DE69026620T2

DE69026620T2 - Anti-tumor-zubereitung enthaltend interleukin-2 und histamin, analoge dazu oder h2-rezeptor-agonisten

Info

Publication number: DE69026620T2
Application number: DE69026620T
Authority: DE
Inventors: Jan Kristoffer S-412 74 Goeteborg Hellstrand; Svante S-431 38 Moelndal Hermodsson
Original assignee: Syntello Inc
Current assignee: Maxim Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1989-09-19
Filing date: 1990-09-19
Publication date: 1996-10-02
Anticipated expiration: 2010-09-20
Also published as: US5348739A; WO1991004037A1; JPH05504548A; NO921050D0; JP2845622B2; EP0493468A1; CA2066728A1; ATE136786T1; DE69026620D1; AU640954B2; KR920703078A; NO921050L; DK0493468T3; CA2066728C; EP0493468B1; ES2087163T3; KR100195392B1; AU6419190A

Description

Gebiet der Erfindung

Diese Erfindung bezieht sich auf das Gebiet der Tumortherapie, genauer auf eine pharmazeutische Zubereitung oder ein solches System zur Hemmung des Tumorwachstums und der Metastasen bösartiger Tumorzellen. Hinsichtlich der Abtötung von Tumorzellen durch Bestandteile des Immunsystems und der Verhinderung oder Hemmung von Metastasen von Tumorzellen werden unerwartet potenzierte Wirkungen beobachtet.

