DE2648759A1 - Stabilisierungsmittel fuer enzyme - Google Patents

Stabilisierungsmittel fuer enzyme

Info

Publication number
DE2648759A1
DE2648759A1 DE19762648759 DE2648759A DE2648759A1 DE 2648759 A1 DE2648759 A1 DE 2648759A1 DE 19762648759 DE19762648759 DE 19762648759 DE 2648759 A DE2648759 A DE 2648759A DE 2648759 A1 DE2648759 A1 DE 2648759A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
enzymes
cysteine
stabilizing agent
stabilizing
stabilizers
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19762648759
Other languages
English (en)
Other versions
DE2648759B2 (de
DE2648759C3 (de
Inventor
Erich Bernt
Helmut Prof Dr Phil Determann
Werner Dollacker
Ingeborg Dr Phil Gutmann
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Roche Diagnostics GmbH
Original Assignee
Boehringer Mannheim GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim GmbH filed Critical Boehringer Mannheim GmbH
Priority to DE2648759A priority Critical patent/DE2648759C3/de
Priority to IT27743/77A priority patent/IT1086090B/it
Priority to SE7710840A priority patent/SE7710840L/
Priority to FR7730993A priority patent/FR2369291A1/fr
Priority to US05/843,298 priority patent/US4118279A/en
Priority to NL7711638A priority patent/NL7711638A/xx
Priority to GB44144/77A priority patent/GB1584878A/en
Priority to AU30032/77A priority patent/AU501657B2/en
Priority to FI773182A priority patent/FI773182A/fi
Priority to BE182051A priority patent/BE860104A/xx
Priority to JP12918777A priority patent/JPS5356383A/ja
Publication of DE2648759A1 publication Critical patent/DE2648759A1/de
Publication of DE2648759B2 publication Critical patent/DE2648759B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2648759C3 publication Critical patent/DE2648759C3/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

