DE3002934C2 - Gewebeklebstoff - Google Patents

Gewebeklebstoff

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Description

2. Gewebeklebstoff nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er Aprotinin in einer Menge von 250 bis 25 000 KIE pro g Fibrinogen enthält.
3. Gewebeklebstoff nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er zusätzlich Glycin enthält.
4. Gewebeklebstoff nach dei< Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß er zusätzlich Glucose oder Saccharose enthält.
5. Gewebeklebstoff nach den Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß er 0,2 bis 200IE Heparin pro g Fibrinogen enthält Jo
6. Gewebeklebstoff nach den Ansprüchen 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Gewichtsverhältnis von Fibrinogen zu Albumin zu kälteunlöslichem Globulin im Gesamtprotein 33 bis 90 :5 bis 40 :0,2 bis 15 beträgt.
7. Verfahren zur Herstellung eines Gewebeklebstoffes nach den Ansprüchen 1 bis 6 aus Plasmakryopräzipitat, dadurch gekennzeichnet, daß aus dem Kryopräzipitat durch ein- oder mehrfache Behandlung mit einer Pufferlösung, welche Natriumeitrat, ■"> Natriumchlorid, Glycin, Glucose und einen Plasminogen-Aktivator-Inhibitor oder Plasmin-Inhibitor und Heparin enthält, kältelösliches Plasmaprotein entfernt, der gereinigte Niederschlag gelöst. Albumin zugesetzt und die Lösung lyophilisiert wird.
Die Erfindung betrifft einen Gewebeklebstoff auf so Basis von menschlichen oder tierischen Proteinen, enthaltend Fibrinogen und Faktor XIII.
Ei ist seit langem bekannt, Blutgerinnungssubstanzen zur Stillung von Blutungen bzw. für Wur.dversiegelungen heranzuziehen. Nach den ersten derartigen Vorschlägen wurden Fibrintampons bzw. Fibrinplättchen verwendet. Während des Zweiten Weltkrieges wurden Gewebeklebungen mit Hilfe von Blutplasma vorgeschlagen.
In letzter Zeit wurde von H. Matras u. a. in der60 »Wiener Medizinischen Wochenschrift«, 1972, Seite 517. ein Gewebeklebstoff auf Basis von Fibrinogen und Faktor XIII zur nahtlosen interfaszikulären Nervcntransplantation im Ticrcxperiment beschrieben.
Eine weitere Studie stammt von Spängier u. a. in der b5 »Wiener Klinischen Wochenschrift«. 1973, Seiten 1 bis 7. Auch hier wurde in Tierversuchen die Möglichkeit aufgezeigt, mit Hilfe von Fibrinogen als Kryopräzipitat und Thrombin eine Gewebeklebung vorzunehmen.
Die bekannten Präparate haben sich noch nicht als zufriedenstellend erwiesen, weil sie die an einen Gewebeklebstoff zu stellenden Forderungen, welche die folgenden sind:
a) hohe Belastbarkeit der Klebungen bzw. Wundversiegelungen sowie sichere und anhaltende Blutstillung, d. h. gute Haftfähigkeit des Klebers an den Wund- bzw. Gewebsflächen, sowie hohe innere Festigkeit desselben,
b) regelbare Haltbarkeit der Klebungen im Körper,
c) vollkommene Resorbierbarkeit des Klebstoffes im Verlauf des Wundheilungsprozesses,
d) wundheilungsfördernde Eigenschaften,
noch nicht in ausreichendem Maße erfuf.M. Dies mag teilweise darauf zurückzuführen sein, daß die für die Blutstillung notwendigen Gerinnungsfaktoren in den bekannten Präparaten nicht in einem optimalen Verhältnis zueinander vorhanden waren und auch daran, daß die fibrinolytische Aktivität im Klebebereich nur ungenügend beherrscht wurde- Es kam häufig durch enzymatische Einwirkung zu einer vorzeitigen Auflösung der Gewebeklebungen.
Die Erfindung bezweckt die Vermeidung dieser Nachteile und Schwierigkeiten und stellt sich die Aufgabe, einen lyophilisierten Gewebeklebstoff menschlichen oder tierischen Ursprungs zu schaffen, der die weiter oben aufgestellten Voraussetzungen erfüllt und in lyophilisierter Form vorliegt, wonach wegen der längeren Haltbarkeit und besseren Transport- bzw. Lagerfähigkeit ein Bedürfnis besteht.
Dementsprechend ist die Erfindung gekennzeichnet durch die folgenden Merkmale:
a) daß er mindestens 33 Gew.-°/o Fibrinogen enthält,
b) daß das Verhältnis des Faktors XIII zu Fibrinogen, ausgedrückt in Einheiten des Faktors XIII pro Gramm Fibrinogen, mindestens 80 beträgt,
c) daß im Gesamtprotein Fibrinogen und Albumin in einem Gewichtsverhältnis von 33 bis 90:5 bis 40 enthalten sind,
d) daß er einen Gehalt an Plasminogen-Aktivator-Inhibitor oder Plasmin-Inhibitor enthält,
e) daß das Präparat lyophilisiert ist.
Vorteilhaft enthält der Gewebeklebstoff Aprotinin in einer Menge von 250 bis 25 000 KIE pro g Fibrinogen.
Nach einer bevorzugten Ausführungsform enthält der Gewebeklebstoff zusätzlich Glycin, wodurch die WiederauflösDarkeit des lyophilisierten Produktes verbessert wird.
Weiters kann der Gewebeklebstoff zusätzlich Glucose oder Saccharose enthalten, welche Komponenten ebenfalls die Auflösbarkeit fördern.
Der Gewebeklebstoff kann weiters 0,2 bis 200 IE Heparin pro g Fibrinogen enthalten, wodurch eine stabilisierende Wirkung erreicht wird.
Der Gewebeklebstoff gemäß der Erfindung besitzt charakteristische Vernetzbarkeitseigenschaften nach der Auflösung, welche nach der Natriumlaurylsulfat (SDS)-Polyacrylamid-Gelelektrophorese-Methode bestimmbar sind. Der Test wird derart durchgeführt, daß nach dem Vermischen des Gewebeklebstoffes mit dem gleichen Volumen einer Lösung, enthaltend 4OnMoICaCI2 und 15 NIH-Einheiten (US National Institute of Health-Einheiten) Thrombin pro ml, die
Mischung bei 37° C inkubiert wird Der Vernetzungsgrad wird nach Stoppen der Reaktion und reduktiver Spaltung der in den Proteinen enthaltenen Disulfidbrükken durch Zugabe eines Gemisches von Harnstoff, Natriumdodecylsulfat und 0-Mercaptoäthanol durch Gelelektrophorese bestimmt Charakteristisch für den erfindungsgemäßen Gewebeklebstoff ist eine vollständige Vernetzung der Fibrin-y-Ketten nach 3 bis 5 Minuten und eine mindestens 35°/oige Vernetzung der Fibrin-«-Ketten nach 2 Stunden.
Fibrinogen, Albumin und kälteunlösliches Globulin im Gesamtprotein sollen im erfindungsgemäßen Gewebeklebstoff in einem bestimmten Verhältnis stehen; dieses Verhältnis beträgt 33 bis 90 :5 bis 40 :0,2 bis 15.
Die Erfindung umfaßt des weiteren ein Verfahren zur Herstellung des beschriebenen Gewebeklebstoffes, ausgehend von Plasmakryopräzipitat, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß aus dem Kryopräzipitat durch ein- oder mehrfach/" Behandlung mit einer Pufferlösung, weiche Natriumckrat, Natriumchlorid, Glycin, Glucose und einen Plasminogen-Aktivator-Inhibitor oder Plasmin-Inhibitor und Heparin enthält, kältelösliches Plasmaprotein entfernt, der gereinigte Niederschlag gelöst, Albumin zugesetzt und die Lösung lyophilisiert wird.
Vorteilhaft wird das Kryopräzipitat aus humanem oder tierischem Frischplasma hergestellt, welches bei —200C eingefroren wurde. Bei Erhöhung der Temperatur auf 0 bis 2° C wird das Kryopräzipitat gewonnen und durch Zentrifugieren abgetrennt. Der Niederschlag wird durch ein- oder mehrmalige Elution mit der Pufferlösung, die einen pH-Wert von 6 bis 8,0 aufweist, eluiert und bei 0 bis 4° C zentruugiert, um das kältelösliche Plasmaprotein zu 2ntfernen. Die Behandlung mit der Pufferlösung wird bis zur Erreichen des gewünschten Faktor XIII-Fibrinogen-Verhältnisses durchgeführt.
Der gereinigte Niederschlag wird mit einer weiteren Pufferlösung, die Humanalbumin, Glycin und gegebenenfalls Glucose oder Saccharose, einen Plasminogen-Aktivator-Inhibitor oder Plasmin-Inhibitor sowie Heparin enthält und einen pH-Wert von 6,5 bis 9,0 aufweist, gelöst und auf eine Proteinkonzentration von 4,0 bis 9,0% verdünnt. Die Lösung wird über Membranfilter einer Porengröße bis zu 0,2 μπι filtriert, in die Endbehälter abgefüllt und lyophilisiert.
Der so erhaltene lyophilisierte Gewebekleber kann bei Zimmertemperatur oder vorzugsweise bei +4° C gelagert werden; er ist nach Rekonstitution mit Aqua ad iniectabilia, dem wahlweise ein Plasminogen-Aktivator-Inhibitor oder Plasmin-Inhibitor, vorzugsweise Aprotinin, beigefügt werden kann, gebrauchsfertig. Bei der Auflösung des lyophilisierten Präparates ist darauf zu achten, daß die gebrauchsfertige Lösung mindestens 70 mg Fibrinogen pro ml enthält.
Der Gewebeklebstoff gemäß der Erfindung weist eine universelle Anwendbarkeit auf. Er kann zum nahtlosen Verbinden von menschlichen oder tierischen Gewebe- oder Organteüen, zur Wundversiegelung und Blutstillung sowie zur Förderung von Wundheilungen verwendet werden.
Bevorzugte Anwendungsgebiete, für welche der erfindungsgemäße Gewebeklebstoff erfolgreich eingesetzt werden kann, sind:
Indikationen im Bereich der Hals-, Nasen-, Ohren- und Kieferchirurgie, Zahnheilkunde, Neurochirurgie, plastischen Chirurgie, allgemeinen Chirurgie, Abdominalchirurgie, Thorax- und Gefäßchirurgie, Orthopädie, Unfallchirurgie, Urologie, Ophthalmologie und Gynäkologie.
Vorteilhaft wird vor der Applikation des erfindungsgemäßen Gewebeklebstoffes auf das zu verbindende Gewebe eine Mischung von Thrombin und Calciumchlorid dem Klebstoff zugefügt oder auf das Gewebe aufgebracht
Das erfindungsgemäße Verfahren wird durch das folgende Beispiel näher erläutert:
211 humanes, bei — 200C eingefrorenes Frischplasma wurden auf +20C erwärmt. Das entstandene Kryopräzipitat (435 g) wurde bei +20C durch Zentrifugieren abgetrennt und bei +20C mit 431 einer Pufferlösung vom pH-Wert 6,5, die 6,6 g Na3-Citrat · 2H2O, 3,4 g NaCl, 10,0 g Glycin, 13,0 g Glucose - IH2O, 50 000 KIE Aprotinin und 200IE Heparin pro 1 enthielt, behandelt und nochmals bei +20C zentrifugiert Der abgetrennte Niederschlag wurde in einer weiteren Pufferlösung vom pH-Wert 7,9, welche 35,0 g Humanalbumin, 20,0 g Glycin, 50 000 KIE Aprotinin und 200 IE Heparin pro I enthielt, gelöst und auf eine Konzentration von 70 mg Protein pro ml verdünnt
Sodann wurde die Lösyng über Membranfilter bis zu einer Porengröße von 0,2 μπι sterilfiltriert, zu je 2,2 ml in Endbehälter abgefüllt, tiefgefroren und lyophilisiert. Nach Rekonstitution des lyophilisierten Produktes auf eine Fibrinogenkonzemration von 90 mg/ml zeigte' das gebrauchsfertige Gewebeklebstoffpräparat im Vernetzungstest eine vollständige Fibrin-y-Vernetzung nach 5 Minuten und eine 66°/oige Fibrin-α-Vernetzung nach 2 Stunden bei 37°C.
Das Verhältnis der im Gewebeklebstoff enthaltenen Proteine Fibrinogen zu Albumin zu kälteunlöslichem Globulin wurde mit 64,0 :223 :7,7 festgestellt. Der Heparingehalt betrug Ί.5 IE pro g Fibrinogen. Aprotinin war in einer Konzentration von 1133 KIE pro g Fibrinogen enthalten. Der Gehalt an Faktor XIII betrug 161 Einheiten pro g Fibrinogen. Der Gehalt an Gesamtprotein im lyophilisierten Präparat betrug 72,2%, der Gehalt an Fibrinogen im lyophilisierten Präparat 46,2%.
Die Bestimmungen erfolgten in folgender Weise: Die Bestimmung der Faktor Xlll-Einheiten erfolgte mittels eines Vernetzungstests, bei dem Faktor XHI-freies Fibrinogen als Substrai verwendet und die durch die Zugabe der unbekannten verdünnten Probe bewirkte Fibrinvernetzung als Maß für die darin enthaltene Menge an Faktor XIII diente. Eine entsprechende Eichkurve wurde mit gcpoltem humanem Citratplasma erhalten, wobei per definitionem 1 ml Plasma 1 Einheit Faktor XIII enthält. Die quantitativen Proteinbestimmungen erfolgten mittels der Methode nach Kjeldahl.
Die Bestimmung der Proteine relativ zueinander erfolgte ebenfalls nach der SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese-Methode, u. zw.
a) mit einer nicht reduzierten und
b) mit einer mit ß-Mercaptoäthanol reduzierten
Probe des Gewebeklebstoffes.

Claims (1)

Patentansprüche:
1. Gewebeklebstoff auf Basis von menschlichen oder tierischen Proteinen, enthaltend Fibrinogen und FaktorXIII, gekennzeichnet durch die folgenden Merkmale:
a) daß er mindestens 33Gew.-% Fibrinogen enthält
b) daß das Verhältnis des Faktors XIII zu Fibrinogen, ausgedrückt in Einheiten des Faktors XIII pro Gramm Fibrinogen, mindestens 80 beträgt,
c) daß im Gesamtprotein Fibrinogen und Albumin in einem Gewichtsverhältnis von 33 bis 90 :5 bis 40 enthalten sind,
d) daß er einen Gehalt an Plasminogen-Aktivator-Inhibitor oder Plasmin-Inhibitor enthält,
e) daß das Präparat lyophilisiert ist.
DE3002934A 1979-02-15 1980-01-28 Gewebeklebstoff Expired DE3002934C2 (de)

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