DE2017837A1 - Antibiotic AM 374 and its manufacture - Google Patents
Antibiotic AM 374 and its manufactureInfo
- Publication number
- DE2017837A1 DE2017837A1 DE19702017837 DE2017837A DE2017837A1 DE 2017837 A1 DE2017837 A1 DE 2017837A1 DE 19702017837 DE19702017837 DE 19702017837 DE 2017837 A DE2017837 A DE 2017837A DE 2017837 A1 DE2017837 A1 DE 2017837A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- antibiotic
- growth
- water
- animal feed
- ivory
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Description
Die Erfindung bezieht sich auf ein neues Antibioticum, auf seine Herstellung durch Fermentation, auf seine Gewinnung und Anreicherung aus rohen Lösungen, auf seine Reinigung und auf die Herstellung seiner Salze.The invention relates to a new antibiotic, on its production by fermentation, on its extraction and enrichment from raw solutions, on its Purification and the manufacture of its salts.
Die Erfindung bezieht sich ferner auf ein verbessertes Tierfuttermittel, besonders zur Anv/endung bei jungen Haustieren, darunter Geflügel, wie Hühner-., Sruthühner- und Entenküken« Es ist ferner für junge Hinder, Pferde, Schweine, Hunde und Schafe vorteilhaft. ' .The invention also relates to an improved one Animal feed, especially for use by young people Domestic animals, including poultry such as chickens, turkeys and Ducklings “It is also beneficial for young hinds, horses, pigs, dogs and sheep. '.
Die Beschleunigung des Wachstums von jungen Haustieren' « und auch der Schutz gegen Krankheiten ist eine wichtigeAccelerating the Growth of Young Pets' " and protection against disease is also an important one
Aufgabe. Die wirtschaftliche Bedeutung einer raschenTask. The economic importance of a rapid
Waehstunisgeschwindigkeit ist sehr groß, besonders bei soWaiting speed is very fast, especially with this
rasch wachsenden Haustieren wie Geflügel, zum Beispiel Hühner, Iruthtihnern* und Entenküken. Je rascher das Wachstum ist, desto größer let der Putteranteil, derrapidly growing domestic animals such as poultry, for example chickens, chicken and ducklings. The faster that Growth, the greater let the putter share, the
in Fleisch umgewandelt wird. Es 1st ferner wünschenswert, Krankheiten bei Küken zu verhindern. Aus diesen Gründen wurde bereits vorgeschlagen, verschiedene Schmalband^a/fcibiptioa, zum Beispiel Penicillin, Bacitracin und Streptomycin, undis converted into meat. It is also desirable to prevent disease in chicks. For these reasons, various narrow band ^ a / fcibiptioa, for example penicillin, bacitracin and streptomycin, and
009842/198 4 original inspected009842/198 4 originally inspected
Breitbandantibiotica, sum Eeispiel Tetracyclin, Oxytetracycli oder Chlortetracyelin zu verwenden. \Ienn diese Verbindungen in geeigneten llengen mit Tierfuttermitteln vormischt v/erden, fördern sie tatsächlich ir, manchen Fällen die Gewichtszunahme und bieten ferner Unterstützung beim Schutz gegen Infektionen. Trotz der bereits erzielten Fprtschritte sind solche Mittel aber noch verbesserungsbedürftig. Broad spectrum antibiotics, such as tetracycline, oxytetracycline or chlortetracyeline, can be used. When these compounds are premixed in appropriate amounts with animal feeds, they actually promote weight gain, in some cases, and also help protect against infection. Despite the progress that has already been made, such means are still in need of improvement.
Überraschenderweise wurde nun ein -Tierfuttermittel gefunden, das die üblichen nährstoffsaßig ausgeglichenen Putterbestand teile und eine wirksame Menge von Antibioticum AM 574 als neuen wachstumsfördernden Zusatz enthält.Surprisingly, an animal feed has now been found the usual nutritionally balanced putter ingredients and an effective amount of antibiotic AM 574 as contains new growth-promoting additive.
Im Rahmen der Erfindung liegen verdünnte Formen, rohe Konzentrate und kristalline Formen des Antibiotieums. Diese neuen Produkte sind gegen zahlreiche Mikroorganismen, darunter grampositive Bakterien, wirksam. Das neue Antibioticum unterscheides sich aufgrund seiner Wirkung auf bestimmte Mikroorganismen in Verbindung mit seinen chemischen und physikalischen Eigenschaften von bisher beschriebenen Antibiotica. ■Within the scope of the invention are thinned forms, raw Concentrates and crystalline forms of the antibiotic. These new products are effective against numerous microorganisms, including gram-positive bacteria. The new antibiotic differs due to its effect on certain microorganisms in connection with its chemical and physical properties of antibiotics described so far. ■
Das neue Antibioticum, dem die Bezeichnung AM 374 gegeben wurde, bildet sich während der Züchtung eines neuen Streptomyceten, der aus einer aus Utah stammenden Bodenprobe isoliert wurde, unter gesteuerten Bedingungen. Eine lebensfähige Kultur des neuen Mikroorganismus wurde bei der Kulturensammelstelle Culture Collection Laboratory, Northern Utilization Research and Development Divison, United States Department of Agriculture, Peoria-Illinois hinterlegt und in deren ständige Kulturensammlung eingereiht.The new antibiotic, named AM 374, is formed under controlled conditions during the cultivation of a new streptomycete isolated from a soil sample from Utah. A viable culture of the new microorganism was deposited with the Culture Collection Laboratory, Northern Utilization Research and Development Divison, United States Department of Agriculture, Peoria-Illinois and included in their permanent culture collection .
2/1984 BAD 2/1984 BATH
Sie ist von dieser Hinterlegungsstelle unter der Hinter-It is available from this depository under the deposit
3582 für jedermann erhältIieh..3582 for everyone receives you ..
Die -BGSchreibung und Identifizierung dieses neuen Mikroorganismus, der auch in der Kulturensanimlung der Lederle Laboratories, Pearl Eiver, Uew York gehalten wird, wurde von Dr. H. D. Iresner, dem Experten dieser Laboratorien, durchgeführt.The -BG description and identification of this new microorganism, which is also used in the cultivation of the Lederle Laboratories, Pearl Eiver, Uew York by Dr. H. D. Iresner, the expert in these laboratories, carried out.
