DE2718588A1 - Verfahren und reagens zur bestimmung von harnsaeure - Google Patents
Verfahren und reagens zur bestimmung von harnsaeureInfo
- Publication number
- DE2718588A1 DE2718588A1 DE19772718588 DE2718588A DE2718588A1 DE 2718588 A1 DE2718588 A1 DE 2718588A1 DE 19772718588 DE19772718588 DE 19772718588 DE 2718588 A DE2718588 A DE 2718588A DE 2718588 A1 DE2718588 A1 DE 2718588A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- acid
- nad
- lower alkyl
- group
- reagent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 34
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 26
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 26
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 title claims description 26
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 20
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 36
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims description 36
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical group C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 14
- WFKAJVHLWXSISD-UHFFFAOYSA-N isobutyramide Chemical compound CC(C)C(N)=O WFKAJVHLWXSISD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical group C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 102000005369 Aldehyde Dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 10
- 108020002663 Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 10
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 claims description 10
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 claims description 10
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 8
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Chemical group COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 7
- 229940047889 isobutyramide Drugs 0.000 claims description 7
- SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N picolinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=N1 SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 claims description 5
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 5
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 4
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 3
- 150000003217 pyrazoles Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 claims description 2
- NOIXNOMHHWGUTG-UHFFFAOYSA-N 2-[[4-[4-pyridin-4-yl-1-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrazol-3-yl]phenoxy]methyl]quinoline Chemical compound C=1C=C(OCC=2N=C3C=CC=CC3=CC=2)C=CC=1C1=NN(CC(F)(F)F)C=C1C1=CC=NC=C1 NOIXNOMHHWGUTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O NADP(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 33
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 23
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 9
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- -1 alcohol aldehyde Chemical class 0.000 description 5
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HGINADPHJQTSKN-UHFFFAOYSA-N Monoethyl malonic acid Chemical compound CCOC(=O)CC(O)=O HGINADPHJQTSKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 229940039748 oxalate Drugs 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- KPWDGTGXUYRARH-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trichloroethanol Chemical compound OCC(Cl)(Cl)Cl KPWDGTGXUYRARH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021336 beef liver Nutrition 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- ZNCPFRVNHGOPAG-UHFFFAOYSA-L sodium oxalate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C([O-])=O ZNCPFRVNHGOPAG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940039790 sodium oxalate Drugs 0.000 description 2
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 2
- DFUAIALZXKLUQU-UHFFFAOYSA-N 4,5-dibromo-1h-pyrazole Chemical compound BrC=1C=NNC=1Br DFUAIALZXKLUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVGCPEDBFHEHEZ-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-1h-pyrazole Chemical compound BrC=1C=NNC=1 WVGCPEDBFHEHEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BADSZRMNXWLUKO-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-1h-pyrazole Chemical compound ClC=1C=NNC=1 BADSZRMNXWLUKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LLNQWPTUJJYTTE-UHFFFAOYSA-N 4-iodopyrazole Chemical compound IC=1C=NNC=1 LLNQWPTUJJYTTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YAXKXMVDJJMGRY-UHFFFAOYSA-N 4-propyl-1h-pyrazole Chemical compound CCCC=1C=NNC=1 YAXKXMVDJJMGRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-L Oxalate Chemical compound [O-]C(=O)C([O-])=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical group ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010580 coupled enzyme reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- RIKMMFOAQPJVMX-UHFFFAOYSA-N fomepizole Chemical compound CC=1C=NNC=1 RIKMMFOAQPJVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004285 fomepizole Drugs 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000012332 laboratory investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Patentanwälte Dipl.-Ing. H. Weickmann, Dipl.-Phys. Dr. K.Fincke
Dipl.-Ing. F. A.Weickmann, Dipl.-Chem. B. Huber
8 MÜNCHEN 86, DEN POSTFACH 860 820 int. Nr. 2126 MÖHLSTRASSE 22, RUFNUMMER 98 39 21/22
BOEHRINGER MANNHEIM GMBH Sandhofer Straße 112-132, 6800 Mannheim
Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure
Die Erfindung betrifft ein Verfahren und Reagens zur störungsfreien
Bestimmung von Harnsäure, insbesondere in Serum und Plasma, mit Hilfe des Uricase/Katalase/Aldehyddehydrogenase-Systems.
Ein erhöhter Harnsäurespiegel im Serum (Plasma) stellt einen wichtigen Hinweis auf das Bestehen einer Gichtkrankheit dar.
Die quantitative Analyse der Harnsäure im Serum gehört daher zu den im klinisch-chemischen Laboratorium häufig auszuführenden
Untersuchungen.
Zur enzymatischen Bestimmung der Harnsäure werden bisher in der Praxis im wesentlichen zwei Methoden angewendet, die als
809845/0054
Uricase-Methode und Urica-quant-Methode bekannt sind (vgl.
