DE2729555C2 - Process for forming a coating of a receptor on a plastic substrate, the product obtained therefrom and its use - Google Patents
Process for forming a coating of a receptor on a plastic substrate, the product obtained therefrom and its useInfo
- Publication number
- DE2729555C2 DE2729555C2 DE19772729555 DE2729555A DE2729555C2 DE 2729555 C2 DE2729555 C2 DE 2729555C2 DE 19772729555 DE19772729555 DE 19772729555 DE 2729555 A DE2729555 A DE 2729555A DE 2729555 C2 DE2729555 C2 DE 2729555C2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- receptor
- plastic substrate
- ligand
- coating
- blocking agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/545—Synthetic resin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
- G01N33/9453—Cardioregulators, e.g. antihypotensives, antiarrhythmics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Application Of Or Painting With Fluid Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft zunächst ein Verfahren zur Bildung eines Überzugs eines Rezeptors für einen zu untersuchenden Liganden auf einem Kunststoffsubstrat mit einer Lösung des Rezeptors. Ein solches Verfahren ist aus der US-PS 37 90 663 bekanntThe invention relates first of all to a method for forming a coating of a receptor for a subject to be examined Ligands on a plastic substrate with a solution of the receptor. Such a procedure is known from US-PS 37 90 663
Die Analyse von Liganden basiert auf der Konkurrenz zwischen einem markierten und einem unmarkierten Liganden um eine begrenzte Anzahl von Stellen auf einem Rezeptor für den Liganden. Dabei werden eine bekannte Menge eines markierten Liganden, eine Probe, die eine unbekannte Menge des nicht markierten Liganden und eine bekannte Menge an Rezeptor fürThe analysis of ligands is based on the competition between a labeled and an unlabeled Ligands around a limited number of sites on a receptor for the ligand. Thereby one known amount of a labeled ligand; a sample that contains an unknown amount of the unlabelled Ligands and a known amount of receptor for
ίο den Liganden enthält, zusammengebracht Der Prozentsatz an markierten Liganden, der an den Rezeptor gebunden ist, hängt von der Menge des nicht markierten Liganden in der Probe ab. Nach der Abtrennung des Rezeptors, einschließlich des gebundenen Liganden, aus der Probe, wird die Menge des markierten Liganden, der an den Rezeptor gebunden oder in der Probe verblieben ist, bestimmt und mit einer Standardkurve verglichen, um die Menge an nicht markiertem Liganden, die in der Probe vorlag, zu bestimmen.ίο contains the ligand, brought together The percentage The amount of labeled ligand that is bound to the receptor depends on the amount of unlabeled Ligands in the sample. After the receptor, including the bound ligand, has been separated off of the sample, the amount of labeled ligand that bound to the receptor or remained in the sample is determined and compared with a standard curve to determine the amount of unlabelled ligand, which was present in the sample to be determined.
Zur erleichterten Abtrennung des Rezeptors aus der Probe ist der Rezeptor in vielen Fällen an ein Kunststoffsubstrat, z. B. ein Rohr, gebunden. Dadurch läßt sich der Rezeptor, einschließlich des gebundenen Liganden, leicht von der Probe abtrennen, um die Bestimmung der Menge an markiertem Liganden, der entweder an den Rezeptor gebunden oder in der Probe verblieben ist, durchzuführen.To facilitate the separation of the receptor from the sample, the receptor is in many cases attached to a plastic substrate, z. B. a pipe, bound. This allows the receptor, including the bound ligand, Easily separate from the sample to allow the determination of the amount of labeled ligand attached to either Receptor is bound or remained in the sample.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, das eingangs erwähnte Verfahren so weiter zu entwickeln, daß im Vergleich zum Stand der Technik die Menge an für die Überzugsbildung erforderlichem Rezeptor wesentlich verringert werden kann. Die Erfindung ist weiterhin auf das bei dem neuen Verfahren erzielte Produkt, und dessen Verwendung gerichtet.The invention is based on the object of further developing the method mentioned at the beginning so that compared to the prior art, the amount of receptor required for coating formation is significant can be reduced. The invention is also based on the product obtained in the new process, and its use directed.
