DE2803920A1 - Hepatitis B surface antigen particle prepn. - by ammonium sulphate pptn., isopycnic banding and rate zonal banding - Google Patents
Hepatitis B surface antigen particle prepn. - by ammonium sulphate pptn., isopycnic banding and rate zonal bandingInfo
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Abstract
Description
Verfahren zur Gewinnung von Hepatitis B-OberflächenantigenMethod for obtaining hepatitis B surface antigen
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von Hepatitis B-Oberflächenantigen (HBSAg) aus biologischen Flüssigkeiten, wobei die Flüssigkeiten unter Verwendung von Ammoniumsulfat eingeengt und einer isopyknischen Bandenbildung und anschliessend einer Geschwindigkeitszonenbandenbildung unterworfen werden.The invention relates to a method for obtaining hepatitis B surface antigen (HBSAg) from biological fluids, the fluids being made using concentrated by ammonium sulfate and an isopycnic banding and then be subjected to speed zone banding.
Als Ausgangsmaterial wird im erfindungsgemässen Verfahren zur Herstellung von gereinigtem Hb 5Ag eine Flüssigkeit mit einem Gehalt an HBSAg verwendet. Dazu können beliebige menschliche biologische Flüssigkeiten mit einem Gehalt an HBSAg verwendet werden, wie Plasma, Speichel, Faeces-Extrakte, Nasen- und Rachensekrete, Gallenflüssigkeit, Rückenmarkflüssigkeit, Schweiss, Urin, Samenflüssigkeit, Vaginalsekrete oder Menstruationsblut.The starting material used in the process according to the invention for production of purified Hb 5Ag, a liquid containing HBSAg was used. In addition any human biological fluids containing HBSAg used, such as plasma, saliva, faeces extracts, nasal and throat secretions, Bile, spinal fluid, sweat, urine, seminal fluid, vaginal secretions or menstrual blood.
Plasma wird auf herkömmliche Weise erhalten, beispielsweise durch Plasmaphorese. Die Konzentration an HBsAg in menschlichen biologischen Flüssigkeiten kann in bekannter Weise nach beliebigen Verfahren gemessen werden, beispielsweise durch umgekehrte passive Hämagglutination oder Komplementfixierung.Plasma is obtained in a conventional manner, for example by Plasmaphoresis. The concentration of HBsAg in human biological fluids can be measured in a known manner by any method, for example by reverse passive hemagglutination or complement fixation.
Wenn als biologische Flüssigkeit Plasma verwendet wird, kann dieses direkt behandelt werden oder es kann gekühlt werden, wobei das gebildete Kryopräzipitat durch leichte Zentrifugation entfernt wird. Eine andere Möglichkeit besteht darin, zur Entfernung von Fibrinogen CaCl2 zuzusetzen und zu klären.If plasma is used as the biological fluid, it can be treated directly or it can be cooled, with the cryoprecipitate formed removed by gentle centrifugation. Another possibility is to add and clarify CaCl2 to remove fibrinogen.
Die erhaltene Flüssigkeit wird erfindungsgemäss mit Ammoniumsulfat behandelt. Das in dieser Flüssigkeit erhaltene HBSAg wird durch eine isopyknische Bandenbildungsstufe und eine anschliessende Geschwindigkeitszonenbandenbildungsstufe isoliert.According to the invention, the liquid obtained is treated with ammonium sulfate treated. The HBSAg obtained in this liquid is through an isopycnic Banding stage and a subsequent speed zone banding stage isolated.
Bei der isopyknischen Bandenbildung wird das teilweise gereinigte Konzentrat mit einem flüssigen Medium, das einen Dichtegradienten aufweist, der die Dichte des speziellen, zu isolierenden Antigens einschliesst, in Kontakt gebracht.In the isopycnic banding, the partially purified Concentrate with a liquid medium that has a Density gradient which includes the density of the specific antigen to be isolated, brought in contact.