Ausgangssituation der Erfindung

Histamin hat sich als hemmend für eine Reihe von Immuneffektormechanismen in vitro erwiesen. Diese Eigenschaft von Histamin ist an H&sub2;-Rezeptoren gebunden. Diese Wirkung ist in der Literatur als direkt oder indirekt vermittelt beschrieben worden. Die direkte Wirkung wird über die CAMP-vermittelte Hemmung immunkompetenter Zellen erzielt. Die indirekte Wirkung wird über die Bildung histamininduzierter hemmender Proteine durch Suppressor-T-Zellen vermittelt (siehe Beer, D.J. et. al, Adv. Immunol. 35: 209, 1984).
Auch andere Studien gehen von dem Gedanken aus, daß Histamin ein Hemmsignal für Immuneffektorzellen liefern kann. Ein Beispiel ist der Test der potentiellen antineoplastischen Wirkung von Cimetidin und anderen H&sub2;-Rezeptor-Blockern, allein oder in Kombination mit anderen antineoplastischen Wirkstoffen. Die Ergebnisse der Tests zu den Wirkungen dieser Wirkstoffe auf die Tumorbildung, die man an Nagetieren und Menschen durchgeführt hat, sind jedoch widersprüchlich. Einerseits gibt es Berichte darüber, daß die Anwendung von H&sub2;-Blockern die Tumorentwicklung bei Nagetieren und Menschen hemmt (siehe z.B. Osband, M.E. et. al, Lancet 1 (8221): 636, 1981). Andererseits gibt es Studien, die berichten, daß dieselbe Behandlung das Tumorwachstum vorantreibt und Tumore sogar induziert (siehe z.B. Barna, B.P. et. al, Oncology 40: 43, 1983).
Es ist gezeigt worden, daß Histamin das Wachstum und Auftreten verschiedener Tumortypen eher hemmt als vorantreibt (siehe z.B. Burtin, C. et. al, Cancer Lett. 12: 195, 1981). Der Mechanismus der Antitumorwirkungen von Histamin ist nicht bekannt, sondern ist der H&sub1;-Rezeptor-Aktivitat zugeschrieben worden (siehe z.B. Lespinats, G. et. al, Br. J. Cancer 50: 545, 1984). Aber auch hier existieren widersprüchliche Daten. Es ist z.B. darüber berichtet worden, daß Histamin das Tumorwachstum bei Nagetieren beschleunigt (Nordlund, J.J. et. al, J. Invest. Dermatol. 81: 28, 1983).
Interleukin-2 (IL-2) ist ein Lymphokin, dem eine zentrale Rolle bei der Expansion von T-Zellen als Reaktion auf Antigen zugeschrieben wird (Smith, K.A., Science 240: 1169, 1988). Es sind Antitumorwirkungen von IL-2 bei Nagetieren nachgewiesen worden (siehe z.B. Lotze, M.T. et. al, "Interleukin 2", K.A. Smith, Academic Press Inc., San Diego, CA S. 237, 1988, Rosenberg, S., Ann. Surgery 208: 121, 1988). Es ist auch gezeigt worden, daß IL-2 eine partielle Regression bereits gebildeter Tumore bei Patienten mit unterschiedlichen Krebstypen induziert (Rosenberg, S.A., Ann. Surgery 208: 121, 1988). Die Antitumorwirkung von IL-2 wird potenziert, wenn die Verbindung zusammen mit autologen Lymphozyten verabreicht wird, die in vitro mit IL-2 kultiviert und dem Patienten anschließend reinfundiert werden (lymphokinaktivierte Killerzellen - LAK-Zellen) (Rosenberg, S.A., Ann. Surgery 208: 121, 1988). Diese Wirkung wird sowohl bei Nagetieren als auch bei Menschen beobachtet. Bei Antikrebsversuchen am Menschen wird IL-2 den menschlichen Krebspatienten gewöhnlicherweise in sehr hohen Dosierungen verabreicht. Dabei wird von ernsten Nebenwirkungen berichtet, einschließlich renaler Störungen, Anämie, reduzierter Thrombozytenzahlen und Auswirkungen auf das Herz-Atmungs-System. Bei einigen dieser Versuche wurde der H&sub2;-Rezeptor-Antagonist Ranitidin benutzt, um IL-2-induzierte Dyspepsie und Nausea zu verhindern (Rosenberg, oben).
Es wird davon ausgegangen, daß Natural-Killer-Zellen (NK-Zellen) eine wichtige Rolle für die Abwehrkräfte eines Wirts gegen entstehende Neoplasmen und auch gegen Metastasen spielen (Hanna, N., Sur. Synt. Pathol. Res. 2: 68, 1983; Hanna, N., Biochem. Biophys. Acta 780: 213, 1985). Es ist bekannt, daß die Aktivierung von NK- Zellen wiederum die Abwehrkräfte eines Wirts gegen Tumorzellen verstärkt (siehe z.B. Lotze, M.T. et. al, oben).
Im folgenden werden einzelne zum Zeitpunkt dieser Erfindung bekannte in vitro-Wirkungen von Histamin und IL-2 auf die Regulierung menschlicher NK-Zellen beschrieben.
