DE2528490C2 - Verfahren zur Herstellung saurer Protease - Google Patents

Verfahren zur Herstellung saurer Protease

Info

Publication number
DE2528490C2
DE2528490C2 DE2528490A DE2528490A DE2528490C2 DE 2528490 C2 DE2528490 C2 DE 2528490C2 DE 2528490 A DE2528490 A DE 2528490A DE 2528490 A DE2528490 A DE 2528490A DE 2528490 C2 DE2528490 C2 DE 2528490C2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
protease
strain
rhizopus
activity
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
DE2528490A
Other languages
English (en)
Other versions
DE2528490A1 (de
Inventor
Rudolf Dr. 4040 Neuss Lehmann
Hans F. Dipl.-Chem. Dr. 5657 Haan Pfeiffer
Joachim Dr. 4000 Düsseldorf Schindler
Wolfgang Dipl.-Chem. Dr. 4018 Langenfeld Schreiber
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henkel AG and Co KGaA
Original Assignee
Henkel AG and Co KGaA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henkel AG and Co KGaA filed Critical Henkel AG and Co KGaA
Priority to DE2528490A priority Critical patent/DE2528490C2/de
Priority to NL7606089A priority patent/NL7606089A/xx
Priority to DK247076A priority patent/DK143164C/da
Priority to US05/695,453 priority patent/US4062732A/en
Priority to IT24537/76A priority patent/IT1061117B/it
Priority to CH818676A priority patent/CH620471A5/de
Priority to JP51074564A priority patent/JPS523893A/ja
Priority to FR7619433A priority patent/FR2317356A1/fr
Publication of DE2528490A1 publication Critical patent/DE2528490A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2528490C2 publication Critical patent/DE2528490C2/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/189—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi
    • Y10S435/939—Rhizopus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Feed For Specific Animals (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Description