"Methoden der enzymatischen Analyse" (Bergmeyer, H.U., Ed.),
Band 2, (1974) 1999 bis 2005, Verlag Chemie). Neuerdings wurde ein neues enzymatisches Verfahren bekannt (DT-OS 24 50 726),
das auf dem folgenden Prinzip beruht:
üricase
Harnsäure + 2 H3O + O3 Allantoin + CO2 + H3O2
Harnsäure + 2 H3O + O3 Allantoin + CO2 + H3O2
Katalase
H2O2 + Alkohol Aldehyd + 2 H2O
H2O2 + Alkohol Aldehyd + 2 H2O
Aldehyd-Dehydrogenase
Aldehyd + NAD(P) + Carbonsäure +
NAD(P)H + H+
Die Bildung von NAD(P)H, gemessen an der Extinktionszunahme bei 340 nm, Hg 334 nm oder Hg 36 5 nm, ist der Harnsäuremenge
proportional.
Verglichen mit der als Referenzmethode angesehenen Uricase-Methode
zeichnet sich dieses neuere Verfahren nach Haeckel durch eine geringere Störanfälligkeit gegenüber Verunreinigungen
im Analysenansatz aus, da die Messung im längerwelligen UV-Bereich durchgeführt wird (334 bis 365 nm anstelle von
293 bis 297 nm). Im Vergleich zum Urica-quant-Verfahren ist
der Zeitbedarf pro Analyse wesentlich geringer, wodurch diese neuere Methode besonders gut für schnell laufende Analysenautomaten
geeignet ist.
Bei Anwendung der oben beschriebenen Harnsäuretests nach Haeckel stellte sich heraus, daß in vielen Fällen, insbesondere
bei Seren von Nierenkranken oder Leberkranken, erhebliche Störungen des Tests durch Schleichreaktionen auftraten.
Beim Arbeiten nach der Endwert-Methode findet man bereits vor Zugabe der als Starter dienenden Uricase-Lösung eine NAD(P)H-
809845/0054
Zunahme bzw. NADH-Abnahme. Ferner kommt die Reaktion auch nach
Umsetzung der gesamten Harnsäure nicht zum Stillstand, sondern es wird weiterhin NAD(P)H gebildet. Die Geschwindigkeit dieser
Schleichreaktionen beträgt bei 25° C ca. 0,001 bis 0,004ÖE/min,
wobei außerdem auch noch die Geschwindigkeiten vor dem Start und nach Ablauf der Harnsäurereaktion oft voneinander verschieden
sind. Dies erschwert die genaue Auswertung der Meßergebnisse sehr, da man die der umgesetzten Harnsäuremenge entsprechende
Extinktionsdifferenz nur ungenau feststellen kann. Aus dieser Extinktionsdifferenz, dem Analysenansatz und dem molaren Extinktionskoeffizienten
von NADH ist jedoch das Analysenergebnis zu berechnen.
Diese Schleichreaktionen machen sich bei der Harnsäurebestimmung auf kinetischer Basis noch weitaus störender als bei der Bestimmung
nach dem Endwert-Verfahren bemerkbar. Bei den kinetischen
Verfahren muß man bekanntlich zur stets erforderlichen Kalibrierung eine Standardbestimmung durchführen, wozu man im allgemeinen
einen wäßrigen Standard einsetzt (J. Ziegenhorn in "Grundlagen der enzymatischen Analyse" H. Bergmeyer, Seite 81 bis 85,
Verlag Chemie (1977). Da bei dieser Standardanalyse keine Schleichreaktionen auftreten, erhält man bei der Analyse der
oben erwähnten Seren, in denen Schleichreaktionen auftreten, falsch positive bzw. negative Resultate; denn der auf die Harnsäure-Umsetzung
zurückgehenden Reaktion überlagert sich die Schleichreaktion. Die kinetischen Tests sind jedoch für das automatisierte
Laboratorium von großer Bedeutung. Sie ermöglichen es, den Zeitbedarf pro Analyse drastisch zu reduzieren und nutzen somit
die Analysenautomaten besser aus. Darüber hinaus sind sie
im allgemeinen weniger anfällig gegen Störungen durch Trübungen oder Eigenfarbe der Probe als Endwert-Verfahren.
Wie beim Endwert-Verfahren können zwar auch bei den kinetischen
Verfahren die durch Schleichreaktionen bedingten Störungen bis zu einem gewissen Grade durch die Bestimmung von
809845/0054
Proben-Leerwerten berücksichtigt werden. Dies hat jedoch Nachteile;
denn Proben-Leerwert-Bestimmungen bedeuten immer eine Verdoppelung des Zeit- und Reagensbedarfs bei der Durchführung
der Analyse. Vor allem an modernen, schnell laufenden Analysenautomaten (Centrifugal Fast Analyzer und verwandte Geräte),
beeinträchtigen Proben-Leerwert-Analysen die optimale Ausnutzung der Geräte sehr.