Zur Lösung der angegebenen Erfindungsaufgabe wird vorgeschlagen, daß die für die Überzugsbildung auf dem Kunststoffsubstrat verwendete Rezeptorlösung ein Blockierungsmittel für die Liganden-Rezeptorstellen enthält, um ein Haften der Rezeptorstellen auf dem Kunststoffsubstrat zu verhindern, wobei das Blokkierungsmittei eine Bindungskapazität für den Rezeptor von 0,001 bis 5% aufweist und durch den zu analysierenden Liganden verdrängt werden kann, und daß die Bildung des Überzugs in Anwesenheit eines Desaggregationsmittels für den Rezeptor erfolgt, um ein Haften des Rezeptors an dem Kunststoffsubstrat in Form von Aggregaten zu verhindern.To achieve the stated object of the invention, it is proposed that the coating formation on the plastic substrate, receptor solution used a blocking agent for the ligand receptor sites to prevent the receptor sites from sticking to the plastic substrate, the blocking agent has a binding capacity for the receptor of 0.001 to 5% and by the to be analyzed Ligand can be displaced, and that the formation of the coating in the presence of a disaggregating agent for the receptor, the receptor adheres to the plastic substrate in the form of aggregates to prevent.
Für die Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird vorzugsweise ein Blockierungsmittel mit einer Bindungskapazität für den Rezeptor von 0,001 bis 1 % verwendet.A blocking agent is preferably used for carrying out the method according to the invention a binding capacity for the receptor of 0.001 to 1% is used.
Die obere Bindungskapazitätsgrenze stellt sicher, daß bei der Verwendung des bei dem erfindungsgemäßen Verfahrens erhaltenen Produkts das Blockierungsmittel an den Rezeptorstellen durch den zu untersuchenden Liganden ersetzt werden kann. Dabei versteht sich, daß die als Blockierungsrnittel verwendete Substanz eine Affinität für die Oberfläche des Kunststoffsubstrats aufweisen soll, die unter der Affinität des Rezeptors für die Kunststoffoberfläche liegt, um so eine gezielte Orientierung des Rezeptors an dem Kunststoff zu vermöglichen. Das Blockierungsmittel ist vorzugsweise hydrophil. Die Verwendung einer nichthydrophilen Substanz als Blokkierungsmittel wird jedoch dadurch nicht ausgeschlossen. The upper binding capacity limit ensures that when using the in the invention The product obtained by the method to be examined contains the blocking agent at the receptor sites Ligands can be replaced. It is understood that the substance used as a blocking agent Affinity for the surface of the plastic substrate should have that below the affinity of the receptor for the Plastic surface lies in order to enable a specific orientation of the receptor on the plastic. The blocking agent is preferably hydrophilic. The use of a non-hydrophilic substance as a blocking agent however, this does not exclude this.
Als Beispiele für bei dem erfindungsgemäßen Verfahren einsetzbare Blockierungsmittel seien genannt: cardiale Glykoside, wie Ouabain, Gitoxin, Gitaloxin, Ace-Examples of blocking agents which can be used in the process according to the invention are: cardiale Glycosides, such as ouabain, gitoxin, gitaloxin, ace-
tylstropanthidin usw.; Steroide, wie Progesteron, Testosteron, Cortisol usw.tylstropanthidine, etc .; Steroids, such as progesterone, testosterone, Cortisol etc.
Im übrigen liegt die Wahl eines geeigneten Mittels zur Blockierung der Rezeptorstellen unter Berücksichtigung der Erfindungsbeschreibung im Bereich fachmännischen Könnens.In addition, the choice of a suitable means of blocking the receptor sites is a consideration the description of the invention in the area of technical ability.
Wird das erfindungsgemäße Verfahren mit einem Antikörper-Rezeptor durchgeführt, dann wird dieser aufgrund der Anwesenheit des erfindungsgemäß verwendeten Desaggregationsmittels im monomeren Zustand gehalten und ein Haften bzw. Kleben in Form von Dimeren oder Aggregaten an dem Kunststoffsubstrat verhindert, wodurch die Zugänglichkeit bzw. Verfügbarkeit der Rezeptorstellen während der späteren Analyse (Ligandenuntersuehung) eingeschränkt würde.If the method according to the invention is carried out with an antibody receptor, then this is due to the presence of the disaggregating agent used according to the invention in the monomeric state held and prevents sticking or sticking in the form of dimers or aggregates to the plastic substrate, whereby the accessibility or availability of the receptor sites during the later analysis (ligand investigation) would be restricted.
Als Beispiele für die erfindungsgemäß einsetzbaren Desaggregationsmittel seien genannt: Glycin, Lysin usw.; Harnstoff; Guanidin; lösliche anorganische Salze, insbesondere Natrium- und Calciumsalze u. dgi. Im übrigen liegt auch die Auswahl eines im Einzelfall geeigneten Desaggregationsmittels unter Berücksichtigung der Erfindungsbeschreibung im Bereich fachmännischen Könnens.Examples of the deaggregation agents which can be used according to the invention are: glycine, lysine etc.; Urea; Guanidine; soluble inorganic salts, especially sodium and calcium salts and the like. Furthermore also depends on the selection of a disaggregation agent suitable in the individual case, taking into account the Description of the invention in the area of technical ability.
Das Blockierungsmittel wird in einer Menge verwendet, die wirksam zur Blockierung der Rezeptorstellen des Rezeptors für den Liganden ist und variiert mit der Rezeptormenge und dem speziell verwendeten Rezeptor. Im allgemeinen verwendet man das Blockierungsmittel in einer Menge von 0,0001 bis 0,1%, vorzugsweise von 0,0005 bis 0,005%, jeweils bezogen auf das Gewicht (z. B. der Lösung). Entsprechend hängt die Menge des verwendeten Desaggregationsmittels von dem Rezeptor und seiner Menge ab, wobei das Desaggregationsmittel im allgemeinen in einer Menge von 0,01 m bis 0,9 m, vorzugsweise von 0,25 m bis 035 m (bzw. 0,01 Mol bis 0,9 Mol, vorzugsweise von 0,25 Mol bis 0,35 Mol) verwendet wird.The blocking agent is used in an amount effective to block the receptor sites of the receptor for the ligand and will vary with the amount of receptor and the particular receptor used. In general, the blocking agent is used in an amount of from 0.0001 to 0.1%, preferably from 0.0005 to 0.005%, in each case based on the weight (e.g. of the solution). The amount of the used disaggregation agent depends on the receptor and its amount, the disaggregation agent generally in an amount from 0.01 m to 0.9 m, preferably from 0.25 m to 035 m (or 0.01 mol to 0.9 mol, preferably from 0.25 mol to 0.35 mol) is used.
Beim Überziehen des Kunststoffsubstrats mit dem Rezeptor kann im übrigen entsprechend dem Stand der Technik vorgegangen werden. So können die Temperaturen für den Überzugsprozeß in der Größenordnung von 10°C bis etwa 38°C liegen. Die Zeitdauer für die Sicherstellung des Haftens bzw. Klebens des Rezeptors auf dem Kunststoffsubstrat kann 15 Minuten bis 24 Stunden betragen.When coating the plastic substrate with the receptor, according to the state of the Technique to be proceeded. Thus, the temperatures for the coating process can be of the order of magnitude from 10 ° C to about 38 ° C. The length of time it takes to ensure the receptor adheres on the plastic substrate can be 15 minutes to 24 hours.
Das mit Antikörper überzogene bzw. ausgekleidete Kunststoffsubstrat, z. B. Rohr, wird zweckmäßig mit einem Protein enthaltenden Puffer behandelt, um jegliche nichtbeschichtete Stellen auf dem Kunststoffsubstrat mit Protein zu überziehen und so eine unspezifische Bindung bei der späteren Analyse zu verringern bzw. zu eliminieren. Nach dem Trocknen steht das bei dem erfindungsgemäßen Verfahren erhaltene Kunststoffsubstrat zur Weiterverwendung zur Verfügung. Die Beschichtung des Kunststoffsubstrats mit Proteinen ist aus der DE-OS 24 40 367 bekannt.The antibody coated or lined plastic substrate, e.g. B. pipe is expedient with a Protein-containing buffer treats any uncoated areas on the plastic substrate to be coated with protein and thus to reduce or increase non-specific binding in the later analysis eliminate. After drying, the plastic substrate obtained in the process according to the invention stands available for further use. The coating of the plastic substrate with proteins is off the DE-OS 24 40 367 known.
Ein besonderer Vorteil der vorliegenden Erfindung liegt darin, daß hohe Rezeptortiter zur Überzugsbildung des Kunststoffsubstrats verwendet werden können. So kann die Antikörperkonzentration 'Λο bis 1A der bisherigen Antikörperkonzentration betragen, was einem fünf- bis zehnfachen Ansteigen des Antikörpertiters entspricht.A particular advantage of the present invention is that high receptor titers can be used to form a coating on the plastic substrate. For example, the antibody concentration can be up to 1 A of the previous antibody concentration, which corresponds to a five to tenfold increase in the antibody titer.
Der auf das Kunststoffsubstrat aufgebrachte Rezeptor kann entweder ein entwickelter bzw. hergestellter Antikörper oder ein natürlich auftretender Rezeptor sein; derartige Rezeptoren sind bekannt. So können die Antikörper durch Injektion eines Antigens oder Haptens, das an einen antigenen Träger gebunden ist, in dem Blutstrom eines Wirbeltieres entwickelt werden. Ein derartiger Antikörper ist dann ein spezifischer Rezeptor für ein derartiges Antigen oder Hapten- Das mit dem Rezeptor überzogene Kunststoffsubstrat kann anschließend für die Analyse einer Vielzahl von Liganden verwendet werden, wie (1) Antigene, die beim Einbringen in den Blutstrom eines Wirbeltieres zur Bildung von Antikörpern führen; (2) Haptene, die bei Bindung an einenThe receptor applied to the plastic substrate can either be developed or manufactured Be antibody or a naturally occurring receptor; such receptors are known. So they can Antibodies by injection of an antigen or hapten bound to an antigenic carrier in the Bloodstream of a vertebrate animal can be developed. Such an antibody is then a specific receptor for such an antigen or hapten- The plastic substrate coated with the receptor can then can be used for the analysis of a wide variety of ligands, such as (1) antigens produced when introduced into cause the bloodstream of a vertebrate animal to produce antibodies; (2) Haptens, which when bound to a
ίο antigenen Träger und Einbringen in den Blutstrom eines Wirbeltieres, Antikörper spezifisch für das Hapten bilden oder (3) Liganden, die natürlich vorkommende Rezeptoren haben, die in einer für den Liganden spezifischen Form isoliert werden können. Es versteht sich, daß ein Ligand natürlich auftretende Rezeptoren haben kann und auch bei Bindung an ein Protein als ein Hapten fungieren kann.ίο antigenic carrier and introduction into the bloodstream of one Vertebrate animals that form antibodies specific for the hapten or (3) ligands that are naturally occurring receptors which can be isolated in a form specific for the ligand. It goes without saying that a ligand can have naturally occurring receptors and also when bound to a protein as a hapten can act.
Als Beispiele für den Ligand, auf die die Erfindung anwendbar ist, können genannt werden: Polypeptide, Nukleotide, Nukleoside und Proteine, wie ACTH, Oxytocin, luteinisierendes Hormon, Insulin, Proinsulin, Bence-Jones-Protein, choriones Gonadotropin, Hypophysengonadotropin. Wachstumshormon, Renin, Thyroxin bindendes Globulin, Bradykinin, Angiotensin, FoI-likel stimulierendes Hormon, cyclisches AMP, Cholyglycin, cyclische GMP usw.; Steroide, einschließlich Östrogene, Gestrogene, Androgene, adrenocortical? Hormone, Gallensäuren, cardiotonische Glykoside, Aglycone sowie Saponine. Als spezielle Beispiele können folgende genannt werden: Thyroxin, Trijodthyronin, Testosteron, Androsteron, östron, östriol, Progesteron, Pregnenolen bzw. Pregnenolon, 17-Hydroxy-dioxycorticosteron (Verbindung S), Deoxycortiocosteron, Cortison, Corticosteron, Cortisol, Aldosteron, Digoxin, Digitoxin usw.; Vitamine, wie Vitamin A, die Vitamin-B-Gruppe, Vitamin C, die D-Vitamine, Folsäure und die Vitamine E und K, sowie verschiedene Liganden, wie Antigene für virale Hepatitis A und B, Rubella, Herpes simplex, Λ-Beto-Protein bzw. Λ-Föto-Protein usw.As examples of the ligand to which the invention is applicable, there may be mentioned: polypeptides, Nucleotides, nucleosides and proteins such as ACTH, oxytocin, luteinizing hormone, insulin, proinsulin, Bence Jones protein, chorionic gonadotropin, pituitary gonadotropin. Growth hormone, renin, thyroxine binding globulin, bradykinin, angiotensin, foil-likel stimulatory hormone, cyclic AMP, cholyglycine, cyclic GMP, etc .; Steroids, including estrogens, Gestrogenic, Androgenic, Adrenocortical? Hormones, bile acids, cardiotonic glycosides, aglycones as well as saponins. The following can be mentioned as specific examples: thyroxine, triiodothyronine, testosterone, Androsterone, estrone, estriol, progesterone, pregnenols or pregnenolone, 17-hydroxy-dioxycorticosterone (compound S), deoxycortiocosterone, cortisone, corticosterone, Cortisol, aldosterone, digoxin, digitoxin, etc .; Vitamins, such as vitamin A, the vitamin B group, vitamin C, the D vitamins, folic acid and vitamins E and K, as well as various ligands, such as antigens for viral Hepatitis A and B, rubella, herpes simplex, Λ-beto-protein or Λ-feto-protein, etc.
Die vorliegenden Substanzen sind lediglich Beispiele und es versteht sich, daß derartige Substanzen in Form geeigneter Analoger verwendet werden können.The present substances are only examples and it is understood that such substances in the form suitable analogs can be used.
Die Analyse unter Verwendung des mit dem Rezeptor überzogenen Kunststoffsubstrats kann durch Anwendung eines markierten Liganden erfolgen, z. B. markiert mit einem Radioisotop, Enzym, einer fluoreszierenden Substanz usw. Derartige Verfahrensweisen sind bekannt und bedürfen daher keiner näheren Erläuterung. The analysis using the plastic substrate coated with the receptor can be carried out by application of a labeled ligand, e.g. B. labeled with a radioisotope, enzyme, fluorescent Substance, etc. Such procedures are known and therefore do not require any further explanation.
Das Kunststoffsubstrat oder polymere Substrat kann in Teilchenform, in Form eines Rohres, in Bogen- bzw. Plattenform usw. vorliegen, wobei die Rohr- bzw. Röhrchenform bevorzugt ist. Der Kunststoff kann jeglicher Kunststoff aus einer Vielzahl von Polymeren sein, die gewöhnlich als Substrate für einen Rezeptor verwendet werden, einschließlich beispielsweise Polystyrol, Polyäthylen, Polypropylen, Polyamiden, Polyacrylamiden usw. Die Wahl eines spziellen Kunststoffsubstrats ergibt sich für den Fachmann aus den Lehren der vorliegenden Beschreibung.The plastic substrate or polymer substrate can be in particle form, in the form of a tube, in an arch or Plate shape, etc., the tubular shape being preferred. The plastic can be any Plastic can be made from a variety of polymers commonly used as substrates for a receptor including, for example, polystyrene, polyethylene, polypropylene, polyamides, polyacrylamides etc. The choice of a particular plastic substrate will be apparent to those skilled in the art from the teachings herein Description.
Die folgenden Beispiele dienen zur weiteren Erläuterung der Erfindung, ohne sie zu beschränken.The following examples serve to further illustrate the invention without restricting it.
Digoxin-Antikörper, erzeugt in Schafen, mit einem digoxinmenschlichen Serumalbumin-Konjugat, in einer wäßrigen Pufferlösung (0,05 m Carbonat/Bicarbonat,Digoxin antibody made in sheep with a digoxin human serum albumin conjugate in one aqueous buffer solution (0.05 m carbonate / bicarbonate,
pH =9,6, 03 m Glycin, 0,001% Ouabain und 0,005% Chloramphenicol) (1,0 ml) wird in ein Polystyrolrohr bei Raumtemperatur gefüllt und zwei Stunden bei Raumtemperatur gehalten, worauf die Flüssigkeit aus dem Rohr abgesaugt wird. Eine Pufferlösung (0,1 m Phosphat, pH = 7,0, mit 03% NaCl und 0,1% NaN3) einschließlich g Lysozym pro I wird in das RcLr gefügt, und es wird etwa 15 Minuten bei Raumtemperatur gehalten. Die Flüssigkeit wird aus dem Rohr abgesaugt und die Rohre werden im Vakuum bei Raumtemperatur getrocknet.pH = 9.6, 03 m glycine, 0.001% ouabain and 0.005% chloramphenicol) (1.0 ml) is placed in a polystyrene tube at room temperature and kept at room temperature for two hours, after which the liquid is aspirated from the tube. A buffer solution (0.1 M phosphate, pH = 7.0, with 03% NaCl and 0.1% NaN 3 ) including g lysozyme per l is added to the RcLr and it is kept at room temperature for about 15 minutes. The liquid is sucked out of the tube and the tubes are dried in vacuo at room temperature.
Die mit Antikörper überzogenen bzw. ausgekleideten Rohre, hergestellt wie in Beispiel 1, werden zur Untersuchung von Digoxin wie folgt verwendet:The antibody-coated or lined pipes, produced as in Example 1, are used for examination used by digoxin as follows:
1. Bei Raumptemperatur werden 50 μΐ eines Digoxinstandards oder einer Probe von einem Patienten, 100 μΐ 3-O-Succinyl-digoxigenin-tyrosin (125I) und 900 μΐ 0,1 m phosphatgepufferte Salzlösung (PBS) in die Röhrchen wie folgt pipettiert:1. At room temperature, 50 μΐ of a digoxin standard or a sample from a patient, 100 μΐ 3-O-Succinyl-digoxigenin-tyrosine ( 125 I) and 900 μΐ 0.1 M phosphate-buffered saline (PBS) are pipetted into the tubes as follows:
Rohr Nr. Digoxin im Standard (ng/ml)Tube No. Digoxin in the standard (ng / ml)
1,2 0,01.2 0.0
3,4 0,53.4 0.5
5,6 1,05.6 1.0
7,8 1,57.8 1.5
9,10 2,09.10 2.0
11,12 3,011.12 3.0
13,14 5,013.14 5.0
15,16 usw. Patienten- Probe15,16 etc. patient sample
3535
Die Röhrchen werden im Wasserbad 60 Minuten bei 37°C inkubiertThe tubes are incubated in a water bath at 37 ° C for 60 minutes
2. Die Flüssigkeit wird aus den Rohren abgesaugt, worauf 1,0 bis 1,5 ml PBS zugefügt werden und abgesaugt (dekantiert) wird. Die Rohre enthalten nun markiertes und unmarkiertes Digoxin, gebunden an Antikörper.2. The liquid is aspirated from the tubes, whereupon 1.0 to 1.5 ml of PBS are added and is sucked off (decanted). The tubes now contain labeled and unlabeled digoxin, bound of antibodies.
3. Die Rohre werden in Folgen von mindestens 0,5 Minuten mit einem Gamma-Zählergerät gemessen und eine Standardkurve wird hergestellt, die den Bereich von 0,5—5,0 ng Digoxin pro ml der Patientenprobe umfaßt3. The pipes are measured with a gamma counter over a period of at least 0.5 minutes and a standard curve is made covering the range of 0.5-5.0 ng digoxin per ml of patient sample includes
4. Die Dogixinkonzentration in der Probe ermittelt man auf der Standardkurve.4. The Dogixin concentration in the sample is determined on the standard curve.
5555
6060
Claims (13)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US05/702,691 US4120945A (en) | 1976-07-06 | 1976-07-06 | Substrate coated with receptor and labeled ligand for assays |
US05/707,683 US4105410A (en) | 1976-07-22 | 1976-07-22 | Receptor coated plastic for assay of ligands |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2729555A1 DE2729555A1 (en) | 1978-02-09 |
DE2729555C2 true DE2729555C2 (en) | 1985-12-12 |
Family
ID=27107006
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19772729555 Expired DE2729555C2 (en) | 1976-07-06 | 1977-06-30 | Process for forming a coating of a receptor on a plastic substrate, the product obtained therefrom and its use |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS54157690A (en) |
AU (1) | AU505248B2 (en) |
BE (1) | BE856549A (en) |
DE (1) | DE2729555C2 (en) |
FR (1) | FR2357901A1 (en) |
GB (1) | GB1560860A (en) |
IT (1) | IT1081127B (en) |
SE (1) | SE7707812L (en) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63246667A (en) * | 1987-03-31 | 1988-10-13 | Kyoto Ikagaku Kenkyusho:Kk | Detection of hemoglobin in excrement |
JPS63246668A (en) * | 1987-03-31 | 1988-10-13 | Kyoto Ikagaku Kenkyusho:Kk | Detection of occult blood in excrement |
JPH0441434U (en) * | 1990-08-07 | 1992-04-08 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3790663A (en) * | 1970-07-07 | 1974-02-05 | Us Health | Preparation of dry antiserum coated solid-phase for radioimmunoassay of antigens |