Die Erfindung betrifft das im Patentanspruch angegebene Verfahren.
Es ist allgemein bekannt und Gegenstand vieler industrieller Herstellungsverfahren, proteolytische Enzyme mit saurem pH-Wirkungsbereich durch Züchtung von Mikroorganismen verschiedener Gattungen, z. B. Stämmen der Gattung Alternaria, Aspergillus, Fusarium, Paecilomyces, Penicillium. Rhizopus und Trametes zu gewinnen. Diese Proteasen besitzen eine optimale Wirkung bei einem allgemein als »pH-Optimum« bezeichneten pH-Wert, ihre Aktivität fällt jedoch beiderseits dieses pH-Wertes rasch ab. Ein sinnvoller Einsatz dieser Proteasen setzt daher eine Kenntnis des bei der Anwendung herrschenden pH-Wertes voraus, die nicht immer gegeben ist. Zudem ist man gezwungen, jeweils eine für den vorliegenden pH-Wert geeignete Protease auszusuchen.
Die Aufgabe der Erfindung besteht daher darin, eine saure Protease mit breitem pH-Wirkungsbereich und hoher enzymatischer Aktivität aufzufinden. Diese Eigenschaft ist besonders nützlich bei einem Einsatz dieser Protease in der Nahrungsmittel- und Tierfuttermittel-lndustrie, da gerade hier mit pH-Schwankungen in jeweils unbekannter Größe gerechnet werden muß.
Gegenstand der Erfindung ist also ein Verfahren zur Herstellung einer sauren Protease durch aerobes Züchten eines Stammes der Gattung Rhizopus in einem Nährmedium, das assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen enthält, bei pH-Werten zwischen 3 und 7 und Temperaturen zwischen 25 und 5O0C, und Abtrennen der sauren Protease nach üblichen Methoden, dadurch gekennzeichnet, daß man als Stamm der Gattung Rhizopus den Stamm Rhizopus rhizopodiformis CBS 227.75 einsetzt.
Der in der vorliegenden Erfindung verwendete Stamm der auf Rhizopus rhizopodiformis wurde mit der Hinterlcgungsnummer CBS 227.75 im Centraal Bureau voor Schiminelcuitures, Baarn (Nederland). am 23. 3. 1975 deponiert.
Dieser Stamm wurde unter spezifischen Anreicherungsbedingungen bei pH-Werten zwischen 3 und 5 und mit Proteinen wie Casein oder Gelatine als C- und N-Quelle aus Erdproben isoliert. Er wurde im Centraal Bureau voor Schiminelcuitures, Baarn (Nederland), klassifiziert.
Das Verfahren zur Herstellung der Protease kann in einem flüssigen oder festen Nährmedium durchgeführt werden, wobei das flüssige Nährmedium im allgemeinen bevorzugt wird. Bei Züchtung in einer Nährlösung wird nach dem üblichen aeroben Schüttel-Kultur- oder Fermentationsverfahren gearbeitet.
Der erfindungsgemäß zu verwendende Nährboden wird in üblicher Weise hergestellt und soll eine Kohlenstoffqueüe, eine Stickstoffquelle und andere von dem Mikroorganismus benötigte Nähr- und Wuchsstof- ; fe enthalten. Als geeignete Kohlenstoffquellen sind Stärke, Dextrin, Rohrzucker, Glukose, Fruktose, Maltose und zuckerhaltige Abfallstoffe zu nennen. Als Stickstoffquellen kommen Ammoniumsalze, Harnstoff, Casein, Gelatine, Maisquellwasser und Sojabohnenmehl
ίο bzw. -kuchen in Frage. Weiterhin können anorganische Salze, wie beispielsweise Natrium-, Kalium-, Ammoniumhydrogenphosphate. Calcium- und Magnesiumsalze, dem Nährboden zugesetzt werden. Ferner kann es vorteilhaft sein, Wuchsstoffe, wie z. B. Hefeextrakt und
ι ϊ Vitamine, dem Nährboden zuzusetzen.
Die Fermentationstemperatur bewegt sich zwischen 25° C und 5O0C, ist aber vorzugsweise zwischen 27 bis 32°C zu wählen. Der pH-Wert des Nährbodens liegt zwischen 3 und 7, vorzugsweise beträgt er 4,0 bis 6,0. Die
>o Züchtung wird im allgemeinen in einer Zeit von 20 bis 96 Stunden durchgeführt.
Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellte Protease kann aus der filtrierten oder zentrifugierten Nährlösung nach üblichen Methoden durch
1-5 Zusatz organischer Lösungsmittel oder durch Aussalzen mit z. B. Natriumchlorid, Natriumsulfat, Ammoniumsulfat oder Calciumchlorid ausgefällt und konzentriert werden. Eine Reinigung läßt sich durch Dialyse-Verfahren oder durch Behandlung an Ioner.austauscherharzen
in bewerkstelligen.
Die erfindungsgemäß hergestellte Protease besitzt ein besonders breites Wirkungsspektrum im schwach sauren Bereich zwischen pH 2,5 bis 6,5. Das Wirkungs-Optimum liegt bei pH 4,5, der Bereich der 80%igen
j5 Maximalaktivität bei pH 3,3 bis 5,9, der Bereich der 60%igen Maximalaktivität bei pH 3,0 bis 6,4. Die Protease eignet sich in besonderem Maße als Zusatzstoff für Ί ierfuttermittel, insbesondere zur Verbesserung der Ergebnisse bei der Aufzucht und Mast von Geflügel, Schweinen, Kälbern und Nutzfischen. Sie kann jedoch darüber hinaus auch für andere Einsatzzwecke, bei denen saure Proteasen verwendet werden können, angewendet werden, wie z. B. in Lebensmittel verarbeitenden Betrieben, in sauren Wasch- und Reinigungsmit-
4ϊ teln, insbesondere Reinigungsmitteln für Kacheln, Fußböden und Tische, in Krankenhäusern und im Haushalt, als Lederhilfsmittel in der Gerberei, ferner in hoch gereinigter Form im medizinischen Anwendungsbereich als Digestivum.
