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Verfäliren zur Gewinnung von Oxytetracyclinkomplexsalzen und reinem
Oxytetracyclin Die Erfindung bezieh sich auf die Gewinnung von reinem Oxytetracyclin,
bekannt unter dem Warenzeichen »Terramycin«, insbesondere in Form von Komplexsalzen
aus seinen wäßrigen oder anderen Lösungen.
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Die Herstellung der Oxytetracyclinrohlösung erfolgt nach dem Verfahren
der USA.-Patentschrift 2 5.16 oso.
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Bei der Gewinnung von Oxyteträcyclin aus den Nährflüssigkeiten, z.
B. nach dem Verfahren der USA.-Patentschrift 2 516 o8o, gehen infolge seiner. Löslichkeit
und derjenigen seiner mehr oder weniger unlöslichen, bisher bekannten Verbindungen
beträchtliche Mengen verloren. Das Verfahren der vorliegenden Erfindung gestattet
die Herstellung von reinem Oxytetraeyclin, ohne daß solche Verluste eintreten.
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Es wurde festgestellt, daß sich ein Teil der antibiotisch wirksamen
Bestandteile aus wäßrigen Oxytetracyclinrohlösungen zeitweilig niederschlägt, wenn
man einer Gärbrühe, die 6oo y je ccm oder mehr Oxytetracyclin enthält, Alkali zusetzt.
Dieser Niederschlag, löst sich jedoch wieder, wenn die Lösung stark alkalisch gemacht
wird, er bleibt aber bei einem pH-Wert von etwa 8,5 bis 9 bestehen. Ein Teil des
Oxytetracyclins bleibt jedoch in Lösung. Es wurde weiterhin festgestellt, daß der
Niederschlag aus Metallkomplexsalzen des Oxytetracyclins besteht und verschiedene
zweiwertige Metalle, wie Calcium und
Magnesium, enthält. Diese zweiwertigen
Metalle sind als Verunreinigungen in vielen wäßrigen Oxytetracyclinrohlösungen ohnehin
anwesend, jedoch selten in solchen Mengen, daß eine zufriedenstellende Aus-- fällung
des Antibiotikums zum Zwecke der Gewinnung gewährleistet wild. Der Zusatz weiterer
Mengen ausgewählter zweiwertiger Metallionen zu diesen Lösungen bewirkt jedoch eine
ziemlich vollständige Ausfällung des Antibiotikums und stellt somit ein wertvolles
Verfahren zum Konzentrieren und Reinigen von Oxytetracyclin aus seinen wäßrigen
Rohlösungen dar.
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Es wurde nun gefunden, daß man wirksames Oxytetracyclin in Form einer
gemischten Komplexverbindung mit mindestens einem der Metalle Barium, Strontium
oder Calcium zusammen mit mindestens einem der Metalle Magnesium, Zink, Beryllium,
Cadmium oder Quecksilber wirksam aus wäßrigen Lösungen bei einem p11-Wert von etwa
7 bis io ausfällen kann. Bestimmte Metalle bilden Niederschläge, wodurch der größte
Teil des Oxytetracyclins auch aus sehr verdünnten wäßrigen Lösungen, z. B. aus Gärlösungen,
ausgefällt wird. Diese besonders wirksamen Metallpaare sind Calcium-Magnesium, Barium-Magnesium
und Barium-Zink, wobei das zweite mit Oxytetracyclin eine Komplexverbindung bildet,
welche die niedrigste Löslichkeit der bisher bekannten überhaupt besitzt. Bei Verwendung
von Barium-Magnesium-Salzen wird das Oxytetracyclin bis auf eine Konzentration von
etwa 6o y je ccm vollständig aus den Nährlösungen entfernt. Obwohl die Ausfällung
bei einem pH-Wert von nur 5 beginnt und der Niederschlag sich erst bei einem pH-Wert
von über io merklich löst, wurde gefunden, daß es vorteilhafter ist, bei einem pH-Wert
zwischen etwa 8 und 9 zu arbeiten.
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Das gefällte Oxytetracyclinsalz>ist reiner als .das in den Nährlösungen
gelöste. Danach ist -es möglich, das gefällte Oxytetracyclin weiter zu reinigen
und in eine Form zu bringen, in der es sich zur therapeutischen Verwendung eignet.
