortrinsvis fra 1,0:0,9:0,9 til 1,0:1,5:1,5.

Reaktionen gennemføres med eller uden tilstedeværelse af alkoholer, såsom methanol, ethanol og isopropylalkohol; 20 aromatiske carbonhydrider, såsom benzen og toluen; halogenerede carbonhydrider, såsom chloroform og carbon-tetrachlorid; ethere, såsom tetrahydrofuran, dioxan og dimethoxyethan; aprotiske polære opløsningsmidler, såsom acetonitril og Ν,Ν-dimethylformamid; eller vand ved fra 25 stuetemperatur til 150 °C, fortrinsvis 30-100 °C.

Forbindelserne II, III og VI-XI, der anvendes som udgangsmaterialer ved fremgangsmåderne ifølge opfindelsen, er enten velkendte forbindelser eller forbindelser, der 30 opnås på konventionel måde.

Forbindelse II : T. Shibanuma et al., Chem.

Pharm. Bull., 28, 2809 (1980) 1

Forbindelse III : J.H. Biel et al., J. Org.

Chem., 26, 4096 (1961)

DK 163502B

11

Forbindelse VII : G. Jones, The Knoevenagel condensation, Org. Reaction, 15, 204 (1967) 5 Forbindelse VIII : S.A. Glickmann et al., J. Am.

Chem. Soc., 67, 1017 (1945)

Forbindelserne IX, XI : A.B. Boese, Ind. Eng. Chem., 32, 16 (1940) 10

Forbindelserne VI, X : lette at skaffe, da de er kommercielt tilgængelige.

I de reaktionsblandinger, der opnås ved fremgangsmåderne 15 1 til 5, forefindes en forbindelse [(+)-a-formen], hvis hydrochlorid har et smeltepunkt på 196-202 °C, og en forbindelse [( +)-0-formen], hvis hydrochlorid har et smeltepunkt på 236-242 °C. Disse er diastereomere i forhold til hinanden og skelnes fra hinanden ved tyndtlags-20 kromatografi (TLC-plade, Merck, Art 11798; udviklingsopløsningsmiddel dichlormethan/ethylacetat/triethylamin i volumenforholdet 50:50:1), hvorved en forbindelse, der viser en høj Rf-værdi, er (+)-e-formen. Isoleringen af den ønskede (+)-a-form fra blandingen indeholdende (+)-a-25 formen og (+)-Æ-formen gennemføres f.eks. ved de følgende procedurer.

Efter at reaktionsblandingen er blevet underkastet konventionelle behandlinger, såsom ekstraktion, koncentre-30 ring og søjlekromatografi, sættes gasformigt hydrogen-chlorid eller hydrogenchlorid opløst i et egnet opløsningsmiddel til reaktionsblandingen til dannelse af hydrochloridet (i det tilfælde at halogenet i det anvendte halogeneringsmiddel er chlor ved fremgangsmåden 35 1, dannes diastereomerblandingen med formlen I i form af hydrochloridet, således at denne behandling ikke nødvendigvis kræves gennemført som en særlig isoleringsmetode).

DK 163502B

12

Efter fjernelse af opløsningsmidlet, om nødvendigt, gennemfører man fraktioneret krystallisation fra et egnet enkelt opløsningsmiddel eller blandet opløsningsmiddel, hvorved (+)-a-formen udkrystalliserer, og (+)-Æ-formen 5 forbliver i opløsningen.

Som enkelte eller blandede opløsningsmidler, der er egnede til den fraktionerede krystallisation, kan nævnes ethanol, chloroform, ethanol-acetone, chloroform-acetone, 10 chloroform-ether, chloroform-ethylacetat etc. Særlig foretrukne er de blandede opløsningsmidler ethanol-ace-tone og chloroform-acetone.

I forbindelsen V, som er et udgangsmateriale ved frem-15 gangsmåde 2, foreligger (+)-a'-formen (en forbindelse, som bliver til (+)-a-formen, når diastereomerblandingen (I) fremstilles i overensstemmelse med fremgangsmåde 2), og ( + )-Æ' -formen (en forbindelse, der bliver til ( + )-/*-formen, når diastereomerblandingen (I) fremstilles i 20 overensstemmelse med fremgangsmåde 2), hvilke forbindel ser forholder sig til hinanden som diastereomere, ligesom det er tilfældet med de diastereomere, der er gengivet ved formlen I. Som følge heraf vil, hvis (+)-a'-formen af udgangsforbindelsen V anvendes selektivt, den diastereo-25 mere, der opnås ved fremgangsmåde 2, kun være (+)-a-for-men, således at behandlingen til isolering af (+)-a-for-men fra (+)-0-formen er unødvendig, og (+)-o-formen af forbindelsen I udvindes ved konventionelle behandlinger, såsom ekstraktion, koncentrering, søjlekromatografi og 30 krystallisation.

Som salte af forbindelserne ifølge opfindelsen kan nævnes uorganiske salte, såsom hydrochloridet, hydrobromidet, phosphatet og sulfatet, og salte af organiske syrer, så-35 som formiatet, acetatet, fumaratet, maleatet og malatet.

13

DK 163502 B

Dernæst anføres fremgangsmåder til fremstilling af (+)-a-formen.

Fremgangsmåde 6: 5 /V'°2 CH3°2C>v1^Y'C02H + H°'Q ^ 10 JL X CB X \9) C3-, h CH3

-> H

XIII XIV

15 (οΓκ°2 \ Ønsket reak- CH-O^C C°2 \ / --tionsprodukt » YT =.,-(0)

ό H

XXI

25 Som udgangsmateriale egner sig en optiske aktiv form, der har optisk rotation (-), eller et racemat af forbindelsen med formlen XIII (herefter betegnet som forbindelse XIII, idet forbindelserne med formlerne XII og XIV betegnes tilsvarende), og på lignende måde foretrækkes en optisk 30 aktiv form, der har optisk rotation (+), eller et racemat af forbindelsen XIV som udgangsmateriale. Mindst én af forbindelserne XIII og XIV skal være optisk aktiv.

