DE2121248B2 - Antibiotic axenomycin D with the empirical formula C78 H125 O3 S Na, and process for its production - Google Patents

Description

CHCH

spekirum in Methanol, das Maxima bei 250,255 und 330 ιτιμ und eine Schulter bei 265 bis 268 πιμ aufweist, EJJ, 138 (255 ιημ) und einem Infrarotspektrum in KBr mit Banden bei 3440, 2980, 2950, 2890, 1735, 1705, 1675, 1630, 1610, 1465, 1385, 1355, 1290, 1265,1195,1170,1115,1080,1050, 1005,995,975,945, 925, 895, 865, 810, 700 cm¹, das als Teilstrukturen ein makrocyclisches Lacton der Formelspekirum in methanol, which has maxima at 250.255 and 330 ιτιμ and a shoulder at 265 to 268 πιμ, EJJ, 138 (255 ιημ) and an infrared spectrum in KBr with bands at 3440, 2980, 2950, 2890, 1735, 1705, 1675, 1630, 1610, 1465, 1385, 1355, 1290, 1265, 1195, 1170, 1115, 1080, 1050, 1005, 995, 975, 945, 925, 895, 865, 810, 700 cm ¹ , the partial structures of which are a macrocyclic lactone of the formula

F=OF = O

'—OH'-OH

O OH OH OHO OH OH OH

OHOH

zwei Zuckerreste und einen 2-Methyl-l,4-naphthochinonchromophor aufweist.has two sugar residues and a 2-methyl-1,4-naphthoquinone chromophore.

2. Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums Axenomycin D, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptomyces lisandri r.. sp. NCIB 10 985 in einem üblichen Kulturmedium, das eine Kohlenstoffquelle, eine Stickstoffquelle und Mineralsalze enthält, bei einer Temperatur von 23 bis 37° C während eines Zeitraums von 60 bis 160 Stunden bei einem pH-Wert von 6 bis 9 in an sich bekannter Weise kultiviert, wobei der Gehalt des Kulturmediums bezüglich der Kohlenstoffquelle höher als 10%, der Gehalt an Phosphaten jedoch möglichst niedrig ist, die Rührbedingungen einer Leistungsaufnahme von 2 bis 4 Watt/Liter, und einer Luftzufuhr von 0,7 bis 2,0 Liter pro Liter Medium pro Minute entsprechen und anschließend das gebildete Axenomycin D aus dem abfiltrierten Mycel durch Lösungsmittelextraktion mit einem Alkohol zusammen mit den Axenomycinen A und B gewinnt und durch übliche Chromatographie abtrennt.2. Process for the preparation of the antibiotic axenomycin D, characterized in that one Streptomyces lisandri r .. sp. NCIB 10 985 in a common culture medium containing a carbon source, contains a nitrogen source and mineral salts, at a temperature of 23 to 37 ° C during a Period of 60 to 160 hours at a pH of 6 to 9 in a manner known per se cultured, the content of the culture medium with respect to the carbon source being higher than 10%, the However, the phosphate content is as low as possible, the stirring conditions of a power consumption of 2 to 4 watts / liter, and an air supply of 0.7 to 2.0 liters per liter of medium per minute and then the axenomycin D formed from the filtered mycelium by solvent extraction with an alcohol together with the axenomycins A and B wins and through usual Separate chromatography.

3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man die Trennung des Axenomycins D an einer Kieselsäuresäule vornimmt, mit Äthylacetat-Methanol-Wasser (125 :25 :17) eluiert, die unlerschiedlichen Fraktionen durch Dünnschichtchromatographie analysiert und die axenomycinhaltigen Fraktionen sammelt, im Vakuum vom Lösungsmittel befreit und den erhaltenen Rückstand aus Methanol· Isopropanol umkristallisiert.3. The method according to claim 2, characterized in that the separation of the axenomycin D undertakes on a silica column, eluted with ethyl acetate-methanol-water (125: 25: 17), the different Fractions analyzed by thin layer chromatography and those containing axenomycin Collects fractions, freed from solvent in vacuo and the residue obtained from methanol Isopropanol recrystallized.

