DE69937498T2

DE69937498T2 - AEROPHOBER STOFF FÜR WÄSSRIGES REAGENZ UND WÄSSRIGE PROBEN, UND VERFAHREN ZUR StABILEN LAGERUNG WÄSSRIGER REAGENZIEN UND PROBEN

Info

Publication number: DE69937498T2
Application number: DE69937498T
Authority: DE
Inventors: Masahiro Ryugasaki-shi SEKIGUCHI; Toshikatsu Ryugasaki-shi ABE; Koji Ryugasaki-shi USHIZAWA
Original assignee: Daiichi Pure Chemicals Co Ltd
Current assignee: Daiichi Pure Chemicals Co Ltd
Priority date: 1998-09-14
Filing date: 1999-09-09
Publication date: 2008-08-28
Anticipated expiration: 2019-09-10
Also published as: DE69937498D1; EP1114999B1; KR100605539B1; AU760928B2; US6632677B1; JP4092018B2; CN1323397A; EP1114999A1; ATE377761T1; EP1114999A4; NO20011266L; AU5648199A; CA2343634A1; CN1271411C; CA2343634C; TW591228B; NO20011266D0; KR20010075070A; JP2000088857A; WO2000016104A1

Description

Technisches Gebiet
Diese Erfindung betrifft ein Verfahren zum stabilen Lagern eines wäßrigen Reagens oder einer wäßrigen Probe und eine stabile Reagenseinheit, ein Luftabschließmittel (Luftsperrmittel) wird verwendet, um stabil eine Reagenskomponente oder eine Substanz, die analysiert werden soll, zu lagern, indem verhindert wird, daß ein wäßriges Reagens oder eine wäßrige Probe mit Luft in Kontakt gelangt. Mehr spezifisch betrifft diese Erfindung ein Verfahren zum stabilen Lagern einer Reagenskomponente oder einer Substanz, die analysiert werden soll, indem das Luftsperrmittel über die Oberfläche eines wäßrigen Reagenzes oder wäßrigen Probe gelagert wird, das nicht einen Meßbereich eines Autoanalysators während der wiederholten Verwendung verschmutzt.
Stand der Technik
Gegenwärtig werden üblicherweise Reagentien, die für klinische Untersuchungen verwendet werden, als Flüssigkeit oder in gefriergetrockneter Form zugeführt. Flüssige Reagentien werden so wie sie sind verwendet, und gefriergetrocknete Reagentien werden bei der Verwendung zur Messung aufgelöst. Im allgemeinen können diese Reagentien nicht abgedichtet an einer kalten Stelle während der Analyse unter Verwendung eines Autoanalysators oder während der Konservierung stehen.
Reagentien in einem nicht abgedichteten Zustand können eine unzureichende Stabilität entfalten. Spezifisch können sich Meßwerte oder die Empfindlichkeit im Verlaufe der Zeit in Abhängigkeit von den Eigenschaften der Reagenzkomponente vermindern. Darüber hinaus tritt häufig die Färbung des Reagenzes oder eine Erhöhung der Blankowerte auf. Daher kann sich die Genauigkeit und Präzision, die die wichtigsten Eigenschaften für diagnostische Reagentien sind, im Verlaufe der Zeit vermindern. Beispielsweise wird ein Reagens unter Verwendung eines OPCP-Verfahrens zur Bestimmung von Calcium im Fluidum eines lebenden Körpers verwendet. Weil Monoethanolamin, das als Basispufferlösung des Reagenzes verwendet wird, CO₂ an Luft absorbiert, verschiebt sich der pH der Lösung zur sauren Stelle, wodurch die Meßwerte beeinflußt werden.
In Abhängigkeit von der Art der Probe kann eine zu analysierende Komponente durch Sauerstoff in der Luft leicht oxidiert werden. Es muß verhindert werden, daß eine solche Probe mit Luft unmittelbar nach dem Ziehen der Probe in Kontakt gelangt, um die Oxidation zu verhindern.
Als Technologie zum Lösen der obigen Probleme in bezug auf die Reagentien und Proben haben diese Erfinder ein Verfahren zum Stabilisieren eines Reagenzes oder dgl. vorgeschlagen, indem ein Luftsperrmittel, das mit dem Reagenz nicht mischbar ist und ein spezifisches Gewicht aufweist, das niedriger als das des Reagenzes ist, über das Reagenz oder dgl. geschichtet wird (offengelegte japanische Patentanmeldung 185928/1998 ).