(1) Histamin erhöht die Zytotoxizität menschlicher NK-Zellen (NKCC) über H&sub2;-Rezeptoren.
Es ist gezeigt worden, daß Histamin bei Konzentrationen von 10&supmin;&sup4; bis 10&supmin;&sup6; M die NKCC menschlicher einkerniger Zellen (MNC) gegenüber leukämischen K562-Zellen stark erhöht. Die Wirkung wird festgestellt, wenn die benutzten Effektorzellen nichtfraktionierte MNCs oder Zellen sind, die durch Percoll-Gradientenzentrifugation mit großen körnigen Lymphozyten (LGL) angereichert sind. Die NK- erhöhende Reaktion auf Histamin wird auch durch den H&sub2;-Rezeptor- Agonisten Dimaprit mit ähnlicher Potenz und Wirksamkeit nachgeahmt. Zwei strukturelle Analogstoffe zu Dimaprit, Nordimaprit und N-Methyl-Dimaprit, die beide keine Aktivitäten bei H&sub2;-Rezeptoren zeigen, haben sich unter denselben Testbedingungen als unwirksam erwiesen. Die NK-erhöhenden Wirkungen von Histamin und Dimaprit waren durch die H&sub2;-Rezeptor-Antagonisten Ranitidin und Cimetidin vollständig zu antagonisieren. Es wurde gezeigt, daß die NK-erhöhende Wirkung von Histamin die Anwesenheit von Monozyten erfordert. In Abwesenheit von Monozyten war Histamin wirkungslos oder hemmte die NKCC bei den erwähnten Histaminkonzentrationen schwach (Hellstrand, K. et. al, J. Immunol. 137: 656, 1986).
(2) Histamin hemmt die Aktivität von NK-Zellen über T-Zellen.
Im Gegensatz zur oben erwähnten Aktivierung von NK-Zellen, die durch Histamin in Anwesenheit von Monozyten induziert wird, ist berichtet worden, daß Histamin die NKCC gegenüber K562-Zellen in Anwesenheit von T-Lymphozyten hemmt. Somit induziert die in vitro- Behandlung menschlicher T-Zellen mit Histamin (10&supmin;³ bis 10&supmin;&sup8; M) die Produktion eines löslichen Faktors, des histamininduzierten löslichen Suppressorfaktors (HISSF), der die Zytotoxizität von NK-Zellen hemmt. NK-Zellen allein produzieren HISSF nicht. Die histamininduzierte HISSF-Produktion wird durch Cimetidin blockiert, nicht aber durch einen H&sub1;-Rezeptor-Antagonisten. Die Hemmung der Zytotoxizität von NK-Zellen durch HISSF wird durch die Zugabe von IL-2 (6,4-64 Einh./ml) oder Interferon-α (500 Einh./ml) reduziert (Nair, M.P.N. et. al, J. Immunol. 136: 2456, 1986). Weiterhin ist gezeigt worden, daß die durch T-Zellen vermittelte hemmende Wirkung von Histamin auf die Zytotoxizität von NK-Zellen in Anwesenheit von IL-2 ausgeprägter ist (Welt, S. et. al, Proc. Annu. Meet. Am. Soc. Clin. Oncol. 7: A632, 1988).
(3) Erhöhung der Zytotoxizität von NK-Zellen durch IL-2.
IL-2 erhöht schnell und wirksam die Zytotoxizität von isolierten menschlichen NK-Zellen in vitro in einem weiten Konzentrationsbereich. Die Wirkung ist bei natürlichen und rekombinierten Formen von IL-2 beschrieben worden (Dempsey, R.A. et. al, J. Immunol. 129: 2504, 1982; Phillips, J.H. et. al, J. Exp. Med. 170: 291, 1989). Die NK-erhöhende Wirkung von IL-2 steht im Zusammenhang mit einem zellulären IL-2-Rezeptor (IL-2R), p 75 (IL-2Rα), der auf menschlichen NK-Zellen exprimiert wird (Siegel, J.P., Science 238: 75, 1987; Phillips, J.H. et. al, oben). Die Wirkung von IL-2 auf NK-Zellen ist für die durch diese Verbindung induzierte Antitumorwirkung relevant, da berichtet worden ist, daß die Depletion von NK-Zellen aus Mäusen die durch die Il-2-Behandlung induzierten Antitumorwirkungen eliminiert (Lotze, M.T. et. al, oben). Das Dokument Chem. Abstr., Band 104, Nr. 17, 1986 offenbart, daß die Aktivierung zytotoxischer T-Lymphozyten durch eine Histamininjektion erhöht wird. Diese Wirkung wird durch einen Anstieg der endogenen IL-2-Produktion erklärt.
In Anbetracht der hohen Krebsinzidenz in der menschlichen Bevölkerung und der gegenwärtig erzielten bestmöglichen Teilerfolge mit den existierenden unterschiedlichen Therapien besteht nach wie vor das Bedürfnis nach weiter verbesserten Verfahren zur Behandlung menschlicher Tumorpatienten.

