DE4017804A1 - Verfahren und vorrichtung zur laserdesorption von analytmolekuelionen, insbesondere von biomolekuelen - Google Patents
Verfahren und vorrichtung zur laserdesorption von analytmolekuelionen, insbesondere von biomolekuelenInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Laserdesorption
von Analytmolekülionen, insbesondere von Biomolekülen, vor
zugsweise mit einer Molekülmasse im Bereich von 10 000 bis
mehreren 100 000 Dalton, aus einem Präparat, welches das
Analyt und eine Laserlicht absorbierende Matrix beinhal
tet. Weiter betrifft die Erfindung eine Vorrichtung zur
Durchführung des Verfahrens.
Die matrixunterstützte Laserdesorption ist als solche an
sich bekannt, und zwar im UV-Bereich, insbesondere bei
einer Wellenlänge von 266 nm.
Bisherige Erfahrungen mit der Ultraviolett-Laserdesorption
haben aber gezeigt, daß intakte Molekülionen, insbesondere
von Biomolekülen, nur sehr schwierig oder gar nicht aus
einem Präparat desorbiert werden können, weil auch die
Analytmoleküle Laserlicht absorbieren, was zu ihrer Be
schädigung führen kann.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, das oben
genannte Verfahren dahingehend zu verbessern, daß auch Bio
molekülionen, vorzugsweise mit Molekülmassen größer als
10 000 Dalton, mit Hilfe von Laserdesorption intakt aus
einem Präparat desorbiert werden können.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß Laser
licht mit einer Wellenlänge größer/gleich 300 nm und eine
in dem gewählten Wellenlängenbereich absorptionsfähige
Matrix verwendet werden, wobei entweder Laserlicht des
langwelligeren UV-Bereichs oder des IR-Bereichs Verwendung
findet.
Bisher werden für die Laserdesorption zumeist Nd-YAG-Laser
mit einer Wellenlänge von etwa 266 nm verwendet, da insbe
sondere für diese Wellenlänge eine große Anzahl von Ma
trices zur Verfügung steht, die diese Wellenlänge absor
bieren können. Gerade Biomoleküle sind aber ebenfalls in
diesem Wellenlängenbereich absorptionsfähig, so daß intak
te Biomoleküle mit einem derartigen Laser häufig nicht de
sorbiert werden können.
In dem erfindungsgemäß vorgeschlagenen Wellenlängenbereich
größer/gleich 300 nm absorbieren die meisten Biomoleküle
das Laserlicht nicht mehr, so daß mit einer geeigneten
Matrix, die in diesem Wellenlängenbereich absorptionsfähig
ist, mit Vorteil die Desorption intakter Biomoleküle mög
lich ist. Es gibt nur sehr wenige Biomoleküle, die Wellen
längen über 300 nm absorbieren, beispielsweise Blutfarb
stoff. Diese Biomoleküle sind aber eher Ausnahmen.
Geeignete Matrizes für die erfindungsgemäßen Wellenlängen
bereiche ergeben sich aus den Tabellen 1 und 2, wobei für
diese erfindungsgemäßen Matrizes auch selbständiger Schutz
beansprucht wird.
Bei diesen geeigneten Matrices ist zusätzlich zu berück
sichtigen, daß die jeweilige Matrix nicht nur für den
jeweils ausgewählten Wellenlängenbereich bzw. die ausge
wählte Wellenlänge absorptionsfähig sein muß, wobei es
prinzipiell mit wachsender Wellenlänge aus Gründen der
elektronischen Molekülstruktur immer schwieriger wird,
kleine Moleküle mit hoher Absorption zu finden, sondern
daß für die Verwendbarkeit einer geeignet absorbierenden
Matrix noch andere, in keiner Weise offensichtliche Eigen
schaften eine Rolle spielen. Hierzu gehören zum einen die
Notwendigkeit, daß Matrixmoleküle auch beim Abdampfen des
Lösungsmittels bei Einführen der Probe bzw. des Präparates
in das Vakuum mit den Analytmolekülen eine homogene
Mischung bilden und nicht seggregieren. Zum anderen dienen
die Matrixmoleküle als Protonendonatoren aus dem elek
tronisch angeregten Zustand und ermöglichen damit erst die
Ionisierung der Analytmoleküle. Beide Eigenschaften lassen
sich aus üblichen Tabellenwerken nicht entnehmen. Als Bei
spiel für die Schwierigkeit, geeignete Moleküle zu finden,
mag gelten, daß z.B. bei 266 nm die 3-Pyridincarbonsäure
(Nikotinsäure) eine exzellente Matrix darstellt, während
die 2- oder 4-Pyridincarbonsäuren, bei denen lediglich die
COOH-Gruppe um eine Position am Ring versetzt ist, als
Matrix völlig unbrauchbar sind.