Die Kulturmerlanale, physiologischen Merlanale und morphologischen Merkmals der Kultur wurden nach den Methoden ermittelt, die von Shirling et al., ^/""Methods for Characterisation of Streptomyces Species", Internat. Journ. of. Syst. ^ Bacteriol. 16: 313-340,(1966)J beschrieben vnirden. Die für die Untersuchung verwendeten Medien wurden aus den Medien gewählt, die von Pridham et al., ^f11A Selection of Media for Maintenance and' Taxonomic Study of Streptomyces", · Antibiotics Annual (1956 - 1957), S. 947 - 953 J für die Züchtung von Streptomyceten empfohlen werden. Einzelheiten sind in den Tabellen I bis IV enthalten, und eine aligemeine Beschreibung der Kultur ist nachstehend angegeben. Unterstrichene Parbbezeichnungen wurden aus Jacobson et al,, /""Color Harmony Manual" 3· Aufl. (T948) J entnommen.The culture merlanals, physiological merlanals and morphological characteristics of the culture were determined according to the methods described by Shirling et al., ^ / """Methods for Characterization of Streptomyces Species", Internat. Journ. Of. Syst. ^ Bacteriol. 16: 313- 340, (1966) J. The media used for the study were chosen from the media described by Pridham et al., ^ F 11 A Selection of Media for Maintenance and 'Taxonomic Study of Streptomyces ", Antibiotics Annual (1956 - 1957), pp. 947 - 953 J for the breeding of Streptomycetes. Details are given in Tables I through IV and a general description of the culture is given below. Underlined Parb designations were taken from Jacobson et al "/""Color Harmony Manual" 3rd edition (T948) J.
: Wachstum : Growth
Auf den meisten Medien mäßig, auf Kartoffel-Dextrose-Agar gut; auf Czapek-Iiösung-Agar schwach. ■*-"'.Moderate on most media, on potato dextrose agar Well; weak on Czapek solution agar. ■ * - "'.
Luftmycel auf den meisten Medien weißlich; wirft in Sporulationsgebieten elfenbeinfarben Ivory (2 dt) bis hellelfenbeinfarben Lt. Ivory (2 ca). Aerial mycelium whitish on most media; throws in sporulation areas ivory colored Ivory (2 dt) to light ivory colored Lt. Ivory (2 approx).
009842/1984009842/1984
BAD ORIGINAL.BATH ORIGINAL.
Lößl.iehe P1.rrraenteLoessl see P1.rrraente
Auf verschiedenen Medien gelblich.-; keine piginenfb.ildung auf Czapek-Lösung-, Asparagin-Oextrose- und anorganische Salze-Stärke-Agar.Yellowish on different media. no pigin color formation on czapek solution, asparagine oextrose and inorganic Salts and starch agar.
?ar"be der Literseite? work on the liter side
Auf den meisten Medien in gelblichen Tönungen. I) Verschiedene physiologische Reaktionen On most media in yellowish tones. I) Various physiological responses
Nitrate werden in organischer Kitratbrühe nicht zu Nitriten reduziert; vollständige Verflüssigung von Gelatine in 7 Tagen; keine Melaninbildung auf Pepton-Eisen-Ägar. Verwertung von Kohlenstoffquellen nach der Methode von • Pridham et al., /*J. Baot. 56: 107-TU, (1948) Vi mittlere biö gute Verwertung von 1-Arabinose, d-Fructose, i7lnosit, Lactose, d-Mannit, d-Melibiöse, Salicin, d-Trehalose, d-Xylooe; schlechte bis keine Verwertung von 1-Rhamnose, Adonit, d-Mclezitose, d-Raffinose und Saccharose.'Nitrates are not reduced to nitrites in organic kitrate broth; complete liquefaction of gelatin in 7 days; no melanin formation on peptone-iron-agar. Utilization of carbon sources according to the method of • Pridham et al., / * J. Baot. 56: 107-TU, (1948) Vi average bio-good utilization of 1-arabinose, d-fructose, i7inositol, lactose, d-mannitol, d-melibiose, salicin, d-trehalose, d-xylooe; poor to no utilization of 1-rhamnose, adonit, d-meclezitose, d-raffinose and sucrose. '
ι Kikromorpholigie ι Micromorphology
Luftmycel spärlich, zeigt lange verschlungene und gev^ellte Ketten von elliptischen bis länglichen Sporen mit Abmessungen von 0,5 bis 0,6ii . χ 1,0 bis 1,3 αι.. Sporenoberfläche • glatt (durch Elektronenmikroskopie bestimmt).Aerial mycelium sparse, shows long intertwined and convoluted chains of elliptical to elongated spores with dimensions from 0.5 to 0.6ii. χ 1.0 to 1.3 αι .. spore surface • smooth (determined by electron microscopy).
Aufgrund der beobachteten allgemeinen Charakteristica ist der Mikroorganismus ein Vertreter des Genus Streptomyces. Die Kultur WRRL 3582 wurde mit allen zugänglichen Kulturen anderer Streptomyceten verglichen, die ähnliche grundlegende taxonomisohe Merkmale aufweisen.« Zwei Species Due to the general characteristics observed, the microorganism is a member of the genus Strepto myces. The WFD 3582 culture was compared to all accessible cultures of other Streptomycetes that share similar basic taxonomic characteristics. ”Two species
009842/1984009842/1984
BAD OBIGiNALBAD OBIGiNAL
hatten mehrere Merlanale mit HEEL. 3532 gemeinsam. Als jedoch die LiteraturbesQhreibungen dieser verwandten Species untersucht wurden, wurden einige grundlegende Unterschiede gefunden. Diese sind in Tabelle Y angegeben.Außer diesen Unterschieden zeigt UEPJj 3582 allgemein ein deutlich begrenzteres Wachstum auf den meisten Medien und seine Sporualtlcnist gewöhnlich spärlich.had several Merlanale with HEEL. 3532 common. However, as the literature descriptions of this related species were examined, some fundamental differences were found. These are given in Table Y. Besides these UEPJj 3582 generally shows a clear difference more limited growth on most media, and its sporulus is usually sparse.