Außerdem gelingt eine solche Reinigung mit nur sehr geringem Gesamtverlust an wirksamer
Substanz. Diese Behandlung kann auch dazu dienen, um Oxytetracyclin aus Rückständen
oder Mutterlaugen von anderen Herstellungsverfahren zu gewinnen.
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Das Mengenverhältnis der Metallsalze; die zugesetzt, werden müssen,
um möglichst das gesamte Oxytetracyclin aus einer bestimmten Lösung zu entfernen,
richtet sich jeweils nach dem Oxytetracyclingehaltsowie der Art und dem Prozentsatz
der anderen gelösten Stoffe. Es benötigen z. B. verschiedene saure Verunreinigungen,
sowohl organischer als auch anorganischer Art, die in Gärlösungen anwesend sein
können und mit den zugesetzten -Metallverbindungen unlösliche Stoffe bilden, zunächst
eine -bestimmte, Menge an Metallsalz -zur Ausfällung, bevor sich das Oxytetracyclin-Metallkomplexsalz.
vollständig abscheidet. Dies trifft insbesondere -bei Nährlösungen zu, die durch
Schwefelsäurebehandlung gereinigt wurden, wobei beträchtliche Mengen eines Metallsalzes,
z. B. Barium, benötigt werden, um die Säure als Bariumsulfat auszufällen, bevor
sich Oxytetracyclin abzuscheiden beginnt. Durch Vorversuche ist es möglich, die
genaue Menge der anzuwendenden Metallsalze zu bestimmen, die man für eine möglichst
vollständige Ausfällung benötigt. Im allgemeinen zieht man es vor, ein lösliches
Bariumsalz und ein lösliches Magnesiumsalz in geringem Überschuß zuzusetzen. Das
Verhältnis der verwendeten Magnesium- und Bai'iumsalze zueinander beträgt in manchen
Fällen i _ 2;_ es kann sich jedoch je nach dem Sulfatgehalt und den anderen in der
Lösung anwesenden Verunreinigungen ändern. Bei Lösungen, welche mit Salzsäure gereinigt
wurden, benötigt man eine geringere Menge Bariumsalz. Das Mengenverhältnis der Metallatome
zudem Oxytetracyclin in den Niederschlägen ist nicht feststehend, sondern ändert
sich je nach dem Verhältnis der der Oxytetracyclinlösung zugesetzten . Metallsalze
sowie auch nach dem Metallionengehalt dieser Lösung und dem pH-Wert, bei dem die
Ausfällung durchgeführt wird. So enthalten Gärlösungen häufig beträchtliche Mengen
an Metallionen, wie Magnesium und Calcium, die an der Bildung der erfindungsgemäßen
Oxytetracyclin-Metallkomplexsalze beteiligt sind. Der Niederschlag, den man durch
Fällung einer wäßrigen Lösung von reinem Oxytetracyclin mit einer Mischung aus löslichen
Barium- und Magnesiumsalzen (1: 2) bei einem pH-Wert von etwa 9 erhält, besteht
aus q. Teilen Oxytetracyclin, 2 Teilen Magnesium und i Teil Barium. Dies. trifft
jedoch nur für Lösungen von reinem Oxytetracyclin zu. Bei Verwendung unreiner Lösungen,
z. B. Nährlösungen, muß zur Erzielung möglichst vollständiger Ausfällungen ein anderes
Mengenverhältnis der Metalle eingehalten werden, und der Niederschlag enthält oft
andere Mengen an Oxytetracyclin und den Metallen.
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Die beschriebenen Metallkomplexsalze des Oxytetracyclins kann man
in ihrer Zusammensetzung ändern, indem man den festen Niederschlag mit Lösungen
anderer Metallionen in Berührung bringt. Auf diese Weise kann man z. B. die Zusammensetzung
eines hauptsächlich aus dem Calcium-Magnesium-Komplexsalz des Oxytetracyclins bestehenden
Niederschlags so ändern, daß er nach der Behandlung mit einer Lösung eines löslichen
Bariurnsalzes eine beträchtliche Menge Barium enthält. Wie bereits oben hervorgehoben
wurde, scheint die Barium-Magnesium-KQmplexverbindung die am wenigsten lösliche
der erfindungsgemäßen Komplexverbindungen zu sein. Das Barium-Zink-Salz hat fast
die gleiche Löslichkeit, das Calcium-Magnesium-Salz ist etwas löslicher. Setzt man
einer Oxytetracyclinlösung bei dem entsprechenden pH-Wert eine Misdhung von mehr
als zwei wasserlöslichen Metallsalzen zu, so scheidet sich zuerst das am wenigsten
lösliche Metallkomplexsalz ab.
