DE69938174T2 - Peptidzusammensetzungen und formulierungen unter verwendung derselben - Google Patents

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Description

  • ALLGEMEINER STAND DER TECHNIK
  • 1. Gebiet der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung bezieht sich im Allgemeinen auf Zusammensetzungen, die als Therapeutika oder Kosmetika nützlich sind. Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung sind insbesondere bei der Behandlung von Gewebe nützlich. Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung umfassen ein Peptid oder Peptide, die die Wirkung von Elastin simulieren, und wahlweise die native Produktion von Elastin erhöhen. Die basische Aminosäuresequenz entspricht einem Abschnitt von Elastin eines Säugetiers oder ist homolog zu diesem, insbesondere mit Fragmenten von Elastin, die dem Gewebe des behandelten Säugetiers endogen sind. Es ist vorzuziehen, dass das Peptid eine therapeutisch wirksame Konzentration aufweist und/oder ein Wirkstoff einer pharmazeutischen, therapeutischen oder kosmetischen Zusammensetzung ist. Insbesondere bezieht sich die vorliegende Erfindung auf ein Peptid oder eine Vielzahl von Peptiden, die die Elastizität und den Turgor der Haut erhöhen. Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung sind die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung zum Erhöhen der Elastizität und/oder des physikalischen Erscheinungsbilds der Haut (z. B. glattere, gesündere und jugendlichere Haut).
  • 2. Hintergrund und Beschreibung verwandter Techniken
  • Haut, insbesondere die Haut eines Säugetiers, besteht aus einer Anzahl von überlappenden Schichten von Zellen. Die äußerste Schicht der Haut eines Säugetiers wird das Stratum corneum genannt. Diese Schicht schützt die Haut eines Säugetiers vor physikalischen und atmosphärischen Schäden und wirkt als eine Grenze gegenüber externen Gefahren. Der Grad an Nachgiebigkeit oder Konsistenz des Stratum Corneum hängt direkt von dessen Feuchtigkeitsgehalt ab. Es hat sich jedoch herausgestellt, dass degenerative Schäden in den unteren Schichten der Haut, die im Alter auftreten, nicht hauptsächlich durch einen Mangel an Feuchtigkeit verursacht werden. Obwohl die Konsistenz und das Erscheinungsbild der Haut von dem Feuchtigkeitsgehalt der Haut abhängen, hat sich gezeigt, dass andere Faktoren das Gesamterscheinungsbild und die Konsistenz der Haut beeinflussen. Es hat sich zum Beispiel herausgestellt, dass der Verlust an Elastizität in der Haut die Straffheit und den Turgor der Haut verringert. Es wird vermutet, dass die Verringerung des Hauttons und Turgors durch die Verringerung gewisser komplexer Polypeptide, die in der Haut vorhanden sind, auftritt. Diese komplexen Polypeptide umfassen unter anderem Elastin und Collagen.
  • Elastin ist ein hochvernetztes komplexes Polypeptid und ist eine Hauptkomponente von elastischen Fasern, die in der Haut und dem Bindegewebe von Tieren vorhanden sind. Elastin scheint hauptsächlich für die physiologische Elastizität von Gewebe verantwortlich zu sein. Bei normaler Haut eines Säugetiers, insbesondere bei menschlicher Haut, stellen die elastischen Gewebeproteine eine relativ kleine Fraktion der gesamten dermalen Proteine dar, spielen aber eine sehr wichtige Rolle beim Aufrechterhalten oder Verbessern des Hauttons und der Struktur.
  • Elastin selbst ist die Hauptproteinsubstanz, die in elastischen Fasern vorhanden ist, und tritt in Sehnen, Blutgefäßen und Bindegewebe auf. Wenn isoliert von diesen Quellen, ist es normalerweise in der Form eines brüchigen, faserigen, gelblichen Materials, das in Wasser, Alkohol und Ether nicht löslich ist, aber einigermaßen in konzentrierten, wässrigen Alkalimetallhydroxidlösungen löslich ist, vorhanden. Die dichte, vernetzte Struktur des Elastins macht das Auflösen sehr schwierig. Es hat zahlreiche Versuche gegeben, Elastin aufzulösen und kosmetische Mittel aus dem aufgelösten Elastin zu schaffen. Versuche der Auflösung sind zum Beispiel in einem U.S. Patent Nr. 4,327,078 beschrieben. Es hat sich jedoch herausgestellt, dass Elastin nur leicht durch die Haut absorbiert wird und die Haut nicht ausreichend durchdringt, um wesentlichen Nutzen für die Haut zu produzieren.
  • ZUSAMMENFASSUNG DER VORLIEGENDEN ERFINDUNG
  • Die vorliegende Erfindung ist auf Zusammensetzungen ausgerichtet, die pharmazeutisch, therapeutisch und/oder kosmetisch für das Gewebe sind, auf das sie angewandt werden. Die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung modifiziert vorzugsweise die physikalischen Charakteristiken des Gewebes, auf das sie angewandt wird, oder scheint diese zu modifizieren, und das modifizierte Gewebe ist vorzugsweise Gewebe der Haut eines Säugetiers. Die Zusammensetzung umfasst im Allgemeinen ein Vehikel oder einen Träger zur therapeutischen oder kosmetischen Verabreichung, bei der die Peptide in therapeutisch wirksamen Konzentrationen formuliert sind, um die Elastizität der Haut zu erhöhen. Die Peptide sind vorzugsweise in einer wässrigen Lösung löslich und beinhalten noch bevorzugter kleine Peptide (üblicherweise weniger als ungefähr 10 Aminosäuren in der Länge). Es ist vorzuziehen, dass der Peptidabschnitt der Zusammensetzung Peptide beinhaltet, die Molekulargewichte von weniger als 10 000 Da aufweisen, sogar noch bevorzugter 90% Peptide mit einem Molekulargewicht von weniger als 10 000 Da beinhalten. Sogar noch bevorzugter beinhaltet der Peptidgehalt der Zusammensetzung Peptide mit einem Molekulargewicht von weniger als ungefähr 3 000 Da, sogar noch bevorzugter beinhaltet der Peptidgehalt der Zusammensetzung Peptide mit einem Molekulargewicht von weniger als ungefähr 1 000 Da. Tatsächlich hat sich herausgestellt, dass der bevorzugte Molekulargewichtbereich von Peptiden, die bei der vorliegenden Erfindung benutzt werden, in dem Bereich von ungefähr 100–1000 Da, noch bevorzugter ungefähr 150–800 Da, sogar noch bevorzugter ungefähr 180–600 Da liegt, und am besten umfasst die therapeutische oder kosmetische Zusammensetzung Peptide mit einem Molekulargewicht in dem Bereich von ungefähr 188–585 Da.