Aus Tabelle Y ist zu ersehen, daß die Sporenmorpholögie von ÜBEL 3582 zum Rectus-3?lexibils-Iyp nach Pridham et al., /"Appl. Microbiol. 6: 52-79, (1958)J/ gehört, während die Sporenmorphologie der beiden anderen Species zum Spira-Typ gehört. Dies ist ein grundsätzlicher Unterschied, der schon allein zur Unterscheidung zwischen den Organismen genügt. Wenn man dazu noch die anderen angegebenen Unterschiede berücksichtigt, ist der Abstand des Organismus NRRl 3582 von. den anderen Organismen so groß, daß er als eigene Species anzusehen ist.From Table Y it can be seen that the spore morphology of UBEL 3582 belongs to the Rectus-3? Lexibils-Iyp according to Pridham et al., / "Appl. Microbiol. 6: 52-79, (1958 ) J / , while the spore morphology of the the other two species belong to the Spira type. This is a fundamental difference which alone suffices to distinguish between the organisms. If one also takes into account the other specified differences, the distance between the organism NRR 3582 and the other organisms is so great that that it is to be regarded as a species in its own right.
Aufgrund der Elfenbeinfarbe der Sporen, die von dem neuen Mikroorganismus erzeugt werden, wird der Name Streptomyces eburosporeus n.s. als geeigneter beschreibender Beiname vorgeschlagen. .Due to the ivory color of the spores produced by the new microorganism are generated, the name Streptomyces eburosporeus n.s. as a more suitable descriptive Suggested nickname. .
009842/1984 bad 0R(G1NAL 009842/1984 b ad 0R (G1NAL
Inkubation: 14 TageIncubation: 14 days
Temperatur: 28Temperature: 28
Mediummedium
Wachstumgrowth
Luftmycel und/oder SporenAerial mycelium and / or spores
lösliches
Pigmentsoluble
pigment
Farbe der
UnterseiteColor of
bottom
BemerkungenRemarks
Czapek*s Uosung-Agar Czapek * s solution agar
(O(O
s chwaehs chwaeh
Luftmycel weii31ich, wird elfenbeinfarben (Ivory (2 db)) .' bis hell elfenbeinfarben (Lt. Ivory(2 ca)) in Sporiiationszonen. Sporulation schwachAerial mycelium weii31ich, becomes ivory (Ivory (2 db)). ' to light ivory-colored (according to Ivory (2 ca)) in sporulation zones. Weak sporulation
keinesnone
hellmelonengelb
(Lt. Melon
Yellow
(3 ea))pale melon yellow
(Lt. Melon
Yellow
(3 ea))
Wachstum begrenztLimited growth
*^ Asparagin-Eex-* ^ Asparagine-eex-
_* trose-Agar ■CD_ * trose agar ■ CD
mäßigmoderate
Luftmycel
spärlichj
rulatj onAerial mycelium
sparsej
rulatj on
weißlich, keine Spo-whitish, no spo
keinesnone
■bambusfar-■ bamboo
benben
(Bamboo(Bamboo
Wachstum begrenzt, Kolonienrän der gezacktGrowth limited, jagged colonies
Hickey undHickey and Tresner'sTresner's AgarAgar
. mäßig. moderate
Luftmycel weißlich, wird elfenbeinfarben (Ivory (2 db)) bis .hellelfenbeinfarben (Lt. Ivory (2 ca)) in Sporulationszonen. Sporulation schv/achAerial mycelium whitish, turns ivory in color (Ivory (2 db)) to .light ivory colored (Lt. Ivory (2 ca)) in Sporulation Zones. Sporulation schv / ach
gelblich;
schv/achyellowish;
schv / ach
hellborn- i Oberflächen-hellborn- i surface-
s't einfärben wachs turns't coloring wax turn
. (Lt.Amor > wargenför-(3 ic)) j . (According to Amor> wargenför- (3 ic)) j
'OO Ca»'OO Ca »
Tabelle I (Forts.) Table I (cont.)
Mediummedium
Wachstumgrowth
Luftmyeel und/oderLuftmyeel and / or
SporenSpurs
lösliches
Pigmentsoluble
pigment
Farbe der UnterseiteColor of the underside
BemerkungenRemarks
Hefeextrakt-Agar Yeast extract agar
mäßigmoderate
LuftEycel weißlieh, spjurenvreise SporulatiönLuftEycel Weißlieh, spjurenvreise Sporulation
gelblich;
schwachyellowish;
weak
hellbern— steinfärben (Lt, Arnberlight amber stone color (Lt, Arnber
Oberflächesurface
.runzelig.wrinkled
Küsters Hafer- mäßig
flocken-AgarKüsters oat-like
flake agar
Luftmycel weißlich, wird elfenbeinfarben
(Ivory (2 db))bia
hellelfenbeinfarben (It.Ivory (2 ca)) in
Sporulationszonen
Spnrulation s chwach gelblichbraun;
schv;achAerial mycelium whitish, turns ivory (Ivory (2 db)) bia
light ivory color (It.Ivory (2 ca)) in sporulation zones
Bloating weakly yellowish brown;
schv; ach
helliaelonengclb. (Lt. Melon Yellov/ (3 ea))helliaelonengclb. (Lt. Melon Yellov / (3 ea))
^ Stärkehydrolyse ^ Starch hydrolysis
Tomatenpaste-Eafermehl-.
AgarTomato paste-eafer meal-.
