DE3521733C2 - - Google Patents

Description

Alle bekannten Interferone werden auf Grund von Homologien sowohl zwischen den Nukleotidsequenzen ihrer Strukturgene als auch zwischen ihren Aminosäuresequenzen eindeutig in drei Gruppen eingeteilt, die als IFN-alpha, IFN-beta und IFN-gamma bezeichnet werden.All known interferons are due to homologies both between the nucleotide sequences of their structural genes even between their amino acid sequences clearly in three groups classified as IFN-alpha, IFN-beta and IFN-gamma become.

Die verwendeten Bezeichnungen folgen der neuesten Empfehlung des "Interferon Nomenclature Commitee", die von J. Vilcek 1983 in Archives of Virology Vol. 77, S. 283-285, veröffentlicht wurden. Zusätzlich zu den genannten Hauptkriterien kann zur Charakterisierung der IFN-gammma-Gruppe herangezogen werden, daß keine immunologische Kreuzreaktion mit den beiden anderen Gruppen erfolgt sowie ihre biologische Instabilität bei pH 2 im Gegensatz zu IFN-alpha und IFN-beta.The terms used follow the latest recommendation of the "Interferon Nomenclature Committee", by J. Vilcek 1983 in Archives of Virology Vol. 77, pp. 283-285 were. In addition to the main criteria mentioned, the Characterization of the IFN-gammma group, that no immunological cross reaction with the other two Groups and their biological instability at pH 2 in contrast to IFN-alpha and IFN-beta.

IFN-gamma wird nach Stimulation der Gesamtpopulation der Leukozyten, nach der Art der Präparation üblicherweise als buffy coats bezeichnet, durch Mitogene, Antigene oder spezifische Antikörper in einem komplexen Prozeß zusammen mit einer großen Anzahl weiterer Faktoren (Mediatoren) ausgeschüttet wie Interleukin 1 (IL 1), Interleukin 2 (IL 2), koloniestimulierender Faktor (CSF), migrationsinhibierender Faktor (MIF), Makrophagen aktivierender Faktor (MAF), Tumor nekrotisierender Faktor (TNF) Lymphotoxin (LT) und Fibroblastenwachstums-Faktor (FGF). Weitere Faktoren sind beschrieben von J.A. Georgiades et al. in Came, P.E. und Carter, W. A. (eds.), Interferons and Their Applications, Springer Verlag, 1984, und von Waksman, B. H. in Cohen, S. et al. (eds.), Biology of the Lymphokines, Academic Press Inc., 1979.IFN-gamma, after stimulation of the total population of leukocytes, according to the type of preparation usually as buffy coats, by mitogens, antigens or specific Antibodies in a complex process together with a large one Number of other factors (mediators) distributed as interleukin 1 (IL 1), interleukin 2 (IL 2), colony-stimulating Factor (CSF), migration-inhibiting factor (MIF), macrophages activating factor (MAF), tumor necrotizing factor (TNF) Lymphotoxin (LT) and fibroblast growth factor (FGF). Further Factors are described by J.A. Georgiades et al. in Came, P.E. and Carter, W.A. (eds.), Interferons and Their Applications, Springer Verlag, 1984, and by Waksman, B.H. in Cohen, S. et al. (eds.), Biology of the Lymphokines, Academic Press Inc., 1979th

Diejenigen Faktoren, die von der Untergruppe der Lymphozyten gebildet werden, bezeichnet man allgemein als Lymphokine. Zu dieser Gruppe wird auch IFN-gamma gerechnet, das hauptsächlich von T-Lymphozyten produziert wird. Die Syntheseleistung der IFN-gamma produzierenden T-Lymphozyten wird ihrerseits wieder von dem Vorhandensein der oben erwähnten Faktoren beeinflußt. Those factors by the subgroup of lymphocytes are commonly referred to as lymphokines. To This group is also expected IFN-gamma, mainly produced by T lymphocytes. The synthesis of the IFN-gamma producing T-lymphocytes in turn becomes influenced by the presence of the factors mentioned above.  

Weiterhin existieren etablierte bzw. transformierte Zellinien, die IFN-gamma konstitutiv produzieren, wie von N. Fujii et al. in J. Immunology 130, S. 1683-1686, und A. Zlotnik et al. in J. Immunology 131, S. 794-800, beschrieben.Furthermore, established or transformed cell lines exist, which constitutively produce IFN-gamma as described by N. Fujii et al. in J. Immunology 130, pp. 1683-1686, and A. Zlotnik et al. in J. Immunology 131, pp. 794-800.

