DE2402217B2

DE2402217B2 - Verfahren zur Herstellung von Proteinmaterial

Info

Publication number: DE2402217B2
Application number: DE2402217A
Authority: DE
Inventors: Yoshikazu Takarazuka Hyogo Fukita; Toyozoo Toyonaka Osaka Katsura; Yukio Toyonaka Tanigawa; Hiroo Takatsuki Wada; Junichi Takarazuka Hyogo Yoshikawa
Original assignee: Sumitomo Chemical Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Chemical Co Ltd
Priority date: 1973-01-17
Filing date: 1974-01-17
Publication date: 1979-01-25
Also published as: DE2402217A1; JPS4993589A; JPS5714833B2; US3901762A; FR2213980B1; GB1444072A; IT1044732B; FR2213980A1; DE2402217C3

Description

Der Proteinbedarf für die ständig anwachsende Weltbevölkerung kann in naher Zukunft nicht mehr allein aus natürlichen Quellen gedeckt werden. Für das Jahr 2000 wird der Fehlbetrag auf etwa 18 000 000 Tonnen geschätzt. Es wurden daher verschiedene Versuche durchgeführt, Proteine aus Erdölprodukten, insbesondere aus η-Paraffinen, auf mikrobiologischem Wege herzustellen. Aus bekannten Gründen ist aber Methanol, das sich aus Erdöl billig in großtechnischem Maßstab herstellen läßt, bei der fermentativen Herstelllung von Proteinmaterial den genannten Petroleumprodukten vorzuziehen. Es sind verschiedene Methanol verwertende Mikroorganismen bekannt; vgl. Advance in Microbial Physiology, Bd. 7 (1972), S. 119 sowie JP-AS 23 393/1972 und JP-OS 14 389/1972.

Aus der DE-OS 20 59 277 ist bereits ein mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung von hochwertigem Protein unter Verwendung bestimmter Pseudomonas- und Corynebacterium-Stämme bekannt. Die Wachstumsgeschwindigkeiten betragen jedoch nur 3,0 bis 6,0 g/Liter/Stunde.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung von Proteinmaterial durch Züchtung von Methanol verwertenden Mikroorganismen in einem Methanol als Kohlenstoffquelle enthaltenden wäßrigen Nährmedium und Abtrennen des angereicherten Proteinmaterials zu schaffen, bei dem Biomasse mit hohem Proteingehalt anfällt, und das mit hoher Wachstumsgesdiwindigkeit und Produktivität (DX) verläuft. Diese Aufgabe wird gemäß dem Kennzeichen des Anspruch 1 gelöst.

Im erfindungsgemäßen Verfahren werden als Mikroorganismen Pseudomonas utilis Nr. 22 FERM-P 1690, Pseudomonas utilis Nr. 133 FERM-P 1691, Pseudomonas inaudita Nr. 200 FERM-P 1692, Pseudomonas inaudita Nr. 300 FERM-P 1693 oder Pseudomonas inaudita Nr. 400 FERM-P 1694 eingesetzt. Die erstgenannten Nummern beziehen sich auf die Sammlung des Takarazuka-Forschungslaboratoriums der Sumitomo Chemical Company, während die letztgenannten Nummern Hinterlegungsnummern beim Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, in Chiba-shi, Chiba-ken, Japan, sitld.

Die taxonomischen Eigenschaften der Stämme Pseudomonas utilis Nr. 22 (=FERM-P 1690) und Nr. 133 ( = FHRM-P 1691) sind in Tabelle I zusammengestellt Das Nährmedium hat die folgende Zusammensetzung: 5 s bis 10 g Diammoniumhydrogenphosphat 2 g Kaliumchlorid, 0,2 g Magnesiumsulfat-heptahydrat, 0,1 g Natriumchlorid, 0,02 g Eisen(II)-sulfat 0,01 g Mangansulfat, g Kobaltnitrat 0,01 g Calciumsulfat 0,01 g Kupfersulfat 0,01 g Zinksulfat 1 Liter Wasser und 10 bis 20 ml