Die Erfindung bezieht sich auf den in den Ansprüchen gekennzeichneten Gegenstand. In der DE-OS 19 29 107 werden der ant'.biotische Komplex Axenomycin A und Axenomycin B und seine Herstellung durch Züchten von Streptomyces lisandri n. sp. I. M. 1.137 178 und I. M. R. U. 3935 beschrieben. Es wurde nun überraschenderweise gefunden, daß durch submerse und aerobe Kultivierung von Streptomyces lisandri I. M. 1. 178 = I. M. R. U. 3935 = NCIB 10 985 (die Kultur wird vom Commonwealth Mycological Institut, Ferry Lane, Kew, Surry, unter der Bezeichnung !. M. 1.137 ! 78 bzw. von der National Collection of Industrial BacteriaThe invention relates to the subject matter characterized in the claims. In DE-OS 19 29 107 the ant'.biotic complex axenomycin A and axenomycin B and its production by cultivation of Streptomyces lisandri n. sp. I. M. 1.137 178 and I. M. R. U. 3935. It has now surprisingly been found that by submerged and aerobic Cultivation of Streptomyces lisandri I.M. 1. 178 = I.M.R. U. 3935 = NCIB 10 985 (the culture is by the Commonwealth Mycological Institute, Ferry Lane, Kew, Surry, under the designation!. M. 1.137! 78 or from the National Collection of Industrial Bacteria

2^Γ) unter der Bezeichnung NCIB 10 985 auf Verlangen an Dritte nach Maßgabe der Rechtsvorschriften über den Umgang mit Mikroorganismen abgegeben, vgl. Bl. f. PMZ 1975, Seite 171) unter den erfindungsgemäßen Bedingungen ein neues Antibiotikum, Axenomycin D,2 ^Γ ) sold under the designation NCIB 10 985 to third parties on request in accordance with the legal provisions on the handling of microorganisms, see sheet f. PMZ 1975, page 171) under the conditions according to the invention, a new antibiotic, axenomycin D,

jo das eine hohe therapeutische Aktivität aufweist, erhalten wird.jo which has a high therapeutic activity, is obtained.

Als Kohlenstoffquellen können Stärke, Glukose, Dextrin und Melasse verwendet werden. Als Stickstoffquelle können Getreideweiche, Sojamehl, Erdnußmehl,Starch, glucose, dextrin and molasses can be used as carbon sources. As a nitrogen source can cereal softener, soy flour, peanut flour,

r> Fleischextrakt, Pepton, Kasein und Kaseinhydrolysate verwendet werden.r> meat extract, peptone, casein and casein hydrolysates be used.

Verwendbare Mineralsalze sind Calciumcarbonat, Natrium-, Kalium-, Magnesium-, Eisen-, Kupfer-, Zink-, Mangan- und Kobaltchlorid. Phosphate sind dagegenUsable mineral salts are calcium carbonate, sodium, potassium, magnesium, iron, copper, zinc, Manganese and cobalt chloride. Phosphates are against it

nicht geeignet; es wurde vielmehr gefunden, daß mit Zunahme ihrer Konzentration im Nährboden die Ausbeute an antibiotischer Substanz sich vermindert.not suitable; Rather, it has been found that, with an increase in their concentration in the nutrient medium, the Yield of antibiotic substance decreases.

Die Fermentation kann im Erlenmeyerkolben oder Laboratoriums- oder Industriefermentern verschiede-The fermentation can take place in Erlenmeyer flasks or laboratory or industrial fermenters

ner Kapazität durchgeführt werden.capacity.

Axenomycin D ist in Alkoholen löslich und in Wasser und Benzol unlöslich. Die Verbindung besitzt einen Drehwert von [«] ? = +11 (c = 0,5 in Methanol) und besitzt im übrigen die in Anspruch 1 angegebenenAxenomycin D is soluble in alcohols and insoluble in water and benzene. The connection has one Rotation value of [«]? = +11 (c = 0.5 in methanol) and has the rest of the specified in claim 1

w Parameter. Wie spätere Untersuchungen zeigen konnten, enthalten die Axenomycine einen makrocyclischen Lactonring, zwei Zuckerreste und ein 1,4-Napthochinonchromophor. Dies kann z. B. durch Chromsäureoxydation von Axenomycin B bzw. Methanolyse mittelsw parameters. As later studies could show, the axenomycins contain a macrocyclic lactone ring, two sugar residues and a 1,4-naphthoquinone chromophore. This can e.g. B. by chromic acid oxidation of axenomycin B or methanolysis means