Dieses Verfahren kann für verschiedene Reagentien und Proben verwendet werden. Jedoch kann ein Problem auftreten, wenn dieses Verfahren für ein Reagens verwendet wird, das in einem Autoanalysator verwendet wird. Spezifisch haftet das Luftsperrmittel, das über dem Reagens angeordnet ist, an einer Reagenzabsaug/-abgabedüse des Autoanalysators. Dies kann dazu führen, daß eine geringe Menge des Luftsperrmittels in einen Reaktionsbehälter zusammen mit dem Reagens fließt, wenn das Reagens in den Reaktionsbehälter abgelassen wird. Bei einem seit einiger Zeit verwendeten Reaktionsbehälter aus Kunststoff haftet das Luftsperrmittel an der Wand des Reaktionsbehälters, wodurch die Oberfläche der Wand durch dieses oder durch Interaktion mit anderen Substanzen verschmutzt wird.
Daher gibt es ein Bedürfnis für ein Verfahren zum stabilen Lagern eines wäßrigen Reagenzes einer wäßrigen Probe und für eine stabile Reagenzeinheit, umfassend ein wäßriges Reagens oder eine wäßrige Probe, die einen Reaktionsbehälter aus irgendeinem Material eines Autoanalysators nicht verschmutzt, selbst wenn das Luftsperrmittel in den Reaktionsbehälter fließt, wenn das Reagens, auf dem das Luftsperrmittel liegt, abgelassen wird.
US 5,552,087 gibt einen flüssigen Verdampfungsinhibitor an, der zur Verwendung bei Hochtemperaturanwendungen geeignet ist. Der Inhibitor umfaßt eine Mischung aus einem Alkan, einem nicht-flüchtigen Öl und einem Tensid. US 4,235,743 beschreibt eine Zusammensetzung zum inhibieren von Dampfverlusten von gelagerten Kohlenwasserstoffen, umfassend eine Mischung aus einen Fluortensid, einem Silicontensid, einem Polyglykol und einem Glykolether. Ein Verfahren zur Verzögerung der Verdampfung von flüchtigen Kohlenwasserstoffen von einem Körper aus flüssigem Kohlenwasserstoffmaterial wird durch Bilden eines dünnen Filmes aus diesen Zusammensetzungen auf der Oberfläche des Körpers aus flüssigem Kohlenwasserstoffen angegeben.
US 3,431,063 betrifft eine Zusammensetzung zum Verzögern der Verdampfung von Wasser, umfassend im wesentlichen von 70 bis 99,4 Gew.% eine Kohlenwasserstofföls, von 0,5 bis 10 Gew.% eines Wachses und von 0,1 bis 20 Gew.% einer Alkenylsuccinsäure, Anhydrids, Esters oder Amids. JP 04 161 855 betrifft die Vereinfachung einer Anlage durch Flotieren einer Flüssigkeit, deren spezifisches Gewicht geringer ist als das eines Reagenzes und die mit dem Reagens in einem Behälter, der das Reagens enthält, nicht gemischt wird, Abdecken der Oberfläche des Reagenzes mit der Lösung und Verhinderung der Verdampfung des Reagenzes. Aus US 4,097,393 ist bekannt, daß Silicon-Kohlenwasserstoff-Zusammensetzungen eine Nützlichkeit als Schmiermittel und hydraulische Fluide, insbesondere Bremsflüssigkeiten haben.
Offenbarung der Erfindung
Diese Erfinder haben intensive Untersuchungen zur Lösung dieser Probleme durchgeführt. Als Ergebnis haben diese Erfinder festgestellt, daß ein Luftsperrmittel mit einem Ketten-(linear oder verzweigt)-Kohlenwasserstoff und Siliconöl einen Reaktionsbehälter aufgrund einer kleinen Affinität daran nicht verschmutzt und in großem Umfang für einen Reaktionsbehälter aus irgendeinem Material verwendet werden kann. Diese Feststellung führte zur Vollendung dieser Erfindung.
Spezifisch gibt diese Erfindung eine stabile Reagenzeinheit an, umfassend einen Behälter, der mit einem wäßrigen Reagens oder einer wäßrigen Probe gefüllt ist und auf der Oberfläche davon eine Mischung (Luftsperrmittel) aus einem Kettenkohlenwasserstoff und einem Siliconöl, geschichtet aufweist, wobei das Siliconöl eine kinematische Viskosität von 100 cSt oder weniger aufweist, und das mit dem wäßrigen Reagens oder der wäßrigen Probe nicht mischbar ist und ein spezifisches Gewicht aufweist, das niedriger ist als das des Reagenzes oder der Probe.
Diese Erfindung gibt ebenfalls ein Verfahren zum stabilen Lagern eines wäßrigen analytischen Reagenzes oder einer wäßrigen Probe an, umfassend das Schichten der obigen Mischung über die Oberfläche eines wäßrigen analytischen Reagenzes oder wäßrigen Probe.