ίο Methanol. Die Pigmentbildung wird an King-Medien A und B untersucht Die Verwertung von Kohlenstoffcuellen wird unter Verwendung eines Hugh-Leifson-Mediums und eines Mediums der vorgenannten Zusammensetzung, das anstelle von Methanol 0,5 Gewichtsprozent

π der zu untersuchenden Kohlenstoffquelle enthält untersucht, wobei das Fehlen eines sichtbaren Wachstums des Mikroorganismus nach Htägiger Züchtung bei 30⁰C als negativ gewertet wird.

Tabelle I Morphologische Eigenschaften Nach 24- bis 48stündiger Züchtung bei 30⁰C auf

>5 einem Agar-Schrägröhrchen (2 Prozent Methanol und die vorstehend genannten anorganischen Salze) lassen sich Stäbchen von 0,5 χ 1,0-1,5 μ Größe beobachten.

Die Stäbchen sind beweglich und weisen polare Geißeln

auf. Sie sind gram-negativ. Sporen- und Kapselbildung

jo treten nicht auf.

Züchtungseigenschaften

Kolonien auf einem 2 Prozent Methanol und die anorganischen Salze enthaltenden Nährmedium: rund, ή glatt und flach, glattrandig, flach konvex, gelblichweiß, glänzend durchscheinend.

Kolonien auf Bouillon-Agar: schwaches Wachstum, rund, glatt und flach, feucht, gelblichweiß, glänzend. Agar-Schrägröhrchen mit 2 Prozent Methanol und den anorganischen Salzen: mäßiges Wachstum, fadenartig, gelblichweiß, glänzend, undurchsichtig.

2 Prozent Methanol enthaltendes Bouillon-Agar-Schrägröhrchen gutes Wachstum, fadenartig, gelblichweiß, undurchsichtig, keine Veränderung des Nährmedi- ums.

Bouillon-Agar-Schrägröhrchen: mäßiges Wachstum. Bouillon: gutes Wachstum, leicht trüb.

Physiologische Eigenschaften

-μ Wachstumstemperatur: 20 bis 35°C,

optimale Wachstumtemperatur: 25 bis 3O⁰C.

Wachstum bei pH-Wert: 5,0 bis 9,0,

kein Wachstum bei 4,0.

Sauerstoffbedarf: aerob. v. Lackmus-Milch: keine Veränderung oder

leicht alkalisch.

BCP-Milch: keine Veränderung oder

leicht alkalisch.

Gelatine: keine Verflüssigung. bi) Schwefelwasserstoff: keine Bildung.

Indol: keine Bildung. Stärke: keine Hydrolyse. Nitrat: wird reduziert.

Nitrat-Respiration: schwach. bi Cataiase-Reaktion: positiv.

Oxidase-Reaktion: positiv. Urease-Reaktion: negativ. Pigment: keine Bildung.

Voges-Proskauer-Test: negativ (kein Methanolzusatz).

Methylrot-Test: negativ (kein Methanolzusatz). Citratverwertung: negativ. p-Hydroxybenzoatverwertung: negativ. Verwertung von Kohlenstoff quellen: gute Methanolverwertung; folgende Kohlenstoffquellen werden im allgemeinen nicht verwertet: Äthanol, Propanol, Butanol, Ameisensäure, Essigsäure, Oxalsäure, Brenztraubensäure, Bernsteinsäure, Monomethylamin, Glucose, Fructose, Arabinose, Xylose, Mannose, Galactose, Maltose, Saccharose, Lactose, Trehalose, Sorbit, Mannit, Inosit, Glycerin und Stärke.

Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika: empfindlich gegen Penicillin, Streptomycin, Tetracyclin, Chloramphenicol, Erythromycin und Sulfaisoxa^ol; nicht empfindlich gegen Oleandomycin.

Herkunft Aus Bodenproben isoliert.

Nach Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, 7. Auflage, lassen sich die genannten Mikroorganismen in die Gattung Pseudomonas einordnen, da sie gram-negativ, aerobe, bewegliche Stäbchen mit polaren Geißeln sind und nur Methanol als Kohlenstoffquelle verwerten. Sie können jedoch nicht einer der dort beschriebenen Arten zugeordnet werden. Außerdem bilden die vorgenannten Mikroorganismen kein rotes Pigment, was für die meisten der bekannten, Methanol verwertenden Mikroorganismen charakteristisch ist. Unter den verschiedenenen Arten der Gattung Pseudomonas scheinen sie der Art Pseudomonas insueta (vgl. JP-AS 25 273/1970) und Pseudomonas methylotropha (JP-OS 14 389/1972) relativ ähnlich zu sein. Von Pseudomonas insueta unterscheiden sich jedoch die vorgenannten, erfindungsgemäß verwendeten Stämme in der Färbung ihrer Kolonien und im Wachstum auf einem Methanol und anorganische Salze enthaltenden Agar-Medium. Von Pseudomonas methylotropha unterscheiden sie sich in der Färbung der Kolonien, der Indolbildung, der Wachstumstemperatur und der Verwertung von Kohlenstoffquellen. Die genannten Stämme werden daher einer neuen Art zugeordnet und als Pseudomonas utilis bezeichnet.

Die taxonomischen Eigenschaften von Pseudomonas inaudita Nr. 200 ( = FERM-P 1692), 300 ( = FERM-P 1693) und Nr. 400 ( = FERM-P 1694) sind in Tabelle II zusammengestellt. In Bezug auf die Zusammensetzung des Nährmediums, die Pigmentbildung und die Verwertung von Kohlenstoffquellen wird auf Tabelle I verwiesen.

Tabellen Morphologische Eigenschaften

Nach 24- bis 48stündiger Züchtung bei 30⁰C auf einem 2 Prozent Methanol und die genannten anorganischen Salze enthaltenden Agar-Schrägröhrchen lassen sich Stäbchen von 0,4 bis 0,6 μ χ 1,0 bis 1,5 μ Größe beobachten. Sie sind beweglich und weisen polare Geißeln auf. Ferner sind sie gram-negativ. Sporen- und Kapselbildung werden nicht beobachtet.

Züchtungseigenschaften

Kolonien auf einem 2 Prozent Methanol und anorganische Salze enthaltenden Agar-Medium: rund, flach und glatt, glattrandig, flach konvex, milchig weiß, glänzend, durchscheinend.

Kolonien auf Bouillon-Agar: leichtes Wachstum in Form von Flecken, die nach einigen Tagen verschwinden.

2 Prozent Methanol und die anorganischen Salze enthaltendes Agar-Schrägröhrchen: gutes Wachstum, fadenförmig, milchigweiß, glänzend, durchscheinend. Bouillon-Agar-Schrägröhrchen: sehr geringes Wachstum. Bouillon: kein Wachstum.

Physiologische Eigenschaften Wachstumstemperatur: Optimum 25 bis 35° C;

sehr geringes oder kein Wachstum bei 42° C.

Wachstum bei pH-Wert: 5,0 bis 9,0; kein Wachstum bei 4,0.

Sauerstoffbedarf: aerob. Lackmus-Milch: keine Veränderung oder

leicht alkalisch.

BCP-Milch: keine Veränderung oder leicht alkalisch.

Gelatine: keine Verflüssigung. Schwefelwasserstoff: keine Bildung. Indol: keine Bildung.

Stärke: keine Hydrolyse. Nitrat: wird reduziert.

Nitrat-Respiration: positiv. Ca talase-Reaktion: positiv. Oxidase-Reaktion: positiv.

Urease-Roaktion: positiv, Pigment: keine Bildung.

Voges-Proskauer-Test: negativ

(kein Methanolzusatz).

Methylrot-Test: negativ

(kein Methanolzusatz). !■; Citratverwertung: negativ.

p-Hydroxybenzoatverwertung: schwach positiv. Verwertung von Kohlenstoffquellen: gute Verwertung von

Methanol; im allgemeinen keine Verwertung von

Äthanol, Propanol, Butanol, Ameisensäure, Essigsäure, Oxalsäure, Brenztraubensäure, Bernsteinsäure, Monomethylamin, Glucose, Fructose, Arabinose, Xylose,

Mannose, Galactose, Maltose, Saccharose, Lactose, Trehalose, Sorbit, Mannit Inosit, Glycerin und Stärke.

Empfindlichkeit gegenüber Antibiotika: empfindlich gegen Streptomycin, Tetracyclin, Chloramphenicol,

Erythromycin und Sulfaisoxazol; nicht empfindlich

gegen Penicillin und Oleandomycin.

Herkunft Aus Bodenproben isoliert.

Unter Berücksichtigung von Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, 7 Auflage, lassen sich die genannten Mikroorganismen der Gattung Pseudomo nas zuordnen, da sie gram-negative, aerobe, bewegliche Stäbchen mit polaren Geißeln sind und nur Methanol als Kohlenstoffquelle verwerten. Sie können jedoch nicht einer der dort beschriebenen Arten zugeordnet werden. Außerdem bilden sie kein rotes Pigment, wie die

bo meisten der bekannten, Methanol verwertenden Mikroorganismen. Unter den verschiedenenen Arten der Gattung Pseudomorias scheinen sie den vorgenannten Arten Pseudomonas insueta und Pseudomonas methylotropha relativ ähnlich zu sein. Von Pseudomonas insueta unterscheiden sie sich jedoch in der Färbung der Kolonien, dem Wachstum auf Methanol und anorganische Salze enthaltendem Agar und der Verwertung von Kühlenstuffqucücn. Von Pseüdurnönas meihyiGiropha

unterscheiden sie sich in der Indolbildung, dem Verhalten gegenüber Lackmus-Milch und der Verwertung von Kohlenstoffquellen. Außerdem sind die vorgenannten Stämme der Art Methylomonas albus (vgL Journal of General Microbiology, Bd. 61 [1970], S. 205) ähnlich. Durch den großen Unterschied der entsprechenden Mindestverdopplungszeiten ergibt sich jedoch eine klare Unterscheidungsmöglichkeit Die vorgenannten, erfindungsgemäß verwendeten Stämme werden als neue Art erachtet und als Pseudomonas inaudita bezeichnet

Im -srfindungsgemäßen Verfahren können wäßrige Nährmedien, die Methanol als Kohlenstoffquelle und außerdem Stickstoffquellen und anorganische Salze und vorzugsweise wachstumsfördernde Substanzen, wie Vitamine, enthalten, verwendet werden. Da Methanoi in gewissem Umfang bactericid wirkt d. h. eine antibiotische Wirkung entfaltet, muß auf die Konzentration des Methanols im Nährmedium die entsprechende Sorgfalt gelegt werden. Beispielsweise wird bei absatzweiser Züchtung die Anfangskonzentration unter etwa 5 Gewichtsprozent gehalten. Mit fortschreitender Züchtung kann das Methanol von Zeit zu Zeit ergänzt werden. Bei einer kontinuierlichen Züchtung wird die Methanolkonzentration in Abhängigkeit von der Bakterienkonzentration, der Konzentration der anderen Nährstoffquellen und dem Verdünnungsgrad festgesetzt.

Beispiele für Stickstoffquellen sind anorganische Ammoniumsalze, z. B. Ammoniumphosphat, Ammoni- jü umsulfat, Ammoniumchlorid und Ammoniumnitrat sowie Harnstoff. Diese Stickstoffquellen wurden im allgemeinen in Konzentrationen von etwa 0,1 bis 3 Gewichtsprozent verwendet. Wird zur Einstellung des pH-Wertes Ammoniak verwendet, so kann es gleichzei- J5 tig als Stickstoffquelle dienen. Beispiele für anorganische Salze sind Salze von Phosphor, Kalium, Magnesium, Eisen. Natrium, Calcium, Mangan, Kobalt, Zink, Molybdän und Kupfer. Gegebenenfalls kann das Nährmedium auch weitere synthetische oder natürliche organische Substanzen, wie Vitamine, Aminosäuren, Maisquellflüssigkeit und Hefeextrakt enthalten.

Die Züchtung wird vorzugsweise bei Temperaturen von etwa 20 bis 40°C und in einem pH-Bereich von etwa 5 bis 9 durchgeführt.

Die Züchtung kann unter Schütteln oder Belüftung absatzweise oder kontinuierlich durchgeführt werden. Bei der absatzweisen Züchtung wird das größte Mikroorganismenwachstum innerhalb von 12 bis 24 Stunden nach Züchtungsbeginn erreicht. Im Verlauf der absatzweisen Züchtung kann während der logarithmischen Wachstumsphase des Mikroorganismus auf ein kontinuierliches Verfahren mit einem Verdünnungsgrad von etwa 0,05 bis 0,6 umgestellt werden.

Nach beeendeter Züchtung wird die Zellmasse nach üblichen Verfahren, wie Zentrifugieren, Filtrieren oder Fällen, aus der Gärmaische gewonnen. Gegebenenfalls kann die Zellmasse mit Wasser gewaschen und/oder zur Extraktion der Proteine weiter behandelt werden.

Die erhaltene Zellmasse kann sterilisiert und anschlie- bo ßend nach üblichen Verfahren getrocknet werden, beispielsweise durch Trocknen unter vermindertem Druck, Sprühtrocknen oder Lyophilisieren.

Die feuchte oder trockene Zellmasse kann beispielsweise als Futterzusatz verwendet werden. Ferner kann (>■> die Zellmasse auch für alle weiteren üblichen Verwendungszwecke für Proteinmaterialien eingesetzt werden.

Die Beispiele erläutern die Erfindung. Sofern nichts anders angegeben, beziehen sich die Prozentangaben auf das Gewicht

Beispiel 1

3 g Diammoniumhydrogenphosphat, 3 g Kaliumchlorid, 0,4 g Magnesiumsulfat 0.2 g Natriumchlorid, 0,04 g Eisen(II)-sulfat 0,02 g Mangansulfat 0,01 g Calciumchlorid, 0,01 g Kobaltnitrat, 0,01 g Kupfersulfat und 0,01 g Zinksulfat werden in Wasser gelöst und auf ein Volumen von 1 Liter gebracht bie erhaltene Lösung wird in einen 2 Liter fassenden Gtesfermenter gegeben, sterilisiert und bis zu einer Konzentration von 1 Prozent (Gewicht/Volumen) mit vorher sterilisiertem Methanol versetzt Das erhaltene Nährmedium wird mit Pseudomonas utilis Nr. 22 inokuliert und anschließend 16 Stunden bei 30° C unter Einhaltung einer Rührgeschwindigkeit von 600 U/min und einer Belüftungsgeschwindigkeit von 1 Liter/Liter/min gezüchtet, wobei der pH-Wert mit 5prozentiger Ammoniaklösung auf 7,0 gehalten wird. Da mit fortschreitendem Wachstum des Mikroorganismus Methanol verbraucht wird, werden von Zeit zu Zeit jeweils 5 g Methanol zugesetzt Die gesamte Methanolzugabe bis zur Beendigung der Züchtung beträgt 30 g. Die Zellmasse wird von der Gärmaische abzentrifugiert, sterilisiert und lyophilisiert. Man erhält 12,0 g getrocknete Zeümasse pro 1 Liter Nährmedium, was einer Ausbeute von 40 Prozent, bezogen auf die zugesetzte Methanolmenge beträgt. Die Aminosäurezusammensetzung ist in Tabelle III angegeben.

Beispiel 2

Gemäß Beispiel 1 wird Pseudomonas utilis Nr. 133 gezüchtet. Man erhält 11,4 g getrocknete Zellmasse pro 1 Liter Nährmedium, was einer Ausbeute von 38 Prozent, bezogen auf die eingesetzte Methanolmenge entspricht. Der Rohproteingehalt (N χ 6,25) in den Zellen beträgt 73,6 Prozent. Die Aminosäurezusammensetzung ist in Tabelle 111 aufgeführt.

Beispiel 3

Gemäß Beispiel 1 wird Pseudomonas inaudita Nr. 200 gezüchtet. Man erhält 12,5 g getrocknete Zellmasse pro 1 Liter Nährmedium, was einer Ausbeute von 42 Prozent, bezogen auf die eingesetzte Methanolmenge entspricht. Der Rohproteingehalt (N χ 6,25) in den Zellen beträgt 78,1 Prozent.

Beispiel 4

Gemäß Beispiel 1 wird Pseudomonas inaudita Nr. 300 gezüchtet. Man erhält 12,3 g getrocknete Zellmasse pro 1 Liter Nährmedium, was einer Ausbeute von 41 Prozent, bezogen auf die eingesetzte Methanolmenge entspricht. Der Rohproteingehalt (N χ 6,25) in den Zellen beträgt 73,8 Prozent.

Beispiel 5

Gemäß Beispiel 1 wird Pseudomonas inaudita Nr. 400 gezüchtet. Man erhält 11,8 g getrocknete Zellmasse pro 1 Liter Nährmedium, was einer Ausbeute von 39 Prozent, bezogen auf die eingesetzte Methanolmenge entspricht. Der Rohproteingehalt (N χ 6,25) in den Zellen beträgt 75,0 Prozent.

Beispiel 6

3 g Diammoniumhydrogenphosphat, I g Kaliumchlorid, 0,5 g Ammoniumsulfat, 0,5 g Magnesiumsulfat 0,25 g Eisen(II)-sulfat, 0,1 g Natriumchlorid, 0,01 g Mangansul-

fat, 0,01 g Calciumchlorid, 0,01 g Kobaltnitrat, 0,01 g Kupfersulfat und 0,01 g Zinksulfat werden in Wasser gelöst und auf ein Volumen von 1 Liter aufgefüllt. Diese Lösung wird in einen 2 Liter fassenden Glasfermenter gegeben, sterilisiert und bis zu einer Konzentration von 2 Prozent (Gewicht/Volumen) mit vorher sterilisiertem Methanol versetzt. Das erhaltene Nährmedium wird mit einer Anzuchtkultur von Pseudomonas inaudita Nr. 200 (hergestellt durch lOstündiges Züchten unter Schütteln von 10 Prozent) inokuliert und anschließend unter Rühren und Belüften bei 34° C gezüchtet. Dabei wird die Sauerstoffkonzentration im Nährmedium über 0,5 ppm und der pH-Wert durch Zusatz von lOprozentiger Ammoniaklösung auf 7,0 gehalten. Sobald das Methanol im Nährmedium verbraucht ist, d. h. wenn sich gaschrofnätögraphiseh praktisch kein iVleihänui im Nährmedium nachweisen läßt, wird Methanol bis zu einer Konzentration von 0,2 Prozent (Gewicht/Volumen) zugegeben. Ferner wird während der Züchtung von Zeit zu Zeit portionsweise Magnesiumsulfat und Eisen(II)-sulfat zugegeben, wobei die Gesamtmengen dieser Salze bis zur Beendigung der Züchtung 1,5 bzw. 0,5 g betragen. Nach 16 Stunden wird die Züchtung unterbrochen. Die Gärmaische wird gemäß Beispiel 1 aufgearbeitet. Man erhält 35,5 g getrocknete Zellmasse 2^r> pro 1 Liter Gärmaische, was einer Ausbeute von 36 Prozent, bezogen auf die eingesetzte Methanolmenge, entspricht.

Beispiel 7 _j(|

Gemäß Beispiel 6 wird Pseudomonas inaudita Nr. 200 absatzweise gezüchtet. Wenn die Konzentration der Zellen (X) im Nährmedium 23 g/Liter erreicht, wird das absatzweise Verfahren auf ein kontinuierliches Verfahren umgestellt, wobei ein 5,5 Prozent (Volumen/Volu- y-> men) Methanol enthaltendes Nährmedium der folgenden Zusammensetzung kontinuierlich mit einer Verdünnung (D) von 0,3 zugesetzt wird: 4 ml Phosphorsäure, 2 g Kaliumchlorid, 0,5 g Ammoniumsulfat, 2 g Magnesiumsulfat, 0,2 g Natriumchlorid, 0,5 g Eisen(II)-sulfat, 0,01 g Mangansulfat, 0,01 g Kobaltsulfat, 0,01 g Kaliumsulfat, 0,01 g Kupfersulfat, 0,01 g Zinksulfat und 55 ml Methanol, mit Wasser auf 1 Liter aufgefüllt. Entsprechend der Menge des zugesetzten Nährmediums wird kontinuierlich Gärmaische entnommen, wobei der pH-Wert mit lOprozentiger Ammoniaklösung bei 6,8 bis 7,2 gehalten wird. Bei dieser kontinuierlichen Züchtung ergibt sich eine Produktivität von DX = 6,9 g/Liter/ Stunde. Der Rohproteingehalt in der getrockneten Zellmasse beträgt 78,5 Prozent. ->o

Beispiel 8

Gemäß Beispiel 7 wird kontinuierlich mit einer Methanolkonzentration (d. h. dem Höchstwert) von 83 Prozent (Volumen/Volumen) und einer Verdünnung (D) von 0,3 gezüchtet Die Zellkonzentration (X) beträgt 25,5 g/Liter und die Ausbeute, bezogen auf Methanol, 41 Prozent Die erhaltene getrocknete Zellmasse enthält 78,5 Prozent Rohprotein, 6,12 Prozent rohes Fett 3,18 Prozent rohes faserartiges Material, 10 Prozent rohe Asche und 4,85 Prozent Wasser. Die Aminosäurezusammensetzung ist in Tabelle III aufgeführt DX=7,65 g/Liter/Stunde.

Beispiel 9

Gemäß Beispiel 7 wird Pseudomonas inaudita Nr. 300 gezüchtet Die Züchtung wird zuerst absatzweise und anschließend kontinuierlich (D=03, X=21 g/Liter)

55 durchgeführt, wobei eine getrocknete Zellmasse mit einem Rohproteingehalt von 78,2 Prozent erhalten wird. Die Aminosäurezusammensetzung ist in Tabelle III aufgeführt. DX = 6,3 g/Liter/Stunde.

Beispiel 10

Gemäß Beispiel 7 wird Pseudomonas inaudita Nr. 400 zuerst absatzweise und anschließend kontinuierlich (D = 0,3, X = 20,5 g/Liter) gezüchtet, wobei eine Zellmasse mit einem Rohproteingehalt von 80,1 Prozent erhalten wird. DX = 6,15 g/Liter/Stunde. Die Aminosäurezusammensetzung ist in Tabelle III aufgeführt.

Tabelle III

Beispie!
1 2

Tryptophan

Lysin

Histidin

Arginin

Asparaginsäure

Threonin

Serin

Glutaminsäure

Prolin

Glycin

Alanin

Cystin

Valin

Methionin

Isoleucin

Leucin

Tyrosin

Phenylalanin

1,31	1,65	1,56	11
6,25	6,43	5,1
2,10	2,51	1,36
4,52	4,88	4,6
9,31	9,57	10,72
4,91	4,58	4,02
4,72	3,62	3,02
11,32	10,27	11,86
4,01	3,55	3,50
4,52	5,57	6,58
7,89	6,70	8,05
1,1	1,27	1,42
5,40	5,32	5,38
1,78	2,21	1,97
4,72	4,32	6,69
6,91	6,93	6,02
3,4	2,92	2,60
4,50	3,64	3,38
Beispiel

1,43 5,22 1,42 5,01

10,86 3,96 3,52

11,97 3,23 5,97 8,22 1,62 5,40 1,86 5,77 6,31 2,56 3,42

1,62 5,35 1,51 4,23 9,86 4,10 4,00 11,87 3,22 5,92 8,31 1,58 5,72 1,99 5,82 6,11 2,86 3,47

40 drei Wochen alte Mäuse vom ICR-Stamm werden in zwei Gruppen, d. h. in eine Testgruppe und eine Kontrollgruppe eingeteilt. Beide Gruppen erhalten 5 Tage lang eine Diät, die aus 38 Prozent Maisstärke, 25 Prozent vitaminfreies Casein, 10 Prozent «-Weizenstärke, 8 Prozent pulverisiertem Filterpapier, 6 Prozent Linolöl, 6 Prozent anorganischen Salzen, 5 Prozent granuliertem Zucker und 2 Prozent Vitaminen besteht Anschließend erhält die Kontrollgruppe weiterhin die vorgenannte Diät während die Testgruppe mit einer Diät weiter gefüttert wird, die anstelle von 25 Prozent vitaminfreiem Casein nur 10 Prozent vitaminfreies Casein und zusätzlich 15 Prozent der nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten getrockneten Zellmasse von Pseudomonas inaudita Nr. 200 enthält Nach 2wöchgiger Fütterung wird die Gewichtezunahme der Mäuse festgestellt Die Ergebnisse sind in Tabelle IV aufgeführt

Tabelle IV

60

Tage nach Durchschnittl. Korpergewichts-

Züchtungsbeginn zunähme (g)

Kontrollgruppe Testgruppe

65 18,5
20,4
23,8

18,3 20,5 24,0

Fortsetzung

Tage nach Züchtungsbeginn

Durchschnittl. Körpergewichtszunahme (g)

Kontrollgruppe Testgruppe

8	27,3	27,2
12	29,8	29,8
14	30,7	30,8

Aus den vorstehenden Ergebnissen geht hervor, daß sich zwischen der Testgruppe und der Kontrollgruppe im wesentlichen keine Unterschiede in der Körpergewichtszunahme ergeben. Außerdem zeigen die beiden Gruppen keine Unterschiede in bezug auf Glanz der Haare und den Zustand der Haut. Nach der Fütterung werden die Mäuse der Testgruppe seziert. Es lassen sich keine organischen Veränderungen feststellen.

Claims

Patentansprüche:

1. Verfahren zur Herstellung von Proteinmaterial durch Züchtung von Methanol verwertenden Mikroorganismen in einem Methanol als Kohlenstoffquelle enthaltenden wäßrigen Nährmedium und Abtrennen des angereicherten Proteinmaterials, dadurch gekennzeichnet, daß man als Mikroorganismen Pseudomonas utilis FERM-P 1690, Pseudomonas utilis FERM-P 1691, Pseudomonas inaudita FERM-P 1692, Pseudomonas inaudita FERM-P 1693 oder Pseudomonas inaudita FERM-P 1694 verwendet

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Nährmedium verwendet, das zusätzlich ein wachstumförderndes Mittel enthält.

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Anfangskonzentration des Methanols im Nährmedium unter etwa 5 Gewichtsprozent liegt.