Esterificeringen af forbindelserne XIII og XIV gennem-35 føres på konventionel måde, f.eks. ved:

DK 163502B

14 (a) en fremgangsmåde, hvorved forbindelsen XIII omdannes til syrehalogenidet under anvendelse af et halogene-ringsmiddel, og syrehalogenidet derpå omsættes med forbindelsen XIV; 5 (b) en fremgangsmåde, hvorved forbindelsen XIII omsættes med forbindelsen XIV i nærvær af et kondenseringsmiddel, såsom N,N'-dicyclohexylcarbodiimid; 10 idet fremgangsmåden (a), hvorved der anvendes et billigt halogeneringsmiddel (f.eks. thionylchlorid, phosphortri-chlorid, phosphorpentachlorid, phosphoroxychlorid og phosphortribromid), er særlig fordelagtig.

15 I det følgende skal fremgangsmåden (a) forklares mere detal j eret.

Den fremgangsmåde, ved hvilken halogeneringsmidlet er thionylchlorid, belyses ved følgende reaktionsligninger:

20 m t" N

^V^N02 ^ NO

ψ ψ

CH,OC 1 CO-,Ε SOCI- „ T

J 2· I V 2 2 y CH302C sA. C0C1

25 JY

3 H 3 CH-3 x ce_ -3 ϋ J ‘

k J

XIII · XV

30 / \ XIV CE, ΧεΗ2"{θ) ----- .. v 3 ιί 3 35 Vt- XI x

Reaktionen gennemføres med eller uden tilstedeværelse af 15

DK 163502 B

halogenerede carbonhydrider, såsom dichlormethan, chloroform, carbontetrachlorid og chlorbenzen; aromatiske carbonhydrider, såsom benzen og toluen; ethere, såsom tetra-hydrofuran og dioxan; aprotiske polære opløsningsmidler, 5 såsom acetonitril, N,N-dimethylformamid og hexamethylen-phosphortriamid; eller aminer, såsom pyridin og triethyl-amin. Reaktionen gennemføres fortrinsvis under anvendelse af thionylchlorid som halogeneringsmiddel i nærvær af N,N-dimethylformamid eller hexamethylphosphortriamid som 10 reaktionsopløsningsmiddel alene eller i kombination med de ovennævnte opløsningsmidler.

Det molære forhold mellem forbindelsen XIII og thionylchlorid er i området fra 1,0:0,8 til 1,0:2,0, fortrinsvis 15 fra 1,0:0,9 til 1,0:1,2.

Det molære forhold mellem thionylchlorid og N,N-dimethylformamid eller hexamethylphosphortriamid er fra 1:1 til 1:100, fortrinsvis fra 1:5 til 1:50.

'20

Reaktionen gennemføres ved temperaturer fra -70 til 100 °C, fortrinsvis fra -20 til 50 °C.

Derpå omsættes den resulterende forbindelse XV (som ikke 25 behøver at isoleres) med forbindelsen XIV til dannelse af forbindelsen XII.

Som opløsningsmiddel anvendes det samme opløsningsmiddel som ved fremstillingen af forbindelsen XV ud fra forbin-30 delsen XIII.

Det molære forhold mellem forbindelsen XIII og forbindelsen XIV er i området fra 1,0:0,8 til 1,0:2,0, fortrinsvis fra 1,0:0,9 til 1,0:1,2, og reaktionstemperatu-35 ren er fra -70 til 100 °C, fortrinsvis fra -20 til 50 °C.

16

DK 163502 B

Forbindelserne XIII og XIV, der anvendes som udgangsmaterialer, er velkendte forbindelser. Endvidere kan optisk aktiv forbindelse XIV også let fremstilles ud fra den kendte optisk aktive forbindelse XVI ved den følgende 5 reaktion:

HO-0 + ClCH2-{0> -¾. HO-Q

io W

m xrv (* betegner et asymmetrisk carbonatom).

15

Forbindelse XIII: T. Shibanuma et al-, Chem. Pharm.

Bull., 28, 2809 (1980)

Forbindelse XIV : H. Sievertsson et al., J. Med. Chem., 20 15, 1085 (1972).

Det ønskede produkt, (+)-a-formen, kan isoleres ud fra den således opnåede reaktionsblanding på følgende måde: 25 Dersom såvel forbindelsen XIII som forbindelsen XIV er optisk aktive forbindelser (forbindelsen XIII er (-)-formen, og forbindelsen XIV er (+)-formen), er produktet i hovedsagen kun (+)-a-formen; det ønskede produkt kan derfor isoleres ved procedurer som ekstraktion og koncen-30 trering, og om nødvendigt kan der også udføres søjlekromatografi .

Dersom enten forbindelsen XIII eller forbindelsen XIV er et racemat, kan det ønskede produkt isoleres ved søjle-35 kromatografi foruden ekstraktion, koncentrering etc., eftersom (+)-0-formen eller (-)-i-formen er indeholdt i reaktionsblandingen sammen med den ønskede (+)a-form. Man

DK 163502 B

17 kan yderligere, hvis det skønnes nødvendigt, omsætte det isolerede frie produkt med uorganiske syrer, såsom saltsyre, hydrogenbromidsyre, phosphorsyre og svovlsyre, eller organiske syrer, såsom myresyre, eddikesyre, fumar-5 syre, maleinsyre, æblesyre og vinsyre, til dannelse af salte deraf.

I det følgende skal redegøres for den hypotensive virkning af (+)-a-formen.

10

Hypotensiv virkning Prøvningsmetode 15

Voksne bastardhunde (8-15 kg) blev anæstetiseret ved intravenøs indgivning af 30 mg/kg natriumpentobarbital.

Hver kanyle blev indført i den venstre femorale arterie, og blodtrykket blev målt med en tryk-transducer (Nippon 20 Koden) og optegnet på en polygraf.

Den opnåede resultater er vist i tabel 1.