Agar
mäßigmoderate
Lyftmyeel weißlich, wird elfenbeinfarben (Ivory (2 db)) bis hellelfenbeinfarben (Lt. Ivory (2 ca)) in Sporulationszonen Sporulatiön chwach orangegelb; Lyftmyeel whitish, becomes ivory colored (Ivory (2 db)) to light ivory colored (Lt. Ivory (2 ca)) in sporulation zones Sporulation pale orange-yellow;
mäßigmoderate
hellbernsteinfarben (Lt. Amber (3 ic))light amber (Lt. Amber (3 ic))
Oberfläche vfarsigSurface vfarsig
Kar-tof f el-Dextrose- Kar-tof el-Dextrose-
gutWell
Luftmycel weißlich,spärlich, wird elfenbeinfarben (Ivory < 2 db).) bis hellelfenbein- j farben (Lt. Ivory(,2 ca)) in j Spor.ulatiönszon.en. Sporn- j !ation s chvrach fAerial mycelium whitish, sparse, becomes ivory (Ivory < 2 db).) To light ivory j-colored (Lt. Ivory (, 2 ca)) in j Spor.ulatiönszon.en. Spur j! Ation s chvrach f
orangegelb; orange yellow;
mäßigmoderate
hellbernsteinfarben (Lt. Amber (5 Ic))light amber (Lt. Amber (5 Ic))
Stärkehydrolyse schv/ach.Starch hydrolysis schv / ach.
Kolonienoberfläche gerunzelt bis rissigColony surface wrinkled to cracked
Tabelle (Ports.)Table (Ports.)
] SporenGrowth aerial mycelium and / or
] Spores
lich, spurenweise Sporu-
lationAerial mycelium whitish, sparse
lich, traces of sporu-
lation
Pigmentsoluble
pigment
Farbe der
Unterseite"" ... -.
Color of
bottom
Ag arBennett'S-
Ag ar
mäßig 1
moderate
Luftmycel weißlich, wird
elfenbeinfarben (Ivory
(2 db)) bis hellelfenbein- .
farben (Lt. Ivory (2 ca))
in Sporulationszonen.
Sporulation schwach•
Aerial mycelium is whitish
ivory-colored (Ivory
(2 db)) to light ivory.
colors (according to Ivory (2 ca))
in sporulation zones.
Weak sporulation
ischwachyellowish;
is weak
steinfarben
(Lt., Amber
(3 ic))light amber
stone colored
(Lt., Amber
(3 ic))
gerunzelt
bi.s
rissig .
■surface
wrinkled
until
cracked.
■
sche Salze-
Stärke -Agarinorganic
cal salts
Starch agar
1
1
■none
1
1
■
gelb
(Lto Melon
Yellow
(3ea))melon
yellow
(Lto Melon
Yellow
(3ea))
Kicromorpliologie von Streptomyces eburosporeus η. s. NRRL 3582Kicromorpliology of Streptomyces eburosporeus η. see NRRL 3582
Mediummedium
lAiftmycel und/oder Sporenketten« stcukturlift mycelium and / or spore chains " structure
SporenformSpore shape
Sporengröße Spore size
Sporenoberfläciie Spore surface
Küster'Eaferflocken-AgarKüster's oatmeal agar
Iiuftmycel spärlich, bildet lange ▼erscblungene und gewellte Sporenketten Iiuftmycel sparse, forming chains long ▼ erscblungene and corrugated spores
Elliptisch
bis länglich Elliptical
to elongated
Sporen
0,5-0,6/USpurs
0.5-0.6 / rev
χ
1,0-1,3/1χ
1.0-1.3 / 1
glatt (durchsmooth (through
Ilektronen-Ilectronic
microslcopiemicroslcopie
bestirnt) ·starred)
Yerschiedene Various physiologische Reaktionen von Streptomyces eburosporeus n.s. NERL 3582physiological reactions of Streptomyces eburosporeus n.s. NERL 3582
iEeHperatur: .28 0CiEeHperatur: .28 0 C
O CO OOO CO OO
toc»toc »
dauerduration
tratbrühekick broth
tratbrühekick broth
AgarPeptone iron.
Agar
O, IO, I.
κ: cdκ: cd
OOOO
C-Quellen-Vorv/ertungsspektrum von Streptomyces C-source pre-consumption spectrum of Streptomyces
eburosporeus eburosporeus n.s. n.s. rTRRL 3582rTRRL 3582
C"-QuellenC "sources
AdonitAdonit
1-Arabinose · d—Fructose i-Inosit -.'.-■ Lactose1-arabinose · d-fructose i-inositol -.'.- ■ lactose
d-Mannlt d-Eelezitose d-Melibiose d-Raffinose 1-Thainnose Salicind-Mannlt d-Eelezitose d-melibiosis d-raffinose 1-thainnose Salicin
Saccharose d-Trehalose "■ d-Xylose Dextrose NegativkontrolleSucrose d-trehalose "■ d-xylose dextrose negative control
5-gute Verwertung 2-mittlere Verwertung5-good recovery 2-medium recovery
Inkubation: 10 Tsge Temperatur; 28 TageIncubation: 10 Tsge temperature; 28 days
3
23
2
.3 ■.3 ■
0 .0.
: 1 . ■■■■.'-: 1 . ■■■■ .'-
3 ;3;
0 ·0 ·
i.-schleclite Verv/ertung 0-keine Verwertungi.-bad waste 0-no recovery
009842/1984009842/1984
BAD ORlGJNALBAD ORlGJNAL
Vergleich von Streptomyces NRRL 35&2 mit S. albidoflavus und S. odorifer Comparison of Streptomyces NRRL 35 & 2 with S. albidoflavus and S. odorifer
ca D O 3D Q ca DO 3D Q
w—J*w — J *
Streptomyces ITRRLStreptomyces ITRRL
S. albidoflavusS. albidoflavus
S. odoriferS. odorifer
sporentragene Ver
zweigungenAerial mycelium and / or j
spore-carrying ver
branches
gev;ellt und ver
schlungenLong sporophores,
gev; ellt and ver
looped
bilden Spiralen \
:Sporophores short,]
form spirals \
:
gerade, verzweigt,
bilden SpiralenLong sporophores,
straight, branched,
form spirals
länglichelliptical "to
elongated
flüssigungGelatin ver
liquid
sigungcomplete liquefaction
approval
flüssigungrapid ver
liquid
flüssigungslow ver
liquid
gelblichmainly
yellowish
bräunlichmainly
brownish
paragin-Dextrose-
AgarGrowth on as-
paragin-dextrose-
Agar
mycel weißlich, spär
lichGrowth yellowish; Air-
mycelium whitish, sparse
lich
Luftmycel wird
weißlich-gelbGrowth brown;
Aerial mycelium will
whitish-yellow
bis bräunlich.
