DE68928932T2 - Racemisierungsfreies Verfahren zum Aufhängen von Aminosäuren auf einer Festphase - Google Patents
Racemisierungsfreies Verfahren zum Aufhängen von Aminosäuren auf einer FestphaseInfo
- Publication number
- DE68928932T2 DE68928932T2 DE68928932T DE68928932T DE68928932T2 DE 68928932 T2 DE68928932 T2 DE 68928932T2 DE 68928932 T DE68928932 T DE 68928932T DE 68928932 T DE68928932 T DE 68928932T DE 68928932 T2 DE68928932 T2 DE 68928932T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- group
- amino acid
- aryl
- compound
- saturated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 title claims description 83
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 57
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 title description 11
- -1 pentachlorophenyl Chemical group 0.000 claims description 129
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 74
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 61
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 49
- RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N thiophenol Chemical group SC1=CC=CC=C1 RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 35
- 125000004417 unsaturated alkyl group Chemical group 0.000 claims description 33
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 30
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 29
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 24
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 claims description 22
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 21
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 21
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 20
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 20
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 20
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical group OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 17
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 17
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 claims description 17
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 16
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 claims description 15
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 15
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical group CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 13
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 13
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 12
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 11
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 11
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 11
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 11
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 11
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims description 10
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 10
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims description 10
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 claims description 10
- COFFWUSSQYARLB-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(bromomethyl)phenoxy]acetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(CBr)C=C1 COFFWUSSQYARLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 9
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 claims description 9
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 7
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 2,4-dichlorophenol Chemical class OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004215 Carbon black (E152) Chemical group 0.000 claims description 6
- XAKBSHICSHRJCL-UHFFFAOYSA-N [CH2]C(=O)C1=CC=CC=C1 Chemical group [CH2]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAKBSHICSHRJCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229930195733 hydrocarbon Chemical group 0.000 claims description 6
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 claims description 5
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 5
- 125000006000 trichloroethyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 claims description 4
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- NYSXWUPVOCFRSE-UHFFFAOYSA-N 1-phenyl-ethene-1,2-diol Chemical class OC=C(O)C1=CC=CC=C1 NYSXWUPVOCFRSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KPWDGTGXUYRARH-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trichloroethanol Chemical class OCC(Cl)(Cl)Cl KPWDGTGXUYRARH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZWVHTXAYIKBMEE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyacetophenone Chemical class OCC(=O)C1=CC=CC=C1 ZWVHTXAYIKBMEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 claims description 3
- 125000006502 nitrobenzyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- YOAYVPRTQRVIGI-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(iodomethyl)phenoxy]acetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(CI)C=C1 YOAYVPRTQRVIGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001743 benzylic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 14
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims 11
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims 4
- 125000001917 2,4-dinitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1*)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O 0.000 claims 2
- 125000006276 2-bromophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Br)=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims 2
- 125000004800 4-bromophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Br 0.000 claims 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 2
- 125000004188 dichlorophenyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 claims 2
- 125000004182 2-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Cl)=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N Alumina Chemical class [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical class O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 claims 1
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 claims 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 75
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 47
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 47
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 24
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 19
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical class CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 11
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 11
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 11
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 9
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RGHHSNMVTDWUBI-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzaldehyde Chemical compound OC1=CC=C(C=O)C=C1 RGHHSNMVTDWUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N divinylbenzene Substances C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M potassium hydroxide Inorganic materials [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- SFTDDFBJWUWKMN-UHFFFAOYSA-N 2-(4-methylphenoxy)acetic acid Chemical compound CC1=CC=C(OCC(O)=O)C=C1 SFTDDFBJWUWKMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 5
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VUCNQOPCYRJCGQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(hydroxymethyl)phenoxy]acetic acid Chemical compound OCC1=CC=C(OCC(O)=O)C=C1 VUCNQOPCYRJCGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 4
- HBGGXOJOCNVPFY-UHFFFAOYSA-N diisononyl phthalate Chemical class CC(C)CCCCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCCCCC(C)C HBGGXOJOCNVPFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N phosphoryl trichloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)=O XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N tetrabromomethane Chemical compound BrC(Br)(Br)Br HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 4
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 3
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N (3-nitropyridin-2-yl) thiohypochlorite Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CN=C1SCl WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- LJCZNYWLQZZIOS-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trichlorethoxycarbonyl chloride Chemical compound ClC(=O)OCC(Cl)(Cl)Cl LJCZNYWLQZZIOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASHGTJPOSUFTGB-UHFFFAOYSA-N 3-methoxyphenol Chemical compound COC1=CC=CC(O)=C1 ASHGTJPOSUFTGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004342 Benzoyl peroxide Substances 0.000 description 2
- OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N Benzoylperoxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OOC(=O)C1=CC=CC=C1 OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019213 POCl3 Inorganic materials 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCHBZNDCJNAEIK-UHFFFAOYSA-N [4-(bromomethyl)-2-(2,4-dichlorophenyl)phenyl] ethaneperoxoate Chemical compound CC(=O)OOC1=CC=C(CBr)C=C1C1=CC=C(Cl)C=C1Cl DCHBZNDCJNAEIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019400 benzoyl peroxide Nutrition 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- SXDBWCPKPHAZSM-UHFFFAOYSA-N bromic acid Chemical compound OBr(=O)=O SXDBWCPKPHAZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIKBFYAXUHHXCS-UHFFFAOYSA-N bromoform Chemical compound BrC(Br)Br DIKBFYAXUHHXCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 159000000006 cesium salts Chemical class 0.000 description 2
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 2
- 150000001261 hydroxy acids Chemical class 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- VXGABWCSZZWXPC-UHFFFAOYSA-N methyl 2-(methylamino)acetate Chemical compound CNCC(=O)OC VXGABWCSZZWXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002993 phenylalanine derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 description 2
- NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M potassium fluoride Chemical compound [F-].[K+] NROKBHXJSPEDAR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000011698 potassium fluoride Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 2
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N (2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-1-[(2R)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-N-[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]pentanediamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N 0.000 description 1
- KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical class C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)SC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 1
- WOWNQYXIQWQJRJ-UHFFFAOYSA-N (3,4,5-triacetyloxy-6-isothiocyanatooxan-2-yl)methyl acetate Chemical compound CC(=O)OCC1OC(N=C=S)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O WOWNQYXIQWQJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XEZNGIUYQVAUSS-UHFFFAOYSA-N 18-crown-6 Chemical compound C1COCCOCCOCCOCCOCCO1 XEZNGIUYQVAUSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanoyl chloride Chemical compound CC(C)(C)C(Cl)=O JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YTEUDCIEJDRJTM-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)benzoic acid Chemical class OC(=O)C1=CC=CC=C1CCl YTEUDCIEJDRJTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHSXOMJIAXJKKH-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(bromomethyl)phenoxy]-2-(2,4-dichlorophenyl)acetic acid Chemical class C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1C(C(=O)O)OC1=CC=C(CBr)C=C1 CHSXOMJIAXJKKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHNPOQXWAMXPTA-UHFFFAOYSA-N 3-methylbut-2-enamide Chemical compound CC(C)=CC(N)=O WHNPOQXWAMXPTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZFGOTFRPZRKDS-UHFFFAOYSA-N 4-bromophenol Chemical compound OC1=CC=C(Br)C=C1 GZFGOTFRPZRKDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical class OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800001415 Bri23 peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000107 C-terminal peptide Human genes 0.000 description 1
- 101800000655 C-terminal peptide Proteins 0.000 description 1
- DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 Chemical compound COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101500024092 Homo sapiens Beta-endorphin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 229910020667 PBr3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102400000096 Substance P Human genes 0.000 description 1
- 101800003906 Substance P Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical group 0.000 description 1
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N benzylamine Chemical class NCC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 150000001649 bromium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229950005228 bromoform Drugs 0.000 description 1
- 125000005997 bromomethyl group Chemical group 0.000 description 1
- FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L caesium carbonate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]C([O-])=O FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- HUCVOHYBFXVBRW-UHFFFAOYSA-M caesium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Cs+] HUCVOHYBFXVBRW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N ethyl formate Chemical compound CCOC=O WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 150000004694 iodide salts Chemical class 0.000 description 1
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910001862 magnesium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- VBTQNRFWXBXZQR-UHFFFAOYSA-N n-bromoacetamide Chemical compound CC(=O)NBr VBTQNRFWXBXZQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940045681 other alkylating agent in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N phenoxyacetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CC=CC=C1 LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHZYTMXLRWXGPK-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentachloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)(Cl)Cl UHZYTMXLRWXGPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPNPIHIZVLFAFP-UHFFFAOYSA-N phosphorus tribromide Chemical compound BrP(Br)Br IPNPIHIZVLFAFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N phosphorus trichloride Chemical compound ClP(Cl)Cl FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006303 photolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015843 photosynthesis, light reaction Effects 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 1
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000003270 potassium fluoride Nutrition 0.000 description 1
- NTTOTNSKUYCDAV-UHFFFAOYSA-N potassium hydride Chemical compound [KH] NTTOTNSKUYCDAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000105 potassium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 108700027361 sarcosine methyl ester Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical compound CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001889 triflyl group Chemical group FC(F)(F)S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N urethane group Chemical group NC(=O)OCC JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
- C07K1/042—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers characterised by the nature of the carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/06—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
- Ein Peptid ist eine natürliche oder synthetische Substanz, die durch eine spezielle Sequenz von miteinander über Amidbindungen chemisch verbundenen Aminosäurekomponenten gekennzeichnet ist. Eine weitverbreitete Methode zur chemischen Peptidsynthese ist als sogenanntes Festphasen-Verfahren bekannt (vgl..Barany et al., "Int. J. Peptide Protein Res.", 30 : 705-39 (1987)). Die Durchführbarkeit der Festphasen-Synthese wurde erstmalig unter Benutzung einer mit Carbobenzyloxy (Cbz) geschützten Aminosäure, die über eine Benzylesterbindung an einer Polystyrolverbindung immobilisiert war, demonstriert (R. B. Merrifield, "J. Am. Chem. Soc.", 85 : 2149-54 (1963)). Seitdem benutzte Merrifield auch tert.-Butyloxycarbonyl (Boc) zum Nα-Schutz.
- Eine kritische Stufe bei der Synthese von Peptiden nach dem Festphasen-verfahren ist die kovalente Befestigung bzw. "Verankerung" der ersten (C-terminalen) Aminosäure an dem festen Träger in spezifischer und gesteuerter Weise. Wenn zur Festphasen-Peptidsynthese Syntheseschemata auf Urethanschutzgruppenbasis benutzt werden, gibt es spezielle Probleme bei den Carboxylgruppenaktivierungsmethoden zur Verankerung der C-terminalen Aminosäure (E. Atherton et al., "J. C. S. Chem. Commun.", 336-7, (1981); P. Sieber, "Tet. Lett.", 28, 6147-50 (1987); F. Albericio und G. Barany, "Int. J. Peptide Protein Res.", 26, 92-7 (1985)). Diese Methoden kranken insbesondere an einer geringen Funktionalisierung und/oder Teilracemisierung. Obwohl es Lösungsvorschläge für diese Probleme gibt (P. Sieber, "Tet. Lett.", 28, 6147-50 (1987); F. Albericio und G. Barany, "Int. J. Peptide Protein Res.", 26, 92-7 (1985); R. Kirstgen et al., "J. Chem. Soc., Chem. Commun.", 1870-1 (1987)), hat keiner derselben für eine großtechnische Herstellung von auf festen Trägern verankerten Aminosäuren vollständig zufriedengestellt.
- Nachteile dieser Festphasen-Verfahren unter Carboxylgruppenaktivierung sind die fehlende Verfügbarkeit oder die Kosten und/oder die Instabilität von für eine Carboxylgruppenaktivierung erforderlichen Reagenzien. Darüber hinaus erfordert offensichtlich eine Veresterung über eine Carboxylgruppenaktivierung in einigen dieser Fälle lange Reaktionszeiten für optimale Ausbeuten. Schließlich wurde die Fähigkeit zur Generalisierung dieser Methoden auf sämtliche Aminosäuren allgemeinen Interesses noch nicht belegt.
- Zur Herstellung von an eine feste Phase gebundenen Aminosäuren wurden auch bereits 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc)- geschützte Aminosäuren verwendet. Bei der derzeit benutzten Methode zur Befestigung von Nα-Fmoc-Aminosäuren an festen Trägern wurde eine 1- bis etwa 20%ige Racemisierung der Aminosäure beobachtet (E. Atherton et al., "J. C. S. Chem. Commun.", 336-337 (1981)). Bei einer anderen Methode wurden Aminosäuren direkt an Alkylhalogenide oder polymere Alkylhalogenide ohne Racemisierung verestert. Diese Methoden erfordern die arbeitsaufwendige und kostspielige Herstellung geschützter Aminosäurecäsiumsalze. Für Fmoc-Aminosäurecäsiumsalze wurde die Methode (Columbo) nicht allgemein belegt, und zwar vermutlich wegen der schlechten Löslichkeit einiger dieser Derivate (z. B. A. R. Mitchell et al., "J. Org. Chem.", 43 : 2845-52 (1978); S. S. Wang et al., "J. Org. Chem.", 42 : 1286-90 (1977); R. Columbo et al., "Int. J. Peptide Protein Res.", 21 : 118-26 (1983)). Andere Verfahren zur Herstellung von Festträgerderivaten, die sich einer Benzylesterbildung über eine Reaktion aktivierter Carboxylgruppen mit Benzylalkoholderivaten in Gegenwart eines Acylierungskatalysators bedienen, führen - wie gezeigt - zur Bildung meßbarer Mengen an Racemisierungsprodukten der geschützten Ami nosäure (M. K. Dhaon et al., "J. Org. Chem.", 47 : 1962-1965 (1981); E. Atherton et al., "J. C. S. Chem. Commun.", 336-337 (1981)).