Je nach Ausmaß der Schleichreaktion wurden Fehler von 5 bis 20 % für die Analysenresultate festgestellt. Dies bedeutet
eine starke Einschränkung der Anwendbarkeit der Haeckel'sehen
Methode zur Harnsäurebestimmung in der Routinediagnostik, wo bekanntlich Harnsäuretests besonders oft an Seren von Nierenkranken
vorgenommen werden müssen. Gerade bei Gicht ist eine Erkrankung der Niere außerordentlich häufig.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zu schaffen, mit dem sich die geschilderten Störungen bei
der Harnsäurebestimmungsmethode nach Haeckel vermeiden lassen.
Gelöst wird diese Aufgabe erfindungsgemäß durch ein Verfahren zur Bestimmung von Harnsäure in biologischem Material mittels
Uricase, Katalase und Aldehyddehydrogenase in Gegenwart von Alkohol und Nicotinamid-adenin-dinucleotid bzw. -phosphat
(NAD(P)), welches dadurch gekennzeichnet ist, daß wenigstens eine Verbindung aus der Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)-alkylester,
Trihalogenäthanol, gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkylgruppen oder/und Halogenatomen substituiertes
Pyrazol oder Pyridin, gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure, deren Amid oder
Niedrigalkylester, Thioharnstoff, Isobutyramid oder chelatbildendes
Komplexierungsmittel, wie Nitrilotriessigsäure oder Äthylendiamintetraessigsäure zugesetzt wird.
Als biologisches Material kommen insbesondere Serum und Blut in Frage, es können jedoch auch Harn, durch Zellaufschluß ge-
809845/0054
wonnene Flüssigkeiten oder dergleichen, als Ausgangsmaterial
eingesetzt werden.
Unter Niedrigalkylgruppen werden im Rahmen der Erfindung solche
mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen verstanden. Halogenatome sollen
im Rahmen der Erfindung Chlor-, Brom- und Jodatome sein. Bei den Pyrazolderivaten werden solche bevorzugt, bei welchen ein
Substituent in Stellung 4 steht. Bei den Pyridincarbonsäuren steht die Carboxylgruppe in Stellung 3. Typische Beispiele
für geeignete Verbindungen sind Pyrazol, 4-Brompyrazol, 4-Jodpyrazol,
4-Chlorpyrazol, 4-Methylpyrazol, 4-fithylpyrazol,
4-Propylpyrazol, 3,4-Dibrompyrazol, Pyridin, N-MethyInicotinamid
u.a..
Die erfindungsgemäß einzusetzenden Zusatzmittel können einzeln oder in Kombination zugegeben werden. Während in vielen Fällen
ein einziges Zusatzmittel ausreicht, um eine Schleichreaktion vollständig zu unterdrücken, wird doch der Zusatz von wenigstens
zwei der erfindungsgemäßen Mittel bevorzugt. Besonders bevorzugt
wird die Verwendung eines Mittels aus der Gruppe Oxalat und Malonsäuremono(niedrig)alkylester
zusammen mit einem oder mehreren Mitteln aus der Gruppe der Trihalogenäthanole, Isobutyramid,
Thioharnstoff substituierten oder unsubstituierten Pyrazole, Pyridine oder Pyridincarbonsäuren. Unter den Oxalaten werden
die Alkalisalze bevorzugt.
Das Verfahren kann nach dem Endwert-Verfahren durchgeführt werden, bei dem die Konzentration der Harnsäure nach Ablauf
der Reaktion aus der gemessenen Extinktionsdifferenz ermittelt wird. Ferner können kinetische Verfahren angewendet werden,
bei denen die Geschwindigkeit der Reaktion als Meßgröße dient. Die Lehre, wie derartige kinetische Testsysteme beim Vorliegen
von gekoppelten Enzymreaktionen aufzubauen sind, ist aus der DT-OS 25 58 536 bekannt. Außerdem ist aus DT-PS 24 40 011
bereits bekannt, daß die an sich für die Anwendung von kinetischen Verfahren zu niedrige Michaelis-Konstante der Uricase
in bezug auf Harnsäure durch Zusatz eines kompetitiven Inhibi-
809845/0054
tors scheinbar erhöht werden kann, so daß kinetische Meßprinzipien
benutzt werden können. Ein solcher kompetitiver Inhibitor ist z. B. Xanthin.
Die erfindungsgemäß zugesetzten Verbindungen werden in solchen
Mengen verwendet, daß vorkommende Schleichreaktionen vollständig unterdrückt werden. Die erforderlichen Mengen lassen sich leicht
durch einen einfachen Vorversuch bestimmen. Im allgemeinen reichen
jedoch Zusätze zwischen 0,005 und 0,5 Mol Zusatzverbindung pro Liter Reagens vollständig aus. In Einzelfällen können größere
oder kleinere Zusätze in Betracht kommen.
