DE69213421T2 - Verfahren zur Herstellung eines aktivierten Faktor VII-Konzentrates mit einer hohen Reinheit - Google Patents
Verfahren zur Herstellung eines aktivierten Faktor VII-Konzentrates mit einer hohen ReinheitInfo
- Publication number
- DE69213421T2 DE69213421T2 DE69213421T DE69213421T DE69213421T2 DE 69213421 T2 DE69213421 T2 DE 69213421T2 DE 69213421 T DE69213421 T DE 69213421T DE 69213421 T DE69213421 T DE 69213421T DE 69213421 T2 DE69213421 T2 DE 69213421T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- factor vii
- carried out
- process according
- vitamin
- plasma
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 3
- 108010054265 Factor VIIa Proteins 0.000 title abstract description 38
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 claims abstract description 45
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 25
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 claims abstract description 19
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 claims abstract description 19
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 claims abstract description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 33
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- 238000003795 desorption Methods 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 11
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 10
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 9
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 claims description 8
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 claims 1
- 229940012414 factor viia Drugs 0.000 abstract description 11
- 101000856746 Bos taurus Cytochrome c oxidase subunit 7A1, mitochondrial Proteins 0.000 abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 abstract description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 abstract 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 abstract 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 10
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 10
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 6
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 6
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical compound [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 3
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 3
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 3
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 3
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 3
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 3
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010075016 Ceruloplasmin Proteins 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 2
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 2
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 2
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 2
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 2
- 108010018823 anti-inhibitor coagulant complex Proteins 0.000 description 2
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 2
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 2
- 229940105776 factor viii inhibitor bypassing activity Drugs 0.000 description 2
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 229940078499 tricalcium phosphate Drugs 0.000 description 2
- 229910000391 tricalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019731 tricalcium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005701 Calcium-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010045403 Calcium-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000016519 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010048049 Factor IXa Proteins 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000975003 Homo sapiens Kallistatin Proteins 0.000 description 1
- 101001077723 Homo sapiens Serine protease inhibitor Kazal-type 6 Proteins 0.000 description 1
- 229940122920 Kallikrein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 102100025421 Serine protease inhibitor Kazal-type 6 Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229940105772 coagulation factor vii Drugs 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 229940012426 factor x Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000031915 positive regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 108010012557 prothrombin complex concentrates Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6437—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21021—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft im wesentlichen ein Verfahren zur Herstellung eines Konzentrats von aktiviertem Faktor VII hoher Reinheit, weiches im wesentlichen frei von Vitamin K-abhängigen Faktoren und den Faktoren VIIIC und VIIICAg ist, sowie das durch dieses Verfahren erhaltene Produkt.
- Der für die Herbeiführung der Hämostase bei Hämophilen mit zirkulierenden Antikörpern verantwortliche Koagulationsfaktor ist bekannt als aktivierter Faktor VII. Er ist in der Zusammensetzung von aktivierten Prothrombinkonzentraten, wie beispielsweise FEIBA oder AUTOPLEX , zu finden.
- Verschiedene Literaturstellen, wie die WO-A-89112097, WO-A-83/00016, EP-A-0 225 160, US-A-4 637 932 und FR-A-2 622 108 haben die wirksame Rolle von Faktor VIIa nachgewiesen. Insbesondere im Dokument EP-B1-0 225 160 wird die Wirksamkeit von Faktor VIIa bei der Herbeiführung einer normalen Hämostase im Fall von Blutungsstörungen, die nicht durch einen Faktor VIII-Mangel oder durch Inhibitoren hervorgerufen werden, aufgezeigt.
- Diese Literaturstellen sowie noch andere beschreiben verschiedene Techniken der Reinigung von Faktor VII und Faktor VIIa. Die eingesetzten Techniken sind jedoch sehr kompliziert und erfordern zahlreiche Schritte und sind schwierig bei der Anwendung in großtechnischem und medizinischem Rahmen oder mit hohen Kosten verbunden.
- Beispielsweise beschreibt Pancham in der US-A4 637 932 ein Verfahren zur Reinigung von Faktoren VII und Faktoren VIIa aus einer wässerigen, Plasmaproteine enthaltenden Lösung durch Adsorption dieser Proteine auf einem Gel, welches bivalente Metalisalze mit einer Affinität für die sich an Calcium bindenden Proteine enthält, wie Tricalciumphosphat in Form von Hydroxyapatit der Firma Biorad , welches anschließend mit Hilfe eines Puffers desorbiert wird, der Salze enthält, welche die fixierten Proteine verschieben können.
- Danach erfolgt eine zusätzliche Reinigung mittels Ionenaustausch-Chromatografie vom Typ DEAE (Diethylaminoethyl), wie beispielsweise unter der Handelsbezeichnung DEAE- Sephadex im Handel erhältlich, u.zw. gemäß dem in der US-A-3 717 708 beschriebenen Verfahren.
- Das Dokument RESEARCH DISCLOSURE Bd. 269, September 1986, HAVANT GB, S. 564-565 enthält einen Artikel von Bjoem betreffend die Aktivierung des Koagulationsfaktors VII zu Faktor VIIa. Die beschriebene Methode besteht darin, daß eine selektive Adsorption von Faktor VII auf einer lonenaustauschersäule vom Typ DEAE- Sephadex, QAE-Sephadex oder Mono-Q von Pharmacia vorgenommen wird, um dessen Aktivierung zu bewerkstelligen. Es sei bemerkt, daß diese Methode nur dann sinnvoll erscheint, wenn von einem Faktor VII ausgegangen wird, der zuvor mittels klassischer Methoden gereinigt oder mittels gentechnischer Methoden erhalten wurde, wie auf Seite 564 ausgeführt.
- Hingegen wird im Rahmen der Erfindung versucht, im Plasma vorhandenen nicht gereinigten Faktor VII zu aktivieren.