Die Tatsache, daß die Moleküle nicht nur desorbiert, son
dern auch ionisiert werden sollen, macht es überraschend,
daß erfindungsgemäß auch Wellenlängen aus dem IR-Bereich
für eine derartige Laserdesorption geeignet sind. Für die
Ionisierung der Moleküle wird in der Literatur bisher all
gemein ein thermischer Prozeß als Ursache angenommen. Die
Möglichkeit, mit IR-Wellenlängen eine Desorption großer,
thermisch labiler Ionen durchzuführen, mußte auf dieser
Grundlage eher als unwahrscheinlich gelten.
Es hat sich gezeigt, daß mit Vorteil auch O-H- und
N-H-Gruppen zu besonders starken Absorbern in dem erfin
dungsgemäßen Wellenlängenbereich gehören. Diese Gruppen
sind aber zugleich die Gruppen, die die chemische Bindung
zwischen Analyten und Matrix bilden. Durch präferenzielle
Einstrahlung in diese Bindungen kommt es zur besseren Frei
setzung der Analytmoleküle, belegt durch die gegenüber be
kannter UV-Desorption durchweg höheren Signalstärken.
Gleichzeitig kann mit der Lösung dieser Bindungen ein
Protonentransfer verbunden sein, der die Ausbeute an ge
ladenen Analytmolekülen erhöht.
Wasser dampft als Matrix leicht in einem Vakuum ab, so daß
bei der Verwendung von Wasser dieses unerwünschte Ver
dampfen nach Möglichkeit unterdrückt werden soll, bei
spielsweise durch schockartiges Kühlen der Probe und Ein
bringen der gekühlten, gefrorenen Probe in das Vakuum.
Insbesondere der Übergang von der bekannten UV-Desorption
zur erfindungsgemäßen IR-Desorption hat zudem den Vorteil,
daß die Auswahl geeigneter, flüssiger Matrices wesentlich
größer ist. Dies führt insbesondere dazu, daß erfindungs
gemäß auch eine Kopplung von Flüssigchromatografie und
Massenspektrometrie durchgeführt werden kann. Für diese
Kopplung wird auch selbständiger Schutz beansprucht.
Eine andere Weiterbildung des erfindungsgemäßen Ver
fahrens, für die ebenfalls selbständiger Schutz bean
sprucht wird, zeichnet sich dadurch aus, daß eine der
artige Kombination von Wellenlänge und Matrix gewählt
wird, die zu einer höheren Ladungszahl der erzeugten Ionen
führt.
Dies hat insbesondere den Vorteil, daß solche Ionen mit
vielen Ladungen beispielsweise auch in klassischen Massen
spektrometern, also beispielsweise nicht in Flugzeitmassen
spektrometern, nachweisbar sind, die aufgrund ihrer Kon
struktion eigentlich nur für kleinere Moleküle geeignet
sind. Dies ist möglich, weil sich beispielsweise ein Ion
der Masse 1 00 000 Dalton mit zehn Ladungen massenspektro
metrisch genauso verhält wie ein Ion der Masse 10 000 Dal
ton mit nur einer Ladung.
Ionen mit Vielfachladungen lassen sich zudem auch leichter
durch Stoß mit anderen Teilchen oder mit Oberflächen oder
durch Photonenbeschuß fragmentieren. Dies ist insbesondere
für die sogenannte MS-MS-Technik von großer Bedeutung und
von großem Vorteil, bei der zwei Massenspektrometer hinter
einandergeschaltet werden. Damit kann eine besonders gute
Strukturforschung an Molekülen betrieben werden.
Zur gezielten Erzeugung mehrfach geladener Ionen können
auch die Impulsdauer, die Bestrahlungsstärke und/oder die
Größe des bestrahlten Areals verändert werden.
Eine weitere Weiterbildung des erfindungsgemäßen Ver
fahrens sieht vor, daß das Präparat (von hinten) mit dem
Laserlicht durchstrahlt wird, wozu das Substrat bzw. ein
Träger des Präparates für die entsprechende Wellenlänge
transparent ist. Diese Durchstrahlung (Backillumination)
ist insbesondere bei einer Kopplung von Flüssigchromato
grafie und Massenspektrometrie von besonderem Vorteil.
Eine erfindungsgemäße Vorrichtung, vorzugsweise zur Durch
führung des erfindungsgemäßen Verfahrens, zeichnet sich
durch einen Laser für Laserlicht einer Wellenlänge größer/
gleich 300 nm aus, wobei es sich um einen UV-Laser oder
einen IR-Laser handeln kann.
Beispielsweise können Stickstofflaser, CO2-Laser und
Er-Laser eingesetzt werden, die jeweils Laserlicht mit
einer Wellenlänge von etwa 337 nm, 10 600 nm bzw. 3000 nm
aussenden.
Erfindungsgemäß können Er-Laser mit unterschiedlichen
Kristallmaterialien verwendet werden, beispielsweise
Er-YAG-Laser oder Er-YILF-Laser. Je nach Kristallmaterial
hat dieser Er-Laser eine etwas andere Wellenlänge, so daß
hierdurch Er-Laser quasi in einem etwas größeren Wellen
längenbereich fein abgestimmt werden können.
Erfindungsgemäß ist beispielsweise auch die Verwendung von
HF-Lasern oder Ho-YAG-Lasern denkbar.
Die Verwendung eines Lasers mit einer Wellenlänge größer/
gleich 300 nm erlaubt mit Vorteil zudem die Verwendung
eines Lichtleiters, z.b. einer Faseroptik, zur Leitung des
Laserlichts vom Laser zum Präparat.
Die Verwendung von Lichtleitern erlaubt mit Vorteil eine
besonders einfache Ausbildung und Handhabung der erfin
dungsgemäßen Vorrichtung, insbesondere lassen sich die
Lichtleiter in besonders einfacher Weise in ein Vakuum ein
führen, und es läßt sich mit dem Lichtleiter in einfacher
Weise der gewünschte Auftreffwinkel des Lichts auf das
Präparat einstellen, insbesondere ohne daß an der Orientie
rung des Lasers selbst oder des Präparates etwas geändert
werden müßte.
Ausführungsbeispiele, aus denen sich weitere erfinderische
Merkmale ergeben sind in der Zeichnung dargestellt. Es
zeigen schematisch:
Fig. 1 ein erstes Ausführungsbeispiel einer Vorrichtung
zur Laserdesorption in der Draufsicht,
Fig. 2 ein zweites Ausführungsbeispiel einer Vorrich
tung zur Laserdesorption in der Draufsicht,
Fig. 3 ein drittes Ausführungsbeispiel einer Vorrich
tung zur Laserdesorption in der Draufsicht, und
Fig. 4 ein viertes Ausführungsbeispiel einer Vorrich
tung zur Laserdesorption.
Fig. 1 zeigt ein erstes Ausführungsbeispiel einer Vorrich
tung zur Laserdesorption von Analytmolekülen bzw. von
deren Ionen aus einem Präparat. Das Präparat befindet sich
auf einem Präparatträger 10, welcher in der Vakuumkammer
einer Ionenquelle 11 angeordnet ist. Der Präparatträger 10
dient als Target für einen Laserstrahl 12, der von einem
Laser 13 ausgesandt wird. Der Laserstrahl 12 besteht aus
Laserlicht, z.B. ultraviolettem Laserlicht, einer Wellen
länge größer/gleich 300 nm. Der Laser 13 kann beispiels
weise ein Stickstofflaser mit Laserlicht der Wellenlänge
337 nm sein. Es können beispielsweise auch Kohlendioxyd
laser mit Laserlicht der Wellenlänge 10 600 nm oder
Er-YAG-Laser mit Laserlicht der Wellenlänge 3000 nm verwen
det werden.
Der Laserstrahl 12 wird bei diesem ersten Ausführungsbei
spiel mittels eines Umlenkspiegels 14 etwa rechtwinklig um
gelenkt, um den Laserstrahl 12 zu justieren, und wird dann
mittels einer Linse 15 fokussiert. Nach Eintritt des Laser
strahls 12 in die Vakuumkammer der Ionenquelle 11 wird der
Laserstrahl 12 mit einem zweiten Umlenkspiegel 16 ein
zweites Mal derart umgelenkt, daß er mit einem Winkel von
etwa 25° bis 45° zur Flächennormalen auf den Präparatträger
10, und damit auf das Präparat, auftrifft.
Am Ort des Präparates werden durch den Laserstrahl 12 Ana
lytionen desorbiert, die mittels einer Ionenoptik 17 extra
hiert und zu einem Ionenstrahl 18 fokussiert werden.
Der Ionenstrahl 18 tritt in die Vakuumkammer 19 eines Ana
lysators ein, die sich an die Vakuumkammer der Ionenquelle
11 anschließt. Bei dem Analysator kann es sich beispiels
weise um ein Massenspektrometer handeln.
Fig. 2 zeigt ein zweites Ausführungsbeispiel einer Vorrich
tung zur Laserdesorption von Analytmolekülen.
Gleiche Bauelemente sind in den Fig. 2 und 3 mit den
gleichen Bezugszahlen bezeichnet wie in Fig. 1.
In diesem Ausführungsbeispiel wird der Laserstrahl 12 des
Lasers 13 nicht mit Umlenkspiegeln umgelenkt, sondern an
den Laser 13 ist optisch durch eine Strahleinkopplung 20
ein Lichtleiter 21 (eine Faseroptik) angeschlossen, mit
dem der Laserstrahl geleitet wird. Am Ende des Lichtlei
ters 21 bildet eine Strahlauskopplung eine Fokussierlinse
15.
Damit das Laserlicht des Lasers 13 möglichst gut von dem
Lichtleiter 21 geleitet werden kann, sollte vorzugsweise
Laserlicht mit einer Wellenlänge größer/gleich 300 nm ver
wendet werden.
Der Lichtleiter 21 kann in besonders einfacher Weise in
das Vakuum der Ionenquelle 11 eingeführt werden, er ist in
seiner Handhabung besonders bequem, und es kann in ein
facher Weise, insbesondere ohne Umlenkspiegel 14, 16, der
gewünschte Strahlwinkel des Laserlichts bezüglich der
Flächennormalen des Präparatträgers 10 eingestellt werden,
da der Lichtleiter 21 flexibel ist.
In Fig. 3 ist ein drittes Ausführungsbeispiel einer Vor
richtung zur Laserdesorption von Analytmolekülen darge
stellt.
Die Vorrichtung gemäß Fig. 3 weist, ähnlich wie die Vor
richtung gemäß Fig. 1, wieder einen Umlenkspiegel 14 zur
Umlenkung des Laserstrahls 12 auf. Bei dem Ausführungsbei
spiel gemäß Fig. 3 ist jedoch der Präparatträger 10 in der
Ionenquelle 11 so orientiert angeordnet, daß der Laser
strahl 12 nach der Umlenkung durch den Umlenkspiegel 14
senkrecht (entlang der Flächennormalen) auf den Präparat
träger 10 auftrifft, nachdem der durch eine Fokussierlinse
15 fokussiert worden ist. Diese Fokussierlinse 15 befindet
sich im Gegensatz zum Ausführungsbeispiel der Fig. 1, ähn
lich wie beim Ausführungsbeispiel gemäß der Fig. 2, beim
Ausführungsbeispiel gemäß Fig. 3 innerhalb der Vakuum
kammer der Ionenquelle 11.
Da der Präparatträger 10 im Ausführungsbeispiel gemäß Fig. 3
anders in der Ionenquelle 11 orientiert ist als in den
vorhergehenden Ausführungsbeispielen, weist die Ionen
quelle 11 zusätzlich zu der Ionenoptik 17 eine Ablenkein
heit 22 auf, die den erzeugten Ionenstrahl 18 in die ge
wünschte Strahlrichtung durch die Ionenoptik 17 ablenkt.
Die Ablenkeinheit funktioniert vorzugsweise elektrosta
tisch. Beispielsweise kann die Ablenkeinheit 22 ein ein
facher Umlenkkondensator sein.
In allen Ausführungsbeispielen wird ein Laser 13 verwen
det, der Laserlicht mit einer Wellenlänge größer/gleich
300 nm aussendet. Ein solcher Laser 13 hat über den Vor
teil bezüglich der intakten Desorption von Biomolekülen
hinaus den weiteren Vorteil, daß er kostengünstiger ist,
als beispielsweise ein sonst zumeist verwendeter
Nd-YAG-Laser mit Laserlicht der Wellenlänge 266 nm.
Die Fig. 4 zeigt ein viertes Ausführungsbeispiel einer Vor
richtung zur Laserdesorption. In dieser Fig. 4 sind die
gleichen Bauelemente mit den gleichen Bezugszahlen bezeich
net wie in den vorhergehenden Figuren.
Der Fig. 4 ist insbesondere ein transparenter Probenträger
23 für die Probe 10 bzw. Präparatträger 10 entnehmbar. Die
Probe wird bei diesem Ausführungsbeispiel also von hinten
durchstrahlt. Der transparente Probenträger 23 kann dabei
als Vakuumträger dienen.
Eine solche erfindungsgemäße Durchstrahlung, auch Back
illumination genannt, ist insbesondere dann vorteilhaft,
wenn die Massenspektrometrie mit einer Flüssigchromato
grafie gekoppelt ist, insbesondere dann, wenn ein Flüssig
chromatografiepräparat massenspektrometrisch analysiert
werden soll.
Bezugszeichenliste
10 Präparatträger
11 Ionenquelle
12 Laserstrahl
13 Laser
14 Umlenkspiegel
15 Linse
16 Umlenkspiegel
17 Ionenoptik
18 Ionenstrahl
19 Vakuumkammer v. Analysator
20 Strahleinkopplung
21 Lichtleiter
22 Ablenkeinheit
23 transparenter Probenträger
11 Ionenquelle
12 Laserstrahl
13 Laser
14 Umlenkspiegel
15 Linse
16 Umlenkspiegel
17 Ionenoptik
18 Ionenstrahl
19 Vakuumkammer v. Analysator
20 Strahleinkopplung
21 Lichtleiter
22 Ablenkeinheit
23 transparenter Probenträger
Claims (34)
1. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere von Biomolekülen, vorzugsweise in
einem Bereich von 10 000 bis mehreren 100 000 Dalton, aus
einem Präparat, welches das Analyt und eine Laserlicht ab
sorbierende Matrix beinhaltet, dadurch gekenn
zeichnet, daß Laserlicht mit einer Wellenlänge
von etwa 300 nm oder größer als 300 nm und eine in dem ge
wählten Wellenlängenbereich absorptionsfähige Matrix ver
wendet werden.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß Laserlicht mit einer Wellenlänge im infraroten Spek
tralbereich verwendet wird.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß als Laser ein CO2-Laser eingesetzt wird.
4. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß als Laser ein Er-Laser eingesetzt wird.
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet,
daß ein Er-YAG-Laser eingesetzt wird.
6. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet,
daß ein Er-YILF-Laser eingesetzt wird.
7. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß als Laser ein Stickstofflaser eingesetzt wird.
8. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere nach einem oder mehreren der vorher
gehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß als Matrix
ein Benzoesäurederivat, beispielsweise Aminobenzoesäure
oder 2,5-Dihydroxybenzoesäure, verwendet wird.
9. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere nach einem oder mehreren der Ansprüche
1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß als Matrix ein
Nikotinsäurederivat, vorzugsweise Hydroxy-Amino-Nikotin
säure, verwendet wird.
10. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, inbesondere nach einem oder mehreren der Ansprüche
1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß als Matrix ein Pyra
zinsäurederivat, vorzugsweise 3-Aminopyrazin-2-Carbon
säure, verwendet wird.
11. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere nach einem der Ansprüche 1 bis 7, da
durch gekennzeichnet, daß als Matrix Wasser, vorzugsweise
in der festen Phase, verwendet wird.
12. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere nach einem oder mehreren der Ansprüche
1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß als Matrix eine
Carboxylsäure bzw. ein Carboxylsäurederivat verwendet
wird.
13. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere nach einem oder mehreren der Ansprüche
1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß als Matrix Glycerin
bzw. Glycerol verwendet wird.
14. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere nach einem oder mehreren der Ansprüche
1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß als Matrix Harnstoff
verwendet wird.
15. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere nach einem oder mehreren der Ansprüche
1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß als Matrix Triethanol
amin verwendet wird.
16. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere nach einem oder mehreren der Ansprüche
1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß eine flüssige Matrix
verwendet wird.
17. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, vorzugsweise nach Anspruch 16, dadurch gekennzeich
net, daß die Laserdesorption mit einer Flüssigchromato
grafie gekoppelt wird.
18. Verfahren nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet,
daß eine unmittelbare Aufeinanderfolge (on-line-Kopplung)
durchgeführt wird.
19. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, vorzugsweise nach einem oder mehreren der vorher
gehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Laser
lichtbestrahlung des Präparates durch ein für das jeweils
gewählte Licht transparentes Substrat bzw. transparenten
Träger erfolgt.
20. Verfahren zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, vorzugsweise nach einem oder mehreren der vorher
gehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß eine Laser
wellenlänge und eine Matrix ausgewählt und einander zuge
ordnet werden bzw. miteinander kombiniert werden, die in
ihrer Zusammenwirkung zu einer Laserdesorption von Ionen
einer höheren Ladungszahl (größer 1) führen.
21. Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet,
daß Ionen mit mehr als einer Ladung in größerer Zahl er
zeugt werden als solche, mit nur einer Ladung.
22. Verfahren nach Anspruch 20 oder 21, dadurch gekenn
zeichnet, daß Ionen mit mehr als einer Ladung je 10 000
Dalton Molekülmasse erzeugt werden.
23. Verfahren nach einem der Ansprüche 20 bis 22, da
durch gekennzeichnet, daß eine Kombination von Kaffee-
oder Bernsteinsäure als Matrix und eine Wellenlänge im
Infrarotbereich benutzt wird, vorzugsweise die Wellenlänge
eines Er- oder eines CO2-Lasers.
24. Verfahren nach einem der Ansprüche 20 bis 23, da
durch gekennzeichnet, daß bei der Erzeugung der mehrfach
geladenen Ionen die Impulsdauer, Bestrahlungsstärke auf
dem Präparat und/oder die Größe des bestrahlten Areals auf
dem Präparat als veränderbare Parameter eingesetzt bzw.
genutzt werden.
25. Verfahren nach einem der Ansprüche 20 bis 24, da
durch gekennzeichnet, daß die mehrfach geladenen Ionen in
einem Massenspektrometer nachgewiesen werden, dessen obere
Grenze nachweisbarer, einfach geladener Ionen unter der
Masse der nachzuweisenden Moleküle liegt.
26. Verfahren nach einem der Ansprüche 20 bis 25, da
durch gekennzeichnet, daß die mehrfach geladenen Ionen in
einem Massenspektrometer direkt oder nach Massentrennung
in einem ersten Massenspektrometer durch Stoß mit anderen
Teilchen (CID), mit einer Oberfläche (SID) oder durch
Photonenbestrahlung fragmentiert und in einem weiteren
Massenspektrometer analysiert werden (MS-MS).
27. Vorrichtung zur Laserdesorption von Analytmolekül
ionen, insbesondere von Biomolekülen, vorzugsweise mit
einer Molekülmasse im Bereich von 10 000 bis mehreren
100 000 Dalton, aus einem Präparat, welches das Analyt und
eine Laserlicht absorbierende Matrix beinhaltet, welche
einen Laser umfaßt, vorzugsweise zur Durchführung des Ver
fahrens nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Laser (13) ein
Laser für Laserlicht einer Wellenlänge von etwa 300 nm
oder größer als 300 nm ist.
28. Vorrichtung nach Anspruch 27, dadurch gekennzeich
net, daß der Laser (13) ein UV-Laser ist.
29. Vorrichtung nach Anspruch 28, dadurch gekennzeich
net, daß der Laser (13) ein Stickstofflaser mit Laserlicht
einer Wellenlänge von etwa 337 nm ist.
30. Vorrichtung nach Anspruch 27, dadurch gekennzeich
net, daß der Laser (13) ein IR-Laser ist.
31. Vorrichtung nach Anspruch 30, dadurch gekennzeich
net, daß der Laser (13) ein CO2-Laser mit Laserlicht einer
Wellenlänge von etwa 10 600 nm ist.
32. Vorrichtung nach Anspruch 30, dadurch gekennzeich
net, daß der Laser (13) ein Er-Laser ist.
33. Vorrichtung nach Anspruch 32, dadurch gekennzeich
net, daß der Laser (13) ein Er-YAG-Laser mit Laserlicht
einer Wellenlänge von etwa 3000 nm oder ein Er-YILF-Laser
bzw. Er-Laser mit einem anderen Kristallmaterial ist.
34. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 27 bis 33, ge
kennzeichnet durch einen am Laser (13) optisch angeschlos
senen Lichtleiter (21) zur Leitung des Laserlichts.
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4017804A DE4017804C2 (de) | 1989-08-22 | 1990-06-01 | Verfahren und Verwendung einer Vorrichtung zur matrix-unterstützten Laserdesorption von Analytmolekülen, insbesondere Biomolekülen |
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