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BEZUG AUF EINE VERWANDTE ANMELDUNG
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Diese
Anmeldung beansprucht den Vorteil der vorläufigen
US Anmeldung Nr. 60/195,538 , die am
7. April 2000 eingereicht wurde.
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GEBIET DER ERFINDUNG
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Die
vorliegende Erfindung betrifft eine Zusammensetzung für die Behandlung
von Neoplasmen, die maligne Neoplasmen einschließen, aber nicht darauf beschränkt sind.
Insbesondere ist die vorliegende Erfindung eine Verwendung von Neuraminidase
in der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung eines Menschen
mit einem Neoplasma, wobei das Medikament so verabreicht wird, dass eine
Dosierung der Neuraminidase zwischen ungefähr 1 × 10–8 mg/Tag
und ungefähr
8 × 10–2 mg/Tag liegt.
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HINTERGRUND DER ERFINDUNG
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Krebs
ist eine Erkrankung, die sowohl auf den Menschen als auch Tiere
eine verheerende Auswirkung hat. Die Bezeichnung "Krebs" bedeutet Tumore
oder Neoplasmen, die maligne Neoplasmen einschließen, die
durch ein unkontrolliertes Wachstum charakterisiert sind. Anders
als normale Zellen sind Krebszellen in der Struktur atypisch und
weisen keine spezialisierten Funktionen auf. Sie konkurrieren mit
normalen Zellen um Nährstoffe,
wobei letztlich normales Gewebe abgetötet wird. Krebsartiges oder
malignes Gewebe kann lokalisiert bleiben, nur in benachbartes Gewebe
eindringen oder kann sich auf andere Gewebe oder Organe über das
Lymphsystem oder Blut ausdehnen (d.h. Metastasen bilden); nahezu
alle Gewebe und Organe sind anfällig.
Es ist eine Erkrankung, die höchst
unvorher sehbar ist und eine sehr hohe Sterberate aufweist. Die derzeitigen
Behandlungen für
Krebs schließen
Chemotherapie, Chirurgie und Strahlenbehandlungen ein. Diese radikalen
Behandlungsverfahren sind für
den Patient höchst
schädlich.
Zum Beispiel ist das typische chemotherapeutische Mittel zytotoxisch
und weist einen sehr engen therapeutischen Bereich auf. Deshalb muss
das chemotherapeutische Mittel vorsichtig in einer Dosis verabreicht
werden, die Krebszellen, aber keine normalen Zellen abtöten wird.
Diese chemotherapeutischen Mittel lassen den Patienten häufig krank
und geschwächt
zurück
und sind im Behandeln des Krebses nur minimal wirksam.
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Was
benötigt
wird, ist eine Zusammensetzung und ein Verfahren zum Behandeln von
Krebs, die den Patienten nicht schädigen, aber gleichzeitig im
Abtöten
der Krebszellen wirksam sind. Idealerweise können die Zusammensetzung und
das Verfahren zusammen mit anderen Mitteln verwendet werden.
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ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
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Die
vorliegende Erfindung stellt eine Verwendung von Neuraminidase in
der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung eines Menschen mit
einem Neoplasma bereit, wobei das Medikament so verabreicht wird,
dass eine Dosierung der Neuraminidase zwischen ungefähr 1 × 10–8 mg/Tag
und ungefähr
8 × 10–2 mg/Tag
liegt. Das Neoplasma kann eine breite Vielfalt von Neoplasmen umfassen,
die solide Tumore, blutbezogene Tumore, wie Leukämien, Tumormetastase, gutartige
Tumore, zum Beispiel Hämangiome,
akustische Neurome, Neurofibrome, Trachome und pyogene Granulome,
einschließt, aber
nicht darauf beschränkt
ist. Das Medikament wird dem Menschen oder Tier mit Krebs mit einer wirksamen
Menge an Neuraminidase verabreicht. Die wirksame Menge der Neuraminidase
ist äußerst gering
und verursacht keine Nebenwirkungen, wie eine Immunantwort auf das
Neuraminidase Protein.