- Das Dokument EP-A 0 346241 der Fondaüon Nationale de Transfusion Sanguine oder FNTS = WO-A-89/12097 = FR-A-2 632 524 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung einer Faktor VIIa-reichen Fraktion unter Anwendung eines Schrittes zur Fixierung eines PPSB- Voreluats an Calcium nach der Zugabe eines Kallikrein-inhibitors, wie Aprotinin, wodurch ein Fremdprotein eingeführt wird, welches kontaminierenden Charakter haben kann. Der erste Aktivierungsschritt erfolgt mittels Tricalciumphosphat, für das der Faktor VII eine große Affinität zeigt, dann werden Desoprtionsschritte mit Salzen durchgeführt, die die an Calcium fixierten Proteine wieder abtrennen können, wie Mono- oder Dinatriumphosphat, und die Aktivierung des Faktors VII wird durch eine Aktivierung mit Kaolin oder Celit vervollständigt. Vor der Virusinaktivierung wird Antithrombin III zugegeben, um jegliche vorzeitige Ausfällung zu vermeiden (Spalte 5, Bsp. 2, Z. 31 bis 36). Schließlich wird eine Virusinaktivierung ausgeführt, und danach entfernt man die Inaktivierungsmittel mittels Chromatografie auf einer Q-Sepharose-Säule. Zuletzt gibt man wieder Albumin zu, um die Proteine zu stabilisieren (Bsp. 2, Spalte 5, Z. 4547). Somit ist dieses Verfahren kompliziert, erfordert während des Ablaufs die Überprüfung der Aktivierung und überdies die Zugabe von drei Fremdproteinen, nämlich Aprotinin, Antithrombin III und Albumin, was ein potentielles Kontaminationsrisiko darstellen kann. Schließlich enthält der erhaltene Faktor VII noch nicht zu vernachlässigende Mengen an weiteren Koagulationsfaktoren, wie aus der Tabelle in Spalte 6 hervorgeht, u.zw. insbesondere Faktor II, Faktor IX und Faktor X, was das Thrombogeneserisiko bezeugt.
- Im Dokument US-A4 473 553, ZUFFI, wird zuerst von einer Cohn-Fraktion gesprochen, die durch eine oder mehrere Aussalzungen des Ausgangsplasmas mit Alkohol gebildet wird. Diese Cohn-Fraktion wird danach mit einer Mischung behandelt, welche zum Großteil Calciumchlorid mit einer geringen Menge eines polyanionischen Adsorptionsmittels, das Dextransulfat (Beispiel 1) oder Heparin (Beispiel 2) sein kann, enthält, um die Lipoproteine durch Ausfällung zu entfernen. In dieser Mischung hat das Dextransulfat keine nachweisbare aktivierende Wirkung. Die Aktivierung des Faktors VII findet zuletzt mit Hydroxyapatit statt.
- Die Erfindung unterscheidet sich von diesem Dokument, indem sie unmittelbar Plasma verwendet, welches nur mit Dextransulfat-Kügelchen ohne Ausfällung von Lipoprotein in diesem Stadium direkt aktiviert wird, was das Verfahren in der Folge vereinfacht und einen sehr guten Aktivierungsgrad liefert.
- Andererseits beschreiben Michalsky et al. in der FR-A-2 622 108 ein Verfahren zur Reinigung von Faktor VII mittels Adsorptionschromatografie auf DEAE Sepharose mit anschließender Elution mittels einer Pufferlösung mit 0,18 bis 0,20 M NaCl, wodurch ein Faktor VII mit einer spezifischen Aktivität, die zwischen 0,8 und 1 liegt, erhalten wird, was einen sehr geringen Reinheitsgrad darstellt.
- Schließlich ist im Artikel von Hedner und Kiesel in 3. Clin. (1983), 71, S 1836-1841 die Verwendung von menschlichem aktivierten Faktor VII bei der Behandlung zweier Patienten beschrieben, welche an Hämophilie A leiden, mit einem hohen Anteil an Inhibitoren. Bei ihrer Behandlung verwenden die Autoren als aktivierten Faktor VII einen Faktor VII, der mittels Ionenaustausch-Chromatografie gereinigt wurde (siehe 5. 1837, linke Spalte), u.zw. mit Hilfe einer DEAE-Sepharose -Saule unter Eluieren mit Pufferlösungen, die Calciumchlorid enthalten. Faktor VII wird durch den Einsatz von aktiviertem Faktor XII aktiviert, welcher seinerseits durch Aktivierung mit menschlichem Kallikrein in Gegenwart von Dextransulfat erhalten wird. Diese Vorgangsweise ist ebenfalls kompliziert und bedingt die Zuführ von exogenen Proteinen, nämlich von aktiviertem Faktor XII und Kallikrein, die am Ende des Reinigungsschrittes entfernt werden müssen, um einen aktivierten Faktor VII sehr hoher Reinheit zu erhalten.
- Das Hauptziel der vorliegenden Erfindung liegt somit darin, das neue technische Problem zu lösen, welches in der Bereitstellung einer Lösung besteht, die die Herstellung von aktiviertem Faktor VII hoher Reinheit, der im wesentlichen frei von Vitamin K-abhängigen Faktoren und den Faktoren VIIIC und VIIICAg ist, gestattet.
- Ein Ziel der vorliegenden Erfindung besteht auch noch darin, dieses neue technische Problem durch den Einsatz einer Lösung zu überwinden, die keinen Einsatz von exogenen Proteinen zur Aktivierung von Faktor VII benötigt.
- Ein noch weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung besteht darin, das oben aufgezeigte neue technische Problem mit einer einfachen Lösung, insbesondere im Aktivierungsschritt des Faktors VII und ebenso in den eigentlichen Reinigungsschritten zu überwinden.