25 1 35

DK 163502 B

in co

O G +| +| I I

σ» ·Η oo O

• £ h co

Di Ό

C

•HOC Ν' cn

lO -H +| +| I I

U £ CO CD

0) cn μ

CD

X O C CO, CO, Η, CN, >i CO -H +| +| +| +|

μ £ Ν' CO CM H

μ (Nil

"O

0 Η

Λ O C CO, IS, <N, H

η Ή +! +1 +1 +1

£ CN Ν' HO

1 CN

Dl

Ό C CO, IS, CN, H

C CD H +| +| +1 +1

•H £ CN O CO CN

H CO

U S· Ή

C

X Η -H CN ΙΟ H CN

>i £ +1 +1 +1 +1

U CO Ν' Ν' CO

μ h o

O in C CN H H CN

H *· -Η + i +1 +1 +1'

m o £ CN_Ν'_CO_CN

s in o co

• ^ CO CN CN H

oo Di Di +1 +1 +1 +1

H *0 K O CO

c \

•Η £ Η Ν' S CO

£ in σ» N< o

S-l W H HH

μ X X

x m x tn X in x -ri x mx -h x ϊμ H>i H>i *H>i H>i μ η μ ομ η μ ομ μ ομ μμ ομ μμ ό μ ό coo μΌ ιη ό ο co ο α ο m ο c ο Η >ιΗ *Η Η κ^Η ·Η Η CQ ΏΑ QA ΙΩ Λ QJ3 μ Ό Η CD (0 Dl μ ·©. in co C in < μ ο μ *<—s

Dl ώί s o o

Dl Η H

Λ •—*

0) H

CO £ £ 0 η μ μ μ cd o ο μ η ό μ μ fi ci ιο

Η ·Η β X

0) Λ I I

λ μ '-τ ε (0 Ο+Ι +10

f Ci< ' •—'CD

DK 163502B

19

Som det fremgår af tabel 1, medførte (+)-a-formen en signifikant hypotensiv virkning 1 minut efter indgivningen, hvilken virkning varede i 90 minutter eller længere.

5 Prøvningsmetode

Den venstre renale arterie på hver bastardhund (9-18 kg) blev indsnøret under bedøvelse med natriumthiopental til 10 opnåelse af renalt hypertensive hunde. Blodtrykket under ikke-anæstetiserede betingelser blev målt hæmatoskopisk ved hjælp af en polyethylenkanyle (fastgjort til den bageste del af halsen), der var indsat i den nedadgående aorta igennem den venstre carotide aorta. Man indgav 15 lægemidlet, som var i suspension i 0,3% carboxymethylcel- lulose, peroralt i en dosering på 0,5 ml pr. kg kropsvægt, idet man anvendte et rør til peroral indgivning.

De opnåede resultater er vist i tabel 2.

20 25 1 35

DK 163502B

20

Tabel 2

Systolisk Diastolisk

Tid Dosis Antal blodtryk blodtryk 5 (timer) (mg/kg) forsøgsdyr (mmHg) (mmHg) 0 174/5 - 8,4 100,0 - 3,1 0,5 175,0 - 8,5 96,0 - 2,5 1 162,8 ± 7.0 88,5 - 4,6 10 2 166,0 - 6,5 91,5 - 3,4 3 0,1 4 169,8 - 7.7 94,8 - 3,1 4 170,3 - 7,1 96,8 - 3,5 5 168,8 - 6,6 97,5 - 3,8 6 166,3 - 7,1 98,3 - 3,8 15 7 172,3 - 6,5 99,0 - 4,7 0 173,4 ± 3,1 · 99,6 - 6,8 0,5 162,0 ± 13,2 87,0 - 8,8 1 138,6 - 15,6 76,0 - 11,3 20 2 137,2 ± 13,8 74,6 ±.11,5 3 0,3 5 138,8 ± 10,2 78,6 ± 8,6 4 136,0 ± 10,7 79,0 ± 7,6 5 141,4 ± 10,7 80,8 ± 7,5 6 145,4 ± 9,2 33,0 ± 7,7 25 7 147,2 ± 9,3 36,2 ± 7,7 0 160,6- 5,9 96,8 — 5,6 0,5 139,0 ± 14,9 76,8 ± 10,5 2 128,4 ± 11,3 62,6 ± 9,8 31 5 123,4 ± 7,1 63,6 ± 9,3 30 4 125,4 ± 8,2 63,6 ± 9,9 5 129,0 ± 7,7 64,3 ± 9,7 6 129,6 ± 9,1 70,6 ± 10,4 7 135,8 ± 8,9 73,2 1 10,6 o c +

Note: Anvendt forbindelse: (-)-a-rorm

DK 163502 B

21

Dernæst beskrives i det følgende sammenligningsprøvninger af den hypotensive virkning og den akutte toxicitet mellem (+)-e-formen og (+)-a-formen.

5 Hypotensiv virkning: 1. Intravenøs indgivning til SHR (ingen bedøvelse)

Spontant hypertensive rotter (SHR) (Okamotostammen, alder 10 20-30 uger, hanner) blev bedøvet med natriumthiopental (50 mg/kg, i.p.). En kanyle til måling af blodtryk blev indført i den nedadgående aorta fra den højre femorale arterie, og en kanyle til intravenøs indgivning blev indført i den venstre carotide vene, og hver af disse kany-15 ler blev fastgjort på bageste carotid. Ændringer i blodtrykket ved intravenøs indgivning af hvert af lægemidlerne blev målt den næste dag uden nogen bedøvelse. En opløsning af hvert af lægemidlerne i polyethylenglycol 400 blev indgivet intravenøst i en dosis på 0,1 ml/100 g 20 kropsvægt af rotten.

Resultaterne er vist i tabel 3.

Tabel 3 25

Maksimal sænk-Indgivet ning i gennem- dosis Antal snitsblodtryk

Forbindelse (ug/kg i.v.) forsøgsdyr (mmHg) 1 35 (+)-«-form 1 5 42,2 +11,5 (+)-a-form 10 5 67,4 + 4,7 (-)-a-form 10 5 23,4+7,9 (-)-«-form 100 5 27,3+6,1 (+)-a-form 1 5 23,1 + 6,4 (+)-a-form 10 5 45,6 + 6,5 22

DK 163502 B

2. Peroral indgivning til SHR (ingen bedøvelse) Ændringen i blodtryk, når lægemidlerne blev indgivet peroralt til spontant hypertensive rotter (SHR) (Okamoto-5 stammen, alder 15-26 uger, hanner) blev målt ved hale-plethysmografi-metoden (Ueda Seisakusho, USM-105R).

