DE2233523A1 - METHOD OF BREEDING MICRO-ORGANISMS AND SUBSEQUENT PROTEIN-RICH BIOLOGICAL MATERIAL - Google Patents

Description

500-19.Q12P 7. 7. 1972500-19.Q12P 7. 7. 1972

1. Agence nationale de valorisation de la recherche 92 - Pa r i s Defense (Prankreich)1.Agence nationale de valorisation de la recherche 92 - Pari s Defense (France)

2. Azote et Produits Chimiques S,A,, Toulouse (Prankreich)2. Azote et Produits Chimiques S, A ,, Toulouse (France)

Verfahren zur Züchtung von iviikroorganismen und danach erhaltenes pro.teinreich.es -biologisches MaterialMethod of growing microorganisms and thereafter Preserved pro.teinreich.es biological material

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung, eines probeinreichen Γ ro du kt es durch Züchtung von Mikroorganismen. Das nach diesem Verfahren erhaltene biologische !Material bzv/, die "Moniasse" ist als Zusatz für Tierfutter brauchbar,The invention relates to a method for producing a sample submitted Γ ro du kt it by cultivating microorganisms. The biological material obtained by this process or the "Moniasse" can be used as an additive for animal feed,

Das erfindungsgemäße Verfahren besteht in der Kultur bzw. Züchtung von isolierten Stämmen, die zu der Gesamtheit der im .-Mageninhalt dea Kaninchens lokalisierten und sich bei pH 2 entwickelnden Septomyzeten gehören.The method according to the invention consists in the culture or breeding of isolated strains belonging to the totality of the im .-Localized stomach contents of the rabbit and developed at pH 2 Septomycetes belong.

Diene Septomyzeten werden durch Entnahme von Mageninhalt vom Kaninchen mit HLiCe einer Sonde oder direkt nach ÖffnenThe septomycetes are produced by removing the contents of the stomach from rabbits with HLiCe a probe or directly after opening

iiölleiiölle

des Magens isoliert,, Ausgehend von dieser Entnahme erfolgt eine punktförmige oder streifenförmige Aussaat auf atandard-G-elosemilieu. Sobald die ersten Pilzkoloniebildiingen in Erscheinung treten, erfolgt eine Rückaussaat zur 'Erzielung einer reinen Kultur. Ks werden dann je'z/eils nur die Stumme behalten, die wich auf einem Milieu bei pH 2 entwickeln.of the stomach isolated, starting from this collection, a punctiform or strip-shaped sowing is carried out on an atstandard G-elose environment. As soon as the first fungal colonies appear, they are re-sown to achieve a pure culture. In each case, only those dumbs are kept that develop in an environment at pH 2.

Die von den Erfindern so isolierten Sepfcomyseten wurden beim Museum d'Histoire Naturelle von Paris unter den folgenden Nummern hinterlegt:The Sepfcomysetes so isolated by the inventors were at the Museum d'Histoire Naturelle of Paris under the following Numbers stored:

2037: Oidiodendron griseum, 2066: Penlcillium cyelopium, 2067' Penicillium lilacinum, 2068: Fenicillium canesceris,. 2069: Penicillium crustosum.2037: Oidiodendron griseum , 2066: Penicillium cyelopium , 2067 ' Penicillium lilacinum , 2068: Fenicillium canesceris,. 2069: Penicillium crustosu m.

Die angegebenen Kümmern entsprechen den Mummern der Stämme im Katalog der Kollektion. Diese Stämme v/urden von den .Erfindern mit Oidiodendron LOOl und Penicillium L002 bis L005 bezeichnet. The specified care corresponds to the numbers of the trunks in the catalog of the collection. These strains were referred to by the inventors as Oidiodendron LOO1 and Penicillium L002 to L005.

Das OLdiodendron griseim ist eine Hyphomyzete, die von Robak untersucht wurde. Das Oidiodendron griseum (2037)"-Stainm LOOl - besitzt die folgenden morphologischen Eigenschaften: Die Kulturen auf "Agar-üifko" in aufrechten Rohren aeigen sich in Form eines lockeren J?Li.u'.>is von grauer farbe, i>ie Kolonien oind in ihrem Zentrum gewölbt; diu Hyphen von ?.,bix Durchmesner entwickeln sich an der Oberfläche des festen oubstrntu; in flüssigem Liilieu bilden sie mehr oder wenige)r miteinander verbundene Kissen, Die Hyphen tragen Γαιϋfc-uhcoiiporcm, die auf flUssigom KulturmilLeni auf liitratbasis "Korämion" (coremLe.;) bilden können. Die Ulfb-tixosporen stehen senkrecht nach oben und unterteilen sich dabei; sie sind 40 bis IOC) i\ lang.The OLdiodendron griseim is a hyphomycete that was studied by Robak. The Oidiodendron gri seum (2037) "- Stainm LOOl - has the following morphological properties: The cultures on" Agar-üifko "in upright tubes appear in the form of a loose J? Li.u '.> Is gray in color, i > The colonies oind arched in their center; diu hyphae of ?., bix diameters develop on the surface of the solid oubstrntu; in liquid Liilieu they form more or less) r interconnected cushions, the hyphae carry Γαιϋfc-uhcoiiporcm, which on liquid KulturmilLeni can form on liitratbasis "Korämion" (coremLe .;) The Ulfb-tixosporen vertically upwards and is divided thereby;., they are 40 to IOC) i \ long.

209884/1244209884/1244

Am Ende unterteilen sie sich stets ausgehend vom Ende transversal in einer großen Vielzahl von kurzen Abschnitten, die sich rasch abrunden: Es kommt zur Bildung von Arthrosporen mit einem Durchmesser von 2,6 Ju. ■At the end, they are always divided transversely starting from the end in a large number of short sections that quickly round off: Arthrospores are formed with a Diameter of 2.6 ju. ■

Die Ärthrosporen sind stets einzellig und erscheinen in Ketten am Ende der hellgrauen Exosporen. Die Konidien können sich direkt ausgehend von vegetativen Hyphen ohne Bildung von Exosporen bilden, insbesondere auf dem Magensaft von Kaninchen in Gegenwart von 2 fo G-lucose.The Ärthrosporen are always unicellular and appear in chains at the end of the light gray exospores. The conidia can form directly from vegetative hyphae without the formation of exospores, especially on the gastric juice of rabbits in the presence of 2 % G-glucose.

Der Stamm L002 (Penicillium aus der Reihe cyclopium WESTL) besitzt folgende morphologische Kennzeichen:The strain L002 ( Penicillium from the cyclopium WESTL series) has the following morphological characteristics:

Die Kulturen (auf "Agar-Difko" in aufrechten Rohren) von blaugrüner Par be (Farbe ITr. 359 der Farbskala von KLINSIEK und VALETTE) färben sich in den beiden ersten Kulturtagen; die Oberfläche der Kultur ist feingranulös mit gewölbtem Zentrum; die Kulturen können auf synthetischem I.rilieu braun-organge werden. Die Hyphen können 6 μ Durchmesser erreichen; die Büschel oder Pinsel haben eine Länge von 50 bis 60 μ und sind asymmetrisch angeordnet. Die kugelförmigen oder ellipsoidal geformten Konidien haben einen Durchmesser zwischen 3 und 6 n.The cultures (on "Agar-Difko" in upright tubes) of blue-green Parbe (color ITr. 359 of the KLINSIEK and VALETTE color scale) change color in the first two days of culture; the surface of the culture is fine-grained with a domed center; the cultures can turn brown-orange on a synthetic medium. The hyphae can reach 6 μ in diameter; the tufts or brushes have a length of 50 to 60 μ and are arranged asymmetrically. The spherical or ellipsoidal conidia have a diameter between 3 and 6 n.

Diese bei pH 2 isolierten Stämme haben den Vorteil sich in sehr saurem Milieu entwickeln zu können. So können sie sich beispielsweise selbst bei einem pH-Wert von 1,7 bis 5 entwickeln. Bei der Kultur in saurem IJedium kann die Sterilisation des Kulturmilieus auf ein Minimum reduziert werden.These strains isolated at pH 2 have the advantage to be able to develop in a very acidic environment. For example, they can develop even at a pH of 1.7 to 5. When culturing in acidic medium, sterilization of the culture medium can be achieved can be reduced to a minimum.

Nach einem Merkmal der Erfindung wird die Septomyzete auf einem Hähr-iviedium kultiviert, das zumindest eine QuelleAccording to a feature of the invention, the septomycete is cultivated on a Hähr-iviedium which has at least one source

_BAD OBSGlNAL 209884/12U _B AD OBSGlNAL 209884 / 12U

für Stickstoff (Stickstoffverbindung) und zumindest ein Kohlehydrat aufweist. Das Nährmilieu enthält ebenfalls mineralische Elemente bzw. Zusätze wie PO.^f", K⁺, Mg⁺⁺ und Oligoelemente (Pe, Zn, Mn). Man kann Vitamine zugeben, aber ihre Anwesenheit ist von geringem Einfluß auf die Kultur.for nitrogen (nitrogen compound) and at least one carbohydrate. The nutrient environment also contains mineral elements or additives such as PO. ^f ", K ⁺ , Mg ⁺⁺ and oligo elements (Pe, Zn, Mn). Vitamins can be added, but their presence has little influence on the culture.

Der in Gramm Stickstoff pro Liter Kulturmilieu ausgedrückte Gehalt an Nährstickstoff liefernden Verbindungen im Kulturmilieu liegt bei zumindest oder mehr als 1,10 g/l und vorzugsweise zwischen Ί ,16 und 2,34 g/l; unterhalb der unteren Grenze wird kein merklicher Einfluß auf die Entwicklungsgeschwindigkeit des Myzels, beobachtet und oberhalb der oberen Grenze keinerlei deutliche Verbesserung während der Entwicklung des Hyzels festgestellt.The content of nutrient nitrogen-supplying compounds in the culture medium, expressed in grams of nitrogen per liter of culture medium is at least or more than 1.10 g / l and preferably between Ί.16 and 2.34 g / l; below the lower limit no noticeable influence on the rate of development of the mycelium is observed, and above the upper limit none is observed significant improvement noted during the development of the Hyzel.

Als Stickstoffquellen sind die in Tabelle 1 angegebenen Substanzen geeignet; Tabelle 1 zeigt die Substanzmengen, die Stickstoffgehalten der Kultur von 1,16 bis 2,34 g Stickstoff pro Liter Kultur entsprechen.The substances given in Table 1 are suitable as nitrogen sources; Table 1 shows the amounts of substance that The nitrogen content of the culture was 1.16 to 2.34 g of nitrogen per liter of culture.

Tabelle 1Table 1

Die Stickstoffgehalten vonThe nitrogen contents of 6 g/l bzw6 g / l or SS. . 2,54 g/l . 2.54 g / l Substanzsubstance 1,11.1 entsprechendenappropriate gG SubstanzmengenSubstance quantities 2,52.5 gG 5,0 g5.0 g Harnstoffurea 7,47.4 5 g5 g 14,8 g14.8 g AlaninAlanine 5,65.6 SS. 7,2 g7.2 g ArgininArginine 5,55.5 gG 11,1 g .11.1 g. AsparaginsäureAspartic acid 8,48.4 SS. 16,8 g16.8 g KaliumnitratPotassium nitrate 5,55.5 6,6 g6.6 g AmmoniumnitratAmmonium nitrate 5,55.5 11,0 g11.0 g AmmoniumsulfatAmmonium sulfate

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BAD ORfGINALBAD ORfGINAL

- Ss ist klar, daß man mehrere unterschiedliche Stickstoffquellen heranziehen kann, unter der Bedingung, daß der: Gesamtgehalt an Stickstoff zumindest bei 1,10 g pro Liter Kulturmilieu liegt.- It is clear that there are several different nitrogen sources can be used, provided that: Total nitrogen content is at least 1.10 g per liter of culture medium.

Von den verschiedenen Stickstoffquellen hat sich Harnstoff als sehr interessant herausgestellt, da er den Stoffwechsel der erfindungsgemäß angewandten Mikroorganismen begünstigt. ■Urea is one of the various sources of nitrogen proved to be very interesting because it favors the metabolism of the microorganisms used according to the invention. ■

Hach einem weiteren Merkmal der Erfindung wird das im Kähnnilieu enthaltene Kohlehydrat in einer Dosis zwischen 10 und 30 g pro liter Kulturmilieu angewandt. Die beste Ausbeute wird erhalten, wenn die in Gramm Kohlenstoff pro Liter Kulturmilieu ausgedrückte Kohlehydratkonzentration bei 8 g/l liegt, was Konzentrationen- von 20 g/l Glucose, 20 g/l Ribose, 20 g/l Arabinose, 20 g/l Maltose-monohydrat, 18,9 g/l Saccharose, 18,9 g/l wasserfreier Maltose, 18,9 g/l Lactose, 18 g/l Stärke und 18 g/l Cellulose entspricht. Andfere Kohlehydratquellen wie gemahlene Mais- oder Weizenkörner und Melassen können verwendet werden*Hach another feature of the invention is that in Carbohydrate contained in the barge environment in a dose between 10 and 30 g per liter of culture medium applied. The best yield is obtained when the carbohydrate concentration, expressed in grams of carbon per liter of culture medium, is 8 g / l lies what concentrations - from 20 g / l glucose, 20 g / l ribose, 20 g / l arabinose, 20 g / l maltose monohydrate, 18.9 g / l sucrose, 18.9 g / l anhydrous maltose, 18.9 g / l lactose, 18 g / l starch and 18 g / l cellulose. Other sources of carbohydrates such as ground corn or wheat kernels and molasses can be used *

Die Kultur der Septomyzeten erfolgt bei einer Temperatur von 18 bis 25 G₀ Die Produktion von Trockenmaterial ist optimal bei 18 G. Dagegen tritt die Sporenbildung bei 25 G seht zeitig auf.The cultivation of the septomycetes takes place at a temperature of 18 to 25 G _0. The production of dry material is optimal at 18 G. In contrast, the formation of spores at 25 G occurs very early.

Nach der Züchtung wird die "Biomasse" durch das ggf. mit Ausgangsmaterialien gemischte Myzel gebildet. Die Biomasse wird vor der Verwendung vorzugsweise getrocknet.After cultivation, the "biomass" is formed by the mycelium, which may be mixed with starting materials. The biomass is preferably dried before use.

Beispielsweise enthält die durch Kultur von OidiodendronFor example, contains the by culture of Oidiodendron

209884/124 4 BAD209884/124 4 BATH

griseum bei pH 2 mit Harnstoffkonzentrationell von 3 g/l erhaltene Biomasse die folgenden Aminosäuren: Asparaginsäure, Threonin, Serin, Glutaminsäure, Prolin, Citrullin, Glykokoll, Alanin, Valin, Cystein, Methionin, Isoleucin, Leucin, Tyrosin, Phenylalanin, ß-Alanin, Ornithin, Lysin, Histidin, Tryptophan, Arginin.griseum obtained at pH 2 with a urea concentration of 3 g / l Biomass the following amino acids: aspartic acid, threonine, serine, glutamic acid, proline, citrulline, glycocoll, Alanine, valine, cysteine, methionine, isoleucine, leucine, tyrosine, phenylalanine, ß-alanine, ornithine, lysine, histidine, tryptophan, Arginine.

Die Gesamtmenge der am dreisehnten Kulturtage entwickelten Aminosäuren lag bei 38 ^CJ> des gesamten Trockengewichts der Biomasse. Die erhaltene Biomasse kann als Zusatz flir Tierfutter Verwendung finden. Sie ist besonders für Tiere geeignet, die einen einzelnen Magen haben wie Kaninchen und Schwein.The total amount of amino acids developed on the thirteenth day of culture was 38 ^C J> of the total dry weight of the biomass. The biomass obtained can be used as an additive for animal feed. It is particularly suitable for animals that have a single stomach such as rabbits and pigs.

Weitere Merkmale und Vorteile der Erfindung werden anhand der nachfolgenden Beschreibung mehrerer Beispiele fur die Züchtung und die Anwendung der erhaltenen Produkte besser verständlich werden.Further features and advantages of the invention will be based on the following description of several examples of the cultivation and the application of the products obtained can be better understood.

KulturbeispieleCulture examples

Beispiel 1example 1

Kultur von Oidiodendron griseum bei pH 2Culture of Oidiodendron griseum at pH 2

Der Stamm L001 von Oidiodendron griseum, Robak (Wr. 2037 im Katalog der Kollektion des Museum d'Histoire Naturelle von Paris) wurde auf ein Nährmilieu ausgesät mit:The strain L001 of Oidiodendron griseum , Robak (Wr. 2037 in the catalog of the collection of the Museum d'Histoire Naturelle of Paris) was sown on a nutrient medium with:

Wasser " 100 ml Monocalciumphosphat . 0,80 gWater "100 ml monocalcium phosphate. 0.80 g

Monokaliumphosphat 0,15 gMonopotassium phosphate 0.15 g

Magnesiumsulfat: 0,05 gMagnesium sulfate: 0.05 g

Mangansulfat 0,002 gManganese sulfate 0.002 g

Zinksulfat 0,002 gZinc sulfate 0.002 g

Glucose 2 gGlucose 2 g

209884/1244 ^BAD 209884/1244 ^BAD

Der pH-Wert des Hilieus wurde auf.2 eingestellt und dann wurden nach Sterilisieren mit Eau de Javelle aseptisch 0,25 g Harnstoff hinzugegeben.The pH of the hilar was adjusted to 2 and then were aseptically 0.25 g after sterilization with Eau de Javelle Urea added.

Der Stamm wurde bei 24°C unter Ausschluß von Licht in trapezoidalen 3?läschchen (Fläschchen von ^lfJouan"-Typ) kultiviert. Während der Entwicklung des Liyzels bleibt der pH-Wert praktisch konstant und gleich 2.The strain was cultivated at 24 ° C. in the absence of light in trapezoidal 3-fold vials (vials of the ^IF Jouan "type). During the development of the Liycel, the pH value remains practically constant and equal to 2.

Das erhaltene Myzel gestattet eine numerische Angabe des V/achstums.The mycelium obtained allows a numerical indication of the growth.

Das nach 7, 11 und 15 Kulturtagen erhaltene im Trockenschrank bis auf G-ewichtskonstanz getrocknete Myzel wog 29 j 7 mg; 147 mg und 125 mg. Das Maximum des Trockengewichts wird mithin um den 11. Tag herum erhalten.The mycelium obtained after 7, 11 and 15 days of culture, dried to constant weight in a drying cabinet, weighed 29 and 7 mg; 147 mg and 125 mg. The maximum dry weight is thus obtained around the 11th day.

Beispiel 2Example 2

Kultur von Oidiodendron £ri_seum bei pH 5,4Culture of Oidiodendron £ ri_seum at pH 5.4

Unter Aussaat des Stammes L001 von Oidiodendron griseum, Hobak in das in Beispiel 1 beschriebene Kulturmilieu mit 0,25 g Harnstoff pro 100 ml Wasser wurde die Kultur bei pH 5_}4 durchgeführt; das nach 7, 11 und 15 Kulturtagen unter Lichtabschluß erhaltene auf Gewichtskonstanz getrocknete Myzel wog 19,8; 78,2 und 111 mg.While sowing the L001 strain of Oidiodendron griseum, Hobak in the culture medium described in Example 1 with 0.25 g of urea per 100 ml of water, the culture was carried out _{at pH 5} 4;} the mycelium obtained after 7, 11 and 15 days of culture under exclusion of light, dried to constant weight, weighed 19.8; 78.2 and 111 mg.

Beispiel 5Example 5

Kultur von Penicilliuni cyclopium bei pH 2Culture of Penicill iuni cyclopi um at pH 2

Der Stamm L002 von Penieilliuin cyclopium (I\fr. 2066 im Katalog der Kollektion des IJuseum d'Histoire Naturelle von Paris)The L002 strain of Penieilliuin cyclopium (I \ fr. 2066 in the catalog of the collection of the IJuseum d'Histoire Naturelle of Paris)

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wurde auf ein Nährmilieu mit folgenden Gehalten ausgesät:was sown on a nutrient medium with the following contents:

Wasser ■ 100 mlWater ■ 100 ml

Monocalciumphosphat 0,08 gMonocalcium phosphate 0.08 g

Monokaliumphosphat 0,15 gMonopotassium phosphate 0.15 g

Magnesiumsulfat 0,05 gMagnesium sulfate 0.05 g

Mangansulfat 0,002 gManganese sulfate 0.002 g

Zinksulfat 0,002 gZinc sulfate 0.002 g

Glucose 2 gGlucose 2 g

Kaliumnitrat 0,153 gPotassium nitrate 0.153 g

Der pH-Wert wurde auf 2 eingestellt.The pH was adjusted to 2.

Der Stamm entwickelte sich bei 24 0; der pH-Wert blieb in der Nähe von 2. Für 100 ml Milieu .erhält man die folgenden Myzel-Trockengewichte (Sporen und Fäden):The strain developed at 240; the pH remained close to 2. For 100 ml of medium, the following are obtained Mycelial dry weights (spores and threads):

44th 3.3. TagDay 6060 mgmg 5.5. TagDay 300300 mgmg 10.10. TagDay 515515 mgmg Beispielexample

Der Stamm L002 von Penicillium cyclopium wurde auf ein mit demjenigen von Beispiel 3 identisches Uährmilieu (11 Liter) in einer klassischen Fermentationsvorrichtung mit einem Inhalt von 14 Litern mit Rührer und Sauerstoffzuleitung ausgesät. Der Eührer bzw. die Kulturumwälzung wurde auf 100 Upm eingeregelt und der Sauerstoffdurchsetz auf 0,2 1 pro Liter Milieu und kinute. Nach 88 Stunden Kultur wurde ein Trockengewicht von 6,7 g Myzel pro Liter gewonnen. Der Gehalt an Proteinen im auf Gewichtskonstanz getrockneten rohen Myzel erreicht 25 $.The strain L002 of Penicillium cyclopium was sown in a medium (11 liters) identical to that of Example 3 in a classic fermentation device with a capacity of 14 liters with stirrer and oxygen supply. The Eührer or the culture circulation was adjusted to 100 rpm and the oxygen penetration to 0.2 1 per liter of environment and kinute. After 88 hours of culture, a dry weight of 6.7 g mycelium per liter was obtained. The protein content in the raw mycelium, dried to constant weight, reaches $ 25.

BAD ORIGINAL 2 0 9 8 8 A / 1 2 A 4 BAD ORIGINAL 2 0 9 8 8 A / 1 2 A 4

Beispiel 5 Example 5

Es wurde in gleicher Weise wie in Beispiel 4 mit einem Sauerstoffdurehsatz von 1,4 Litern pro liter Milieu und Iviinute gearbeitet und nach 96 Stunden ein Trockengewicht von 5,7 g üyzel pro Liter Milieu gewonnen.It was in the same way as in Example 4 with a Oxygen flow rate of 1.4 liters per liter of environment and Iviinute worked and after 96 hours a dry weight of 5.7 g üyzel gained per liter of medium.

Der Gehalt an Proteinen im auf Gewientskonstanz getrockneten rohen Kyzel erreicht ebenfalls 25 Gew_o^.,The content of proteins in the dried on Gewientskonstanz crude Kyzel also reached 25 percent _o ^.,

Beispiel 6 : Example 6 :

Penicilllum cyclopium wurde in einer Permentationsvorrichtung kultiviert, die durch einen Kunststoffbehälter von 1500 1 Inhalt mit einer Belüftung am Boden zur Sieherstsllung ' einer Bewegung des Inhalts gebildet wurde. Das Kulturmilieu hatte folgende Zusammensetzung: Penicillum cyclopium was cultured in a permentation device formed by a plastic container of 1500 l capacity with a ventilation at the bottom to ensure movement of the contents. The culture environment had the following composition:

H₃PO₄ !H ₃ PO ₄ ! 1,1, 44th g/ig / i MgSO₄, 7H₂O ;MgSO ₄ , 7H ₂ O; 0,0, 22 g/lg / l Harnstoff :Urea: 0,0, 55 g/lg / l

20 g/l idelassen mit 60 °/o Saccharose und sein pH war auf 3 eingestellt. .20 g / l idelassen with 60 ° / o sucrose, and its pH was adjusted to. 3 .

Wasser, Phosphorsäure und Magnesiumsulfat wurden durch üiinführung von Natriumhypochlorit bis die Prüfung mit ortho-Tolidin die Anwesenheit von etwa 50 ppm restlichem freien Chlor anzeigte, sterilisiert. Lielasse und Harnstoff wurden 1 Stunde lang bei 100⁰G sterilisiert, bevor 3ie in den Behälter gegeben wurden.Water, phosphoric acid and magnesium sulfate were sterilized by introducing sodium hypochlorite until testing with ortho-tolidine indicated the presence of about 50 ppm residual free chlorine. Lielasse and urea were ^{sterilized for 1 hour at 100 0} G before they were added to the container.

Das Kulturmilieu wurde unter Verwendung von VorkulturenThe culture medium was created using precultures

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besät, die in einer Fermentationsvorrichtung von kleiner Kapazität (TO 1) erhalten worden waren. Die Überführung von einem Behälter in den anderen wurde mit Hilfe einer vorangehend sterilisierten Pumpe bewerkstelligt. Die Temperatur schwankte im Verlaufe der Kultur zwischen 20 und 25°O» Jtfach 3 Tagen wurden 7,5 g/l eines Myzels erhalten, in dem die gesam-ten stickstoffhaltigen Materialien 38 </' des Trockenmaterials ausmachten.sown in a fermenter of smaller Capacity (TO 1) had been obtained. The transfer from one container to the other was carried out with the help of a previous one sterilized pump. The temperature fluctuated in the course of the culture between 20 and 25 degrees centigrade 3 days, 7.5 g / l of a mycelium were obtained in which the entire nitrogenous materials 38 </ 'of the dry matter made out.

Beispiel 10Example 10

Penicillium cyclopium wurde auf einem Milieu kultiviert, das durch eine ilischung von zerkleinertem und angefeuchteten Weizen mit 10 g Harnstoff pro kg Getreide gebildet wurde und einen pH-Wert von 2,3 hatte. Das Iviilieu wurde mit einer Sporensuspension besät. Penicillium cyclopium was cultivated in a medium which was formed by mixing crushed and moistened wheat with 10 g of urea per kg of grain and had a pH of 2.3. The ivilieu was seeded with a spore suspension.

Der Weizen wurde durch Anfeuchten in heißem Viasser von hoher Temperatur und einstundiges Aufheizen auf 100⁰C sterilisiert. Das Penicillium entwickelt sich an der Oberfläche der Körner in den Zwischenräumen und bildet 3ehr rasch Sporen. Nach Ablauf von 17 Tagen ist der Gehalt an stickstoffhaltigem Material von 16,45 auf 24,80 <?j angestiegen, entsprechend einer Zunahme um 54 '/» und das Trockenmaterial (Getreide + Pilz) nimmt von 25,5 kg auf 17,43 kg ab.The wheat was sterilized by wetting in hot Viasser of high temperature and einstundiges heating to 100 ⁰ C. The penicillium develops on the surface of the grains in the interstices and forms spores very quickly. After 17 days, the content of nitrogenous material has risen from 16.45 to 24.80 <? J , corresponding to an increase of 54 '/ »and the dry material (grain + mushrooms) increases from 25.5 kg to 17.43 kg from.

Toxizitättoxicity

Die chronische Toxizität wurde an Gruppen von 10 Kaninchen überprüft. Dazu wurden den Tieren zwei Monate lang alle 3 Tage 10 g frisches Myzel vom Stamm LOOI von Oidiodendrou durch LIagenaoride verabreicht. Es wurde keinerlei anormalesChronic toxicity was assessed on groups of 10 rabbits checked. For this purpose, the animals were all given for two months 3 days 10 g of fresh mycelium from the LOOI strain of Oidiodendrou administered by Lagenaoride. It didn't turn out to be anything abnormal

BAD ORIGINAL, 2 0 3 Ο 8 A / 1 2 h A BAD ORIGINAL, 2 0 3 Ο 8 A / 1 2 h A

Verhalten beobachtet. Die Autopsie der !Tiere nach 2 und 6 LIonaten nach Beginn der Behandlung ergab keinerlei Schädigung. Oas Myzel wird mithin gut vertragen.Behavior observed. The autopsy of the animals after 2 and 6 months after the start of the treatment, there was no damage whatsoever. The mycelium is therefore well tolerated.

nährwert des Myzels - ■ nutritional value of the mycelium - ■

" Bs wurden 3 Versuchsreihen durchgeführtί"3 series of tests were carried out"

1. Versuchsreihe;1st series of experiments;

2 männliche Kaninchen von 1,8 und 1,9 kg wurden innerhalb von 18 Tagen nacheinander mit unterschiedlicher Nahrung versorgt; die Gewichtslcurve dieser Tiere ist in !ig. 1 dargestellt (die Zeit längs der Abszisse in Tagen; das Körpergewicht längs der Ordinate in kg); die Kurven 1 und 2 stammen von je einem der Tiere.2 male rabbits of 1.8 and 1.9 kg were inside 18 days in a row with different foods provided; the weight curve of these animals is in! ig. 1 shown (the time along the abscissa in days; the body weight along the ordinate in kg); curves 1 and 2 come from each one of the animals.

Während der ersten sieben Tage (Phase 1) wurden die Tiere jeden Tag mit einer eiweißhaltigen Kost mit bezogen auf die vom Stickstoff gelieferte nahrung 18 Sew.yö versorgt, ohne daß die Nahrung rationiert wurde.During the first seven days (phase 1), the animals were given a protein-containing diet with based on the nourishment supplied by nitrogen 18 Sew.yö supplied without the food has been rationed.

Vom 8. bis zum. 11. Tage (Phase 2) erhielten die Tiere täglich ohne Hationierung eine stickstoffreie Kost, die abgesehen von den Proteinen mit derjenigen der Phase 1 identisch war.From the 8th to the. The animals received 11th days (phase 2) a nitrogen-free diet every day without hationing apart of the proteins was identical to that of phase 1.

Vom 12. bis zum 15. Tage (Phase 3) erhielten die Tiere täglich die stickstoffreie Kost der Phase 2 und zusätzlich 30 g-getrocknetes Myzel von Oidiodendron griseum, das über, ein iiagenröhrehen eingeführt wurde-.From the 12th to the 15th day (phase 3) the animals received the nitrogen-free diet of phase 2 and in addition 30 g-dried mycelium of Oidiodendron griseum, which is a tube was introduced.

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Vom 16. bis sum 18. Tage (Phase 4) erhielten die Kaninchen täglich ohne Rationierung die stickstoffreie Kost der PhaseFrom the 16th to the 18th day (phase 4), the rabbits received the nitrogen-free diet of the phase daily without rationing

Wie man aus den Kurven von Fig. 1 ersieht, t3\it die Steigung der in Abhängigkeit von der Zeit aufgetragenen Gewichtskurve für die Phasen 1 und 3 parallel» Dieses Phänomen macht die Wirksamkeit der Behandlung mit Myzel als Zusatz für Tierfutter anschaulich.As can be seen from the curves of FIG. 1, t3 \ it is the slope the weight curve plotted against time for phases 1 and 3 parallel »This phenomenon makes the effectiveness of the treatment with mycelium as an additive for animal feed.

ο ο Reiheline

Ein männliches Kaninchen wurde innerhalb von 14 Tagen folgender nehandlun,/ unterworfen;A male rabbit was subjected to the following nehandlun, / within 14 days;

a) Vollständiges Fasten während der beiden ersten Tage; unda) Complete fast for the first two days; and

b) vom 3. bis zum 12. Tag wurde eine Nahrung verabreicht,b) food was given from the 3rd to the 12th day,

bei der der proteinische Stickstoff ausschlielilich durch das liyzel von Penicillium cyclopium geliefert wurde, wobei die tägliche Kation derart gebildet wurde, daß der Gehalt an Proteinen in der Ration 20 Gew.'/ö betrug. Die Ration hatte folgende Zusammensetzung*in which the proteinaceous nitrogen was supplied exclusively by the liyzel of Penicillium cyclopium , the daily cation being formed in such a way that the protein content in the ration was 20% by weight. The ration had the following composition *

Erdnußöl 5gPeanut oil 5g

Mineralsalze 4 gMineral salts 4 g

Vitaminmischung ' 1 g Agar-Agar ' 0,5 gVitamin mixture '1 g agar-agar' 0.5 g

Gholin 0,5 gGholin 0.5 g

Saccharose 35 gSucrose 35 g

Stärke 34,5 gStarch 34.5 g

Myzel von Penicillium ra r o· cyclopium " 24,- gMycelium of Penicillium ra ro · cyclopium "24, - g

V/asser (vom Kochen) 80 gV / ater (from cooking) 80 g

BAD ORJGlNAi-BAD ORJGlNAi-

2 0 9 3 8 4 / 1 2 U2 0 9 3 8 4/1 2 U

■ c) vom 13. Tage an einem vollständigen Fasten aus Mangel an Liyzel.■ c) from the 13th day of a complete fast for lack to Liyzel.

In Figo 2 sind längs der Ordinate die Gewichtsänderungen des Tieres in Abhängigkeit von der Behandlungsdauer aufgetragen.In FIG. 2, the changes in weight of the animal as a function of the duration of treatment are plotted along the ordinate.

3. Reihe 3rd row e

Die Gewichte von 2 Gruppen zu je 3 Kaninchen wurden untersucht. Während der ersten drei Tage erhielten beide Gruppen eine Nahrung mit 15 Gew.^f/> Proteinen, die durch eine Mischung von Hafer, Weizen, Luzerne, Ölkuchen von Erdnuß und Soja und "Nachlauf" (kleiehaltiges Grobinehl) geliefert wurden, wobei die tägliche l.ienge 2g Stickstoff entsprach; anschließend erhielten die beiden Gruppen bis zum 11. Tag eine unterschied- ·, liehe Kost, und zwarThe weights of 2 groups of 3 rabbits each were examined. During the first three days received two groups, a diet with 15 wt. ^F /> proteins that have been supplied by a mixture of oat, wheat, alfalfa, oil cake of peanut and soybean, and "Delay" (kleiehaltiges Grobinehl), wherein the daily l . little corresponded to 2g nitrogen; then the two groups received a different diet up to the 11th day, namely

erhielt eine Gruppe (Ve z'gl ei cha gruppe) die gleiche Nahrung -wie in der ersten Behandlungsphase (2 g proteinischen Stickstoff pro Tag); undone group (Ve z'gl ei cha group) received the same food as in the first phase of treatment (2 g of protein nitrogen per day); and

die zweite Gruppe nahm Myzel von P. eye 1 ppi um ausschlie(31ich jeder anderen Eiweißquelle auf;*the second group took mycelium from P. eye 1 ppi and exclusively from any other protein source; *

Fig. 3 zeigt die Änderung des Gewichtes .(in kg) der Vergleiehskaninchen (Kurven T₁, T₀ und T_x) und der behandelten Kaninchen (Kurven Pp P₂ und P-.,) in Abhängigkeit von der Behandlungsdauer in Tagen.3 shows the change in weight (in kg) of the rabbits to be compared (curves T ₁ , T ₀ and T _x ) and of the treated rabbits (curves Pp, P ₂ and P-.,) As a function of the duration of treatment in days.

Aus diesem letzten Versuch kann gesohLoaaon werden, daß eine Kation von 0,4 g an vom Myzel von P. £yj^Lj3pJLUui herstammendem proteinisehen Stickstoff pro Tag ebenoo wirksam 1st wie 2 g proteinischer Stickstoff pro Tag, der von der Üblicher-From this last attempt it can be concluded that a cation of 0.4 g derived from the mycelium of P. £ yj ^ Lj3pJLUui proteinaceous nitrogen per day is just as effective like 2 g of proteinaceous nitrogen per day, which is

* Dabei wurde das Myzel absLchtLieh den anderen Nährstoffen derart zugemischt, daß die Tagesration an profceLnischem Stickstoff 0,4 g pro Tag und Tier betrug.* The mycelium was separated from the other nutrients mixed in so that the daily ration of professional nitrogen 0.4 g per day and animal.

¹BAD ORIGINAL ¹ ORIGINAL BATHROOM

2 0 9 8 8 A / I 2 4 h 2 0 9 8 8 A / I 2 4 h

weise zugeführten pflanzlichen Ration herstammt.wisely supplied vegetable ration comes from.

Im übrigen konnte im Verlaufe der 3 Versuchsreihen ebenfalls beobachtet werden, daß die Tiere in augenfälliger ,/eise die rayzelreiche Nahrung suchen.Incidentally, in the course of the 3 test series, it was also possible it can be observed that the animals are more conspicuous seek the raycelium-rich food.

BAD ORIGINALBATH ORIGINAL

Ί 0 Π 8 K h I 1 2 4 k Ί 0 Π 8 K h I 1 2 4 k

Claims (1)

PatentansprücheClaims \yi Verfahren zur Herstellung eines proteinreichen Produktes durch Kultur von Uikroorganismen, dadurch gekennzeichnet , daß man zu der Gesamtheit der aus dem Llage,n des Kaninchens isolierten und sich bei pH 2 entwickelnden Septomyzeten gehörende Stämme kultiviert und die erhaltene Biomasse gewinnt» A process for the production of a protein-rich product by culturing microorganisms, characterized in that the septomycetes isolated from the rabbit and developing at pH 2 are cultivated and the biomass obtained is obtained » 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Septomyceten durch Oidiodendron griseum, Penicillium.cyclopium, Penicillium crustosum und Penicillium canescens gebildet werden.2. The method according to claim 1, characterized in that the Septomycetes by Oidiodendron griseum, Penicillium.cyclopium, Penicillium crustosum and Penicillium canescens are formed will. 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Züchtung bei einem pH-\/ert von 1,7 bis 5 vorgenommen3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that that the cultivation is carried out at a pH of 1.7 to 5 4o Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Septomyzeten auf einem Nährmilieu kultiviert werden, daa zumindest eine Stickstoffquelle in Konzentrationen über 1,10 g/l und vorzugsweise zwischen 1,16 und 2,34 g/l Milieu (gerechnet in g Stickstoff) und zumindest 10 bis 30 g/l. Kohlehydrat enthält.4o method according to claims 1 to 3, characterized in that that the septomycetes are cultivated on a nutrient medium, as at least one nitrogen source in concentrations above 1.10 g / l and preferably between 1.16 and 2.34 g / l medium (calculated in g nitrogen) and at least 10 to 30 g / l. Contains carbohydrate. 5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Kohlehydrat durch Melassen gebildet wird.5. The method according to claim 4, characterized in that the carbohydrate is formed by molasses. b. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß . das Kohlehydrat durch Getreidekörner geliefert v?ird.b. Method according to claim 4, characterized in that. the carbohydrate is supplied by cereal grains. BAD ORIOiNAU 884/1244BAD ORIOiNAU 884/1244 7° Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Kultivierung der Septomyzeten bei einer Temperatur von 19 bis 25°C erfolgt.7 ° method according to claims 1 to 6, characterized in that the cultivation of the septomycetes at a Temperature of 19 to 25 ° C takes place. 8. Tiernahrung, gekennzeichnet durch einen Gehalt an nach einem der Ansprüche 1 bis 7 erhaltener Biomasse zusammen mit einem physiologisch akzeptablen Träger.8. pet food, characterized by a content of according to one of claims 1 to 7 obtained biomass together with a physiologically acceptable vehicle. BAD ORIGINAL 209884/1244 BATH ORIGINAL 209884/1244