  • Es hat sich ebenfalls herausgestellt, dass die Peptide, die am besten eine Erhöhung in der Elastizität und dem Turgor des Gewebes erreichen, diejenigen sind, die Abschnitten von Elastin entsprechen oder im Wesentlichen homolog zu diesen sind (insbesondere Elastin, das dem behandelten Gewebe endogen ist). Dementsprechend hat sich herausgestellt, dass die Verdauung von Elastin, zum Beispiel die hydrolytische oder stellenspezifische enzymatische Spaltung von Elastin, in Peptiden resultiert, die besonders zur Verwendung bei der vorliegenden Erfindung geeignet sind. Die Peptide, die aus der Verdauung resultieren, können direkt in der pharmazeutischen, therapeutischen und/oder kosmetischen Formulierung der vorliegenden Erfindung sein. Die Peptide der vorliegenden Erfindung können ebenfalls durch die auf dem Stand der Technik bekannten Verfahren synthetisiert werden (d. h. fester Zustand, flüssig und Überdruck). Wie hier verwendet ist nicht beabsichtigt, dass der Begriff „Peptid" jegliche Bedeutung bezüglich des Präkursormaterials oder der Verfahren ausdrückt, die benutzt werden, um die Peptide zu synthetisieren oder zu fertigen. Zusätzlich dazu bezieht sich der Begriff „Elastin-Peptid-Fragment" in der Singular- oder Plural-Form auf die Tatsache, dass das erörterte Peptid oder die erörterte Aminosäuresequenz einem Abschnitt Elastin, insbesondere einem Abschnitt oder einem Fragment Elastin, der/das dem behandelten Tier endogen ist, entspricht, das biologische Äquivalent von diesem ist oder im Wesentlichen homolog zu diesem ist. Der Begriff „Elastin-Peptid-Fragment" soll jedoch keine Bedeutung bezüglich der Quelle oder des Ausgangsmaterials oder des Verfahrens des Ankommens an dem Elastin-Peptid-Fragment ausdrücken. Wie oben ausgeführt, werden die Peptide der vorliegenden Erfindung vorzugsweise durch die enzymatische Spaltung von Elastin gebildet und werden sogar noch bevorzugter durch die Spaltung von Elastin mit Thermolysin gebildet, um hydrophile, aus Elastin erlangte Peptide zu bilden. Es ist ebenfalls vorzuziehen, dass sich die Peptide der vorliegenden Erfindung bei einer wirksamen Konzentration innerhalb der therapeutischen oder kosmetischen Zusammensetzung befinden, wobei die therapeutisch wirksame Konzentration in einem Bereich von ungefähr 0,0002% bis ungefähr 90% des Gewichts des Peptids, noch bevorzugter in einem Bereich von ungefähr 0,05% bis ungefähr 50% Peptid, sogar noch bevorzugter in einem Bereich von ungefähr 0,5% bis ungefähr 10% Peptid, sogar noch bevorzugter ungefähr 1,5% Peptid und am besten ungefähr 1,3% hydrolisiertes Elastin-Peptid liegt. Die therapeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann als eine kosmetische Zubereitung formuliert werden, um topisch auf die Haut eines Patienten angewandt zu werden, wie etwa in einer Emulsion, einer Lotion, einem Spray, einem Puder, einer Salbe, einer Creme oder einem Schaum oder in anderen geeigneten pharmazeutischen Vehikeln oder Trägern, die auf dem Stand der Technik üblicherweise für andere Typen von Verabreichung (d. h. subkutan) bekannt sind. Das Abgabesystem der vorliegenden Erfindung ist vorzugsweise ein topisches Abgabesystem, kann aber auch ein subkutanes, transkutanes, orales, nasales, Aerosol- oder Pflasterabgabesystem sein.
  • Die vorliegende Erfindung ist des Weiteren auf eine Zusammensetzung zur Verbesserung der Konsistenz des Gewebes ausgerichtet, wobei die Zusammensetzung ein Elastin-Peptid beinhaltet, das durch die selektive Spaltung von Elastin gebildet wird. Die Zusammensetzung umfasst vorzugsweise ein pharmazeutisches Abgabesystem, und das Elastin wird aus dem Gewebe eines Tiers erlangt. Ligamentum nuchea hat sich als eine besonders nützliche Quelle eines Elastinausgangsmaterials herausgestellt. Das Elastin der vorliegenden Erfindung wird vorzugsweise selektiv durch die enzymatische Verdauung des Elastins mit Thermolysin gespalten. Diese thermolytische Spaltung resultiert vorzugsweise in einem Elastin-Peptid-Fragment oder in Elastin-Peptid-Fragmenten mit einem Molekulargewicht von weniger als ungefähr 10 000 Da, noch bevorzugter weniger als ungefähr 3 000 Da, sogar noch bevorzugter weniger als ungefähr 1 000 Da.
  • Die vorliegende Erfindung ist ebenfalls auf eine Zusammensetzung zur Steigerung der Funktionalität, des Tons, des Turgors und/oder der Elastizität des Gewebes, an das sie durch die Verabreichung wirksamer Mengen eines Peptids an das Gewebe (insbesondere Hautgewebe) verabreicht wird, ausgerichtet. Wenn Haut behandelt wird, wird das Erscheinungsbild der Haut gesteigert, es wird angenommen als eine Konsequenz der Verbesserung der Elastizität des Gewebes, auf das das Peptid angewandt wird. Es ist vorzuziehen, dass der Verabreichungsschritt eine Anzahl separater Verabreichungsschritte beinhalten kann, die am besten zweimal täglich in einem vorbestimmten Zeitraum wiederholt werden, wobei der vorbestimmte Zeitraum eine Woche der täglichen Verabreichung des Peptids, noch bevorzugter zwei Wochen, und am besten mindestens einen Monat der täglichen topischen Anwendung übersteigt (wobei eine Verabreichung des Peptids zweimal täglich im Laufe des Monats sogar noch mehr vorzuziehen ist). Wie bei der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung ist es bei dem Verfahren der vorliegenden Erfindung vorzuziehen, dass die benutzte Zusammensetzung ein Elastin-Peptid-Fragment umfasst, das Peptide beinhaltet, die ein Molekulargewicht von weniger als ungefähr 1 000 Da aufweisen. Vorzugsweise und geeigneterweise kann das Peptid durch die enzymatische Spaltung des Elastins (vorzugsweise erlangt aus dem Gewebe eines Tiers) gebildet werden. Es ist vorzuziehen, dass die enzymatische Spaltung über die enzymatische Behandlung von gereinigtem Elastinausgangsmaterial mit Thermolysin auftritt.
  • KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
  • Die Merkmale, Aspekte und Vorteile der vorliegenden Erfindung werden angesichts der folgenden Beschreibung, beigefügten Ansprüche und begleitenden Zeichnungen verständlicher, in denen:
  • 1 ein Balkendiagramm ist, das die erhöhte Elastinproduktion als ein Resultat der Anwendung der vorliegenden Erfindung auf die Haut eines Säugetiers darstellt.
  • 2 ist eine Gefügeaufnahme, die die Reaktion der Mikrogefäße des Gewebes der Haut bei der vorliegenden Erfindung darstellt.
  • GENAUE BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORM
  • Damit die hier beschriebene Erfindung besser verständlich ist, wird die folgende detaillierte Beschreibung dargelegt. Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Zusammensetzungen, die bei der Erhöhung der Elastizität, des Turgors und/oder des Erscheinungsbilds des Gewebes nützlich sind. Die vorliegende Erfindung ist ebenfalls auf therapeutisch wirksame Konzentrationen der Zusammensetzungen ausgerichtet.