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Das ausgefällte Metallkomplexsalz des Oxytetracyclins Wird abfiltriert.
Der Niederschlag wird gewöhnlich mit einem kleinen Volumen Wasser gewaschen und
dann in einer Säure, vorzugsweise verdünnter Mineralsäure, insbesondere in verdünnter
Schwefelsäure, gelöst. Bei Verwendung von Schwefelsäure wird das unlösliche- abfiltrierte
Bariumsulfat mit Wasser gewaschen. Um möglichst das gesamte Oxytetracyclin aus diesem
Niederschlag zu gewinnen; kann es notwendig sein, das Bariumsulfat nochmals mit
verdünnter Säure zu behandeln. Das saure Filtrat, das den größten
Teil
des Antibiotikums enthält, wird danach auf einen p$-Wert von etwa 6 bis 9, vorzugsweise
etwa 7, eingestellt. Bei diesem pg-Wert trennt sich das Antibiotikum als amphotere
Verbindung von der Lösung ab, es kann jedoch zusätzlich wesentliche Mengen an Metallsalzen,
z. B. von Calcium und Magnesium, enthalten.
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Bei der Einhaltung eines etwas niedrigeren pH-Wertes, etwa 5, ist
die Ausfällung des Oxytetracyclins als Komplexsalz nicht ganz vollständig. Der Niederschlag
des Oxytetracyclins wird wieder von der Lösung abfiltriert und mit einem kleinen
Volumen Wasser gewaschen. Obwohl man dieses Komplexsalz, das einen Reinheitsgrad
von etwa 5oo bis 8oo y je mg hat, schon für gewisse therapeutische Zwecke verwenden
kann, bevorzugt man, aus ihm kristallines Oxytetracyclin oder dessen Salze für die
medizinische Verwendung herzustellen. Die Niederschläge werden besser in Alkali
als in Säure gelöst, um das Antibiotikum daraus zu gewinnen.
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Es wurde ferner festgestellt, daß die Niederschläge dieser Art beträchtliche
Mengen Eisen, Chrom und Kupfer enthalten können, welche durch metallische Werkstoffe
in die Lösungen hineingeraten sein können. Diese Metalle, insbesondere Eisen, stören
das Reinigungsverfahren. Es wurde nun gefunden, daß man diese Metalle aus den Säurelösungen
der gefällten Metallkomplexsalze des Oxytetracyclins durch Behandlung mit einem
löslichen Ferrocyanid, wie Kaliumferrocyanid, entfernen kann. Der auf diese Weise
gebildete Niederschlag wird abfiltriert und der Überschuß an Ferrocyanid durch Behandeln
der Lösung mit einem löslichen Zink-, Zirkonium- oder einem .anderen geeigneten
Metallsalz ausgefällt. Der Endpunkt dieser Einstellung kann mit einer Lösung eines
Kupfersalzes geprüft werden. Aus dem klaren Filtrat wird danach mit einem löslichen
Alkalisalz das Antibiotikum ausgefällt, das nun im wesentlichen frei von Eisen und
anderen Schwermetallen ist, jedoch gewisse Mengen Calcium und Magnesium enthält.
Das auf diese Weise erhaltene Produkt hat eine beträchtlich hellere Farbe und höhere
Wirksamkeit als das ohne Ferrocyanid behandelte, und der dabei entstandene Verlust
ist sehr geringfügig. Auch bei der Herstellung von kristallinem Oxytetracyclin oder
Oxytetracyclinhydrochlorid nach dem beschriebenen Verfahren übertrifft die Qualität
des fertigen Produktes bei weitem die des ohne Ferrocyanid behandelten Erzeugnisses.