Yi 0,05 η-Hexan bei Raumtemperatur und Vergleich der erhaltenen Bruchstücke mit authentischem Material nachgewiesen werden. Die Struktur des Axenolids, dem Aglykon von Axenomycin B ergibt sich aus dem Abbau durch alkalische Hydrolyse und Behandlung mit Yi 0.05 η-hexane can be detected at room temperature and comparison of the fragments obtained with authentic material. The structure of axenolids, the aglycone of axenomycin B, results from degradation by alkaline hydrolysis and treatment with

M) Natriumperjodat und Natriumborhydrid sowie aus den spektrographischen Daten CPMR und Massenspektrum. M) sodium periodate and sodium borohydride as well as from the spectrographic data CPMR and mass spectrum.

Das Antibiotikum Axenomycin D der Erfindung weist eine hohe wurmhemmende Aktivität sowie eineThe antibiotic axenomycin D of the invention has high anti-worm activity as well

h5 Aktivität gegen Protozoen und Pilze auf.h5 activity against protozoa and fungi.

Die wurmhemmends Aktivität des Axenomycin D wurde an Mäusen geprüft, die experimentell mit Hymenolepis nana infiziert waren. Die VersucheThe worm-inhibiting activity of axenomycin D was tested on mice that were experimentally tested with Hymenolepis nana were infected. The trials

wurden an Gruppen von jeweils 10 Mäusen durchgeführt. Axenomycin D wurde auf oralem Wege zwischen dem zwölften und zwanzigsten Tag der Infektion verabreicht. In Tabelle I sind die Werte der geheilten Tiere angegeben.were performed on groups of 10 mice each. Axenomycin D was administered orally between the twelfth and twentieth day of infection administered. Table I shows the values of the cured animals.

Tabelle 1Table 1

Zusammensetzungcomposition

Axenomycin D
Axenomycin DAxenomycin D.
Axenomycin D.

Dosis
mg/kgdose
mg / kg

2,5
5,02.5
5.0

Verbesserungimprovement

65,0
100,065.0
100.0

Bei den aus der DE-OS 19 29 107 bekannten Axenomycinen A und B liegt die 100%-Dosis bei 10 mg/kg.In the case of the axenomycins A and B known from DE-OS 19 29 107, the 100% dose is included 10 mg / kg.

Die akute Toxizität des Axenomycin D, ausgedrückt als Dl .-,Cl, bei Mäusen beträgt bei oraler Verabreichung 200 mg/kg und entspricht damit der DLw von Axenomycin A₁ während Axenomycin B eine DLw von 300 mg/kg bei oraler Verabreichung besitzt.The acute toxicity of axenomycin D, expressed as Dl .-, Cl, in mice when administered orally is 200 mg / kg and thus corresponds to the DLw of axenomycin A ₁ while axenomycin B has a DLw of 300 mg / kg when administered orally.

Darüber hinaus wurde die erfindungsgemäße Verbindung Axenomycin D mit den aus der DE-OS 19 29 107 bekannten Verbindungen Axenomycin A und B hinsichtlich ihrer antiprotozoischen, antibakteriellen und antifungalen Aktivitäten sowie ihrer wurmhemmenden Aktivität verglichen. Die Versuchsergebnisse sind in den nachstehenden Tabellen II und III zusammengefaßt.In addition, the compound according to the invention axenomycin D with those from DE-OS 19 29 107 known compounds axenomycin A and B in terms of their antiprotozoal, antibacterial and antifungal activities as well as their worm-inhibiting activity. The test results are in are summarized in Tables II and III below.

Tabelle IITable II

Antiprotozoische, antibakterielle und antifungale In-vitro-Aktivität von Axenomycin A, B und DIn vitro antiprotozoal, antibacterial and antifungal activity of axenomycin A, B and D

MlC, y.g/ml
Axenomycin AMlC, yg / ml
Axenomycin A

Axenomycin B Axenomycin DAxenomycin B Axenomycin D

Entamoeba histolyticaEntamoeba histolytica 1,51.5 33 1,51.5 Trichomonas foetusTrichomonas fetus 0,10.1 0,10.1 0,10.1 Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus >100> 100 >100> 100 >100> 100 Bacillus subtilisBacillus subtilis >100> 100 >100> 100 >100> 100 Mycobacterium smegmatisMycobacterium smegmatis 5050 >100> 100 2525th Escherichia coliEscherichia coli >100> 100 >100> 100 >100> 100 Salmonella abortivoequinaSalmonella abortivoequina >100> 100 >100> 100 >100> 100 Candida albicansCandida albicans 6,256.25 0,780.78 1,561.56 Saccharomyces calsbergensisSaccharomyces calsbergensis 0,300.30 0,040.04 0,080.08 Trichophyton mentagrophytesTrichophyton mentagrophytes >100> 100 2525th 1010 Epidermophyton floixosumEpidermophyton floixosum 2525th 1010 2,52.5 Sabouraudites gypseumSabouraudites gypseum 2525th 1010 2,52.5 Bothritis cinereaBothritis cinerea 1010 2,52.5 2,52.5

Tabelle IUTable IU

Wurmhemmende In-vitro-Aktivität von Axenomycin A, B und DIn vitro anti-worm activity of axenomycin A, B and D

MIC oder M.Im.C, ug/mlMIC or M.Im.C, µg / ml

Axenomycin A Axenomycin B Axenomycin DAxenomycin A Axenomycin B Axenomycin D

Rhabditis macrocercaRhabditis macrocerca 15,615.6 n.d.n.d. 3,93.9 3,93.9 Syphacia obvelataSyphacia obvelata >1000> 1000 >1000> 1000 >1000> 1000 Hymenolepis nanaHymenolepis nana 3,13.1 1,551.55 1,551.55 Schistosoma mansoniSchistosoma mansoni 55 2,52.5

Axenomycin D wurde ferner mit dem als gut wirksam bekannten Arzneimittel N,N-Dibutyl-4-hexyloxynaphthylamidin (Bunamidin, von der WHO vorgeschlagener Freiname), die in Progress in Drug Research 17 (1973), Seite 110 beschrieben ist, hinsichtlich ihrer Wirksamkeit gegenüber Hymenolepis nana verglichen.Axenomycin D was also combined with the well-known drug N, N-dibutyl-4-hexyloxynaphthylamidine (Bunamidine, proposed by the WHO non-proprietary name), which in Progress in Drug Research 17 (1973), Page 110 is described with regard to their effectiveness compared to Hymenolepis nana.

Schweizer pathogenfreie Cobs-Mäuse wurden experimentell mit Eiern von Hymenolepis nana, die aus trächtigen Proglottiden gewonnen worden waren, infiziert. Es wurden 100 Eier pro Maus per os verabreicht.Swiss pathogen-free Cobs mice were experimentally carried out with eggs of Hymenolepis nana, which were made from pregnant proglottids were infected. 100 eggs per mouse were per os administered.

Nach 12 Tagen wurden die Tiere mit den untersuchten Verbindungen per os behandelt. Nach 24 StundenAfter 12 days, the animals were treated orally with the investigated compounds. After 24 hours

wurden die Mäuse getötet, und die Eingeweide wurden untersucht, um die Anwesenheit von Hymenolepis nana zu bestimmen.the mice were sacrificed and the intestines examined for the presence of Hymenolepis nana to determine.

Hierbei wurden die nachfolgend aufgeführten Ergebnisse erhalten:The results listed below were obtained:

Substanzsubstance hlSt. ED₅₀ ED ₅₀ LD₅₁,LD ₅₁ , TherapeuTherapeu tischertable mg/kgmg / kg mg/kgmg / kg Indexindex

Axenomycin D
BunamidinAxenomycin D.
Bunamidine

2,15
622.15
62

93,2
54093.2
540

43,3
8,743.3
8.7

Die Untersuchungen zeigen deutlich, daß Axenomycin D dem bekannten Produkt überlegen ist.The investigations clearly show that axenomycin D is superior to the known product.

Die Beispiele sollen die vorliegende Erfindung näher :rläutern.The examples are intended to explain the present invention in more detail.

Beispiel 1example 1

Ein 2000-ml-Kolben, der 500 ml Kulturmedium enthielt, wurde bei 120⁰C während 20 Minuten sterilisiert.,Zum Animpfen wurde folgendes Kulturmedium verwendet:A 2000 ml flask containing 500 ml culture medium was ^{sterilized at 120 °} C. for 20 minutes. The following culture medium was used for inoculation:

DextrinDextrin

CalciumcarbonatCalcium carbonate

GetreideweicheGrain softener

Kaseincasein

AmmoniumsulfatAmmonium sulfate

DikaliumphosphatDipotassium phosphate

Leitungswasser aufTap water on

4%
0,5%
1.0%
l,OO/o
0,2%
0,01%
100%4%
0.5%
1.0%
l, OO / o
0.2%
0.01%
100%

GlukoseGlucose 10 und 12%10 and 12% SojamehlSoy flour 3,0%3.0% GetreideweicheGrain softener 2,0%2.0% CalciumcarbonalCalcium carbonal 1,0%1.0% NatriumchloridSodium chloride 0,25%0.25% SojaöiSoy oil 0,5%0.5% Leitungswasser aufTap water on 100%100%

GlukosekonzentrationGlucose concentration

Axenomycin D
γ/νη\ Axenomycin D.
γ / νη \

10
1210
12th

1350
2050 Konzentration KH2PO41350
2050 concentration KH2PO4

Axenomycin D y/mlAxenomycin D y / ml

0,005
0,01
0,050.005
0.01
0.05

2060 2040 1485 10052060 2040 1485 1005

Der Kolben wurde mit einer Sporensuspension angeimpft, die durch Waschen der Patina von vier, 15 Tage alten, auf Glukose-Kartoffel-Agar entwickelten Schrägkulturen von Streptomyces lisandri NCIB 10 985 erhalten wurde.The flask was inoculated with a spore suspension obtained by washing the patina of four, 15 Day old Streptomyces lisandri NCIB 10 985 slants developed on glucose-potato agar was obtained.

Nach der Bebrütung bei 23⁰C während etwa 48 Stunden auf einem Drehschüttler mit 120 UpM wurden 50 ml dieser Kulturbrühe dazu verwendet, einen 5-1-Glasfermenter, der 3 Liter des Mediums derselben Zusammensetzung enthält, anzuimpfen. Die Kulturbrühe wurde mittels zwei Turbinenrührern mit gekrümmten Schaufeln gerührt und mit einer Luftzufuhr von 0,7 Liter je Liter Medium pro Minute bei einer Temperatur von 27 bis 28⁰C belüftet. Mit einem Teil der unter den obigen Bedingungen erhaltenen Kulturbrühe, entsprechend 5 Volumenprozent des produktiven Mediums, wurden 5-1-GIasfermenter, welche 3 Liter Kulturmedium enthalten, angeimpft.After incubation at 23 ⁰ C for about 48 hours on a rotary shaker at 120 rpm 50 ml of this culture broth were used to create a 5-1-jar fermenter containing 3 liters of the medium containing the same composition to inoculate. The culture broth was stirred by means of two turbine stirrers with curved blades and aerated with an air supply of 0.7 liters per liter of medium per minute at a temperature of 27 to 28 ^{° C.} 5-1 glass fermenters containing 3 liters of culture medium were inoculated with a portion of the culture broth obtained under the above conditions, corresponding to 5 percent by volume of the productive medium.

Das produktive Medium wies folgende Zusammensetzung auf:The productive medium had the following composition:

Beispiel 3Example 3

Das Verfahren wurde in 5-1-Fermentern unter denselben Bedingungen, wie sie in Beispiel 1 angegeben sind, mit 12% Glukose und bei 500 und 650 UpM sowie einer Luftzufuhr von 1 1 und 1,7 1 pro l.iter Nährboden pro Minute durchgeführt. Folgende Ergebnisse wurden erhalten:The procedure was carried out in 5-1 fermenters under the same conditions as given in Example 1 are, with 12% glucose and at 500 and 650 rpm and an air supply of 1 1 and 1.7 1 per liter of nutrient medium performed per minute. The following results were obtained:

Rühren
UpMstir
Rpm

Luftzufuhr Axenomycin DAir supply axenomycin D

Liter/Liter/Minute 7/mlLiter / liter / minute 7 / ml

1,01.0 24102410 1,71.7 30503050 1,01.0 36303630 1,71.7 41004100 Beispiel 4Example 4

Die Kulturbrühe wurde mit 500 UpM in einem Fermenter gerührt, der mit zwei Turbinenrührern mit je 6 gekrümmten Schaufeln versehen war, und mit einer Luftzufuhr von 1 I pro Minute pro Liter Nährboden belüftet.The culture broth was stirred at 500 rpm in a fermenter with two turbine stirrers each with 6 curved blades was provided, and with an air supply of 1 l per minute per liter of nutrient medium ventilated.

Nach 136 Stunden Gärung wurden folgei.de Ausbeuten erhalten:After 136 hours of fermentation, folgei.de yields were obtained:

Beispiel 2Example 2

Man wiederholte eine Fermentation in 5-l-Fermcnlcrn unter denselben Kultur- und mechanischen Bedingungen, wie sie in Beispiel 1 angegeben sind.A fermentation was repeated in 5 l Fermcnlcrn under the same culture and mechanical conditions as given in Example 1.

Das Medium der produktiven Phase, das 12% Glukose enthält, wurde mit kleinen Mengen KH2PO1 versetz!. Folgende F.rgebnissc wurden erhalten:The medium of the productive phase, which contains 12% glucose, was mixed with small amounts of KH2PO1 offset !. The following results were obtained:

500
500
650
650500
500
650
650

Ein rostfreier 80-l-Stahlfermenter, der 50 I Medium zur Herstellung des Inoculums enthält, das dieselbe Zusammensetzung wie in Beispiel 1 hat, wurde mit 500 ml einer Kultur, die in einem 2000-ml-Kolben unter den in Beispiel 1 beschriebenen Bedingungen erhalten wurde, angeimpft. Nach 24 Stunden langer Bebrütung Γ) im Fermenter unter Belüften und Rühren erhielt man ein Mycelwachstum, das ausreichte, einen rostfreien 500-ml-Stahlfermenter anzuimpfen. Dieser Fermenter enthielt 300 ml Kulturmedium der folgenden Zusammensetzung: An 80 liter stainless steel fermenter, the 50 liter medium for the preparation of the inoculum, which has the same composition as in Example 1, was used with 500 ml of a culture obtained in a 2000 ml flask under the conditions described in Example 1 was vaccinated. After incubation for 24 hours Γ) in the fermenter with aeration and stirring, one obtained a mycelial growth sufficient to inoculate a 500 ml stainless steel fermenter. This fermenter contained 300 ml of culture medium of the following composition:

Glukose 13%Glucose 13%

Sojamehl 3,0%Soy flour 3.0%

Getreideweiche 2,5% Calciumcarbonat 1,2%Grain softener 2.5% calcium carbonate 1.2%

Natriumchlorid 0,25%Sodium chloride 0.25%

^v' Sojaöl 0,6% ^v ' soybean oil 0.6%

Leitungswasser auf 100%Tap water to 100%

Nach 136 Stunden langer Bebrütung bei 28°C mit einer Luftzufuhr von 0,7 I pro Liter pro Minute undAfter 136 hours of incubation at 28 ° C with an air supply of 0.7 l per liter per minute and

-jo Rühren bei 250 UpM in einem Fermenter, der mit zwei Turbinenrührern mit je acht flachen Schaufeln versehen war (Absorptionskraft = 2,5 W/Liter), mit einem Gegendruck von 1 atm erhielt man eine Fermentationsausbeute von 3050 y/ml.-jo stirring at 250 rpm in a fermenter that has two Turbine stirrers were each provided with eight flat blades (absorption power = 2.5 W / liter), with a counter pressure a fermentation yield of 3050 y / ml was obtained from 1 atm.

Das durch Filtration von 14 Liter Kulturbrühe gewonnene Mycel wurde unter heftigem Rühren zweimal mit je 4 1 Butanol extrahiert. Die vereinten Extrakte wurden auf ungefähr 300 ml konzentriert. Der erhaltene Niederschlag wurde durch ZentrifugierenThe mycelium obtained by filtration of 14 liters of culture broth was stirred with vigorous stirring extracted twice with 4 l of butanol each time. The combined extracts were concentrated to approximately 300 ml. Of the obtained precipitate was obtained by centrifugation

wi gewonnen, mit Äthyläther gewaschen und unter Vakuum getrocknet. Das so erhaltene rohe Produkt wurde in Methanol gelöst, durch Filtrieren von dem wenigen unlöslichen Produkt abgetrennt und das Filtrat durch eine Kieselsäuresäulc Chromatographien und mitwi obtained, washed with ethyl ether and dried under vacuum. The crude product thus obtained was dissolved in methanol, separated from the little insoluble product by filtration, and the filtrate through a silica column chromatography and with

h^r> Äthylacetat-Methanol-Wasser (125 : 25 : 17) eluicrt.h ^r > ethyl acetate-methanol-water (125: 25: 17) eluted.

Während der Eluierung wurden Proben der verschiedenen Fraktionen durch Dünnschichtchromatographie analysiert. Die ersten Fraktionen (ungefähr 2 LiterDuring the elution, the various fractions were sampled by thin layer chromatography analyzed. The first fractions (about 2 liters

Eluat) wurden entfernt. Die folgenden Fraktionen enthielten Axenomycin D, welches durch Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum gewonnen wurde.Eluate) were removed. The following fractions contained axenomycin D, which by evaporation of the solvent was recovered in vacuo.

Durch Kristallisation aus Methanol-Isopropanol wurden 7 g Produkt erhalten, das aus reinem Axenomycin D besteht.Crystallization from methanol-isopropanol gave 7 g of product, which was obtained from pure axenomycin D exists.

Aus der ersten Fraktion wurden 1,34 g Axenomycin A und 1,24 g Axenomycin B erhalten.From the first fraction, 1.34 g of axenomycin A and 1.24 g of axenomycin B were obtained.

Beispiel 5Example 5

Man geht, wie im Beispiel 4 angegeben, vor mit dem einzigen Unterschied, daß der Prozentsatz der Glukose von 13% auf 8% reduziert wurde. Alle übrigen Bedingungen blieben gleich.Proceed as indicated in Example 4, the only difference being that the percentage of glucose was reduced from 13% to 8%. All other conditions remained the same.

Die Aufarbeitung des gewonnenen Mycel erfolgte wie im Beispiel 4 angegeben, und die prozentuale Zusammensetzung der so erhaltenen Fraktionen A, B und D ist in der nachfolgenden Tabelle angegeben im Vergleich zu derjenigen, die im Beispiel 4 beschrieben ist.The mycelium obtained was worked up as indicated in Example 4, and the percentage The composition of the fractions A, B and D thus obtained is given in the table below Compared to that described in Example 4.

Λ %Λ%

B%B%

D%D%

Glukose 13% (Beispiel 4) 14 13 73
Glukose 8% (Beispiel 5) 40 60 SpurenGlucose 13% (Example 4) 14 13 73
Glucose 8% (Example 5) 40 60 traces

Claims (1)

Patentansprüche:Patent claims: 1. Antibiotikum Axenomycin D mit der Summenformel C78Hi2sO33SNa, einem Molekulargewicht von 1646,83, einem Schmelzpunkt von 174 bis 175°C, einem Rf-Wert von 0,35 auf Kieselgel (Äthylacelat-Isopropanol-Wasser 100 :35 :5), einem Ultraviolett-1. Antibiotic axenomycin D with the empirical formula C78Hi2sO33SNa, a molecular weight of 1646.83, a melting point of 174 to 175 ° C, an Rf value of 0.35 on silica gel (ethyl acetate-isopropanol-water 100: 35: 5), an ultraviolet