Offenbarung der Erfindung

Diese Erfindung bezieht sich auf eine Zubereitung oder ein System zur Hemmung des Tumorwachstums und der Metastasenbildung bösartiger Tumorzellen, aufweisend eine erste Zusammensetzung, die IL-2 aufweist, und eine zweite Zusammensetzung, die einen Wirkstoff aufweist, der aus der Gruppe, die aus Histamin, dessen Analogstoffen mit H&sub2;-Rezeptor-Aktivitäten, endogenes Histamin freisetzenden Zubereitungen und H&sub2;-Rezeptor-Agonisten besteht, ausgewählt wird, wobei die erste und die zweite Zusammensetzung entweder in einer Zubereitung gemischt oder in separaten Dosierungen in einer Menge bereitgestellt werden, die für die Behandlung von Tumoren und Metastasen bösartiger Tumore ausreicht.
Ein umfassenderes Verständnis der Erfindung und vieler mit ihr im Zusammenhang stehender Vorteile wird unter Bezugnahme auf die folgende detaillierte Beschreibung in Verbindung mit der beigefügten Figur leicht erreicht werden.

Kurze Beschreibung der Zeichnung

Die einzige Figur ist ein Histogramm, das die Anzahl der Lungenmetastasenherde von B16-Melanomzellen zeigt, die durch verschiedene Behandlungen männlicher Mäuse produziert wurden. Die Behandlungen wurden durchgeführt mit einem Arzneistoffträger (c, Kontrolle), 25 mg/kg Histamin (h), 6 x 10³ Einh./kg menschlichen rekombinierten IL-2 (IL), 25 mg/kg Histamin + 6 x 10³ Einh./kg menschlichen rekombinierten IL-2 (h+IL), 25 mg/kg Ranitidin (r), 6 x 10³ Einh./kg menschlichen rekombinierten IL-2 + 25 mg/kg Ranitidin (r+IL). Die Zusammensetzungen wurden 4 bis 6 Wochen alten männlichen Schweizer Albinomäusen injiziert, und 1,5 x 10&sup5; B16-Melanomzellen wurden den Mäusen 24 Stunden später i.v. injiziert. Die Behandlung mit Arzneistoffträger, Histamin, IL-2, Ranitidin, Histamin + IL-2 und Ranitidin + IL-2 wurde eine Woche nach der Tumorimpfung wiederholt. Die Lungenmetastasenherde (LMF) wurden nach dem Tod der Tiere 21 Tage später beobachtet. Die nichtausgefüllten Balken stellen den LMF-Mittelwert auf der Lungenoberfläche dar, berechnet von 10 Tieren pro Behandlung. Ähnliche Ergebnisse wurden bei zwei separaten Experimenten erzielt. Die ausgefüllten Balken zeigen die Lungengewichte der entsprechenden Behandlungsgruppen. Die Lungengewichte wurden mit der LMF-Anzahl in Wechselbeziehung gebracht. Wie aus der Figur ersichtlich wird, entsprach das Lungengewicht von Tieren, die mit Histamin + IL-2 behandelt wurden, dem normaler, tumorfreier Lungen.
Andere Aufgaben, Vorteile und Merkmale der vorliegenden Erfindung werden dem Fachmann aus der folgenden Diskussion deutlich werden.