Es hat eine reine, eher hellgelbe als bräunliche Farbe, und seine Wirksamkeit ist
sehr hoch. Außerdem hat das ohne Ferrocyanidbehandlung erhaltene Produkt die Neigung,
beim Stehenlassen beträchtlich nachzudunkeln. Weiterhin erhält man bei der Anwendung
der Ferrocyanidbehandlung nach dem erfindungsgemäßen Verfahren eine erheblich bessere
Ausbeute an kristallinem Salz.
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Die kristallinen Verbindungen können in bekannter Weise auf verschiedene
Arten hergestellt werden, z. B. nach dem Verfahren der USA.-Patentschrift 2 516
o8o. So kann das getrocknete Rohoxytetracyclin z. B. in Methanol gelöst und mit
genügend konzentrierter Salzsäure behandelt werden, um das Antibiotikum zu lösen.
Nach der Behandlung mit Entfärbungskohle und Filtration kann man das Hydrochlorid
nach Zusatz weiterer konzentrierter Salzsäure kristalliert erhalten.
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Die vorliegende Erfindung wird in den nachstehenden Beispielen erläutert.
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Beispiel i Es wurde folgende Nährlösung für die Oxytetracyclingewinnung
hergestellt Sojabohnenmehl .................. 5oo g Glukosehydrat ....................
500 g wasserlöslicher Extrakt aus Schlempe 259
Natriumchlorid . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . 2509
Destilliertes Wasser zur Auffüllung auf
501 Der pH-Wert der Mischung wurde durch Zusatz von Natriumhydroxyd auf 7 gebracht,
anschließend wurden 50 g Calciumcarbonat zugesetzt.
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Die Nährlösung wurde bei i21° sterilisiert, abgekühlt, mit Streptomyces
rimosus geimpft und dieser Pilz darin 4 Tage bei 28° unter ständigem Schütteln gezüchtet.
Durch Zusatz von verdünnter Schwefelsäure wurde nun die Lösung auf einen pH-Wert
von 2,5 eingestellt und danach filtriert. In der 44,9 Millionen y Antibiotikum enthaltenden
klaren Lösung wurden unter Rühren i2o g Bariumchloriddihydrat und 48 g Magnesiumchloridhexahydrat
gelöst. Die erhaltene Lösung wurde dann mit Natriumhydroxydlösung auf einen p11-Wert
von g eingestellt. Nach zehnminutigem Stehen wurde der gebildete Niederschlag unter
Zusatz einer kleinen Menge Diatomeenerde abfiltriert. Es wurde gefunden, daß die
vergorene Näbrlösung und die erhaltenen Waschflüssigkeiten insgesamt 1,92 Millionen
y Oxytetracyclin enthielten.
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Der Niederschlag wurde zuerst in 21 Wasser suspendiert und dann mit
Schwefelsäure auf einen p11-Wert von 1,2 eingestellt.
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Die 36,8 Millionen y Oxytetracyclin enthaltende Lösung wurde vom Unlöslichen
abfiltriert. Durch Einstellung der Lösung mit Natriumhydroxyd auf einen p11-Wert
von 7 wurde das Oxytetracyclin ausgefällt. Der Niederschlag enthielt noch etwa 34
Millionen y des Antibiotikums und geringe Mengen an Calcium und Magnesium. Das Filtrat
dieses ausgefällten Produktes enthielt 2,3 Millionen y Oxytetracyclin.
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Beispiel 2 Eine nach obigem Verfahren hergestellte Oxytetracyclinlösung,
die etwa 2o Millionen y des Antibiotikums enthielt, jedoch mit Salzsäure bei einem
pH-Wert von 2,5 geklärt worden war, wurde mit Natriumhydroxyd auf einen pH-Wert
von 9 gebracht. Danach wurden 50 g Bariumchloriddihydrat und 2o g Magnesiumchloridhexahydrat
zugesetzt,' die in Zoo ccm heißem Wasser gelöst worden waren. Die Mischung wurde
1/2 Stunde gerührt, danach mit 8o g Diatomeenerde, bekannt unter dem Namen nSupercel«,
versetzt und von dem Niederschlag abfiltriert. Das Filtrat enthielt o,8 Millionen
y Oxytetracyclin. Der Niederschlag wurde mit einem Liter Wasser gewaschen, welches
0,5 Millionen y löste.