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Das
Medikament kann systemisch über
eine Vielfalt von Wegen verabreicht werden, die intramuskulär, intradermal,
intranasal, intravenös,
sublingual und subku tan einschließt, aber nicht darauf beschränkt ist.
Das Medikament kann auch lokal an die Stelle des Tumors verabreicht
werden. Der bevorzugte Weg der Verabreichung ist mehrere sublinguale
Verabreichungen pro Tag.
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Das
Medikament kann für
ein Behandeln von Neoplasmen verwendet werden, die Metastasen bildenden
Krebs, Prostatakrebs, Brustkrebs, Kolonkrebs, Eierstockkrebs, Leukämie, Hämangiom,
Hirntumore, Pankreastumore und Lebertumore einschließen.
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DETAILLIERTE BESCHREIBUNG
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Wie
hier verwendet bedeutet der Begriff "Neuraminidase" irgendein Protein, das Neuraminidase
Aktivität
aufweist oder eine Aminosäuresequenz
aufweist, die im Wesentlichen einem Protein ähnlich ist, das Neuraminidase
Aktivität
aufweist. Der Begriff "Neuraminidase" schließt auch
Fragmente der Neuraminidase ein, die im Behandeln von Neoplasmen
wirksam sind. Die Neuraminidase, die verwendet werden kann, um die
vorliegende Erfindung durchzuführen,
kann auch ein inaktiviertes Enzym sein, wobei die Neuraminidase
eine partielle Aktivität oder
keine Aktivität
aufweist, wenn sie mit der Aktivität des nativen Enzyms verglichen
wird. Es wird angenommen, dass ein Erwärmen der Neuraminidase in kochendem
Wasser die Antitumor Aktivität
zerstören
wird.
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Die
vorliegende Erfindung stellt die Verwendung von Neuraminidase in
der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung eines Menschen mit
einem Neoplasma bereit, wobei das Medikament so verabreicht wird,
dass eine Dosierung der Neuraminidase zwischen ungefähr 1 × 10–8 mg/Tag
und ungefähr
8 × 10–2 mg/Tag
liegt. Das Neoplasma kann sein, ist aber nicht beschränkt auf
solide Tumore, blutbezogene Tumore, wie Leukämien, Tumormetastase, gutartige
Tumore, zum Beispiel Hämangiome, akustische
Neurome, Neurofibrome, Trachome und pyogene Granulome. Beispiele
solider Metastasen bildender Tumore oder Neoplasmen schließen ein, sind
aber nicht beschränkt
auf Prostatakrebs, Pankreaskrebs, Melanom, Brustkrebs, Ösophaguskrebs, Lungenkrebs,
Kolonkrebs, Hoden krebs oder Hirnkrebs. Es sollte verstanden werden,
dass die vorliegende Erfindung gegen eine breite Vielfalt von Neoplasmen
wirksam ist.
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Die
Neuraminidase (Acylneuraminyl Hydrolase: EC3.2.1.18), die im Durchführen der
vorliegenden Erfindung verwendet werden kann, kann aus irgendeiner
Quelle stammen, die Arthrobacter ureafaciens, Vibrio cholerae, Clostridium
perfringens einschließt,
aber nicht darauf beschränkt
ist.
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Eine
pharmazeutische Dosierungseinheit des Medikaments für die Verabreichung
von Neuraminidase in einer geringen Konzentration umfasst einen
flüssigen
oder festen pharmazeutisch verträglichen
Träger
und eine wirksame Menge an Neuraminidase. Die oben genannte wirksame
Menge beträgt vorzugsweise
von zwischen ungefähr
10–2 bis
ungefähr
10–8 mg
und noch weiter bevorzugt ungefähr
10–4 mg
Neuraminidase in der Dosierungseinheit zusammen mit pharmazeutisch
verträglichen
Arzneimittelträgerstoffen.
Der bevorzugte Träger
ist 0,1% bis 0,4% Phenol in 0,9% Natriumchlorid (USP).
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Das
Medikament umfasst zwischen ungefähr 10–2 mg
bis 10–8 mg
Neuraminidase. Eine weiter bevorzugte Dosis Neuraminidase beträgt zwischen
ungefähr
10–3 mg
und 10–7 mg.
Die am meisten bevorzugte Dosis Neuraminidase beträgt ungefähr 10–4 mg.
Vorzugsweise geht die gesamte regelmäßige Tagesdosis nicht über ungefähr 10–2 mg
pro Proband hinaus, und noch weiter bevorzugt geht sie nicht über von
ungefähr
10–3 mg
bis 10–4 mg
hinaus.
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Das
Medikament umfasst einen Träger
für eine
einzige Verabreichung der Neuraminidase oder einer Fraktion oder
eines Derivat davon, der eine Menge von bis zu ungefähr 10–2 mg
Neuraminidase oder der Fraktion oder des Derivats davon und pharmazeutisch
inerte Bestandteile umfasst.
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Bei
der Durchführung
sollte die Verabreichung von Neuraminidase nicht über ungefähr 10–2 mg
hinausgehen, obwohl in bestimmten Fällen die Gesamtmenge an Neuraminidase,
die an irgendeinem Tag verabreicht wird, über die bevorzugte Grenze hinausgehen
kann. Die Neuraminidase kann als eine Flüssigkeit verabreicht werden,
oder sie kann als ein Feststoff verabreicht werden, wobei die Neuraminidase
in eine biologisch abbaubare oder biologisch erodierbare Matrix
eingebettet oder ihr beigemischt ist. Die Matrix kann eine Zeitfreisetzungs-Matrix
sein. Diese Matrizes sind dem Fachmann gut bekannt und sind für die vorliegende
Erfindung nicht entscheidend. Die Neuraminidase kann durch Injektion
oder über
den sublingualen Weg verabreicht werden. In einer Ausführungsform
ist der Träger
eine wässrige
Lösung,
der in einem inerten Gefäß enthalten
ist. In einer anderen Variation liegt die Zusammensetzung in der
Form eines Zäpfchens
vor. Die flüssige
Form der Zusammensetzung kann subkutan, intramuskulär oder intravenös injiziert
werden. Zusätzlich
kann die Zusammensetzung über
die Schleimhäute,
wie die Nasenhäute,
verabreicht werden.
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Die
Neuraminidase kann durch Standardverfahren verabreicht werden, die
intravenöse,
intramuskuläre
und subkutane Wege einschließen.
Die Neuraminidase kann auch über
sublinguale und intranasale Wege verabreicht werden. Da die wirksame
Menge an Neuraminidase in einer Dosis so gering ist, kann die Zusammensetzung
auch transdermal, anal oder oral verabreicht werden. Die Dosierungseinheiten
können
entweder flüssig
oder fest sein. Typischerweise kann die Dosierungseinheit bis zu
ungefähr
1 bis 8 Mal pro Tag oder mit Unterbrechungen in Abhängigkeit
vom Einzelfall verabreicht werden.
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Die
Neuraminidase kann direkt an die Tumorstelle verabreicht werden,
wird aber vorzugsweise systemisch verabreicht. Eine bevorzugte systemische
Verabreichung erfolgt über
eine sublinguale Verabreichung oder nasale Verabreichung durch Verabreichen
eines einzigen Tropfens (50 μl)
einer Neuraminidase Lösung
(ungefähr
10–4 mg/Dosis).
Für den
typischen Patienten ist der erste Tag einer Behandlung ein fünf-Dosis
Behandlungsplan in der ersten Stunde mit vier weiteren Dosen in
gleichmäßigem Abstand
während
des Tages. Der Patient wird viermal pro Tag nach dem ersten Tag
behandelt bis die bösartigen
und primären
Tumore durch eine umfassende klinische Untersuchung nicht mehr nachweisbar
sind. Es wird empfohlen, dass der Patient auf einen Erhaltungsbehandlungsplan
von zwei bis sieben, vorzugsweise 4, Verabreichungen pro Tag für mehrere
Monate bis ein Jahr bleibt, nachdem das Neoplasma nicht länger nachweisbar
ist. Der Patient sollte regelmäßig auf
ein Wiederauftreten des Krebses untersucht werden. Es sollte verstanden
werden, dass die Behandlungspläne
der Dosierung pro Tag in Abhängigkeit
von der Patientenantwort variiert werden können.