Beste Ausführungsform der Erfindung

Diese Erfindung ergab sich aus den unerwarteten in vitro-Erkenntnissen, daß
(i) IL-2 die NKCC in Anwesenheit von Monozyten hemmen kann und (ii) Histamin und IL-2 hinsichtlich der Erhöhung der NKCC synergistisch wirken.
Diese Erkenntnisse veranlaßten den Erfinder, die in vivo-Wirkungen einer kombinierten Histamin/IL-2-Behandlung auf die Bildung von Lungenmetastasen in einem Mäusetiermodell zu analysieren.
Eine kombinierte Histamin/IL-2-Behandlung verhinderte unerwartet Metastasen bösartiger Tumorzellen vollständig, wenn die Verbindungen als Einzeldosis 24 Stunden vor und eine Woche nach der Tumorzellenimpfung verabreicht wurden. Das sind unerwartet hervorragende Ergebnisse, da unter ähnlichen Umständen weder IL-2 allein noch Histamin allein eine solch günstige Wirkung hatten. Die Dosierungen von IL-2 bei den Tierexperimenten waren wesentlich niedriger als die Mengen, die allgemein bei der Krebsbehandlung eingesetzt werden. Das ist von besonderer Bedeutung, da die Potenzierung der Antitumorwirkung von IL-2, die durch die begleitende Behandlung mit Histamin induziert wird, ein Reduzierung der hohen Dosierungen von IL-2 in der Krebstherapie erlaubt. Eine Behandlung mit solch hohen IL-2-Dosierungen führt zu ernsten Nebenwirkungen (Rosenberg, S.A., oben).
Diese Erfindung schafft eine Zubereitung oder ein System zur Hemmung des Tumorwachstums und der Metastasen bösartiger Tumorzellen in einem zelltragenden Patienten, aufweisend eine erste Zusammensetzung, die einen Wirkstoff aufweist, der aus der Gruppe, die aus Histamin, dessen Analogstoffen mit H&sub2;-Rezeptor-Aktivitäten, endogenes Histamin freisetzenden Zubereitungen und H&sub2;-Rezeptor-Agonisten besteht, ausgewählt wird, und eine zweite Zusammensetzung, die IL- 2 aufweist, wobei der Wirkstoff und IL-2 entweder in einer Zubereitung gemischt oder in separaten Dosierungen in einer Menge bereitgestellt werden, die für die Behandlung von Tumoren und Metastasen bösartiger Tumorzellen ausreicht.
Analogstoffe von Histamin mit H&sub2;-Rezeptor-Aktivitäten, die für die Benutzung in dieser Erfindung geeignet sind, sind dem Fachmann bekannt und müssen hier nicht beschrieben werden. Die Analogstoffe können z.B. eine histaminähnliche chemische Struktur haben, aber durch Beigabe von Anteilen modifiziert werden, die sich nicht negativ auf ihre histaminartigen, insbesondere ihre H&sub2;-Rezeptor- Aktivitäten auswirken. Beispiele für H&sub2;-Rezeptor-Agonisten, die für die Benutzung in dieser Erfindung geeignet sind, sind solche wie Dimaprit, aber nicht N-Methyl-Dimaprit oder Nordimaprit. Endogenes Histamin freisetzende Zubereitungen, die für die Benutzung in dieser Erfindung geeignet sind, sind dem Fachmann bekannt. Beispiele für Zubereitungen, die endogenes Histamin freisetzen können, sind solche, die andere Lymphokine wie IL-3 oder Allergene aufweisen. Es sind jedoch auch andere bekannte Zubereitungen geeignet.
IL-2 und Verbindungen wie Histamin, dessen Analogstoffe, endogenes Histamin freisetzende Zubereitungen und H&sub2;-Rezeptor-Agonisten können separat oder in derselben Zusammensetzung verabreicht werden. Die Verabreichung kann über dem Fachmann für diese Verbindungen und Zubereitungen bekannte Wege erfolgen. Sie können z.B., wie es dem Fachmann bekannt ist, durch lokale oder systemische Injektion oder durch Infusion verabreicht werden. Es sind jedoch auch andere Mittel der Verabreichung geeignet.