Lægemidlerne blev tvangsmæssigt indgivet peroralt i en dosis på 0,5 ml/100 g kropsvægt af rotten i form af en 10 suspension i 0,3% carboxymethylcellulose under anvendelse af et gastrisk rør.

Resultaterne er vist i tabel 4.

15 Tabel 4

Maksimal

Indgivet sænkning i 20 dosis Antal blodtryk

Forbindelse (ug/kg p.o.) forsøgsdyr (mmHg) (+)-a-form 1 8 56,3 + 13,0 (-)-a-form 3 4 22,5 + 9,6 25 (-)-a-form 10 4 30,0 + 5,3 (+)-a-form 1 8 35,6 + 6,3

Akut toxicitet 30 Lægemidlerne blev tvangsmæssigt indgivet peroralt til mus (ddY-type, kropsvægt 20-24 g, hanner), og overlevelsesraten 72 timer efter indgivningen blev undersøgt. En suspension af hvert af lægemidlerne i vand, hvortil der var 35 sat en lille mængde "Tween 80" blev indgivet peroralt i en dosis på 0,1 ml/10 g musekropsvægt, under anvendelse af et gastrisk rør.

23

DK 163502 B

Akut toxicitet LDgg (mg/kg p.o.) (+)-a-form 95 5 (-)-o-form 918 (+)-α-form 218

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan på grund af deres farmaceutiske virkning anvendes i forskellige farma-10 ceutiske præparationsformer med henblik på den påtænkte indgivningsmetode, og de anvendes især fortrinsvis i former til peroral indgivning, såsom tabletter og pulvere.

Når det drejer sig om tabletter, kan forbindelserne 15 ifølge opfindelsen være til stede i en mængde på 1-30 vægt-% pr. tablet. Som andre komponenter (bærestoffer) kan anvendes almindeligt anvendte excipienter, sprængmid-ler, glittemmidler, bindemidler, overtræksmidler etc. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Man kan f.eks. nævne excipienter, såsom glucose og lacto 2 se, sprængmidler, såsom stivelse og calciumcarboxymethyl- 3 cellulose, glittemidler, såsom magnesiumstearat og tal 4 kum, bindemidler, såsom almindelig sirup, polyvinylalko- 5 hol, gelatine og hydroxypropylcellulose, og overtræksmid- 6 ler såsom dispergeringsmidler (f.eks. methylcellulose og 7 ethylcellulose) og blødgøringsmidler (f.eks. glycerol og 8 polyethylenglycol). Mikrokrystallinsk cellulose har egen 9 skaber som sprængmiddel, som bindemiddel og som excipi- 10 ens.

11 12 Når det drejer sig om pulvere, kan forbindelserne ifølge 13 opfindelsen være til stede i en mængde på 1-20 vægt-%.

14

Som bærestoffer kan anvendes excipienter, såsom glucose 15 og lactose, bindemidler, såsom hydroxypropylcellulose og 16 lignende. LDj-q af ( + )-«-formen ved peroral indgivning til hanrotter er 127 mg/kg. Doseringen er fortrinsvis i området 1-100 mg pr. dag for et voksent menneske, der vejer 24

DK 163502 B

ca. 60 kg.

LD50 af (+)-a-formen ved peroral indgivning til hanrotter er 95 mg/kg. Doseringen er fortrinsvis i området 1-50 mg 5 pr. dag for et voksent menneske, der vejer ca. 60 kg.

Endelig beskrives i det følgende sammenligningsprøvninger af den femorale vasodilaterende aktivitet mellem omformen af 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-l,4-dihydropyri-10 din-3,5-dicarboxylsyre-3-(N-benzyl-3-piperidyl)ester-5- methylester-hydrochlorid, som er angivet i EP patentskrift nr. 63 365, og (+)-o-formen og (+)-e-formen ifølge den foreliggende opfindelsen.

15 Femoral vasodilaterende virkning

Prøvningsmetode 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

De anvendte dyr var voksne bastardhunde af begge køn, som 2 vejede 12-17 kg. Efter at have fremkaldt bedøvelse med 3 pentobarbital-Na, 35 mg/kg i.v., blev bedøvelsen opret 4 holdt med det samme anæstetikum ved intramuskulær injek 5 tion af 5 mg/kg pr. time. Der anvendtes et apparatur til 6 kunstigt åndedræt (Takashima Shoten), og for at forhindre 7 kollaps af lungen blev luften inhaleret via et kredsløb 8 med et overtryk på 3 cm H20, således at p02 ville være 9 100-120 mmHg og pC02 35-40 mmHg i det arterielle blod.

10

Perfusion af et baglem blev gennemført på følgende måde.

11

Efter injektion af 500 enh./kg heparin i.v. blev den 12 højre femorale arterie blottet. Aterielt blod, som blev 13 aftappet fra en arteriekanyle indsat i arteriens centrale 14 side (hjertesiden), blev indført i et lukket blodreser 15 voir i et bad holdt ved en konstant temperatur på 37 °C, 16 og blodet blev yderligere fremført til den samme arteries perifere side med en pumpe (Harvard peristaltic pump,

Model 1210). En Starling-modstand blev anbragt parallelt

DK 163502 B

25 med blodkredsløbet ved den femorale arteries perifere side for at perfusere under et konstant tryk (100 mmHg), og blodet blev fremført med pumpen, således at der var et konstant overløb. Dette overløbende blod blev sendt 5 tilbage til den venstre femorale vene. Det ydre kredsløb blev fyldt op med blod opsamlet fra en anden donorhund bedøvet med thiopental 20 mg/kg i.v. Blodstrømningen blev optegnet med en elektromagnetisk strømningsmåler (Nihon Koden, MF-27) udstyret med en ydre sonde med en indvendig 10 diameter på 3 mm. Prøveforbindelsen blev injiceret intraarterielt fra et gummirør i kredsløbet i 3 sekunder med en mikrokanyle. Endvidere blev heparin injiceret intravenøst med 100 enh./kg pr. time til forhindring af blodkoagulation. Den femorale blodstrømning blev fulgt, 15 indtil blodstrømningen vendte tilbage til før-behandlings-værdien. Området under den forøgede blodstrømningskurve (dvs. den totale styrke) for procent forøgelse i femoral blodstrømning efter intraarteriel injektion blev udregnet og anvendt som indeks for den 20 samlede forøgelse i femoral blodstrømning. Varigheden af strømningsforøgelsen (dvs. virkningsvarigheden) blev også målt.