- Zum ersten Mal wird das oben aufgezeigte technische Problem durch die vorliegende Erfindung auf eine einfache, relativ kostengünstige, in großtechnischem und medizinischem Maßstab anwendbare Weise gelöst, indem ein aktivierter Faktor VII hoher Reinheit geschaffen wird, welcher im wesentlichen frei von Vitamin K-abhängigen Faktoren und den Faktoren VIIIC und VIIICAg ist.
- Daher schafft die vorliegende Erfindung gemaß einem ersten Aspekt ein Verfahren zur Herstellung eines Konzentrats von hochreinem aktivierten Faktor VII, welches die Verwendung eines kryopräzipitatfreien Plasmas, vorzugsweise menschlichen Ursprungs, sowie mindestens einen Reinigungsschritt durch mindestens eine Chromatografie auf einem Anionenaustauscherharz sowie einen Aktiverungsschritt des Faktors VII umfaßt und dadurch gekennzeichnet ist, daß man zunächst die direkte Aktivierung des Faktors VII in dem von Kryopräzipitat befreiten Plasma ohne Zuführ von exogenen Proteinen durch die Verwendung von im Plasma unlöslichem Dextransulfat in Pulverform durchführt. Vorzugsweise wird das Dextransulfat in Form von Kügelchen verwendet. Die Größe der Kügelchen ist nicht kritisch, und man kann handelsübliche Dextransulfatkügelchen, wie die von Sigma unter der Referenz D5650 vertriebenen, verwenden. Es sei bemerkt, daß keinerlei Spezialbehandlung dieser Kügelchen vor deren Verwendung notwendig ist, was ebenfalls einen bedeutenden Vorteil der Erfindung darstellt.
- Gemäß einem weiteren vorteilhaften Merkmal des erfindungsgemäßen Verfahrens wird der Schritt zur Aktivierung des Faktors VII vorzugsweise mit Dextransuifat in Kälte bei kontrollierter Temperatur, vorteilhafterweise im Bereich von 0ºC und +4ºC, durchgeführt, wodurch sich eine sehr gute Aktivierung des Faktors VII zu Faktor VIIa erzielen laßt.
- Gemäß einem anderen vorteilhaften Merkmal des erfindungsgemaßen Verfahrens erfolgt nach dem Aktivierungsschritt eine DEAE-Anionaustausch-Chromatografie des von Kryoprazipitat befreiten, den aktivierten Faktor VII sowie nicht aktivierten Faktor VII enthaltenden Plasmas derart, daß im wesentlichen alle Vitamin K-abhängigen Faktoren selektiv adsorbiert werden, d.h. in erster Linie umfassend den aktivierten Faktor VII, den nicht aktivierten Faktor VII, Faktor IX, Faktor X und Faktor II. Daher besteht das Ziel dieser selektiven Adsorption in der Entfernung eines bedeutenden Teils der unerwünschten Proteine, wie Albumin.
- Gemaß einem noch anderen vorteilhaften Merkmal des erfindungsgemaßen Verfahrens wird eine nicht selektive Desorption aller auf der DEAE-Ionenaustauschersäule adsorbierten Vitamin K-abhangigen Faktoren durchgeführt. Dazu kann man mit jeder dem Fachmann zur Durchführung dieser Desorption auf dieser Art von Gel wohlbekannten Elutions-Pufferlösung eluieren.
- Danach wird das erhaltene Eluat, das sämtliche Vitamin K-abhängige Faktoren enthält, neuerlich über eine spezifische Anionenaustauschersäule vom quaternären Amintyp, vorzugsweise vom Typ Q-Sepharose Fast Flow von Pharmacia, welche in Form von zu etwa 6 % vernetzten Agarosekügelchen mit vorzugsweise einem kleinen C&sub1;-C&sub6;-Spacerarm vorliegt, derart geleitet, daß alle Vitamin K-abhängigen Faktoren selektiv adsorbiert werden.
- Diese Adsorption der Vitamin K-abhängigen Faktoren auf dieser Säule auf spezifische Weise gestattet auch die Entfernung weiterer kontaminierender Proteine, wie α-Antitrypsin und Ceruloplasmin.
- Diese selektive Adsorption auf einer Säule vom quaternären Amintyp stellt ein patentierbares Merkmal des Verfahrens unabhängig von der Aktivierung des Faktors VII dar. Dasselbe gilt für die selektive Desorption, auf die im folgenden eingegangen wird. Vorzugsweise ist die Lösung für die selektive Adsorption eine Pufferlösung mit 150 mM NaCl, 4 mM Trinatriumcitrat und pH 6.
- Anschließend wird eine selektive Desorption des aktivierten Faktors VII und des nicht aktivierten Faktors VII durchgeführt, indem eine Elution der Säule mit einer Pufferlösung zur selektiven Desorption mit der folgenden Zusammensetzung durchgeführt wird:
- NaCl .... 250 mM
- Trinatriumcitrat .... 4 mM
- pH 6
- Das erhaltene Eluat, welches im wesentlichen aktivierten und nicht aktivierten Faktor VII in wassenger Form, im wesentlichen frei von anderen Vitamin K-abhängigen Faktoren enthält, wird danach einem Schritt zur Virusinaktivierung auf bekannte Weise unterzogen, beispielsweise durch den Einsatz einer Mischung von TNBP/Tween unter Einhaltung eines gegenseitigen Verhältnisses von 0,3 % TNBP und 1 % Tween, bezogen auf die Gesamtkonzentration der Lösung von aktiviertem Faktor VII/Faktor VII, vorzugsweise während 6 h bei 24ºC unter Rühren entsprechend dem im Dokument EP-A-0 131 740 bzw. US-A-4 540 573 beschriebenen Verfahren.