Luftmycel reichlich,
cremefarbenCream-colored growth
to brownish.
Aerial mycelium abundant,
cream colored
OO CO OO CO
1 I I1 I I
- 13 -- 13 -
Es wird hervorgehoben, daß die Erfindung zur Produktion des neuen Antibioticums nicht auf diesen bestimmten Mikroorganismus oder auf Mikroorganismen beschränkt ist, die die vorstehenden zur Erläuterung angegebenen Wachsturnscharakteristica und mikroskopischen Charakteristica vollständig erfüllen.. Im Rahmen der Erfindung liegt vielmehr auch die Verwendung von Hutanten, die aus dem beschriebenen Organismus durch verschiedene Maßnahmen wie Röntgenbestrahlung, Ultraviolettbestrahlung, Behandlung mit Stickstoff lost, Phageneinwirkung und dergleichen erhältlich sind, It is emphasized that the invention for the production of the new antibiotic does not target this particular microorganism or limited to microorganisms that have the growth characteristics given above for illustrative purposes and fully meet microscopic characteristics .. Rather, within the scope of the invention is also the use of Hutantes resulting from the described Organism can be obtained by various measures such as x-ray irradiation, ultraviolet irradiation, treatment with nitrogen dissolves, phage exposure and the like,
.Die Züchtung des Organismus S. eburosporeus kann, in einer Vielzahl von flüssigen Kulturmedien durchgeführt werden. Medien, die zur Produktion des neuen Antibioticums geeignet sind, enthalten eine assimilierbare Kohlenstoffqueile, zum Beispiel Stärke, Zucker, Melasse, Glycerin und dergleichen, eine assimilierbare Stickstoffquelle, zum Beispiel Protein, Proteinhydrolysate Polypeptide, Aminosäuren, Maiaquellwaaser und dergleichen, und anorganische Anionen und Kationen, zum Beispiel Kalium, Natrium, Calcium, Sulfat, Phosphat, Chlorid und dergleichen. Spurenelemente wie Bor, Molybdän, Kupfer und dergleichen werden als Verunreinigungen anderer Beetandteile der Medien zugeführt. Für eine Belüftung in Tanks und Flaschen wird durch Durchieiten von steriler Luft durch das Fermentationsmedium oder auf dessen Oberfläche gesorgt. Sine weitere Durchiaiaohung in Tanke erfolgt mit Hilfe mechanischer Rühreinrichtungen. !lach Bedarf kann ein Entaohäumungemittel, zum Beispiel 1 ^ Octadecanol in SchmalzÖl, zugeeetzt werden. The cultivation of the organism S. eburosporeus can be carried out in a variety of liquid culture media. Media which are suitable for the production of the new antibiotic contain an assimilable carbon source, for example starch, sugar, molasses, glycerol and the like, an assimilable nitrogen source, for example protein, protein hydrolysates, polypeptides, amino acids, corn swell and the like, and inorganic anions and cations , for example, potassium, sodium, calcium, sulfate, phosphate, chloride and the like. Trace elements such as boron, molybdenum, copper and the like are added to the media as impurities in other constituent parts. Ventilation in tanks and bottles is provided by passing sterile air through the fermentation medium or on its surface. Mechanical stirring devices are used to continue through the storage in tanks. If necessary, a de-haze agent, for example 1 ^ octa decanol in lard oil, can be added.
- 14 Inokulurahe r s t el lung - 14 Inoculum preparation
Ein Schüttelflaschen-Inokulum von S. eburosporeus v/ird durch Beimpfen von 100 ml sterilen flüssigen Mediums in ml'-Kolben mit von einer Agarschrägkultur des Stamms abgeschabten .oder abgewaschenen Sporen bereitet. Gewöhnlich v/ird folgendes -Medium verwendet.A shake bottle inoculum of S. eburosporeus v / ird by inoculating 100 ml of sterile liquid medium into ml 'flask with spores scraped off or washed off from an agar slant culture of the strain. Usually the following will occur -Medium used.
ι .ι.
Melasse . .20 gMolasses. .20 g
Glucose .....10 gGlucose ..... 10 g
Bactopepton 5 gBactopeptone 5 g
Wasser ad 1 000 mlWater to 1 000 ml
Die Kolben werden bei einer Temperatur von 25 bis 29 °C, vorzugsweise 28°C, inkubiert und auf einer Eotationsschüttelvorrichtung 30 bis 48 Stunden intensiv bewegt. Diese 100 ml Inokua werden zum Beimpfen von 1 1- und 12 1-Ansätzen des gleichen Mediums in 2 1- und 20 1-Glasfermentern verwendet. Das Inokulum wird 30 bis 48 Stunden wachsen gelassen und dabei mit steriler Luft belüftet. Diese Inokulumansätze werden zum Beimpfen von Tankfermentern verwendet.The flasks are kept at a temperature of 25 to 29 ° C, preferably 28 ° C, incubated and on an eotation shaker Intensive exercise for 30 to 48 hours. These 100 ml Inokua are used to inoculate 1 1- and 12 1 batches of the same medium in 2 1 and 20 1 glass fermenters used. The inoculum is allowed to grow for 30 to 48 hours while aerating with sterile air. These Inoculum approaches are used to inoculate tank fermenters.
' ' TankfermentationTank fermentation
Pur die Produktion des Antibioticums in Tankfermentern . wird vorzugsweise das folgende Fermentationsmedium verwendet. Purely the production of the antibiotic in tank fermenters. the following fermentation medium is preferably used.
Soyabohnenmehl .........10gSoybean meal ......... 10g
Gerelose 10 g 'Gerelose 10 g '
Natriumchlorid ................. 5gSodium Chloride ................. 5g
Calciumcarbonate.*.. 1gCalcium carbonate. * .. 1g
Distillers' Solubles aus Mais.** 5 gDistillers' Solubles from Corn. ** 5 g
Wasser ad 1000 mlWater to 1000 ml
Jader Tank wird mit 3 bis 10 $ des wie oben be schrieb en hergestellten Inokulums beimpft. Die Belüftung erfolgt mit einer Geschwindigkeit'von 0,5 bis 1,0 1 steriler luft pro Liter Brühe und pro Minute, und die Fermentationsmischung wird durch einen Rührer, der mit 200 bis 400 Umdrehungen pro Minute betrieben wird, gerührt. Die Temperatur wird bei 25 bis 29°C, gewöhnlich bei 28°C, gehalten» Gewöhnlich wird die Fermentation 65 bis 90 Stunden lang durchgeführt, worauf die Maische geerntet wird.Jader Tank comes with $ 3 to $ 10 of the above prepared inoculum. The ventilation takes place at a rate of 0.5 to 1.0 1 sterile air per liter of broth and per minute, and the fermentation mix is stirred by a stirrer which is operated at 200 to 400 revolutions per minute. The temperature is maintained at 25 to 29 ° C, usually 28 ° C » The fermentation is usually carried out for 65 to 90 hours, after which the mash is harvested.
Nach beendeter Fermentation wird die fermentierte Maische, die das erfindungsgemäße Antibioticum enthält, zur Entfernung des Kyeels filtriert, vorzugsweise bei pH 6. Zur Unterstützung der Filtration kann Diatomeenerde oder eine andere übliche Filterhilfe verwendet werden. Normalerweise wird der Mycelkuchen mit Wasser gewaschen und das Waschwasser mit dem Filtrat vereinigt. Die antibiotische Ak- ,-tivität wird an Aktivkohle Darco G-60 oder einer anderen geeigneten Adsorptionskohle adsorbiert, wofür etwa 0,5 $ (Gewicht/Volumen) des Adsorptionsmittels verwendet werden. Die an der Aktivkohle festgehaltene antibiotische Aktivittät kann eluiert werden, indem die Aktivkohle etwa eine halbe Stunde mit 40 %-igem wässrigem Aceton, das mit konzentrierter Schwefelsäure auf pH 2 eingestellt ist, gerührt wird, wobei eine Volumenmenge an Eluiermittel verwendet wird, die etwa einem Viertel des ursprünglichen Maischevolumens entspricht. Daa Eluat wird unter vermindertem Druck zu einer wässrigen Phase eingeengt, die etwa einem Zwanzigstel seines ur- · sprünglichen Volumens entspricht. Der pH-Wert dieser Phase wird mit Bariumhydroxid auf etwa 5»5 eingestellt, und der entstehende Bariumsulfatniederschlag wird abfiltriert. Die eingestellte Lösung (FiItrat) wird weiter bis aufAfter the fermentation has ended, the fermented mash, which contains the antibiotic according to the invention, is filtered to remove the kyeel, preferably at pH 6. Diatomaceous earth or another customary filter aid can be used to aid the filtration. Usually the mycelial cake is washed with water and the wash water combined with the filtrate. The antibiotic activity is adsorbed on activated charcoal Darco G-60 or other suitable adsorbent charcoal, for which about $ 0.5 (weight / volume) of the adsorbent is used. The antibiotic activity retained on the activated carbon can be eluted by stirring the activated carbon for about half an hour with 40% aqueous acetone adjusted to pH 2 with concentrated sulfuric acid, using a volume of eluent that is about one Corresponds to quarter of the original mash volume. The eluate is concentrated under reduced pressure to an aqueous phase which corresponds to about one twentieth of its original volume. The pH of this phase is adjusted to about 5-5 with barium hydroxide, and the barium sulfate precipitate that forms is filtered off. The set solution (Filtrat) is continued except for
009842/198Λ009842 / 198Λ
BADORiOiNALBADORiOiNAL
etwa 400 bis 800 ml eingeengt. Dieses Konzentrat wird dann mit augesäuertedi Aluminiumoxid, (unter Verwendung von etwa .1/5- der Menge an Aluminiumoxid in G-rasim im Vergleich au dem Volumen des Konzentrats) aufgeschlämmt, und die Aufschlämmung wird auf eine geeignete Kolonne mit angesäuertem Aluminiumoxid (mit etwa der zehnfachen Menge des in der Aufschlämmung verwendeten Aluminiumoxids) aufgegeben, das in Methanol naß- eingefüllt wurde. Die antibioticehe Aktivität wird aus der Säule mit wässrigem Methanol (gewöhnlich 25 bis 50 $-ig) eluiert, wobei geeignete aktive Fraktionen aufgefangen werden. Die aktiven Fraktionen werden vereinigt und unter vermindertem Druck auf ein kleines Volumen (1 Liter oder weniger) eingeengt. Der pH-Wert dieses Konzentrats wird · mit Bariumhydroxid auf etwa 6,0 bis 6,5 eingestellt. Der ent- standene Bariumsulfatniederschlag wird erneut abfiltriert, und das klare Filtrat wird lyophilisiert, wodurch das {rohe Antibioticum AM 374 erhalten wird. Dieseslyophilisierte Produkt wird nun durch Säulenchromatographie an einem geeigneten Ionenaustauscherharz, aum Beispiel an CM Sephadex C-25 (H -Form), weiter gereinigt. Die Säule wird mit verdünnten Schwefelsäurelösungen eluiert werden. Das Eluat, das die antibiotische Aktivität enthält, welche sich durch Absorption bei 280 mn zeigt, wird mit Bariumhydroxid auf etwa pH 6,3 eingestellt. Der entstandene Bariumsulfatnieder schlag wird abfiltriert, und das Filtrat auf ein Volumen von etwa 30 bis 80 ml eingeengt. Der pH-Wert dieser Lösung wird mit Ionenaustauscherharz IR45 (OH*") auf etwa 8,0 eingestellt. Das Harz wird abfiltriert, und'das Filtrat \^ird unter Rühren zu einer größeren Menge Aceton gegeben. Der entstehende Niederschlag wird abfiltriert, mit Aceton gewaschen und bei mäßiger Temperatur unter vermindertem Druck getrocknet, -wodurch Antibioticum AM 374 in der Basenform erhalten wird» ' . .concentrated about 400 to 800 ml. This concentrate is then slurried with acidified alumina, (using about 1/5 the amount of alumina in G-rasim compared to the volume of the concentrate), and the slurry is transferred to a suitable column of acidified alumina (about ten times the amount of aluminum oxide used in the slurry), which was wet-filled into methanol. The antibiotic activity is eluted from the column with aqueous methanol (usually 25 to 50%) with appropriate active fractions being collected. The active fractions are combined and concentrated to a small volume (1 liter or less) under reduced pressure. The pH of this concentrate is adjusted to about 6.0 to 6.5 with barium hydroxide. The barium sulfate precipitate formed is filtered off again and the clear filtrate is lyophilized, whereby the crude antibiotic AM 374 is obtained. This lyophilized product is then further purified by column chromatography on a suitable ion exchange resin, for example on CM Sephadex C-25 (H -form). The column will be eluted with dilute sulfuric acid solutions. The eluate, which contains the antibiotic activity, which is shown by absorption at 280 nm, is adjusted to about pH 6.3 with barium hydroxide. The resulting barium sulfate precipitate is filtered off and the filtrate is concentrated to a volume of about 30 to 80 ml. The pH of this solution is adjusted to about 8.0 with ion exchange resin IR45 (OH * "). The resin is filtered off and the filtrate is added to a larger amount of acetone with stirring. The resulting precipitate is filtered off with Acetone washed and dried at moderate temperature under reduced pressure, -which antibiotic AM 374 is obtained in the base form.