Kurze Beschreibung der Zeichnung
1 ist eine Vergleichsansicht, die Verschmutzungsbedingungen bei Verwendung des erfindungsgemäßen Produktes 1 und eines Referenzproduktes 1 zeigt.
2 ist eine Ansicht, die die Färbung im Verlaufe der Zeit eines Reagenzes 1 eines Triglycerid-Meßreagenzes, umfassend einen Farbentwickler, zu dem ein Luftsperrmittel dieser Erfindung gegeben ist, und des Reagenzes 1, das kein Luftsperrmittel enthält, im Vergleich zeigt.
Beste Art zur Durchführung der Erfindung
In dieser Erfindung wird eine Mischung aus einem Kettenkohlenwasserstoff und Siliconöl als Luftsperrmittel verwendet. Diese Mischung muß mit dem beabsichtigten wäßrigen Reagens oder der wäßrigen Probe (nachfolgend "Reagens oder Probe" genannt) unmischbar sein und ein spezifisches Gewicht (Dichte) aufweisen, das niedriger ist als das des Reagenzes oder dgl. Im allgemeinen ist das spezifische Gewicht eines Reagenzes wie eines Reagenzes, das für die klinische Untersuchung verwendet wird, etwa 1. Daher ist das spezifische Gewicht der Mischung bevorzugt etwa 0,7–0,95 und besonders bevorzugt etwa 0,86 oder weniger. Es ist bevorzugt, daß die Mischung bei Raumtemperatur flüssig ist und ein spezifisches Gewicht aufweist, das von dem des Reagenzes im Bereich von etwa 0,05 bis 0,3 verschieden ist.
Als Kettenkohlenwasserstoff unter den Komponenten der Mischung wird ein Kettenkohlenwasserstoff mit einer Viskosität von weniger als 37 cSt und einem Flash-Punkt von 46°C oder mehr verwendet. Spezifische Beispiele umfassen Octan, Nonan, Decan, Undecan, Dodecan, Tridecan, Tetradecan und dgl. Von diesen ist ein Kettenkohlenwasserstoff mit einem Flash-Punkt von 80°C oder mehr angesichts der leichten Handhabung bei der praktischen Anwendung bevorzugt.
Als Siliconöl, das die andere Komponente der Mischung ist, kann ein Polyalkylsiloxan, Polyalkylphenylsiloxan, Polyalkylhydrogensiloxan und dgl. verwendet werden. Es ist bevorzugt, ein lineares Dimethylpolysiloxan zu verwenden, das kommerziell als Siliconöl erhältlich ist, das eine Mischung aus linearen Dimethylpolysiloxanen mit unterschiedlichen Molekulargewichten und mit der folgenden Formel ist, worin n verschiedene Werte bedeutet:
Als lineares Dimethylpolysiloxan sind lineare Dimethylpolysiloxane mit verschiedenen kinematischen Viskositäten bekannt. Die kinematische Viskosität des linearen Dimethylpolysiloxans ist bevorzugt etwa 1,5 bis 100 cSt und mehr bevorzugt 3 bis 50 cSt.
Die Mischung kann unter Verwendung des Kettenkohlenwasserstoffes und des Siliconöls so hergestellt werden, daß der Gehalt des Siliconöls in der Mischung 1 bis 99%, bevorzugt etwa 10 bis 90% und noch mehr bevorzugt 30 bis 50% ist.
Bei Verwendung der Mischung aus dem Kettenkohlenwasserstoff und dem Siliconöl, die somit hergestellt ist, als Luftsperrmittel, kann die Mischung über die Oberfläche eines wäßrigen Reagenzes oder einer wäßrigen Probe, die in der Form einer Flüssigkeit oder in der Form einer Lösung vorliegt, erhalten durch Auflösen eines gefriergetrockneten Produktes, geschichtet werden. Bezüglich der Menge des zu verwendenden Luftsperrmittels gibt es keine besonderen Beschränkungen. Es ist bevorzugt, das Luftsperrmittel in einer Menge von 0,03 ml bis 1,0 ml pro 1 cm² der Oberfläche des Reagenzes (Oberfläche, die mit Luft in Kontakt ist, wenn keine Luftsperrmittel-Schicht gebildet ist) zu verwenden.
Eine stabile Reagenzeinheit kann hergestellt werden durch Füllen eines Behälters mit einem flüssigen Reagens unter Verwendung eines konventionellen Verfahrens und Bildung einer Schicht aus der Mischung des Kettenkohlenwasserstoffes und des Siliconöls auf der oberen Oberfläche des Reagenzes. Alternativ kann eine stabile Reagenzeinheit durch Zugabe der Mischung aus dem Kettenkohlenwasserstoff und dem Siliconöl zu einem Behälter, und Bildung einer Schicht aus der Mischung durch Injektion eines flüssigen Reagenzes in den Behälter hergestellt werden. Als Material für den Behälter für die Reagenzeinheit können Glas, Metalle, Kunststoffe und dgl. verwendet werden. Es ist bevorzugt, einen Behälter zu verwenden, der nicht ermöglicht, daß Luft permeiert und eine enge Öffnung hat.