  • Wie hier verwendet, bedeutet der Begriff „Testperson" oder „Patient" jedes beliebige Säugetier einschließlich Menschen, bei denen Elastin zur richtigen Gewebefunktion oder zum Erscheinungsbild benutzt wird. Die Verfahren hier zur Verwendung ziehen prophylaktische, kosmetische und kurative Verwendung in Erwägung.
  • In seiner Verwendung hier bedeutet der Begriff „ungefähr" plus oder minus 10% des numerischen Wertes der Zahl, mit der er verwendet wird. Daher bedeutet ungefähr 50% in dem Bereich von 45%–55%. In seiner Verwendung hier bezieht sich der Begriff „Dalton" (oder „Da") auf die Einheit der Masse, die äquivalent zu der Masse eines Wasserstoffatoms (1,66 × 10–24 Gramm) ist. Allgemein ausgedrückt bezieht sich der Begriff „Gewebe" auf jede beliebige Ansammlung ähnlich spezialisierter Zellen, die in der Leistung einer bestimmten Funktion vereint werden. Wie hier verwendet, bezieht sich „Gewebe", wenn nicht anders angegeben, auf Gewebe, das Elastin als Teil seiner notwendigen Struktur und/oder Funktion umfasst. Bindegewebe zum Beispiel, das unter anderem aus Collagenfibrillen und Elastinfibrillen besteht, genügt der Definition von „Gewebe", wie hier verwendet. Zusätzlich dazu scheint Elastin bei der richtigen Funktion von Blutgefäßen, Venen und Arterien in ihrer inhärenten Viskoelastizität involviert zu sein. Außer anderweitig angegeben, bedeutet der Begriff „Haut" die äußere Haut oder Hülle des Körpers, einschließlich der Lederhaut und der Oberhaut und dem darauf ruhenden subkutanen Gewebe.
  • „Bereitstellen", wenn in Verbindung mit einem therapeutischen Mittel verwendet, um ein Therapeutikum direkt in oder auf ein Zielgewebe zu verabreichen, oder um ein Therapeutikum an einen Patienten zu verabreichen, wobei das Therapeutikum einen positiven Einfluss auf das Gewebe hat, auf das es abzielt (entweder auf eine prophylaktische, kurative oder kosmetische Weise). Folglich kann, wie hier verwendet, der Begriff „Bereitstellen", wenn in Verbindung mit dem Elastin-Peptid-Fragment verwendet, Folgendes umfassen, ist aber nicht darauf begrenzt: Bereitstellen eines Elastin-Peptid-Fragments in oder auf das Zielgewebe; Bereitstellen eines Elastin-Peptid-Fragments systematisch an einen Patienten durch z. B. intravenöse Injektion, wodurch das Therapeutikum das Zielgewebe erreicht; Bereitstellen eines Elastin-Peptid-Fragments in der Form einer Codiersequenz davon an das Zielgewebe (z. B. durch so genannte Gentherapietechniken), wobei das Elastin-Peptid-Fragment innerhalb des Zielgewebes exprimiert wird.
  • Details zu Techniken zur Formulierung und Verabreichung von Pharmazeutika finden sich in der neusten Ausgabe von Remington's Pharmaceutical Sciences (hack Publishing Co, Esston Pa.). Obwohl die lokale topische Abgabe wünschenswert ist, gibt es andere Mittel der Abgabe, zum Beispiel: orale, parenterale, Aerosol-, intramuskuläre, subkutane, transkutane, intramedulläre, intrathekale, intraventrikuläre, intravenöse, intraperitoneale oder intranasale Verabreichung.
  • Wie hier verwendet, bedeutet der Begriff „therapeutisch" ein Agens, das zur Behandlung, Bekämpfung, Ameliorierung, Verhinderung oder Verbesserung eines Zustands oder einer Krankheit eines Patienten benutzt wird. Der in der vorliegenden Erfindung behandelte Zustand ist unzureichendes Elastin im Gewebe, das heißt ein Bedarf in dem Gewebe an mehr Elastin. Da es auf Haut angewandt wird, wird es durch Turgor, Ton, Erscheinungsbild, Grad an Falten und Jugendlichkeit gemessen. Da der Begriff auf Blutgefäße angewandt wird, kann er durch den Grad an Elastizität oder die richtige vasomotorische Reaktion (Vasodilatation/Vasokonstriktion) des Gefäßes gemessen werden. Demgemäß kann die therapeutische Behandlung von Blutgefäßen Implikationen bei Krankheiten aufweisen, die mit der Viskoelastizität zusammenhängen, einschließlich Hypertension, Arteriosklerose, Angina, Angiogenese, Myokardinfarkt, Koronarthrombose, Restenose nach Angioplastie und chronisch-obstruktive Atemwegserkrankung.
  • Schließlich bezieht sich der Begriff „kosmetisch", wie hier verwendet, auf eine verschönernde Substanz oder Zubereitung, die das Erscheinungsbild der körperlichen Schönheit bewahrt, wiederherstellt, verleiht, simuliert oder steigert, insbesondere da sie sich auf das Erscheinungsbild von Gewebe oder Haut bezieht.
  • Wie oben ausgeführt, ist die vorliegende Erfindung auf ein Elastin-Peptid-Fragment ausgerichtet, das als eine therapeutische und/oder kosmetische Zusammensetzung oder ein Agens zur Modifizierung von Gewebe, besonders Haut, nützlich ist. Der Begriff „modifizieren" wird verwendet, um auszudrücken, dass die vorliegende Erfindung entweder das Erscheinungsbild, die Form, die Charakteristiken und/oder die physikalischen Attribute des Gewebes, für das es bereitgestellt, auf das es angewandt oder an das es verabreicht wird, verändert. Die Veränderung in der Form kann in jedem der Folgenden allein oder in Kombination reflektiert werden: gesteigertes Erscheinungsbild der Haut; erhöhte Nachgiebigkeit der Haut; erhöhter Turgor der Haut; erhöhte Konsistenz der Haut; erhöhte Elastizität der Haut; verringerte Faltenbildung und erhöhte endogene Elastinproduktion in der Haut.
  • Die Quelle des Ausgangselastinmaterials kann ihren Ursprung in einer Anzahl von Quellen haben, die auf dem Stand der Technik bekannt sind. Es ist zum Beispiel bekannt, dass das Ligamentum nuchae weitgehend aus Elastin besteht, mit nur einer relativ kleinen Menge Collagen. Mehr als 70% des Trockengewichts dieses Ligaments ist Elastin. Aufgrund seines relativ hohen Elastingehalts und seines relativ niedrigen Collagengehalts ist das Ligamentum nuchae ein ideales Ausgangsmaterial zur Verwendung beim Erlangen der Elastin-Peptid-Fragmente der vorliegenden Erfindung. Das Ligamentum nuchae kann zuerst unter Verwendung einer Verfahrensweise, die der in U.S. Patent Nr. 5,028,695 offenbarten ähnlich ist, gereinigt werden. Obwohl die bevorzugte Quelle des Ausgangsmaterials der vorliegenden Erfindung Ligamentum nuchae ist, können andere Ligamente, Sehnen, Bindegewebe, Gewebe und synthetische Quellen ebenfalls verwendet werden. Zum Beispiel können die Arterien und Lungen und anderes Gewebe von Tieren, besonders das, das signifikante Mengen an Elastin aufweist, verwendet werden. Außerdem könnte Elastin aus unterschiedlichen Quellen oder Elastin und Collagen aus den gleichen oder unterschiedlichen Quellen zusammengemischt werden, um eine bestimmte zweckmäßige Mischung zu produzieren, die zur beabsichtigten Verwendung geeignet ist. Zum Beispiel kann die Aorta von Ratten, Schafen und Schweinen als eine Quelle von Elastin verwendet werden, wie in L. B. Sandberg, Connective Tissue Research, 1990, Band 25, S. 139–148 beschrieben.