- Nach der Inaktivierung ist es notwendig, die restliche Mischung der Inaktivatoren TNBP/Tween zu entfernen, und es wird neuerlich eine Adsorption auf der gleichen Q- Sepharose Fast Flow -Säule mit einer Pufferlösung durchgeführt, die die selektive Adsorption gestattet, namlich 150 mM NaCl, 4 mM Trinatriumcitrat und pH 6.
- Auf diese Adsorption folgt anschließend die Desorption mit der gleichen Desorptionslösung (250 mM NaCl, 4 mM Trinatriumcitrat, pH 6), wodurch ein Eluat erhalten wird, welches den hochreinen aktivierten Faktor VII und den nicht aktivierten Faktor VII im wesentlichen frei von Vitamin K-abhängigen Faktoren sowie den Faktoren VIIIC und VIIICAg enthält.
- Danach kann man dieses Eluat auch gegen einen Puffer diafiltrieren, der vorzugsweise für die Injektion beim Menschen kompatibel ist (wie ein Puffer aus 100 mM NaCl, 4 mM Trinatriumcitrat, 3 g/l Lysin, pH 7), welcher vorteilhafterweise auf einen Gehalt an aktiviertem Faktor VII von 5000 IU pro 20 ml-Fläschchen konzentriert und durch Filtration über einen Sterilfilter mit einer Porengröße von 0,2 µm sterilfiltriert werden kann, worauf gewünschtenfalls eine Lyophilisierung vorgenommen werden kann.
- Es sei bemerkt, daß es mit dem erfindungsgemaßen Verfahren möglich ist, nicht nur einen Faktor VII hoher Reinheit, sondern auch einen sehr hohen Aktivierungsgrad des Faktors VII zu erreichen.
- Aus diesem Grund bedeutet der Ausdruck "aktivierter Faktor VII hoher Reinheit" in der Beschreibung und in den Ansprüchen, daß das Verhältnis von Faktor VIIa/Faktor VII höher als 5, vorzugsweise höher als 7 und noch bevorzugter etwa 10 ist, während die spezifische Aktivität des aktivierten Faktors VII über 200 IU/mg Protein beträgt. Die thrombogene Aktivität gemaß dem freien Thrombin-Test ist nach 6 h bei 37ºC negativ.
- Unter die Erfindung fällt auch der durch das zuvor beschriebene Verfahren erhaltene aktivierte Faktor VII hoher Reinheit.
- Weitere Ziele, Merkmale und Vorteile der Erfindung gehen klar aus der folgenden erläuternden Beschreibung unter Bezugnahme auf zwei Herstellungsbeispiele hervor, welche einfach zur Illustration angeführt sind und den Schutzumfang der Erfindung in keiner Weise einschränken sollen. In diesen Beispielen verstehen sich, wenn nicht anders angegeben, die Prozentangaben als Gewichtsprozent.
- 5 l kryopräzipitatfreies Plasma, das auf 4ºC gehalten wird, werden auf einen Ionenstärke von < 140 mM NaCl eingestellt.
- Chargenweise werden 0,1 g Dextransulfatkügelchen (Sigma D5650) pro Liter Plasma zugegeben. Nach 1 h Rühren bei 4ºC wird dekantiert und der Überstand gewonnen, um 90 min lang mit 0,5 g/l DEAE Sephadex A50 inkubiert zu werden. Nach dem Dekantieren wird das Gel, auf dem sämtliche Vitamin K-abhängigen Faktoren fixiert sind, mit 11 Puffer aus 4 mM Trinatriumcitrat, 140 mM NaCl, pH 7 gewaschen, wodurch u.a. Albumin entfernt werden kann. Die Vitamin K-abhängigen Faktoren werden danach mit dem gleichen Puffer, dessen Ionenstärke auf 500 mM NaCl erhöht wurde, gewaschen. Man gewinnt 500 ml Eluat 1.
- Diese Eluat 1 wird diafiltriert und mit einer Kassette mit einer Durchlaßschwelle von 10 Kd gegen einen Puffer aus 4 mM Trinatriumcitrat, 150 mM NaCl, pH 6, auf 250 mi konzentriert.
- Diese Lösung wird auf einer Säule mit 9 cm Durchmesser, enthaltend 300 ml Q- Sepharose Fast Flow -Gel (Pharmacia) und mit demselben Puffer equilibriert, chromatografiert. 5 l dieses Puffers gestatten die Entfernung von α-Antitrypsin und Ceruloplasmin. Die Faktoren VII/VIIa werden spezifisch desorbiert, indem die Ionenstärke auf 250 mM NaCl erhöht wird, man erhält etwa 2 l Eluat II.
- Das Eluat II wird anschließend 6 h lang bei 24ºC unter Rühren einem Virusinaktivierungsschritt mit einer derartigen TNBP/Tween-Mischung unterzogen, daß die Endkonzentration in der Faktor VII(VIIa-Lösung 0,3 % TNBP und 1 % Tween beträgt.
- Nach der Inaktivierung wird die Lösung diafiltriert und auf 250 ml konzentriert, u.zw. gegen den Puffer, der zur Equilibrierung der zuvor genannten Q Sepharose Fast Flow -Säule gedient hat (4 mM Trinatriumcitrat, 150 mM NaCl, pH 6). Die Lösung wird neuerlich über Q Sepharose Fast Flow chromatografiert, u.zw. mit 2 l Waschlösung, die identisch mit dem Equilibrierungspuffer ist, wodurch die Entfernung der Inaktivatorenmischung möglich wird, indem diese in die nicht zurückgehaltene Fraktion geleitet wird. Mit dem Puffer aus 4 mM Trinatriumcitrat, 250 mM NaCl, pH 6, werden die Faktoren VII/VIIa gegenüber den anderen Vitamin K-abhängigen Faktoren selektiv eluiert, um ein Eluat III zu erhalten. Dieses Eluat von 2 l wird danach gegen einen Puffer diafiltriert, der mit der Injektion beim Menschen kompatibel ist (4 mM Trinatriumcitrat, 100 mM NaCl, 3 g/l Lysin, pH 7), und auf einen Gehalt von 5000 IU Faktor VIIa pro 20 ml-Fläschchen konzentriert und dann lyophilisiert.