Erfindungsgemäß ist es wichtig, das Reagens für Untersuchungen oder Tests zu verwenden, indem nur das Reagens oder dgl. von dem Behälter unter Verwendung eines einer Reagensansaugdüse eines Autoanalysators, einer Pipette, Nadel oder dgl. ohne Mischen des Reagenzes oder der Probe mit dem Luftsperrmittel entfernt wird.
Wenn Tenside oder andere Materialien, die das Luftsperrmittel emulgieren können, im Reagens vorhanden sind, kann die Wirkung dieser Erfindung unzureichend werden. Wenn irgendwelche Komponenten des Reagenzes mit einer gewissen Funktion bei der Messung eine extrem hohe Affinität für das Luftsperrmittel aufweisen, können solche Komponenten zur Luftsperrmittelschicht wandern und die Wirkungen des Reagenzes beeinträchtigen. Ein solches Auftreten sollte vermieden werden.
Industrielle Anwendbarkeit
Das Luftsperrmittel dieser Erfindung verhindert den Kontakt zwischen dem Reagens oder dgl. mit Luft durch Schichten des Luftsperrmittels über die Oberfläche des Reagenzes oder dgl. Daher kann das Luftsperrmittel ein Reagens oder dgl. mit ausgezeichneter Lagerungsstabilität ergeben, wodurch die Messung für eine lange Zeitdauer ermöglicht wird.
Das Luftsperrmittel dieser Erfindung verschmutzt nicht die Materialien, die für einen Reaktionsbehälter eines Autoanalysators verwendet werden können, wie Glas, Quarz, Kunststoffe (Polypropylen, Polystyrol, Methacrylat oder Polymethylpenten). Daher kann das Luftsperrmittel wiederholt im Autoanalysator verwendet werden.
Wie oben beschrieben kann diese Erfindung effektiv verhindern, daß das Reagens oder dgl. mit Luft in Kontakt gelangt und verschmutzt den Reaktionsbehälter des Autoanalysators nicht. Daher kann diese Erfindung vorteilhaft für ein Reagens verwendet werden, das zur Analyse unter Verwendung des Autoanalysators eingesetzt wird, wie ein alkalisches Phosphatase-Meßreagens, Calcium-Meßreagens, Gallensäure-Meßreagens, Kreatinin-Meßreagens und Triglycerid-Meßreagens oder Probe.
Beispiele
Diese Erfindung wird detailliert unter Bezugnahme auf die Beispiele beschrieben, die diese Erfindung nicht beschränken sollen.
Beispiel 1
Anwendung für ein Calcium-Meßreagens
Isoparaffin und Silicon (Polydimethylsiloxan, 200R FLUID, kinematische Viskosität: 5 cSt, hergestellt von Aldrich) wurden bei einem Verhältnis von 6 bis 4 vermischt, zur Herstellung eines Luftsperrmittels (erfindungsgemäßes Produkt 1).
Dieses Luftsperrmittel wurde über ein Reagens 1 eines Calcium-Meßreagenzes gemäß der unten angegebenen Zusammensetzung geschichtet. Unter Verwendung eines Hitachi 7170 Automatic Analyzer, wurden 150 μl des Reagenzes 1 zu 4 μl einer Probe gegeben und die Mischung wurde gerührt und dann 5 min bei 37°C inkubiert. Nach Zugabe eines Reagenzes 2 wurde die Mischung bei 37°C 5 min inkubiert. Das Absorptionsvermögen der Mischung bei 600 nm wurde dann gemessen.
Die Messung wurde viermal kontinuierlich unter Verwendung des gleichen Reaktionsbehälters (aus Polymethylpenten-Kunststoff) wiederholt. Nach den Messungen wurde der Verschmutzungsgrad des Reaktionsbehälters mit bloßem Auge beobachtet und entsprechend den unten angegebenen Standards bewertet. 1 zeigt die Verschmutzungsbedingungen.
Als Referenz wurde ein Referenzprodukt 1, hergestellt unter Verwendung eines Reagenzes 1 gemäß dieser Erfindung, das nur Isoparaffin anstelle der 6:4-Mischung von Isoparaffin und Silicon enthielt.
(Reagenzzusammensetzung des erfindungsgemäßen Produktes 1)
Reagens 1