int. Nr. 2086
8 MONCiIEN 86, DEN
POSTFACH 860 820
Boehringer Mannheim GmbH Sandhofer Straße 112-132, 6800 Mannheim
Stabilisierungsmittel für Enzyme
Die Erfindung betrifft ein Stabilisierungsmittel für Enzyme, insbesondere für Enzyme, die zur Aktivierung organische Sulfhydry!verbindungen benötigen.
Es ist bekannt, daß Enzympräparationen wie z.B. enzymhaltige Reagentien für die klinische Analyse oder die Lebensmittelanalyse, standardisierte Testpräparate, lösliche Enzympräparate für katalytische, präparative Zwecke und dergleichen, stabilisiert werden müssen gegen Verlust an enzymatischer Aktivität. Als Stablisierungsmittel für diese Zwecke haben sich dabei enzymatisch inaktive Proteinpräparationen besonders bewährt. Insbesondere Albumine wie Rinderserumalbumin werden aus diesem Grunde in großem Umfang den genannten enzymhaltigen Präparaten als Stabilisierungsmittel und Schutzkolloid für die Enzyme zugesetzt.
80981&/OU7
Diese Stabilisierungsmittel auf Proteinbasis sind jedoch gegen Denaturierung empfindlich und können zur Bildung von höchst unerwünschten Trübungen führen, welche insbesondere dann störend sind, wenn in der die Enzyme enthaltenden Lösung optische Messungen durchgeführt werden sollen. Dies ist beispielsweise regelmäßig bei analytischen Beagenszusammensetzungen der Fall, bei denen die Meßreaktion photometrisch, nephelometrisch oder nach anderen optischen Methoden verfolgt wird.
Die genannte Schwierigkeit tritt insbesondere dann auf, wenn die zu stabilisierende Enzympräparation organische Sulfhydrylverbindungen enthält. Derartige SuIfhydry!verbindungen (SH-Verbindungen) werden von vielen Enzymen zur Aktivieruncr benötigt. Weiter werden derartige SH-Verbindungen häufig bei kombinierten Präparaten als Stabilisatoren, insbesondere als Oxydationsschutzmittel zugesetzt und zwar sowohl für manche Enzyme wie auch für andere, nichtproteinische Substanzen, die gegen Oxydation empfindlich sind. Derartige SH-Verbindungen führen jedoch häufig zu einer Denaturierung der als Stabilisierungsmittel zugesetzten,enzymatisch inaktiven Proteine, wie z.B. von Serumalbumin. Diese Denaturierung führt dann zum Auftreten der oben beschriebenen Trübungen.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Stabilisierungsmittel für Enzyme zu finden, welches hinsichtlich seiner stabilisierenden Wirksamkeit den bisher gebräuchlichen Stabilisatoren auf Basis natürlicher Proteine gleichkommt, unter den bei enzymatischen Präparationen auftretenden Bedingungen jedoch keine Neigung zur Bildung von Trübungen aufweist. Insbesondere ist es ein Ziel der Erfindung, ein derartiges Stabilisierungsmittel zu schaffen, welches gegenüber SH-Verbindungen stabil ist und nicht zu Ausfällungen führt.
Gelöst wird diese Aufgabe erfindungsgemäß durch ein Stabilisierungsmittel für Enzyme, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß es aus Oxypolygelatine besteht oder diese in einer zur Stablisierung ausreichenden Menge enthält..
809818/0147
Oxypolygelatine ist bekannt und im Handel erhältlich. Sie läßt sich erhalten durch hydrolytischen Abbau von Gelatine, Umsetzung der Abbauprodukte mit Glyoxal und Oxydation des Umsetzungsproduktes mit einem Oxydationsmittel wie H„0„. Das mittlere Molekulargewicht einer für die erfindungsgemäßen Zwecke verwendeten Oxypolygelatine liegt vorzugsweise zwischen 10.000 und 50.000.
Für die erfindungsgemäßen Zwecke sollte die Oxypolygelatine frei von Salzen und anderen niedermolekularen Bestandteilen sein. Vorzugsweise enthält daher das erfindungsgemäße Stabilisierungsmittel eine durch Dialyse von niedermolekularen Anteilen befreite und anschließend lyophilisierte Oxypolygelatine.
Das erfindungsgemäße Stabilisierungsmittel kann allein aus Oxypolygelatine bestehen, es kann aber auch andere bekannte Stabilisierungsmittel enthalten, also nur Bestandteil eines komplexen Stabilisierungsmittels sein. Seine stabilisierende Wirksamkeit entspricht mindestens der der bisher verwendeten Stabilisierungsmittel auf Basis nativer Proteine. Dabei bezieht sich dies auf Gewichtsbasis, d.h., Oxypolygelatine wird zur Erzielung gleicher Stabilisierungswirkung in gleicher Menge verwendet,wie native stabilisierende Proteine, beispielsweise Serumalbumin. Man kann daher in existierenden enzymhaltigen Präparaten, welche bisher durch native Proteine stabilisiert wurden, letztere durch eine gleiche Gewichtsmenge Oxypolygelatine ersetzen, um die Vorteile der Erfindung zu erhalten.
Das erfindungsgemäße Stabilisierungsmittel eignet sich nicht nur zur Stabilisierung von durch SH-Verbindungen aktivierten Enzymen, sondern auch für andere Enzyme. Beispiele für erfindungsgemäß stabilisierbare Enzyme sind Hexokinase, Glucose-6-phosphatdehydrogenase, Kreatinkinase, Lactat-Dehydrogenase, Malat-Dehydrogenase, Glutamat-Dehydrogenase, Alkohol-Dehydrogenase, Aldolase, Trioseisomerase, Diaphorase.
809818/OU7
Eine Reagentienlösung der nachstehend angegebenen Zusammensetzung A wurde zu je 1,00 ml in Flaschen abgefüllt und die Lösung lyophilisiert. Das Lyophilisat wurde 3 Wochen bei +33°C gelagert. Nach dieser Zeit wurde zur Bestimmung der Stabilität der Hexokinase (HK) und Glucose-6-phosphat-dehydrgenase (G6P-DH), der Funktion (Wiederfindung der Kreatinkinase-Aktivität (CK) im Kontrollserum) sowie der Trübung das Lyophilisat mit je 2,5 ml einer Pufferlösung der Zusammensetzung B aufgelöst und die entsprechenden Tests durchgeführt.
Reagentienlösung A: 220 mg Adenosindiphosphosäure
65 3 mg Adenosinmonophosphat-Na«
445 mg Nicotinamidadenin-dinucleotid-
phosphat-Na?
2.887 mg Creatinphosphat-Na~-6 H„C . 8,5 mg N-Acetylcystein 880 ü Hexokinase 450 U G6P-DH
ohne Zusatz oder mit 2,0 mg Oxypolygelatine dialysiert und lyophilisiert oder mit 2,0 mg Serumalbumin vom Rind.
Diese Substanzen wurden in 100 ml Wasser gelöst, die Lösung zu je 1,0 ml abgefüllt und lyophilisiert.
Pufferlösung B 496 mg Imidazol
2 88 mg Glucose H-O 156 mg Magnesiumacetat 4 H2O 82 mg EDTA
q.s. Essigsäure ad pH 6,7 bidest. Wasser ad 70 ml
809818/OU7
Typisch zur Aktivierung oder Oxy-lationsinhibierung verwendete SH-Verbindungen sind:
Derivate von Cystein und Homocystein:
N-Guanyl-L-cystein
N-Guanyl-DL-isocystein N-Acetyl-S-Guanyl-L-cystein N-Acetyl-S-benzyl-L-cystein N,S-Diguanyl-L-cystein S-Carbamoyl-L-cystein S-Carboxymethyl-L-cystein S-Guanyl-L-cysteinhydantoin S-Acetylguanyl-DL-cysteinazlacton 2-Imino-L-cysteinhydantoin N-Acetyl-DL-homocysteinthiolacton DL-Homocysteinthiolacton L-Cystein
L-Cysteinmethylester L-Cysteinäthylester
N-Acetyl-L-cystein
N-Acetyl-DL-Isocystein Als HS-haltiges Peptid (Tripeptid):
reduz. Glutathion
Thioalkohole einschließlich Mercaptane:
1,3 Dimercapto-2-propanol 2,3 Dimercapto-1-propanol 1,2 Dimercapto-äthan Dithiothreit
Dithioerythrit
Mercaptoäthanol
Als Thiosäure:
Thioglycolsäure
L-Thiazolidin-4-carbonsäure sowie: Aminoathylisothiouroniumbromid
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter.
809818/0Uf
1, Messung der Aktivität von Hexokinase und G6P-DH (in U/Flasche)
ohne Stabili
sierungsmittel		 G6P-DH mit OPG G6P-DH mit Albumin G6P-DH
Anfangswert vor
Lyophilisation		 HK 4,4 HK 4,5 HK 4,5
lach 3 W/33OC 8,9 0,05 8,9 4,0 8,8 4,2
0,1 6,9 6,7
2. Wiederfindung der CK-Aktivität im Kontrollserum (in % des Sollwertes)
ohne Stabili-
sierunqsmitte]		 mit OPG mit Albumin
Anfangswert vor
Lyophilisation		 97% 99% 97%
nach 3 W/33°C 5% ... 96% 95%
3. Messung der Trübung im aufgelösten Lyophilisat bei 546 nm
ohne Stabili-
sierunasmittel		 mit OPG mit. Albumin
Anfangswert vor
Lyophilisation		 0,125 0,135 0,330
nach 3 W/33°C o,128 o, 138 1,235
809818/0U7
"Y
Die oben wiedergegebenen Vergleichsversuchswerte zeigen, daß ohne Zusatz eines Stabxlisierungsmittels eine sehr rasche Inaktivierung der Enzyme erfolgt. Mit Zusatz des bekannten Stabilisierungsmittels Serumalbumin lassen sich zwar die Enzyme gut stabilisieren, es entsteht jedoch eine starke Trübung aufgrund einer Denaturierung des Stabxlisierungsmittels, die im optischen Test eine sehr hohe Anfangsextinktion hervorruft. Aufgrund dieser hohen Anfangsextinktion können mit herkömmlichen Photometern keine exakten Werte mehr gemessen werden.
Bei Zusatz des erfindungsgemäßen Stabxlisierungsmittels hingegen ist sowohl die Aktivitätserhaltung auch bei der beschleunigten Alterung bei erhöhter Temperatur sehr gut, als auch ein völliges Fehlen von Trübungen, die durch das Stabilisierungsmittel bedingt sind, feststellbar.
809818/OU7

Claims (4)

Patenta. nsprüche
1. Stabilisierungsmittel für Enzyme, dadurch gekennzeichnet, daß es aus PoIyoxygelatine besteht oder diese in einer zur Stabilisierung ausreichenden Menge enthält.
2. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es eine dialysierte und anschließend lyophilisierte Oxypolygelatine enthält.
3. Verfahren zur Herstellung des Stabilisierungsmittels nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß handelsübliche Oxypolygelatine durch Dialyse von niedermolekularen Bestandteilen befreit und dann lyophilisiert wird.
4. Verwendung des Mittels von Anspruch 1 oder 2 zur Stabilisierung von Enzymen in Gegenwart von organischen Sulfhydrylverbindungen.
809818/0U7
DE2648759A 1976-10-27 1976-10-27 Stabilisierungsmittel für Enzyme Expired DE2648759C3 (de)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2648759A DE2648759C3 (de) 1976-10-27 1976-10-27 Stabilisierungsmittel für Enzyme
IT27743/77A IT1086090B (it) 1976-10-27 1977-09-20 Agente stabilizzante per enzimi
SE7710840A SE7710840L (sv) 1976-10-27 1977-09-28 Enzymstabilisering
FR7730993A FR2369291A1 (fr) 1976-10-27 1977-10-14 Stabilisant pour enzymes
US05/843,298 US4118279A (en) 1976-10-27 1977-10-18 Stabilizing agent for enzymes
GB44144/77A GB1584878A (en) 1976-10-27 1977-10-24 Stabilised enzyme preparations containing oxypolygelatine
NL7711638A NL7711638A (nl) 1976-10-27 1977-10-24 Werkwijze voor de bereiding van een enzym- houdend preparaat en gevormd preparaat, ver- vaardigd met de werkwijze.
AU30032/77A AU501657B2 (en) 1976-10-27 1977-10-25 Stabilised enzyme
FI773182A FI773182A (fi) 1976-10-27 1977-10-25 Stabiliseringsaemne foer enzymer
BE182051A BE860104A (fr) 1976-10-27 1977-10-26 Stabilisant pour enzymes
JP12918777A JPS5356383A (en) 1976-10-27 1977-10-27 Production of stabilyzing agent for enzyme

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2648759A DE2648759C3 (de) 1976-10-27 1976-10-27 Stabilisierungsmittel für Enzyme

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DE2648759A1 true DE2648759A1 (de) 1978-05-03
DE2648759B2 DE2648759B2 (de) 1978-10-05
DE2648759C3 DE2648759C3 (de) 1979-05-31

Family

ID=5991593

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2648759A Expired DE2648759C3 (de) 1976-10-27 1976-10-27 Stabilisierungsmittel für Enzyme

Country Status (11)

Country Link
US (1) US4118279A (de)
JP (1) JPS5356383A (de)
AU (1) AU501657B2 (de)
BE (1) BE860104A (de)
DE (1) DE2648759C3 (de)
FI (1) FI773182A (de)
FR (1) FR2369291A1 (de)
GB (1) GB1584878A (de)
IT (1) IT1086090B (de)
NL (1) NL7711638A (de)
SE (1) SE7710840L (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0007057A1 (de) * 1978-07-17 1980-01-23 Roche Diagnostics GmbH Kontrollserum für die klinisch-chemische Analyse mit einem bestimmten Gehalt an Creatin-kinase

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3019612A1 (de) * 1980-05-22 1981-11-26 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Stabilisiertes thrombinpraeparat
EP0044532B1 (de) * 1980-07-18 1986-04-23 E.I. Du Pont De Nemours And Company Monothioglycerol als Thiolschützer in lyophilisierten Materialien
US4339533A (en) * 1980-07-30 1982-07-13 Technicon Instruments Corporation Stabilization of creatine kinase (CK) and its application as a reference standard
US4442212A (en) * 1980-11-10 1984-04-10 E. I. Du Pont De Nemours & Company Monothioglycerol as thiol-protector in lyophilized materials
JPS57122796A (en) * 1980-12-09 1982-07-30 American Hospital Supply Corp Stabilized creatinekinase control
EP0100217B1 (de) * 1982-07-23 1987-10-07 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Verfahren zur quantitativen Bestimmung eines mit Oxidase behandelten Substrates
US4547461A (en) * 1983-01-18 1985-10-15 Eastman Kodak Company Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase
EP0263533A3 (de) * 1983-03-01 1990-05-30 C.R.C. Compagnia di Ricerca Chimica S.p.A. Verfahren zur Herstellung von Cytidinmonophosphat von 5-Acetamido-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galactononulosaminsaeure
JPS62104598A (ja) * 1985-11-01 1987-05-15 Yatoron:Kk クレアチンキナ−ゼ測定用試薬
GB8600679D0 (en) * 1986-01-13 1986-02-19 Imp Group Plc Chemical analysis of tobacco/smoking-related products
US4994375A (en) * 1988-07-11 1991-02-19 Baxter International Inc. Stable human serum based control and/or calibrant
US5824522A (en) * 1990-12-07 1998-10-20 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Recombinant decarbamylases for producing D-α-amino acids
JP3203108B2 (ja) * 1993-08-26 2001-08-27 協和メデックス株式会社 グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼの安定化方法
ES2180632T3 (es) * 1994-05-06 2003-02-16 Beckman Coulter Inc Activador de tiol estable en un liquido.
EP1311860A2 (de) * 2000-08-21 2003-05-21 Queen's University At Kingston Verfahren und testkit zur auftrennung und zum nachweis von proteinen in biologischen proben

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0007057A1 (de) * 1978-07-17 1980-01-23 Roche Diagnostics GmbH Kontrollserum für die klinisch-chemische Analyse mit einem bestimmten Gehalt an Creatin-kinase

Also Published As

Publication number Publication date
NL7711638A (nl) 1978-05-02
US4118279A (en) 1978-10-03
FR2369291A1 (fr) 1978-05-26
FI773182A (fi) 1978-04-28
SE7710840L (sv) 1978-04-28
IT1086090B (it) 1985-05-28
GB1584878A (en) 1981-02-18
AU3003277A (en) 1979-05-03
FR2369291B1 (de) 1980-04-25
DE2648759B2 (de) 1978-10-05
BE860104A (fr) 1978-04-26
DE2648759C3 (de) 1979-05-31
AU501657B2 (en) 1979-06-28
JPS5356383A (en) 1978-05-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2648759C3 (de) Stabilisierungsmittel für Enzyme
DE2548963C3 (de) Verfahren und Mittel zur Bestimmung der Aktivität von Creatinkinase-MB
DE69228828T2 (de) Stabilisierte parathormonzusammensetzung
DE69629209T2 (de) Getrocknete zubereitung von bluttfaktoren, enthaltend trehalose
CURRY III et al. Brain myelination after neonatal administration of oestradiol
NZ222413A (en) Compositions containing a polypeptide growth factor and a water-soluble cellulose polymer stabiliser
DE69214355T2 (de) Hepatozytwachstumsfaktor enthaltende Mittel
CH641046A5 (de) Verfahren zur herstellung bestaendiger urokinasemittel.
Goodman Antilipolytic effects of growth hormone
Needham et al. The protein composition and nucleic acid content of the rat uterus in different states
DE2548962C2 (de) Antikörper gegen die Untereinheit M von Creatinkinase-Isoenzymen
DE3329952A1 (de) Verfahren zur verringerung einer truebung in kontrollseren
Soboll et al. Mitochondrial metabolism in different thyroid states
CH625557A5 (de)
DE69119576T2 (de) Verfahren zur Abtrennung, Identifizierung und Quantifizierung von Isoenzymen und Isoformen der alkalischen Phosphatase
Gerdes et al. Nuclear size and DNA content in rat cardiac myocytes during growth, maturation and aging
DE60022751T2 (de) Mittel zur stabilisierung von hämoglobinen
DE2908053C2 (de) Verfahren und Reagenz zur Bestimmung der Creatinkinase MB
DE69931716T2 (de) Reagentienzusammensetzung zum bestimmen von elektrolyten
DE2302721C2 (de) Verfahren zur Bestimmung der Creatinkinase
FARESE Effects of ACTH and cyclic-AMP in vitro on incorporation of 3H-leucine and 14C-orotic acid into protein and RNA in the presence of an inhibitor of cholesterol side chain cleavage
Frieden et al. Effect of relaxin upon decidual reactions in the rat
EP1130402B1 (de) Gebrauchsfertiges langzeitstabiles Ristocetin Cofactor Testreagenz
EP0997735A2 (de) Stabilisierung von biologischen Flüssigkeiten durch Zusatz von Sterinestern
Kośmider Untersuchungen über den toxischen Wirkungsmechanismus des metallischen Quecksilbers

Legal Events

Date Code Title Description
OAP Request for examination filed
OD Request for examination
C3 Grant after two publication steps (3rd publication)
8339 Ceased/non-payment of the annual fee