Die Verfahrensbedingungen hinsichtlich pH-Wert, Zeit, Temperatur und dergleichen entsprechen den aus der DT-OS 24 50 726 bekannten.
Vorzugsweise wird bei pH 8,0 bis 9,O gearbeitet unter Verwendung eines in diesem Bereich seine maximale Kapazität aufweisenden
Puffers. Besonders gute Ergebnisse wurden mit Diphosphatpuffer
(K-P-O./HCl) erzielt. Zweckmäßig erfolgt die
Bestimmung bei Raumtemperatur.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Reagens zur Bestimmung von Harnsäure, enthaltend Uricase, Katalase, Aldehyddehydrogenase,
Alkohol, NAD(P) und Puffer, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß es wenigstens eine Verbindung aus
der Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)alkylester, Trihalogenäthanol,
gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkylgruppen oder/und Halogenatomen substituiertes Pyrazol oder Pyridin,
gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure, deren Amid oder Niedrigalkylester, Thioharnstoff,
Isobutyramid oder chelatbildendes Komplex!erungsmittel,
wie Nitrilotriessigsäure oder Äthylendiamintetraessigsäure enthält.
Ein bevorzugtes Reagens der oben genannten Art enthält etwa 1 χ 102 bis 1 χ 103 U/l Uricase, 500 bis 1500 kU/1 Katalase,
809845/0054
500 bis 1000 U/l Aldehyddehydrogenase, 0,3 bis 2 Mol/l Äthanol, 0,5 bis 1,5 mMol/1 NAD+ oder NADP+, 20 bis 100 mMol/1 Puffer
pH 8,0 bis 9,0 und 0,005 bis 0,5 Mol/l erfindungsgemäßes Zusatzmittel.
Erfindungsgemäß gelingt es, wie oben beschrieben, störende
Schleichreaktionen bei der Bestimmung auszuschließen und damit die Genauigkeit des Verfahrens zu verbessern und durch Einsparung
von Proben-Leerwert-Bestimmung den Zeit- und Reagentienbedarf herabzusetzen.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter. Beispiele 1 bis 27
Die nachstehend beschriebenen Beispiele wurden nach dem Endwert-Verfahren
durchgeführt unter Verwendung folgender Reagentien:
Reagens 1
K4P2O7/HCl-Puffer (30 bis 50 mMol/1, pH 8,0 bis 9,0), Äthanol
(0,3 bis 2 Mol/l), NAD+ (= 0,5 mMol/1), Katalase aus Rinderleber
(= 500 kU/1), Aldehyddehydrogenase aus Hefe (^ 500 U/l).
Reagens 2
Uricase aus Schweineleber (- 1.6 χ 10 U/l).
Meßstrahlung: Hg 334 nm, 340 nm, Hg 365 nm; Schichtdicke der Küvette: 1 cm; Inkubationstemperatur: Raumtemperatur.
2,0 ml des Reagens 1 in Küvette pipettieren, 0,1 ml Probe zusetzen
und mischen. Extinktion ca. 3 Minuten lang registrieren, auf Zeitpunkt der Zugabe von Reagens 2 extrapolieren und E^ be-
8O9845/O0B4
stimmen. 10,ul des Reagens 2 einmischen. Extinktion ca. 2 bis
10 Minuten lang registrieren, durch Extrapolation auf den Zeitpunkt der Zugabe von Reagens 2 E_ ermitteln.
Berechnung der Konzentration (c) der Harnsäure im Serum:
c = (E2-E1) . 3,41 mMol/1 (λ = Hg 334 nm)
c = (E2-E1) . 3,35 mMol/1 (λ = Hg 340 nm)
c = (E2-E1) . 6,20 mMol/1 (λ = Hg 365 nm, NAD)
c = (E2-E1) . 6,03 mMol/1 (λ = Hg 365 nm, NADP)
Serum, Plasma, verdünnter Harn.
Bei dem wie oben beschrieben durchgeführten Verfahren wurden die aus der folgenden Tabelle ersichtlichen erfindungsgemäßen Zusatzmittel
eingesetzt. Die Tabelle gibt an die Art des verwendeten Probenmaterials, das eingesetzte Coenzym, die Verwendung des
Zusatzmittels sowie die unspezifische Extinktionsänderung (Schleichreaktion) in E pro Minute. Die Beispiele 1, 4, 6, 8,
10, 13, 17, 22, 24 und 26 sind Vergleichsbeispiele, die übrigen Beispiele erläutern die Erfindung.