Monoethanolamin: 0,5 M
Mischung aus Isoparaffin und Silicon (Verhältnis = 6:4): 3 ml (pro 70 ml-Flasche)

Reagens 2

o-Cresolphthalein-Komplex: 0,13 mM
8-Hydroxy-5-sulfonsäure: 10 mM
Essigsäure-Pufferlösung: 0,24 M (pH 6,0)

(Reagens 1 von Referenzprodukt 1)

Monoethanolamin: 0,5 M
Isoparaffin: 3 ml (pro 70 ml-Flasche)

(Auswertungsstandards für die Verschmutzung des Reaktionsbehälters)

Auswertung Bedingung

– keine Verschmutzung

± sehr geringe Verschmutzung

+ geringe Verschmutzung

++ verschmutzt

+++ signifikant verschmutzt
(Ergebnisse)
Die Auswertungsergebnisse der Verschmutzung des Reaktionsbehälters sind in Tabelle 1 gezeigt. Tabelle 1

Reagens Verschmutzungsgrad

Erfindungsgemäßes Produkt 1 –

Referenzprodukt 1 +++
Wie aufgrund dieser Ergebnisse ersichtlich ist, entfaltet der Reaktionsbehälter keine Verschmutzung nach vier kontinuierlichen Messungen unter Verwendung des erfindungsgemäßen Produktes 1. Im Gegensatz dazu war die innere Wand des Reaktionsbehälters verschmutzt, wenn das Referenzprodukt 1 verwendet wurde.
Wie in 1 gezeigt ist, wurde keine Verschmutzung im Reaktionsbehälter nach Messungen unter Verwendung des erfindungsgemäßen Produktes 1 beobachtet (rechts in der 1). Im Gegensatz dazu wurde eine Verschmutzung an der Mitte des Reaktionsbehälters beobachtet, wenn das Referenzprodukt verwendet wurde (links in der 1).
Wie oben beschrieben verursacht das Luftsperrmittel dieser Erfindung, das die Mischung aus einem Kettenkohlenwasserstoff und Silicon verwendet, keine Verschmutzung des Reaktionsbehälters während der wiederholten Verwendung.
Beispiel 2
Anwendung für ein alkalisches Phosphatase-Meßreagens
Jede Mischung aus einem Kettenkohlenwasserstoff und Siliconöl (Luftsperrmittel) wurde über ein Reagens 1 aus einem alkalischen Phosphatase-Meßreagens mit der unten angegebenen Zusammensetzung geschichtet. Die Mischung konnte nicht abgedichtet an einer kühlen Stelle (8°C) stehen. Die alkalische Phosphataseaktivität im menschlichen Blutserum wurde aufeinanderfolgend unter Verwendung dieses alkalischen Phosphatase-Meßreagenzes entsprechend dem unten angegebenen Verfahren gemessen. Änderungen in den Meßwerten wurden verglichen und geprüft. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 gezeigt.
(Reagenzzusammensetzung)
Reagens 1