Resultaterne er vist i tabel 5.

25 1 35

DK 163502B

26

Tabel 5

Femoral vasodilaterende virkning

Prøvefor- Dosis Antal Total styrke Virkningsvarig-5 bindelse (ug) hunde (%.min) hed (min) α/5-form 3 8 479,8+ 147,7 20,8+ 4,3 (+)-e-form 3 6 2340,2+1057,9 69,8+ 14,1 (+)-a-form 3 8 2971,7+ 625,7 61,8+ 9,0 10

Hver værdi repræsenterer gennemsnittet + standardafvigelse.

Det fremgår af de data, som er angivet i tabel 1, at den lo totale styrke af (+)-«-formen og (+)-a-formen er henholdsvis ca. 4,9 gange og ca. 6,2 gange så høj som af αβ-formen, og at virkningsvarigheden af (+)-a-formen og ( + )-α-formen er henholdsvis ca. 3,4 gange og ca. 3,0 gange så lang som af αβ-formen.

20

Opfindelsen belyses nærmere ved de følgende eksempler og referenceeksempler.

25 1 35 EKSEMPEL 1 27

DK 163502 B

(of™2 C.H 09C Av^C07H -i- BO-/ \ --—:* XX - .

10 ch/^ce3 -W

[0^°2 1 ς ,—v Ønsker reak- C5 o c ^ X, CO,-/ > -* ti?nsproaukt 3 2 '•X Ύ 2 \_jjZ _ [ (-)-a-fona] C,// =3 3 :ii 3 20

Diastereomerblanding [(+)-a-form, (+)-Æ-form] 10,00 g 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl )-l, 4-dihydropyri-25 din-3,5-dicarboxylsyre-monoethylester blev suspenderet i 70 ml af et blandet opløsningsmiddel bestående af di-chlormethan og N,N-dimethylformamid (volumenforhold 4:1) og 2,43 ral thionylchlorid blev sat til suspensionen under isafkøling. Efter omrøring i 1 time under isafkøling til-30 sattes 6,33 g l-benzyl-3-hydroxypiperidin efterfulgt af yderligere omrøring under isafkøling i 2,5 timer. Reaktionsblandingen blev vasket med 100 ml vand og derpå med 100 ml saltvand. Efter tørring af dichlormethanlaget over vandfrit natriumsulfat blev opløsningen koncentreret 35 under reduceret tryk. Derpå satte man 100 ml acetone og 8 ml methanol til koncentratet, hvorved der blev opnået 7,57 g af et gult stof bestående af 2,6-dimethyl-4-(3-

DK 163502 B

28 nitrophenyl) -1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3- (1-benzyl-3-piperidyl )ester-5-methylester, hydrochlorid [ ( +)-a-form]. Smeltepunktet var 197-198 °C (ethanol).

Denne forbindelse viste en enkelt plet på TLC (Merck, Art 5 11798; udviklingsopløsningsmiddel: dichlormethan/ethyl- acetat/triethylamin i volumenforholdet 50:50:1).

Fra moder luden til krystallerne blev derpå opnået 5,21 g (+)-Æ-form. Smeltepunktet var 239-240 °C (ethanol-metha-10 nol).

De fysiske egenskaber af ( + )-a-formen er vist i det følgende: 15 IR (KBr, cm-1): 1680, 1525, 1345 NMR (DMS0-dg)6: 1,3-2,2 (4H, bred) 2,33 (6H, s) 2,7-3,4 (4H, bred) 20 3,57 (3H, s) 4,40 (2H, s) 4,98 (IH, s) 5,20 (IH, bred) 7,3-8,2 (9H, m) 25 9,47 (IH, bred)

Grundstof analyse (som ^8^2^^3^6);

Beregnet: C 62,04 - H 5,96 - N 7,75 30 Fundet : C 62,16 - H 6,01 - N 7,76.

35 EKSEMPEL 2 29

DK 163502 B

fofN°2 5 CT3°2C/X|/“2<^> * BC1 CH, CH, 3 H 3 10 [ (±)-a‘-form] N°2 15 CH3°2CW C°2O ~ A JL x ^2-(0) CH- ^ CE, >—f 3 h 3 20 ønsket produkt [(+)-a-form] 1,35 g 2, 6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-l,4-dihydropyridin- 3,5-dicarboxylsyre-3-(l-benzyl-3-piperidyl)ester, hydro-chlorid [(+)-a'-form] med et smeltepunkt på 236-238 °C, 25 fremstillet i referenceeksempel 1, 0,25 g benzylchlorid og 0,62 g triethylamin blev sat til 20 ml THF, og der blev omrørt i 24 timer under tilbagesvaling. Reaktionsblandingen blev hældt ud i 50 ml vand. Blandingen blev ekstraheret to gange med 30 ml ethylacetat. Ethylace-30 tatlagene blev kombineret og tilsat 10 ml 4N saltsyre.

Efter kraftig omrøring af blandingen i 1 time blev ethylacetatlaget vasket med 20 ml saltvand og derpå med 10 ml vand. Efter tørring over vandfrit natriumsulfat blev blandingen koncentreret under reduceret tryk. Til 35 koncentratet sattes 100 ml af et blandet opløsningsmiddel bestående af chloroform og acetone (volumenforhold 1:9), og blandingen blev omrørt, hvorved der blev opnået 1,22 g 30

DK 163502 B

af et gult stof bestående af 2,6-dimethyl-4-(3-nitro-phenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3-(1-benzyl -3-piperidyl)ester-5-methylester, hydrochlorid [( + )-<*-form]. Smeltepunktet var 197-198 °C (ethanol). TLØ-, IR-5 og NMR-spektrene for forbindelsen fremstillet i dette eksempel var identiske med værdierne for den i eksempel 1 fremstillede (+)-o-form.