  • Bei der vorliegenden Erfindung beinhaltet die Ligamentextraktion das Nehmen von zerlegten Ligamentum nuchae-Ligamenten und das Entfernen von soviel Fett und überschüssigem Bindegewebe wie möglich. Diese „sauberen" Ligamente werden dann in Stücke von ungefähr einem Quadratzentimeter (1 cm2) geschnitten und mit doppelt destilliertem Wasser („ddW") gewaschen. Die sauberen Ligamente werden dann auf einem Mörser aus Metall platziert, auf –20°F vorgekühlt, und flüssiger Stickstoff wird hinzugefügt, um das Gewebe einzufrieren. Die Ligamente werden dann mit dem geeigneten Werkzeug zerkleinert oder pulverisiert und in 1% wässrigem NaCl bei einem Verhältnis von ungefähr 100 Gramm Gewebe zu ungefähr drei Liter 1% wässrigem NaCl resuspendiert und in einem Waring-Mischer bei hoher Geschwindigkeit 30–60 Sekunden lang homogenisiert. Das homogenisierte Ligament wird in einen Vier-Liter-Becher übertragen und über Nacht bei 4°C auf einem Magnetrührer gerührt, wonach es bei 32,500 × g zentrifugiert wird, und der Überstand wird unter Verwendung des Biuret-Verfahrens zur Proteinbestimmung auf den Proteingehalt untersucht. Die Biuret-Reaktion wird durch das Mischen von 2 Millilitern Extrakt mit 3 Millilitern des Reagens und das unmittelbare Lesen entweder durch einfache visuelle Inspektion oder bei 540 Nanometer auf einem Spektrophotometer vorgenommen, um die Proteinkonzentration des Überstands zu bestimmen. Der Überstand wird dann entsorgt. Der Pressling (auf den hiernach als der Elastinpressling Bezug genommen wird) wird in 1% wässrigem NaCl resuspendiert und homogenisiert. Der Prozess des Homogenisierens in einem Waring-Mischer, das Rühren über Nacht und das Zentrifugieren werden drei bis vier mal wiederholt, bis der Überstand Biuret negativ ist. Nach dem Zentrifugieren wird der Elastinpressling in ddW resuspendiert und bei 30 psi sechs Stunden lang autoklaviert. Der resuspendierte Elastinpressling wird erneut zentrifugiert, und der Überstand wird über das Biuret-Verfahren auf den Proteingehalt getestet. Das Elastin wird mit kochendem ddW und dann mit ddW bei Raumtemperatur gewaschen, und die Wäschen werden über das Biuret-Verfahren auf den Proteingehalt getestet. Wenn die Wäschen Biuret negativ sind, wird der Elastinpressling mit Chloroform/Methanol-Lösung bei einem Verhältnis von 2 Teilen Chloroform zu 1 Teil Methanol getrocknet. Wenn der Biuret-Test positiv ist, wird die sechsstündige Autoklavierungsverfahrensweise mit Waschschritt wiederholt, bis der Biuret-Test negativ ist. Schließlich wird der Elastinrest mit fünf Volumen reinem Methanol gewaschen und bei Raumtemperatur an der Luft getrocknet. Der Elastinrest wird in einen Exsikkator übertragen und über P2O5 24 Stunden lang getrocknet, bis das Gewicht des Elastinrests stabil ist. Der Elastinrest wird dann in einer Willey-Mühle durch ein 40-Maschensieb, gefolgt von einem 60-Maschensieb gemahlen.
  • Für die Verdauung von Thermolysin wurde ein dreimal rekristallisiertes Thermolysinprodukt von CalBiochem (10394 Pacific Center Court, San Diego, CA 92121) verwendet. Die Thermolysinzubereitung enthält ausreichend Calcium, um eine maximale Aktivität des Enzyms sicherzustellen. Die Verdauung von Thermolysin wird wie folgt durchgeführt: ein Wasserbad wird mit einer Umlaufschüttelmaschine auf eine Temperatur von 55°C gebracht, und fünf Gramm des fein gemahlenen weitgehend nicht löslichen Elastinrests werden mit einem Liter ddW fünfzehn Minuten lang bei Raumtemperatur hydriert. Nach der Hydratation wird der eine Liter ddW, der die fünf Gramm Elastin enthält, in dem 55°C Bad platziert, und der pH-Wert der Elastin/Wasser-Mischung wird auf einen pH-Wert zwischen 7–8 mit 10% Methylamin gebracht. Fünfzig Milligramm Thermolysin (Bacillus thermoproteolyticus) werden direkt zu der Elastin-Wasser-Mischung hinzugefügt. Das Thermolysin enthält ungefähr 60% Protein (60,2%), ungefähr 13% (13,2%) Natriumacetat und ungefähr 25% (25,3%) Calciumacetat, mit einer spezifischen Aktivität von ungefähr 8,720 lU/mg Trockengewicht. Der pH-Wert der Elastin-Wasser-Mischung wird mit einem pH-Meter oder pH-Stat überwacht und mit 10% Methylamin eingestellt, um den pH-Wert zwischen 6,8 und 7,5 zu halten. Die Verdauung wird 75 Minuten lang weiterlaufen gelassen, und dann wird konzentrierte Chlorwasserstoffsäure hinzugefügt, um den pH-Wert auf 3,0 einzustellen, um die Verdauung zu beenden.
  • Nachdem die Verdauung beendet ist, wird das verdaute Produkt vorzugsweise durch eine PM 10 Diaflow Ultrafiltrationsmembran bis zu einem Molekulargewicht von 10 000 Da gefiltert, um jegliches Protein oder Peptide, die ungefähr 10 000 Da Molekulargewicht übersteigen, herauszufiltern. Der resultierende Überstand ist eine erlangte Zusammensetzung, die Peptide mit einem Molekulargewicht von weniger als ungefähr 10 000 Da beinhaltet. Wie sich herausstellt, beinhaltet die am meisten bevorzugte Zusammensetzung ein Elastin-Peptid-Fragment mit einem Molekulargewicht von weniger als ungefähr 1 000 Da. Tabelle 1 ist eine Liste von Peptidsequenzen, die aus der thermolytischen Spaltung von Elastin isoliert sind. Diese isolierten Fraktionen, entweder allein oder in Kombination, wenn angewandt auf Gewebe, resultieren darin, dass das Gewebe, insbesondere die Haut eines Säugetiers, Charakteristiken von erhöhter Hautelastizität vorweist, einschließlich Nachgiebigkeit der Haut und erhöhter Turgor sowie insgesamt eine Erhöhung der Attraktivität der Haut. Wie aus Tabelle 1 unten ersichtlich ist, ist es vorzuziehen, dass die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung Elastin-Peptid-Fragmente mit einer Aminosäurekettenlänge von weniger als ungefähr 10 Aminosäuren beinhaltet, oder ein Molekulargewicht in dem Bereich von ungefähr 150–800 Da, sogar noch bevorzugter ungefähr 180 Da bis ungefähr 600 Da und am besten von ungefähr 188 Da bis ungefähr 585 Da aufweist. Es ist ebenfalls vorzuziehen, dass das Peptid oder die Peptide, die beim Formulieren der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung verwendet werden, im Wesentlichen Aminosäuren mit einer apolaren und/oder einer ungeladenen Seitengruppe (d. h. Alanin, Valin, Prolin, Glycin) beinhalten, noch bevorzugter Peptide beinhalten, die Valin oder Prolin umfassen, und sogar noch bevorzugter Peptide beinhalten, die Valin und Prolin in jeder Aminosäuresequenz enthalten.