- Die mit dem erfindungsgemaßen Verfahren im Rahmen von vier Pilotversuchen an jeweils 5 l kryopräzipitatfreiem Plasma sowie für Vergleichszwecke an einem Kontroll-Lot gemaß demselben Verfahren, aber unter Weglassung des Aktivierungsschritts mit Dextransulfat, erzielten Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengefaßt.
- Die Ergebnisse in Tabelle I sind in Internationalen Einheiten ausgedrückt. Die Bestimmungen erfolgten in verschiedenen Stadien des Verfahrens, wie dies für den Fachman bei Betrachtung der Tabelle I wohl klar ist. TABELLE I
- *PDC = kryopräzipitatfreies Plasma
- Q1 : 1. Adsorptions-Chromatografie auf Q Sepharose Fast Flow
- Q2 : 2. Adsorptions-Chromatografie auf Q Sepharose Fast Flow
- LYO: Lyophllisation.
- Biologische Kenndaten des Faktor VIIa-Konzentrats nach der Rekonstitution mit 20 ml destilliertem Wasser:
- VIIa : 172 ± 27 UI/ml
- VII : 14,3 ± 1,4 UI/ml
- VIIAg : 0,88 ± 0,22 UI/ml
- VIIa/VII : 12 ± 2,5
- Proteingehalt : 0,82 ± 0,07
- AS VIIa : 208 ± 36
- AS VII : 17,5 ± 1,6
- II/IIa : < 0,1 UI/ml
- IX/IXa : < 0,1 UI/ml
- XI/Xa : < 0,1 UI/ml
- VIIIC : < 0,1 UI/ml
- VIIICAg : < 0,1 UI/ml
- Die Dosierungen der Koagulationsfaktoren erfolgen durch zeitliche Messungen der Verkürzung der Koagulationszeit eines Mangelplasmas bei einem fehlenden Faktor. Dieser Faktor wird mit der Probe eingebracht.
- Der Grad der Aktivierung des Faktors VII wird unter Verwendung von menschlichem Thromboplastin und Rinder-Thromboplastin gemaß der von Van Deijk et al., Haemostasis 13, 1983, beschriebenen Methode bestimmt.
- Der aktivierte Faktor VII hat eine größere Affinität zu Rinder-Thromboplastin als der Faktor VII, während die Affinität für menschliches Thromboplastin bei beiden gleich ist. Der Aktivierungsgrad wird ausgedruckt durch das Verhältnis
- Faktor VII mit Human-Thromboplastin
- Zum Vergleich ist dieses Verhältnis 1 in normalem Humanplasma.
- Es wird vorgegangen, wie in Beispiel 1 beschrieben, mit der Ausnahme, daß zu Beginn 300 l Plasma verwendet werden.
- Die erzielten Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle II ausgedruckt. TABELLE II
- PDC, Q1, Q2 und LYO: Bedeutungen siehe Tabelle I.
- Biologische Kenndaten des Faktor VIIA-Konzentrats nach der Rekonstitution mit 20 ml destilliertem Wasser:
- VIIa : 244 UI/ml
- VII : 32,5 UI/ml
- VIIa/VII : 7,5
- Proteingehält : 1 g/l
- AS VIIa : 244
- AS VII : 32,5
- II/IIa : < 0,1 UI/ml
- IX/IXa : < 0,1 UI/ml
- X/XA : < 0,1 UI/ml
- VIIIC : < 0,1 UI/ml
- VIIICAg : < 0,1 UI/ml
- Aus den voranstehenden Beispielen und den die Ergebnisse aufzeigenden Tabellen ist daher ersichtlich, daß sich beim Kontroll-Lot ohne anfängliche Aktivierung das Verhältnis VII/VIIa nicht wesentlich verändert hat, well es nahe beim Ausgangsverhältnis von 1,5 von normalem Plasma liegt.
- Weiters gestattet die Erfindung neben der Tatsache, ein sehr gutes Aktivierungsverhältnis zu erreichen, auch die Erzielung eines hervorragenden Reinheitsgrades des Faktors VII mittels eines äußerst einfachen, leicht durchführbaren Verfahrens mit sehr guter Reproduzierbarkeit.
- Außerdem weist das erfindungsgemaße Produkt eine sehr schwache thrombogene Aktivität auf. Der freie Thrombin-Test (Europäische Pharmakopöe 2. Ausgabe, 554) ist nämlich nach 6 h bei 37ºC mit dem erfindungsgemäßen Produkt negativ, was ein bevorzugtes wesentliches Merkmal des erfindungsgemäßen Produkts darstellt, wodurch sich dieses von den Produkten des Standes der Technik unterscheidet. Die mittels anderer Verfahren erhaltenen aktivierten Faktor VIL-Konzentrate sowie die aktivierten Prothrombinkonzentrate des Standes der Technik, wie beispielsweise FEIBA oder AUTOPLEX , haben nämlich vor 6 h eine positive thrombogene Aktivität.
- Es sei auch bemerkt, daß das erfindungsgemäße Konzentrat an aktiviertem Faktor VII wegen seiner Reinheit nicht mit Antithrombin III behandelt wird und somit kein Risiko einer vorzeitigen Koagulation in sich birgt.