Die vorliegenden Verbindungen können ebenfalls auf intraperitonealen oder anderen parenteralen Wegen verabreicht werden. Lösungen der aktiven Verbindung als freie Säure oder pharmazeutisch akzeptables Salz können in Wasser mit oder ohne einem grenzflächenaktiven Stoff wie z.B. Hydroxypropylzellulose verabreicht werden. Dispersionen wie diejenigen unter Benutzung von Glyzerol, flüssigen Polyethylenglykolen und Mischungen daraus und Ölen werden auch in Betracht gezogen. Antimikrobielle Verbindungen können den Zubereitungen ebenfalls beigegeben werden. Injizierbare Zubereitungen können sterile wäßrige Lösungen oder Dispersionen und Pulver einschließen, die vor der Benutzung in einer sterilen Umgebung verdünnt oder suspendiert werden können. Träger wie z.B. Lösungsoder Dispersionsmittel, die z.B. Wasser, Ethanolpolyole, pflanzliche Öle u.a. enthalten, können auch beigegeben werden. Überzüge wie z.B. Lezithin und grenzflächenaktive Stoffe können benutzt werden, um eine angemessene Fließfähigkeit der Zusammensetzung aufrechtzuerhalten. Isotone Wirkstoffe wie z.B. Zucker oder Kochsalz können ebenso wie Produkte beigegeben werden, die der Verzögerung der Absorbierung der aktiven Verbindungen dienen, wie z.B. Aluminiummonostearat und Gelatine. Sterile injizierbare Lösungen werden, wie es dem Fachmann bekannt ist, hergestellt und vor der Lagerung und/oder Verabreichung gefiltert. Sterile Pulver können aus einer sie enthaltenden Lösung oder Suspension vakuum- oder gefriergetrocknet werden.
Jedes der pharmazeutischen Zusammensetzung beigegebene Material muß in den benutzten Mengen pharmazeutisch akzeptabel und substanzieh ungiftig sein. Zubereitungen und Zubereitungsformen mit protrahierter Freigabe liegen ebenfalls im Bereich dieser Erfindung.
Pharmazeutisch akzeptable Träger, die im Zusammenhang mit diesem Patent benutzt werden, schließen alle Lösungs- und Dispersionsmittel, Überzüge, antimikrobiellen Wirkstoffe, isotonen und absorbierungsverzögernden Wirkstoffe u.ä. ein, die dem Fachmann bekannt sind. Alle Zubereitungen werden in Dosierungseinheiten zur einheitlichen Dosierung und bequemen Verabreichung hergestellt. Jede Dosierungseinheit enthält eine festgelegte Menge der aktiven Ingredienz, die so berechnet ist, daß sie eine gewünschte therapeutische Wirkung erzielt, zusammen mit einer erforderlichen Menge des pharmazeutischen Trägers.
Typischerweise kann der Wirkstoff, der Histamin, dessen Analogstoffe, endogenes Histamin freisetzende Zubereitungen und H&sub2;-Rezeptor-Agonisten einschließt, in einer Menge von ca. 0,1 bis 10 mg/- Tag, bevorzugterweise ca. 0,5 bis 8 mg/Tag, noch besser ca. 1 bis 5 mg/Tag verabreicht werden. Jedoch können je nach Berechnung des praktischen Arztes auch andere Mengen mit IL-2 verabreicht werden.
Obwohl in den Beispielen die Verbindungen als Einzeldosis verabreicht werden, können die Verbindungen im Rahmen der Tumortherapie über einen längeren Zeitraum verabreicht werden. Typischerweise können die Verbindungen über Zeiträume von bis zu ca. einer Woche, sogar von mehr als einem Monat verabreicht werden. In einigen Fällen kann die Behandlung des Tumors nach einiger Zeit unterbrochen und später wieder aufgenommen werden.
IL-2 kann in einer Menge von ca. 1.000 bis 300.000 Einh./kg/Tag, besser ca. 3.000 bis 100.000 Einh./kg/Tag, noch besser ca. 5.000 bis 20.000 Einh./kg/Tag oder in einer anderen dem Fachmann bekannten Menge verabreicht werden.
Eine Tagesdosis kann als Einzeldosis verabreicht oder bei negativen Wirkungen in mehrere Einheiten aufgeteilt werden.
In einer bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens werden Histamin, dessen Analogstoffe mit H&sub2;-Rezeptor-Aktivitäten, endogenes Histamin freisetzende Zubereitungen oder H&sub2;-Rezeptor-Agonisten und IL-2 an denselben Tagen verabreicht. In einer noch bevorzugteren Ausführungsform ist der Wirkstoff Histamin und wird in derselben Zusammensetzung mit IL-2 verabreicht.
Nach dieser allgemeinen Beschreibung der Erfindung wird letztere durch Bezugnahme auf einige spezifische Beispiele verständlicher werden. Die Beispiele sind hier nur zum Zweck der Veranschaulichung eingeschlossen und sollen die Erfindung oder deren Ausführungsformen nicht einschränken, solange dazu kein spezifischer Hinweis gegeben wird.