- In "Chemical Abstracts", Band 109, Nr. 5, 1. August 1988, S. 658, Abstrakt Nr. 38219k, wird darüber berichtet, daß einige Nα-Dithiosuccinoyl-
- (Dts)-aminosäuren I (R = H, Me, CHMe&sub2;, CH&sub2;CHMe&sub2;, CH&sub2;Ph, CH&sub2;CH&sub2;SMe, (CH&sub2;)&sub3;NHC(NHNO&sub2;): NH) ohne Racemisierung mit Hilfe von entweder DCC oder Me&sub2;N(CH&sub3;)&sub3;N : C : NEt, HCl, jeweils in Gegenwart von 4-Dimethylaminopyridin an 4-HOCH&sub2;C&sub6;H&sub4;O- (CH&sub2;)nCO&sub2;C&sub4;H&sub2;Cl&sub3;-2,4,5 (n = 2,3) verestert wurden. Die gebildeten Henkelderivate wurden gereinigt und dann quantitativ durch Kupplungsmaßnahmen in 1-Hydroxybenzotriazol enthaltendem DMF an Aminomethylträgern befestigt. Diese Methode erleichtert die Verankerung von Dts-Aminosäuren als p-Alkoxybenzylester, die in guten Ausbeuten durch 1 : 1 CF&sub3;CO&sub2;H/CH&sub2;Cl&sub2; bei 25ºC (ab)gespalten werden können.
- In "Chemical Abstracts", Band 109, Nr. 3, 18. Juli 1988, S. 660-661, Abstrakt Nr. 23352z wird darüber berichtet, daß eine Reihe von polymergetragenen Benzylamiden
- die in den Ringstellungen durch 1 bis 3 Alkoxygruppe(n) substituiert sind, hergestellt wurden und - wie gezeigt - bei der Behandlung mit Säure Carboxamide liefern. Auf der Basis einer anfänglichen Sichtung wurde die Bis(o-methoxy)-p- alkoxybenzylamid-Verankerungsbindung für eine detaillierte Beurteilung ihrer Eignung zur Festphasen-Synthese von C-terminalen Peptidamiden ausgewählt.
- In "Chemical Abstracts", Band 105, Nr. 1, 7. Juli 1986, S. 638, Abstrakt Nr. 6797y, wird darüber berichtet, daß Phenoxyacetat I (R = OH) (II)
- als neuer Henkel vom Phenacyltyp für die polymergetragene Peptidsynthese hergestellt wurde. II wurde mittels DCC mit H&sub2;NCH&sub2;-Polymer zu I (R = NHCH&sub2;-Polymer) kondensiert. Letzteres wurde mit Boc-X-OH (Boc = Me&sub3;CO&sub2;C; X = Gly, Leu Tyr(CH&sub2;Ph), Leu) über KF/DMF oder sein Cs-Salz zu polymergebundenen Aminosäuren III verestert. III eignet sich zur Festphasen-Peptidsynthese; das endgültige Peptid läßt sich ohne Schwierigkeiten von dem Phenacylpolymer durch Nucleophile oder Photolyse (ab)spalten.
- In "Chemical Abstracts", Band 99, Nr. 3, 18. Juli 1983, S. 660, Abstrakt Nr. 22889t, wird darüber berichtet, daß 4- Chlormethylphenoxyacetamidomethylcopoly(styrol-1% -divinylbenzol) und 4-Chlormethylphenoxyacetyl-norleucylpoly(dimethylacrylamid) als funktionalisierte Träger zur Festphasen- Synthese von Peptiden unter milden Bedingungen hergestellt wurden, um die Gefahr einer Racemisierung während der basekatalysierten Veresterung der ersten geschützten Aminosäure an die 4-Alkoxybenzylalc.-Harze, die früher in Kombination mit Nα-9-Fluorenylmethoxycarbonyl- und tert.-Bu-Seitenkettenschutzgruppen benutzt wurden, zu vermeiden. Die Veresterung der Nα-geschützten Aminosäuren an die neuen Harze läßt sich ohne Schwierigkeiten und ohne nennenswerte Racemisierung mittels ihrer Cäsiumsalze bewerkstelligen. Eine (Ab)- spaltung von den Trägern ist durch Behandeln mit CF&sub3;CO&sub2;H möglich.
- In "Chemical Abstracts", Band 98, Nr. 15, 11. April 1983, S. 689, Abstrakt Nr. 126602q, wird darüber berichtet, daß säurelabile
- Peptid-Harz-Bindungsmittel I (R = H, OMe) aus 4-Formylphenol (II) bzw. 3-Methoxyphenol (III) hergestellt wurden. So wird III mit POCl&sub3;/DMF zu Benzaldehyd IV (R¹ = H) formyliert. Letzterer wird mit ClCH&sub2;CO&sub2;H in Gegenwart von wäßriger NaOH zu IV (R¹ = CH&sub2;CO&sub2;H) umgesetzt. Dieses wird mit NaBH&sub4; zu I (R = OMe) reduziert. II wird mit ClCH&sub2;CO&sub2;H zu 4-HCOC&sub6;H&sub4;OCH&sub2;CO&sub2;H umgesetzt. Letztere Verbindung wird mit NaBH&sub4; zu I (R = H) reduziert. I (R = OMe) eignet sich zur Herstellung von Peptidfragmenten mit Seitenkettenschutzgruppen auf tert.-Bu-Basis.
- Die FR-A-2 286 811 beschreibt p- oder o-Chlormethylbenzoesäuren von Phenol oder Thiophenol der folgenden Formel (I):
- worin bedeuten:
- X ein Sauerstoff- oder Schwefelatom, und
- R einen unsubstituierten oder substituierten, monocyclischen oder polycyclischen Phenolrest, wobei der (die) Substituent(en) den folgenden Substituenten oder ein entsprechendes Thiophenol hiervon umfaßt (umfassen).
- E. Atherton et al. beschreiben in "Journal of the Chemical Society; Chemical Communications", Nr. 13, 5. Juli 1987, S. 539-540, ein neues Verfahren, das sich baselabiler N-α-Fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc)-aminosäuren in Kombination mit säurelabilen Seitenkettenschutzgruppen auf tert.-Butylbasis und einer p-Alkoxybenzylesterharzbindung bedient, um unter milderen Reaktionsbedingungen mit Hilfe einer Festphasenpeptidsyntheseprozedur humanes β-Endorphin herzustellen.
- E. Atherton et al. beschreiben in "Journal of the Chemical Society; Perkin Transactions I", Band 4, Nr. 2, 1981, S. 538-546, die Verwendung baselabiler Nα-9-Fluorenylmethoxycarbonylaminosäuren in Kombination mit säurelabilen tert.- Butyl- oder p-Alkoxybenzyl-Seitenketten oder -Carboxyterminus (Harzbindung)-Schutzgruppen, die die Durchführung einer Festphasen-Peptidsynthese unter außergewöhnlich milden Reaktionsbedingungen ermöglichen. Unter Benutzung dieser neuen Kombination von Schutzgruppen lassen sich auf Polyamidträgern zu hohen Ausbeuten führende Synthesen eines Decapeptids und eines Undecapeptids (Substanz P) durchführen.
- Es besteht ein Bedarf nach einer allgemein durchführbaren und preisgünstigen Möglichkeit zur gesteuerten und wirksamen Verankerung C-terminaler Aminosäuren an festen Trägern ohne signifikante Racemisierung der Aminosäuren.
- Diese Erfindung betrifft ein Verfahren nach den Ansprüchen 13 oder 16 zur kovalenten Bindung von Aminosäuren an feste Träger in racemisierungsfreier Weise zur Verwendung bei Festphasen-Peptidsyntheseverfahren. Diese Erfindung betrifft ferner neue Verbindungen nach Anspruch 1, die zur kovalenten und spezifischen Bindung von Aminosäuren an feste Träger verwendet werden. Weiterhin betrifft diese Erfindung ein Verfahren nach Anspruch 19 zur Synthese von Peptiden aus nach den erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten, an einen festen Träger gebundenen Aminosäurederivaten.
- Gemäß dem Verfahren dieser Erfindung kann eine kovalent an einen festen Träger gebundene, geschützte Aminosäure der allgemeinen Formel (I):
- worin bedeuten:
- Z eine von Dithiosuccinyl oder (Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
- B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit geschützten oder ungeschützten Seitenketten;
- R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind, Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
- A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen, Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt sind;
- Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl, Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung gebunden sein kann;
- D ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer, ausgewählt aus der Gruppe natürliche oder unnatürliche Aminosäure und Kohlenwasserstoffkette mit einer linearen oder verzweigtkettigen, gesättigten oder ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder Aralkylgruppe, gebunden sein kann, wobei der Spacer an das Carbonyl über eine Sauerstoff- oder -NH- Bindung gebunden ist, und
- SS einen festen Träger, der an die Carbonylgruppe über D gebunden und aus der Gruppe mit Divinylbenzol vernetztes Polystyrol, vernetztes Polydimethylacrylamid, Glas, Glas mit kontrollierter Porengröße, Polyvinylidendifluorid, Polypropylen, Polyethylen, Keramiken, Siliciumdioxide und Aluminiumoxide ausgewählt ist,
- hergestellt werden.
- Fig. 1 ist eine schematische Darstellung zur racemisierungsfreien Befestigung C-terminaler Aminosäuren an festen Trägern zur Peptidsynthese.
- Fig. 2 ist eine andere schematische Darstellung zur racemisierungsfreien Befestigung C-terminaler Aminosäuren an festen Trägern zur Peptidsynthese.
- Fig. 3a zeigt ein HPLC-Chromatogramm von GITC-Derivaten eines Standard-D,L-Gemischs von Phenylalanin.
- Fig. 3b zeigt eine HPLC-Chromatogramm von GITC-Derivaten von einem nach den Methoden von Atherton ("J. C. S. Chem. Comm.", 336-337 (1981)) hergestellten Harz.
- Fig. 3c zeigt ein HPLC-Chromatogramm eines von einem nach den erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Harz erhaltenen GITC-Derivats.
- Fig. 4a zeigt das HPLC-Chromatogramm von Fig. 3b nach Computerexpansion.
- Fig. 4b zeigt das HPLC-Chromatogramm von Fig. 3c nach Computerexpansion.
- Diese Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer kovalent an einen festen Träger gebundenen, geschützten Aminosäure der allgemeinen Formel (I):
- worin Z für eine von Dithiosuccinyl oder (Isopropyldithio)- carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe steht und B eine oder mehrere natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure(n) mit geschützten oder ungeschützten Seitenketten bedeutet. Vorzugsweise steht B für eine Aminosäure. R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind, sind aus der Gruppe Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes oder ungesättigtes Alkyl, Aryl und Benzyl ausgewählt. Vorzugsweise stehen beide Reste R&sub1; und R&sub2; für Wasserstoff. A bedeutet einen substituierten oder unsubstituierten Phenylring, wobei die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen, Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt sind. Vorzugsweise handelt es sich bei dem Phenylring um einen substituierten oder unsubstituierten Benzolring, wobei die Benzolgruppe an C und Y in ihren para-Stellungen gebunden ist. Y steht für eine Kohlenwasserstoffkette mit linearer oder verzweigtkettiger, gesättigter oder ungesättigter Alkyl-, Aryl- oder Aralkylgruppe, die an A über eine Etherbindung gebunden sein kann. Vorzugsweise bedeutet Y -(O)m- (CH&sub2;)n mit m = 1 oder 0 und n gleich einer ganzen Zahl von über 0 bis 12. D steht für ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer, ausgewählt aus der Gruppe eine oder mehrere natürliche oder unnatürliche Aminosäure(n) oder Kohlenwasserstoffkette(n) mit linearen oder verzweigtkettigen, gesättigten oder ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder Aralkylgruppen, gebunden sein kann. Der Spacer ist an das Carbonyl über eine Sauerstoff- oder -NH-Bindung gebunden. SS bedeutet einen festen Träger, der an die Carbonylgruppe über D gebunden und aus der Gruppe mit Divinylbenzol vernetztes Polystyrol, vernetztes Polydimethylacrylamid, Glas, Glas mit kontrollierter Porengröße, Polyvinylidendifluorid, Polypropylen, Polyethylen, Keramiken, Siliciumdioxide und Aluminiumoxide ausgewählt ist. Bevorzugte feste Träger sind PepsynTM, Pepsyn KTM und Polystyrolharze.