EKSEMPEL 3 10 /¾¾ r-\ /oVCH = c + CH3C = chco9 ) 15 ^ XC0CE3 ' N-CH2-<g> 20 -> Diastereomerblanding ——> Ønsket produkt [(+ )-a-form, ( + )-/)-form] [ (+)-a-form] 2,49 g methyl-3-nitrobenzyliden-acetoacetat og 2,74 g 3-25 aminocrotonsyre-l-benzyl-3-piperidylester blev sat til 10 ml ethanol, og der blev omrørt i 10 timer under tilbagesvaling. Reaktionsblandingen blev koncentreret under reduceret tryk, og fraktioner indeholdende den ønskede forbindelse [(+)-a-form] blev adskilt derfra ved silicagel-30 søjlekromatografi (elueringsmiddel: chloroform/methanol i volumenforholdet 20:1). Efter koncentrering af de fraktioner, der indeholdt den ønskede forbindelse, blev koncentratet opløst i 40 ml chloroform og tilsat 10 ml 4N saltsyre. Blandingen blev kraftigt omrørt. Derefter blev 35 chloroformlaget vasket to gange med 20 ml vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og atter koncentreret. Til koncentratet blev sat et blandet opløsningsmiddel bestå- 31

DK 163502 B

ende af 3 ml ethanol og 27 ml acetone, og blandingen blev omrørt, hvorved der blev opnået 1,61 g gult stof bestående af 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-l,4-dihydropyridin- 3,5-dicarboxylsyre-3-(l-benzyl-3-piperidyl)ester-5-me-5 thylester, hydrochlorid [(+)-a-form]. Smeltepunktet var 197-198 °C (ethanol). TLC-, IR- og NMR-spektrene for forbindelsen fremstillet i dette eksempel var identiske med værdierne for den i eksempel 1 fremstillede (+)-a-form.

10 EKSEMPEL 4 °2N \_ ^C02CH3

15 V~y CH= c\ + ch3coch2co2-0 + NH

OOCH, ' N · /-λ.

3 20 ........> Diastereomerblanding -> Ønsket produkt [(+)-a-form, ( + )-/)-form] [(+ )-a-form] 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 4,98 g methyl-3-nitrobenzyliden-acetoacetat, 6,05 g ace- 2 toeddikesyre-l-benzyl-3-piperidylester og 1,76 g 29% 3 vandig ammoniakopløsning blev sat til 20 ml ethanol, og 4 der blev omrørt i 12 timer under tilbagesvaling. Reak 5 tionsblandingen blev behandlet på samme måde som i 6 eksempel 3, hvorved der blev opnået 3,02 g 2,6-dimethyl- 7 4- (3-nitrophenyl) -1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre- 8 3-(l-benzyl-3-piperidyl)ester-5-methylester, hydrochlorid 9 [(+ )-et-form]. Smeltepunktet var 196,5-198 °C (ethanol).

10 TLC-, IR- og NMR-spektrene for forbindelsen fremstillet i 11 dette eksempel var identiske med værdierne for den i eksempel 1 fremstillede (+)-a-form.

EKSEMPEL 5 32

DK 163502 B

ς °2N NH_ 'Ny~\ I 2 (Qyceo + cs3c = chco2ch3 + ch3coch2co2-Q -* 10

Diastereomerblanding Ønsket produkt 15 [(+)-a-form, ( + )-/5-form] [(+)-a-form] 3,02 g m-nitrobenzaldehyd, 2,53 g methyl-Ø-aminocrotonat og 5,50 g acetoeddikesyre-l-benzyl-3-piperidylester blev sat til 10 ml THF, og der blev omrørt i 19 timer under 20 tilbagesvaling. Reaktionsblandingen blev koncentreret under reduceret tryk, og fraktioner indeholdende den ønskede forbindelse blev adskilt fra koncentratet ved sili-cagel-søjlekromatografi (elueringsmiddel: chloroform/ace-tone i volumenforholdet 9:1), og koncentreret. Koncentra-25 tet blev opløst i 70 ml acetone og indstillet til pH 1 med ether, der var mættet med hydrogenchlorid. Der blev yderligere tilsat ether, hvilket gav 2,10 g gule krystal ler. Smeltepunktet var 176-178 °C. Omkrystallisation fra acetone-ethanol (volumenforhold 9:1) gav 0,93 g 2,6-30 dimethyl-4- (3-nitrophenyl) -1,4-dihydropyridin-3,5-dicar- boxylsyre-3-( l-benzyl-3-piperidyl )ester-5-methylester, hydrochlorid [(+)-a-form]. Smeltepunktet var 197-198,5 °C. TLC-, IR- og NMR-spektrene for forbindelsen fremstillet i dette eksempel var identiske med værdierne for den 35 i eksempel 1 fremstillede (+)-a-form.

EKSEMPEL 6 33

DK 163502 B

5 (OJ 1- 50C12 CH,0-C jT C0oH ——> TY 2- so-0 ch3A„Ach3 *Nsa-(g}

(-)-xiii (+)-XXV

X5 ΥΓΝ°2 CH3°2Cv^v. æ2\J _ 1 I ' ^-/o) .

3 H 3 20 [ (+)-a-foxia] 1 17 ml af et blandet opløsningsmiddel bestående af di-25 chlormethan og Ν,Ν-dimethylformamid (volumenforhold 4:1) blev suspenderet 2,50 g (-)-2,6-dimethyl-4-(3-nitrophe-nyl)-1,4-dihydropyridin-3, 5-dicarboxylsyremonomethyles-ter, og til suspensionen blev under isafkøling sat 0,57 ml thionylchlorid. Efter omrøring under isafkøling i 30 1 time blev 1,5 g ( + )-l-benzyl-3-hydroxypiperidin, frem stillet i referenceeksempel 2, sat til blandingen og omrøringen blev fortsat under isafkøling i yderligere 2 timer. Reaktionsblandingen blev fortyndet med 25 ml di-chlormethan og vasket med 30 ml vand og derpå med 30 ml 35 saltvand. Dichlormethanlaget blev tørret over vandfrit natriumsulfat og koncentreret under reduceret tryk. Koncentratet blev underkastet silicagel-søjlekromatografi 34

DK 163502 B

(elueringsmiddel: chloroform/ethylacetat i volumenforholdet 1:1), og fraktioner indeholdende det ønskede produkt blev koncentreret. Til koncentratet sattes 30 ml chloroform og 10 ml 4N saltsyre. Efter kraftig omrøring af 5 blandingen blev chloroformlaget vasket to gange med 20 ml vand og derpå tørret over vandfrit natriumsulfat og koncentreret til tørhed, hvorved der blev opnået 4,20 g af et amorft pulver. Pulveret blev opløst i 15 ml acetone, og denne opløsning blev sat til 200 ml ether.