Beispiele

Beispiel 1: In vitro-Studien mit IL-2 und Histamin.
Dieses Beispiel ist eine Studie zu den Wirkungen von Histamin, Ranitidin und rekombiniertem IL-2 (25 Einh./ml), allein oder in Kombination, auf die NKCC menschlicher einkerniger Zellen (MNC).
Die MNCs wurden aus peripherem venösen Blut gesunder Blutspender gewonnen und durch Ficoll-Hypaque-Zentrifugation und anschließende Percoll-Gradientenzentrifugation, wie oben beschrieben, rückgewonnen (Hellstrand, K. et. al, J. Immunol. 137: 656, 1986). Eine in den Experimenten benutzte Percoll-Fraktion 8 mit geringer Dichte enthielt ca. 30% Monozyten und wurde mit großen körnigen Lymphozyten (LGL) angereichert.
Die NKCC wurde in einem &sup5;¹Cr-Freigabe-Mikrozytotoxizitätsassay unter Benutzung von erythroleukämischen K562-, B-lymphoblastoiden Daudi-, Molt-4-T-Zellen und Chang-Leberzellen als Zielzellen (alle Zellen bösartig) gemessen.
Die NKCC wurde sechsfach als spezifische &sup5;¹-Cr-Freigabe bei einem MNC-Zielzellen-Verhältnis von 15:1 oder 30:1 bestimmt. Die Assays wurden im Iscove'schen Medium (Antibiotika und 10% menschliches Serum AB+) durchgeführt. Histamin, IL-2 und Ranitidin oder verschiedene Kombinationen davon (siehe Tabelle unten) wurden zu Beginn eines vierstündigen &sup5;¹-Cr-Freigabeassays beigegeben. Kontrollzellen wurde nur ein Arzneistoffträger gegeben.
Es wurden die folgenden Ergebnisse erzielt: Histamin (10&supmin;&sup4; - 10&supmin;&sup7; M) erhöhte die NKCC gegenüber allen Tumorzellentypen in Anwesenheit von Monozyten. Die Wirkung wurde durch äquimolare Konzentrationen von Ranitidin völlig blockiert. Ranitidin allein beeinflußte die NKCC nicht. In Abwesenheit von Monozyten, d.h. nach Entfernen der Monozyten durch eine einstündige MNC-Inkubation auf einer Petri-Kulturschale oder durch Carbonyleisenbehandlung, waren Histamin, Ranitidin oder Histamin plus Ranitidin bei jeder getesteten Konzentration wirkungslos.
IL-2 (5-50 Einh./ml) allein war unerwartet wirkungslos oder hemmte die NKCC in Anwesenheit von Monozyten sogar. Nach Entfernen der Monozyten erhöhte IL-2 abhängig von der Dosierung die NKCC stark im selben Konzentrationsbereich. Histamin, Ranitidin oder Histamin plus Ranitidin beeinflußten die IL-2-induzierte Erhöhung der NKCC in monozytabgereicherten MNCs nicht. Jedoch hatten Histamin plus IL-2 eine starke synergistische erhöhende Wirkung auf die NKCC in Anwesenheit von Monozyten gegenüber allen getesteten Tumorzellenzielen. Diese synergistische Wirkung wurde durch die Anwesenheit von Ranitidin völlig blockiert. Ergebnisse eines repräsentativen Experiments sind aus der untenstehenden Tabelle zu entnehmen. Tabelle: Demonstration der synergistischen Aktivierung menschlicher NKCC durch kombinierte Behandlung mit Histamin und IL-2 NKCC (Zellzerfall %) ± Standardfehler des Mittelwertes gegenüber entsprechenden Tumorzielzellen Behandlung Daudi Chang Molt Medium Hist Ran 1 Effektor-MNCs wurden aus peripherem Blut durch Ficoll-Hypaque- und Percoll-Gradientenzentrifugation rückgewonnen. Eine Percoll-Fraktion mit geringer Dichte mit 27% Monozyten wurde bei einem Effektor-Zielzellen-Verhältnis von zuletzt 15:1 (K562 Chang und Molt-4) oder 30:1 (Daudi) benutzt. 2 Hist = Histamin, IL-2 = Interleukin-2, Ran = Ranitidin
Beispiel 2: In vivo-Studienmodell zu Antitumorwirkungen von Histamin, IL-2, Ranitidin und Kombinationen dieser Verbindungen in einem Mäusetumortiermodell.
In vivo-Experimente wurden mit Histamin oder IL-2 allein und Kombinationen dieser Verbindungen in einem Mäusetumortiermodell durchgeführt.
Histamin (25 mg/kg), Ranitidin (25 mg/kg) und menschliches rekombiniertes IL-2 (6.000 Einh./kg) wurden allein oder in Kombination als Einzeldosis 4 bis 6 Wochen alten männlichen Schweizer Albinomäusen (20 g) 24 Stunden vor und eine Woche nach der intravenösen Impfung von B16-Mäusemelanomzellen (150.000 Zellen/Maus) verabreicht. Jede Behandlungsgruppe wies 10 Tiere auf. NK-Zellensensitive B16-Mäusemelanomzellen (150.000 Zellen/Maus) wurden 24 Stunden nach der Behandlung intravenös geimpft. Kontrollen wurden mit Tieren, die mit den entsprechenden Arzneistoffträgern behandelt wurden, vorgenommen.
Die Lungenmetastasenherde (LMF) auf den Lungenoberflächen wurden 21 Tage später makroskopisch beobachtet. Die LMFs wurden von einem unbeeinflußten Beobachter unter Benutzung eines Mikroskops mit zehnfacher Vergrößerung gezählt. Alle auf den Lungenoberflächen sichtbaren LMFs wurden gezählt.
Die Lungengewichte wurden unmittelbar nach dem Tod der Mäuse gemessen und auf virtuell lineare Art und Weise mit der LMF-Anzahl in Wechselbeziehung gebracht.
Beispiel 3: Ergebnisse der in Beispiel 2 durchgeführten Tests.
Im Rahmen des in Beispiel 2 beschriebenen Therapieplans wurde herausgefunden, daß Histamin allein die LMF-Anzahl relativ wirksam reduziert (25 mg/kg ca. 50% Reduzierung, 250 mg/kg ca. 80-90% Reduzierung).
Diese Wirkung wurde durch Dimaprit mit ähnlicher Potenz nachgeahmt. Ranitidin erhöhte die LMFs um ca. 100%. IL-2 allein reduzierte die LMFs um ca. 40-70%. Die kombinierte Behandlung mit Histamin (25 mg/kg) und IL-2 verhinderte LMFs völlig (siehe Figur). Keines der mit Histamin (25 mg/kg) + IL-2 (6 x 10³ Einh./kg) behandelten Tiere (n = 10) zeigte sichtbare Tumore. Keines der mit Histamin (25 mg/kg) oder IL-2 (6 x 10³ Einh./kg) allein behandelten Tiere (n = 10) war völlig frei von sichtbaren Tumoren. IL-2 war in Anwesenheit von Ranitidin praktisch wirkungslos. Die Lungengewichte der Tiere, die Histamin plus IL-2 erhielten, entsprach den Lungengewichten der Mäuse, denen keine Tumorzellen geimpft wurden.
Es wurde herausgefunden, daß Histamin, IL-2 oder Histamin plus IL- 2 die Lungengewichte der Tiere, die keine Tumorzellen erhielten, nicht beeinflußten.