- Das erfindungsgemäße Verfahren bietet eine wirtschaftliche Möglichkeit zur Herstellung derivatisierter fester Träger, die bei der Festphasen-Peptidsynthese verwendet werden können. Das Verfahren bedient sich preisgünstiger und rasch reagierender Ausgangsmaterialien. Weiterhin beseitigt die vorliegende Erfindung die Notwendigkeit einer Verwendung von Cäsiumsalzen der Nα-geschützten Aminosäuren, z. B. von Boc- Aminosäure-O-Cs&spplus;, wie es bei der Mitchell-Methode verwendet wird, oder von teuren und toxischen Zusatzstoffen, z. B. 18- Crown-6, wie es bei der Columbo-Methode verwendet wird.
- Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht eine praktische, gesteuerte und wirksame Verankerung C-terminaler Aminosäuren an festen Trägern ohne begleitende Racemisierung der Aminosäuren. Somit werden unter Verwendung der erfindungsgemäßen, an eine feste Phase gebundenen Aminosäuren hergestellte Peptide in höherer Ausbeute und Reinheit als unter Verwendung üblicher Festphasenträger hergestellte Peptide gewonnen.
- Die genannten Verbindungen lassen sich nach zwei im folgenden detailliert beschriebenen Schemata synthetisieren. Bei den Synthesezwischenprodukten handelt es sich ebenfalls um neue Verbindungen. Es folgt nun eine detailliertere Beschreibung der für diese Synthesewege geeigneten Reaktionsteilnehmer.
- Im Rahmen eines ersten Schemas wird eine Carbonsäure (II) mit (von Cl verschiedener) abspaltbarer bzw. flüchtiger Gruppe X mit einem Alkohol, Phenol, Thiol, Thiophenol oder heterocyclischem Äquivalent in Gegenwart eines Kondensationsmittels zu der Verbindung (III) kondensiert.
- A, R&sub1;, R&sub2; und Y besitzen die zuvor angegebene Bedeutung. X steht für eine von Cl verschiedene abspaltbare bzw. flüchtige Gruppe, die in einer folgenden Synthesestufe ohne weiteres durch ein Carboxylat ersetzt werden kann. Eine abspaltbare bzw. flüchtige Gruppe wird hierin als beliebiger elektronenabziehender Substituent, der das Kohlenstoffatom, an dem er hängt, unter Erleichterung nucleophiler Substitutionsreaktionen an diesem Kohlenstoff elektrophil macht, definiert. Bevorzugte abspaltbare bzw. flüchtige Gruppen sind irgendwelche von Cl verschiedene Halogene, es kann sich hierbei jedoch auch um eine Sulfonylgruppe, z. B. Methansulfonyl, Trifluormethylsulfonyl oder p-Toluolsulfonyl, handeln. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform besteht die Verbindung (II) aus 4-Brommethylphenoxyessigsäure oder 4- Iodmethylphenoxyessigsäure. W steht entweder für ein Schwefelatom oder ein Sauerstoffatom. R&sub3; bedeutet eine von dem Alkohol, Phenol, Thiol, Thiophenol oder analogen heterocyclischen Alkohol oder Thiol herrührende Gruppe. Als Reagens kann jeder Alkohol, jedes Phenol, jedes Thiol, jedes Thiophenol oder jeder analoge heterocyclische Alkohol oder jedes analoge heterocyclische Thiol verwendet werden, solange (nur) R&sub3; als Carboxylschutzgruppe wirkt. R&sub3; kann die Carboxylgruppe für einen nucleophilen Angriff aktivieren, braucht es jedoch nicht zu tun. Wenn R&sub3; eine derartige aktivierende Gruppe darstellt, muß sie eine Verbindung (III) ausreichender Stabilität liefern, so daß R&sub3; nicht auf die Carboxylgruppe der in der folgenden Synthesestufe benutzten Aminosäure übertragen wird. Sie muß allerdings ausreichend reaktionsfähig sein, um die Verbindung (IV) für einen nucleophilen Ersatz bzw. Austausch durch ein an einem festen Träger befestigtes Atom D zur Bildung der Verbindung der Formel I zugänglich zu machen. Wenn R&sub3; nicht für eine Carbonyl aktivierende Gruppe steht, muß es unter Bedingungen entfernbar sein, welche die Nα- und Seitenkettenschutzgruppen nicht beeinflussen.
- Eine Nα-geschützte Aminosäure wird dann direkt zu dem substituierten aromatischen Ester (III) zur Bildung der Verbindung der folgenden Formel:
- verestert.
- In der Formel besitzen R&sub1;, R&sub2;, Y, A, W und R&sub3; die zuvor angegebene Bedeutung. B steht für eine Aminosäure oder ein Peptid, die bzw. das über ihre bzw. seine Carboxylgruppe an den Benzylkohlenstoff der Verbindung gebunden ist. Bei der Aminosäure kann es sich um eine natürlich vorkommende Aminosäure oder Modifikationen derselben handeln. Obwohl B als einzige Aminosäure dargestellt ist, dürfte es selbstverständlich sein, daß B auch für mehr als eine Aminosäure stehen kann. Die Aminosäureseitenkette kann gewünschtenfalls oder erforderlichenfalls mit einer Seitenkettenschutzgruppe geschützt sein. Z steht für eine von Dithiosuccinyl oder (Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe. Der Ausdruck "Nα-Aminosäureschutzgruppe" bedeutet eine Struktur, die eine Bindung mit der Aminosäure über das α-Stickstoffatom eingehen und dabei die Aminogruppe nicht mehr reaktionsfähig machen kann. Die Nα-Aminosäureschutzgruppe soll ohne Zerstörung irgendeiner nach den erfindungsgemäßen Verfahren gebildeten Peptidbindung entfernbar sein. Vorzugsweise handelt es sich bei Z um eine baselabile Schutzgruppe, z. B. eine 9-Fluorenylmethyloxycarbonylschutzgruppe (Fmoc).
- In der Veresterungsstufe werden Nα-geschützte Aminosäurecarboxylatanionen in Lösung erzeugt und wirken als solche als Nucleophil. Danach wird mit dem Benzylkohlenstoff des substituierten aromatischen Esters (III) durch nucleophilen Angriff von Aminosäurecarboxylaten eine Esterbindung gebildet.
- In der letzten Synthesestufe wird der Nα-geschützte Aminosäureester (IV) unter Verwendung eines Katalysators direkt an einen festen Träger gekuppelt, um die Verbindung der Formel (I) in der zuvor beschriebenen Weise zu liefern.
- Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform erfährt eine halogenierte oder sulfonierte Carbonsäure (V) in Gegenwart eines Kondensationsmittels eine Kondensationsreaktion mit 2,4-Dichlorphenol unter Bildung einer Verbindung (VI):
- Hierbei bedeuten m 0 oder 1 und n eine ganze Zahl von über 0 bis 12. Die Verbindung (VI) wird anschließend zu einer Nαgeschützten Aminosäure verestert, um eine Verbindung der folgenden Formel:
- mit Z, B, m und n in der zuvor angegebenen Definition, zu liefern. Die Verbindung (VII) wird anschließend direkt an einen festen Träger gekuppelt, um eine Verbindung der Formel:
- mit den verschiedenen Variablen in der zuvor angegebenen Definition zu liefern.
- Die substituierte aromatische Carbonsäure 4-Methylphenoxyessigsäure dient als Ausgangsmaterial. Es können jedoch auch andere substituierte aromatische Carbonsäuren verwendet werden. Die in Fig. 1 benutzten Abkürzungen werden bei ihrer Erwähnung im folgenden Text, der das Verfahren beschreibt, erläutert.
- In der ersten Stufe wird 4-Methylphenoxyessigsäure (a) durch Alkylierung von p-Kresol mit Chloressigsäure in Gegenwart einer geeigneten Base, wie Natriumhydroxid, hergestellt. Unter Verwendung von o-Kresol oder m-Kresol können auch andere Isomere der 4-Methylphenoxyessigsäure gewonnen werden. Es können auch noch andere Alkylierungsmittel, wie lodessigsäure, Bromessigsäure oder deren Äquivalente, zum Einsatz gelangen. Die Reaktion kann in einem wäßrigen oder geeigneten organischen Lösungsmittel oder Mischungen derselben durchgeführt werden. Zur Bildung des zur Reaktion erforderlichen Kresolatanions können (auch) andere Basen, wie Kalium- oder Lithiumhydroxid, Kaliumcarbonat, Cäsiumcarbonat, Natriumhydroxid, Natriumhydrid, Kaliumhydrid oder deren Äquivalente verwendet werden. Das Ansäuern des Reaktionsgemischs zur Produktisolierung wird mit wäßriger Salzsäüre, Schwefelsäure, Kaliumhydrogensulfat oder einer hierzu äquivalenten Protonenquelle bewerkstelligt.
- In der folgenden Synthesestufe wird 4-Methylphenoxyessigsäure (a) mit N-Bromsuccinimid (NBS) zur Bildung von 4-Brommethylphenoxyessigsäure (b) unter Verwendung von Chloroform oder Tetrachlorkohlenstoff als Lösungsmittel bromiert. Die Reaktion wird in rückfließendem Lösungsmittel in Gegenwart eines radikalischen Initiators für freie Radikale, wie Benzoylperoxid oder eines Äquivalents hiervon, durchgeführt. Andererseits kann die Reaktion auch unter Verwendung anderer Bromierungsmittel, wie N-Bromacetamid oder dessen Äquivalenten, durchgeführt und durch Belichten eingeleitet werden. In ähnlicher Weise können als Lösungsmittel Alkane, Bromoform, Tetrabromkohlenstoff oder deren Äquivalente verwendet werden.
- In der folgenden Synthesestufe wird ein geeigneter aktiver Ester von 4-Brommethylphenoxyessigsäure (b) gebildet. Diese Stufe wird durch Kondensation von b mit 2,4-Dichlorphenol unter Verwendung von Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) als Kondensationsmittel durchgeführt. Die Reaktion kann in den verschiedensten organischen Lösungsmitteln, wie Ethylacetat, Methylenchlorid, Chloroform, Dioxan, Tetrahydrofuran, Dimethylformamid oder einem Äquivalent hiervon, durchgeführt werden. Zur Bereitstellung aktiver Esterderivatanaloge zu 2,4-Dichlorphenyl-4-brommethylphenoxyacetat (c) können (auch) andere substituierte Phenole, wie Pentafluor-, Pentachlor-, 2-Nitro-, 2,4-Dinitro-, 4-Nitro-, 2-Chlor-, 4-Chlor-, 2,4,5-Trichlor-, 2-Brom-, 4-Bromphenol, Isomere derselben oder deren Äquivalente verwendet werden. Andere analoge Ester lassen sich durch Ersatz des 2,4-Dichlorphenols bei dieser Reaktion durch geeignet strukturierte Alkohole, wie Trichlorethanol, Phenacylalkohol, N-Hydroxyverbindungen, wie N-Hydroxysuccinimid, hydroxylsubstituierte Heterocyclen oder deren Äquivalente, gewinnen. Darüber hinaus lassen sich Thioesteranaloge von (c) durch Kondensation von b mit geeignet substituierten Thiolen herstellen. Zur Umwandlung von b zu c oder b zu den genannten Analogen von c kann man auch andere Kondensationsmittel oder chemische Kondensationsreaktionen benutzen. So können beispielsweise auch andere Carbodiimide, wie Diisopropylcarbodiimid oder Äquivalente hiervon, verwendet werden. In ähnlicher Weise kann man die Carboxylaktivierung von b durch Umwandeln von b in sein Säurechlorid über Thionylchlorid oder ein Äquivalent hiervon oder durch Umwandeln in ein gemischtes Anhydrid über Isobutylchlorformiat, Pivaloylchlorid oder Äquivalente derselben be werkstelligen. Andere bekannte Verfahren einer Carboxylgruppenaktivierung können ebenfalls durchgeführt werden.
- In einigen Fällen kann die Umwandlung von c in sein Iodidderivat, 2,4-Dichlorphenyl-4-iodmethylphenoxyacetat (d), vor Durchführung der folgenden in Fig. 1 dargestellten chemischen Reaktionen von Vorteil sein. Die Halogenaustauschreaktion erfolgt durch Zusatz von gesättigtem wasserfreiem Natriumiodid in Aceton zu dem Brommethyl-Aktivester (c). Bei dieser Reaktion kann das Natriumiodid durch Kaliumiodid oder ein äquivalentes Iodid oder Aceton als Lösungsmittel durch Tetrahydrofuran oder ein Äquivalent hiervon ersetzt werden.