10 Blandingen blev omrørt til dannelse af bundfald. Bundfaldet blev frafiltreret og tørret, hvilket gav 2,72 g (+)-e-2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin- 3,5-dicarboxylsyre-3-(l-benzyl-3-piperidyl)ester-5-me-thylester, hydrochlorid [(+)-a-form].

15 [e]D/21 +113,6 (c = 0,50, acetone) IR (KBr, cm"1): 1680, 1525, 1350 20 NMR (DMSO-dg)s: 1,3-2,2 (4H, bred) 2,33 (6H, s) 2,7-3,4 (4H, bred) 3,57 (3H, s) 4,40 (2H, s) 25 4,98 (IH, s) 5,20 (IH, bred) 7,3-8,2 (9H, m) 9,47 (IH, bred) 2 35 2 EKSEMPEL 7 35

DK 163502 B

- ’ ^ . N0_ jgf ^ S0C12_

CH3°2CV>V>C02H 2- Z0-O

V-k ,—v CE^^CH, ^2-(0) 10 3 H 3 v__/

XXIX (+,-XIV

15 (όΓν°2 -* W-a-far»

- J L

CH, g"^CE. -2 YT/

20 3 h J

•XII (blanding) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 I 17 ml af et blandet opløsningsmiddel bestående af di- 2 chlormethan og N,N-dimethylformamid (volumenforhold 4:1) 3 blev suspenderet 2,50 g 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl )- 4 1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyremonomethylester, og 5 til suspensionen sattes under isafkøling 0,57 ml thionyl- 6 chlorid. Efter omrøring under isafkøling i 1 time blev 7 1,51 g ( + )-l-benzyl-3-hydroxypiperidin, fremstillet i re 8 ferenceeksempel 2, sat til blandingen, og omrøringen 9 under isafkøling blev fortsat i yderligere 2 timer og 40 10 minutter. Reaktionsblandingen blev fortyndet med 50 ml 11 dichlormethan og vasket med 50 ml 5% natriumhydrogen-carbonat, 50 ml vand og derpå med 50 ml saltvand. Di-chlormethanlaget blev tørret over vandfrit natriumsulfat 36

DK 163502 B

og koncentreret under reduceret tryk. Koncentratet blev underkastet silicagel-søjlekromatografi (elueringsmiddel: chloroform/ethylacetat/triethylamin i volumenforholdet 50:50:1) til adskillelse af (+)-a-formen fra (+)~0-for-5 men. Fraktioner indeholdende den ønskede (+)-a-form blev koncentreret og opløst i 20 ml acetone. Til opløsningen sattes 5 ml 4N saltsyre. Efter omrøring af blandingen blev acetonen fjernet ved afdestillation under reduceret tryk. Til den inddampningsrest, som blev tilbage efter 10 koncentreringen, sattes 20 ml chloroform. Chloroformlaget blev vasket to gange med 20 ml vand og derpå tørret over vandfrit natriumsulfat og koncentreret til tørhed, hvilket gav 1,02 g af et amorft pulver bestående af ( + )-a-2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-15 dicarboxylsyre-3-(l-benzyl-3-piperidyl)ester-5-methyles- ter, hydrochlorid [(+)-a-form].

[a]D/21 +110,7° (c * 0,50, acetone).

20 IR- og NMR-spektrene var identiske med værdierne for den i eksempel 6 fremstillede ( + )-et-form.

REFERENCEEKSEMPEL 1 N0n 25 foT " i) soci2 CH302csyyc°2H --> _ i 2) H0~( ) - IICl CH, V. -Nj

3 II 3 E

30 . ψ 35 CH3°2C Z02~(^) ‘ EC1

i H

CIT^^N·^ CE 3 h 3 37

DK 163502 B

3,31 g 2, 6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-l,4-dihydropyridin- 3.5- dicarboxylsyremonomethylester blev suspenderet i 23 ml af et blandet opløsningsmiddel bestående af dichlor-methan og Ν,Ν-dimethylformamid og der blev yderligere sat 5 1,32 g thionylchlorid til suspensionen under isafkøling.

Efter omrøring af blandingen under isafkøling i 1 time tilsattes 1,51 g 3-hydroxypiperidin, hydrochlorid, og blandingen blev yderligere omrørt i 1 time og 20 minutter under isafkøling. Efter at reaktionen var ført til ende, 10 blev reaktionsblandingen opløst i 50 ml chloroform, og opløsningen blev vasket med 40 ml vand. Derpå tilsattes 40 ml IN natriumhydroxidopløsning, og blandingen blev kraftigt omrørt. Chloroformlaget blev skilt fra. Efter vaskning af chloroformlaget to gange med 20 ml vand blev 15 chloroformlaget koncentreret. Koncentratet blev opløst i 20 ml acetone, og til opløsningen blev sat 2 ml koncentreret saltsyre. Omrøring under isafkøling gav 2,07 g 2.6- dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-di-carboxylsyre-3-methyl-5-(3-piperidyl)ester, hydrochlorid 20 [(+)-«’-form].

Smeltepunkt 236-238 °C.

IR (Nujol, cm"1): 1696, 1530, 1350.

25 NMR (DMSO-dg)6: 1,4-2,1 (4H, bred) 2.32 (3H, s) 2,35 (3H, bred) 2.7- 3,3 (4H, bred) 30 3,56 (3H, s) 4.7- 5,2 (IH, bred) 5,05 (IH, s) 7,4-8,1 (4H, m) 9.33 (IH, s) 35 38

DK 163502 B

Grundstof analyse (som C2iH25N3°6/HC1^'

Beregnet: C 55,81 - H 5,80 - N 9,30

Fundet : C 55,73 - H 5,74 - N 9,42.