Claims

1. Pharmazeutische Zubereitung oder pharmazeutisches System zur Hemmung des Tumorwachstums und der Metastasen bösartiger Tumorzellen, gekennzeichnet durch eine erste Zusammensetzung, die einen Wirkstoff aufweist, der aus der Gruppe, die aus Histamin, dessen Analogstoffen mit H&sub2;-Rezeptor-Aktivitäten, endogenes Histamin freisetzenden Zubereitungen und H&sub2;-Rezeptor-Agonisten besteht, ausgewählt wird, und eine zweite Zusammensetzung, die IL-2 aufweist, wobei die erste und die zweite Zusammensetzung entweder in einer Zubereitung gemischt oder in separaten Dosierungen in einer Menge bereitgestellt werden, die für die Behandlung von Tumoren und Metastasen bösartiger Tumorzellen ausreicht.

2. Pharmazeutische Zubereitung oder pharmazeutisches System nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Wirkstoff Histamin ist.

3. Pharmazeutische Zubereitung oder pharmazeutisches System nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie bzw. es einen oder mehrere pharmazeutisch akzeptable Träger, z.B. Lösungs- und Dispersionsmittel, Überzüge, antimikrobielle Wirkstoffe, isotone und absorbierungsverzögernde Wirkstoffe, enthält.

4. Verwendung einer ersten Zusammensetzung, die einen Wirkstoff aufweist, der aus der Gruppe, die aus Histamin, dessen Analogstoffen mit H&sub2;-Rezeptor-Aktivitäten, endogenes Histamin freisetzenden Zubereitungen und H&sub2;-Rezeptor-Agonisten besteht, ausgewählt wird, und einer zweiten Zusammensetzung, die IL-2 aufweist, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung oder eines pharmazeutischen Systems zur Hemmung des Tumorwachstums und der Metastasen bösartiger Tumorzellen, wobei die erste und die zweite Zusammensetzung entweder in einer Zubereitung gemischt oder in separaten Dosierungen in einer Menge bereitgestellt werden, die für die Behandlung von Tumoren und Metastasen bösartiger Tumorzellen ausreicht.

5. Verwendung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß der Wirkstoff Histamin ist.

6. Verwendung nach Anspruch 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, daß die pharmazeutische Zubereitung oder das pharmazeutische System oder die separaten Dosierungen einen oder mehrere pharmazeutisch akzeptable Träger, z.B. Lösungs- und Dispersionsmittel, Überzüge, antimikrobielle Wirkstoffe, isotone und absorbierungsverzögernde Wirkstoffe, enthalten.