Darauf wurde der Niederschlag dreimal mit
je 60o ccm Wasser verrührt, wobei der pH-Wert jedesmal mit Schwefelsäure auf 1,5
eingestellt und die Flüssigkeit von dem Feststoff abfiltriert wurde. Die vereinigten
Filtrate enthielten 12 ooo y je ccm des Antibiotikums. Den vereinigten Filtraten
wurde allmählich so viel Natriumhydroxydlösüng zugesetzt, bis der pH-Wert 7 erreichte
und Rohoxytetracyclin ausfiel. Dieses wurde abfiltriert und mit Zoo ccm Wasser gewaschen.
Das Filtrat und das Waschwasser enthielten etwa 2,3 Millignen y des Antibiotikums.
Der Niederschlag wurde über Nacht im Vakuum bei 50° getrocknet, wog 25 g, und die
Bestimmung ergab einen Gehalt von 65o y je mg des Antibiotikums.
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Beispiel 3 Eine ähnliche Nährlösung wie im Beispiel i, die jedoch
an Stelle der Schlempe die gleiche Gewichtsmenge eines enzymatischen Kaseinauszugs
enthielt, wurde auf ähnliche Weise vergoren und mit Salzsäure bei einem p$ Wert
von 2,5 gereinigt. Die klare Lösung wurde mit Natriumhydroxyd auf einen pH-Wert
von g eingestellt und dann mehrere Male mit je io Volumprozentn-Butanolausgezogen;
dabeiwurdefestgestellt, daß das Antibiotikum mit Metallen wie Calcium und Magnesium
mindestens teilweise als Salz ausgezogen wurde. Es ist auch möglich, das Oxytetracyclin
als Metallkomplexverbindungen mit anderen Metallsalzen, z. B. mit Barium-Magnesium-
oder Barium-Zink-Salzen, auszuziehen. Der Butanolauszug wurde mit 5o Volumprozent
i n-Salzsäure in Wasser behandelt. Das erhaltene wäßrige Konzentrat enthielt 460o
y je ccm des Afitibiotikums. 40 ccm dieser Lösung wurden mit verdünntem Natriumhydroxyd
auf einen pH-Wert von 9,5 gebracht; der dabei entstehende Niederschlag wurde
zentrifugiert und von der klaren dä.rüberstehenden Flüssigkeit abgetrennt. Die klare
Flüssigkeit enthielt etwa 500y je ccm Oxytetracyclin; dies bedeutet, daß etwa go
°% des Antibiotikums ausgefällt worden waren. Der .Niederschlag wurde mit Wasser
gewaschen und getrocknet. Die Untersuchung ergab etwa 675 y je mg. Es zeigte sich,
daß eine Probe davon etwa 35 °/° Rückstand enthielt (Sulfate, die aus etwa gleichen
Mengen Calcium und Magnesium bestanden)°. Wie oben schon erwähnt wurde, gehen Calcium
und Magnesium als Komplexsalze des Oxytetracyclins in die Butanolschicht.
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Beispiel 4 Eine Nährlösung gemäß Beispiel 3, in der 11,9 Millionen
y des Antibiotikums enthalten, waren, wurde mit Schwefelsäure geklärt und dann mit
175 g Bariunichloriddihydrat versetzt. Danach wurde genügend Natriumhydroxydlösung
zugesetzt, um den p11-Wert auf g zu bringen. Nach kurzem Rühren wurde der in Gegenwart
einer kleinen . Menge Diätömeenerde ausgefällte Feststoff abfiltriert- und der Niederschlag
mehrere Male mit kleinen Mengen Wasser gewaschen. Dieser Niederschlag bestand aus
einer Mischung der Barium-Magnesium- und Cälcium-Magnesium-Komplexsalze des Oxytetracychns.
Das Filtrat enthielt insgesamt noch o,77 Millionen y Oxytetracyclin. -Der feuchte
Niederschlag wurde in der kleinstmöglichen Menge Wasser suspendiert und der pH-Wert
der Suspension mit Schwefelsäure auf 1,2 gebracht. Nach gründlichem Rühren der Mischung
wurden die Feststoffe abfiltriert, und der Rückstand wurde mehrmals mit Wasser gewaschen.