009842/1984009842/1984
BAD ORIGINALBATH ORIGINAL
Eine Hikroanalysenprobe" kann durch lallen von AM 374-Base aus methanolisehern und/oder äthanolischem Aceton und 2 Tage langes Irocknen des Niederschlags im Hochvakuum (10 mm) "bei 1O0°C hergestellt werden· In dieser Weise hergestellte Antibioticum AM 374-Base enthält die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Sauerstoff, Stickstoff und Chlor in praktisch folgenden G-ewichtsprozentsätzeBiA microanalysis sample can be obtained by babbling AM 374-Base from methanolic and / or ethanolic acetone and 2 days long drying of the precipitate in a high vacuum (10 mm) "Made at 100 ° C · Made in this way Antibiotic AM 374-Base contains the elements carbon, Hydrogen, oxygen, nitrogen and chlorine in handy the following weight percentages
Kohlenstoff 54,54Carbon 54.54
Wasserstof ....................6,10Hydrogen .................... 6.10
• Sauerstoff... 29,01• Oxygen ... 29.01
Stickstoff 7,60Nitrogen 7.60
Chlor ......... 2,47Chlorine ......... 2.47
Das Produkt v/eist keinen definierten Schmelzpunkt auf und zersetzt sich langsam oberhalb 250°c. Der optische Drehwert beträgt /"a J^5 = 102° ( + 2,9°) (C= 1,045· in Waaser).The product does not have a defined melting point and slowly decomposes above 250 ° C. The optical rotation value is / "a J ^ 5 = 102 ° (+ 2.9 °) (C = 1.045 · in Waaser).
Ultraviolettmaxima treten auf beiUltraviolet maxima occur
282 mn (E* cm « 42) in säuren Lösungen · 282 mu (e3 „„ = 42,5) in neutralen Lösung en282 mn (E * cm «42) in acidic solutions 282 mu (e3 "" = 42.5) in neutral solution
f Ί CIu f Ί CIu
1 - 1 -
305 mu (E, _ * 51 »5) in baaJsohen Lösungen 3h260 mn (Ε]οη, ■ 92) " in basiohen Lösungen305 mu (E, _ * 51 »5) in basic solutions 3h260 mn ( Ε ] οη, ■ 92)" in basic solutions
Ein Infratorabsorptionsepektruni von AM 374-Base in einem wie üblich hergestellten KBr-PreßIing weist oharakteriotische Absorptionen bei folgenden Wellenlängen, angegeben In Mikron auf: 3,0, 3,45, 6,0, 6,20, 6,30, 6,67, 6,88, 7,05, 7,22, 7,35eh, 7,52, 7,67, 8,2, 8,65sh, 8,85, 9,45, 9,75, 9,90, 10,45ih, 11/07, 11,5, 12,0, 12,35, 13,35,An infrared absorption spectrum of AM 374 base in a like Commonly produced KBr molding has oharacteriotic Absorptions at the following wavelengths, expressed in microns on: 3.0, 3.45, 6.0, 6.20, 6.30, 6.67, 6.88, 7.05, 7.22, 7.35eh, 7.52, 7.67, 8.2, 8.65sh, 8.85, 9.45, 9.75, 9.90, 10.45ih, 11/07, 11.5, 12.0, 12.35, 13.35,
Die Infrarotabsorptionskurve ist in Figur 1 der "beigefügten Zeichung dargestellt.The infrared absorption curve is shown in Figure 1 of the "accompanying" Drawing shown.
Antibioticum AM 374 weist in den nachstehend angegebenen Lösungsraittelsy3teinen folgende unter Verwendung von Bacillus subtilis pH 6,0 oder Corynebaeterium xerosis als Nachweisorganismeri ermittelten R^-Werte auf:Antibiotic AM 374 has the specified below Solvent systems using the following Bacillus subtilis pH 6.0 or Corynebaeterium xerosis as detection organismeri determined R ^ values on:
Rp-Wert . Iib'sungsEiittelsystem Rp value. Iib'sungsEulelsystem
0,90 5 #-ige wässrige-NE.Cl-Lösung0.90 5 # aqueous NE.Cl solution
0,20 Pyridin 2 Teile,0.20 pyridine 2 parts,
s-Collidin 2 Teile, ' ' sec.-Butanol 1 Teil, Wasser 1 Teil.s-collidine 2 parts, '' sec-butanol 1 part, water 1 part.
Antibioticum AM 374-Base ist in Wasser und Dimethylsulfoxid leicht löslich, in Methanol mäßig löslich und in Äthanol in geringerem Maße löslich.Antibiotic AM 374 base is in water and dimethyl sulfoxide Easily soluble, moderately soluble in methanol and to a lesser extent soluble in ethanol.