- In der nächsten Stufe des Syntheseschemas wird entweder das Bromid (c)- oder Iodid (d)-Derivat zur Alkylierung von Fmoc- Aminosäurecarboxylatanionen, die in Lösung durch Neutralisation mit einer Base aus einem tertiären Amin, wie Diisopropylethylamin (DIEA), erzeugt worden waren, verwendet. Fmoc bezeichnet die 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl-Schutzgruppe. R bezeichnet die Struktur der Aminosäureseitenkette und hängt von der gewählten speziellen Aminosäure ab. Wenn beispielsweise R für CH&sub3; steht, ist die Aminosäure Alanin (Ala). Wenn R für CH(CH&sub3;)&sub2; steht, ist die Aminosäure Valin (Val), und dgl. Das R, die Aminosäureseitenkette, kann erforderlichenfalls die Struktur einer Schutzgruppe umfassen. Das Sternchen am α-Kohlenstoff dient zur Bezeichnung dieses Atoms als chirales Zentrum. So können D- oder L-Enantiomere einer jeden Aminosäure bei dieser Reaktion verwendet werden. Die Stereochemie bleibt während der Umwandlung der Halogenide c oder d in das Produkt Nα-9-Fluorenylmethyloxycarbonylaminoacyl-4-oxymethylphenoxyessigsäure-2,4-dichlorphenylester (e) vollständig erhalten. So sind bei Verwendung optisch reiner Fmoc-geschützter L-Aminosäuren bei der Veresterung die erhaltenen Produkte (e) von L-Konfiguration und nicht mit dem D-Isomer verunreinigt.
- Die Veresterung kann in den verschiedensten Lösungsmitteln oder Lösungsmittelgemischen einschließlich Dimethylacetamid, Dimethylformamid, N-Methylpyrrolidon, Aceton oder Äquivalenten derselben durchgeführt werden. Andere Basen oder wasserstoffbindende Chemikalien können zur Erzeugung eines wirksamen geschützten Aminosäurecarboxylats ebenfalls verwendet werden. Hierzu gehören Triethylamin, Tributylamin, Cäsium- oder Kaliumcarbonat oder -bicarbonat, N-Methylmorpholin, Kaliumfluorid oder Äquivalente hiervon. Vorzugsweise dient Fmoc als Nα-Schutzgruppe. Zur Peptidsynthese können jedoch auch noch andere Schutzgruppen, wie tert.-Butyloxycarbonyl (Boc), Carbobenzyloxycarbonyl (Cbz), 2-Nitropyridinsulfenyl (Npys), Trifluoracetyl, 2(p-Biphenylisopropyloxycarbonyl (Bpoc), 4-Methoxybenzyloxycarbonyl (Pmz), Tosyl, Trityl, methoxysubstituierte Trityle, 9-Phenylfluorenyl, 2-Nitrophenylsulfenyl (Nps), Benzyl, p-Nitrocarbobenzyloxycarbonyl (p-NO&sub2;Cbz), tert.-Amyloxycarbonyl (Aoc), 2-(3,5-Dimethyloxyphenyl) -propyl- (2) -oxycarbonyl (Ddz), 2,2-[Bis(4-nitrophenyl)]-ethyloxycarbonyl (Bnpeoc), Adamantyloxycarbonyl (Adoc), 2,2,2-Trichlorethyloxycarbonyl (Troc) und anders substituierte Analoge und Isomere sowie deren Äquivalente, verwendet werden.
- In Tabelle 1 sind verschiedene carboxyfunktionalisierte Nα- Fmoc-geschützte Aminosäuren (e), die über die Iodid (d)- oder Bromid (c)-Derivate und geeignete Nα-Fmoc-Aminosäuren (vgl. Fig. 1) hergestellt wurden, aufgelistet. Die Proton- NMR-Spektren sämtlicher in Tabelle 1 aufgeführter Derivate stimmen mit den erwarteten Strukturen überein. Das Verfahren ist mit einem vollständigen Bereich von bei der Peptidsynthese brauchbaren Seitenkettenschutzgruppen durchführbar. Neben den in Tabelle 1 angegebenen Seitenkettenschutzgruppen (bezüglich der Abkürzungen vgl. die Fußnote zu Tabelle 1) kann das Verfahren auch mit anderen Seitenkettenschutzgruppen, z. B. Cbz, verschiedenen chlor-, brom- und methylsubstituierten Cbz-Gruppen, Pmz, p-NO&sub2;Cbz, Aoc, Adoc, Bpoc, Tri fluoracetyl, Nps, Npys, Tosyl, verschieden substituierten Tosylgruppen, Ddz, Bnpeoc, Benzyl und verschiedenen chlor-, brom-, nitro- und methoxysubstituierten Benzylen, Dinitrophenyl (Dnp), tert.-Butyloxymethyl (bum), Benzyloxymethyl (Bom), substituierten Tritylen, 9-Phenylfluorenyl, substituierten tert.-Butylgruppen, Trichlorethyl, Nitrobenzyl, Troc, Phenacyl, 2,2,5,7,8-Pentamethylchroman-6-sulfonyl (Pmc), Benzydrylamin (BHA), Methylbenzydrylamin (Mbha), Xanthyl (Xan), 2,4,6-Trimethoxybenzyl (Tmob) und sonstigen verschieden substituierten Analogen, Isomeren oder äquivalenten Gruppen hierzu, durchgeführt werden. Tabelle 1
- a. Rohausbeute
- b. Diese Materialien lieferten unter Hochvakuum "Schäume", die physikalisch zu leicht handhabbaren, offensichtlich stabilen Pulvern gebrochen werden können.
- c. Für Seitenkettenschutzgruppen benutzte Abkürzungen (in Klammern) sind:
- Boc - tert.-Butyloxycarbonyl,
- tBu - tert.-Butyl,
- Trt - Trityl,
- Mtr - 4-Methoxy-2,3,6-trimethylbenzolsulfonyl,
- Mbh - 4,4'-Dimethoxybenzhydryl,
- Acm - Acetamidomethyl.
- In der letzten Stufe (Fig. 1) werden funktionalisierte Nα- Fmoc-Aminosäureester (e) direkt an feste Träger (mit D-SS bezeichnet, wobei D für irgendeine nucleophile Gruppe steht und aus einer Amino- oder Hydroxylgruppe bestehen kann) zur Bildung der Verbindung (f) gekuppelt. Die Kupplung an den Träger wird durch Mitverwendung eines Katalysators erleichtert. Der Katalysator kann aus Pyridin, 4-Dimethylaminopyridin (DMAP), N-Methylimidazol, 1-Hydroxybenzotriazol (HOBT) oder einem Äquivalent hierzu bestehen. Die Kupplungsreaktion kann unter Verwendung von Dimethylformamid (DMF), Dimethylacetamid (DMA), N-Methylpyrrolidon (NMP), Methylenchlorid oder einem Gemisch dieser Verbindungen oder einem Äquivalent hierzu bestehen. Die nach diesem Verfahren funktionalisierten festen Träger können aus solchen Werkstoffen bestehen, die derzeit bei der Peptidsynthese weitverbreitet sind. Hierzu gehören mit 1% Divinylbenzol (1% DVB) vernetztes Polystyrol, vernetztes Polydimethylacrylamid (handelsübliche Pepsyn- und Pepsyn-K-Harze), Äquivalente hierzu mit verschiedenen Vernetzungsgraden und verschiedenen Funktionalisierungsgraden, funktionalisierte Gläser mit kontrollierter Porengröße sowie experimentelle Polymere, z. B. Membranen auf Basis von funktionalisiertem Polyvinylidendifluorid oder Polypropylen, funktionalisierte Siliciumdioxide oder Aluminiumoxide und Keramiken sowie sonstige unlösliche Werkstoffe, auf die eine nucleophile Gruppe aufgesetzt werden kann.
- Die an einen festen Träger gebundene Aminosäure der Formel I läßt sich auch nach einem Alternativschema synthetisieren. Gemäß diesem Schema wird an den festen Träger vor der Ver esterung der Aminosäure ein Linker befestigt. Der Ausdruck "Linker" bedeutet hier und im folgenden einen Teil der Verbindung zwischen der Aminosäure und dem festen Träger, der die beiden miteinander verbindet. Während der Veresterung erfährt die flüchtige Benzylgruppe einen nucleophilen Angriff durch das Carboxylat der Aminosäure. Diese Veresterung führt ebenfalls zu einer racemisierungsfreien Befestigung der Aminosäuren an festen Trägern.
- Bei dem zweiten Schema wird die Verbindung II mit einer Hydroxidquelle zur Umwandlung von X in eine Hydroxylgruppe behandelt. Die erhaltene Verbindung wird dann mit einem festen Träger gegebenenfalls in Gegenwart eines Katalysators zur Bildung der an den festen Träger gebundenen Verbindung der Formel (IX)
- kondensiert.
- Anschließend wird die Hydroxylgruppe der Verbindung IX in eine abspaltbare bzw. flüchtige Gruppe, z. B. ein von Cl verschiedenes Halogen oder ein Sulfonyl, umgewandelt. Die gebildete Verbindung erfährt einen Austausch der abspaltbaren bzw. flüchtigen Gruppe durch eine Nα-geschützte Aminosäure unter Bildung der Verbindung der Formel I oder der bevorzugten Verbindung (VIII) (vgl. die vorherigen Ausführungen).
- Vorzugsweise wird ein halogeniertes aromatisches Carbonsäureanalog mit einer Hydroxidquelle unter Bildung einer hydroxysubstituierten aromatischen Carbonsäure (X)
- zur Reaktion gebracht.
- Die Verbindung (X) wird anschließend an einen funktionalisierten Träger zur Bildung der Verbindung der Formel (XI)
- kondensiert. Schließlich wird die Hydroxylgruppe auf der Verbindung (XI) durch eine von Cl verschiedene abspaltbare bzw. flüchtige Gruppe X ersetzt. In einer folgenden Stufe wird die abspaltbare bzw. flüchtige Gruppe durch eine Nα-geschützte Aminosäure ersetzt, wobei die Verbindung der Formel VIII entsteht.
- In Schema II wurde als Ausgangsmaterial eine Bromsäure (b) verwendet, um die racemisierungsfreie Befestigung von Aminosäuren an festen Peptidsyntheseträgern zu erleichtern (vgl. das in Fig. 2 dargestellte Schema).
- In der Anfangsstufe wird die Bromsäure (b) mit Hilfe von wäßrigem NaHCO&sub3; in eine Hydroxysäure (g) umgewandelt. Zu dieser Umwandlung eignen sich auch andere wäßrige Basen (Hydroxidquelle), die auf einen geeigneten pH-Wert gepuffert sind. Hierzu gehören Lithium-, Natrium-, Kalium-, Cäsium-, Magnesium-, Calcium- und Bariumhydroxid, -carbonat, -bicarbonat oder deren Äquivalente. In der Folgestufe wird die Hydroxysäure (g) mit einem etwas nucleophile Funktionalität D in Form von Hydroxyl oder Amin enthaltenden festen Träger kondensiert. Die Kondensation kann unter Verwendung von Carbodiimiden, wie Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) mit oder ohne 1-Hydroxybenzotriazol (HOBT) als Katalysator durchgeführt werden. Es können auch andere Acylierungskatalysatoren, wie N-Hydroxysuccinimid oder ein Äquivalent hierzu, verwendet werden. Zur Kondensation mit dem festen Träger zur Bildung funktionalisierter Träger (h) können auch aktive Esterderivate von (g) verwendet werden. Zur Herstellung der Derivate (h) eignen sich auch andere bekannte Verfahrensweisen einer Carboxylaktivierung, z. B. solche, wie sie zuvor im Zusammenhang mit dem in Fig. 1 dargestellten Schema diskutiert wurden. Eine Schlüsselstufe bei diesem Verfahren ist die Umwandlung von Hydroxymethylträgern (h) in Chlormethylträger (i). Diese wird durch Umsetzen von h mit 4 N HCl in Dioxan bei Raumtemperatur bewerkstelligt. Es können auch andere Lösungsmittel als Dioxan, wie Ethylacetat, Tetrahydrofuran, Essigsäure, Methylenchlorid, Ether, Wasser oder Mischungen dieser Lösungsmittel oder deren Äquivalente, zur Chlorierung verwendet werden. Ferner kann man sich auch anderer bekannter Reagenzien und Maßnahmen zum Ersatz einer Hydroxylgruppe durch Halogen oder eine sonstige abspaltbare bzw. flüchtige Gruppe bedienen. Solche Reagenzien sind beispielsweise PCl&sub3;, PCl&sub5;, POCl&sub3;, Triphenylphosphin in CCl&sub4; oder CBr&sub4;, HBr in einem geeigneten Lösungsmittel, PBr&sub3;, Aryl- und Alkylsulfonylchloride oder -bromide in Lösung mit einer geeigneten Base, wie Pyridin oder Diisopropylethylamin (DIEA) oder deren Äquivalente. In der letzten Stufe wird die von einem geschützten Aminosäurecäsiumsalz verschiedene geschützte Aminosäure durch nucleophilen Austausch der zuvor eingebauten abspaltbaren bzw. flüchtigen Gruppe an das Harz verestert. In diesem Falle wurde die Chlormethylgruppe von (i) bei Raumtemperatur mit einer Fmoc-Aminosäure in DIEA und NaI enthaltendem Dimethylformamid (DMF) reagieren gelassen. Im Falle von Fmoc-Alanin überstieg die Kupplungsausbeute unter diesen Bedingungen 98% der theoretischen Ausbeute. Das auf diese Weise eingebaute Fmoc-Alanin wurde durch Behandeln mit Trifluoressigsäure quantitativ freigesetzt. Man kann sich auch anderer bekannter Maßnahmen zur Durchführung einer Veresterung über eine nucleophile Austauschreaktion einer abspaltbaren bzw. flüchtigen Gruppe durch ein Carboxylat wie bei der Umwandlung von (i) in (f) bedienen. Diese Maßnahmen wurden zuvor im Zusammenhang mit der Beschreibung der in Schema 1 benutzten Chemie diskutiert.