Die Lösung, die 9,8 Millionen y Oxytetracyclin enthielt, wurde unter Rühren
langsam mit Natriumhydroxydlösung behandelt, bis der pH-Wert 7 erreichte. Der Oxytetracyclinniederschlag
wurde abfiltriert und mit einem kleinen Volumen Wasser gewaschen. Der Filterrückstand
.wurde so trocken- wie möglich gesaugt und danach in einem Vakuumexsikkator bei
Zimmertemperatur weiter getrocknet. Das getrocknete Produkt wog 12,4 g; die Untersuchung
ergab 70o y je mg, insgesamt 8,68 Millionen y Antibiotikum. Davon wurden
7,7 Millionen y
in 5 Volumen Methanol suspendiert und langsam mit i Moläquivalent
37°[°iger Salzsäure versetzt. Die Lösung wurde unter Verwendung einer kleinen Menge
Diatomeenerde und etwas Entfärbungskohle, bekannt unter dem Namen »Darco G-6o«,
filtriert. Dann wurde dem Filtrat ein zweites Moläquivalent 370%ige Salzsäure und
eine kleine Menge kristallines Oxytetracyclinhydrochlorid als Impfstoff zugesetzt.
Nach 1/2 stündigem Rühren wurde das kristalline Produkt abfiltriert, .mit einem
kleinen Volumen Methanol gewaschen und getrocknet. Es wog 5,10 g, und die Bestinunung
ergab goo y je mg, d. h. fast den theoretischen Wert für Oxytetracyclinhydrochlorid.
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Beispiel 5 Eine geklärte Gärlösung nach Beispie13, die 5.95 Millionen
des Antibiotikums enthielt, wurde unter Rühren mit 75 g Bariumchloriddihydrat versetzt.
Danach wurde die Lösung mit Natriumhydroxydlösung auf einen p,1-Wert von
9,5 eingestellt, mit 35 g Diatomeenerde versetzt und filtriert. Der Filterrückstand
wurde mit insgesamt 25o ccm Wasser gewaschen. Nach dem Trocknen unter Atmosphärendruck
bei 50° wurde die Substanz gemahlen und in 300 ccm Methanol suspendiert.
Der Suspension wurden 4 ccm konzentrierte Salzsäure zugesetzt; beim Verdünnen mit
dem zehnfachen Volumen Wasser besaß diese einen p$ Wert von etwa 3. Die Suspension
wurde filtriert und der auf diese Weise erhaltene feste Stoff in 150 ccm
Methanol erneut suspendiert. Wiederum wurde genügend konzentrierte Salzsäure zugesetzt,
bis der p],-Wert 3 betrug, und das Unlösliche dann abfiltriert. Die vereinigten
Methanolfiltrate wurden auf etwa io ccm eingeengt und hierzu 25 ccm einer 1,5 n-Salzsäure
in Methanol gegeben, die man durch Verdünnung von 370%iger wäßriger .Salzsäure mit
Methanol hergestellt hatte. Nach dem Animpfen mit Oxytetracychnhydrochloridkristallen
schied sich nach kurzer Zeit das kristalline Hydrochlorid ab, das abfiltriert und
getrocknet wurde.
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Beispiel 6 80o g feuchter Niederschlag aus dem Metallkomplexsalz des
Oxytetracyclins, der nach dem Verfahren des Beispiels i hergestellt worden war,
wurden in 40o ccm Wasser suspendiert und mit 5o°[°iger Schwefelsäure unter raschem
Rühren versetzt, bis das pH einen Wert von 1,5 erreichte. Die Oxytetracyclinlösung
wurde
durch Filtrieren mit einer kleinen Menge eines Filtriermittels abgetrennt. Der Filterrückstand
wurde mit einem kleinen Volumen Wasser gewaschen und dann in einem Mindestvolumen
Wasser erneut suspendiert. Der pH-Wert wurde wiederum auf 1,5 eingestellt, dann
wurde filtriert und mit einem kleinen Volumen Wasser nachgewaschen. Die vereinigten
sauren Filtrate hatten ein Gesamtvolumen von etwa iooo ccm und enthielten 2o,5 Millionen
y Antibiotikum. Der Lösung wurde unter Rühren eine io°/oige Lösung von Kaliumferrocyanid
zugesetzt. Nach Zugabe von ii ccm dieser Lösung zeigte eine filtrierte Probe bei
Zusatz von Kaliumferrocyanidlösung keinen weiteren Niederschlag. Der Suspension
wurde eine kleine Menge eines Filtriermittels zugesetzt und die ausgefällten Verunreinigungen
abfiltriert. Der Filterrückstand wurde mit einem kleinen Volumen Wasser gewaschen
und das Filtrat durch Zusatz von etwas Eisenlösungsalz auf überschüssiges Ferrocyanid
geprüft. Da kein Überschuß vorhanden war, wurde das Filtrat ohne Neueinstellung
des pH-Wertes für die nächste Verfahrensstufe verwendet.