Ein bevorzugtes Verfahren zur Gewinnung von humanem Roh-IFN-gamma wird nachfolgend beschrieben. Als Ausgangsmaterial dienen lymphozytenreiche Plasmafraktionen von Blutkonserven, sogenannte "buffy coats", die gepoolt und durch schonende Zentrifugation bei 600-800 g von Plasmaresten befreit werden. Die pelletierten Gesamtleukozyten werden in vorgewärmtem Medium mit einer Dichte von 5 Millionen Zellen/ml suspendiert. Die Zellsuspension wird in aliquots in geeigneten Kultivierungsgefäßen nach Zugabe eines Mitogens (z. B. Phythämagglutinin) und Phorbolester (z. B. Phorbolmyristylacetat (PMA) bis zu 70 Stunden bei 37 Grad C auf einem Schüttler inkubiert. Die IFN-gamma-haltigen Kulturüberstände werden durch Zentrifugation gewonnen und können bis zur Weiterverwendung bei 4 Grad C gelagert werden. Üblicherweise enthalten die so gewonnenen Präparationen etwa 10 000 Internationale Referenzeinheiten (I.E.) IFN-gamma pro ml.A preferred method for obtaining crude human IFN-gamma is described below. The starting materials are lymphocyte-rich Plasma fractions of stored blood, so-called "buffy coats", which are pooled and gently centrifuged at 600-800 g of plasma residues. The pelleted Total leucocytes are in prewarmed medium with a density of 5 million cells / ml. The cell suspension is in aliquots in suitable culture vessels after addition of a mitogen (eg, phytohaemagglutinin) and phorbol esters (eg. Phorbol myristyl acetate (PMA) for up to 70 hours at 37 degrees C incubated on a shaker. The IFN-gamma-containing culture supernatants are obtained by centrifugation and can be up to stored for further use at 4 degrees C. Usually The preparations thus obtained contain about 10,000 internationals Reference units (I.E.) IFN-gamma per ml.

Der IFN-gamma-Gehalt wird durch einen CPE-Reduktionstest in geeigneten Indikatorzellen (z. B. WISH) mit einem Testvirus (z. B. EMC der Maus) gegen den Referenzstandard Gg 23-901-530 des National Institure of Health (USA) als antivirale Aktivität des Präparates bestimmt.The IFN-gamma content is determined by a CPE reduction test in appropriate indicator cells (eg WISH) with a test virus (eg EMC of the mouse) against the reference standard Gg 23-901-530 of the National Institute of Health (USA) as an antiviral activity drug.

Weitere Methoden zur Gewinnung von IFN-gamma-Präparationen werden von Y.K. Yip et al. in "Infection and Immunity", Okt. 1981, S. 131-133, Vol. 34 und in den US-PS 43 76 821 und 43 76 822 sowie 44 60 685 beschrieben.Other methods for obtaining IFN-gamma preparations are from Y.K. Yip et al. in "Infection and Immunity", Oct. 1981, Pp. 131-133, Vol. 34, and U.S. Patents 4,376,821 and 4,376,822 and 44 60 685.

Ein grundsätzlich anderer Weg zur Gewinnung von humanen IFN-gamma- Präparaten wird mit der Einschleusung des humanen Strukturgens mit Hilfe geeigneter Vektoren in heterologe Wirtszellen beschritten. Diese rekombinanten Gene werden konstitutiv oder nach Zugabe spezifischer Induktoren von der Wirtszelle exprimiert. A fundamentally different way of obtaining human IFN-gamma Preparations become with the introduction of the human structural gene with suitable vectors into heterologous host cells. These recombinant genes become constitutive or after addition specific inducers expressed by the host cell.  

Auch wenn es sich bei dem Strukturgen um eine eindeutig definierte Sequenz aus Nukleotiden handelt, die zwingend zur Synthese einer daraus ableitbaren Aminosäuresequenz führt, ist das IFN-gamma-Molekül des mit Hilfe der Wirtszelle hergestellten Präparates nicht notwendigerweise mit einem natürlich vorkommenden IFN-gamma identisch. Diese Möglichkeit der Variation unter Erhaltung der spezifischen Wirkung durch "post processing" wird durch das sogenannte Proteindesign erweitert, durch das das Strukturgen durch chemische bzw. biochemische Vollsynthese oder Modifikation verändert werden kann.Even if the structural gene is clearly defined Sequence of nucleotides that are essential for the synthesis of a derived derivable amino acid sequence is the IFN-gamma molecule of the preparation prepared by means of the host cell, not necessarily identical to a naturally occurring IFN-gamma. This possibility of variation while preserving the specific The effect of "post processing" is the so-called protein design extended, by which the structural gene by chemical or Biochemical full synthesis or modification can be changed.

Als Wirtszellen zur Aufnahme des Humangens können außer Bakterien (z. B. E. coli von G. Simons et al. in Gene 28, S. 55-64, 1984, beschrieben) auch Hefen (z. B. Saccharomyces cerevisiae, wie von R. Derynck et al. in Nucleic Acids Research 11, S. 1819-1837, 1983, beschrieben) oder eukaryotische Zellen (wie z. B. Chinese Hamster Ovary Cells, wie von S.J. Scahill et al. in Proc. Nat. Acad. Sci. USA 80, S. 4654-4658, 1983, Affenzellen, wie von P. W. Gray et al in Nature 295, S. 503-508, 1982, beschrieben) dienen.As host cells for the uptake of human beings can except bacteria (e.g., E. coli by G. Simons et al., Gene 28: 55-64, 1984). also described yeasts (eg Saccharomyces cerevisiae, as of R. Derynck et al. in Nucleic Acids Research 11, p. 1819-1837, 1983, described) or eukaryotic cells (such as Chinese hamster Ovary Cells, as described by S.J. Scahill et al. in proc. Nat. Acad. Sci. USA 80, pp. 4654-4658, 1983, monkey cells as described by P.W. Gray et al., Nature 295, p. 503-508, 1982).

In einigen dieser Systeme reichert sich entweder IFN-gamma bis zu einer Konzentration von mehr als 100 000 I.E. pro ml in der Kulturflüssigkeit an oder es wird im Wirt selbst angereichert und stellt dort bis zu 25 Prozent des Proteingehalts der Zelle dar.In some of these systems, either IFN-gamma accumulates up to a concentration of more than 100 000 I.E. per ml in the Culture fluid or it is enriched in the host itself and there represents up to 25 percent of the protein content of the cell.

Die Anreicherung bzw. Reinigung der nach den vorstehend beschriebenen Verfahren erhaltenen IFN-gamma-Präparationen kann nach den folgenden Methoden einzeln oder in Kombination erfolgen:The enrichment or purification of those described above Method of obtaining IFN-gamma preparations may be according to the following Methods are used individually or in combination:

• 1. Controlled Pore Glass (CPG) oder Silica-Gel;1. Controlled Pore Glass (CPG) or silica gel;
• 2. Gelfiltration (z. B. AcA 54 oder Sephacel S 200);2. gel filtration (eg AcA 54 or Sephacel S 200);
• 3. Ionenaustauschchromatographie (CM-Sepharose oder Phosphocellulose oder DEAE cellulose);3. Ion exchange chromatography (CM-Sepharose or phosphocellulose or DEAE cellulose);
• 4. Affinitätschromatographie (Con A-Sepharose oder Poly-U-Sepharose oder Cu-Chelat-Sepharose);4. Affinity chromatography (Con A-Sepharose or poly-U-Sepharose or Cu chelate Sepharose);
• 5. Immunaffinitätschromatographie (Anti-IFN-gamma-Sepharose);5. immunoaffinity chromatography (anti-IFN-gamma-Sepharose);
• 6. HPLC (z. B. mit Reversed Phase Materialien).6. HPLC (eg with reversed phase materials).

Entsprechende Verfahren wurden von Y. K. Yip et al. "Partial Purification and Characterization of Human Gamma (Immune) Interferon" in Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 78, S. 1601-1605, 1981, oder von D. Novick et al., EMBO Journal 2, S. 1527-1530, 1983, oder in der DE-PS 31 36 166 A 1 beschrieben.Corresponding methods have been described by Y. K. Yip et al. "Partial Purification and Characterization of Human Gamma (Immune) Interferon " in proc. Nat. Acad. Sci. USA, 78, pp. 1601-1605, 1981, or of D. Novick et al., EMBO Journal 2, pp. 1527-1530, 1983, or in US Pat DE-PS 31 36 166 A 1 described.

Durch geeignete Kombinationen ist eine Reinigung bis zur elektrophoretischen Homogenität möglich, z. Zt. liegt die dabei erreichte maximale spezifische Aktivität bei 50 Millionen I. E., während die beschriebenen Durchschnittswerte bei 10 bis 20 Millionen I.E. liegen.By suitable combinations is a cleaning up to electrophoretic Homogeneity possible, eg. At the moment it is reached maximum specific activity at 50 million I. E. while the average values described at 10 to 20 million I.E. lie.

Die Interferone (IFN-alpha, IFN-beta, IFN-gamma) wurden bisher in sehr unterschiedlichen Dosen und Applikationsweisen bei Patienten therapeutisch eingesetzt. Ein- oder mehrmalig pro Woche verabreichte Dosen bis zu ca. 10 Millionen I. E. werden gemeinhin als niedrig, Dosen ab 20-50 Millionen I. E. als hoch bezeichnet.The interferons (IFN-alpha, IFN-beta, IFN-gamma) have been so far in very different doses and modes of administration in patients used therapeutically. Administered once or several times a week Doses up to about 10 million I. E. are commonly considered low, Doses from 20-50 million I. E. referred to as high.

In der Anfangszeit der therapeutischen Anwendung der Inferferone standen aufgrund des Fehlens geeigneter biotechnologischer Herstellungsverfahren diese Substanzen lediglich in so geringen Mengen zur Verfügung, daß nur Dosen von weniger als 3 Millionen I. E. verabreicht werden konnten. Der Einsatz höherer Dosen ist beim IFN-alpha und IFN-beta seit Mitte der siebziger Jahre, beim IFN- gamma seit 1983 möglich. Seither werden bei einer systemischen Behandlung Dosen von weniger als 3 Millionen I. E. in der Regel nur in Toleranz- und Toxizitätsprüfungen sowie in pharmakokinetischen Studien eingesetzt.In the early days of therapeutic use of inferferons were due to the lack of suitable biotechnological manufacturing processes these substances only in such small quantities available that only doses of less than 3 million I. E. could be administered. The use of higher doses is at IFN-alpha and IFN-beta since the mid-seventies, IFN-alpha gamma possible since 1983. Since then, at a systemic Treatment doses of less than 3 million I. E. usually only in tolerance and toxicity tests as well as in pharmacokinetic Studies used.

Aufgrund der antiviralen, antiproliferativen und immunmodulierenden Wirkung werden die Interferone vornehmlich bei Tumoren und Viruserkrankungen klinisch eingesetzt. Für IFN-alpha und IFN-beta gilt, daß bei der systemischen Behandlung dieser Erkrankungen Dosen bis zu ca. 3 Millionen I. E. entweder unwirksam oder höheren Dosen unterlegen sind (Tumoren: Kirkwood, J. M. und Ernstoff, M. S. J. Clin. Oncol. 2, 336-352, 1984; Billiau, A.: Contr. Oncol. 20, 251-269, 1984; Bonnem, E. M. und Spiegel, R. J.: J. Biol. Resp. Modif. 3, 580-598, 1984; Viruserkrankungen: Merigan, T. C. et al.: N. Engl. J. Med. 298, 981-987, 1978; Heidemann, E. et al. Dtsch. Med. Wschr. 107, 695-697, 1982; Levin, S.: Isr. J. Med. Sci. 19, 955-958, 1983; Billiau, A.: s. o., Greenberg, S. B. und Harmon, M. W., Armstrong, J. A. in Came, P. E. und Carter, W. A.: Interferons and Their Applications. Springer Verlag, Berlin 1984). Lediglich bei lokaler Behandlung (intratumorale, peritumorale, intraventrikuläre intrathekale, intraläsionale, periläsionale oder intranasale Applikation) zeigen Dosen von weniger als 3 Millionen I. E. örtlich eine vergleichbare Wirksamkeit wie eine systematische Applikation höherer Dosen (Literatur s. o.).Due to the antiviral, antiproliferative and immunomodulatory The effect of interferons is primarily on tumors and viral diseases used clinically. For IFN-alpha and IFN-beta, that in the systemic treatment of these diseases doses up to about 3 million I. E either ineffective or higher doses inferior (tumors: Kirkwood, J.M. and Ernstoff, M.S.J. Clin. Oncol. 2, 336-352, 1984; Billiau, A .: Contr. Oncol. 20 251-269, 1984; Bonnem, E.M. and Spiegel, R.J .: J. Biol. Resp. Modif. 3, 580-598, 1984; Viral Diseases: Merigan, T.C. et al .:  N. Engl. J. Med. 298, 981-987, 1978; Heidemann, E. et al. Dtsch. Med. Wschr. 107, 695-697, 1982; Levin, S .: Isr. J. Med. Sci. 19 955-958, 1983; Billiau, A .: s. o., Greenberg, S. B. and Harmon, M.W., Armstrong, J.A. in Came, P.E. and Carter, W.A .: Interferons and their applications. Springer Verlag, Berlin 1984). Only with local treatment (intratumoral, peritumoral, intraventricular intrathecal, intralesional, perilesional or intranasal Application) show doses of less than 3 million I. E. locally a comparable effectiveness as a systematic application higher doses (literature see above).

Bei akuten Viruserkrankungen wie Herpes zoster hat sich eine Dosis von 0,5 Millionen I. E. IFN-alpha oder IFN-beta pro kg Körpergewicht und Tag bewährt, d. h. bei Erwachsenen täglich ca. 30 Millionen I. E. (Merigan, T. C.: s.o.; Heidemann, E. et al.: Onkologie 7, 210-212, 1984). Bei chronischen Viruserkrankungen wie der chronisch aktiven Hepatitis B werden in der Regel 3-10 Millionen I.E. IFN- alpha oder IFN-beta täglich oder 3mal wöchentlich gegeben (Müller, R. et al.: Z. Gastroenterologie 20, 105-109, 1982; Billiau, A.: s.o.; Levin, S.: s.o.).In acute viral diseases such as herpes zoster has a dose of 0.5 million I. E. IFN-alpha or IFN-beta per kg of body weight and day proven, d. H. in adults daily about 30 million I. E. (Merigan, T.C., supra; Heidemann, E. et al .: Oncology 7, 210-212, 1984). In chronic viral diseases like the chronic active hepatitis B will usually be 3-10 million I.E. IFN- given alpha or IFN-beta daily or 3 times a week (Müller, R. et al .: Z. Gastroenterology 20, 105-109, 1982; Billiau, A .: s.o .; Levin, S .: s.o.).

Die amyotrophische Lateralsklerose (ALS) ist eine Systemerkrankung des Zentralnervensystems, bei der es zu einer fortschreitenden Degeneration des 1. und 3. Neurons der Willkürmotorik kommt. Klinisch ist das Krankheitsbild durch die Kombination von atrophischen und spastischen Lähmungen charakterisiert, die in der Regel symmetrisch bilateral auftreten. Die mittlere Krankheitsdauer beträgt 3-4 Jahre, die Prognose ist infaust. Eine Therapie der ALS gibt es nicht. Die Ätiologie der Erkrankung ist unbekannt, diskutiert werden eine slow virus-Infektion und autoimmune Prozesse (Poeck, K. Neurologie. Springer Verlag Berlin 1977). Der Nachweis viraler Antigene konnte bislang aber nicht erbracht werden (Färkkilä, M. A. Act. Neur. Sci. 69, 184-185, 1984).Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a systemic disease of the central nervous system, in which there is a progressive Degeneration of the 1st and 3rd neurons of voluntary motor skills comes. clinical is the disease by the combination of atrophic and characterized by spastic paralysis, which is usually symmetrical occur bilaterally. The median disease duration is 3-4 Years, the prognosis is in vain. There is a therapy of ALS Not. The etiology of the disease is unknown, discussed be a slow virus infection and autoimmune processes (Poeck, K. Neurology. Springer Verlag Berlin 1977). The detection of viral However, antigens could not be provided so far (Färkkilä, M.A. Act. Neur. Sci. 69, 184-185, 1984).

Aufgrund der möglichen virusbedingten Genese der ALS wurde ein Therapieversuch mit IFN-alpha unternommen. In den zunächst durchgeführten pharmakokinetischen Untersuchungen, bei denen intravenös und subcutan 3-6 × 10⁶ I. E. appliziert wurden, konnte keine Interferonaktivität in der Cerebrospinalflüssigkeit des Gehirns festgestellt werden (Jablecki, C. et al. Ann. Neurol. 10, 82, 1981). Da die antiviale Wirkung der Interferone einen direkten Kontakt mit dem Zielgewebe erfordert, schlagen die Autoren für weitere Untersuchungen vor, IFN-alpha intrathekal, d. h. lokal, zu applizieren bzw. bei systematischer Verabreichung sehr hohe Dosen zu verwenden. Diese Lehre wurde von Färkkilä et al. (s.o.) aufgegriffen, die ihren Patienten 100-200 × 10⁶ I.E. pro Tag über 6 Tage intravenös verabreichten. Mit dieser ungewöhnlichen hohen Dosis war bei einigen Patienten ein Therapieeffekt zu beobachten.Due to the possible virus-related genesis of ALS was a Therapy with IFN-alpha. In the first performed Pharmacokinetic studies in which intravenous and subcutaneous 3-6 × 10⁶ I. E. were administered, no interferon activity detected in the cerebrospinal fluid of the brain  (Jablecki, C. et al., Ann Neurol., 10, 82, 1981). Because the antivial effect of interferons in direct contact with Requires the target tissue, the authors suggest for further investigation before, IFN-alpha intrathecal, d. H. locally, to apply or to use very high doses when administered systemically. This teaching has been described by Färkkilä et al. (s.o.) taken up, the their patients 100-200 × 10⁶ I.E. intravenously per day for 6 days administered. With this unusual high dose was with some Patients observe a therapeutic effect.

Ausgehend von vorklinischen Untersuchungen, in denen sich IFN-gamma stärker antiproliferativ bzw. antitumoral zeigte als IFN-alpha oder IFN-beta, wurden bislang nur Patienten, die an malignen Erkrankungen litten, mit IFN-gamma behandelt (Yamazaki, S.: Jpn. J. Med. Sci. Biol. 37, 209-223, 1984; Sherwin, S.A. et al.: J. Biol. Resp. Modif. 3, 599-607, 1984; Guttermann, J. U. et al.: Cancer Res. 44, 4164-4171, 1984; Niederle et al. in Kirchner, H. und Schellekens H.: The Biology of the Interferon System 1984, Elsevier, Amsterdam 1985).Based on preclinical studies in which IFN-gamma more antiproliferative or antitumoral than IFN-alpha or IFN-beta, so far have been only patients suffering from malignancies suffered, treated with IFN-gamma (Yamazaki, S .: Jpn. J. Med. Sci. Biol. 37, 209-223, 1984; Sherwin, S.A. et al .: J. Biol. Resp. Mod. 3, 599-607, 1984; Guttermann, J.U. et al .: Cancer Res. 44, 4164-4171, 1984; Niederle et al. in Kirchner, H. and Schellekens H .: The Biology of the Interferon System 1984, Elsevier, Amsterdam 1985).

Aufgrund von In-vitro-Untersuchungen gilt IFN-gamma als weniger antiviral wirksam als IFN-alpha oder IFN-beta (z. B. Munoz, A., Carrasco, L.: FEMS Microbiol. Letters 21, 105-111, 1984). Aus diesem Grunde wurde IFN-gamma für die systematische Behandlung von Viruserkrankungen bislang nicht eingesetzt.Due to in vitro studies, IFN-gamma is considered to be less antivirally effective as IFN-alpha or IFN-beta (eg Munoz, A., Carrasco, L .: FEMS Microbiol. Letters 21, 105-111, 1984). Out For this reason, IFN-gamma has been used for the systematic treatment of Viral diseases have not been used.

Bei Autoimmunerkrankungen gilt IFN-gamma als kontraindiziert. Es verstärkt die Expression von Oberflächenantigenen sowohl der Klasse I als auch der Klasse II (Trinchieri, G.T. und Perussia, B.: Immunology Today 6, 131-136, 1985). Lokale aberrante Expression der Oberflächenantigene der Klasse II gilt u. a. als Ursache für die Bildung von Auto-Antikörpern und somit lokaler Destruktion (Editorial, Lancet ii, 78-79, 1985). Außerdem stimuliert IFN-gamma generell die Bildung von Antikörpern (Trinchieri, G.T. und Perussia, B. s. o.; Leibson, H. J. et al.: Nature 309, 799-801, 1984). In autoimmune diseases, IFN-gamma is considered contraindicated. It enhances the expression of surface antigens of both the Class I and Class II (Trinchieri, G.T. and Perussia, B.: Immunology Today 6, 131-136, 1985). Local aberrant expression the surface antigens of class II are u. a. as cause for the formation of auto-antibodies and thus local destruction (Editorial, Lancet ii, 78-79, 1985). In addition, IFN-gamma stimulates in general, the formation of antibodies (Trinchieri, G. T. and Perussia, B. s. O.; Leibson, H.J. et al .: Nature 309, 799-801, 1984).  

Die DE-OS 30 01 585 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung von IFN-gamma in Human-Lymphoblasten-Zellinien. Es werden weiterhin in vitro und in vivo Versuche beschrieben, in denen die bekannte antivirale, antiproliferative und antitumorale Wirkung von IFN-gamma gezeigt wird.DE-OS 30 01 585 describes a process for the preparation of IFN-gamma in human lymphoblast cell lines. It will continue to be in vitro and in vivo experiments in which the known antiviral, antiproliferative and antitumoral effect of IFN-gamma.

In Praxis-Kurier 19, 12. Mai 1980, S. 10 wird berichtet, daß IFN-gamma möglicherweise für die Behandlung des Myeloms und des Kaposi-Sarkoms geeignet ist.In Praxis-Kurier 19, May 12, 1980, p. 10 it is reported that IFN-gamma possibly for the treatment of myeloma and Kaposi's sarcoma suitable is.

In der Münch. Med. Wschr. 126, 1984, Nr. 17, S. 28 wird ausgesagt, daß IFN-gamma das Wachstum von Tumoren hemmt und andererseits das Immunsystem zur Abwehr gegen Tumorzellen stimuliert.In the Münch. Med. Wschr. 126, 1984, No. 17, p. 28, it is stated that IFN-gamma inhibits the growth of tumors and, secondly, the immune system stimulated to defend against tumor cells.

In der US-PS 45 07 281 wird eine Zusammensetzung, die bevorzugt IFN- alpha enthält zur topischen Behandlung von durch Herpes simplex hervorgerufenen Infektionen beschrieben.In US-PS 45 07 281 is a composition which preferably IFN alpha contains for the topical treatment of caused by herpes simplex Infections are described.

Von G. R. Adolf werden in einem Abstract, präsentiert auf dem 3rd European Conference on Clinical Oncology and Cancer Nursing, Stockholm, 17. Juni 1985 im Abschnitt "Rekombinant Interferon-alpha 2 and Gamma" die für diese Substanzen bekannten biologischen Eigenschaften aufgelistet, u. a. die antivirale in vitro als auch in vivo Wirkung von IFN-gamma, sowie dessen cytostatische und toxische Aktivität auf Tumorzellen in vitro und im Tiermodell.By G. R. Adolf will be presented in an abstract, presented on the 3rd European Conference on Clinical Oncology and Cancer Nursing, Stockholm, 17. June 1985 in the section "Recombinant Interferon-alpha 2 and Gamma" the listed for these substances known biological properties, u. a. the antiviral in vitro and in vivo effects of IFN-gamma, as well as its cytostatic and toxic activity on tumor cells in in vitro and in animal models.

Jablecki berichtet in Ann. of Neurology Vol. 10, Nr. 1, Juli 1981, S. 82 über den Nachweis von IFN-alpha im Serum und in der cerebrospinalen Flüssigkeit von ALS- und Multiple Sklerosis Patienten bei wiederholter Gabe von 3 bis 6 × 10⁶ IU von IFN. Über irgendwelche Behandlungserfolge wird nichts berichtet.Jablecki reports in Ann. of Neurology Vol. 10, No. 1, July 1981, p. 82 on the detection of IFN-alpha in the serum and in the cerebrospinal Fluid from ALS and multiple sclerosis patients at repeated Administration of 3 to 6 × 10⁶ IU of IFN. About any treatment success nothing is reported.

Färkkilä berichtet in The Biology of the Interferon System 1984, Elsevier Science Publishers Amsterdam, New York, Oxford, 1985, S. 575 über die Behandlung von ALS Patienten mit hohen Dosen von IFN-alpha. Obwohl hohe Dosen von 100 bis 200 × 10⁶ I. U. pro Tag für 2 1/2 bis 5 Tage verabreicht wurden, war eine eindeutig positive Behandlung nicht erkennbar, wobei sich außerdem zeigte, daß IFN-alpha neurologische Wirkungen besitzt.Färkkilä reports in The Biology of the Interferon System 1984, Elsevier Science Publishers Amsterdam, New York, Oxford, 1985, p. 575 on the treatment of ALS patients with high doses of IFN-alpha. Although high doses of 100 to 200 × 10⁶ I.U. per day for 2 1/2 to 5  Days were administered, was not a clearly positive treatment recognizable, it also showed that IFN-alpha neurological Possesses effects.

Aufgrund der geringeren antiviralen Aktivität als IFN-alpha und der Wahrscheinlichkeit, autoimmune Prozesse zu verstärken, galt IFN-gamma als nicht wirksam bzw. kontraindiziert bei der ALS; für den Fachmann war daher ein Therapieversuch mit IFN-gamma a priori ausgeschlossen.Due to the lower antiviral activity than IFN-alpha and the probability of reinforcing autoimmune processes was true  IFN-gamma not effective or contraindicated in ALS; For the expert, therefore, was a therapeutic trial with IFN-gamma a excluded priori.

Um so mehr mußte es überraschen, daß bei systemischer Verabreichung von IFN-gamma in der niedrigen Dosis von 0,1-1,0 × 10⁶ I.E. dieses Krankheitsbild gebesser werden konnte (s. Beispiel 1 u. 2). Aufgrund der bisher bekannten, oben dargestellten Eigenschaften dieser Substanz kann für den therapeutischen Effekt bei der ALS bisher keine Hypothese formuliert werden. Es muß daher weiteren In-vitro- und In-vivo-Untersuchungen vorbehalten bleiben, für die Wirkungsweise von IFN-gamma bei der ALS eine Erklärung zu finden.It was all the more surprising that with systemic administration of IFN-gamma in the low dose of 0.1-1.0 x 10⁶ I.U. this Could be improved (see example 1 and 2). by virtue of the previously known, above properties of this Substance can be used for the therapeutic effect in ALS so far no hypothesis can be formulated. It must therefore be further in vitro and in vivo studies remain reserved for the mode of action of IFN-gamma at the ALS to find an explanation.

Für die systemische Behandlung können natürliches IFN-gamma und rekombinantes IFN-gamma wie folgt dosiert werden: intravenös als Bolus oder über mehrere Minuten, Stunden, Tage oder Wochen, intramuskulär und/oder subkutan. Die IFN-gamma enthaltende Präparation kann in einer Depotform für Polypeptidtherapeutika verabreicht werden. Außerdem ist eine systemische Verabreichung von IFN-gamma auch mit einem Nasenspray, Inhalationsspray oder mit einer Sublingualtablette möglich.For systemic treatment, natural IFN-gamma and recombinant IFN-gamma as follows: intravenously as Bolus or for several minutes, hours, days or weeks, intramuscularly and / or subcutaneously. The IFN-gamma-containing preparation can be used in a depot form for Polypeptidtherapeutika be administered. Besides that is a systemic administration of IFN-gamma also with a nasal spray, inhalation spray or with a sublingual tablet.

Eine Dosis von 20 000 I. E. bzw. ca. 2 µg bis zu 2 Millionen I. E. bzw. ca. 200 µg kann pro Tag einmalig gegeben werden oder portioniert mehrmalig. Bei mehrtägiger Gabe kann die Dosis von 0,02-2,0 × 10⁶ I. E. bzw. ca. 2-200 µg wie folgt verabreicht werden:A dose of 20,000 I.U. or approx. Up to 2 million I.U. or approx. 200 μg per day can be administered once per day be given or portioned several times. With several days of administration For example, the dose of 0.02-2.0 x 10⁶ I.U. or about 2 to 200 μg may be as follows be administered:

• a) an aufeinanderfolgenden Tagena) on consecutive days
• b) alle 2 bis 6 Tageb) every 2 to 6 days
• c) 1mal pro Wochec) once a week
• d) alle 2 bis 4 Wochend) every 2 to 4 weeks
• e) 1mal pro Monate) once a month

Die Dosis von 0,02-2,0 × 10⁶ I.E. bezieht sich auf einen Patienten von 60 kg Körpergewicht und 170 cm Körpergröße, entsprechend 1,74 qm Körperoberfläche (Dubois u. Dubois, Arch. intern. Med. 17, 863, 1916). Entsprechend wird für den einzelnen Patienten die individuelle Dosis ermittelt. The dose of 0.02-2.0 x 10⁶ I.E. refers to a patient of 60 kg body weight and 170 cm body size, corresponding to 1.74 square meters Body surface (Dubois and Dubois, Arch. Intern. Med. 17, 863, 1916). Accordingly, for the individual patient, the individual Dose determined.  

Zur Steigerung der Effektivität der Interferon-gamma-Präparationen können folgende Substanzen zusätzlich gegeben werden: andere Interferone und/oder andere von Leukozyten gebildete bzw. durch gentechnologische Verfahren hergestellte Zell-Mediatoren wie IL 1, IL 2, CSF, MIF, MAF, TNF, LT und FGF.To increase the effectiveness of interferon-gamma preparations the following substances may additionally be given: other interferons and / or other leukocytes cell mediators produced by genetic engineering such as IL 1, IL 2, CSF, MIF, MAF, TNF, LT and FGF.

Zur Herstellung der jeweiligen Darreichungsform werden die dem Fachmann bekannten Hilfsstoffe verwendet.For the preparation of the respective dosage form are the Expert known excipients used.

Beispiel 1example 1 Patient:Patient: W.W., männlich, 61 J., 65 kg, 175 cmW. W., male, 61 years, 65 kg, 175 cm Diagnose:Diagnosis: Amyotrophische LateralskleroseAmyotrophic lateral sclerosis Substanz:Substance: humane IFN-gamma-Präparation aus E. colihuman IFN-gamma preparation from E. coli Applikationsweise:Application way: intramuskulärintramuscularly Therapieschema:Regimen: 3mal pro Woche über 4 Wochen, Dosis von 0,1 × 10⁶ auf 1 × 10⁶ I. E. steigernd. Danach 1mal pro Woche 0,5 × 10⁶ I. E. über 4 Wochen.3 times a week over 4 weeks, increasing the dose from 0.1 x 10⁶ to 1 x 10⁶ I. E. Then once a week 0.5 × 10⁶ I. E. over 4 weeks. Ergebnis:Result: Unter Therapie besserten sich die Funktionen der oberen Extremität. Die Hände konnten wieder gebeugt und gestreckt werden, auch waren mäßige Streckungen und Beugungen sowie geringfügige Rotationen im Ellenbogengelenk möglich. Beim Schultergelenk war wieder eine geringe Elevation möglich.Therapy improved upper extremity functions. The hands could be flexed and stretched again, and moderate stretching and flexing as well as slight rotations in the elbow joint were possible. The shoulder joint was again low elevation possible.

Beispiel 2Example 2 Patient:Patient: W. S., männlich, 62 J., 73 kg, 170 cmW. S., male, 62 years, 73 kg, 170 cm Diagnose:Diagnosis: Amyotrophische Lateralsklerose fortgeschrittenes Stadium mit kompletter Paralyse der unteren Extremitäten und Teilparalyse der oberen ExtremitätenAmyotrophic lateral sclerosis advanced stage with complete paralysis of the lower extremities and partial paralysis of the upper extremities Substanz:Substance: humane IFN-gamma-Präparation aus menschlichen Leukozytenhuman IFN-gamma preparation from human leukocytes Applikationsweise:Application way: subcutansubcutaneously Therapieschema:Regimen: 0,1-1,0 × 10⁶ I.E. 3×/Woche über 6 Monate0.1-1.0 x 10⁶ I.E. 3 × / week over 6 months Ergebnis:Result: Während der Therapiedauer war die Erkrankung nicht weiter progredient. Die Sprache war gebessert.During the treatment period, the disease was not progressive. The language was improved.

Claims (5)

1. Verwendung von Interferon-gamma enthaltenden Präparationen mit einer Dosiseinheit von 20 000 bis 2 Millionen Internationalen Referenzeinheiten (I.E.) (entspr. ca. 2 bis 200 µg) zur systemischen Behandlung der amyotrophischen Lateralsklerose.1. Use of preparations containing interferon-gamma a unit dose of 20,000 to 2 million International Reference Units (I.E.) (approximately 2 to 200 μg) for systemic treatment amyotrophic lateral sclerosis. 2. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Interferon-gamma enthaltende Präparation zusätzlich andere Interferone und/oder andere durch Leukozyten gebildete bzw. durch gentechnologische Verfahren hergestellte Zell-Mediatoren enthält.2. Use according to claim 1, characterized that the preparation containing interferon-gamma additionally other interferons and / or others formed by leukocytes or containing cell mediators produced by genetic engineering. 4. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Präparation in einer intravenös, intramuskulär oder subkutan zu verabreichenden Applikationsform vorliegt.4. Use according to one of claims 1 or 2, characterized that the preparation in an intravenous, intramuscular or subcutaneously administered administration form. 4. Verwendung nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Präparation in einer Depotform für Polypeptidtherapeutika verabreicht wird.4. Use according to claim 1 to 3, characterized that the preparation in a depot form for Polypeptidtherapeutika is administered. 5. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Präparation als Nasenspray, Inhalationsspray oder als Sublingualtablette vorliegt.5. Use according to claim 1, characterized that the preparation as a nasal spray, inhalation spray or as Sublingual tablet is present.