- In ähnlicher Weise kann man wie zuvor im Zusammenhang mit Schema 1 beschrieben auch andere geschützte Aminosäuren als Ausgangsmaterialien für die Veresterung verwenden.
- Zum Beleg der optischen Reinheit der nach den hierin beschriebenen Verfahren hergestellten, an einen festen Träger gebundenen Aminosäuren wurde ein chirales Derivatisierungsmittel, nämlich 2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-β-D-glucopyranosylisothiocyanat (GITC) (N. Nimura et al., "Journal of Chromatography", 202 : 375-9 (1980); T. Kinoshita et al., "Journal of Chromatography", 210 : 77-81 (1981)), das D,L- Aminosäuregemische in Mischungen von durch Umkehrphasen-HPLC trennbaren Diastereomeren umzuwandeln vermag, verwendet. Bei diesen Experimenten wurden nach den neuen hierin beschriebenen Verfahren hergestellte Harze auf Pepsyn-K-Basis mit nach derzeit üblichen Verfahren hergestellten handelsüblichen Harzen (E. Atherton et al., "J. C. S. Chem. Commun.", 336-337 (1981)) und handelsüblichen D, L-Aminosäurestandardgemischen (Sigma Chemical Co., Lt. Louis, MO) verglichen. Nach Entfernen der Fmoc-Gruppe von den Fmoc-Aminosäure/Pepsyn-K-Harzen mit 20% Piperidin in DMF (v/v) und anschließendem Auswaschen des überschüssigen Reagens mit DMF und danach CH&sub2;Cl&sub2; wurden die freien Aminosäuren mit blanker Trifluoressigsäure (TFA) von den Harzen abgespalten. Nach Abtrennung der TFA von den Harzen wurde sie zur Trockene eingedampft, wobei die freien Aminosäuren als trockene TFA-Salze erhalten wurden. Die freien Aminosäuren wurden mit GITC-Reagens gemäß Literaturangaben (N. Nimura et al., "Journal of Chromatography", 202 : 375-9 (1980); T. Kinoshita et al., "Journal of Chromatography", 210 : 77-81 (1981)) derivatisiert. Die Ergebnisse der HPLC-Analyse (C-18-Säule, 15-minütiger linearer Gradient von 20-40% Acetonitril in Wasser mit 0,1% TFA) der auf diese Weise aus den nach den erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Fmoc-Phe-Pepsyn-K-Harzen bzw. einem handelsüblichen Fmoc-Phe-Pepsyn-K-Produkt (E. Atherton et al., "J. C. S. Chem. Commun.", 336-337 (1981)) erhaltenen Aminosäuren sind in Fig. 3 und 4 dargestellt. Das aus dem nach den erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Harz erhaltene Phenylalaninderivat war im wesentlichen von D-Isomerverunreinigung frei und wurde folglich racemisierungsfrei erhalten. Im Gegensatz dazu zeigte es sich, daß das handelsübliche Phenylalaninderivat eine erhebliche Menge (2%) an D- Isomerverunreinigung (quantifiziert durch Peakintegration) enthielt. Die Fig. 3b zeigt einen kleinen, nach 18,43 min eluierten Peak, der einer 2%igen D-Verunreinigung in dem nach den Methoden von Atherton et al. hergestellten Handelsprodukt entspricht.
- Die an einen festen Träger gebundenen Aminosäuren der Formel I werden zur Synthese spezieller Peptidsequenzen benutzt. Der feste Träger ist chemisch funktionalisiert, um den ersten Peptidbildungsblock zu verankern. Die Synthese der speziellen Peptidsequenz erfolgt entweder manuell oder automatisiert. Zur stufenweisen Peptidkonstruktion kann man sich üblicher chemischer Protokolle bedienen. Von geschützten Aminosäurecäsiumsalzen verschiedene geschützte Aminosäuren können nach und nach an die erste an den festen Träger gebundene Aminosäure gekoppelt werden, um an den festen Träger gebundene Peptide herzustellen.
- Beispiele für solche Methoden finden sich bei B. Gutte und R. B. Merrifield (1971) in "J. Biol. Chem.", 246 : 1922-1941; S. B. Kent et al. (1978) in "Anal. Chem.", 50 : 155-159; T. W. Wong & R. B. Merrifield (1980) in "Biochemistry", 19 : 3233- 3238; R. Arshady et al. (1981) in "J. Chem. Soc., Perkin Trans. I", 529-537; E. Atherton et al. (1981) in "J. Chem. Soc., Perkin Trans. I", 538-546; J. M. Stewart & J. D. Young (1984) in "Solid Phase Peptide Synthesis", 2. Auflage, Pierce Chemical Co., Rockford, IL, und E. Atherton, R. C. Sheppard & P. Ward (1985) in "J. Chem. Soc., Perkin Trans.
- I", 2065-2073. Nach dem Zusammenbau der gewünschten speziellen Sequenz können die Schutzgruppen zur Erzeugung biologisch funktioneller Moleküle entfernt werden.
- Je nach der Bindung an den festen Träger kann das synthetisierte Peptid entweder für die anschließende Charakterisierung und/oder Identifizierung abgespalten oder in ungeschützter Form an dem festen Träger belassen werden.
- Die folgenden, jedoch keineswegs beschränkenden Beispiele sollen die vorliegende Erfindung näher veranschaulichen.
- 4-Methylphenoxyessigsäure (87,3 g, 0,525 mol) und N-Bromsuccinimid (112,2 g, 0,63 mol) wurden mit 900 ml trockenem CHCl&sub3; und 100 mg Benzoylperoxid versetzt, worauf das Gemisch 2,5 h auf Rückflußtemperatur erwärmt wurde. Nachdem sich das Gemisch abgekühlt hatte, wurde es über Nacht bei 4ºC stehen gelassen. Die hierbei ausgefallenen Kristalle wurden durch Vakuumfiltrieren abgetrennt, zweimal mit 50 ml eiskaltem CHCl&sub3; und anschließend 50 ml Waschwasser gewaschen. Nach dem Trocknen im Vakuum über P&sub2;O&sub5; auf konstantes Gewicht wurden 52,9 g eines weißen Produkts (Fp : 122-4ºC) erhalten. Zur Gewinnung von weiterem Produkt wurde die organische Mutterlauge mit Wasser (3 · 150 ml) und 150 ml Salzlake gewaschen. Nach dem Trocknen über Na&sub2;SO&sub4; und Abfiltrieren wurde das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Verdampfungsrückstand wurde aus 90 ml siedendem CHCl&sub3; zur Kristallisation gebracht. Die erhaltenen Kristalle wurden durch Vakuumfiltrieren abgetrennt, dreimal mit 20 ml CHCl&sub3;/Hexane (1 : 1) gewaschen und im Vakuum getrocknet, wobei 17,6 g weiteres Produkt (Fp: 121-2ºC) erhalten wurden. Die Gesamtausbeute betrug 70,5 g (55%). Das Produkt zeigte einen Rf-Wert von 0,33 bei der Dünnschichtchromatographie (auf Silicagel 60) unter Verwendung von 95 : 5 CHCl&sub3; : Essigsäure als Entwick ler. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;, δ in ppm relativ zu Tetramethylsilan) : 4,41 (s, 2H), 4,62 (s, 2H), 6,24 (breites s, 1H), 6,82 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,7 Hz, 2H).
- 4-Brommethylphenoxyessigsäure (20 g, 81,6 mol) und 2,4- Dichlorphenol (14 g, 85,7 mol), die in 100 ml Ethylacetat bei 0ºC suspendiert worden waren, wurden portionsweise unter Rühren mit festem Dicyclohexylcarbodiimid (17,7 g, 85,8 mol) versetzt. Nach 2 h bei 0ºC wurden zu der gebildeten dicken Suspension 200 ml Ethylacetat zugegeben. Während sich das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmen durfte, wurde es 30 min lang weitergerührt. Unlöslicher Dicyclohexylharnstoff wurde abfiltriert und mit Ethylacetat (3 · 30 ml) gewaschen. Das mit den Waschflüssigkeiten vereinigte Filtrat wurde im Vakuum eingeengt. Der hierbei angefallene Verdampfungsrückstand wurde in 35 ml siedendem Ethylacetat gelöst. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur hatte sich ein kristallines Produkt gebildet. Nach portionsweiser Zugabe von 155 ml Hexanen unter Vermischen wurde das Produkt durch Vakuumfiltrieren abgetrennt, mit Hexanen/Ethylacetat (9 : 1) gewaschen und im Vakuum getrocknet, wobei 26,8 g (85%) eines kristallinen Produkts (eines Fp von 114-6ºC) erhalten wurden. Das Produkt erwies sich durch TLC (Silicagel 60) als homogen. Beim Entwickeln mit Hexanen : Ethylacetat (8 : 2) besaß es einen Rf-Wert von 0,50.
- ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;, δ in ppm relativ zu Tetramethylsilan) : 4,51 (s, 2H), 4,98 (s, 2H), 6,97 (d, J = 10,2 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 7,28-7,4 (m, 3H, umfaßt d, J = 10,2 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 3,4 Hz, 1H).
- 2,4-Dichlorphenyl-4-brommethylphenoxyacetat (7,21 g, 18,48 mmol) wurde in eine Lösung von wasserfreiem Natriumiodid (2,96 g, 19,7 mmol) in 100 ml Aceton eingetragen, worauf das Gemisch 30 min bei Raumtemperatur gerührt wurde. Das gebildete unlösliche Natriumbromid wurde durch Vakuumfiltrieren entfernt und dreimal mit 5-ml-Portionen Aceton gewaschen. Die Entfernung des Lösungsmittels im Vakuum aus dem mit der Waschflüssigkeit vereinigten Filtrat lieferte 8,1 g (100%) eines schwach gelben kristallinen Feststoffs (eines Fp von 121-2ºC). Dieser wurde ohne weitere Reinigung zur Synthese benutzt. Das Produkt zeigte beim Entwickeln mit Hexanen : Ethylacetat (1 : 1) bei der Dünnschichtchromatographie (auf Silicagel 60) einen Rf-Wert von 0,59.
- Zu aktivem 4-Iodmethylester (d) (1,0 g, 2,3 mmol) und der geeigneten Nα-Fmoc-Aminosäure (2,5 mmol), die in 4-5 ml Dimethylacetamid : Aceton (1 : 1) gelöst bzw. suspendiert worden waren, wurde unter Rühren bei Raumtemperatur Diisopropylethylamin (0,45 ml, 2,6 mmol) zutropfen gelassen. Im allgemeinen bildet sich innerhalb von 1 h eine Lösung und sind die Reaktionen innerhalb von 2 h vollständig (belegt durch das Verschwinden von d bei der Dünnschichtchromatographie). Das Reaktionsgemisch wurde mit 20 ml Ether : Ethylacetat (1 : 1) versetzt, worauf die organische Phase sukzessive mit 10-ml- Portionen Wasser, 5%iger wäßriger Natriumbicarbonatlösung, 5%iger wäßriger Natriumthiosulfatlösung, Wasser und Salzlake gewaschen und mit wasserfreiem MgSO&sub4; getrocknet wurde. Nach dem Filtrieren zur Entfernung von Trocknungsmittel wurden die Produkte durch Entfernen des Lösungsmittels und Trocknen im Vakuum erhalten. Wenn möglich, wurden die Produkte aus einem geeigneten Lösungsmittel oder Lösungsmittelpaar zur Kristallisation gebracht. Im Falle von Cys(Acm)-, Asn- und Gln-Derivaten wurden die Reaktionen durchgeführt, indem in ähnlicher Weise von dem aktiven 4-Brommethylester c ausgegangen und blankes Dimethylformamid als Lösungsmittel verwendet wurde. Im Falle von Asn- und Gln-Derivaten wurden die Produkte aus der organischen Phase während der üblichen Wäsche mit Wasser gefällt. Diese Produkte wurden abfiltriert, mit Ether und einigen Portionen Wasser gewaschen und im Vakuum über P&sub2;O&sub5; getrocknet.