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Das helle bernsteinfarbige Filtrat hatte ein Volumen von 1140 ccm
und enthielt 2o Millionen y Oxytetracyclin. Die Hälfte dieses Filtrates wurde langsam
durch Zusatz einer io°%igen Natriumhydroxydlösung auf einen p,1-Wert von 7 eingestellt,
das ausgefällte Oxytetracyclin abfiltriert, mit ioo ccm Wasser gewaschen und dann
bei 50° im Vakuum getrocknet. Es wog 12,5 g, die Bestimmung ergab 740'Y je mg. Bei
der Behandlung der Säurelösung mit Entfärbungskohle vor der Ausfällung des Oxytetracyclins
war das erhaltene Produkt noch etwas heller und besaß eine bessere Wirksamkeit,
es war jedoch etwas Substanz verlorengegangen.
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Kristallines Oxytetracyclinhydrochlorid wurde daraus auf folgende
Weise gewonnen: Das getrocknete Produkt wurde fein gemahlen. io g davon wurden in
4o ccm Methanol suspendiert und mit io ccm einer gesättigten Lösung von Calciumchlorid
in Methanol versetzt. Das Oxytetracyclin löste sich allmählich, und nach Behandlung
mit o,5 g Entfärbungskohle wurde die Mischung filtriert. Der Filterrückstand wurde
erst mit io ccm einer halbgesättigten Lösung von Calciumchlorid in Methanol, dann
mit io ccm Methanol, in dem 1 ccm 37°[oige Salzsäure enthalten waren, und schließlich
mit 5 ccm reinem Methanol gewaschen. Die Methanollösung wurde gerührt und langsam
mit 6 ccm 37%iger Salzsäure versetzt. Nährend des Zusatzes der Säure wurde mit kristallinem
Oxytetracyclinhydrochlorid geimpft. Nach Beendigung der Kristallisation wurden die
Kristalle abfiltriert und mit io cc;@r. i,2 n-Salzsäure in Methanol gewaschen. Nach
nochmaligem Waschen mit io ccm wasserfreiem Methanol wurde das Produkt kurze Zeit
bei 50° getrocknet. Das getrocknete kristalline Oxytetracyclinhydrochlorid wog 6,64
g und die biochemische Untersuchung ergab goo y je mg. Es war hellgelb glänzend,
enthielt nur Spuren von Metallen und zeigte sich für klinische Zwecke verwendbar.
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Eine rohe Nährlösung von Oxytetracyclin, die genügend geeignete Metallionen
wie Calcium und Magnesium enthält, braucht lediglich auf den entsprechenden pH-Wert,
vorzugsweise 8,5 bis 9, eingestellt zu werden, um einen Teil des Oxytetracyclins
ausfallen zu lassen. Die Menge des Materials, das ausgefällt werden kann, nimmt
zu, wenn man die verdünnte Oxytetracyclinlösung vor der Einstellung des pH-Wertes
konzentriert. Dieses Verfahren ist jedoch selten so wirksam wie jenes, bei dem die
erforderlichen Gemische und Mengenanteile zweiwertiger Metallionen zusätzlich gegeben
werden.
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Barium, Strontium und bzw. oder Calcium können als Hydroxyde zugesetzt
werden, um, falls es erwünscht ist, gleichzeitig den pH-Wert zu erhöhen.