5

Yderligere blev der fra moderluden til de ovennævnte krystaller opnået 1,27 g 2,6-dimethyl-4~(3-nitrophenyl)- 1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3-methyl-5-(3-pipe-ridyl)ester, hydrochlorid [(+)-5’-form], som havde et 10 smeltepunkt på 248,5 °C.

REFERENCEEKSEMPEL 2 ηο-Λ"') + /0Vch2ci

Vnh K^ch2-Æ)

(-)-XVI (+)_XIV

20

Efter omrøring af 8,53 g (-)-3-hydroxypiperidin, 7,72 g benzylchlorid og 6,17 g triethylamin i 70 ml toluen i 5 25 timer under tilbagesvaling blev blandingen filtreret, og filtratet blev koncentreret under reduceret tryk. Inddampningsresten blev destilleret under reduceret tryk, hvorved der blev opnået 2,49 g af et destillat, som havde et kogepunkt på 103,8 °C/0,5 mmHg.

30 [a]D/23 +11,9° (c = 2,14, methanol).

35 REFERENCEEKSEMPEL 3 39

DK 163502 B

5 ψ CE3°2C YY C02H ~7=T ^ CH3^N^CH3 2·

10 (+1-XIII (-)-XIV

φ" /—\ S-^CH. 2 VZ/ xi

20 XII f (-)-a-forraJ

På lignende måde som i eksempel 6 blev der fremstillet 25 3,16 g amorft pulver bestående af (-)-a-2,6-dimethyl-4- (3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3-(l-benzyl-3-piperidyl )ester-5-methylester,hydrochlorid, undtagen at der blev anvendt 2,50 g (+)-2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-30 monomethylester og 1,51 g (-)-l-benzyl-3-hydroxypiperidin i stedet for henholdsvis (-)-2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl ) -1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-monomethyl-ester og (+)-l-benzyl-3-hydroxypiperidin som anvendt i eksempel 6.

[a]D/22 -110,2° (c = 0,24, acetone).

35

Claims (13)

1. 2. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse 20 ifølge krav 1 i (+)-a-formen eller et salt deraf, kendetegnet ved, at man omsætter en syre med formlen II: & CIi3°2C °°2Ή (n) CH, ^ CH,
2. 3 H 3 30 med en alkohol med formlen III: H0-O (III)
3. 35 A_N-ce2-{0> DK 163502 B til dannelse af en diastereomerblanding med formlen I og derpå underkaster diastereomerblandingen en fraktioneret krystallisation til isolering af (+)-a-formen, der om ønsket omdannes til et salt deraf. 5
4. 3. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1 i (+)-e-formen eller et salt deraf, kendetegnet ved, at man omsætter en piperidylester med formlen V: 10 (δΓΝ°2 a302C^X^“2-O <V> '—N
5. 15 J. - ^
6. 3 H 3 med et benzylhalogenid med formlen VI: 20 ((5)— ^2* (Vi) 25 hvori Y betegner et halogenatom, til dannelse af en diastereomerblanding med formlen I og derpå underkaster diastereomerblandingen en fraktioneret krystallisation til isolering af (+)-a-formen, der om ønsket omdannes til et salt deraf. 30
7. 4. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1 i (+)-a-formen eller et salt deraf, kendetegnet ved, at man omsætter en forbindelse med formlen VII: 35 02N (OV-CH = C 7 ^coch3 (VII) DK 163502 B med en forbindelse med formlen VIII NH0 I 2 CH^-C = CHC0oR2 (-VIII) 5 d 2 1 2 hvori en af R og R er methyl og den anden benzylpi-peridyl, til dannelse af en diastereomerblanding med formlen I og derpå underkaster diastereomerblandingen en fraktioneret krystallisation til isolering af (+)-a-for-men, der om ønsket omdannes til et salt deraf.
8. 5. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1 i (+)-a-formen eller et salt deraf, kendetegnet ved, at man omsætter en forbindelse med formlen VII: °2"-W /C02EX 20 (OVCH-C (VII, ^C0CH3* med en ester med formlen IX: 25 CH3C0CH2C02R2 (IX) 1 2 hvori R og R har den i krav 4 angivne betydning, og med NH« eller et ammoniumsalt til dannelse af en diastereo- on ^ merblanding med formlen I og derpå underkaster diastereomerblandingen en fraktioneret krystallisation til isolering af (+)-a-formen, der om ønsket omdannes til et salt deraf.
9. 6. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1 i (+)-a-formen eller et salt deraf, k e n - DK 163502 B detegnet ved, at man omsætter et aldehyd med formlen X: °2K \ 5 /qVcSO (χ) med en forbindelse med formlen XI:
10. 10 CHgCOCI^COjgR1 (XI) og med en forbindelse med formlen VIII: NH- I 2
11. 15 CH3"C = CHC02R2 (VIII) 1 2 hvori R og R har den i krav 4 angivne betydning, til dannelse af en diastereomerblanding med formlen I og derpå underkaster diastereomerblandingen en fraktioneret 20 krystallisation til isolering af (+)-a-formen, der om Ønsket omdannes til et salt deraf.
12. 7. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1 i ( + )-a-formen eller et salt deraf, k e n -detegnet ved, at man omsætter en carboxylsyre i racemisk eller optisk aktiv (-)-form med formlen XIII: ΓΥ™2 30 ''S'' (XIII) CH3°2C Y^yc02E -3 3 3 35 DK 163502B med en alkohol i racemisk eller optisk aktiv (+)-form med formlen XIV: 5 \_n' /7^\ (XIV) ^α2·{0) idet mindst én af forbindelserne med formlen XIII eller 10 XIV er optisk aktiv, til dannelse af en forbindelse med formlen XII: 15 (df CH 0 C X CO,-O (XII> U 20 og derefter isolerer den i krav 1 definerede forbindelse i (+)-a-formen fra reaktionsblandingen på konventionel måde, dersom såvel forbindelsen XIII som forbindelsen XIV 25 er optisk aktive forbindelser, eller ved søjlekromatografi, dersom enten forbindelsen XIII eller forbindelsen XIV er et racemat, hvorpå den isolerede forbindelse om ønsket omdannes til et salt deraf. 1 35
13. 8. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det indeholder en farmaceutisk bærer og som aktiv bestanddel en effektiv mængde af en forbindelse ifølge krav 1.