  • Die Elastin-Peptid-Fragmente, die identifiziert worden sind, weisen die folgenden Aminosäuresequenzen auf:
    SEQ.-NR. PEPTID MOL GEW. NAME (N- bis C-Terminal) c-DNA-Kopien
    1. AVG 245 Alanin-Valin-Glycin 1
    2. VGAG 302 Valin-Glycin-Alanin-Glycin 2
    3. IGG 302 Isoleucin-Glycin-Glycin 4
    4. LG 188 Leucin-Glycin 26
    5. IGAG 316 Isoleucin-Glycin-Alanin-Glycin 2
    6. LGG 245 Leucin-Glycin-Glycin 6
    7. VAPG 342 Valin-Alanin-Prolin-Glycin 2
    8. LGPG 342 Leucin-Glycin-Prolin-Glycin 3
    9. LGAG 316 Leucin-Glycin-Alanin-Glycin 4
    10. VGPG 328 Valin-Glycin-Prolin-Glycin 2
    11. FGPG 376 Phenylalanin-Glycin-Prolin-Glycin 2
    12. VGPQ 399 Valin-Glycin-Prolin-Glutamin 1
    13. LGA 259 Leucin-Glycin-Alanin 7
    14. VGPA 342 Valin-Glycin-Prolin-Alanin 1
    15. VVPG 370 Valin-Valin-Prolin-Glycin 2
    16. AVPG 342 Alanin-Valin-Prolin-Glycin 2
    17. VVPQ 441 Valin-Valin-Prolin-Glutamin 1
    18. VAARPG 569 Valin-Alanin-Alanin-Arginin-Prolin-Glycin 1
    19. LGAGGAG 501 Leucin-Glycin-Alanin-Glycin-Glycin-Alanin-Glycin 1
    20. AIPG 356 Alanin-Isoleucin-Prolin-Glycin 2
    21. LGPGG 399 Leucin-Glycin-Prolin-Glycin-Glycin 1
    22. AAAQA 430 Alanin-Alanin-Alanin-Glutamin-Alanin 1
    23. VGVHypG 444 Valin-Glycin-Valin-Hydroxyprolin-Glycin 14*
    24. VYPGG 491 Valin-Tyrosin-Prolin-Glycin-Glycin 1
    25. IGGVGG 458 Isoleucin-Glycin-Glycin-Valin-Glycin-Glycin 1
    26. VAPGVG 498 Valin-Alanin-Prolin-Glycin-Valin-Glycin 1
    27. LGVGG 401 Leucin-Glycin-Valin-Glycin-Glycin 3
    28 VLPG 384 Valin-Leucin-Prolin-Glycin 3
    29. FRAAA 534 Phenylalanin-Arginin-Alanin-Alanin-Alanin 1
    30. VGGVPG 484 Valin-Glycin-Glycin-Valin-Prolin-Glycin 1
    31. FGPGG 433 Phenylalanin-Glycin-Prolin-Glycin-Glycin 1
    32. VGVPG 427 Valin-Glycin-Valin-Prolin-Glycin 14*
    33. VLPGAG 512 Valin-Leucin-Prolin-Glycin-Alanin-Glycin 1
    34. VGLHypG 458 Valin-Glycin-Leucin-Hydroxyprolin-Glycin 1**
    35. LGVGA 415 Leucin-Glycin-Valin-Glycin-Alanin 1
    36. AFPG 390 Alanin-Phenylalanin-Prolin-Glycin 1
    37. AFPGA 461 Alanin-Phenylalanin-Prolin-Glycin-Alanin 1
    38. VGIPA 455 Valin-Glycin-Isoleucin-Prolin-Alanin 1
    39. VGGIPT 542 Valin-Glycin-Glycin-Isoleucin-Prolin-Threonin nein
    40. VGVGVPG 583 Valin-Glycin-Valin-Glycin-Valin-Prolin-Glycin 2
    41. LGPGVG 498 Leucin-Glycin-Prolin-Glycin-Valin-Glycin 1
    • * Die Sequenznr. 23 und 32 scheinen eine gemeinsame Sequenz zu sein, da die Hydroxylierung von Prolin ein Ereignis nach der Translation ist.
    • ** wie VGLPG.
  • Die obigen Sequenzen machen ungefähr 40% aller Elastin-Sequenzen aus, wobei der Rest der Sequenzen auf freie Aminosäuren oder Desmosinvernetzungen reduziert wird (diese Aminosäuren tragen nicht zur Sequenzierung bei).
  • Die Elastin-Peptid-Fragment/Wasser-Mischung, die bei der Verdauung mit Thermolysin erhalten wird, wird vorzugsweise zur Trockenheit flash evaporiert und in einem kleinen Volumen von ddW neu aufgelöst, und, falls gewünscht, ausreichen mit ddW zur Lyophilisation bis zur Trockenheit verdünnt. Bei der Alternative, anstatt das Elastin-Peptid/die Elastin-Peptide neu aufzulösen, wird das gefilterte Produkt zweimal gefriergetrocknet, was in einem Puder resultiert, das 30 Gewicht chemisch gebundenes Wasser und sehr wenig Salz (NaCl) enthält. Vorzugsweise ist das Puder zur therapeutischen Verwendung auf eine Konzentration von ungefähr 0,0002% bis ungefähr 90 Gew.-% des Elastin-Peptid-Fragments aufgelöst, noch bevorzugter in einem Bereich von ungefähr 0,05% bis ungefähr 50%, sogar noch bevorzugter in einem Bereich von ungefähr 0,05% bis ungefähr 10% Elastin-Peptid-Fragment und noch bevorzugter ungefähr 1,5% Elastin-Peptid-Fragment, und am besten ungefähr 1,3% Peptid-Fragment oder -fragmente in einem Vehikel, das zur topischen oder subkutanen Verabreichung geeignet ist.
  • Wie aus 1 ersichtlich ist, stellt die topische Behandlung mit einer Zusammensetzung, die Peptid-Fragmente bei einer Konzentration von ungefähr 1,3% umfasste, wenn für den Zeitraum von einem Monat angewandt auf die Haut einer männlichen Sprague-Dawley- Ratte, eine Verdopplung des Elastin-Gehalts der Haut dar, wie verglichen mit beiden Kontrollproben und ähnlichen Anwendungen und der Konzentration von DHEA. In 1 stellt S CONTR die rasierte Kontrolle dar, und US CONTR stellt die unrasierte Kontrolle dar. 1 stellt dar, dass die vorliegende Erfindung die zweckmäßigen Qualitäten aufweist, um die Nachgiebigkeit oder Elastizität der Haut durch das Steigern der endogenen Produktion von Elastin in der Haut zu erhöhen. Die Peptide und Formulierungen der vorliegenden Erfindung scheinen ebenfalls die Konsistenz der Haut zu verbessern, insbesondere das physikalische Erscheinungsbild der Haut durch das Verbessern der endogenen Produktion von Elastin.
  • Das Verfahren der Verabreichung von Peptiden und Formulierungen der vorliegenden Erfindung setzt jede beliebige einer Anzahl von bekannten Verabreichungsrouten wie etwa oral, iv, subkutan, transkutan und topische Verabreichung ein. Ein bevorzugtes Verfahren der vorliegenden Erfindung setzt eine pharmazeutische oder kosmetische Zusammensetzung ein, die das physikalische Erscheinungsbild und/oder die Elastizität des Gewebes steigert. Es wird angenommen, dass die Grenze für die Hautdurchdringung des Elastin-Peptid-Fragments ein Molekulargewicht von ungefähr 20 000 Da ist. Vorteilhafterweise verwendet die vorliegende Erfindung Peptide, die durch thermolytische Spaltung aus dem Elastin erlangt werden, die ein Molekulargewicht von weniger als ungefähr 10 000 Da, noch bevorzugter weniger als ungefähr 3 000 Da und sogar noch bevorzugter weniger als 1 000 Da aufweisen. Folglich würden die Peptide der vorliegenden Erfindung scheinbar den Kriterien ****** entsprechen und werden bei Anwendung von der Haut absorbiert. Über die erhöhte Absorption aufgrund der relativ kleinen Größe der aktiven Peptide der vorliegenden Erfindung hinaus scheinen die Peptide selbst, die vorzugsweise denen entsprechen, die durch die thermolytische Spaltung von Elastin mit Thermolysin gebildet werden, erhöhte Aktivität aufzuweisen. Es wird angenommen, dass diese Aktivität zumindest teilweise aufgrund der Produktion von endogenem Elastin auf Haut, auf die die Verabreichung oder die Zusammensetzung angewandt wird, stattfindet.
  • Die vorliegende Erfindung kann in einer Anzahl von Trägervehikeln formuliert werden, zum Beispiel in einem Spray; einem Aerosol; einem Wasser und einer ölartigen Emulsion; einer öl- und wasserartigen Emulsion, einer Gesichtscreme oder einer Körpercreme; einer Sonnenlotion oder After Sun Lotion oder anderen topischen Verabreichungsvehikeln. U.S. Patent Nr. 4,327,078 , auf das vorher Bezug genommen wurde, ist darstellend für die verschiedenen Typen von topischen Verabreichungen, die eingesetzt werden können, um ein lösliches auf Elastin basierendes Derivat zu verabreichen. In jedem der bereitgestellten Beispiele würde die Konzentration des Elastin-Peptid-Fragments der vorliegenden Erfindung vorzugsweise ungefähr 1,5% betragen, und die Konzentration von Wasser würde erhöht werden, um den Unterschied auszumachen
  • Es ist vorzuziehen, dass die topische Verabreichung der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung wiederholt über einen vorbestimmten Zeitraum, vorzugsweise in dem Bereich von ungefähr einer Woche bis ungefähr einem Monat, auftritt. Bei den Sprague-Dawley-Ratten, die verwendet wurden, um 1 zu erzeugen, wurden die Ratten über einen Zeitraum von 30 Tagen topisch mit einer 1,3%igen Konzentration des hydrophilen Elastin-Peptids, das durch das hier offenbarte Verfahren formuliert wurde, behandelt. Das Testen stellte dar, dass das endogene Elastin (gemessen durch Mikrogramm (μg) Elastin pro Milligramm (mg) Hautfett freies Trockengewicht) jeder der Ratten, auf die die Verabreichung angewandt wurde, auf eine Kontrollprobe und eine Probe, die mit einer 5%igen Konzentration von DHEA über einen ähnlichen Zeitraum behandelt wurde, gedoppelt wurde. Je drei Tiere wurden verwendet, um die Daten für S CONTR, US CONT und DHEA zu erzeugen, und elf Tiere wurden für HEP verwendet. Drei Hautproben von den behandelten Bereiche jedes Tiers wurden zur Untersuchung entnommen, und von den drei Resultaten jedes Tiers wurde der Durchschnitt ermittelt. Der Mittelwert dieser Resultate war folgender: S CONTR (1,408); US CONTR (2,291); DHEA (1,753); HEP (3,175). Der Elastingehalt der Haut wurde durch ein genaues Assay für Rattenelastin bestimmt, entwickelt durch Sandberg, et al. („Quantitation of Elastin in Tissues and Culture: problems related to the accurate measurement of small amounts of elastin with special emphasis an the rat", Connective Tissue Research. 25: 139–48, 1990). Eine Irrtumswahrscheinlichkeit von weniger als 0,001 für die Daten aus 1, wie bestimmt durch Varianzanalyse, ist bedeutend, da die Wahrscheinlichkeit geringer als eins zu tausend ist, dass die Untersuchungsergebnisse durch Zufall auftreten.
  • Die Daten aus 1 unterstützen des Weiteren die Verwendung der kosmetischen oder pharmazeutischen Zubereitung über einen erweiterten Zeitraum, vorzugsweise in dem Bereich von einer Woche bis zu einem Monat, noch bevorzugter in dem Bereich von sieben Tagen bis ungefähr vierzehn Tagen und am besten ungefähr vierzehn Tage der täglichen Verabreichung bei ungefähr 1,5%igen Konzentration von Elastin-Peptid oder Peptiden mit einem Molekulargewicht, das geringer als ungefähr 10 000 Da, noch bevorzugter geringer als 1 000 Da ist und am besten in dem Bereich von ungefähr 180 Da bis ungefähr 600 Da liegt.
  • 2A–2D sind Gefügeaufnahmen, die ein erhöhtes Erscheinungsbild und eine günstige kosmetische Implikation der vorliegenden Erfindung darstellen. Aus 2A–2D scheint mit einem Elastin-Peptid-Fragment behandelte Haut gesünder zu sein als unbehandelte Haut. Dies wird unter einem Mikroskop durch eine Erhöhung in der Gefäßreaktion bewiesen. In 2A–2D wurden fixierte Gewebeteilabschnitte von Rattenhaut mit mit Fluorescein konjugierten Antifibronectinantikörpern gekennzeichnet. 2A ist eine repräsentative Probe des unrasierten Kontrollgewebes; 2B ist eine repräsentative Probe der rasierten Kontrollprobe; und 2C ist eine repräsentative Probe des Gewebes, das topische Behandlung mit DHEA empfing. Schließlich empfing 2D Behandlung mit der vorliegenden Erfindung in einer topischen Behandlung gemäß den oben erörterten Proben unter Bezugnahme auf 1. Die dermale Schicht in den Steuertafeln (2A und 2B) ist relativ einheitlich und dünn im Vergleich zu der Dicke von sowohl 2C und 2D. Zur Vereinfachung ist in jeder der 2A, 2B, 2C und 2D die dermale Schicht in Klammern gesetzt. Überraschend und darstellend für einige der Nutzen, die durch die Benutzung der vorliegenden Erfindung erhalten wurden, stellt 2D eine erhöhte Konzentration von kapillaren Venolen in der subdermalen Region dar. Die kapillaren Venolen werden in dieser Figur als hell gefleckte ovale Körper gezeigt, die unter der dermalen Schicht liegen. Die Erhöhung in der Konzentration von Endothelzellen in der subdermalen Region gibt einen Anstieg in der Kapillardichte an und stellt daher das Potential für die Peptide und Formulierungen der vorliegenden Erfindung dar, die für die Bildung von Blutgefäßen oder kapillaren Venolen (Neovaskularisation oder Angiogenese) verwendet werden.
  • Es scheint, dass das Elastin-Peptid-Fragment der vorliegenden Erfindung vorzugsweise Sequenzen von Valin-Valin-Prolin-Glutamin oder Valin-Glycin-Valin-Hydroxyprolin (möglicherweise Prolin)-Glycin umfassen würde. Es scheint ebenfalls, dass Sequenzen, die Valin und/oder Prolin enthalten, ebenfalls bevorzugt werden, und dass Peptide, die entweder eine oder beide der Aminosäuren in einer größeren Konzentration umfassen (relativ zu anderen vorhandenen Aminosäuren) am meisten bevorzugt werden.
  • Wie aus Tabelle II unten ersichtlich ist, scheint es, dass bestimmte Gruppen von hier beschriebenen Peptiden (z. B. Sequenznr. 1 bis einschließlich Sequenznr. 41) bevorzugte Charakteristiken aufweisen, da sie sich auf die kosmetische oder therapeutische Anwendung auf die Haut beziehen. Die Elastin-Peptid-Mischung, die von der Verdauung von Thermolysin von Elastin isoliert wurde (d. h. Sequenznr. 1 bis einschließlich Sequenznr. 41) wurde gesammelt, als sie sich von einer HPLC-Säule ablöste. Anstatt jedes der Thermolysin-Peptid-Fragmente einzeln zu isolieren, wurden 5 Fraktionen oder Cluster von Peptiden in dem Bereich von 5–50 Minuten gesammelt und unter Benutzung eines Bromdeoxyuridin-Triphosphat-Inkorporationsassays (BrdUTP) auf Aktivität getestet. Das Assay misst die Produktion von mRNA, die bei der Proteinsynthese involviert sind. Tabelle II misst die grüne Fluoreszenzintensität als ein Maß des erhöhten mRNA in RFL-6-Zellen als Reaktion auf das konzentrierte Elastin-Fragment. TABELLE II
    Fraktion Nr. Ungefähre Elutionszeit Ungefähre Änderung in% mit abgezogener Kontrolle
    1 5,3 Min.–11,8 Min. 1%
    2 11,8 Min.–23,0 Min. 4%
    3 23,0 Min.–44,1 Min. 41%
    4 44,1 Min.–45,8 Min. 10%
    5 45,8 Min.–50,0 Min. 2%
    6 nicht in Bruchstücke zerlegte Mischung (Seq.-Nr. 1–41) 52%
  • Jede der Fraktionen zeigt eine Erhöhung in mRNA in RFL-6-Zellen im Verlauf der Kontrollgruppe. Aus dem Test scheint es jedoch so, dass die Fraktion Nr. 3 allein und/oder in Kombination mit anderen Fraktionen (z. B. wie gesehen bei Fraktion Nr. 6) gutes Potential als eine Zusammensetzung oder Formulierung aufweist, um die Elastizität, den Turgor und/oder das Erscheinungsbild des Gewebes, besonders der Haut, zu erhöhen. Fraktion 3 umfasst die Sequenznr. 14–31. Es sei beachtet, dass es hinsichtlich des Falls zum Erhalten der nicht in Bruchstücke gelegten Mischung (wie oben beschrieben) besser sein kann, die nicht in Bruchstücke zerlegte Mischung zu verwenden, anstatt den aktivsten Wirkstoff zu isolieren.
  • Die Fraktion oder der Cluster 3 wurden in 10 Fraktionen zerlegt, die den zehn auf der HPLC (bei 215 nm) identifizierten Hauptspitzen entsprechen. Die Tabelle III unten stellt die grüne Fluoreszenzintensität als ein Maß von erhöhter mRNA in RFL-6-Zellen als Reaktion auf in Bruchstücke zerlegte Abschnitte der Fraktion Nr. 3, gezeigt in Tabelle II oben, dar. Tabelle III
    In Bruchstücke zerlegt Nr. Patent Seq.-Nr. Darin enthalten Abgekürzte Peptidsequenz % Veränderung von grüner Fluoreszenzintensität
    1 Sequenznr. 14 VGPA 39
    2 Sequenznr. 15, 16 VVPG, AVPG 40
    3 Sequenznr. 17 VVPQ 85
    4 Sequenznr. 18, 19 VAARPG, LGAGGAG 44
    5 Sequenznr. 20, 21 AIPG, LGPGG 42
    6 Sequenznr. 22 AAAQA 20
    7 Sequenznr. 23 VGVHypG 57
    8 Sequenznr. 24 VYPGG 38
    9 Sequenznr. 25, 26, 27, 28, 29 IGGVGG, VAPGVG, LGVGG, VLPG, FRAAA 10
    10 Sequenznr. 30, 31 VGGVPG, FGPGG 23
    Blindprobe 30
  • Wie klar aus Tabelle III ersichtlich ist, weist die Sequenznr. 17 (VVPQ) die größte Aktivität auf, gefolgt von Sequenznr. 23 (VGVHypG) und dann Sequenznr. 18 (VAARPG) und 19 (LGAGGAG). Es scheint, als würden die Sequenznr. 22 und 25–31 den gesamten therapeutischen oder kosmetischen Wert von Fraktion 3 negativ beeinflussen. Der Anmelder wünscht jedoch nicht, durch diese Spekulation gebunden zu sein, dass eine beliebige dieser Fraktionen oder eine Kombination von diesen, während die grüne Fluoreszenzintensität der in Bruchstücke zerlegten Probe gesenkt wird, tatsächlich eine wünschenswerte Charakteristik zu der beabsichtigten Verwendung der Gesamtmischung oder wenn mit einem anderen Peptid kombiniert (z. B. eine beliebiges von Seq.-Nr. 1–41), beisteuern kann.
  • Die Peptide und Formulierungen können über zahlreiche alternative im Fach bekannte Arzneimittelabgabevehikel verabreicht werden, und die Peptide können von der Verdauung von Elastin oder durch Aminosäuresequenzierung (entweder im festen Zustand oder flüssig) sowie aus der Überexpression in einem bakteriellen System erlangt werden.

Claims (17)

  1. Eine Zusammensetzung, die ein Elastin-Peptid-Fragment der Sequenznr. 17 (Valin-Valin-Prolin-Glutamin) beinhaltet, wobei die Zusammensetzung zur Verwendung bei der Behandlung eines Zustands von Gewebe eines Säugetiers geeignet ist.
  2. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, die des Weiteren die Elastin-Peptid-Fragmente der Sequenznr. 14 (Valin-Glycin-Prolin-Alanin), Sequenznr. 15 (Valin-Valin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 16 (Alanin-Valin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 18 (Valin-Alanin-Alanin-Arginin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 19 (Leucin-Glycin-Alanin-Glycin-Glycin-Alanin-Glycin), Sequenznr. 20 (Alanin-Isoleucin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 21 (Leucin-Glycin-Prolin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 22 (Alanin-Alanin-Alanin-Glutamin-Alanin), Sequenznr. 23 (Valin-Glycin-Valin-Hydroxyprolin-Glycin), Sequenznr. 24 (Valin-Tyrosin-Prolin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 25 (Isoleucin-Glycin-Glycin-Valin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 26 (Valin-Alanin-Prolin-Glycin-Valin-Glycin), Sequenznr. 27 (Leucin-Glycin-Valin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 28 (Valin-Leucin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 29 (Phenylalanin-Arginin-Alanin-Alanin-Alanin), Sequenznr. 30 (Valin-Glycin-Glycin-Valin-Prolin-Glycin) und Sequenznr. 31 (Phenylalanin-Glycin-Prolin-Glycin-Glycin) beinhaltet.
  3. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1 oder Anspruch 2, wobei die Zusammensetzung eine kosmetische Zubereitung ist.
  4. Zusammensetzung gemäß Anspruch 3, wobei die kosmetische Zubereitung als eine topische Zubereitung, die auf die Haut eines Patienten angewendet werden soll, formuliert ist.
  5. Zusammensetzung gemäß Anspruch 4, wobei die topische Zubereitung aus der Gruppe, bestehend aus einer Emulsion, einer Lotion, einem Spray, einem Aerosol, einem Puder, einer Salbe, einer Creme und einem Schaum, ausgewählt wird.
  6. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, wobei das Elastin-Peptid-Fragment in einer wässrigen Lösung löslich ist.
  7. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, wobei das Elastin-Peptid-Fragment des Weiteren an entweder dem Amino- oder dem Carboxyende des Peptid-Fragments einen Glycin-Alanin-Rest beinhaltet.
  8. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, wobei das Elastin-Peptid-Fragment ein Molekulargewicht von weniger als 1 000 Da aufweist.
  9. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, wobei das Elastin-Peptid-Fragment durch die Verdauung von Elastin mit Thermolysin erhalten werden kann.
  10. Eine Zusammensetzung, die ein Elastin-Peptid-Fragment der Sequenznr. 17 (Valin-Valin-Prolin-Glutamin) zur Verwendung als ein Medikament beinhaltet.
  11. Zusammensetzung gemäß Anspruch 10, die des Weiteren die Elastin-Peptid-Fragmente der Sequenznr. 14 (Valin-Glycin-Prolin-Alanin), Sequenznr. 15 (Valin-Valin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 16 (Alanin-Valin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 18 (Valin-Alanin-Alanin-Arginin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 19 (Leucin-Glycin-Alanin-Glycin-Glycin-Alanin-Glycin), Sequenznr. 20 (Alanin-Isoleucin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 21 (Leucin-Glycin-Prolin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 22 (Alanin-Alanin-Alanin-Glutamin-Alanin), Sequenznr. 23 (Valin-Glycin-Valin-Hydroxyprolin-Glycin), Sequenznr. 24 (Valin-Tyrosin-Prolin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 25 (Isoleucin-Glycin-Glycin-Valin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 26 (Valin-Alanin-Prolin-Glycin-Valin-Glycin), Sequenznr. 27 (Leucin-Glycin-Valin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 28 (Valin-Leucin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 29 (Phenylalanin-Arginin-Alanin-Alanin-Alanin), Sequenznr. 30 (Valin-Glycin-Glycin-Valin-Prolin-Glycin) und Sequenznr. 31 (Phenylalanin-Glycin-Prolin-Glycin-Glycin) zur Verwendung als ein Medikament beinhaltet.
  12. Zusammensetzung gemäß Anspruch 10, wobei die Konzentration des Elastin-Peptid-Fragments therapeutisch wirksam ist.
  13. Zusammensetzung gemäß Anspruch 10, wobei die therapeutisch wirksame Konzentration in einem Bereich von 0,0002% bis 90% liegt.
  14. Zusammensetzung gemäß Anspruch 10, wobei die therapeutisch wirksame Konzentration in dem Bereich von 0,5% bis 10% liegt.
  15. Zusammensetzung gemäß Anspruch 10, wobei die Zusammensetzung zur Behandlung eines Blutgefäßes geeignet ist.
  16. Die Verwendung von Elastin-Peptid-Fragmenten, die bei der Zubereitung eines Medikaments zur Behandlung eines Zustands, der aus der Gruppe, bestehend aus Hypertension, koronarer Herzerkrankung, Arteriosklerose, Angina, Koronarthrombose, chronisch-obstruktiver Atemwegserkrankung und Restenose nach Angioplastie, ausgewählt wird, die Sequenznr. 17 (Valin-Valin-Prolin-Glutamin) beinhalten.
  17. Verwendung gemäß Anspruch 16, wobei die Elastin-Peptid-Fragmente bei der Zubereitung eines Medikaments zur Behandlung eines Zustands, der aus der Gruppe, bestehend aus Hypertension, koronarer Herzerkrankung, Arteriosklerose, Angina, Koronarthrombose, chronisch-obstruktiver Atemwegserkrankung und Restenose nach Angioplastie, ausgewählt wird, die Sequenznr. 14 (Valin-Glycin-Prolin-Alanin), Sequenznr. 15 (Valin-Valin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 16 (Alanin-Valin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 17 (Valin-Valin-Prolin-Glutamin), Sequenznr. 18 (Valin-Alanin-Alanin-Arginin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 19 (Leucin-Glycin-Alanin-Glycin-Glycin-Alanin-Glycin), Sequenznr. 20 (Alanin-Isoleucin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 21 (Leucin-Glycin-Prolin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 22 (Alanin-Alanin-Alanin-Glutamin-Alanin), Sequenznr. 23 (Valin-Glycin-Valin-Hydroxyprolin-Glycin), Sequenznr. 24 (Valin-Tyrosin-Prolin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 25 (Isoleucin-Glycin-Glycin-Valin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 26 (Valin- Alanin-Prolin-Glycin-Valin-Glycin), Sequenznr. 27 (Leucin-Glycin-Valin-Glycin-Glycin), Sequenznr. 28 (Valin-Leucin-Prolin-Glycin), Sequenznr. 29 (Phenylalanin-Arginin-Alanin-Alanin-Alanin), Sequenznr. 30 (Valin-Glycin-Glycin-Valin-Prolin-Glycin) und Sequenznr. 31 (Phenylalanin-Glycin-Prolin-Glycin-Glycin) beinhalten.
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