- Handelsübliches Pepsyn KTM (250 umol Sarcosinmethylester/g)- Harz (25 g) wurde über Nacht bei Raumtemperatur mit 60 ml Ethylendiamin behandelt. Das Ethylendiamin wurde abfiltriert, worauf das Harz sukzessive sechsmal mit Dimethylformamid (DMF), sechsmal mit CH&sub2;Cl&sub2; und dreimal mit Ether gewaschen und dann im Vakuum getrocknet wurde. Zur Bestimmung des entstandenen Aminsubstitutionsgrads wurde ein kleiner Anteil des mit Ethylendiamin derivatisierten Harzes mit einem großen Überschuß Fmoc-Alaninpentafluorphenylester (0,3 M in DMF) in Gegenwart von einem Äquivalent 1-Hydroxybenzotriazol behandelt. Nach 1 h bei Raumtemperatur wären die auf das Harz aufgesetzten Aminogruppen vollständig an Fmoc-Alanin gekuppelt. Dies ergab sich aus dem Unvermögen des Harzes zur Reaktion mit Ninhydrinreagens. Das Harz wurde sukzessive sechsmal jeweils mit DMF, CH&sub2;Cl&sub2; und Ether gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die eingebaute Fmoc-Gruppe wurde nach Abspalten mit Piperidin in CH&sub2;Cl&sub2; spektralphotometrisch quantitativ bestimmt. Eine Korrektur bezüglich der Gewichtszunahme des eingebauten Fmoc-Alanins zeigte, daß das als Ausgangsmaterial verwendete, mit Ethylendiamin derivatisierte Pepsyn KTM eine Substitution von 0,24 mmol Aminogruppen/g aufwies. Dieses Amino-Pepsyn-K-Derivat diente zum Erhalt der in Tabelle 2 aufgeführten Ergebnisse.
- Bei einem typischen Derivatisierungsexperiment des festen Trägers wurden 0,5 bis 1,5 g des mit Ethylendiamin derivatisierten Pepsyn-K-Harzes verwendet. Das geeignete Fmoc-Aminosäurederivat (e) wurde in einer solchen Menge DMF gelöst, die gerade zur vollständigen Quellung und Befeuchtung des Harzes (etwa 2,5 ml/g Harz) ausreichte. Die Zugabe zu dem Harz erfolgte zusammen mit 4-Dimethylaminopyridin (die genauen Reagenzienmengen sind in Tabelle 2 angegeben). Nach schwachem Vermischen zur Entfernung irgendwelcher eingeschlossener Luftblasen wurde das Gemisch bei Raumtemperatur 3 h lang stehen gelassen. Im allgemeinen reicht eine dreistündige Reaktionszeit zu einer vollständigen oder nahezu vollständigen Kupplung sämtlicher harzgebundener Aminogruppen aus. (Dies ergibt sich aus dem Fehlen einer Reaktion der Harzprodukte mit Ninhydrinreagens.) Nach der Kupplungsreaktion wurden die Harze sukzessive in der zum Aufarbeiten des als Ausgangsmaterial verwendeten, mit Ethylendiamin derivatisierten Pepsyn K beschriebenen Weise gewaschen. Nach dem Trocknen im Vakuum auf konstantes Gewicht wurden Proben der Harze spektralphotometrisch auf die Fmoc-Chromophor-Freisetzung bei Behandlung mit Piperidin in CH&sub2;Cl&sub2; analysiert. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengestellt. Tabelle 2 Feste Träger (f), hergestellt durch Kupplung von Aminosäurederivaten (e) an Amino-Pepsyn-KA, 0,24 mmol NH&sub2;/g
- a. DMAP ist eine Abkürzung für 4-Dimethylaminopyridin. Die Abkürzungen für die Seitenkettenschutzgruppe entsprechen denjenigen in Tabelle 1.
- b. Die Kupplungsdauer beträgt 3 h.
- c. Der Substitutionsgrad von 0,19 mmol Fmoc/g wurde erreicht, wenn 2,5 Äquivalente Fmoc-Cys (Trt)-Derivat verwendet und 3,0 Äquivalente Pyridin als Ersatz für DMAP verwendet wurden.
- Mit Fmoc-Aminosäure derivatisierte Pepsyn-KTM-Harze (100 mg) (MilliGen) wurden in 16 · 100 mm-Glasteströhrchen gefüllt. Die Harze wurden mit 10 ml CH&sub2;Cl&sub2; und 10 ml Dimethylformamid gewaschen. Die Waschflüssigkeiten wurden nach sorgfältigem Dekantieren von den abgesetzten Harzen verworfen. Die Fmoc- Schutzgruppe wurde durch Reaktion der Harze mit 5 ml 20% Piperidin in Dimethylformamid (v/v) während 10 min entfernt. Die Harze wurden mit DMF (3 · 10 ml) und CH&sub2;Cl&sub2; (6 · 10 ml) gewaschen. Die Aminosäuren wurden durch 20-minütiges Behandeln der Harze mit 5 ml blanker Trifluoressigsäure abgespalten. Die Trifluoressigsäurelösungen der derart abgespaltenen Aminosäuren wurden mittels eines trockenen Stickstoffstroms eingedampft und im Vakuum über festem KOH weiter getrocknet. Die hierbei angefallenen Rückstände wurden in 0,4 ml 50%igem wäßrigem Acetonitril (v/v) mit 0,4% Triethylamin gelöst. Die Aminosäurelösungen (0,05 ml) wurden in 0,10 ml GITC-Lösung (0,2% GITC (g/v) in Acetonitril) eingetragen. Nach mindestens 30-minütiger Reaktion wurden aliquote Teile (2 ul) der GITC-Derivate einer HPLC-Analyse unterworfen. Die hierbei erhaltenen GITC-Derivate waren in dieser Lösung bis zu etwa 12 h bei Raumtemperatur stabil. D,L-Aminosäurestandards wurden mit GITC-Lösung in der zuvor beschriebenen Weise derivatisiert, indem von einer 5 mg/ml-Lösung von Standard in 50%igem wäßrigem Acetonitril (v/v) mit 0,4% Triethylamin ausgegangen wurde. Injektionsvolumina betrugen 5 ul.
- Die HPLC-Analyse wurde unter Nutzung eines Waters-600-Gradienten-HPLC-Systems mit einem Waters-Lambda-Max-Modell 481- Detektor, der auf 220 nm, 1 AUFS eingestellt worden war, durchgeführt. Als Säule diente ein Waters-Delta-PakTM-C-18- 300-A, 3,9 mm · 15 cm. Binäre Gradienteneluierpuffer waren: (a) 0,1% Trifluoressigsäure in Wasser; und (b) 0,07% Trifluoressigsäure in Acetonitril.
- Es wurde ein linearer Gradient von 20 bis 40% Puffer B bei einer Strömungsgeschwindigkeit von 1 ml/min über 15 min benutzt. Diesem folgte eine weitere min lang 40% Puffer B. Dann durfte sich die Säule wieder ins Gleichgewicht setzen, indem vor Injektion der nächsten Probe mindestens 6 min lang 20% Puffer B durchgepumpt wurde.
- 4-Brommethylphenoxyessigsäure (2,50 g, 10,2 mmol) wurde langsam unter Schäumen mit etwa 70 ml 5%iger wäßriger NaHCO&sub3; versetzt. Die erhaltene trübe Lösung wurde 2 h lang bei Raumtemperatur verrührt. Nach dem Filtrieren wurde die Lösung in einem Eisbad gekühlt und sorgfältig mit 6 M HCl auf einen pH-Wert von 2 angesäuert. Das Produkt wurde mit Ethylacetat (3 · 50 ml) extrahiert. Die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlake gewaschen, über MgSO&sub4; getrocknet, filtriert und mittels eines Rotationsverdampfers vom Lösungsmittel befreit. Nach dem Trocknen im Vakuum wurden 1,53 g (82,5%) eines weißen Rohprodukts erhalten. Nach dem Umkristallisieren aus einem Gemisch aus Ethylacetat (10 ml) und Hexanen (10 ml) wurden 1,23 g (66%) gereinigtes weißes kristallines Produkt erhalten. Fp : 112-115ºC (114-116ºC nach den Berichten von R. C. Sheppard und B. J. Williams in "Int. J. Peptide Protein Res.", 20 : 451-454 (1982)).
- 200 mg Pepsyn-KATM-Harz (MilliGen) (0,2 mmol Hydroxymethylgruppen/g) wurden mit 1 ml 4 N HCl in Dioxan versetzt. Nach zweistündigem Stehenlassen bei Raumtemperatur wurde das Harz gründlich durch (jeweiliges) Dekantieren des zugesetzten Dimethylformamids (95 · 4 ml) gewaschen. Zu der erhaltenen Aufschlämmung des mit Dimethylformamid befeuchteten Harzes wurden Fmoc-Alanin (100 mg, 0,32 mmol), Diisopropylethylamin (0,061 ml, 0,35 mmol) und wasserfreies Natriumiodid (40 mg, 0,27 mmol) zugegeben, worauf das Gemisch schwach durch periodisches Schütteln von Hand gemischt wurde. Das Gemisch durfte 20 h bei Raumtemperatur reagieren, worauf das Harz dreimal mit 4 ml Dimethylformamid, dreimal mit 4 ml Wasser, dreimal mit 4 ml Methanol und dreimal mit 4 ml Ether gewaschen wurde. Das Harz wurde im Vakuum getrocknet und auf die Fmoc-Substitution hin analysiert. Es zeigte sich, daß das Harzprodukt 0,186 mmol Fmoc-Alanin/g (98,4% der Theorie) enthielt. Die Behandlung eines Teils des Produkts mit blanker Trifluoressigsäure während 1,5 h bei Raumtemperatur und anschließende Analyse der Fmoc-Substitution zeigten, daß das in der geschilderten Weise eingebaut Fmoc-Alanin quantitativ abgespalten war.
- Zum Beleg der Brauchbarkeit der nach den erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Harze (Tabelle 2) zur Peptidsynthese wurde ausgehend von dem in der zuvor geschilderten Weise hergestellten Fmoc-Val-Linker-Pepsyn-K-Harz ein neun Reste aufweisendes Peptid (Ala-Asn-Lys-Gly-Phe-Leu-Glu-Glu-Val) synthetisiert. Als Kontrolle zum Vergleich wurde dasselbe Peptid ausgehend von einem nach bekannten Verfahren (E. Atherton et al. in "J. C. S. Chem. Commun.", 336-337 (1981)) hergestelltes handelsübliches Fmoc-Val-Linker-Pepsyn-K-Harz (Cambridge Research Biochemicals Ltd., Cambridge, England) synthetisiert. Beide Synthesen wurden auf der im kontinuierlichen Strom arbeitenden, automatisierten Peptidsynthesevorrichtung Modell 9050 MilliGen/Biosearch unter Verwendung handelsüblicher (MilliGen/Biosearch, Burlington, MA) Fmoc- Aminosäure-pentafluorphenylester als voraktivierte Monomere und nach Standard (Standardwert)-Protokollen gemäß Milli- Gen/Biosearch-ExpressTM-Peptidsynthesesoftware (Version 1.2) durchgeführt. Beide Synthesen wurden gleichzeitig auf derselben Vorrichtung unter Verwendung zwei getrennter Säulenreaktoren durchgeführt, und zwar dergestalt, daß dieselben Reagenzien oder Lösungsmittel gleichzeitig bei beiden Synthesen verwendet wurden. Beide Peptide wurden entschützt und isoliert. Beide Synthesen lieferten das Zielpeptid in mehr als 80%iger Rohausbeute bei vergleichbar hohen Reinheiten (wie sich aus den Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC)-Chromatogrammen (Fig. 3) ergibt). Die Fig. 3a zeigt ein Chromatogramm für das neun Reste umfassende Peptid, hergestellt unter Verwendung der erfindungsgemäßen, an einen festen Träger gebundenen Aminosäure. Die Fig. 3b zeigt ein Chromatogramm für ein ähnliches neun Reste umfassendes Peptid, das unter Verwendung eines handelsüblichen Harzes mit einer an einen festen Träger gebundenen Aminosäure hergestellt wurde. Die Trennungen erfolgten unter Verwendung einer Delta-PakTM-C-18-Säule (100 Å Poren, 5 um, 0,30 · 15 cm) und einer Strömungsgeschwindigkeit von 1,0 ml/min. Die Produkte wurden durch Extinktion bei 220 nm nachgewiesen. Gradienteneluierung: (Eluiermittel A, 0,1% (v/v) Trifluoressigsäure in Wasser; Eluiermittel B, 0,1% (v/v) Trifluoressigsäure in 95% Acetonitril mit 5% Wasser) 6% bis 62% B linear in 30 min. Die Identität beider Produkte wurde durch Aminosäureanalyse und Massenspektrumdaten (M+ = 1005± 2, berechnet : 1006) belegt.
Claims (31)
1. Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
X eine von Cl verschiedene, abspaltbare Gruppe bzw.
flüchtige Gruppe;
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes
oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind;
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann;
W ein Schwefel- oder Sauerstoffatom, und
R&sub3; eine von einem Alkohol, Phenol, Thiol, Thiophenol
oder heterocyclischen Rest herrührende Gruppe.
2. Verbindung nach Anspruch 1, wobei R&sub3; aus der Gruppe
Dichlorphenyl, Pentafluorphenyl, Pentachlorphenyl, 2-
Nitrophenyl, 2,4-Dinitrophenyl, 4-Nitrophenyl, 2-Chlor-
5 phenyl, 2,4,5-Trichlorphenyl, 2-Bromphenyl,
4-Bromphenyl, Trichlorethyl, Phenacyl und einem Heterocyclus mit
3 bis 12 Kohlenstoffatomen mit einem oder mehreren
Stickstoff-, Schwefel- oder Sauerstoffatom(en) oder
Kombinationen derselben ausgewählt ist;
X ein Halogenatom darstellt und
Y für -(O)m-(CH&sub2;)n- mit m = 0 oder 1 und n einer ganzen
Zahl über 0 bis 12 steht.
3. Verbindung nach Anspruch 1 der Formel:
worin bedeuten:
X ein von Cl verschiedenes Halogenatom;
m = 0 oder 1 und
n eine ganze Zahl von über 0 bis 12.
4. Enantiomerenreine Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
Z
eine von Dithiosuccinyl oder
(Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit
geschützten oder ungeschützten Seitenketten;
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes
oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind;
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann;
W ein Schwefel- oder Sauerstoffatom, und
R&sub3; eine von einem Alkohol, Phenol, Thiol, Thiophenol
oder heterocyclischen Rest herrührende Gruppe.
5. Verbindung nach Anspruch 4, wobei R&sub3; aus der Gruppe
Dichlorphenyl, Pentafluorphenyl, Pentachlorphenyl, 2-
Nitrophenyl, 2,4-Dinitrophenyl, 4-Nitrophenyl,
2-Chlorphenyl, 2-Bromphenyl, 4-Bromphenyl, Trichlorethyl,
Phenacyl und einem Heterocyclus mit 3 bis 12
Kohlenstoffatomen mit einem oder mehreren Stickstoff-,
Schwefel- oder Sauerstoffatom(en) oder Kombinationen
derselben ausgewählt ist, und
Y -(O)m-(CH&sub2;)n- mit m = 0 oder 1 und n einer ganzen
Zahl über 0 bis 12 bedeutet.
6. Verbindung nach Anspruch 4, wobei die
Nα-Aminosäureschutzgruppe und Aminosäureseitenkettenschutzgruppe
unabhängig voneinander aus der Gruppe
9-Fluorenylmethyloxycarbonyl, tert.-Butyloxycarbonyl, tert.-Butyl,
Trityl, 4-Methoxy-2,3,6-trimethylbenzolsulfonyl, 4,4'-
Dimethoxybenzhydryl, Thio-tert.-butylacetamidomethyl,
Carbobenzyloxycarbonyl, 2-Nitropyridinsulfenyl,
Trifluoracetyl, 2(p-Biphenylisopropyloxycarbonyl),
4-Methoxybenzyloxycarbonyl, Tosyl, 9-Phenylfluorenyl,
2-Nitrophenylsulfenyl, Benzyl,
p-Nitrocarbobenzyloxycarbonyl, tert.-Amyloxycarbonyl, 2,2-[Bis(4-nitrophenyl)]-
ethyloxycarbonyl, Adamantyloxycarbonyl,
2,2,2-Trichlorethyloxycarbonyl, Dinitrophenyl, tert.-Butyloxymethyl,
Benzyloxymethyl, Trichlorethyl, Nitrobenzyl, Phenacyl,
2,2,5,7,8-Pentamethylchroman-6-sulfonyl, Benzydrylamin,
Methylbenzydrylamin, Xanthyl und 2,4,6-Trimethoxybenzyl
ausgewählt sind.
7. Verbindung nach Anspruch 4 der Formel
worin bedeuten:
Z eine von Dithiosuccinyl oder
(Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit
geschützten oder ungeschützten Seitenketten;
m = 0 oder 1 und
n eine ganze Zahl von über 0 bis 12.
8. Verbindung nach Anspruch 7, wobei die
Nα-Aminosäureschutzgruppe und Aminosäureseitenkettenschutzgruppe
unabhängig voneinander aus der Gruppe
9-Fluorenylmethyloxycarbonyl, tert.-Butyloxycarbonyl, tert.-Butyl,
Trityl, Thio-tert.-butyl,
4-Methoxy-2,3,6-trimethylbenzolsulfonyl, 4,4'-Dimethoxybenzhydryl,
Acetamidomethyl, Carbobenzyloxycarbonyl, 2-Nitropyridinsulfenyl,
Trifluoracetyl, 2(p-Biphenylisopropyloxycarbonyl), 4-
Methoxybenzyloxycarbonyl, Tosyl, 9-Phenylfluorenyl, 2-
Nitrophenylsulfenyl, Benzyl,
p-Nitrocarbobenzyloxycarbonyl, tert.-Amyloxycarbonyl, 2,2-[Bis(4-nitrophenyl)]-
ethyloxycarbonyl, Adamantyloxycarbonyl,
2,2,2-Trichlorethyloxycarbonyl, Dinitrophenyl, tert.-Butyloxymethyl,
Benzyloxymethyl, Trichlorethyl, Nitrobenzyl, Phenacyl,
2,2,5,7,8-Pentamethylchroman-6-sulfonyl, Benzydrylamin,
Methylbenzydrylamin, Xanthyl und 2,4,6-Trimethoxybenzyl
ausgewählt sind.
9. Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
X eine von Cl verschiedene abspaltbare bzw. flüchtige
Gruppe;
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind, und
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Aryl
oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung gebunden
sein kann.
10. Verbindung nach Anspruch 9, worin bedeuten:
X ein von Cl verschiedenes Halogen, und
Y -(O)m-(CH&sub2;)n- mit m = 0 oder 1 und n einer ganzen
Zahl über 0 bis 12.
11. Verbindung nach Anspruch 9 der Formel:
worin bedeuten:
X ein von Cl verschiedenes Halogen;
m = 0 oder 1 und
n eine ganze Zahl von über 0 bis 12.
12. Verbindung nach Anspruch 11, nämlich
4-Brommethylphenoxyessigsäure oder 4-Iodmethylphenoxyessigsäure.
13. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
Z eine von Dithiosuccinyl oder
(Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit
geschützten oder ungeschützten Seitenketten;
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes
oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind;
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann;
D ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer,
ausgewählt aus der Gruppe natürliche oder unnatürliche
Aminosäure- und Kohlenwasserstoffketten mit einer
linearen oder verzweigtkettigen, gesättigten oder
ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder Aralkylgruppe, gebunden sein
kann, wobei der Spacer an das Carbonyl über eine
Sauerstoff- oder -NH-Bindung gebunden ist, und
SS einen festen Träger, der an die Carbonylgruppe über
D gebunden und aus der Gruppe mit Divinylbenzol
vernetztes Polystyrol, vernetztes Polydimethylacrylamid,
Glas, porengesteuertes Glas, Polyvinylidendifluorid,
Polypropylen, Polyethylen, Keramiken, Siliciumdioxide
und Aluminiumoxide ausgewählt ist,
in folgenden Stufen:
a. Bereitstellen einer Verbindung der Formel:
worin x für eine von Cl verschiedene abspaltbare bzw.
flüchtige Gruppe steht und A, R&sub1;, R&sub2; und Y die zuvor
angegebene Bedeutung besitzen;
b. Umsetzen der Verbindung aus Stufe (a) mit einem
Alkohol, Phenol, Thiol oder Thiophenol in Gegenwart
eines Kondensationsmittels zur Bildung eines
Kondensationsprodukts der Formel:
worin X, R&sub1;, R&sub2; und Y die zuvor angegebene Bedeutung
besitzen,
W für ein Schwefel- oder Sauerstoffatom steht, und
R&sub3; eine von einem Alkohol, Phenol, Thiol oder
Thiophenol oder analogen heterocyclischen Alkohol oder Thiol
herrührende Gruppe bedeutet;
c. Umsetzen des Produkts aus Stufe (b) mit einer
geschützten Aminosäure unter Bedingungen, die für eine
Verdrängung von X und zur Bindung der Aminosäure an die
Verbindung über eine Esterbindung ausreichen, und
d. Umsetzen des Produkts aus Stufe (c) mit einem
funktionalisierten festen Träger unter Bedingungen, die für
eine Entfernung von WR&sub3; und Kupplung mit dem
funktionalisierten festen Träger ausreichend sind.
14. Verfahren nach Anspruch 13, wobei der Alkohol, das
Phenol, das Thiol oder das Thiophenol aus der Gruppe
substituierte Phenole, 2,4-Dichlorphenol, Trichlorethanol,
Phenacylalkohol, N-Hydroxysuccinimid,
hydroxylsubstituierte Heterocyclen und substituierte Thiole ausgewählt
ist.
15. Verfahren nach Anspruch 13, wobei die erhaltene
Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
Z eine von Dithiosuccinyl oder
(Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit
geschützter oder ungeschützter Seitenkette;
D ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer,
ausgewählt aus der Gruppe eine oder mehrere natürliche
oder unnatürliche Aminosäure- und
Kohlenwasserstoffkette(n) mit einer linearen oder verzweigtkettigen,
gesättigten oder ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder
Aralkylgruppe, gebunden sein kann, wobei der Spacer an
das Carbonyl über eine Sauerstoff- oder -NH-Bindung
gebunden ist, und
SS einen festen Schichtträger, der aus der gruppe mit
Divinylbenzol vernetztes Polystyrol, vernetztes
Polydimethylacrylamid, Glas, porengesteuertes Glas,
Polyvinylidendifluorid, Polypropylen, Polyethylen,
Keramiken, Siliciumdioxide und Aluminiumoxide ausgewählt und
über D an die Carbonylgruppe gebunden ist;
m = 0 oder 1, und
n eine ganze Zahl von über 0 bis 12
entspricht.
16. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
Z eine von Dithiosuccinyl oder
(Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit
geschützten oder ungeschützten Seitenketten;
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes
oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind;
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann;
D ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer,
ausgewählt aus der Gruppe eine oder mehrere natürliche
oder unnatürliche Aminosäure- und
Kohlenwasserstoffkette(n) mit einer linearen oder verzweigtkettigen,
gesättigten oder ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder
Aralkylgruppe, gebunden sein kann, wobei der Spacer an das
Carbonyl über eine Sauerstoff- oder -NH-Bindung
gebunden ist, und
SS einen festen Träger, der an die Carbonylgruppe über
D gebunden und aus der Gruppe mit Divinylbenzol
vernetztes Polystyrol, vernetztes Polydimethylacrylamid,
Glas, porengesteuertes Glas, Polyvinylidendifluorid,
Polypropylen, Polyethylen, Keramiken, Siliciumdioxide
und Aluminiumoxide ausgewählt ist,
in folgenden Stufen:
a. Bereitstellen eines aromatischen
Carbonsäurevorläufers der Formel:
worin X für eine von Cl verschiedene abspaltbare bzw.
flüchtige Gruppe steht und R&sub1;, R&sub2;, A und Y die zuvor
angegebene Bedeutung besitzen;
b. Umsetzen der Verbindung aus Stufe (a) mit einer
Hydroxidquelle unter zum Ersatz von X durch eine
Hydroxylgruppe ausreichenden Bedingungen;
c. Kondensieren eines funktionalisierten festen Trägers
mit dem Produkt aus Stufe (b);
d. Umsetzen des Produkts aus Stufe (c) mit einem
Reagens unter zum Ersatz der Hydroxylgruppe durch eine
abspaltbare bzw. flüchtige Gruppe ausreichenden
Bedingungen und.
e. Umsetzen des Produkts aus Stufe (d) mit einer von
einem geschützten Aminosäurecäsiumsalz verschiedenen
geschützten Aminosäure unter Bedingungen, die zur
Verdrängung der abspaltbaren bzw. flüchtigen Gruppe und
Kupplung der Aminosäure an die Verbindung über eine
Esterbindung in racemisierungsfreier Art und Weise
ausreichen.
17. Verfahren nach Anspruch 16, wobei der erhaltenen
Verbindung die Formel:
worin bedeuten:
Z eine von Dithiosuccinyl oder
(Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit
geschützter oder ungeschützter Seitenkette;
D ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer,
ausgewählt aus der Gruppe eine oder mehrere natürliche
oder unnatürliche Aminosäure- und
Kohlenwasserstoff
kette(n)
mit einer linearen oder verzweigtkettigen,
gesättigten oder ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder
Aralkylgruppe, gebunden sein kann, wobei der Spacer an
das Carbonyl über eine Sauerstoff- oder -NH-Bindung
gebunden ist, und
SS einen festen Träger, der über D an die
Carbonylgruppe gebunden ist;
m = 0 oder 1, und
n eine ganze Zahl von über 0 bis 12 besitzt,
zukommt.
18. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
Z eine von Dithiosuccinyl oder
(Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit
geschützten oder ungeschützten Seitenketten;
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes
oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Allcyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind;
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann;
D ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer,
ausgewählt aus der Gruppe eine oder mehrere natürliche
oder unnatürliche Aminosäure- und
Kohlenwasserstoffkette(n) mit einer linearen oder verzweigtkettigen,
gesättigten oder ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder
Aralkylgruppe, gebunden sein kann, wobei der Spacer an
das Carbonyl über eine Sauerstoff- oder -NH-Bindung
gebunden ist, und
SS einen festen Träger, der an die Carbonylgruppe über
D gebunden und aus der Gruppe mit Divinylbenzol
vernetztes Polystyrol, vernetztes Polydimethylacrylamid,
Glas, porengesteuertes Glas, Polyvinylidendifluorid,
Polypropylen, Polyethylen, Keramiken, Siliciumdioxide
und Aluminiumoxide ausgewählt ist,
in folgenden Stufen:
a. Bereitstellen einer an einen festen Träger
gebundenen Verbindung der Formel:
worin X für eine von Cl verschiedene abspaltbare bzw.
flüchtige Gruppe steht und R&sub1;, R&sub2;, A, Y, D und SS die
zuvor angegebene Bedeutung besitzen, und
b. Umsetzen der Verbindung aus Stufe (a) mit einer von
einem geschützten Aminosäurecäsiumsalz verschiedenen
geschützten Aminosäure unter Bedingungen, die zur
Verdrängung der abspaltbaren bzw. flüchtigen Gruppe und
Kupplung der Aminosäure an die Verbindung über eine
Esterbindung in racemisierungsfreier Art und Weise
ausreichen.
19. Verfahren zur Synthese eines Peptids in folgenden
Stufen:
a. Bereitstellen einer an einen festen Träger
gebundenen Aminosäure der Formel:
worin bedeuten:
Z eine von Dithiosuccinyl oder (Isopropyldithio>
carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit
geschützten oder ungeschützten Seitenketten;
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes
oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind;
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann;
D ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer,
ausgewählt aus der Gruppe eine oder mehrere natürliche
oder unnatürliche Aminosäure- und
Kohlenwasserstoffkette n) mit einer linearen oder verzweigtkettigen,
gesättigten oder ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder
Aralkylgruppe, gebunden sein kann, wobei der Spacer an
das Carbonyl über eine Sauerstoff- oder -NH-Bindung
gebunden ist, und
SS einen festen Träger, der an die Carbonylgruppe über
D gebunden und aus der Gruppe mit Divinylbenzol
vernetztes Polystyrol, vernetztes Polydimethylacrylamid,
Glas, porengesteuertes Glas, Polyvinylidendifluorid,
Polypropylen, Polyethylen, Keramiken, Siliciumdioxide
und Aluminiumoxide, und
b. sequentielles Kuppeln geschützter und von
geschützten Aminosäurecäsiumsalzen verschiedenen Aminosäuren an
B zur Bildung eines an einen festen Träger gebundenen
Peptids.
20. Verfahren nach Anspruch 19, bei welchem zusätzlich die
Schutzgruppen aus dem an einen festen Träger gebundenen
Peptid entfernt werden.
21. Verfahren nach Anspruch 19, bei welchem das
synthetisierte Peptid von dem festen Träger abgespalten wird.
22. Verfahren nach Anspruch 19, wobei der an einen festen
Träger gebundenen Aminosäure die Formel:
worin bedeuten:
Z eine von Dithiosuccinyl oder
(Isopropyldithio)carbonyl verschiedene Nα-Aminosäureschutzgruppe;
B eine natürlich vorkommende D- oder L-Aminosäure mit
geschützter oder ungeschützter Seitenkette;
m = 0 oder 1;
n eine ganze Zahl von über 0 bis 12;
D ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer,
ausgewählt aus der Gruppe natürliche oder unnatürliche
Aminosäure- und Kohlenwasserstoffketten mit einer
linearen oder verzweigtkettigen, gesättigten oder
ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder Aralkylgruppe, gebunden sein
kann, wobei der Spacer an das Carbonyl über eine
Sauerstoff- oder -NH-Bindung gebunden ist, und
SS einen an die Carbonylgruppe über D gebundenen festen
Träger, ausgewählt aus der Gruppe mit Divinylbenzol
vernetztes Polystyrol, vernetztes
Polydimethylacrylamid, Glas, porengesteuertes Glas,
Polyvinylidendifluorid, Polypropylen, Polyethylen, Keramiken,
Siliciumdioxide und Aluminiumoxide
zukommt.
23. Verfahren zur Herstellung der Verbindung nach Anspruch
19, in folgenden Stufen:
a. Bereitstellen einer Verbindung mit einem
Benzylwasserstoff der Formel:
worin bedeuten:
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes
oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe, Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind, und
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann, und
b. Umsetzen der Verbindung aus Stufe (a) mit einem
Reagens unter zum Ersatz des Benzylwasserstoffs durch die
abspaltbare bzw. flüchtige Gruppe geeigneten
Bedingungen.
24. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach
Anspruch 1 in folgenden Stufen:
a. Bereitstellen einer Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
X eine von Cl verschiedene abspaltbare bzw. flüchtige
Gruppe;
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind, und
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann, und
b. Umsetzen der Verbindung aus Stufe (a) mit einem
gegebenenfalls heterocyclischen Alkohol, Phenol, Thiol
oder Thiophenol in Gegenwart eines Kondensationsmittels
unter Bedingungen, die zur Herstellung der genannten
Verbindung nach Anspruch 1 mit WR&sub3; gleich einer zu dem
Alkohol, Phenol, Thiol oder Thiophenol analogen Gruppe
geeignet sind.
25. Verfahren nach Anspruch 24, wobei der Alkohol, das
Phenol, das Thiol oder das Thiophenol aus der Gruppe
substituierte Phenole, 2,4-Dichlorphenol, Trichlorethanol,
Phenacylalkohol, N-Hydroxysuccinimid,
hydroxylsubstitu
ierte Heterocyclen und substituierte Thiole ausgewählt
ist.
26. Verfahren nach Anspruch 25, bei welchem zusätzlich in
einer Stufe (c) X durch eine geschützte Aminosäure
unter Bedingungen, die zur Bindung der Aminosäure an
die betreffende Verbindung über eine Esterbindung
geeignet sind, ersetzt wird.
27. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
X eine von Cl verschiedene abspaltbare bzw. flüchtige
Gruppe;
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes
oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind;
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann;
D ein Sauerstoffatom oder -NH-, das an einen Spacer,
ausgewählt aus der Gruppe eine oder mehrere natürliche
oder unnatürliche Aminosäure- und
Kohlenwasserstoffkette(n) mit einer linearen oder verzweigtkettigen,
gesättigten oder ungesättigten Alkyl-, Aryl- oder
Aralkylgruppe, gebunden sein kann, wobei der Spacer an
das Carbonyl über eine Sauerstoff- oder -NH-Bindung
gebunden ist, und
SS einen festen Träger, der an die Carbonylgruppe über
D gebunden und aus der Gruppe mit Divinylbenzol
vernetztes Polystyrol, vernetztes Polydimethylacrylamid,
Glas, porengesteuertes Glas, Polyvinylidendifluorid,
Polypropylen, Polyethylen, Keramiken, Siliciumdioxide
und Aluminiumoxide, in folgenden Stufen:
a. Bereitstellen einer Verbindung der Formel:
worin R&sub1;, R&sub2;, A, Y, D und SS die zuvor angegebene
Bedeutung besitzen, und
b. Umsetzen der Verbindung aus Stufe (a) mit einem
Reagens unter Bedingungen, die zur Verdrängung der
Hydroxylgruppe durch eine abspaltbare bzw. flüchtige Gruppe
X ausreichend sind.
28. Verfahren nach Anspruch 27, wobei der erhaltenen
Verbindung die Formel:
worin bedeuten:
X ein von Cl verschiedenes Halogen;
m = 0 oder 1, und
n eine ganze Zahl über 0 bis 12
zukommt.
29. Verfahren nach Anspruch 27, bei welchem zusätzlich in
einer Stufe (c) die Verbindung aus Stufe (b) mit einer
geschützten Aminosäure unter Bedingungen, die zur
Verdrängung der abspaltbaren bzw. flüchtigen Gruppe und
Kupplung der Aminosäure an die betreffende Verbindung
über eine Esterbindung in racemisierungsfreier Art und
Weise ausreichen, umgesetzt wird.
30. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel:
worin bedeuten:
R&sub1; und R&sub2;, die gleich oder verschieden sind,
Wasserstoff, lineares oder verzweigtkettiges, gesättigtes
oder ungesättigtes Alkyl, Aryl oder Benzyl;
A einen gegebenenfalls substituierten Phenylring, wobei
die Substituenten aus der Gruppe Aryl, Alkyl, Halogen,
Nitro, Alkoxy und Kombinationen derselben ausgewählt
sind, und
Y eine Kohlenwasserstoffkette mit linearem oder
verzweigtkettigem, gesättigtem oder ungesättigtem Alkyl,
Aryl oder Aralkyl, das an A über eine Etherbindung
gebunden sein kann, in folgenden Stufen:
a. Bereitstellen einer Verbindung der Formel:
worin X für eine von Cl verschiedene abspaltbare bzw.
flüchtige Gruppe steht und R&sub1;, R&sub2;, A und Y die zuvor
angegebene Bedeutung besitzen, und
b. Umsetzen der Verbindung aus Stufe (a) mit einer
Hydroxidquelle unter Bedingungen, die zur Verdrängung
von X durch eine Hydroxylgruppe ausreichen.
31. Verfahren nach Anspruch 30, wobei es sich bei der
Verbindung von Stufe (a) um 4-Brommethylphenoxyessigsäure
handelt.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29043388A | 1988-12-27 | 1988-12-27 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE68928932D1 DE68928932D1 (de) | 1999-04-01 |
DE68928932T2 true DE68928932T2 (de) | 1999-07-29 |
Family
ID=23115974
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE68928932T Expired - Fee Related DE68928932T2 (de) | 1988-12-27 | 1989-12-22 | Racemisierungsfreies Verfahren zum Aufhängen von Aminosäuren auf einer Festphase |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0376218B1 (de) |
JP (1) | JP2670873B2 (de) |
DE (1) | DE68928932T2 (de) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0516070B1 (de) * | 1991-05-31 | 1996-11-06 | Calbiochem-Novabiochem Ag | Geschützte Derivate des Tryptophans, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
JP5972857B2 (ja) | 2013-12-25 | 2016-08-17 | 三菱重工業株式会社 | 排気ダクト及びボイラ |
CN115092938B (zh) * | 2022-06-21 | 2024-02-06 | 苏州拉索生物芯片科技有限公司 | 一种氨基改性二氧化硅微球的制备方法及应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2447385A1 (de) * | 1974-10-04 | 1976-04-15 | Dynamit Nobel Ag | Chlormethyl-benzoesaeureester von phenolen und thiophenolen sowie verfahren zu ihrer herstellung |
DE3635670A1 (de) * | 1986-10-21 | 1988-04-28 | Hoechst Ag | Synthese von peptid-aminoalkylamiden und peptidhydraziden mittels festphasenmethode |
-
1989
- 1989-12-22 EP EP89123841A patent/EP0376218B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-12-22 DE DE68928932T patent/DE68928932T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-12-27 JP JP1336795A patent/JP2670873B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0314549A (ja) | 1991-01-23 |
DE68928932D1 (de) | 1999-04-01 |
EP0376218B1 (de) | 1999-02-24 |
JP2670873B2 (ja) | 1997-10-29 |
EP0376218A2 (de) | 1990-07-04 |
EP0376218A3 (de) | 1991-11-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0285562B1 (de) | Kunstharz | |
DE68916722T2 (de) | Urethan geschützte aminosäuren-n-carboxyanhydride. | |
DE3784799T2 (de) | Malonsaeurederivate und ihre synthesemethoden. | |
DE69222091T2 (de) | Peptid-Synthese an fester Phase | |
DE3177306T2 (de) | Verfahren und Verbindungen zur Herstellung von H-ARG-X-Z-Y-TYR-R. | |
JP2858766B2 (ja) | 酸不安定なアンカー基 | |
DE68928932T2 (de) | Racemisierungsfreies Verfahren zum Aufhängen von Aminosäuren auf einer Festphase | |
JP2549704B2 (ja) | ペプチド合成用担体 | |
EP0460446B1 (de) | Ein neues Kupplungsreagenz für die Peptidsynthese | |
US5196566A (en) | Hypersensitive acid-labile handle for solid-phase peptide synthesis | |
DE69604759T2 (de) | N alpha-2-(4-nitrophenylsulfonyl)ethoxycarbonyl-aminosäuren | |
DE69016732T2 (de) | Verfahren zur Lösung von Peptiden und Verfahren zur Herstellung von Peptiden. | |
JPH06107610A (ja) | ペプチド合成におけるアリル側鎖保護 | |
US5994588A (en) | Peptide purification method using novel linker and solid-phase ligand | |
US4290943A (en) | Method of preparing polypeptides | |
KR100203548B1 (ko) | 고체상 합성에 의한 펩티드의 제조방법 | |
JPH0547556B2 (de) | ||
EP0264802B1 (de) | Synthese von Peptid-aminoalkylamiden und Peptid-hydraziden mittels Festphasenmethode | |
JP2725780B2 (ja) | ペプチドアミドの合成 | |
US4359416A (en) | Process for preparing L-carnosine | |
JPH0643344B2 (ja) | カルボン酸の活性エステルの調製方法 | |
EP0331073B1 (de) | Benzhydrylamin-Derivate | |
EP0552368A1 (de) | Verfahren zur reinigung synthetischer peptide sowie in diesem verfahren verwendete kuppler und festphasenträger gebundene kuppler | |
EP0295540B1 (de) | Allylische Seitenketten enthaltendes Festphasensystem, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung in Festphasenreaktionen | |
US5187270A (en) | Racemization free attachment of amino acids to a solid phase |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |