DE2611286B2

DE2611286B2 - Verfahren zur Herstellung von 6- [D- a -Amino- a -(p-hydroxyphenyl)-acetamido] -penicillansäure-Trihydrat

Info

Publication number: DE2611286B2
Application number: DE2611286A
Authority: DE
Inventors: Joseph H. Grossman; Glenn A. Hardcastle Jun.
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1975-03-17
Filing date: 1976-03-17
Publication date: 1980-01-03
Also published as: US3980637A; SE430336B; GB1535291A; DK144476B; JPS51113893A; DK113476A; NL7602634A; DK144476C; DE2611286A1; BE839682A; NL165748B; SE7602825L; DE2611286C3; NL165748C; JPS566432B2

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 6-[D-<x-Amino-«-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penicillansäure-Trihydrat.

Das erste im Handel erhältliche Penicillin mit einer Λ-Aminogruppe an der 6-Acylamidoseitenkette war das Ampicillin, bei dem es sich um die 6-(D-«-Amino-«-phenylacetamido)-penicillansäure (vgl. US-Patentschrift 85 648) handelt. 6-[D-«-Amino-«(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penisillansäure ist eine antibakteriell wirksame Verbindung, die bei der Humantherapie verwendet und in Form des Trihydrats der freien Säure (d. h. des Zwitterions) auf den Markt gebracht wird. Sie ist beispielsweise im Journal of the Chemical Society (London), Seiten 1920 bis 1922 (1971) und in Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1970, Seiten bis 430 (1971), sowie in der US-Patentschrift 74 776 (vgl. auch US-Patentschrift 3192 198) beschrieben. Ihr internationaler Freiname ist Amoxicillin. Diese Bezeichnung wird nachfolgend gebraucht.

Die Verwendung von Aminosäurechlorid-Hydrochloriden zur Herstellung der «-Aminopenicilline ist bekannt. Die GB-PS 9 38 321 und 9 59 853 offenbaren ihre Verwendung unter wasserfreien Bedingungen. Die zuletzt genannte Patentschrift lehrt die Verwendung einer Silylgruppe zum Schutz der Carboxylgruppe der

ίο

6-Aminopsnicillansäure während der Acylierung; dies ist auch in der GB-PS 1008468 und der US-PS 32 49 622 offenbart Die GB-PS 9 62 719 offenbart die Verwendung von Aminosäurechlorid-Hydrochloriden in kaltem wäßrigem Aceton. Die genannten Penicilline sind amphotere Verbindungen. Bei ihrer Isolierung, wie beispielsweise in den US-PS 31 57 640 und 32 71 389 offenbart, verwendet man bestimmte aliphatische unsymmetrische verzweigtkettige sekundäre Amine, die oft als flüssige Aminharze bezeichnet werden. Diese waren vorher gemäß US-PS 30 08 956 bei der Isolierung von 6-Aminopenicillansäure, die ebenfalls eine amohotere Aminosäure ist, eingesetzt worden. Verbesserte Methoden zur Isolierung und Reinigung derartiger Penicilline sind beispielsweise in der US-Patentschrift 31 80 862 über die /}-Naphthalinsulfonate und in der US-Patentschrift 3198 804 über die intermediäre Isolierung und anschließende leichte Hydrolyse von Hetacillin, offenbart

Der Gebrauch einer Silylgrupppe zum Schutz der Carboxylgruppe eines natürlichen Penicillins während der chemischen Spaltung zur 6-Aminopenicillansäure ist in der US-PS 34 99 909 offenbart. Der Gebrauch von silylierter 6-Aminopenicillansäure während der wasserfreien Acylierung mit Aminosäurechlorid-Hydrochloriden ist in zahlreichen Patenten, beispielsweise in den US-PS 34 78 018, 35 95 855, 36 54 266, 34 79 338 und 34 87 073, offenbart Einige dieser Patentschriften betreffen auch die Verwendung flüssiger Aminharze.

Die GB-PS 13 39 605 enthält verschiedene spezifische und detaillierte Beispiele zur Herstellung von Amoxicillin durch Reaktion eines silylierten Derivats der 6-Aminopenicillansäure mit einem reaktiven Derivat einschließlich des Chlorid-Hydrochlorids der D-(-)-«- Amino-p-hydroxyphenyl-essigsäure, in der die Aminogruppe geschützt ist, anschließendes Entfernen der Silylgruppe(n) durch Hydrolyse oder Alkoholyse und, wenn möglich, anschließende Gewinnung des Amoxicillins, üblicherweise als kristallines Trihydrat. So erhält man in Beispiel 1 kristallines Amoxicillin durch iso-elektrische Ausfällung aus einer wäßrigen Lösung, beispielsweise bei pH 4,7. Bei diesem Beispiel wird eine Reinigung vermutlich durch Auflösen des Rohprodukts vor dem isoelektrischen Ausfällen in Wasser bei saurem pH, beispielsweise 1,0, zum Beispiel in wäßriger Chlorwasserstoffsäure in Gegenwart eines mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittels, wie Methylisobutylketon (4-Methylpentan-2-on), erzielt. Ziemlich dieselbe Arbeitsweise wird in der US-PS 36 74 776 angewendet

In der US-PS 36 74 776 (Beispiel 10) ist eine spezifische Herstellungsweise von kristallinem Amoxicillin-Hydrochlorid-Trihydrat aus Amoxicillin-Trihydrat beschrieben. Bei dieser Arbeitsweise wird eine wäßrige Suspension von feingemahlenem Amoxicillin-Trihydrat mit 5n-Salzsäure versetzt, das Gemisch wird filtriert und das gewünschte Salz durch Animpfen des Hydrats zur Kristallisation gebracht Bei der Hydrochloridbildung und -fällung wird dabei von dem das silylierte Amoxicillin-Hydrochlorid enthaltenden Acylierungsgemisch ausgegangen. Die Arbeitsweise des Beispiels 10 der Druckschrift unterscheidet sich vom erfindungsgemäßen Verfahren hinsichtlich Ausgangsmaterial und Endprodukt. Diese Unterschiede haben unter anderem auch die praktische Folge, daß nach dem bekannten Verfahren bis zur beginnenden Kristallbildung 30 Minuten verstreichen, eine vollständige Kristallisation jedoch noch wesentlich länger dauert. Im Hinblick auf

die nicht allzugroße Stabilität der Hydrolysemischung beim erfinJungsgemäßen Verfahren und die lange Kristallisationsdauer beim bekannten Verfahren legt dieses das erfindungsgemäße Verfahren nicht nahe.

In der DE-OS 19 60 748 ist im Beispiel 1 beschrieben, daß aus einer sauren Lösung eines Ampicillin-Silylesters durch Zugabe von «-Naphthalinsulfonsäure das Naphthalinsulfonat ausgefällt abfiltriert und mit Triethylamin in das freie Ampicillin-Anhydrat überführt wird. Diese Arbeitsweise ist relativ aufwendig.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Gewinnung von 6-[D-a-Amino-a-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penicillansäure-Trihydrat zu schaffen, das zu einem hochreinen Produkt in ausgezeichneter Ausbeute führt Diese Aufgabe wird durch die Lehre des Anspruchs 1 gelöst

Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Herstellung von 6-[D-«-Amino-«-(p-hydroxyphenyl)-acetamidoi-penicillansäure-Trihydrat durch aufeinanderfolgendes

a) Silylieren von 6-Aminopenicillansäure in einem wasserfreien Lösungsmittel in Gegenwart einer starken Base,

b) Acylieren der silylierten 6-Aminopenicillansäure mit D-(—)-2-para-Hydroxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid in Gegenwart einer schwachen Base und ihrem Hydrochlorid,

c) Hydrolysieren und Neutralisieren des Produkts der Acylierung zur Bildung des 6-[D-ot-Amino-«-(p-hy-

droxyphenylJ-acetamidoJ-penicillansäure-Trihydrats, und

d) Gewinnung des 6-[D-«-Amino-«-(p-hydroxyphenylJ-acetamidoJ-penicillansäure-Trihydrats,

das dadurch gekennzeichnet ist daß man das Reaktionsgemisch aus der Stufe b) mit Wasser bei einem pH unterhalb 2 und in Gegenwart von NaCl in einer Gewichtsmenge von bis zu 30% des Gewichts des für die Hydrolyse verwendeten Wassers vermischt, das ausgefallene Hydrochlorid der 6-[D-<x-Amino-«,-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penicillansäure abtrennt und mit einer Lösung eines flüssigen, basischen, aliphatischen Amins mit hohem Molekulargewicht in einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel in Gegenwart einer Wassermenge, die ungefähr 10% des Gewichts des organischen Lösungsmittels gleich ist, bei ungefähr 25° C vermischt, die Mischung einige Zeit stehen läßt und schließlich das gewünschte Produkt abtrennt.

Die beim erfindungsgemäßen Verfahren erfolgende Kristallisation von Amoxicillin-Hydrochlorid und Umwandlung in Amoxicillin-Trihydrat ist eine neue Methode zur Isolierung von Amoxicillin aus einer wasserfreien Acylierungsmischung, die zu hohen Ausbeuten an Produkt mit einer ausgezeichneten Qualität führt, und zwar ohne die lange Umwandlungszeit, die mit der bisherigen Arbeitsweise verbunden war, bei der das rohe Amoxicillin in der Acylierungsreaktionsmischung durch Behandlung mit Aceton während eines beträchtlichen Zeitraums in das entsprechende Acetonaddukt (vgl. GB-PS 12 24 619) überführt wurde, das dann isoliert und zum Amoxicillin hydrolysiert wurde. Versuche zur Acylierung mit Dane's Salz ergaben hierbei für die Acylierung Ausbeuten von nur ungefähr 55% im Vergleich zu Ausbeuten von ungefähr 80%, die durch das erfindungsgemäße Verfahren erzielt werden. Zusätzlich zur erhöhten Ausbeute besitzt das erfindungsgemäße Verfahren gegenüber den anderen

bekannten Verfahren den Vorteil der hohen Produktivität (Produktgewicht pro Reaktionsvolumen) und in einigen Fällen den Vorteil einer höheren Reinheit des Produkts.

Das erfindungsgemäße Verfahren ergibt somit Amoxicillin-Trihydrat mit besserer Qualität d. h. geringerer Farbe, geringerem Gehalt an DMA und einer geringeren Wahrscheinlichkeit eines Wirksamkeitsverlust aufgrund der geringeren erforderlichen Zeit, als beim bekannten Verfahren, bei dem die Acylierungsmischung unter Bildung einer sehr sauren wäßrigen Lösung zerstört die wäßrige Phase abgetrennt und ihr pH anschließend bis zum isoelektrischen Punkt erhöht wird.

Die beim erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten flüssigen, basischen aliphatischen Amine mit hohem Molekulargewicht entsprechen der Formel:

R¹
R —N —C —R²

H R³

worin R eine aliphatische Gruppe mit 10 bis 14 Kohlenstoffatomen darstellt und R¹, R² und R³ jeweils Alkylgruppen bedeuten, die insgesamt das heibt in der Summe, 11 bis 14 Kohlenstoffatome aufweisen. Diese Klasse umfaßt somit aliphatische sekundäre Amine in

jo Form geradkettiger, verzweigter, gesättigter, ungesättigter, symmetrischer und unsymmetrischer sekundärer Amine.

Ein bevorzugtes basisches aliphatisches flüssiges Amin mit hohem Molekulargewicht ist eine im Handel

ν-, erhältliche Mischung sekundärer Amine der allgemeinen Formel I:

CH₃ CH₃

R¹

CH₃-C-CH₂-C-CH₂-CH=Ch-CH₂-NHC-R²

CH₃ CH₃ R³

worin jeweils R¹, R² und R³ insgesamt 11 bis 14 Kohlenstoffatome aufweisen. Diese besondere Mischung sekundärer Amine ist eine klare, bernsteinfarbene Flüssigkeit mit den folgenden physikalischen Eigenschaften: Molekulargewicht 351 bis 393; Gefrierpunkt unterhalb -8O⁰C; Neutralisationsäquivalent 380 bis 410; Säurebindungskapazität 2,5 bis 2,7 mäq/g; Viskosität bei 25°C 72cps; spezifisches Gewicht bei 25⁰C 0,84; % (Volumen bei 10 mm destilliert: unterhalb 160°C = 5% Maximum; 50% (Volumen) Destillationspunkt bei 10 mm = 210⁰C.

Es handelt sich somit um aliphatische, unsymmetrische, ungesättigte sekundäre Amine. Ein weiteres zweckmäßiges flüssiges basisches, aliphatisches Amin mit hohem Molekulargewicht ist ein ähnliches Amin mit

bo der Ausnhame, daß es geradkettig und gesättigt ist. Es entspricht der allgemeinen Formel II:

R¹

i
_b5 CH₃(CH₂J₁₀CH₂NHC-R² (II)

R³

worin jeweils R¹, R² und R³ einen einwertigen

aliphatischen Kohlenwasserstoffrest bedeuten und worin R¹, R² und R³ insgesamt 11 bis 14 Kohlenstoff atome enthalten. Diese besondere Mischung sekundärer Amine ist eine klare, bernsteinfarbene Flüssigkeit mit den folgenden physikalischen Eigenschaften: Viskosität bei 25° C 70cps; spezifisches Gewicht bei 20⁰C 0,826; Brechungsindex bei 25°C 1,4554; Destillationsbereich bei 10mm: bis zu 170°C = 0,5%; 170 bis 220°C=3%; 220 bis 230° C=90% und oberhalb 230° C=6,5%.

Das nachfolgende Beispiel dient zur weiteren Erläuterung der Erfindung. Alle Temperaturen sind in ° C angegeben.

Im Beispiel werden die nachfolgenden Abkürzungen verwendet:

6-APA 6-Aminopenicillansäure
MeCl₂ Methylenchlorid

I. Reaktionsschema

10 MIBK Methylisobutylketon

TEA Triethylamin

TCMS Trimethylchlorsilan

HMDS Hexamethyldisilazan

DMA N,N-Dimethylanilin

MILA 15%ige (Volumen) Lösung von Aminen der allgemeinen Formel I in MIBK

MeLA 15%ige (Volumen) Lösung von Aminen der allgemeinen Formel I in MeCb

KF Wasseranalyse nach der Karl Fischer-Methode

Beispiel

Amoxicillin über wasserfreie Acylierung — Isolierung über das Hydrochlorid-Zwischenprodukt

H, N

-N-

CO₂H

6-APA
M. G. = 216,3

TEA

+ (CHj)₃SiC]

TMCS

M. G. = 108,6
S

(CH₃I₃SiHN

MeCI

CO₂Si(CH₃).,

+ 2TEA · HCl

SiIyI 6-APA + HO

// V

SiIyI 6-APA*) O

Ii

CHCCl

NH₂ ■ HCl DMA

D-( - )-2-p-Hydroxyphenylglycin-

chlorid-Hydrochlorid

M. G. =

silyliertes Amoxicillin-Hydrochlorid M. G. = 473,9

H₂O + 20% NaCl pH 1,3—1,5

HO

CH-CNH

+ (CH₃)jSiOH

NH₂ HCI / ^N O CO, H

Amoxicillin-Hydrochlorid M. G. = 401,5

MlLA

Amoxicillin-Trihydrat M. G. = 419,4

*| I-.s wird angenommen, dall 2 Mol TMCS eine Mischung silylicrter Verbindungen mil l(HI%igcr Silylicrunj: an der Carboxylgruppe und iigciain ίτϊϊ'/Όί^ϋΐ Silylicl uiig ίπι ucl Ainiiitigl lippe cigiüi.

II. Materialien

	Erforderliches Gewicht und Volumen	Mol	Mol
			verhältnis
6-APA	1 kg (KF = 0,02%)	4,62	1,0
MeCl₂	20 1 (mit Molekularsieb getrocknet)	-	-
	soviel wie erTorderlich (1)
TEA	1,29 1 (2)	9,26	2
TMCS	1,17 1 (S. G. = 0,854)	9,26	2
DMA	0,696 1	5,48	1,2
DMA · HCI	1,49 kg Lösung (3)	2.82	0,61
D-(-)-2-p-Hydroxy-	1,26 kg in einer Reinheit von 82 %	4,63	1,0
phenylglycin-
chlorid-Hydrochlorid
Wasser	12,5 1 oder 50% abgemessenes	-	-
	Acylierungsgemischvolumen-
	ebenso soviel wie erforderlich
Natriumchlorid	2,5 kg oder 20% des Wasser	-	-
	volumens
6 η HCl	soviel wie erforderlich	-	-
15% Amine der allg.	37,5 1 Amine in MIBK	-	-
Formel I/MIBK (MILA)	(5,625 1 Amine in 37,5 1 Gesamt
	volumen
Filterhilfe	500 g säuregewaschen	-	-
(Diatomeenerde)	(oder geringer Fe-Gehalt)

Anmerkungen:

(1) Trocknung mit Molekularsieb entfernt Wasser und Methanol aus dem Methylenchlorid

(2) Diese Arbeitsweise verlangt 2MoI TEA und TMCS. Mit den Variationen bei eingesetzter APA und MeCl₂ (gewonnen gegen neu) wurde gezeigt, daß diese Bemessung übereinstimmende Ergebnisse liefert. Diese Arbeitsweise ist auch bei 1,6 Mol TEA und TMCS wirksam.

(3) 30% Gewicht/Gewicht DMA · HCl Lösung, 1,25 g/ml.

!Ii. Arbeitsweise

1. Zi< 20 1 MeCl₂ gibt man bei 25⁰C 1 kg 6-APA. Man fügt bei 25° bis 28° C 1,29 1 TEA zu und rührt 30 Minuten; — die 6-APA sollte sich beinahe vollständig auflösen.

2. Bei 20° bis 25°C gibt man 1,17 1 TMCS zu. Man läßt die Temperatur auf 25° bis 27° C ansteigen. Das TMCS wird im Verlauf von 5 bis 10 Minuten zugegeben. Die Temperatur wird 60 Minuten bei 25° C gehalten.

3. Man kühlt auf 0° bis 5°C Es werden 0,696 1 DMA und 1,49 kg DMA · HCl-Lösung zugegeben. Man beginnt sofort mit der Acylierung.

4. Man streut 1,26 kg D-(-)-2-p-HydroxyphenylglycinchJorid-Hydrochlorid in drei aliquoten Anteilen wie folgt ein:

Ein Drittel des D-(-)-2-p-Hydroxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorids (430 g) werden bei 0° bis 5^CC im Verlauf von 5 Minuten zugegeben. Man läßt die Acylierungsmischung wieder auf ungefähr 3° C abkühlen. Man gibt einen zweiten aliquoten Anteil D-(—)-2-p-Hy-

droxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid
schnell zu. Die Temperatur läßt man auf

60

b5 ungefähr 5⁰C steigen. Man läßt 10 Minuten stehen, während man auf <5°C zurückkühlt. Die abschließende Menge an D-( —)-2-p-Hy-

droxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid
(430 g) wird zugegeben, während man die Temperatur unterhalb 10°C, falls möglich unterhalb 5° C H) hält.

Man läßt die Acylierungsmischung bei 0 bis 5° C (3° C vorzugsweise) 2 Stunden altern.

5. Die Acylierungsmischung muß klarfiltriert werden. Im Laboratorium wird dies am besten wie folgt bewerkstelligt:

a) Zur kalten Acylierungsmischung gibt man 500 g Filterhilfe mit geringem Eisengehalt Im Laboratorium wird mit Säure gewaschene Filterhilfe verwendet — diese enthält 36 ppm Fe und weits einen KF von 0,05% auf. Man vermeide, daß »feuchte« Filterhilfe (KF größer als 0,05%) mit der Acylierungsmischung in Kontakt kommt

b) Man läßt ungefähr 5 Minuten stehen und klarfUtriert schnell in lyi gut gerührtes eiskaltes H₂O (oder 50% des gemessenen Volumens der Acylierungsmischung). Man wäscht den Filterkuchen mit Methylenchlorid.

c) Man mischt 5 bis 10 Minuten.

6. Das Amoxicillin-Hydrochlorid wird bei 0 bis 5⁰C wie folgt kristallisiert:'⁵)

a) Man streut ungefähr Ve der gesamten 2,5 kg NaCl (ungefähr 300 g) in die Hydrolysemischung mit einer Temperatur von 0 bis 5° C. Wenn möglich wird mit 10 g Amoxicillin-Hydrochlorid angeimpft — falls dies nicht möglich ist, gibt man etwas mehr Salz (ungefähr 100 g) zu. Man läßt ungefähr 5 bis 10 Minuten stehen; es sollte ein schweres Bett aus Amoxicillin-Hydrochloridkristallen beobachtet werden — falls dies nicht der Fall ist, wird etwas mehr Salz zugegeben.

b) Sobald sich ein schweres Bett aus Kristallen gebildet hat (dies sollte nicht mehr als 10 Minuten dauern — die Hydrolysemischung ist nicht allzu stabil), gibt man einen weiteren Ve Anteil Salz zu. Insgesamt sind 25% zugesetzt. Man läßt 5 Minuten stehen.

c) Nun gibt man die verbleibenden 75% des gesamten Salzes (ungefähr 1,25 kg) im Verlauf von 10 bis 15 Minuten zu. Der gesamte Arbeitsgang sollte nicht mehr als 30 Minuten dauern, jedoch ist es von Bedeutung, daß sich eine gute Amoxicillin-Hydrochloridaufschlämmung bei einer geringen Salzkonzentration bilden sollte. Dies führt zu einem geringen Gehait an DMA im endgültigen Amoxicillin-Trihydrat.

d) Nachdem das gesamte Salz zugesetzt ist wird sichergestellt, daß der pH der Aufschlämmung bei 1,3 bis 1,5 liegt, wobei man erforderlichenfalls 6n HCl zugibt. Man rührt 30 Minuten bei 0 bis 5° C.

Man filtriert wäscht mit MeCb und 2,5 bis 4 1 eiskalter, klarer, gesättigter (35 g Salz/100 ml) Natriumchloridlösung. Unter Vakuum wird ausreichend trockengesaugt, so daß der erhaltene feuchte Filterkuchen sicher gehandhabt werden kann.

7. Das Amoxicillin-Hydrochlorid wird bei 25° C in Amoxicillin-Trihydrat überführt, indem man es zu einer Mischung von 37,51 15%igem Amin der allgemeinen Formel I in MIBK<⁶> und 3,75 1 H₂O zugibt. Man streut den Kuchen unter gutem Rühren in die MILA. Man streut langsam ein, wobei man den Kuchen sich dispergieren und in das Trihydrat umwandeln läßt

8. Man hält 2 bis 3 Stunden bei 25° C, sammelt durch Filtrieren, wäscht gründlich mit MIBK und dann mit 21 kaltem H₂O. Der Kuchen kann mit Aceton behandelt werden. Man trocknet 14 bis 16 Stunden lang bei 40° C

Die Ausbeute beträgt bei zu 98,7% reiner APA als Ausgangsmaterial üblicherweise 1,50 bis 1,59 kg 98% reines Amoxicillin-Trihydrat (Bio); Aktivitätsausbeute 77 bis 82%. Der DMA-Gehalt ist üblicherweise < 10 ppm.

(5) Es gibt auch eine zweite Technik zum Ausfällen des Hydrochloridsalzes. Die Acylierungsmischung wird in 40 Vol.-% Wasser klarfiltriert. Nach lOminütigem Stehenlassen tropft man eine 10 Volumen-%ige Salzlösung (30 g/100 ml) langsam ein, bis eine schwere Kristallaufschlämmung gebildet ist. Das verbleibende Salz (angenähert 1,75 kg) wird langsam als Feststoff zugegeben. Dies sollte eine maximale Ausfällung bei einer geringen Salzkonzentration ergeben.

in (6) Eine Lösung der Amine der allgemeinen Formel I in Methylenchlorid (MeLA) kann anstelle von MILA verwendet werden. MILA kann einen etwas geringeren DMA-Gehalt als MeLA ergeben.

Nachfolgend werden neuere Laboratoriumsdaten bezüglich der Isolierung von Amoxicillin-Hydrochlorid aus der wäßrigen Acylierungsmischung angegeben. Das Amoxicillin-Hydrochlorid wird anschließend in Amoxicillin-Trihydrat überführt, indem man es in einer Aminmischung der allg. Formel I (gelöst in MeCb oder MIBK) und 10% Wasser aufschlämmt. Das Verfahren stellt eine sehr wirksame Methode zur Herstellung von Amoxicillin-Trihydrat guter Qualität mit einem geringen DMA-Gehalt (15 ppm, üblicherweise < 10 ppm) dar. Es besitzt den Vorteil ausgezeichneter Ausbeuten und einer hohen Produktivität gegenüber anderen bekannten Verfahren zur Herstellung von Amoxicillin.

Die folgenden Punkte verdienen Beachtung:

1. Eine Arbeitsweise zur Herstellung von Amoxicillin-Trihydrat über wasserfreie Acylierung und Isolierung über das AmoxiciUin-Hydrochlorid-Zwischenprodukt ist vorstehend aufgeführt.

j.-, 2. Laboratoriumsexperimente ergeben Aktivitätsausbeuten von 77 bis 82% Amoxicillin-Trihydrat aus 6-APA. Eine übliche Isolierung läßt 6 bis 9% Aktivität, getestet als Amoxicillin, in der Saizmutterlauge zurück; 2 bis 3% Amoxicillin verblei-

₄„ ben in der Mutterlauge der Aminmischung, sowie angenähert 3% unumgesetzte 6-APA.

3. Das Hauptproblem bestand darin, einen DMA-Gehalt von weniger als 15 ppm im endgültigen Amoxicillin-Trihydrat zu halten. Dieses Problem

4^r» wurde am besten durch folgende Maßnahmen gelöst:

(a) Vermischen der Acylierungsmischung mit einem halben Volumen Wasser, gefolgt von langsamer Zugabe von festem NaCl (20 Gew.-% des Wasservolumens).

(b) Langsame Zugabe von Amoxicillin-Hydrochlorid-Kuchen zu der in MIBK oder MeCb (MILA oder MeLA) gelösten Aminmischung der allgemeinen Formel I.

4. Wenn man 6-APA üblicher Produktionsqualität für eine Acylierung verwendet, muß eine Klarfiltration der wasserfreien Acylierungsmischung angewendet werden.

Anmerkungen:

(4) Es ist nützlich, eine Kochsalzsole von 0°C bei dieser Stufe zu verwenden.

5. Es war im Laboratorium nicht möglich, Standard-Amoxicillin-Ausbeuten ohne Zugabe von mindestens 0,5 Mol des Hydrochloride einer schwachen Base (DMA) vor der Acylierung zu erhalten. DMA kann durch Chinolin ersetzt werden, wenn man Chinolin-Hydrochlorid im selben Verhältnis wie DMA-Hydrochlorid einsetzt Eine Acylierung mit Isochinolin war nicht erfolgreich.

6. Die besten Acylierungsausbeuten aus 6-APA zum Amoxicillin liegen weiterhin bei einer Bemessung von 1 Mol D-( — )-2-p-Hydroxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid. Bei einem Vergleich ergaben

0,95 Mol D-(~)-2-p-Hydroxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid eine um 3% bessere Ausbeute zum Amoxicillin, bezogen auf das Säurechlorid, als 1 Mol.

Laboratoriumsdaten

In Tabelle I sind die Ergebnisse aufgeführt, die man beim Aufschlämmen von Amoxicillin-Kuchen (aus Amoxicillin+6n HCl) in Salzlösung über einen pH-Bereich von 0,5 bis 1,75 erhält. Dies zeigt, daß das Amoxicillin · HCl in einer 20 bis 30%igen NaCl-Lösung eine sehr geringe Löslichkeit aufweist. Es ist auch bei pH 1,0 bis 1,5 ziemlich stabil. Wenn das Hydrochlorid aus der Acylierungsmischung ausgefällt wird, werden durch Test 6 bis 9% Amoxicillin in der Salzlösung festgestellt. Diese Verluste sind höher als nach der Löslichkeitstabelle erwartet und können teilweise auf der Bildung von p-Methoxyampicillin · HCl aus D-( —)-2-p-Hydroxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid, das p-Methoxyphenylglycylchlorid · HCl enthält, beruhen.

Bislang ergaben Experimente zur Überführung von Amoxicillin-Hydrochlorid in Amoxicillin-Trihydrat aus Acylierungsmischungen aus dem Labor und den technischen Produktionsanlagen nur Ausbeuten von 65 bis 70%. Dies beruhte auf der Zerstörung der Mischungen in 10 bis 20 Volumen-% gesättigten Salzlösungen bei pH 0,5. Die geringen Ausbeuten mußten durch eine beträchtliche Zersetzung in der hochkonzentrierten Lösung mit niedrigem pH bewirkt worden sein. Tabelle II zeigt, daß ausgezeichnete Ausbeuten erhalten werden können, wenn das Wasservolumen auf 50% des Volumens der Acylierungsmischung erhöht wird. Ein Vergleich von 15 bis 30% Salz über einen pH-Bereich von 0,3 bis 1,5 (eingestellt, nachdem der HO-Kuchen ausgefällt ist) zeigte, daß 25 bis 30% ein Produkt mit einem nicht annehmbaren (>15ppm) DMA-Gehalt ergaben. Eine Menge von 20% im pH-Bereich von 1,3 bis 1,5 ergab im Laboratorium die besten Ergebnisse. Diese Experimente wurden mit umkristallisierter 6-APA durchgeführt; eine Klarfiltrationsstufe war nicht erforderlich.

Technische 6-APA enthält üblicherweise unlösliche dunkle Farbkörper, die entfernt werden müssen. Tabelle III zeigt, daß eine Klarfiltration der Hydrolysegemische (pH 1,5) durch einen mit Filterhilfe überzogenes Filter zu etwas geringeren Ausbeuten führte. Es wurde gezeigt, daß Amoxicillin-Hydrochlorid aus einer gerührten Hydrolysemischung ausfällt, wenn es angeimpft oder zu lange gerührt wird. Die sicherste Methode besteht in der Klärung der wasserfreien Acylierungsmischung. Die Verwendung von Filterhilfe als Zusatz im Laboratorium — die einzige Erfahrung wurde mit 50Gew.-% Filterhilfe zu APA gemacht - führte zu Ausbeuten von 76 bis 79% Amoxicillin-Trihydrat Die Farbe des Produkts war stärker als erwartet, blieb jedoch im allgemeinen innerhalb der Vorschriften. Die Verwendung von mit Säure gewaschener Filterhilfe führte nicht zu verbesserten Ausbeuten oder zu verbesserter Farbe.

In Tabelle IV sind Experimente zusammengestellt, bei denen das Amoxicillin-Hydrochlorid durch verschiedene Techniken mit NaCl als Feststoff und als Lösung, ausgefällt wurde. Es wurde die Theorie aufgestellt, daß die Verwendung einer Salzlösung als Fällungsmittel zur Kristallisation des HCl-Salzes bei geringen NaCl-Konzentrationen führen könnte. Dies hätte zu Amoxicillin-Trihydratprodukten mit einem gleichmäßig geringen DMA-Gehalt führen sollen, jedoch erwies sich dies bei den vorgenommenen Experimenten als unzutreffend. Die erfolgreichsten Ergebnisse wurden erzielt, wenn 20% Salz im Verlauf von 30 Minuten in die Hydrolysemischung eingestreut wurde.

Die Tabelle V enthält Angaben zur Stabilität der Amoxicillin-Hydrochlorid-Aufschlämmung über einen Zeitraum von 16 Stunden. Bei 0 bis 5° C betrug der maximale Ausbeuteverlust nur 3%. Die Kristallisation der Amoxicillin-Hydrochlorid-Aufschlämmung bei 25° führte zu einem geringeren ausgefällten Gewicht, und man fand das verbliebene Produkt in der Mutterlauge. Jedoch wurde kein Versuch unternommen, das Produkt kalt auszufällen und dann auf 25⁰C zu erwärmen. Der Vorteil der gewählten Arbeitsweise liegt darin, daß man ein Produkt ausfällt, das den halben DMA-Gehalt des kalt aufgeschlämmten Produkts aufweist.

In Tabelle VI sind einige Experimente bezüglich der Umwandlung von Aufschlämmungen von Amoxicillin-Hydrochlorid in Amoxicillin-Trihydrat aufgeführt. Die Daten zeigen an, daß 15% Aminmischung der allgemeinen Formel I in MIBK oder MeCl₂ (das 10% H2O enthält) gut funktionieren. Waschen mit Aceton

j-, schien auf dem DMA-Gehalt keinen Einfluß zu haben. Die Verwendung anderer Lösungsmittel, wie Butanol oder Heptan verringerte nicht den Gehalt an DMA. Das Produkt ist im feuchten Butanolsystem ziemlich gut löslich.

In Tabelle VII ist die Verwendung des Hydrochlorids einer schwachen Base (DMA, Chinolin oder Isochinolin) untersucht Läßt man die schwache Base ■ HCl weg, so erhält man im Vergleich zur Standardarbeitsweise geringere Ausbeuten. Die Feststellung, daß die Menge j an TEA-TMCS die Ausbeuteschwankungen beeinflußt, ist ebenfalls von Interesse. Bei den meisten der Experimente war der verbliebene APA-Gehalt höher, wenn die schwache Base · HCl weggelassen wurde. Die Feststellung, das der Basengehalt von Amoxicillin-Trihydrat aus der Chinolin-Acylierung viel höher als bei den Acylierungen mit DMA ist, ist ebenfalls von Interesse. Es wurde kein Versuch unternommen, direkte Kristallisationen durchzuführen, alle Produkte wurden über das HCl-Zwischenprodukt hergestellt

Tabelle VIII gibt die bisherigen Erfahrungen mit 0,9, 0,95 und 1,0 Mol D-(—)-2-p-Hydroxyphenylglycinchlo-

rid-Hydrochlorid wieder. Wie angegeben, ergab 1 Mol D-(—)-2-p-Hydroxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid die besten Ergebnisse, bezogen auf 6-APA, jedoch

bo ergaben 0,95 Mol eine bessere Ausbeute, bezogen auf D-(—)-2-p-Hydroxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid. Bei allen Acylierungen besteht eine Lücke von angenähert 5 bis 10% bei der Materialgleichung. So führt die Zugabe von 10% zusätzlichem D-(-)-2-p-Hy-

b5 droxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid nicht zu einer entsprechenden Zunahme der Ausbeute an Amoxicillin-Trihydrat

13 14

Tabelle I

Löslichkeitsdaten von Amoxicillin-Hydrochlorid gg. pH und % NaCI (in !i-g/ml, ermittelt aus der Biowirksamkeit)

pH	H₂O	5% NaCI	10% NaCl	20% NaCl	30% NaCI
0,5	10 600	5 600	5 700	2 130	1260
1,0	32 000	8 500	4 560	1 980	1500
1,25	53 500	9 100	4 680	1 770	1 130
1,5	53 500	10000	5 650	2 070	1 130
1,75	55 000	12 300	6 000	2 100	1 180

Tabelle Il

pH, Salzkonzentration gg. Ausbeute und DMA-Gehalt von Amoxicillin-Trihydrat

Experiment

pH Scm*) Biowirk- tatsächl. Farbe DMA Asche Cl

samkeit Ausbeute
(%) (ug/mgl (%) (Klett) (ppm) (%)

1) Man gibt aliquote Teile Acylierungsmischung zu 50% H₂O-läßt 10 Minuten stehen gibt 30% Salz zu - impft an setzt mit 15% MeLA um

2) Man gibt aliquote Anteile Acyüelierungsmischung zu 50% Wasser

(A) Man läßt 10 Minuten stehen, gibt 15% NaCl in einem Anteil zu impft an - setzt mit 15% MeLA um

(B) Man läßt 10 Minuten stehen, gibt 20% NaCl in einem Anteil zu impft an - setzt mit 15% MeLA um

(C) Man läßt 10 Minuten stehen, gibt 25% NaCl in einem Anteil zu impft an - setzt mit 15% MeLA um

so wie 79,0 866

er ist

(1,4-1,5)

so wie 83,0 868

er ist

(1,4-1,5)

so wie 84,0 866

er ist

(1,4-1,5)

81
79
80,4
79,2

78,6

82,6

83,5

48
49
43
50

44

45

65

31
46

32
41

0,2 0,1 0,1 0,1

<0,l 0,15

<0,l 0,09

<0,l 0,22

*) Scm betrifft die stöchiometrische Ausbeute, d. h. die prozentuale Ausbeute unter der Annahme, daß reine Reagenzien und reines Produkt vorliegen.

Tabelle III

Klarfiltrieren des Acylierungsgemischs oder Hydrolysegemischs vor der Amoxicillin-Hydrochlorid-Ausfallungsstufen

Hydrolyse- NaCl Klär- Experiment Stufe H₂O stufe

Scm. Analyse beim hergestellten Amoxicillin-Trihydrat

Bio- tatsächl. DMA Asche wirksam- Ausbeute v.
keit Amoxicillin-Trihydrat

(ppm)

Farbe (Klett)

60 20- Hydr.- Zugabe von H₂O - Klären - 77,5 866 77,4

lang- Mischg. Weiterverarbeiten

sam

60 desgl. desgl. Trennen der Phasen - 76,9 866 76,9

Kristallisieren aus H₂O-MeCI₂

<0,l 55 <0,l 39

15

16

Fortsetzung

Hydrolyse- NaCl Klär- Experiment Stufe HiO stufe

Scm. Analyse beim hergestellten Amoxicillin-Trihydrat

Bio- tatsächl. DMA Asche wirksam- Ausbeute v.
keit Amoxiciliin-Trihydrat

Farbe (Klett)

(ppm)

50 20- Hydr.- Zugabe von H₂O - Klären - 75,5 874 75,8

lang- Mischg. Weiterverarbeiten ■am

50 desgl. Acyl.- Verwendung von trockener 79 870 79,3

Mischg. F. A.²) als Beimengung
50 desgl. desgl. 5-μ Trichter - N₂-Beutel - 77,6 875 78

keine F. A.
50 24- desgl. Zugabe der Mischg. - 76 836 73,9

langsam übliche F. A.²)

50 desgl. desgl. Zugabe der Mischg. - 76,8 858 76,7

feuchte F. A.²)
50 desgl. desgl. Zugabe der Mischg. - 77,4 883 78,4

trockene F. A.²)
60 20 Acyl.- trockene F. A. - als vorüber- 79,7 836 77,5

Mischg. zogenes Filter verwendet
60 20 Hydr.- wie oben klären 76,4 849 73,5

Mischg.

50 20 Acyl.- Verwendung von mit Säure 77,7 840 75,9

Mischg. gewaschener F. A.²) als Beimengung

27,6') 0,1 57

11 0,1

12,8 <0,l

15 <0,l

18 <0,l

10

< 0.5
10

<0,l 80 <0,l 59 <0,l 119

Anmerkungen:

') Es wurde nur eine Probe zur Untersuchung auf DM A eingesandt - bei einigen Proben kann die Varabilrtätbis zu 100% betragen

^. -τ-_ , _Γ7λ „, ■» A ™->« .-, „„,,.«^„Urt^rt xrari nntfnclontfl Ci I fort- ^:'Γλ

»Übliche F. A.« = Filterhilfe, wie sie aus der Produktion kommt.

»Feuchte F. A.« = Filterhilfe, die in Wasser aufgeschlämmt und an der Luft getrocknet wurde.

»Mit Säure gewaschene F. A.« = Filterhilfe, in HCl gewaschen, neutralisiert, mit Aceton gewaschen und getrocknet.

Tabelle IV

DMA-Gehalt von Amoxicillin-Trihydrat gg. Technik der Ausfällung von Amoxicillin-Hydrochlorid

Vo	Gesamt	pH	Experiment	Mischg.	Scm.	Bio	tatsächl.	DMA	Bemerkungei
lumen	zuge					wirksam	Ausbeute
H₂O	setztes			- 1 Anteil		keit
	Salz			- 2 Anteile
(%)	(%)			Min.	(%)	(;j.g/mg)	(%)	(ppm)
50	20	1,4-1,5		- 1 Anteil	83	868	82,6	7	Umkrist.
				- 1 Anteil					APA
									keine Klar
								filtrations
								stufe
50	20	1,4-1,5	Kontrolle - Zugabe von Salz -	75,8	849	73,5	8	desgl.
			1 Anteil
50	20	1,4-1,5		80,5	874	80,4	18	desgl.
50	20	1,4-1,5		79,5	887	79,5	7	desgl.

75	20	1,4-1,5	Zugabe von Acyl.-	79,4	870	79,4	7	desgl.
!00	20	1,4-1,5	zu Salz - H₂O	78.4	891	78.4	7	desgl.
			Zugabe von Salz -					909 581/3«
Zugabe von Salz -
im Verlauf von 10
Zugabe von Salz -
ZijgMhR vnn Salz -

Fortsetzung

Vo- Gesamt pH
lumen zuge-H₂O setztes
Salz

Experiment

Biowirksam
keit

tatsächl. DMA Bemerkungen Ausbeute

(fxg/mg) (%)

(ppm)

100 20 1,4-1,5 Verd. Acyl.-Mischg. Gew./100%

MeCl₂

30 20 1,4-1,5 SOP - langsame Zugabe

15 20 1,4-1,5 SOP - langsame Zugabe

20 20 1,3 langsame Zugabe d. Salzlösg.

zur Hydr. Mischg.

30 20 1,3 langsame Zugabe d. Salzlösg.

zur Hydr. Mischg.

20 20 1,3 Schnelle Zugabe d. Salzlösg.

zur Hydr. Mischg.

50 20 1,3 langsame Zugabe d. festen

Salzes

20 20 1,3 Verwendg. von 30 Vol-%

Salzlösung + Feststoff

40 20 1,3 Verwendg. von 10 Vol-%

Salzlösung + Feststoff

78	870	78	6	Umkrist. APA keine Klar filtrations stufe
80,5	858	79,3	13	desgl.
77,6	849	75,6	9	desgl.
78,4	879	78,4	10	desgl.
76	870	76	8	desgl.
78,8	870	78,8	15	desgl.
77,7	840	75,9	10	Klarfiltra- tionsstufe- techn. APA
76,9	849	76,5	18	desgl.
79	840	77,2	13	desgl.

Tabelle V

Stabilität von Amoxicillin-Ilydrochlorid-Aufschlämmung bei pH 1,4 -♦ 1,7 (nicht eingestellt) - 25%-ige NaCl-Lösung

Probe	aufrecht	Zeit	Amoxicillin ■	Anteil bez. auf	Menge in
	erhaltene		HCI	Kontrolle	der ML
	Temp.
	( (-·)	(Std.)	100 ml	(%)	(με)
1	0,5	0,5	7,63	ΐυο	370,000
2	0,5	1	7,95	104	360,000
3	0,5	1,5	7,64	100	370,000
4	0,5	2	7,85	103	320,000
5	0,5	3	7,50	98	360,000
6	0,5	16	7,37	96,6	360,000
7	25	2	6,4	84	610,000

Der DMA-Gehalt der bei 0 bis 5 C hergestellten Proben von Amoxicillin-1 lydrochlorid betrug

6390 ppm.

Der DMA-Gehall der Probe Nr. 7 betrug 3300 ppm.

Der getrocknete Amoxicillin-hydrochlorid-Kuchen in Probe Nr. 2 wurde in Amoxicillin-Trihydrat

überführt. Ausbeute 82%; Bio 862; DMA 33.

19

20

Tabelle VI
Umwandlungsstufe

H₂O	NaCl	Umwandlungsmischung	Experiment	Analysen beim hergestellten Amoxicillin-Trihydrat	DMA
				Scm. Bio- tatsächl. wirksam- Ausbeute keit	(ppm)
(%)				(%) ((ig/mg) (%)

50 20 pH 5, 15% MeLA

50 20 pH 5, 20% MeLA

50 20 pH 5, 15% MlLA

50 20 pH 5, 15% MeLA

50 20 15% MeLA, pH nicht eingestellt

50 20 15% MeLA, pH nicht

eingestellt 50 20 15% MeLA, pH nicht

eingestellt

I	50	20	15% MeLA, pH nicht
η			eingestellt
1	50	20	15% MlLA, pH nicht
			eingestellt
	50	20	20% BuLA, pH nicht
t'-'Γ			eingestellt
ί'^;	50	20	15% Amin I, in Heptan
			pH nicht eingestellt

wie im obigen Beispiel wie im obigen Beispiel wie im obigen Beispiel Aufschlämmung in Aceton Kräftiges Waschen des Amoxicillin-Hydrochlorid-Kuchens mit MeCi₂ vor der Umwandig.

Zugabe der Umwandlungsmischung zum HCl-Kuchen Amoxicillin-Trihydrat im Filtertrichter mit Aceton gewaschen
Kontrolle

wie im obigen Beispiel wie im obigen Beispiel wie im obigen Beispiel

79,5	849	77,5	6
78,8	858	77,6	8
79,4	862	78,6	4
78,7	S53	77,1	9
78,5	853	76,5	17
81,3	846	78,9	10
81,3	831	77,6	12
79,9	888	79,9	4
77,9	879	77,9	5
58,7	875	58,7	18
78,4	853	76,8	12

Tabelle VIl

Verwendung von DMA - Chinolin - Isochinolin

Bedeutung der Zugabe von Base · HCl und Auswirkung auf Esterbildung

Ester	I	TMCS-TEA	läse	Base · HCl	H₂O	Salz	Analysen beim hergestellten Amoxicillin-Trihydrat	Bio wirksam keit	tatsächl. Ausbeute	Base	Bemerkungen
		TMCS-TEA					Scm.	^g/mg)	(%)	(ppm)
		TMCS-TEA			(%)	(%)	(%)	874	82,5	6	Eingesetzt: Umkristalli sierte 6-APA
ί 2,0 Mol ^;-._t	TMCS-TEA	,2 DMA	0,6 DMA · HCl	50	24	82,5	868	82,6	7	desgl.
:·; 2,0 Mol	TMCS-TEA	,2 DMA	0,61 DMA ■ HCl	50	20	83	874	74	6	desgl.
1,6 Mol	TMCS-TEA	,2 DMA	0 DMA · HCl	50	20	74	849	66,4	82	desgl.
Z 2,0 Mol	TMCS-TEA	,2 Chin	0 Chin · HCl	50	24	68,1	858	75,9	75	desgl.
I 1,6 Mol	TMCS-TEA	,2 Chin	OChin ■ HCl	50	24	77	883	73,2	33	desgl.
■ 1,6 Mol	TMCS-TEA	,0 Chin	OChin · HCl	50	20	73,2	870	73,4	24	desgl.
i 2,0 Mol	TMCS-TEA	,0 Chin	0,125 Chin · HCl	50	24	73,4	866	75	24	desgl.
2,0 Mol	TMCS-TEA	,0 Chin	0,25 Chin ■ HCl	50	24	75,0	871	80,4	17	desgl.
2,0 Mol	TMCS-TEA	,0 Chin	0,5 Chin ■ HCl	50	24	80,4	866	80,1	13	desgl.
2,0 Mol	,0 Chin	0,6 Chin · HCl	50	24	80,6	862	77,7	24	desgl.
2,0 Mol	,0 Chin	0,75 Chin · HCl	50	24	78,5	848	53,5	NA	desgl.
2,0 Mol	,2 lso-	0,6 Isochin ■ HCI	50	24	55

21 22

Tabelle VIII

D-i-^-p-Hydroxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid Amoxicillin-Trihydrat Ausbeute über Amoxicillin-Hydrochiorid-Verfahren

Moi D-(-)-2-p-Hydro-.y- APA ph enylglycinchlori d-Hydrochlorid

APA Scm.	Bio wirksam keit	tatsächl. Ausbeute	D-( - )-2-p-Hydroxyphenylglycin chlorid-Hydrochlorid tatsächl. Ausbeute
(%)	(Kg/mg)	(%)	(%)
77,7	840	78,2	78,2
70,9	845	69,7	77,4
76,3	875	76,3	81,4

Claims

Patentansprüche:

1. Verfahren zur Herstellung von 6-[D-«-Amino-«- (p-hydroxyphenylJ-acetunidoPpenicillansäure-Trihydrat durch aufeinanderfolgendes

b) Acylieren der silylierten 6-Aminopenicillansäure mit D-(-)-2-para-Hydroxyphenylglycinchlorid-Hydrochlorid in Gegenwart einer schwachen Base und ihrem Hydrochlorid,

c) Hydrolysieren und Neutralisieren des Produkts der Acylierung zur Bildung des 6-[D-«- Amino-a-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penisillansäure-Trihydrats und

d) Gewinnung des 6-[D-a-Amino-«-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penicillansäure-Trihydrats,

dadurch gekennzeichnet, daß man das Reaktionsgemisch aus der Stufe b) mit Wasser bei einem pH unterhalb 2 und in Gegenwart von NaCl in einer Gewichtsmenge von bis zu 30% des Gewichts des für die Hydrolyse verwendeten Wassers vermischt, das ausgefallene Hydrochlorid der 6-[D-a-Amino-a-fp-hydroxyphenylJ-acetamidoJ-penicillansäure abtrennt und mit einer Lösung eines flüssigen, basischen, aliphatischen Amins mit hohem Molekulargewicht in einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel in Gegenwart einer Wassermenge, die ungefähr 10% des Gewichts des organischen Lösungsmittels gleich ist, bei ungefähr 25° C vermischt, die Mischung einige Zeit stehen läßt und schließlich das gewünschte Produkt abtrennt.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als mit Wasser nicht mischbares organisches Lösungsmittel Methylenchlorid oder Methylisobutylketon verwendet.