- Außerdem erfordert das erfindungsgemäße Konzentrat an aktiviertem Faktor VII insbesondere in Hinblick auf die Lyophilisierung aufgrund seiner Reinheit für seine Stabilität nur den Einsatz von Lysin, wahrend die älteren Produkte zur Lyophilisierung den Einsatz von Albumin benötigten, weshalb die Kosten verringert werden und die Injektion eines für den Patienten unnötigen Proteins vermieden wird.
Claims (10)
1. Verfahren zur Herstellung eines Konzentrats an hochreinem
aktiven Faktor VII, das die Verwendung eines vom Kryopräzipitat befreiten
Plasmas, vorzugsweise menschlichen Ursprungs, sowie mindestens einen
Reinigungsschritt durch mindestens eine Chromatographie auf einem
Anionenaustauscherzharz, sowie einen Aktivierungsschritt des Faktors VII
umfaßt, dadurch gekennzeichnet, daß man zunächst die direkte Aktivierung
des Faktors VII in dem vom Kryopräzipitat befreiten Plasma ohne Zufuhr
von exogenen Proteinen durch die Verwendung von in dem Plasma
unlöslichem Dextransulfat in Pulverform durchführt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das
Dextransulfat in Form von Kügelchen verwendet wird.
3. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 2, dadurch
gekennzeichnet, daß der Schritt zur Aktivierung des Faktors VII
vorzugsweise mit Dextransulfat in der Kälte unter kontollierter Temperatur,
vorteilhafterweise im Bereich von 0 bis +4 ºC, durchgeführt wird.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch
gekennzeichnet, daß man nach dem Aktivierungsschritt eine DEAE-
Anionenaustauschchromatographie des vom Kryoprazipitat befreiten, den
aktiven Faktor VII sowie den nicht aktiven Faktor VII enthaltenden Plasmas
so ausführt, daß alle Vitamin K-abhängigen Faktoren selektiv adsorbiert
werden.
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß man
eine nicht selektive Desorption aller auf der DEAE-Ionenaustauschersäule
adsorbierten Vitamin K-abhängigen Faktoren durchführt.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das
gewonnene Eluat, das die Vitamin K-abhängigen Faktoren enthält, erneut
durch eine spezifische Anionenaustauschersäule vom quartären Aminotyp,
vorzugsweise vom Typ Q-Sepharose Fast Flow von PHARMACIA, das
in Form von zu etwa 6% vernetzten Agarosekügelchen vorliegt und
vorzugsweise einen kleinen C&sub1;-C&sub6;-Spacerarm enthält, so durchgeleitet
wird, daß alle Vitamin K-abhängigen Faktoren selektiv adsorbiert werden.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man
anschließend eine selektive Desorption des aktiven und nicht aktiven
Faktors VII durchführt, indem eine Elution der Säule mit einer Pufferlösung
zur selektiven Desorption mit der folgenden Zusammensetzung
durchgeführt wird:
- NaCl 250 mM
- Tri-Na-citrat 4 mM
- pH 6
8. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß das
gewonnene Eluat, das im wesentlichen den aktiven Faktor VII und den
restlichen nicht aktiven Faktor VII in wäßriger, im wesentlichen von
anderen Vitamin K-abhangigen Faktoren befreiter Form enthält, einen
weiteren Schritt zur Inaktivierung von Viren durchläuft, beispielsweise
durch 6-stündige Verwendung einer Mischung von TNBP/Tween bei 24ºC
unter Rühren, wobei man einen relativen Anteil von 0,3 % TNBP und 1 %
Tween im Verhältnis zur Gesamtkonzentration der Lösung von aktivem
Faktor VII/Faktor VII einhält, wonach die Inaktivierungsmischung durch
Adsorption auf der gleichen Säule mit der gleichen Pufferlösung beseitigt
wird, wodurch die selektive Adsorption (NaCl 150 mM, Tri-Na-citrat 4
mM und pH 6) bei selektiver Desorption mit der gleichen selektiv
desorbierenden Pufferlösung sichergestellt wird.
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß eine
Diafiltration gegen eine Pufferlösung, die vorzugsweise bei Injektion in
Menschen verträglich ist, wie etwa eine Pufferlösung aus 100 mM NaCl,
4 mM Tri-Na-citrat, 3g/l Lysin und pH 7, durchgefährt wird.
10. Verfahren nach anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß eine
Konzentration auf einen Wert von 5000 IU des aktiven Faktors VII pro 20
ml-Kolben vorgenommen wird, indem man durch einen Sterilfilter mit
einer Porengröße von 0,2 µm sterilfiltriert und anschließend eine
Lyophilisierung durchführt.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9115601A FR2684999A1 (fr) | 1991-12-16 | 1991-12-16 | Procede de fabrication d'un concentre de facteur vii active de haute purete essentiellement depourvu des facteurs vitamine k dependants et des facteurs viiic et viiicag. |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE69213421D1 DE69213421D1 (de) | 1996-10-10 |
DE69213421T2 true DE69213421T2 (de) | 1997-04-03 |
Family
ID=9420096
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE69213421T Expired - Lifetime DE69213421T2 (de) | 1991-12-16 | 1992-12-01 | Verfahren zur Herstellung eines aktivierten Faktor VII-Konzentrates mit einer hohen Reinheit |
DE92403234T Pending DE547932T1 (de) | 1991-12-16 | 1992-12-01 | Verfahren zur Herstellung eines aktivierten Faktor VII-Konzentrates mit einer hohen Reinheit. |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE92403234T Pending DE547932T1 (de) | 1991-12-16 | 1992-12-01 | Verfahren zur Herstellung eines aktivierten Faktor VII-Konzentrates mit einer hohen Reinheit. |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5344918A (de) |
EP (1) | EP0547932B1 (de) |
JP (1) | JP2533050B2 (de) |
AT (1) | ATE142255T1 (de) |
DE (2) | DE69213421T2 (de) |
DK (1) | DK0547932T3 (de) |
ES (1) | ES2056782T3 (de) |
FR (1) | FR2684999A1 (de) |
GR (2) | GR930300094T1 (de) |
Families Citing this family (33)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5664362A (en) * | 1993-09-03 | 1997-09-09 | The Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Fishing lure which releases the involuntary biting reflex of largemouth bass and other fishes within the family centrachidae |
DE19538716A1 (de) * | 1995-10-18 | 1997-04-24 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Quantifizierung von aktiviertem Gerinnungsfaktor VII (FVIIa) |
DE19531637A1 (de) * | 1995-08-28 | 1997-03-06 | Immuno Ag | Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörugnen, Verfahren zur Herstellung derselben und deren Verwendung |
DE19538715A1 (de) | 1995-10-18 | 1997-04-30 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Reinigung von Faktor VII und aktiviertem Faktor VII |
AU781741B2 (en) * | 1998-04-24 | 2005-06-09 | Csl Behring Gmbh | Process for the preparation in pure form of the protease activating blood clotting factor VII, its proenzyme or mixture of both proteins by means of ion-exchange chromatography |
AT408613B (de) * | 1998-06-17 | 2002-01-25 | Immuno Ag | Pharmazeutisches faktor vii-präparat |
US6258577B1 (en) | 1998-07-21 | 2001-07-10 | Gambro, Inc. | Method and apparatus for inactivation of biological contaminants using endogenous alloxazine or isoalloxazine photosensitizers |
US6277337B1 (en) | 1998-07-21 | 2001-08-21 | Gambro, Inc. | Method and apparatus for inactivation of biological contaminants using photosensitizers |
US6444788B1 (en) * | 1999-03-15 | 2002-09-03 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatography of GLP-1, analogs and derivatives thereof |
US6451987B1 (en) | 1999-03-15 | 2002-09-17 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatography of proteins and peptides |
DE19937218A1 (de) * | 1999-08-06 | 2001-02-08 | Aventis Behring Gmbh | Verfahren zur Reindarstellung der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease, ihres Proenzyms oder eines Gemisches beider Proteine mittels Affinitätschromatographie |
US6268120B1 (en) | 1999-10-19 | 2001-07-31 | Gambro, Inc. | Isoalloxazine derivatives to neutralize biological contaminants |
US7648699B2 (en) | 2000-06-02 | 2010-01-19 | Caridianbct Biotechnologies, Llc | Preventing transfusion related complications in a recipient of a blood transfusion |
TW590780B (en) | 2000-06-02 | 2004-06-11 | Gambro Inc | Additive solutions containing riboflavin |
US7985588B2 (en) | 2000-06-02 | 2011-07-26 | Caridianbct Biotechnologies, Llc | Induction of and maintenance of nucleic acid damage in pathogens using riboflavin and light |
US9044523B2 (en) | 2000-06-15 | 2015-06-02 | Terumo Bct, Inc. | Reduction of contaminants in blood and blood products using photosensitizers and peak wavelengths of light |
ATE428439T1 (de) | 2001-12-21 | 2009-05-15 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Flüssige zusammensetzung aus faktor vii polypeptiden |
PL207018B1 (pl) | 2002-06-21 | 2010-10-29 | Novo Nordisk Helth Care Ag | Kompozycja farmaceutyczna, sposób przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII i zastosowanie polipeptydu czynnika VII |
KR101204712B1 (ko) * | 2003-03-18 | 2012-11-27 | 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 | Gla-잔기 함유 세린 프로테아제의 제조 방법 |
US7897734B2 (en) | 2003-03-26 | 2011-03-01 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Method for the production of proteins |
MXPA05012476A (es) | 2003-05-23 | 2006-02-22 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Estabilizacion de proteina en solucion. |
ES2382157T3 (es) | 2003-06-25 | 2012-06-05 | Novo Nordisk Health Care Ag | Composición líquida de polipépttidos del factor VII |
KR101293503B1 (ko) | 2003-08-14 | 2013-08-07 | 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 | 인자 vii 폴리펩티드의 액상 수성 약학적 조성물 |
DE602004023626D1 (de) * | 2003-08-21 | 2009-11-26 | Novo Nordisk As | Trennung von polypeptiden mit einer racemisierten aminosäure |
CA2549593C (en) | 2003-12-19 | 2014-02-11 | Novo Nordisk Health Care Ag | Stabilised compositions of factor vii polypeptides |
EP1797122A2 (de) * | 2004-09-29 | 2007-06-20 | Novo Nordisk Health Care AG | Reinigung eines faktor-vii-polypeptid-wirkstoffes mittels entfernung von desgla-faktor-vii-polypeptidstrukturen |
ES2257225B1 (es) * | 2006-02-17 | 2007-03-16 | Grifols, S.A | Preparacion terapeutica de fviia de muy alta pureza y metodo para su obtencion. |
FR2901707B1 (fr) * | 2006-05-31 | 2017-09-29 | Lab Francais Du Fractionnement | Composition de facteur vii recombinant ou transgenique, chaque molecule de facteur vii possedant deux sites de n-glycosylation a motifs glycanniques definis |
FR2904558B1 (fr) * | 2006-08-01 | 2008-10-17 | Lab Francais Du Fractionnement | "composition de facteur vii recombinant ou transgenique, presentant majoritairement des formes glycanniques biantennees, bisialylees et non fucosylees" |
FR2917414B1 (fr) * | 2007-06-15 | 2012-07-13 | Lab Francais Du Fractionnement | Facteur vii/viia humain modifie et composition pharmaceutique contenant celui-ci |
FR2942231B1 (fr) | 2009-02-19 | 2015-03-20 | Lfb Biotechnologies | Acides nucleiques se liant specifiquement au facteur vii/viia humain, et utilisations |
AU2011343813B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-05-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Eluate collection using conductivity gradient |
EP2687595B1 (de) | 2012-07-19 | 2018-05-30 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | Verfahren zur Reinigung eines transgenen Faktor VII |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5314604B2 (de) * | 1972-12-20 | 1978-05-18 | ||
JPS57206620A (en) * | 1981-06-12 | 1982-12-18 | Cutter Lab | Blood coagulation promoter and manufacture |
US4540473A (en) * | 1983-11-22 | 1985-09-10 | International Business Machines Corporation | Copper plating bath having increased plating rate, and method |
US4473553A (en) * | 1983-12-02 | 1984-09-25 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a lipoprotein-poor concentrate of coagulation factors VII and VIIa |
US4470969A (en) * | 1983-12-02 | 1984-09-11 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a concentrate of coagulation factors VII and VIIa |
FR2632524B1 (fr) * | 1988-06-09 | 1992-03-13 | Fondation Nale Transfusion San | Procede de preparation d'une fraction concentree en facteur viia et son application a titre de medicament |
-
1991
- 1991-12-16 FR FR9115601A patent/FR2684999A1/fr active Granted
-
1992
- 1992-12-01 DK DK92403234.5T patent/DK0547932T3/da active
- 1992-12-01 DE DE69213421T patent/DE69213421T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-12-01 AT AT92403234T patent/ATE142255T1/de active
- 1992-12-01 ES ES92403234T patent/ES2056782T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-12-01 EP EP92403234A patent/EP0547932B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-12-01 DE DE92403234T patent/DE547932T1/de active Pending
- 1992-12-10 US US07/988,776 patent/US5344918A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-12-16 JP JP4354440A patent/JP2533050B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-09-30 GR GR930300094T patent/GR930300094T1/el unknown
-
1996
- 1996-12-04 GR GR960403286T patent/GR3021875T3/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2684999B1 (de) | 1995-05-05 |
GR3021875T3 (en) | 1997-03-31 |
DE547932T1 (de) | 1994-02-03 |
JPH05345799A (ja) | 1993-12-27 |
DE69213421D1 (de) | 1996-10-10 |
ES2056782T3 (es) | 1997-02-16 |
EP0547932A1 (de) | 1993-06-23 |
JP2533050B2 (ja) | 1996-09-11 |
GR930300094T1 (en) | 1993-09-30 |
ATE142255T1 (de) | 1996-09-15 |
DK0547932T3 (da) | 1997-02-10 |
FR2684999A1 (fr) | 1993-06-18 |
US5344918A (en) | 1994-09-06 |
ES2056782T1 (es) | 1994-10-16 |
EP0547932B1 (de) | 1996-09-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69213421T2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines aktivierten Faktor VII-Konzentrates mit einer hohen Reinheit | |
DE3877529T2 (de) | Herstellung von hoch-gereingtem menschlichen Faktor IX sowie anderem Plasmaproteinkonzentrat und dessen therapeutische Verwendung. | |
EP0888386B1 (de) | STABILER FAKTOR VIII/vWF-KOMPLEX | |
DE69222716T2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines menschlichen Thrombin-Konzentrats für therapeutische Verwendung | |
DE2734821C3 (de) | Blutgerinnungsfördernde Präparation und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
AT407115B (de) | Verfahren zur herstellung eines konzentrates von standardisiertem, menschlichem von willebrand-faktor | |
DE19531637A1 (de) | Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörugnen, Verfahren zur Herstellung derselben und deren Verwendung | |
EP0971958B2 (de) | Verfahren zur reinigung von faktor viii/vwf-komplex mittels kationenaustauscherchromatographie | |
EP1005492B1 (de) | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie | |
EP0973544B1 (de) | Immuntolerante prothrombinkomplex-präparation | |
DE3043409C2 (de) | ||
DE68921371T2 (de) | Verfahren zur Herstellung einer an Faktor-VIIa angereicherten Fraktion und ihre Verwendung als Arzneimittel. | |
DE69829408T2 (de) | Herstellungsverfahren einer virusfreien faktor viii-lösung durch filtration | |
AT409334B (de) | Pharmazeutisches präparat enthaltend vitamin k-abhängige einzelfaktoren | |
DE69231401T2 (de) | Herstellung von faktor-ix | |
EP0669342B1 (de) | Verfahren zur Isolierung und Reinigung Vitamin K-abhängiger Proteine | |
DE3881895T2 (de) | Verfahren zur Reinigung von Vitamin-K-abhängigen Blutgerinnungsfaktoren. | |
DE69303941T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von hochreinem Fibrinogen | |
DE4142908C2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines virusinaktivierten Prothrombinkomplex-Konzentrats (PPSB) | |
EP0406216B1 (de) | Protein-S-hältige pharmazeutische Präparation | |
AT402263B (de) | Pharmazeutische präparation enthaltend eine thrombolytisch wirkende substanz | |
EP0910629B1 (de) | Verfahren zur Herstellung einer Antidotausgangssubstanz für natürliche und synthetische Thrombininhibitoren | |
DE19616540A1 (de) | Verwendung von von Willebrand-Faktor und pharmazeutische Zubereitung | |
DE19616540A9 (de) | Verwendung von von Willebrand-Faktor und pharmazeutische Zubereitung | |
EP0256522A2 (de) | Verfahren zur Herstellung einer prothrombin-armen Präparation Vitamin K-abhängiger Gerinnungsfaktoren, sowie ein danach erhältliches Mittel |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8328 | Change in the person/name/address of the agent |
Representative=s name: GROSSE, BOCKHORNI, SCHUMACHER, 81476 MUENCHEN |
|
8328 | Change in the person/name/address of the agent |
Representative=s name: BOCKHORNI & KOLLEGEN, 80687 MUENCHEN |