| Beispiel Nr. |
Probe | Coenzym | Zusatzmittel (Mol/l) |
Schieichreaktion Δ E/Minute |
| 1 | Urämikerserum Nr.1 | NAD | — | ^ 0,004 |
| 2 | ürämikerserum Nr.1 | NAD | Pyrazol (0,05-0,3) |
0,000 |
| 3 | Urämikerserum Nr.1 | NAD | Pyridin (0,05-0,20) |
Ο,ΟΟΟ |
| 4 | Urämikerserum Nr.2 | NAD | - | + 0,002 |
| 5 | Urämikerserum Nr.2 | NAD | 4-Methylpyri- din (0,1-0,3) |
0,0OO |
| 6 | Urämikerserum Nr.3 | NAD | - | + 0,003 |
809845/0054
| Beispiel Nr. |
Probe | Coenzyn | Zusatzmittel (Mol/l) |
Schleichreaktion Δ E/Minute |
| 7 | Urämikerserum Nr.3 | NAD | a) Pyrazol (0,05-0,15) :>) Natrium- oxalat (0,05-0,15) |
0,001 0,000 |
| 8 | Urämikerserum Nr.4 | NAD | - | f 0,002 |
| 9 | Urämikerserum Nr.4 | NAD | Trichlorätha- iol (0,01-0,07) |
Ο,ΟΟΟ |
| 10 | Urämikerserum Nr.5 | NAD | - | - 0,003 |
| 11 | Urämikerserum Nr.5 | NAD | Natriumoxalat (0,05-0,15) |
0,000 |
| 12 | Urämikerserum Nr.5 | NAD | Malonsäure- monoäthyl- ester (K-SaIz) (0,05-0,15) |
0,000 |
| 13 | Urämikerserum Nr.6 | NAD | - | + 0,003 |
| 14 | Urämikerserum Nr.6 | NAD | a) Pyrazol (0,05-0,15) b) Malonsäure- monoäthyl- ester (K- salz) (0,05- 0,15) |
0,001 0,000 |
| 15 | Urämikerserum Nr.6 | NAD | a) Pyrazol (0,05-0,15) b) Pyridin (0,05-0,10) |
0,001 0,000 |
| 16 | Urämikerserum Nr.6 | NAD | Thioharnstoff (0,1-0,2) |
0,000 |
| 17 | Urämikerserum Nr.6 | NADP | - | + 0,002 |
| 18 | Urämikerserum Nr.6 | NADP | Trichloräthanol (0,01-0,07) |
0,000 |
| 19 | Urämikerserum Nr.6 | NADP | a) Pyrazol (0,05-0,15) 3) Malonsäure- monoäthyl- ester (K-SaIz) (0,05-0,15) |
0,001 Ο,ΟΟΟ |
| 20 | Urämikerserum Nr.6 | NADP | a) Pyrazol (0,05-0,15) b) Natriumoxa lat (0,05- 0,15) |
0,001 0,000 |
809845/0054
Δ*
| Beispiel Nr. |
Probe | Nr. | 6 | Coenzym | Zusatzmittel (Mol/l) |
Schleichreaktion Δ E/Minute |
| 21 | ürämikerserum | Nr. | 7 | NADP | a) Pyrazol (0,05-0,15) b) Pyridin (0,05-0,10) |
0,001 O,000 |
| 22 | ürämikerserum | Nr. | 7 | NADP | - | + 0,003 |
| 23 | Urämikerserum | Nr. | 8 | NADP | a) Trichlor- äthanol (0,01-0,07) b) Malonsäure- monoäthyl- ester K-SaIz (0,05-0,10) |
0,001 0,000 |
| 24 | Urämikerserum | Nr. | 8 | NAD | - | + 0,002 |
| 25 | Ur ämi ke rs er um | Nr. | 9 | NAD | EDTA (0,05-0,20) | 0,000 |
| 26 | Serum | Nr. | 9 | NAD | - | + 0,001 |
| 27 | Serum | NAD | Isobutyramid (0,1-0,3) |
0,000 | ||
+ = Extinktionszunahme
- = Extinktionsabnahme
- = Extinktionsabnahme
Aus den Beispielen 1 bis 27 geht hervor, daß erfindungsgemäß die
störende Schleichreaktion vollständig unterdrückt werden kann, gleichgültig, ob es sich dabei um eine Extinktionszunahme oder
Extinktionsabnahme handelt.
Beispiel 28
Zur Harnsäurebestimmung auf kinetischer Basis kann das folgende Reagens eingesetzt werden:
Reagens
K4P2O7/HCl-Puffer (3O bis 5O mMol/1, pH 8,0 bis 9,O), Äthanol
(0,3 bis 2 Mol/l), NAD+ (= 0,5 mMol/1), Katalase aus Rinderleber
(= 500 kü/1), Aldehyddehydrogenase aus Hefe (^ 500 U/l),
809845/0054
Uricase (470 bis 710 U/l), Xanthin, K-SaIz (180 bis 240 .umol/1)
Bestimmungsansatz
Durchführung der Analyse nach dem kinetischen "fixed-time-Verfahren"
(vgl. DT-OS 25 58 536.8) unter Benutzung eines GEMSAEC Fast Analyzers.