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Die
bevorzugte Dosierung für
einen typischen Krebspatienten lautet wie folgt:
Am ersten
Tag werden fünf
Dosen in der ersten Stunde gegeben. Die Dosen werden zum Zeitpunkt
0, 15, 30, 45 und 60 Minuten morgens gegeben, gefolgt von drei weiteren
Verabreichungen in gleichmäßigem Abstand
während
des Tages. Vorzugsweise werden die Dosen 15 Minuten vor dem Essen
oder Trinken verabreicht. Ein tägliches
Dosieren wird fortgesetzt bis Manifestierungen eines bösartigen
Tumors nicht länger
vorhanden sind. Ein Dosieren 4 Mal pro Tag wird für 1 Jahr
weiter aufrecht erhalten, um irgendwelche latenten Krebszellen zu
zerstören.
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Ein
Patient sollte alle 3 Monate auf bösartige Tumore durch herkömmliche Überwachungsverfahren überprüft werden,
die dem Fachmann gut bekannt sind, während er einer Behandlung unterzogen wird.
Falls ein Dosieren eingestellt wird, sollte ein ähnliches Überwachen alle 3 Monate für ein Jahr
fortgesetzt werden. Falls es irgendeinen Hinweis gibt, dass der
Krebs wieder auftritt, sollte der Patient den Dosierungsbehandlungsplan
unmittelbar wieder aufnehmen.
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Es
sollte verstanden werden, dass das Medikament zusammen mit herkömmlichen
Therapien verwendet werden kann, die einschließen, aber nicht beschränkt sind
auf Chemotherapie, Chirurgie und Strahlentherapie. Das Medikament
kann zusammen mit diesen Therapien verwendet werden oder kann vor
oder nach diesen Therapien verwendet werden.
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Die
Erfindung wird durch die folgenden Beispiele weiter dargestellt,
die nicht in irgendeiner Weise ausgelegt werden sollen, dass sie
Beschränkungen
auf deren Schutzbereich auferlegen. Die Patientenzusammenfassungen
stammen von Patienten, die in australischen klinischen Studien behandelt wurden.
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BEISPIEL 1
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Präparation
von Neuraminidase
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1
mg Neuraminidase (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) wird mit 1
ml 0,9% Salzlösung
(Allergy Laboratory, Inc., Oklahoma City, OK) gemischt. Diese Lösung wird
steril filtriert. 0,2 ml dieser Neuraminidase Lösung werden mit 75 ml 0,9%
Salzlösung
gemischt. Diese Lösung
wird bei Raumtemperatur für drei
Stunden stehen gelassen. Wahlweise wird die Lösung alle 15 Minuten gerührt. Nach
der dreistündigen
Inkubation bei Raumtemperatur werden 25 ml 0,4% Phenol Salzlösung zu
den 75 ml Neuraminidase Salzlösung
zugegeben. Dies ergibt eine Phenol Endkonzentration von 0,1% in
0,9% Salzlösung
und eine Endkonzentration Neuraminidase von 2 × 10–3 mg/ml.
Diese Lösung
wird bei 4°C
aufbewahrt.
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BEISPIEL 2
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Alternatives Verfahren zur Präparation
von Neuraminidase
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1
mg Neuraminidase (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) wird mit 1
ml 0,4% Phenol (Allergy Laboratory, Inc., Oklahoma City, OK) Salzlösung gemischt.
Diese Lösung
wird steril filtriert. 0,2 ml dieser Neuraminidase Lösung werden
mit 24,8 ml der 0,4% Phenol Salzlösung gemischt. Diese Lösung wird
bei Raumtemperatur für
drei Stunden stehen gelassen. Wahlweise wird die Lösung alle
15 Minuten gerührt. Nach
der dreistündigen
Inkubation bei Raumtemperatur werden 75 ml Salzlösung zu den 25 ml Neuraminidase/Phenol
Salzlösung
zugegeben. Dies ergibt eine Phenol Endkonzentration von 0,1% in
0,9% Salzlösung
und eine Endkonzentration Neuraminidase von 2 × 10–3 mg/ml.
Diese Lösung
wird bei 4°C
aufbewahrt.
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BEISPIEL 3
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Verabreichung einer Neuraminidase Lösung
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Ein
bevorzugter Weg einer Verabreichung der vorliegenden Erfindung ist
die sublinguale Verabreichung. Ein Tropfglas, das 50 μl pro Tropfen
liefert, wird verwendet, um einen Tropfen pro Verabreichung sublingual
zu liefern. Wie oben dargestellt, umfasst der erste Tag einer Behandlung
die Verabreichung von einem 50 μl
Tropfen alle 15 Minuten für
eine Stunde (5 Tropfen insgesamt). Nach dem ersten Tag wird dem
Patienten ein 50 μl
Tropfen viermal am Tag gegeben, bis die Tumore sich zurückentwickelt
haben. Ein empfohlenes Schema ist ein Tropfen vor dem Frühstück, ein
Tropfen vor dem Mittagessen, ein Tropfen vor dem Abendessen und
ein Tropfen vor der Schlafenszeit. Es wird empfohlen, dass dieses
Schema für
mehrere Monate bis ein Jahr aufrecht erhalten wird, nachdem alle
klinischen Zeichen des Krebses verschwunden sind. Der Patient sollte
klinisch genau überwacht
werden, und die Behandlung sollte wieder aufgenommen werden, falls
der Krebs wieder auftritt.
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BEISPIEL 4
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Ein
51 Jahre alter männlicher
Patient mit Hodenkrebs, der in der Prostata, dem Darm, der Leber und
dem Pankreas Metastasen gebildet hatte (Stufe 4), wurde, wie oben
beschrieben, behandelt. Nach 6 Monaten sublingualer Neuraminidase
Behandlung war kein bösartiger
Tumor nachweisbar. Bei dem Patient wurden zwei sublinguale Verabreichungen
täglich
als eine Prophylaxe aufrecht erhalten.
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BEISPIEL 5
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Lungenkrebs
bildete in einer 34 Jahre alten Frau in der Leber und anderen Geweben
Metastasen mit stark einbezogenen Lymphknoten. Eine Behandlung mit
der sublingualen Neuraminidase Behandlung begann am 12. Juli 1999. Über sechs Monate hinweg
trat eine ständige
Verbesserung auf. Durch die letzte physische Untersuchung im Januar
2000 ergab sich kein Nachweis irgendeines bösartigen Tumors in irgendeinem
Gewebe.
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BEISPIEL 6
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Der
Patient wurde mit einem inoperablen Hirntumor mit extremem Kopfschmerz
und beeinträchtigtem
Sehvermögen
vorgestellt. Nach einem und einem halben Monat sublingualer Neuraminidase
Behandlung wurde weder von Schmerz noch einer Beeinträchtigung
des Sehvermögens
berichtet. Bei dem Patienten werden 4 Verabreichungen der Neuraminidase
Lösung
aus Beispiel 1 pro Tag fortgesetzt.
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BEISPIEL 7
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Ein
zweiter Fall eines Patienten mit einem inoperablen Hirntumor wurde
behandelt. Nach fünf
Monaten einer Behandlung verschwanden alle abnormen Symptome, und
eine klinische Analyse zeigte keine nachweisbaren Zeichen einer
Erkrankung. Bei dem Patienten werden 4 Verabreichungen der Neuraminidase
Lösung
aus Beispiel 1 pro Tag fortgesetzt.
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BEISPIEL 8
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Eine
75 Jahre alte Frau wurde mit einem B Zell CD10 Lymphom vorgestellt.
Die Diagnose beruhte auf einer klinischen Evaluierung sowie einer
Gewebebiopsie. Innerhalb eines und eines halben Monats der sublingualen
Neuraminidase Behandlung wies eine Untersuchung durch einen Onkologen
keine abnormen CD10 transformierten Zellen nach.