DE2440367C2 (en) * | 1973-08-30 | 1984-03-15 | General Electric Co., Schenectady, N.Y. | Process for the production of multimolecular layers from immunologically complexed proteins on a substrate |
-
1977
- 1977-06-30 DE DE19772729555 patent/DE2729555C2/en not_active Expired
- 1977-07-04 AU AU26711/77A patent/AU505248B2/en not_active Expired
- 1977-07-05 SE SE7707812A patent/SE7707812L/en not_active Application Discontinuation
- 1977-07-05 IT IT2541177A patent/IT1081127B/en active
- 1977-07-06 FR FR7720835A patent/FR2357901A1/en active Granted
- 1977-07-06 JP JP8087677A patent/JPS54157690A/en active Pending
- 1977-07-06 BE BE179130A patent/BE856549A/en unknown
- 1977-07-06 GB GB2841677A patent/GB1560860A/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2357901A1 (en) | 1978-02-03 |
AU505248B2 (en) | 1979-11-15 |
SE7707812L (en) | 1978-01-07 |
JPS54157690A (en) | 1979-12-12 |
DE2729555A1 (en) | 1978-02-09 |
AU2671177A (en) | 1979-01-11 |
GB1560860A (en) | 1980-02-13 |
BE856549A (en) | 1977-10-31 |
FR2357901B3 (en) | 1980-05-16 |
IT1081127B (en) | 1985-05-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69434038T2 (en) | SIMPLE IMMUNOCHEMICAL SEMI-QUANTITATIVE DETERMINATION METHOD AND DEVICE | |
DE2729268A1 (en) | SOLID SUBSTRATE COATED WITH RECEPTOR AND MARKED LIGAND AND ITS USE FOR ANALYSIS | |
DE2743444C3 (en) | Immunochemical measuring method and reagent for its implementation | |
DE2743445C2 (en) | Immunochemical hapten measurement method by agglutination inhibition | |
DE2323467C2 (en) | Methods for the detection and determination of haptens | |
DE2744836A1 (en) | IMMUNCHEMICAL MEASURING METHOD | |
CH645465A5 (en) | IMMUNIOLOGICAL METHOD FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF HAPTENEN AND TEST EQUIPMENT FOR IMPLEMENTING THE METHOD. | |
CH617774A5 (en) | ||
DE2920289A1 (en) | SOLID PHASE INVESTIGATION PROCEDURE | |
EP0001224A1 (en) | Method for the preparation of a water insoluble immunological diagnostic reagent | |
US4256725A (en) | Preparation of solid substrate containing receptor and labeled form of ligand for assays | |
DE69333582T2 (en) | Improved method for the determination of estradiol in a sample fluid and kit | |
DE2608667A1 (en) | SOLIDS DIAGNOSTIC REAGENT AND METHOD FOR MANUFACTURING THEREOF | |
DE2824903A1 (en) | IMMUNE ANALYSIS PROCEDURE | |
EP0943098A1 (en) | Receptor binding assay for detecting tsh-receptor auto-antibodies | |
DE2729555C2 (en) | Process for forming a coating of a receptor on a plastic substrate, the product obtained therefrom and its use | |
Reeves et al. | An improved method for the assay of progesterone by competitive protein binding | |
DE60017017T2 (en) | IMMUNTEST USING PARTICLES WITH CASEIN Hulls | |
DE2731028A1 (en) | METHOD FOR DETERMINING UNBONDED HORMONES OR PHARMACA | |
DE2722038A1 (en) | SUBSTANCE COMPOSITIONS BASED ON ISOCYANATE REACTRION PRODUCTS, PROCESS FOR THEIR MANUFACTURING AND USE | |
DE3586808T2 (en) | L-THYROXIN DETECTING MONOCLONAL ANTIBODIES. | |
DE2816830A1 (en) | ANTI-BODY DOUBLE COATED TEST TUBE AND ITS USE IN RADIOIMMUNASSAY | |
DE3114362C2 (en) | Process for producing an antibody or antiserum, use of this process for obtaining mammalian cells which are capable of producing such an antibody, and use of the antibody or antiserum produced in this way for immunoassay | |
EP0303284B1 (en) | Immunological method for the determination of free haptenic substances | |
DE3782282T2 (en) | SOLID PHASE SYSTEM WITH TETRAZOLIC SALTS FOR USE IN LIGAND RECEPTOR ASSAYS. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8110 | Request for examination paragraph 44 | ||
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition |