DE3040005C2 - Aqueous, enzyme-containing, stabilized composition - Google Patents

Description

Die Erfindung bezieht sich auf eine wäßrige. enzymenthaltende. stabilisierte Zusammensetzung.The invention relates to an aqueous. enzyme-containing. stabilized composition.

Enzymenthallende Zusammensetzungen werden gewöhnlich in klinischen Analysen als enzymenthaltende Wirkstoffe, Standardenzympräparate oder als Katalysatoren in Form von löslichen Enzympräparaten verwendet. Es ist jedoch notwendig, die Aktivität der Enzyme derartiger enzymenthaltender Zusammensetzungen zu stabilisieren, da eine derartige Aktivität aufgrund des Gefriertrocknens. Lagerns und Wiederbereiistellens abnimmt. _M Enzyme-releasing compositions are commonly used in clinical analyzes as enzyme-containing agents, standard enzyme preparations, or as catalysts in the form of soluble enzyme preparations. However, it is necessary to stabilize the activity of the enzymes of such enzyme-containing compositions because such activity is due to freeze-drying. Storage and re-provisioning decreases. _M.

Bisher wurden Proteinpräparate, wie zum Beispiel Rinderalbuminserum (BSA) und Humanalbuminserum (HSA) als Stabilisatoren für enzymenthaltende Zusammensetzungen verwendet. Man dachte, daß diese Albumine auf die Enzyme eine stabilisierende Wirkung haben, indem sie als Schutzkolloide für die Enzyme in den enzymenthaltenden Zusammensetzungen wirken. Ebenfalls wurde Rohrzucker und seine Abkömmlinge zur Stabilisierung gewisser enzymenthaltenden Zusammensetzungen verwendet. Eine enzymenthaltende Zusammensetzung, die entweder mit BSA. HSA oder mit Rohrzucker alleine stabilisiert wurde, neigt jedoch beim Gefriertrocknen und darauffolgenden Lagern zur Inaktivierung. Setzt man gefriergetrocknete Präparate starken Deaktivierungsbedingungen (37°C oder 40⁰C) aus. so wird eine merkliche Veränderung der Aktivität der Enzyme im Verlauf der Zeit bewirkt.Heretofore, protein preparations such as bovine albumin serum (BSA) and human albumin serum (HSA) have been used as stabilizers for enzyme-containing compositions. It was thought that these albumins had a stabilizing effect on the enzymes by acting as protective colloids for the enzymes in the enzyme-containing compositions. Cane sugar and its derivatives have also been used to stabilize certain enzyme-containing compositions. An enzyme-containing composition that is compatible with either BSA. HSA or stabilized with cane sugar alone, however, tends to inactivate during freeze-drying and subsequent storage. Substituting from lyophilized preparations strong deactivation conditions (37 ° C or 40 ⁰ C). this causes a noticeable change in the activity of the enzymes with the passage of time.

Es ist daher Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine wäßrige, enzymenthaltende. stabilisierte Zusammensetzung zu schaffen, die weniger zur Inaktivierung aufgrund des Gefriertrocknens neigt.It is therefore an object of the present invention to provide an aqueous, enzyme-containing. stabilized composition which is less prone to inactivation due to freeze-drying.

Diese Aufgabe wird durch die in Anspruch 1 gekennzeichnete Erfindung gelöst.This object is achieved by the invention characterized in claim 1.

Vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung ergeben sich aus den Unteransprüchen.Advantageous refinements of the invention emerge from the subclaims.

Man hat also nun herausgefunden, daß ein Stabilisator, der sowohl bestimmte Proteine als auch Rohrzucker in bestimmten Mengen enthält, bewirkt, daß enzymenthaltende Zusammensetzungen ihre Enzym-Aktivität ungeachtet des Gefriertrocknens und darauffolgenden Lagerns beibehalten. Eine derartige Stabilisierung kann nicht durch die Verwendung entweder von Rohrzucker oder Albumin allein erreicht werden.So it has now been found that a stabilizer, both certain proteins and cane sugar Containing in certain amounts, enzyme-containing compositions cause their enzyme activity retained regardless of freeze-drying and subsequent storage. Such stabilization can cannot be achieved by using either cane sugar or albumin alone.

Eine enzymenthaltende Zusammensetzung gemäß der Erfindung kann ohne wesentliche Verminderung der Enzymaktivität gefriergetrocknet werden, wobei das gefriergetrocknete Produkt seine Enzymaktivität über eine längere Zeitdauer behält.An enzyme containing composition according to the invention can without substantial reduction in the Enzyme activity are freeze-dried, whereby the freeze-dried product has its enzyme activity over retains a longer period of time.

Ausführungsbeispiele der Erfindung werden im folgenden beschrieben.Embodiments of the invention are described below.

Die wäßrige, enzymenthaltende, stabilisierte Zusammensetzung enthält Rohrzucker in Verbindung entweder mit BSA oder HSA. Besondere Verhältnisse von Rohrzucker zu BSA oder HAS in der Zusammensetzung stabilisieren die Enzyme auf bezeichnende Weise. Das Gewichtsverhältnis des Rohrzuckers zu BSA oder HSA in dem Stabilisator bewegt sich von 1 : 0,4 bis 1 : 2,5. Ein zweckmäßiges Verhältnis besteht aus 1 Teil Rohrzucker zu 1 bis 2,5 Teilen BSA oder HSA und ein noch besseres Verhältnis besteht aus 1 Teil Rohrzucker zu 1 bis 2 Teilen BSA oder HSA. Die obenerwähnte Zusammensetzung enthält Rohrzucker in Mengen von 0,5 bis 10.0% (GewyVcl.), zweckmäßig 1,0 bis 10,0% (Gew./ Vol.) und noch besser 2,5 bis 10,0% (Gew./Vol.).The aqueous, enzyme-containing, stabilized composition contains either cane sugar in combination with BSA or HSA. Special proportions of cane sugar to BSA or HAS in the composition stabilize the enzymes in a significant way. The weight ratio of the cane sugar to BSA or HSA in the stabilizer ranges from 1: 0.4 to 1: 2.5. A convenient ratio is 1 part cane sugar to 1 to 2.5 parts BSA or HSA and an even better ratio consists of 1 part cane sugar to 1 to 2 parts BSA or HSA. The above-mentioned composition contains cane sugar in amounts from 0.5 to 10.0% (weight / volume), expediently 1.0 to 10.0% (weight / volume) and even better 2.5 to 10.0% (weight / volume).

Die Zusammensetzung kann zur Stabilisierung der verschiedensten Enzyme verwendet werden. Enzyme, wie z. B. Transaminase, Phosphatase und Dehydrogenase und besondere Enzyme wie z. B. Glutamat-Oxalacetat-Transaminase (GOT), Glutamat-Pyruvat-Transaminase (GPT), alkalische Phosphatase (ALP) und Laktat-Dehydrogenase (LDH) werden mit der vorliegenden Zusammensetzung auf bezeichnete Weise stabilisiert.The composition can be used to stabilize a wide variety of enzymes. Enzymes, such as B. transaminase, phosphatase and dehydrogenase and special enzymes such. B. Glutamate oxaloacetate transaminase (GOT), glutamate pyruvate transaminase (GPT), alkaline phosphatase (ALP) and lactate dehydrogenase (LDH) are stabilized with the present composition in a designated manner.

Zur Herstellung der Zusammensetzung wird eine bestimmte Menge Rohrzucker und BSA oder HSA in destilliertem Wasser aufgelöst. Eine bestimmte vorgeschriebene Menge der Zusammensetzung wird dann zu einem Enzym oder zu einer enzymenthaltenden Zusammensetzung hinzugegeben. Alternativ kann Rohrzucker, BSA oder HSA und Enzym oder eine enzymenthaltende Zusammensetzung in bestimmten vorgeschriebenen Mengen destilliertem Wasser gleichzeitig zugegeben und zur Herstellung einer fertigen Mischung, die von jedem die gewünschte Konzentration enthält, gemischt werden.To make the composition, a certain amount of cane sugar and BSA or HSA is in dissolved in distilled water. A certain prescribed amount of the composition is then added to added to an enzyme or to an enzyme-containing composition. Alternatively can Cane sugar, BSA or HSA and enzyme or an enzyme-containing composition in certain prescribed amounts of distilled water are added at the same time and used to prepare a finished Mixture containing the desired concentration of each.

Die enzymenthaltende stabilisierte Zusammensetzung kann unmittelbar nach der Herstellung verwendet oder gefriergetrocknet und darauffolgend nach Wiederbereitstellung mittels destillierten Wassers verwendet werden.The enzyme-containing stabilized composition can be used immediately after preparation or freeze-dried and then used after reconstitution with distilled water will.

Die Erfindung soll durch die folgenden Beispiele erläutert werden, in denen Änderungen der Enzymaktivität der Proben bestimmt wurden, wobei die Proben eine wäßrige Lösung eines von verschiedenen Enzymen und eine besondere Stabilisatorverbindung enthielten. Verschiedene Stabilisatorverbindungen sind in Tabelle 1 gezeigt.The invention is illustrated by the following examples, in which changes in enzyme activity of the samples were determined, the samples being an aqueous solution of one of various enzymes and contained a special stabilizer compound. Various stabilizer compounds are shown in the table 1 shown.

Tabelle 1Table 1

Gehalt von Stabilisatoranteilen in den ProbenContent of stabilizer components in the samples

RohrzuckerCane sugar

Proben Nr.Sample no. 5%5% 2,5%2.5% 1,0%1.0% 0,5%0.5% BSA oder HSABSA or HSA (Gew./Vol.)(W / v) (Gew./Vol.)(W / v) (Gew./Vol.)(W / v) (Gew./Vol.)(W / v) 10%10% 66th 1111th 1616 2121 (Gew./Vol.)(W / v) 77th 1212th 1717th 2222nd 11 88th 1313th 1818th 2323 22 99 1414th 1919th 2424 33 1010 1515th 2020th 2525th 44th 55

10% (Gew./Vol.)
5% (Gew./Vol.)
2,5% (Gew./Vol.) 1,0% (Gew./Vol.) 0,5% (Gew./Vol.)10% (w / v)
5% (w / v)
2.5% (w / v) 1.0% (w / v) 0.5% (w / v)

Jede Probe wurde hergestellt, indem man die erforderliche Menge Rohrzucker und BSA, wie in Tabelle 1 gezeigt, in destilliertem Wasser gelöst hat 30 00OmU 37° C), woraufhin ausreichend destilliertes Wasser hinzugefügt wurde um ein Endvolumen von 100 ml zu erreichen. Lösungsteilmengen von 1 mlEach sample was prepared by adding the required amount of cane sugar and BSA as in Table 1 shown, dissolved in distilled water has 30 00OmU 37 ° C), whereupon sufficiently distilled Water was added to achieve a final volume of 100 ml. Solution aliquots of 1 ml

(z. B. Probe 1, 10 mg Rohrzucker und 10 mg BSA) und 20 wurden in Ampullen gefüllt, gefriergetrocknet und bei 10 μΙ Enzymlösung hinzugefügt hat (etwa 25 000 bis 40"Cüber verschieden lange Zeiträume gelagert.(e.g. sample 1, 10 mg cane sugar and 10 mg BSA) and 20 were filled into ampoules, freeze-dried and in 10 μΙ has added enzyme solution (about 25,000 to 40 "C stored over different periods of time.

Beispiel 1
Stabilisierung von Glutamat-Oxalacetat-Transaminase (GOT)-Aktivitätexample 1
Stabilization of glutamate oxaloacetate transaminase (GOT) activity

Die verschiedenen Proben enthielten eine Flüssigkeitsfraktion GOT (s-GOT), die sich über den Zellen abscheidet, als Enzym. Die gefriergetrockneten Präparate wurden mit 1,0 ml destilliertem Wasser wieder bereitgestellt und 0,2 ml Teilmengen wurden von jeder Ampulle genommen. Das GOT-Aktivitätsniveau (mU/ml bei 37°C) jeder Teilmenge wurde mittels eines Raten-Analysenverfahrens unter Verwendung von LKB 8600-GOT-¹J?! Testreagenz untersucht und die Ergeb- j nisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Das nach verschiede-Lagerzeiten verbleibende GOT-AktivitätsniveauThe various samples contained a liquid fraction GOT (s-GOT), which is deposited on the cells, as an enzyme. The freeze-dried preparations were replenished with 1.0 ml of distilled water and 0.2 ml aliquots were taken from each vial. The GOT activity level (mU / ml at 37 ° C) of each aliquot was determined by a rate analysis method using LKB 8600-GOT- ¹ J ?! Examined test reagent and the results-j nep are shown in Table 2 below. The level of GOT activity remaining after various storage times

nen wird als prozentuales Verhältnis der unmittelbar nach dem Gefriertrocknen verbleibenden Aktivität ausgedrückt, wobei letzteres als 100% definiert ist.nen is expressed as the percentage of the activity remaining immediately after freeze-drying, the latter being defined as 100%.

Tabelle 2Table 2

Aktivitätsänderung von GOT in Abhängigkeit von der ZeitChange in activity of GOT as a function of time

Proben Nr.Sample no.

Unmittelbar nach dem GefriertrocknenImmediately after freeze drying

Verstrichene LagerzeitElapsed storage time

1 Woche 1 Monat1 week 1 month

2 Monate2 months

3 Monate3 months

100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100

100.6100.6 101.2101.2 96.396.3 94.994.9 101.9101.9 98.998.9 91.891.8 (75.4)(75.4) 81.581.5 (72.0)(72.0) (62.5)(62.5) (57.8)(57.8) 87.387.3 (65.0)(65.0) (58.9)(58.9) -- (75.1)(75.1) -- -- -- 98.098.0 85.285.2 (53.6)(53.6) -- 101.6101.6 91.091.0 85.485.4 (77.0)(77.0) 94.594.5 90.690.6 8L78L7 (73.0)(73.0) 83.383.3 (63.8)(63.8) (52.2)(52.2) -- 80.180.1 (55.9)(55.9) -- -- 89.489.4 (60.5)(60.5) -- -- 102.5102.5 (71.1)(71.1) (55.1)(55.1) -- 100.6100.6 94.294.2 81.981.9 (57.8)(57.8) 96.696.6 90.990.9 (74.3)(74.3) (51.8)(51.8) 90.090.0 (59.2)(59.2) -- -- 77.377.3 -- -- -- (77.6)(77.6) (50.1)(50.1) -- -- 91.391.3 (67.5)(67.5) -- -- 94.194.1 81.981.9 (58.8)(58.8) -- 95.295.2 (72.5)(72.5) (55.5)(55.5) -- (64.2)(64.2) __ —- __

!'rohen Nr.! 'raw no.

Unmittelbar
nach dem
GefriertrocknenDirect
after this
Freeze drying

Vcrs;richene Lager/eilVcrs; richene stock / eil

! Woche 1 Monal! Week 1 Monal

2 Monate2 months

3 Monate3 months

2222nd 100100 2323 100100 2424 100100 2525th 100100

(72.1)(72.1) (64.3)(64.3) (77.6)(77.6) (56.9)(56.9) 86.786.7 (63.2)(63.2)

(51.4)(51.4)

Bemerkungen:Remarks:

- : GOT Aklivitätsniveau weniger als 50%. (): GOT Aktivitätsniveau 50% bis 80%.-: GOT level of awareness less than 50%. (): GOT activity level 50% to 80%.

Diese Ergebnisse zeigen, daß eine bezeichnende Stabilisierungswirkung in den Proben Nr. 1. 2. 6. 7. 8, 12. !J. \4. !8 und !9 erhallen wurde.These results show that a significant stabilizing effect was found in Sample Nos. 1, 2, 6, 7, 8, 12th! \ 4. ! 8 and! 9 was echoed.

Um weiter die Wirkung der Zusammensetzung >o darzustellen, wurde eine Reihe von 4 Lösungen mitochondrialem GOT (m-GOT) hergestellt. Die erste Lösung enthielt Enzyme ohne irgendein hinzugefügtes Stabilisierungsmittel und die zweite Lösung enthielt Enzyme mit 10% (Gew./Vol.) BSA, die dritte Lösung enthielt Enzyme mit 10% (GewVVol.) Rohrzucker und die vierte Lösung enthielt Enzyme sowohl mit 10%To further illustrate the effect of the composition, a series of 4 solutions mitochondrial GOT (m-GOT). The first Solution contained enzymes without any added stabilizer and the second solution contained Enzymes with 10% (w / v) BSA, the third solution contained enzymes with 10% (w / v) cane sugar and the fourth solution contained enzymes with both 10%

Tabelle 3
Aktivitätsniveau (mil)Table 3
Activity level (mil)

(GewVVol.) BSA und 10% (GewVVol.) Rohrzucker, d. h. eine besondere Form des Stabilisators. Eine ähnliche Reihe Lösungen wurde hergestellt, indem man als Enzym die sich über der Zellen abscheidende Flüssigkeitsfraktion von GOT (s-GOT) verwendete. Die Enzymaktivität jeder Lösung in den zwei Reihen wurde unmittelbar vor dem Gefriertrocknen, unmittelbar danach und nach zwei Monaten Lagerzeit bei 40⁰C gemessen.(Weight / volume) BSA and 10% (weight / volume) cane sugar, ie a special form of the stabilizer. A similar series of solutions was prepared using the liquid fraction of GOT (s-GOT) which separates on the cells as the enzyme. The enzyme activity of each solution in the two rows was measured immediately before freeze-drying, and immediately thereafter, after two months of storage at 40 ⁰ C.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt.The results are shown in Table 3.

GOT mit AdditivGOT with additive

vor Gefriertrocknen nach Gefriertrocknenbefore freeze drying after freeze drying

nach 2 Monatenafter 2 months 40 C40 C beiat 00 00 .4.4 1111th .5.5 77th 00 00 .3.3 137137 .6.6 179179

ohne Stabilisatorwithout stabilizer 142.9142.9 m-GOTm-GOT 132.9132.9 s-GOTs-GOT 10Gew./Vol.-%BSA10% w / v BSA 142.4142.4 m-GOTm-GOT 133.2133.2 s-GOTs-GOT 10 Gew./Vol.-% Rohrzucker10% w / v cane sugar 142.9142.9 m-GOTm-GOT 132.5132.5 s-GOTs-GOT 10 Gew./Vol.-% BSA und 10 Gew./Vol.-%10% w / v BSA and 10% w / v RohrzuckerCane sugar 142.6142.6 m-GOTm-GOT 132.9132.9 s-GOTs-GOT

Diese Versuche zeigen, daß eine GOT-Lösung. erfindungsgemäß stabilisiert, weit besser stabilisiert war als eine, die nur Rohrzucker oder nur BSA enthielt. Sogar bei strengen Inaktivierungsversuchen. die eine 1.3
1.0These experiments show that a GOT solution. stabilized according to the invention, was stabilized far better than one which contained only cane sugar or only BSA. Even with strict inactivation attempts. the one 1.3
1.0

140.8
72.0140.8
72.0

3.83.8

13.113.1

142.4
130.3142.4
130.3

2monatige Lagerung der gefriergetrockneten Lösung bei 40°C umfaßten, wurde die GOT-Aktiviiat erfin· dungsgemäß beibehalten.Including 2 months of storage of the freeze-dried solution at 40 ° C, the GOT Aktiviiat was invented. duly maintained.

Beispiel 2
Stabilisation von Glutamat-Pyrovat-Transaminase (GPT)-AktivitätExample 2
Stabilization of glutamate pyrovate transaminase (GPT) activity

Die verschiedenen Proben enthielten GPTaIs F.nzym. Die gefriergetrockneten Präparate wurden mit 1 ml destilliertem Wasser wieder bereitgestellt und zwei 0,2 ml Teilmengen wurden von jeder Ampulle entnommen. Das CJPT-Aktivitätsniveau jeder Teilmenge wurde mittels Raten-Analyseverfahren unter Verwendung von LKB 8600-GPT UV Testwirkstoff gemessen und die Ergebnisse sind in Tabelle 4 dargestellt. Das verbleibende GPT-Aktivitätsnivcau nach verschiedenen Lagerzeilcn wird als prozentuales Verhältnis der unmittelbar nach dem Gefriertrocknen verbleibenden Aktivität, die als 100% definiert ist. ausgedrückt.The various samples contained GPTaIs F. enzyme. The freeze-dried preparations were replenished with 1 ml of distilled water and two 0.2 ml aliquots were withdrawn from each vial. The CJPT activity level of each subset was measured by the rate analysis method using LKB 8600-GPT UV test active ingredient and the Results are shown in Table 4. The remaining GPT activity level according to various storage lines is expressed as the percentage of the activity remaining immediately after freeze-drying, the is defined as 100%. expressed.

Tabelle 4Table 4

Aktivitatsänderung von GPT in Abhängigkeit von der ZeitChange in activity of GPT as a function of time

Proben Nr.Sample no.

Unmittelbar
nach dein
GefriertrocknenDirect
according to your
Freeze drying

Verstrichene LagerzeitElapsed storage time

Woche I MonatWeek I month

2 Monate2 months

3 Monate3 months

11 100100 22 100100 33 100100 44th 100100 55 100100 66th 100100 77th 100100 88th 100100 99 100100 1010 100100 1111th 100100 1212th 100100 1313th 100100 1414th 100100 1515th 100100 1616 100100 1717th 100100 1818th 100100 1919th 100100 2020th 100100 2121 100100 2222nd 100100 2323 100100 2424 100100 2525th 100100 Bemerkungen:Remarks:

96.196.1 93.393.3 89.389.3 (78.4)(78.4) 86.286.2 80.780.7 (72.4)(72.4) -- (59.3)(59.3) -- -- -- 82.182.1 (67.2)(67.2) -- -- (78.3)(78.3) (68.8)(68.8) -- -- 98.398.3 92.792.7 86.386.3 (72.8)(72.8) 98.998.9 95.495.4 94.194.1 92.292.2 89.889.8 81.381.3 (73.5)(73.5) -- (76.3)(76.3) (62.9)(62.9) -- -- 69.169.1 -- -- -- 93.293.2 (69.6)(69.6) -- 99.599.5 92.392.3 87.687.6 (78.0)(78.0) 92.192.1 88.788.7 82.482.4 (75.1)(75.1) 86.386.3 82.582.5 (79.8)(79.8) -- (73.8)(73.8) -- -- -- (79.4)(79.4) -- -- 82.582.5 (68.1)(68.1) -- -- 92.192.1 89.089.0 83.583.5 -- 90.690.6 87.387.3 (78.9)(78.9) -- (78.9)(78.9) -- -- -- (73.4)(73.4) -- -- -- (67.6)(67.6) -- -- -- (79.8)(79.8) -- -- -- 90.390.3 (80.0)(80.0) -- -- 88.688.6 (71.1)(71.1) -- __

- : GPT-Aktivitätsniveau weniger als 50%. O : GPT-Aktivitätsniveau 50% bis 80%.-: GPT activity level less than 50%. O: GPT activity level 50% to 80%.

Diese Ergebnisse zeigen, daß eine bezeichnende Stabilisierungswirkung in den Proben 1. 2. 6. 7. 8. 12. 13, 14.18 und 19 erhalten wurde.These results show that a significant stabilizing effect in the samples 1. 2. 6. 7. 8. 12. 13, 14.18 and 19 was received.

B e i s ρ i e 1 3 50B e i s ρ i e 1 3 50

Stabilisierung von alkalischer Phosphatase (ALP)-AktivitätStabilization of alkaline phosphatase (ALP) activity

Die verschiedenen Proben enthielten ALP als Enzym. Das gefriergetrocknete Präparat wurde mit 1.0 ml 55The various samples contained ALP as an enzyme. The freeze-dried preparation was 1.0 ml 55

Tändle 5Tändle 5

destilliertem Wasser wieder bereitgestellt und zwei 0.2 ml Teilmengen wurden von jeder Ampulle entnommen. Das ALP-Aktivitätsniveau jeder Teilmenge wurde mittels des Raten-Analysenverfahrens unier Verwendung von LKB 8600-ALP Aktivitätsbestimmungsreager.z gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 gezeigt. Das ALP-Aktivitätsniveau nach verschiedenen Lagerzeiten wird als prozentuales Verhältnis der Aktivität unmittelbar nach dem Gefriertrocknen, die als 100% definiert ist. ausgedrückt.distilled water was again provided and two 0.2 ml aliquots were withdrawn from each vial. The ALP activity level of each subset was determined using the rate analysis method measured by LKB 8600-ALP activity determination reager. The results are shown in Table 5. The ALP activity level after different storage times is expressed as a percentage ratio of the activity immediately after freeze-drying, which is defined as 100%. expressed.

Akiiviuitsänderung von ALP in Abhängigkeit von der ZeilChange in activity of ALP depending on the cell

Proben NrSample no UnmittelbarDirect VerstricheneElapsed LagertenCamped 1 Mon.il1 month il nach demafter this i Wochei week Ciefricr-Ciefricr- trocknendry 42.242.2 11 100100 46.846.8 XOr.XOr. 22 100100 88.288.2 CN..CN .. SS. U)OU) O 89.189.1

2 Mnnalc 2 Mnnalc

.' Monate. ' months

88.988.9

(73 4|(73 4 |

(76.3)(76.3)

99 3030th 40 00540 005 1 Monat1 month 1010 3 Monate3 months I oriM.'t/iiiiuI oriM.'t / iiiiu UnmittelbarDirect (80.0)(80.0) \-\ - Proben Nr.Sample no. nach dem
Gefrierafter this
Freezer VerstricheneElapsed Lagerzeitstorage time 97.397.3 2 Monate2 months 93.693.6 trocknendry 1 Woche1 week 95.895.8 (74.3)(74.3) 100100 (76.6)(76.6) (68.5)(68.5) -- 66th 100100 (80.0)(80.0) 82.382.3 95.295.2 -- 77th 100100 99.199.1 91.791.7 88.688.6 (76.6)(76.6) 88th 100100 99.499.4 89.689.6 -- (75.2)(75.2) 1111th 100100 95.395.3 (72.0)(72.0) (70.8)(70.8) -- 1212th iOOiOO 91.591.5 85.285.2 86.386.3 -- 1313th 100100 99.299.2 88.888.8 82.382.3 (58.1)(58.1) 1414th 100100 93.393.3 (67.6)(67.6) (53.4)(53.4) -- 1717th 100100 87.787.7 (62.8)(62.8) (74.0)(74.0) -- 1818th 100100 91.691.6 80.580.5 (79.3)(79.3) -- 1919th 100100 93.593.5 (71.3)(71.3) -- -- 2020th 100100 89.289.2 -- 2323 100100 86.586.5 (51.7)(51.7) 2424 100100 92.192.1 (50.3)(50.3) 2525th 91.291.2

Bemerkungen: -: ALP-Aktivitätsniveau weniger als 50% O: ALP-Aktivitätsniveau 50 bis 80%Comments: -: ALP activity level less than 50% O: ALP activity level 50 to 80%

Diese Ergebnisse zeigen, daß bei den Proben 1, 2, 6, 7, 8. 12. 13, 14, 18 und 19 eine bemerkenswerte Stabilisierungswirkung erhalten wurde.These results show that Samples 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 18 and 19 had a remarkable one Stabilizing effect was obtained.

B e i s ρ i e I 4B e i s ρ i e I 4

Stabilisierung von Laktat-Dehydrogenase (LDH)-AktivitätStabilization of lactate dehydrogenase (LDH) activity

Die verschiedenen Proben enthielten LDH als Enzym. Die gefriergetrockneten Präparate wurden mit 1,0 ml destilliertem Wasser wieder bereitgestellt und esThe various samples contained LDH as an enzyme. The freeze-dried preparations were with Provide 1.0 ml of distilled water again and add it

wurden zwei 0,2 ml Teilmengen von jeder Ampulle entnommen. Das LDH-Aktivitätsniveau jeder Teilmenge wurde mittels des Raten-Analysenverfahren unter Verwendung von LKB 8600-LDH Aktivitätsbestimmungsreagenz bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 dargestellt. Das nach den verschiedenen Lagerzeiten verbleibende Aktivitätsniveau ist als prozentuales Verhältnis der unmittelbar nach dem Gefriertrocknen verbleibenden Aktivität, die als 100% definiert ist, ausgedrückt.Two 0.2 ml aliquots were withdrawn from each vial. The LDH activity level of each subset was determined by the rate analysis method using LKB 8600-LDH activity determination reagent certainly. The results are shown in Table 6. That according to the different The remaining activity level is expressed as a percentage of the immediately after the storage times Freeze-drying expressed residual activity, which is defined as 100%.

Tabelle 6Table 6

Aktivitätsänderung von LDH in Abhängigkeit von der ZeitChange in activity of LDH as a function of time

Proben Nr.Sample no. UnmittelbarDirect VerstricheneElapsed Lagerzeitstorage time 2 Monate2 months 3 Monate ':3 months ': nach dem
Gefrierafter this
Freezer 1 Woche1 week 1 Monat1 month trocknendry 88.788.7 (75.1) \ (75.1) \ 11 100100 97.597.5 92.592.5 (76.1)(76.1) \\ 22 100100 89.389.3 84.484.4 (58.5)(58.5) 66th 100100 89.789.7 81.181.1 95.795.7 91-8 I91-8 I. 77th 100100 99.599.5 98.398.3 89.789.7 (79.6) ι(79.6) ι 88th 100100 99.599.5 97.397.3 (51.6)(51.6) \\ 1111th 100100 96.896.8 (76.8)(76.8) (51.5).(51.5). ιι 1212th 100100 92.492.4 85.885.8 84.784.7 (76.1) \ (76.1) \ 1313th 100100 94.094.0 90.190.1 85.985.9 (74.1) I(74.1) I. 1414th 100100 99.599.5 91.391.3 (54.2)(54.2) •• 1717th 100100 92.392.3 (71.6)(71.6) (77.1)(77.1) (57.6) ;(57.6); 1818th 100100 94.394.3 89.789.7 (78.3)(78.3) -- 1919th 100100 96.896.8 90.190.1 -- -- 2020th 100100 90.290.2 (61.6)(61.6)

FortsctziiimContinuation

flohen Ni.fled Ni.

l'nmitlclb.ii
nach dem
(ielrieriniekncn l'nmitlclb.ii
after this
(ielrieriniekncn

Versirichene Lager/eilInsured warehouse / express

1 Woche I Monat1 week I month

2 Monalc2 Monalc

MonalcMonalc

100
KX)
100100
KX)
100

90.1
93.5
93.090.1
93.5
93.0

(65.6)
80.9
(71.8)(65.6)
80.9
(71.8)

(55.5)(55.5)

Uemcrklingen: -: LDH-Aklivitälsnivc.iu weniger als 5(1"'., (I: LDH-Aklivilalsniveau .Ml his 8(1"/;,Oemcrklingen: -: LDH-Aklivitälsnivc.iu less than 5 (1 "'., (I: LDH civil level .Ml to 8 (1 "/ ;,

Diese Ergebnisse zeigen eine bemerkenswerte .Stabilisierungswirkung der Proben 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 18 und 19.These results show a remarkable stabilizing effect of samples 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 18 and 19.

Die beschriebenen Beispiele zeigen, daß man eine bezeichnende Siabilisierungswirkung bei Enzymen 2« erhalten kann, wenn man Rohrzucker in Verbindung entweder mit BSA oder HSA in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 0,4 und 1 : 2,5 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 0,5 und 10,0% (GewVVol.) verwendet. Eine noch größere Stabilisierungswirkung kann man erhalten, wenn man Rohrzucker und Albumin in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 1 und 1 :2.5 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 1,0 und 10% (GewVVol.) verwendet. Noch größer ist die Stabilisierungswirkung, wenn man Rohrzucker und Albumin in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 1 und 1:2 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 2,5 und 10% (GewVVol.) verwendet.The examples described show that one Significant stabilizing effect with enzymes 2 «can be obtained when cane sugar is combined either with BSA or HSA in a corresponding weight ratio between 1: 0.4 and 1: 2.5 for one Cane sugar content between 0.5 and 10.0% (weight by volume) is used. An even greater stabilizing effect can be obtained by using cane sugar and albumin in an appropriate weight ratio between 1: 1 and 1: 2.5 used with a cane sugar content between 1.0 and 10% (weight / volume). It is even bigger Stabilizing effect, if you cane sugar and albumin in an appropriate weight ratio between 1: 1 and 1: 2 with a cane sugar content between 2.5 and 10% (weight by volume).

Wie oben beschrieben, wird erfindungsgemäß die Enzymaktiviiät enzymenthaltender Zusammensetzung stabilisiert, wodurch derartige Zusammensetzungen weniger zur Inaktivierung während des Gefriertrocknens und der darauf folgenden Lagerung neigen. Durch eine derartige Stabilisation bleiben gefriergetrocknete enzymenthaltende Zusammensetzungen als klinische Reagenzien und als Katalysatoren geeignet.As described above, according to the invention the enzyme activity is an enzyme-containing composition stabilized, making such compositions less susceptible to inactivation during freeze-drying and the subsequent storage. Such stabilization leaves freeze-dried ones enzyme-containing compositions useful as clinical reagents and as catalysts.

Claims (3)

Patentansprüche:Patent claims: I. Wäßrige, enzymenthaltende, stabilisierte Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie mit Rohrzucker und entweder Rinderalbuminserum oder Humanalbuminserum stabilisiert ist, wobei das Gewichtsverhältnis von Rohrzucker zu entweder Rinderalbuminserum oder Humanalbuminserum zwischen 1 :0,4 und 1 :2,5 liegt und dabei der Rohrzupkergehalt zwischen 0,5 und 10,0% (GewyVol.) beträgt.I. Aqueous, enzyme-containing, stabilized composition, characterized in that it is stabilized with cane sugar and either bovine albumin serum or human albumin serum, the weight ratio of cane sugar to either bovine albumin serum or human albumin serum between 1: 0.4 and 1: 2.5 and thereby the The cane sugar content is between 0.5 and 10.0% (by weight). 2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Enzym Glutamat-Oxalacetat-Transaminase, Glutamat-Pyruvat-Transaminase, alkalische Phosphatase oder Laktatdehydrogenase enthält.2. Composition according to claim 1, characterized in that it contains as enzyme glutamate oxaloacetate transaminase, glutamate pyruvate transaminase, alkaline phosphatase or lactate dehydrogenase. 3. Verwendung der Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, zur Herstellung gefriergetrockneter, stabilisierter Enzympräparate.3. Use of the composition according to claim 1 or 2 for the production of freeze-dried, stabilized enzyme preparations.