ίο Die Feststellung der proteolytischen Aktivität der erfindungsgemäß erhältlichen Protease erfolgte nach dem bekannten Prinzip der Bestimmung nach Anson: eine geeignet verdünnte Menge Enzymlösung wird bei 40°C 20 Minuten mit einem gleichen Volumen einer l,2%igen Caseinlösung inkubiert, wobei diese 0,6% Milchsäure, 6 Mol Harnstoff und 0,1 Mol Zitronen- oder Essigsäure enthält. Der pH-Wert der Caseinlösung wird durch Zusatz von 2 N Natronlauge auf 4,5 eingestellt. Nach der Inkubation wird im Volumenverhältnis 1 : 1
to mit 0,4 N Trichloressigsäure versetzt, der sich bildende Niederschlag von unverdautem Casein abfiltriert und im Filtrat die beim Abbau entstandenen Protein-Spaltstükke nach einer beliebigen Eiweißbestimmungsmethode ermittelt. Geeignet hierfür ist z. B. das von Layne in
b5 Methods of Enzymology 3 (1957) Seiten 448 ff. beschriebene Verfahren.
Für jede Meßprobe muß ein Blindwert angefertigt werden, bei dem zuerst Trichloressigsäure und dann
Caseinlosung zugesetzt werden. Dieser Blindwert gibt neben dem Reagenzien-Leerwert den Anteil an niedermolekularen Peptiden an, der bereits vor der Verdauung in der Enzymlösung vorhanden ist Die Differenz zwischen Haupt- und Blindwert wird bei der angegebenen Methode dann mit der Extinktion verglichen, die eine bestimmte Menge Tyrosin bei dieser Bestimmung liefert Diese Menge Tyrosin ist dann ein Maß für die proteolytische Aktivität des vorliegenden Enzyms: eine Enzymeinheit (TU) ist diejenige Menge Enzym, die den gleichen Extinktionsunterschied zwischen Haupt- und Blindwert pro Minute verursacht wie eine 1-M-Tyrosinlösung, die anstatt der Enzymlösung eingesetzt wird.
Die Messung der proteolytischen Aktivität bei höheren und tieferen pH-Werten als 4,5 ist durch passende Einstellung der Caseinlosung ohne weiteres möglich, wobei man jedoch den Essigsäurezusatz günstigerweise durch Zitronensäure ei setzt.
Beispiel 1
Zur Bereitung des Nährmediums werden in 1 1 Wasser 3 g Sojamehl, 3 g Maisquellwasser, 15 g Casein, 7 g Gelatine, 2,4 g KH2PO4, 0,5 g MgSO4 · 7 H2O, 0,1 g MnCl2 · 4 H2O1O1I g CaCl2 ■ 2 H2O und 20 g Maisstärke gelöst bzw. dispergiert. Der pH-Wert der Nährlösung betrug 5,3. Die Maisstärke wurde mittels Amylase weitestgehend abgebaut. In die sterilisierte Nährlösung wurden Sporen des Stammes Rhizopus rhizopodiformis CBS 227.75 eingeimpft und die Kultur unter optimaler Belüftung bei 300C etwa 50 Stunden gezüchtet. Nach dieser Zeit wurde das Pilzmycel abfiltriert und die mycelfreie Kulturbrühe zur Bestimmung der Proteaseaktivität gemäß vorgenanntem Verfahren verwendet. Dabei ergab sich, daß die Kulturlösung enzymatische Aktivität bis zu 18 m TU/ml erreichte.
Beispiel 2
Zur Bereitung des Nährmediums wurden in 1 1 Leitungswasser 10 g Sojamehl (entölt), 5 g Maisquellwasser, 12 g Casein, 5 g Gelatine, 5 g Getreidetrockenschlempe, 2,4 g KH2PO4, 1 g NaNO3, 1 g NH4Cl, 0,01 g FeSO4 und 30 g native Maisstärke gelöst bzw. dispergiert. Der pH-Wert der Nährlösung wurde nach dem Autoklavieren auf 5,3 eingestellt. Ein mit dieser Nährlösung angesetzter 10-Liter-Fermenter wurde mit 100 ml einer Czapek-Dox-Vorkultur (mit 5% Stärke und 0,5% Hefeextrakt) versetzt, die mit Sporen des Pilzstammes Rhizopus rhizopodiformis CBS 227.75 beimpft und 24 Stunden bei 3O0C geschüttelt worden war, unter Belüftung bei 30°C etwa 50 Stunden betrieben, bis der pH-Wert auf 6,8 bis 7,0 angestiegen war. Danach wurde das Mycel abfiltriert und die klare Kulturbrühe zur Bestimmung der Proteaseaktivität gemäß vorgenanntem Verfahren verwendet Dabei ergab sich, daß die Kulturlösung eine enzymatische Aktivität bis zu 20 m TU/ml erreichte.
Die Protease wurde isoliert durch Klarfiltration der ι Brühe unter Zusatz von 5 g Filter CeI und 5 g Standard Super CeI, Einengen bei 50 Torr auf ein Drittel des Ausgangsvolumens und Ausfällen unter Zusatz von 39% wasserfreiem Natriumsulfat unter Rühren, wobei die Temperatur auf 38-40°C gebracht wurde. Alternativ kann die Protease aber auch durch Zutropfen von 2 Volumina Äthanol, Methanol, Aceton oder anderer wassermischbarer Lösungsmittel bei einer Temperatur von -3 bis 5°C ausgefällt werden. Der Niederschlag wurde abgesaugt und im Vakuum getrocknet.
Beispiel 3
Unter Anwendung des vorstehend geschilderten Bestimmungsverfahrens wurde die Aktivität der nach Beispiel 1 und 2 isolierten Protease in Abhängigkeit vom pH-Wert ermittelt. In der Tabelle sind die pH-Werte aufgeführt, bei denen die optimale bzw. 50% der beim optimalen pH-Wert gemessenen Aktivität vorliegen. Wie die ebenfalls in dieser Tabelle enthaltenen Werte für literaturbekannte, saure Proteasen erkennen lassen, besitzt die aufgefundene Protease einen breiteren und für die genannten Anwendungsgebiete günstigeren Wirkungsbereich — ausgedrückt in pH-Einheiten — als die bekannten Enzyme.
j-) Tabelle pH-Optimum 50%-Werte
Enzym 2,5-3,0 1,5-4,0
,„ Takamine®
acid fungal protease 3,0 1,5-4,5
Denapsin® 2,5 1,5-4,0
Aspergillus acid protease 2,0-3,0 1,5-4,5
Proctase® 2,5 2,0-4,5
Samprose® 4,0-4,5 2,5-6,5
Protease aus Rhizopus
rhizopodiformis CBS 227,75

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Verfahren zur Herstellung einer sauren Protease durch aerobes Züchten eines Stammes der Gattung Rhizopus in einem Nährmedium, das assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen enthält, bei pH-Werten zwischen 3 und 7 und Temperaturen zwischen 25 und 50° C, und Abtrennen der sauren Protease nach üblichen Methoden, dadurch gekennzeichnet, daß man als Stamm der Gattung Rhizopus den Stamm Rhizopus rhizopodiformis CBS 227.75 einsetzt.
DE2528490A 1975-06-26 1975-06-26 Verfahren zur Herstellung saurer Protease Expired DE2528490C2 (de)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2528490A DE2528490C2 (de) 1975-06-26 1975-06-26 Verfahren zur Herstellung saurer Protease
NL7606089A NL7606089A (nl) 1975-06-26 1976-06-04 Werkwijze voor de bereiding van een zuur protease.
DK247076A DK143164C (da) 1975-06-26 1976-06-04 Fremgangsmaade til fremstilling af sur protease
US05/695,453 US4062732A (en) 1975-06-26 1976-06-14 Process of producing acid stable protease
IT24537/76A IT1061117B (it) 1975-06-26 1976-06-22 Procedimento per produrre proteasiacide
CH818676A CH620471A5 (de) 1975-06-26 1976-06-25
JP51074564A JPS523893A (en) 1975-06-26 1976-06-25 Production of acid protease
FR7619433A FR2317356A1 (fr) 1975-06-26 1976-06-25 Procede de preparation d'une protease acide

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2528490A DE2528490C2 (de) 1975-06-26 1975-06-26 Verfahren zur Herstellung saurer Protease

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE2528490A1 DE2528490A1 (de) 1977-01-20
DE2528490C2 true DE2528490C2 (de) 1983-04-28

Family

ID=5950003

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2528490A Expired DE2528490C2 (de) 1975-06-26 1975-06-26 Verfahren zur Herstellung saurer Protease

Country Status (8)

Country Link
US (1) US4062732A (de)
JP (1) JPS523893A (de)
CH (1) CH620471A5 (de)
DE (1) DE2528490C2 (de)
DK (1) DK143164C (de)
FR (1) FR2317356A1 (de)
IT (1) IT1061117B (de)
NL (1) NL7606089A (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2802397C2 (de) 1978-01-20 1987-01-02 Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf Futtermittelmischung, enthaltend Carbadox und proteolytische Enzyme

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4218437A (en) * 1976-07-23 1980-08-19 Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien (Henkel Kgaa) Animal feeds containing a mixture of virginiamycin, zinc bacitracin or flavophospholipol and proteolytic enzymes
US4235879A (en) * 1976-07-23 1980-11-25 Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien Animal feeds containing a mixture of Virginiamycin, zinc bacitracin or flavophospholipol and proteolytic enzymes
DE2751902C2 (de) * 1977-11-21 1986-09-11 Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf Futtermittelmischung enthaltend Avoparcin und proteolytische Enzyme
US4225584A (en) * 1977-12-10 1980-09-30 Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien Animal feeds containing a mixture of nitrovin, carbadox or olaquindox and proteolytic enzymes
DE2802398C2 (de) * 1978-01-20 1987-02-26 Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf Futtermittelmischung, enthaltend Lincomycin und proteolytische Enzyme
DE2836824C2 (de) * 1978-08-23 1987-01-29 Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf Verfahren zur enzymatischen Pelzweiche
DE2921213A1 (de) * 1979-05-25 1980-12-11 Henkel Kgaa Tierfuttermischung
DE3132936A1 (de) * 1981-08-20 1983-03-03 Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf "verfahren zur herstellung saurer protease und diese bildende mutanten der gattung rhizopus"
CA1231069A (en) * 1983-10-24 1988-01-05 Bausch & Lomb Incorporated Microbial enzymatic contact lens cleaner and methods of use
JPS60244261A (ja) * 1984-05-18 1985-12-04 Kyodo Shiryo Kk 幼豚用配合飼料
US5662901A (en) * 1987-07-21 1997-09-02 Loveland Industries, Inc. Enzymatic grain conditioner and methods of using it
JPH0254797A (ja) * 1988-08-15 1990-02-23 Nippon Steel Corp 金属の表面処理方法
JP2569993B2 (ja) * 1991-03-29 1997-01-08 日本鋼管株式会社 耐食性、耐指紋性および塗装性に優れた、クロメート処理亜鉛系めっき鋼板の製造方法
JPH0787270B2 (ja) * 1992-02-19 1995-09-20 日鉱グールド・フォイル株式会社 印刷回路用銅箔及びその製造方法
US6960462B2 (en) * 2000-02-08 2005-11-01 Dsm Ip Assets B.V Use of acid-stable subtilisin proteases in animal feed
US6855548B2 (en) * 2000-02-08 2005-02-15 F. Hoffman-La Roche Ag Use of acid-stable proteases in animal feed
AP2212A (en) * 2003-12-30 2011-03-01 Gilead Sciences Inc Phosphonates, Monophosphonamidates, Bisphosphonamidates for the treatment of viral diseases.
WO2008002231A1 (en) * 2006-06-30 2008-01-03 Lars Edebo Zygomycetes for fish feed

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3674644A (en) * 1968-12-26 1972-07-04 Kikkoman Shoyu Co Ltd Production of novel acidstable and thermostable protease
DE1965305A1 (de) * 1969-01-17 1970-09-17 Kyowa Hakko Kogyo Kk Verfahren zur Herstellung von Proteasen auf mikrobilogischem Wege mit Hilfe von Mikroorganismen der Klasse Basidiomycetes
US3677898A (en) * 1969-01-31 1972-07-18 Ajinomoto Kk Acid protease and method of preparing the same

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NICHTS-ERMITTELT

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2802397C2 (de) 1978-01-20 1987-01-02 Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf Futtermittelmischung, enthaltend Carbadox und proteolytische Enzyme

Also Published As

Publication number Publication date
IT1061117B (it) 1982-10-20
DK143164C (da) 1981-11-16
DE2528490A1 (de) 1977-01-20
FR2317356A1 (fr) 1977-02-04
CH620471A5 (de) 1980-11-28
DK143164B (da) 1981-07-06
US4062732A (en) 1977-12-13
FR2317356B1 (de) 1980-04-18
JPS523893A (en) 1977-01-12
NL7606089A (nl) 1976-12-28
DK247076A (da) 1976-12-27
JPS619033B2 (de) 1986-03-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2528490C2 (de) Verfahren zur Herstellung saurer Protease
DE69726194T2 (de) Ds11 (kctc 02311bp), neuartiger bacillus sp. stamm und neue von diesem produzierte phytase
DE2314984B2 (de) Verfahren zur herstellung von proteinhydrolysat mit hohem gehalt an freien aminosaeuren und dessen verwendung als wuerze oder lebensmittelzusatz
DE2123707C3 (de) Verfahren zur Herstellung einer eßbaren, Protein enthaltenden Substanz
EP0082395A2 (de) Verfahren zur Herstellung saurer Protease und diese bildende Mutanten von Pilzen der Gattung Aspergillus
EP0897977A2 (de) Enzymkomplex
DE2524753A1 (de) Verfahren zur entfernung wasserloeslicher kohlenhydrate bei der herstellung von pflanzenproteinprodukten
DE2705878A1 (de) Verfahren zur foerderung der milchsekretion bei tieren
DE2167078C2 (en) Amylase prepn - for prodn of maltose from starch
DE2824390C2 (de)
EP0072978B1 (de) Verfahren zur Herstellung saurer Protease
DE1767183C3 (de) Verfahren zur Herstellung von mikrobiellem Labferment
DE1949719A1 (de) Verfahren zur Herstellung von Dextranase
EP0024345B1 (de) Verfahren zur Gewinnung von Cholesterinesterase
DE3025424C2 (de) Verfahren zur Herstellung von Galactoseoxidase
DE2164018B2 (de) Verfahren zur biotechnischen herstellung von uricase
DE1293704B (de) Verfahren zur Steigerung der Extrazellularenzymbildung bei der Zuechtung von Mikroorganismen mit Extrazellularenzymbildungsfaehigkeit
DE2261270C3 (de) Verfahren zur Herstellung zellwändelysierender Enzymkomplexe, so erhältliche Enzymkomplexe und deren Verwendung
DE3617368C2 (de) Verfahren zur Herstellung eines stickstoffhaltigen Polysaccharids
DE1642637A1 (de) Milchgerinnungsenzym und Verfahren zu seiner Erzeugung
DE2051945C3 (de) Verfahren zur Herstellung eines Enzyms mit etwa gleich großer Glutaminase- und Asparaginase-Aktivität
DE939397C (de) Verfahren zur Herstellung und Gewinnung eines Produktes mit antiviraler Aktivitaet
DE1300817B (de) Verfahren zur Herstellung von carotinoidhaltigen Futterzusatzmitteln, insbesondere fuer Gefluegelfuttermittel
DE2033822A1 (de) Hydrolytisches Enzymgemisch und Ver fahren zu dessen Herstellung
DE2239210A1 (de) Verfahren zur zersetzung von raffinose unter verwendung von alpha-galactosidase

Legal Events

Date Code Title Description
8110 Request for examination paragraph 44
D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition
8339 Ceased/non-payment of the annual fee