Meßstrahlung: 340 nm; Inkubationstemperatur: 25°C. Probe bzw. Standard 50,ul
NaCl-Lösung, 0,9 % 200,ul
Reagens 500.ul
NaCl-Lösung, 0,9 % 200,ul
Reagens 500.ul
Die erste Ablesung E1 wird 35 bis 100 Sekunden nach dem Start
der Reaktion, die zweite Ablesung E- 150 bis 200 Sekunden später
durchgeführt. Unter Bezugnahme auf einen Standardansatz berechnet der Computer des Automaten die Harnsäurekonzentration
) nach der Formel:
cStandard* *E2~E1*Probe cProbe = (E2-E1>
Standard ™ol/1
Serum, Plasma, verdünnter Harn.
Die Durchführung der Versuche erfolgte analog wie bei den Beispielen
1 bis 27 mit und ohne Zusatz der erfindungsgemäßen Zusatzmittel.
Die Ergebnisse entsprachen dabei völlig denen, die mit den entsprechenden Zusätzen nach den Beispielen 1 bis 27 erzielt
wurden.
809845/0054
Claims (6)
1.) Verfahren zur Bestimmung von Harnsäure in biologischem
iaterial mittels Uricase, Katalase und Aldehyddehydrogenase in Gegenwart von Alkohol und Nicotinamid-adenin-dinucleotid
bzw. -phosphat (NAD(P)), dadurch gekennzeichnet, daß wenigstens eine Verbindung aus der Gruppe Oxalsäure, Malonsäuremono
(niedrig) alkylester , Trihalogenäthanol, gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkylgruppen oder/und Halogenatomen
substituiertes Pyrazol oder Pyridin, gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure, deren Amid
oder Niedrigalkylester, Thioharnstoff, Isobutyramid oder chelatbildendes Komplexierüngsmittel, wie Nitrilotriessigsäure
oder Äthylendiamintetraessigsäure zugesetzt wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß 0,005 bis 0,5 Mol/l Zusatzmittel verwendet werden.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß wenigstens ein Zusatzmittel aus der Gruppe Oxalat und Malonsäuremono
(niedrig) alkylester zusammen mit einem oder mehreren Zusatzmitteln aus der Gruppe Thioharnstoff, Isobutyramid, Komplexbildner
der substituierten Pyrazole, Pyridine oder Pyridincarbonsäuren zugesetzt wird.
4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß bei pH-Werten von 8,0 bis 9,0 gearbeitet
wird.
5. Reagens zur Bestimmung von Harnsäure, enthaltend Uricase, Katalase, Aldehyddehydrogenase, Alkohol, NAD(P) und Puffer,
dadurch gekennzeichnet, daß es wenigstens eine Verbindung aus der Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)alkylester, Trihalogenäthanol,
gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkyl-
809845/0 054
-J-
gruppen oder/und Halogenatomen substituiertes Pyrazol oder Pyridin,
gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure, deren Amid oder Niedrigalkylester, Thioharnstoff,
Isobutyramid oder chelatbildendes Komplexierungsmittel,
wie Nitrilotriessigsäure oder Äthylendiamintetraessigsäure enthält.
wie Nitrilotriessigsäure oder Äthylendiamintetraessigsäure enthält.
6. Reagens nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß es
etwa 1 χ 102 bis 1 χ 103 U/l Uricase, 500 bis 1500 kü/1 Katalase, 500 bis 1000 U/l Aldehyddehydrogenase, 0,3 bis 2 Mol/l Äthanol, 0,5 bis 1,5 mMol/1 NAD+ oder NADP+, 20 bis 100 mMol/1 Puffer pH 8,0 bis 9,O und 0,005 bis 0,5 Mol/l erfindungsgemäßes Zusatzmittel enthält.
etwa 1 χ 102 bis 1 χ 103 U/l Uricase, 500 bis 1500 kü/1 Katalase, 500 bis 1000 U/l Aldehyddehydrogenase, 0,3 bis 2 Mol/l Äthanol, 0,5 bis 1,5 mMol/1 NAD+ oder NADP+, 20 bis 100 mMol/1 Puffer pH 8,0 bis 9,O und 0,005 bis 0,5 Mol/l erfindungsgemäßes Zusatzmittel enthält.
809845/0054
Priority Applications (14)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2718588A DE2718588C3 (de) | 1977-04-26 | 1977-04-26 | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure |
| AT65778A AT354642B (de) | 1977-04-26 | 1978-01-31 | Verfahren und reagens zur bestimmung von harnsaeure |
| CA296,266A CA1098013A (en) | 1977-04-26 | 1978-02-03 | Process and reagent for determination of uric acid |
| AU33786/78A AU511846B2 (en) | 1977-04-26 | 1978-03-02 | Uric acid determination |
| SE7803056A SE432949B (sv) | 1977-04-26 | 1978-03-16 | Forfarande och reagens for bestemning av urinsyra |
| IT7821633A IT1095369B (it) | 1977-04-26 | 1978-03-24 | Processo e reagente per la determinazione dell'acido urico |
| NLAANVRAGE7803366,A NL179145C (nl) | 1977-04-26 | 1978-03-30 | Werkwijze en reagens voor het bepalen van urinezuur. |
| US05/892,360 US4247630A (en) | 1977-04-26 | 1978-03-31 | Method and reagent for the determination of uric acid |
| FR7809688A FR2389135A1 (fr) | 1977-04-26 | 1978-03-31 | Procede et reactif pour le dosage de l'acide urique |
| JP4713878A JPS53135390A (en) | 1977-04-26 | 1978-04-20 | Method and reagent for determination of uric acid |
| DK172678A DK149476C (da) | 1977-04-26 | 1978-04-20 | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af urinsyre i biologiskmateriale |
| CH434578A CH643661A5 (de) | 1977-04-26 | 1978-04-21 | Verfahren und reagens zur bestimmung von harnsaeure. |
| GB15854/78A GB1578176A (en) | 1977-04-26 | 1978-04-21 | Process and reagent for the determination of uric acid |
| BE187138A BE866414A (fr) | 1977-04-26 | 1978-04-26 | Procede et reactif pour le dosage de l'acide urique |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2718588A DE2718588C3 (de) | 1977-04-26 | 1977-04-26 | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2718588A1 true DE2718588A1 (de) | 1978-11-09 |
| DE2718588B2 DE2718588B2 (de) | 1979-03-08 |
| DE2718588C3 DE2718588C3 (de) | 1979-11-08 |
Family
ID=6007336
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE2718588A Expired DE2718588C3 (de) | 1977-04-26 | 1977-04-26 | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4247630A (de) |
| JP (1) | JPS53135390A (de) |
| AT (1) | AT354642B (de) |
| AU (1) | AU511846B2 (de) |
| BE (1) | BE866414A (de) |
| CA (1) | CA1098013A (de) |
| CH (1) | CH643661A5 (de) |
| DE (1) | DE2718588C3 (de) |
| DK (1) | DK149476C (de) |
| FR (1) | FR2389135A1 (de) |
| GB (1) | GB1578176A (de) |
| IT (1) | IT1095369B (de) |
| NL (1) | NL179145C (de) |
| SE (1) | SE432949B (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0043530A1 (de) * | 1980-07-03 | 1982-01-13 | C.H. Boehringer Sohn | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Harnsäure |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6031472B2 (ja) * | 1978-12-14 | 1985-07-22 | 協和醗酵工業株式会社 | 酸性ウリカ−ゼ |
| DE3743405A1 (de) * | 1987-05-14 | 1988-11-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung von fructosamin |
| IT1247946B (it) * | 1991-05-17 | 1995-01-05 | Instrumentation Lab Srl | Stabilizzazione in forma liquida dell'enzima urato ossidasi |
| US5265301A (en) * | 1992-11-02 | 1993-11-30 | Lawrence Irwin F | Drain cleaning apparatus |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3411887A (en) * | 1964-06-15 | 1968-11-19 | Miles Lab | Diagnostic composition |
| US3335069A (en) * | 1964-12-14 | 1967-08-08 | Miles Lab | Composition and method for determining uric acid |
| US3536448A (en) * | 1967-07-28 | 1970-10-27 | Miles Lab | Uric acid detection |
| DE2237940C3 (de) * | 1972-08-02 | 1980-12-11 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Harnsäure |
| JPS53711B2 (de) * | 1973-01-16 | 1978-01-11 | ||
| JPS5013356A (de) * | 1973-06-08 | 1975-02-12 | ||
| US3956069A (en) * | 1974-04-29 | 1976-05-11 | Abbott Laboratories | Enzymatic assays for glucose, creatine phosphokinase or plasma ammonia |
| JPS5123294A (en) * | 1974-08-19 | 1976-02-24 | Seishin Seiyaku Kk | Nyosanno anteikaho |
| DE2450726C3 (de) | 1974-10-25 | 1981-02-19 | Rainer Prof. Dr.Med. Haeckel | Verfahren zur enzymatischen quantitativen Bestimmung von Wasserstoffperoxid |
-
1977
- 1977-04-26 DE DE2718588A patent/DE2718588C3/de not_active Expired
-
1978
- 1978-01-31 AT AT65778A patent/AT354642B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-02-03 CA CA296,266A patent/CA1098013A/en not_active Expired
- 1978-03-02 AU AU33786/78A patent/AU511846B2/en not_active Expired
- 1978-03-16 SE SE7803056A patent/SE432949B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-03-24 IT IT7821633A patent/IT1095369B/it active
- 1978-03-30 NL NLAANVRAGE7803366,A patent/NL179145C/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-03-31 FR FR7809688A patent/FR2389135A1/fr active Granted
- 1978-03-31 US US05/892,360 patent/US4247630A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-04-20 DK DK172678A patent/DK149476C/da active IP Right Grant
- 1978-04-20 JP JP4713878A patent/JPS53135390A/ja active Granted
- 1978-04-21 GB GB15854/78A patent/GB1578176A/en not_active Expired
- 1978-04-21 CH CH434578A patent/CH643661A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-04-26 BE BE187138A patent/BE866414A/xx not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0043530A1 (de) * | 1980-07-03 | 1982-01-13 | C.H. Boehringer Sohn | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Harnsäure |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU3378678A (en) | 1979-09-06 |
| JPS53135390A (en) | 1978-11-25 |
| BE866414A (fr) | 1978-10-26 |
| US4247630A (en) | 1981-01-27 |
| CA1098013A (en) | 1981-03-24 |
| ATA65778A (de) | 1979-06-15 |
| NL179145B (nl) | 1986-02-17 |
| DK172678A (da) | 1978-10-27 |
| GB1578176A (en) | 1980-11-05 |
| IT1095369B (it) | 1985-08-10 |
| AU511846B2 (en) | 1980-09-11 |
| FR2389135A1 (fr) | 1978-11-24 |
| FR2389135B1 (de) | 1981-02-13 |
| JPS5643240B2 (de) | 1981-10-09 |
| DK149476C (da) | 1986-12-01 |
| NL179145C (nl) | 1986-07-16 |
| SE432949B (sv) | 1984-04-30 |
| DE2718588B2 (de) | 1979-03-08 |
| DK149476B (da) | 1986-06-23 |
| CH643661A5 (de) | 1984-06-15 |
| AT354642B (de) | 1979-01-25 |
| DE2718588C3 (de) | 1979-11-08 |
| NL7803366A (nl) | 1978-10-30 |
| SE7803056L (sv) | 1978-10-27 |
| IT7821633A0 (it) | 1978-03-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0016947B1 (de) | Verfahren und Reagenz zur enzymatischen Bestimmung von Enzymsubstraten | |
| DE69032422T2 (de) | Reagenzzusammensetzung, Verfahren und Kits zur Quantifizierung von Magnesium oder Calcium und Magnesium | |
| EP0007058A1 (de) | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Glycerin | |
| DE2833612A1 (de) | Mittel und verfahren zur bestimmung von wasserstoffperoxyd | |
| EP0068356A1 (de) | Mittel und Verfahren zum Nachweis von Wasserstoffperoxid oder Peroxidasen | |
| DE2518862A1 (de) | Enzymatisches analyseverfahren und reagens zur durchfuehrung desselben | |
| DE2818603A1 (de) | Kinetisches glucosereagens und dessen verwendung in einem kinetischen nachweisverfahren | |
| DE3303098A1 (de) | Verfahren und reagenz zur glucosebestimmung im haemolysierten blut | |
| DE2718588C3 (de) | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure | |
| DE2224132C2 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Cholesterin | |
| DE2932748A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von transaminase in einer biologischen fluessigkeit und reagens hierfuer | |
| EP0863995B1 (de) | Verbessertes verfahren zur bestimmung von lipase | |
| EP0048347B1 (de) | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Glycerin | |
| DE2906732B1 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung der Peroxidase | |
| EP0408075B1 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Antithrombin III | |
| DE68918517T2 (de) | Bestimmung des Ammoniakspiegels im Blut. | |
| DE2729125A1 (de) | Enzymatisches reagens und dessen verwendung in einem verfahren zur erhoehung der empfindlichkeit von enzymatischen substratanlaysen unter verwendung von sauerstoffbestimmungsanalysatoren | |
| DE69111016T2 (de) | Zusammensetzung von Agenzien zum Nachweis einer Redox-Reaktion. | |
| DE2612725A1 (de) | Verfahren und reagenz zur bestimmung von cholesterin | |
| DE3703081A1 (de) | Verfahren und mittel zum nachweis von thiolen | |
| DE19742117B4 (de) | Verfahren zur Messung von Harnstoffstickstoff und Untersuchungssets dafür | |
| DE2913722C2 (de) | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Wasserstoffperoxid | |
| DE3586511T2 (de) | Diagnostisches reagenz zur bestimmung von harnstickstoff. | |
| DE69327060T2 (de) | Stabiles reagenz für indikatorsysteme für komplexe von eisenionen | |
| DE3438683A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von peroxidase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OAP | Request for examination filed | ||
| OD | Request for examination | ||
| C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) |