Ethylaminoethanol-Pufferlösung: 1,0 M (pH 9,9)
Magnesiumchlorid: 0,5 mM
Luftsperrmittel (siehe Tabelle 2): 0,2 ml/cm²

Reagens 2

p-Nitrophenylphosphat (?): 15 mM

(Meßverfahren)
260 μl des Reagenzes 1 wurden zu 4 μl einer Probe gegeben. Die Mischung wurde gerührt und dann 5 min bei 37°C inkubiert. Nach Zugabe von 130 μl des Reagenzes 2 wurde die Mischung gerührt. Unter Verwendung eines Reagenzblankos als Referenz wurden Änderungen in der Absorbans der Mischung bei einer Wellenlänge von 450 nm bei 37°c von 2 bis 5 Minuten unter Verwendung eines Hitachi 7150 Automatic Analyzer gemessen. Eine physiologische Salinelösung wurde als Reagensblankomittel verwendet. Die alkalische Phosphatase (ALP)-Aktivität wurde von einem Konversionsfaktor berechnet, der von einem molaren Extinktionskoeffizienten von p-Nitrophenlyphosphat, das das Reaktionsprodukt war, und der Variation der Absorbans stammt.
(Ergebnisse)

Tabelle 2

Luftsperrmittel	ALP-Meßwerte (U/l)
	0 Tag	7 Tage	14 Tage	22 Tage
Undecan + Silicon	444	442	443	442
Dodecan + Silicon	442	444	441	443
Tridecan + Silicon	442	441	443	442
Tetradecan + Silicon	443	441	442	444
Isoparaffin + Silicon	443	444	442	442
Keine Zugabe (Referenz)	443	385	329	237

Wie aufgrund dieser Ergebnisse ersichtlich ist, verminderten sich diese Meßwerte signifikant im Verlaufe der Zeit, wenn das Luftsperrmittel nicht zugegeben wurde (Referenz). Im Gegensatz dazu zeigten die Meßwerte keine Verminderung nach 22 Tagen, wenn das Luftsperrmittel dieser Erfindung verwendet wurde. Spezifisch kann die alkalische Phosphatase-Aktivität genau für eine lange Zeitperiode durch Verwendung des Luftsperrmittels dieser Erfindung gemessen werden.
Beispiel 3
Anwendung für ein Gallensäure-Meßreagens
Eine Mischung aus Undecan und Silicon (Verhältnis = 6:4) wurde zu einem Reagens 2 eines Gallensäure-Meßreagenzes als Luftsperrmittel gemäß der unten angegebenen Zusammensetzung gegeben (erfindungsgemäßes Produkt 2). Die Mischung konnte nicht abgedichtet in einem kühlen Raum stehen. Eine standardisierte Gallensäure-Lösung (50 μM) wurde aufeinanderfolgend unter Verwendung des Reagenzes 2 des Gallensäure-Meßreagenzes gemessen. Die Änderungen der Meßempfindlichkeit wurden verglichen und untersucht. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt. Als Referenz wurde ein Reagens 2 ohne die obige Undecan/Silicon-Mischung (Referenzprodukt 2) verwendet.
(Reagenzzusammensetzung)
Reagens 1

Oxidiertes β-Thionicotinamidadenindinukleotid: 0,99 mg/ml Glycin-Pufferlösung: 0,03 M (pH 4,0)

Reagens 2

Reduziertes β-Nicotinamidadenindinukleotid: 5,04 mg/ml
3α-Hydroxysteroiddehydrogenase: 9,5 U/ml
Mischung aus Undecan und Silicon: 0,3 ml/cm²
Diethanolamin-Pufferlösung: 0,2 M (pH 9,2)

(Meßverfahren)
260 μl des Reagenzes 1 wurden zu 3 μl einer Probe gegeben. Die Mischung wurde 5 Minuten bei 37°C inkubiert. Nach Zugabe von 130 μl des Reagenzes 2 wurde die Mischung gerührt. Unter Verwendung einer Reagenzblankoprobe als Referenz wurden Änderungen der Absorbans der Mischung bei einer Wellenlänge von 405 nm bei 37°C von 1 bis 3 Minuten unter Verwendung einer Hitachi 7150 Automatic Analyzer gemessen. Eine physiologische Saline-Lösung wurde als Reagensblanko verwendet.
(Ergebnisse)
Tabelle 3

Konservierung Gallensäuremeßempfindlichkeit (mAbs/min)

Erfindungsgemäßes Produkt 2 Referenzprodukt 2

0 Tag 34 34

8 Tage 33 24

16 Tage 33 22

24 Tage 32 19
Wie aufgrund dieser Ergebnisse ersichtlich ist, verminderte sich die Meßempfindlichkeit signifikant im Verlaufe der Zeit, wenn das Luftsperrmittel nicht zugegeben war (Referenzprodukt 2). Im Gegensatz dazu zeigte die Meßempfindlichkeit keine Verminderung, wenn das Luftsperrmittel dieser Erfindung verwendet wurde (erfindungsgemäßes Produkt 2). Spezifisch kann Gallensäure präzise für eine lange Zeitperiode durch das Verfahren unter Verwendung des Luftsperrmittels dieser Erfindung gemessen werden.
Beispiel 4
Anwendung für ein Kreatinin-Meßreagens
Eine Mischung aus Tridecan und Silicon (Verhältnis = 6:4) wurde zu einem Reagens 1 eines Kreatinin-Meßreagenzes als Luftsperrmittel gemäß der unten angegebenen Zusammensetzung gegeben (erfindungsgemäßes Produkt 3). Die Mischung konnte nicht abgedichtet in einem kühlen Raum stehen. Eine standardisierte Kreatinin-Lösung (10,0 mg/dl) wurde aufeinanderfolgend unter Verwendung des Reagenzes 1 des Kreatinin-Meßreagenzes gemessen. Die Änderungen der Meßempfindlichkeit wurden verglichen und untersucht. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 gezeigt. Als Referenz wurde ein Reagens 1 ohne die obige Tridecan/Silicon-Mischung (Referenzprodukt 3) verwendet.
(Reagenzzusammensetzung)
Reagens 1

Natriumhydroxid: 0,2 M
Mischung aus Tridecan und Silicon: 0,2 ml/cm²

Reagens 2

2,4,6-Trinitrophenol: 28,4 mM

(Meßverfahren)
300 μl des Reagenzes 1 wurden zu 15 μl einer Probe gegeben. Die Mischung wurde 5 Minuten bei 37°C inkubiert. Nach Zugabe von 75 μl des Reagenzes 2 wurde die Mischung gerührt und dann bei 37°C 5 Minuten inkubiert. Unter Verwendung einer Reagenzblankoprobe als Referenz wurden Änderungen der Absorbans der Mischung bei einer Wellenlänge von 505 nm bei 37°C von 1 bis 3 Minuten unter Verwendung einer Hitachi 7150 Automatic Analysers gemessen. Eine physiologische Saline-Lösung wurde als Reagensblanko verwendet.
(Ergebnisse)
Tabelle 4

Konservierung Gallensäuremeßempfindlichkeit (mAbs/100 mg/dl)

Erfindungsgemäßes Produkt 3 Referenzprodukt 3

0 Tag 931 930

8 Tage 930 371

16 Tage 931 94
Wie aufgrund dieser Ergebnisse ersichtlich ist, verminderte sich die Meßempfindlichkeit signifikant im Verlaufe der Zeit, wenn das Luftsperrmittel nicht zugegeben war (Referenzprodukt 3). Im Gegensatz dazu zeigte die Meßempfindlichkeit keine Verminderung, wenn das Luftsperrmittel dieser Erfindung verwendet wurde (erfindungsgemäßes Produkt 3). Spezifisch kann Gallensäure präzise für eine lange Zeitperiode durch das Verfahren unter Verwendung des Luftsperrmittels dieser Erfindung gemessen werden.
Beispiel 5
Anwendung für ein Triglycerid-Meßreagens
Ein Luftsperrmittel (Mischung aus Tetradecan und Silicon (Verhältnis = 6:4) wurde zu einem Reagens 1 mit einem Farbentwickler aus einem Triglycerid-Meßreagens (erfindungsgemäßes Produkt 4) gemäß der unten angegebenen Zusammensetzung gegeben. Dieses Produkt wurde nicht abgedichtet an einem kühlen Platz stehengelassen. Der Färbegrad im Verlaufe der Zeit des Reagenzes 1 wurde mit einem Reagens 1 ohne die obige Tetradecan/Silicon-Mischung (Referenzprodukt 4) unter Verwendung des unten angegebenen Meßverfahrens verglichen. Die Ergebnisse sind in 2 gezeigt.
(Reagenszusammensetzung)
Reagens 1

Glycerinkinase: 900 U/l
Glycerin-3-phosphatoxidase: 3800 U/l
Peroxidase: 1950 U/l
Natrium-3,5-dimethoxy-N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)anilin: 1,8 mM
Mischung aus Tetradecan und Silicon: 0,2 ml/cm²
Gute Pufferlösung: 0,2 M (pH 6,5)

(Meßverfahren)
10 ml des Reagenzes 1 konnten an einer kühlen Stelle 40 Tage nicht abgedichtet stehen. Unter Verwendung eines Reagenzblankos als Referenz wurde ein Absorptionsspektrum des Reagenzes bei einer Wellenlänge von 400 bis 800 nm unter Verwendung eines Beckman DU640-Spektrophotometers gemessen. Als Reagensblanko wurde destilliertes Wasser verwendet.
(Ergebnisse)
Wie aufgrund von 2 ersichtlich ist, wurde, wenn das Luftsperrmittel nicht zugegeben wurde (Referenzprodukt 4) Sauerstoff in Luft beim Reagens absorbiert, wodurch eine Oxidation des Farbentwicklers verursacht wurde. Wie in 2(a) gezeigt ist, wurde eine signifikante blaue Färbung beobachtet, die einen Absorptionspeak bei 590 nm entfaltete.
Im Gegensatz dazu wurden keine Oxidation und Färbung des Reagenzes beobachtet, wie in 2(b) gezeigt ist, wenn das Luftsperrmittel verwendet wurde (erfindungsgemäßes Produkt 4). Spezifisch kann gemäß dem Verfahren unter Verwendung des Luftsperrmittels dieser Erfindung die Färbung des Triglycerid-Meßreagenzes verhindert werden, wodurch das Reagens stabil für eine lange Zeit gelagert werden kann.

Claims

Verfahren zum stabilen Lagern eines wäßrigen Reagens oder einer wäßrigen Probe, umfassend das Schichten einer Mischung aus einem Kettenkohlenwasserstoff und einem Siliconöl, wobei die Mischung mit dem wäßrigen Reagens oder der wäßrigen Probe unmischbar ist und ein spezifisches Gewicht aufweist, das niedriger ist als das des Reagens oder der Probe, über die Oberfläche des wäßrigen Reagenzes oder der wäßrigen Probe, dadurch gekennzeichnet, daß das Siliconöl eine kinematische Viskosität von 100 cSt oder weniger hat.
Verfahren nach Anspruch 1, worin der Kettenkohlenwasserstoff ein flüssiges Paraffin, Isoparaffin, Decan, Undecan, Dodecan oder Tridecan ist.
Verfahren nach Anspruch 1, worin das Siliconöl ein Polyalkylsiloxan, Polyalkylphenylsiloxan oder Polyalkylhydrogensiloxan ist.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die Mischung aus dem Kettenkohlenwasserstoff und dem Silicon ein spezifisches Gewicht von 0,7 bis 0,95 hat.
Verfahren nach einem der Ansprüche 1, 3 und 4, worin der Gehalt des Siliconöls 1 bis 99% ist.
Verfahren nach Anspruch 1, worin das wäßrige Reagens in einem Autoanalysator verwendet wird.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die wäßrige Probe unter Verwendung eines Autoanalysators analysiert wird.
Stabile Reagenseinheit, umfassend einen Behälter, der mit einem wäßrigen Reagens oder einer wäßrigen Probe gefüllt ist, und bei der auf der Oberfläche davon eine Mischung aus einem Kettenkohlenwasserstoff und einem Siliconöl geschichtet ist, wobei die Mischung mit dem wäßrigen Reagens oder der wäßrigen Probe unmischbar ist und ein spezifisches Gewicht hat, das niedriger ist als das des wäßrigen Reagenzes oder der wäßrigen Probe, dadurch gekennzeichnet, daß das Siliconöl eine kinematische Viskosität von 100 cSt oder weniger hat.
Stabile Reagenseinheit nach Anspruch 8, worin die Mischung in einer Menge von 0,03 ml bis 1,0 ml pro 1 cm² der Oberfläche des Reagenzes verwendet wird.