Anschliessend wird das flüssige Medium der Ultrazentrifugation unterworfen, um eine Gleichgewichtsverteilung der Serumbestandteile über den Dichtegradienten entsprechend ihrer individuellen Dichten zu erreichen. Die aufeinanderfolgenden Fraktionen des Mediums werden verdrängt. Fraktionen mit einet Gehalt am gewünschten Antigen, d.h. Fraktionen mit einer Dichte von etwa 1,21 bis etwa 1,24 g/cm³ , werden abgetrennt. Die Anwendung dieser Technik auf die Reinigung von HB5Ag ist in der DT-OS 2 049 515 und in der US-PS 3 636 191 beschrieben. Die Konzentrationen der den Gradienten bildenden Lösungen werden so gewählt, dass der Dichtebereich von etwa 1,0 bis etwa 1,41 g/cm) umfasst wird. Das flüssige Medium kann in Form eines linearen Gradienten oder eines Stufengradienten eingesetzt werden. Vorzugsweise wird wegen der höheren Fraktionierungskapazität ein Stufengradient angewendet.The liquid medium is then subjected to ultracentrifugation, an equilibrium distribution of the serum components over the density gradient according to their individual densities. The successive Fractions of the medium are displaced. Fractions with a content of the desired Antigen, i.e. fractions having a density of about 1.21 to about 1.24 g / cm³, become severed. The application of this technique to the purification of HB5Ag is in the DT-OS 2,049,515 and US-PS 3,636,191. The concentrations of the Solutions forming the gradient are chosen so that the density range of about 1.0 to about 1.41 g / cm). The liquid medium can be in the form of a linear gradients or a step gradient can be used. Preferably a step gradient is used because of the higher fractionation capacity.
Bei der Geschwindigkeitszonenbandenbildung ("rate zonal banding) wird das teilweise gereinigte Konzentrat der Ultrazentrifugation in Kontakt mit einem flüssigen Medium, das einen Dichtegradienten aufweist, unterworfen, wobei aber in diesem Fall die Geschwindigkeitszonentechnik angewendet wird, d.h. die Geschwindigkeit und die Dauer der Zentrifugation werden so eingestellt, dass kein Gleichgewicht erreicht wird. Dabei werden HBSAg und die anderen restlichen Serumbestandteile entsprechend in äeweiligen Sedimentationskoeffizienten im Medium verteilt. Die Konzentrationen der den Stufengradienten bildenden Lösungen werden so gewahlt, dass ein Dichtebereich von etwa 1,0 bis etwa 1,28 g/cm3 umfasst wird. Die Geschwindigkeitszonenstufe wird so lange durchgeführt, bis sich das HB5Ag im Dichtebereich von 1,13 bis 1,16 befindet. An dieser Stelle wird das HBSAg von der Masse der rohen Plasmaproteine abgetrennt. Ferner erfolgt, was besonders wichtig ist, auch eine Abtrennung vom Makroglobulin-Komplement des Plasmas. Wenn die Geschwindigkeitszonenstufe so durchgeführt wird, das das gewünschte HBSAg-Antigen seine Gleichgewichtsstellung, d.h. etwa 1,18 bis etwa 1,20 g/cm3, erreicht, so lässt sich feststellen, dass eine Plasma-Makroglobulin-Fraktion als Verunreinigung in der getrünschten HB5Ag-Antigenfraktion auftritt Bei der isopyknischen Bandenbildungsstufe können als flüssige Medien beliebige Dichtegradienten in den entsprechenden Bereichen verwendet werden. Beispiele für herkömmliche gelöste Stoffe in diesen Lösungen sind Saccharose, Kaliumbromid, Cäsiumchlorid und Kaliumtartrat.In rate zonal banding, the partially purified concentrate of ultracentrifugation in contact with a liquid medium, which has a density gradient, subjected, but in In this case the speed zone technique is used, i.e. the speed and the duration of centrifugation are adjusted so that there is no equilibrium is achieved. HBSAg and the other remaining serum components are used accordingly distributed in the medium in respective sedimentation coefficients. The concentrations the solutions forming the step gradient are chosen so that a density range from about 1.0 to about 1.28 g / cm3. The speed zone level becomes carried out until the HB5Ag is in the density range from 1.13 to 1.16. At this point the HBSAg of the mass of crude plasma proteins severed. Furthermore, what is particularly important, there is also a separation from Macroglobulin complement of plasma. If the speed zone stage performed so that the desired HBSAg antigen is in equilibrium, i.e. about 1.18 up to about 1.20 g / cm3, it can be determined that a plasma macroglobulin fraction occurs as an impurity in the desired HB5Ag antigen fraction Banding stage can be any density gradient in the liquid media appropriate areas are used. Examples of common solutes in these solutions are sucrose, potassium bromide, cesium chloride and potassium tartrate.
Die isopyknische Bandenbildungsstufe wird zweckmässigerweise in einer Zentrifuge, beispielsweise Electronucleonics-K, durchgeführt, indem man den stationären Rotor mit Kochsalzlösung füllt und anschliessend allmählich die Kochsalzlösung nach oben mit Aliquotanteilen eines flüssigen Mediums von ansteigender Dichte verdrängt, bis sich ein Stufengradient gebildet hat.The isopycnic banding stage is expediently in one Centrifuge, for example Electronucleonics-K, performed by using the stationary Fill the rotor with saline solution and then gradually add the saline solution displaced above with aliquots of a liquid medium of increasing density, until a step gradient has formed.
Das Plasma wird am Rotorkopf eingeführt, wobei am Rotorboden ein Teil der Lösung der höchsten Dichte verdrängt wird. Vorzugsweise beträgt das Plasmavolumen etwa 15 bis etwa 40 Prozent des Volumens des Stufengradienten. Die Zentrifuge wird durch ein programmiertes Steuersystem, das ein Vermischen während der ursprünglichen Reorientierungsphase verhindert, auf Touren gebracht. Nachdem das Gleichgewicht erreicht ist und sich das Produkt in der seiner Dichte entsprechenden Stellung befindet, wird der Rotor mittels des gleichen Steuersystems abgebremst, um ein Vermischen bei der Reorientierung in die ursprüngliche Konfiguration zu verhindern. Anschliessend wird der Gradient von unten abgelassen. Eine Fraktion von entsprechender Dichte wird gewonnen. Eine ähnliche Technik wird bei der Geschwindigkeitszonenbandenbildung angewendet. Die Fraktion entsprechender Dichte, die nach der Geschwindigkeitszonenbandenbildung gewonnen wird, ist das gewünschte Konzentrat von Hepatitis B-Antigen.The plasma is introduced at the rotor head, with a part at the rotor bottom the solution of the highest density is displaced. The plasma volume is preferably about 15 to about 40 percent of the volume of the step gradient. The centrifuge will through a programmed control system that allows mixing during the original Reorientation phase prevented, brought up to speed. After the balance is reached and the product is in the position corresponding to its density, the rotor is braked using the same control system to avoid mixing to prevent the reorientation in the original configuration. Afterward the gradient is drained from below. A fraction of the appropriate density is won. A similar technique is used in speed zone banding applied. The group more appropriate Density after the speed zone banding is obtained is the desired concentrate of hepatitis B antigen.
Aufgrund der geringen Grösse von HBSAg, etwa 20 nm; ist die isopyknische Bandenbildungsstufe relativ zeitaufwendig. Die erforderliche Zentrifugierzeit beträgt etwa 18 Stunden. Somit lassen sich bei einem durchgehenden Tag- und Nachtbetrieb innerhalb von 7 Tagen nur etwa 4 Ansätze pro Zentrifuge verarbeiten.Due to the small size of HBSAg, about 20 nm; is the Isopycnic Banding stage relatively time-consuming. The required centrifugation time is about 18 hours. This enables continuous day and night operation process only about 4 batches per centrifuge within 7 days.
Selbstverständlich kann die Produktivität durch Verwendung zusätzlicher Zentrifugen gesteigert werden. Dazu ist aber angesichts der hohen Kosten für die Zentrifugen ein hoher Kapitaleinsatz erforderlich.Of course, productivity can be increased by using additional Centrifuges are increased. In addition, given the high cost of the Centrifuges require a high capital investment.
Es wurde erfindungsgemäss festgestellt, dass eine wesentliche Produktivitätssteigerung bei einer beträchtlichen Senkung der Betriebskosten möglich ist, wenn man die menschlichen biologischen Flüssigkeiten vor der isopyknischen Bandenbildung mit Ammoniumsulfat behandelt. Die verwendete Ammoniumsulfatmenge soll dabei mindestens so gross sein, dass sie ausreicht, um im wesentlichen das gesamte HBSAg in der Flüssigkeit zu fällen, während eine Fällung von zusätzlichem unerwünschtem Proteinmaterial vermieden werden soll. Als Ergebnis dieser Fällung kann HB5Ag von mehreren Litern Flüssigkeit in einem Ansatz der isopyknischen Bandenbildung unterworfen werden, während ohne vorherige Ammoniumsulfatfällung in einem einzigen Ansatz nur eine wesentlich geringere Flüssigkeitsmenge der isopyknischen Bandenbildung unterworfen werden kann. Im allgemeinen werden bei Plasma als biologischer Flüssigkeit etwa 200 bis etwa 250 g und vorzugsweise etwa 225 g Ammoniumsulfat pro 1 Liter Plasma verwendet. Bei Verwendung von geringeren Mengen ergibt sich keine vollständige Fällung von HB5Ag, während bei Verwendung grösserer Mengen zusätzliches unerwünschtes Proteinmaterial ausgefällt wird. Bei Plasma als Flüssigkeit kann bei vorheriger Ammoniumsulfatfällung-das HBSAg in etwa 20 Litern Flüssigkeit in einem Ansatz der isopyknischen Bandenbildung unterworfen werden. Ohne vorherige Ammoniumsulfatfällung können nur etwa 1,5 Liter Plasma dieser Behandlung unterzogen werden.It was found according to the invention that a significant increase in productivity at a significant reduction in operating costs is possible if you consider the human biological fluids before isopycnic banding with ammonium sulfate treated. The amount of ammonium sulfate used should be at least as large as that it is sufficient to precipitate essentially all of the HBSAg in the liquid, while avoiding precipitation of additional undesirable protein material target. As a result of this precipitation, HB5Ag can hold several liters of liquid in may be subjected to an isopycnic banding approach while without prior Ammonium sulfate precipitation in a single batch only requires a much smaller amount of liquid can be subjected to isopycnic banding. In general, Plasma as biological fluid about 200 to about 250 g and preferably about 225 g ammonium sulfate used per 1 liter of plasma. When using lower Quantities do not result in complete precipitation of HB5Ag while using large amounts of additional unwanted protein material failed will. In the case of plasma as a liquid, ammonium sulfate precipitation - the HBSAg subjected to isopycnic banding in about 20 liters of liquid in one approach will. Without prior ammonium sulphate precipitation, only about 1.5 liters of plasma can do this Treatment.
Nach der Zugabe des Ammoniumsulfats wird die Flüssigkeit bewegt, um eine Lösung des Ammoniumsulfats zu erleichtern. Vorzugsweise wird die Flüssigkeit mindestens etwa 3 Stunden bei erniedrigten Temperaturen von etwa 0 bis etwa 1000 und vorzugsweise von etwa 50C bewegt. Vorzugsweise wird die Bewegung mindestens etwa 4 Stunden vorgenommen, wobei eine längere Bewegungsdauer unschädlich ist. Der gebildete Niederschlag wird abzentrifugiert, der Zentrifugationsrückstand in Kochsalzlösung resuspendiert und zur Entfernung von Ammoniumsulfat gegen Kochsalzlösung dialysiert.After adding the ammonium sulfate, the liquid is moved around to facilitate a solution of the ammonium sulfate. Preferably the liquid at least about 3 hours at depressed temperatures from about 0 to about 1000 and preferably moved from about 50C. Preferably the movement is at least made about 4 hours, a longer period of movement is harmless. Of the The precipitate formed is centrifuged off, the centrifugation residue in saline solution resuspended and dialyzed against saline to remove ammonium sulfate.
Das erhaltene Flüssigkeitskonzentrat wird anschliessend unter Verwendung eines Gradientenmaterials mit einem Dichtebereich von etwa 1,1 bis etwa 1,4 g/cm3 der isopyknischen Bandenbildung unterworfen.The resulting liquid concentrate is then used of a gradient material with a density range of about 1.1 to about 1.4 g / cm3 subject to isopycnic banding.
Das bei der isopyknischen Bandenbildung erhaltene Produkt wird gegen PBS dialysiert, um das Gradientenmaterial zu entfernen, sofern dieses dialysierbar ist.The product obtained in the isopycnic banding is against PBS is dialyzed to remove the gradient material if it is dialyzable is.
Anschliessend wird das Produkt einer Geschwindigkeitszonenbandenbildung unterworfen, bis sich das KBsAg im Dichtebereich von etwa 1,13 bis etwa 1,16 g/cm3 befindet. Es kann ein beliebiges Gradientenmaterial verwendet werden, mit dem dieser Dichtebereich erzielt wird und das dialysierbar und physiologisch verträglich ist. Im allgemeinen dauert diese Bandenbildung etwa 16 bis etwa 20 Stunden und vorzugsweise etwa 17 bis etwa 18 Stunden bei etwa 30 000.U/min. Bei höheren Drehzahlen ist eine geringere Dauer und bei niedrigeren Drehzahlen eine längere Dauer erforderlich.The product then becomes a speed zone banding until the KBsAg is in the density range from about 1.13 to about 1.16 g / cm3 is located. Any gradient material can be used with which this Density range is achieved and which is dialyzable and physiologically compatible. Generally, this banding takes about 16 to about 20 hours, and preferably about 17 to about 18 hours at about 30,000 rpm. At higher speeds is one shorter duration and a longer duration at lower speeds.
Gemäss einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemässen Verfahrens wird ein Natriumbromid-Gradient verwendet.According to a preferred embodiment of the method according to the invention a sodium bromide gradient is used.
Gegenüber herkömmlichen Materialien weist Natriumbromid bestimmte Vorteile auf. Die Löslichkeit von Natriumbromid erlaubt die Verwendung von hochdichten Lösungen bei der Herstellung von Gradienten bei Kühlschranktemperaturen (2 bis 6°G). Die Verwendung von Natriumbromid bringt gegenüber Salzen, wie CSiumchlorid, entscheidende wirtschaftliche Vorteile mit sich. Ferner tritt das Problem der Toxizität für den Menschen aufgrund von restlichen und an HB5Ag gebundenen Cäsiumionen nicht auf. Bei Natriumbromid-Gradienten treten als an das HB 5Ag aufgrund von biophysikalischen Eigenschaften gebundene Ionen nur Natriumionen auf, die mit dem menschlichen biologischen System vollkommen verträglich sind und keine Toxizitätsprobleme mit sich bringen.Compared to conventional materials, sodium bromide has certain properties Benefits on. The solubility of sodium bromide allows the use of high density Solutions in making gradients at refrigerator temperatures (2 to 6 ° G). The use of sodium bromide is decisive over salts such as sodium chloride economic benefits with them. Furthermore, there arises the problem of toxicity for the Humans due to residual cesium ions bound to HB5Ag. When sodium bromide gradients occur as at the HB 5Ag due to biophysical Properties bound ions are only sodium ions that are associated with the human biological System are completely compatible and do not pose any toxicity problems.
Die überlegene Löslichkeit von NaBr bei niedrigen Temperaturen im Vergleich zu KBr erlaubt ein Arbeiten bei niedrigen Temperaturen, was für die Stabilität der biologischen Materialien günstiger ist. Die Verwendung eines Stufengradienten wird gegenüber einem linearen Gradienten bevorzugt, da dabei Verunreinigungen an den Stufengrenzen angereichert werden und in einem einzigen Gradienten ein grösseres Plasmavolumen verarbeitet werden kann.The superior solubility of NaBr at low temperatures in the Compared to KBr, it allows working at low temperatures, which is good for stability of biological materials is cheaper. The use of a step gradient is preferred over a linear gradient because it creates impurities the step limits are enriched and a larger one in a single gradient Plasma volume can be processed.
Das Beispiel erläutert die Erfindung.The example illustrates the invention.
Beispiel 20 Liter geklärtes Plasma von Hepatitis B-Spendern werden durch ein 293 mm-Filter mit einer AP 20-Filtermembran (Millipore) filtriert. Das Filtrat wird mit 4,53 kg Ammoniumsulfat versetzt und sodann über Nacht bei 5°C leicht bewegt. Der gebildete Niederschlag wird durch absatzweise 30-minütige Zentrifugation bei 7000 g unter Verwendung eines JA-10-Rotors (3 Liter Fassungsvermögen pro Ansatz) gewonnen. Die nach der Zentrifugation erhaltenen Rückstände werden in etwa 2,25 Liter Kochsalzlösung suspendiert. Die konzentrierte Suspension wird sodann zur Entfernung des Ammoniumsulfats gegen 40 Liter Kochsalzlösung dialysiert.Example 20 liters of cleared plasma from hepatitis B donors will be used filtered through a 293 mm filter with an AP 20 filter membrane (Millipore). That 4.53 kg of ammonium sulfate are added to the filtrate and then lightly at 5 ° C. overnight emotional. The educated Precipitation is by intermittent 30-minute Centrifugation at 7000 g using a JA-10 rotor (3 liter capacity per approach). The residues obtained after centrifugation are in suspended about 2.25 liters of saline. The concentrated suspension is then dialyzed against 40 liters of saline solution to remove the ammonium sulfate.
Der Rotor einer Zentrifuge (Electronucleonics K) wird mit 8400 ml Phosphatpuffer gefüllt. Nach einem Betreiben des Rotors bis auf 10 000 U/min zur Entgasung des Systems wird in den stationären Rotor von unten her der folgende Stufengradient gepumpt: 1. 2000 ml 10% NaBr, 9 = 1,08 2. 1000 ml 20% NaBr, y = 1,17 3. 1500 ml 30% NaBr, Q = 1,28 4. 3900 ml 40% NaBr, y = 1,41 Die dialysierte Suspension mit einem Gehalt an HBsAg (2250 ml) wird von oben in den stationären Rotor gepumpt, wobei 2250 ml 40% NaBr am Rotorboden verdrängt werden. Sodann wird der Rotor auf 30 000 U/min beschleunigt und 18 Stunden bei dieser Drehzahl betrieben. Nach dem Abbremsen des Rotors werden 2000 ml an HB5Ag reichem Material im Dichtebereich von 1,21 bis 1,24 g/ cm3 gewonnen und gegen Phosphatpuffer dialysiert.The rotor of a centrifuge (Electronucleonics K) is 8400 ml Phosphate buffer filled. After operating the rotor up to 10,000 rpm for The system is degassed in the stationary rotor from below using the following step gradient pumped: 1. 2000 ml 10% NaBr, 9 = 1.08 2. 1000 ml 20% NaBr, y = 1.17 3. 1500 ml 30% NaBr, Q = 1.28 4. 3900 ml 40% NaBr, y = 1.41 The dialyzed suspension with a content of HBsAg (2250 ml) is pumped from above into the stationary rotor, whereby 2250 ml of 40% NaBr are displaced at the rotor base. Then the rotor will open Accelerated 30,000 rpm and operated at this speed for 18 hours. After this When the rotor is decelerated, 2000 ml of material rich in HB5Ag in the density range of 1.21 to 1.24 g / cm3 obtained and dialyzed against phosphate buffer.
Anschliessend wird der Rotor mit Phosphatpuffer gefüllt und auf die vorstehend beschriebene Weise entgast. Anschliessend wird der nachstehend angegebene Dichtegradient in den Boden des ~stationären~Rötõrs gepumpt.The rotor is then filled with phosphate buffer and placed on the degassed manner described above. Then the following is given Density gradient pumped into the bottom of the ~ stationary ~ red.
1. 2000 ml 5% Saccharose, 9 = 1,02 2. 1650 ml 15% Saccharose, = 1,06 3. 1750 ml 25% Saccharose, Q 1,10 4. 3000 ml 50% Saccharose, = 1,23 Das bei der isopyknischen Bandenstufe mit NaBr gewonnene, an HBsAg reiche Material (2000 ml) wird von oben in den Rotor gepumpt, wodurch 2000 ml 50% Saccharose am Rotorboden verdrängt werden. Der Rotor wird sodann 18 Stunden bei 28 000 U/min betrieben. Nach dem Abbremsen des Rotors werden 1000 ml an HBSAg reichem Material im Dichtebereich von 1,135 bis 1,165 gewonnen. 1. 2000 ml of 5% sucrose, 9 = 1.02 2. 1650 ml of 15% sucrose, = 1.06 3. 1750 ml of 25% sucrose, Q 1.10 4. 3000 ml of 50% sucrose, = 1.23 The at the isopycnic band level obtained with NaBr, HBsAg-rich material (2000 ml) is pumped into the rotor from above, leaving 2000 ml of 50% sucrose at the bottom of the rotor be displaced. The rotor is then operated at 28,000 rpm for 18 hours. To When the rotor is decelerated, 1000 ml of material rich in HBSAg are in the density range won from 1.135 to 1.165.
Ende der BeschreibungEnd of description
Claims (11)
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|---|---|---|---|
| DE19782803920 DE2803920A1 (en) | 1978-01-30 | 1978-01-30 | Hepatitis B surface antigen particle prepn. - by ammonium sulphate pptn., isopycnic banding and rate zonal banding |
Applications Claiming Priority (1)
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| DE19782803920 DE2803920A1 (en) | 1978-01-30 | 1978-01-30 | Hepatitis B surface antigen particle prepn. - by ammonium sulphate pptn., isopycnic banding and rate zonal banding |
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ID=6030720
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| DE19782803920 Granted DE2803920A1 (en) | 1978-01-30 | 1978-01-30 | Hepatitis B surface antigen particle prepn. - by ammonium sulphate pptn., isopycnic banding and rate zonal banding |
Country Status (1)
| Country | Link |
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| DE (1) | DE2803920A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2470795A1 (en) * | 1979-12-07 | 1981-06-12 | Pasteur Institut | PROCESS FOR THE PURIFICATION OF PARTICLES OF BIOLOGICAL ORIGIN, IN PARTICULAR OF THE SURFACE ANTIGEN OF HEPATITIS B VIRUS (AGHBS) AND THE PRODUCTS OBTAINED |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3951937A (en) * | 1973-12-20 | 1976-04-20 | The Community Blood Council Of Greater New York, Inc. | Large scale purification of hepatitis type B antigen using polyethylene glycol |
| US4024243A (en) * | 1975-06-16 | 1977-05-17 | Merck & Co., Inc. | Process for isolating hepatitis B antigen |
-
1978
- 1978-01-30 DE DE19782803920 patent/DE2803920A1/en active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US3951937A (en) * | 1973-12-20 | 1976-04-20 | The Community Blood Council Of Greater New York, Inc. | Large scale purification of hepatitis type B antigen using polyethylene glycol |
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Der Internist 14, 546-553, 1973 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| FR2470795A1 (en) * | 1979-12-07 | 1981-06-12 | Pasteur Institut | PROCESS FOR THE PURIFICATION OF PARTICLES OF BIOLOGICAL ORIGIN, IN PARTICULAR OF THE SURFACE ANTIGEN OF HEPATITIS B VIRUS (AGHBS) AND THE PRODUCTS OBTAINED |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2803920C2 (en) | 1987-12-03 |
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