Antibioticum AM 374 unterscheidet sich von anderen Antibiotica deutlich durch die oben angegebenen Charakterisierungsdaten und durch seine antimikorbielle Aktivität. Die in-vitro-antimikrobielle Aktivität dieses neuen Antibioticums und seines Hydrolyseprodukts ist in der folgenden Tabelle angegeben, die die minimale Hemmkonzentration zeigt, die zur Inhibierung des Wachstums repräsentativer Mikroorganismen in einem Nährmedium erforderlich ist.Antibiotic AM 374 clearly differs from other antibiotics in the characterization data given above and by its anti-microbial activity. The in vitro antimicrobial activity of this new antibiotic and its hydrolysis product is given in the table below, which is the minimum inhibitory concentration shows which is required to inhibit the growth of representative microorganisms in a nutrient medium.
Q4i*4*/1M4Q4i * 4 * / 1M4
Tabο11ο VITabο11ο VI
In Vitro antiraicrobielle Alctivit.üt von Antibioticum AM 374 und seinesHydrolyseprodukts * In Vitro antiraicrobial activity of the antibiotic AM 374 and its hydrolysis product *
Minimale Hemmkonzentratioiieii (mc.g/ml)Minimal inhibitory concentration (mc.g / ml)
M374Aa ΐ ibi ο 11cum
M374
produkt, Hydrolysis
product
ATCC 6538Ϊ " 1
■ ■ iStaphylococcus aureus]
ATCC 6538Ϊ "1
■ ■ i
"'""·■ ■ " ι Staphylococcus aureus STo. 69 I.
"'""· ■ ■" ι
Hose ATCC H 1.54Staphylococcus aureus ■
ATCC trousers H 1.54
Staphylococcus aureus
Smith ATCC 13709
■ !. . i
Staphylococcus aureus
Smith ATCC 13709
■!
Streptococcus pyogenes C2O3.- ■■ '■ ■. ■ ■ '·
Streptococcus pyogenes C2O3
Streptococcus' faecalis
ATCC 8043
-■-:■■- -
Streptococcus' faecalis
ATCC 8043
- ■ -: ■■ -
■3.1
■
Streptococcus sp,, nicht-
hämolytisch No. 11 ■
Streptococcus sp ,, non-
hemolytic No. 11
■ ■
6,2-
■ ■
6.2
Iytisch JTo. 80Streptococcus sp., Ss-hemo-
Iytisch JTo. 80
■6.2
■
ATCC 607 ..■■■■-... Mycobacterium smegmatis
ATCC 607 .. ■■■■ -...
>250■
> 250
Salmonella thyphosa
ATCC 6539■
Salmonella thyphosa
ATCC 6539
> 250•
> 250
PseudoBionas aeruginosa ATCC 10145Enterobacter aerogenes Ko. 75
PseudoBionas aeruginosa ATCC 10145
>250> 250
> 250
> 250> 25O
> 250
* mit Agar-Verdünnungsmethode ermittelt * determined using the agar dilution method
0 0 9842/198A0 0 9842 / 198A
Auch in vivo ist 13. 374 gegen zahlreiche grampositive Mikroorganismen, zum Beispiel Staphylococcen, Pneumococeen und Streptococcen aktiv. Damit kommt das neue Antibioticum als therapeutisches Mittel zur Behandlung von Bakterien« Infektionen bei Säugetieren, die durch solche Mikroorganismen verursacht werden, in Betracht. Es kann erwartet \*erden, daß das neue Antibioticum mit Vorteil zur Behandlung oder ' Bekämpfung solcher Infektionen durch örtliche Anwendung oder parenteral©- Verabreichung verwendet werden kann. 13. 374 is also active in vivo against numerous gram-positive microorganisms, for example staphylococci, pneumococci and streptococci. Thus, the new antibiotic comes into consideration as a therapeutic agent for the treatment of bacterial infections in mammals caused by such microorganisms. It can be expected that the new antibiotic can be used to advantage in the treatment or control of such infections by topical or parenteral administration.
ψ Die Brauchbarkeit des neuen Antibioticums läßt sich an seiner Fähigkeit, letale Systeminfektionen bei Mäusen zu bekämpfen, nachweisen, Das neue Antibioticum zeigt hohe antibakterielle Aktivität in vivo bei Mäusen gegen Staphylococcus aureus, Stamm.Smith; Staphylococcus aureus, Stamm Hose; Streptococcus pyogenes, 0203; und Diplococcus pneumoniae, SVl, wenn es als subkutane Einzeldosis an Gruppen von weiblichen Mäusen (Carworth Farms CF-1) mit einem Gewicht von etwa 20 g verabreicht wird, die intraperitoneal ■ mit einer letalen Dosis dieser Bakterien in 10 , 10°, 10 bzw. 10" Trypticase-Soya-Br.ühe (TSP)-Verdünnungen einer 5 lage-TSP-Blutkultur infiziert wurden. ψ The usefulness of the new antibiotic can be demonstrated by its ability to combat lethal systemic infections in mice. The new antibiotic shows high in vivo antibacterial activity in mice against Staphylococcus aureus, strain Smith; Staphylococcus aureus, trunk pants; Streptococcus pyogenes, 0203; and Diplococcus pneumoniae, SVl, when administered as a single subcutaneous dose to groups of female mice (Carworth Farms CF-1) weighing about 20 g, the intraperitoneally ■ with a lethal dose of these bacteria in 10, 10 °, 10 or 10 "trypticase soy broth (TSP) dilutions of a 5-layer TSP blood culture were infected.
> ■■■"--.■> ■■■ "-. ■
Die folgende Tabelle VII erläutert die in vivo-anti-The following table VII explains the in vivo anti
bakterielle Aktivität von AM 374» während die anschließende Tabelle VIII die in-vivo-ahtibakterielle Aktivität des Hydrolyseprodukts zeigt.bacterial activity of AM 374 »during the subsequent Table VIII shows the in vivo anti-bacterial activity of the hydrolysis product.
0098 42/198 4 bad0098 42/198 4 baths
φ co φ co
=5 g= 5 g
coco
rnrn
in vivo antibacterielle Aktivität von Antibioticum AH374 lebende Mäuse/ sämtliche Mäuse: 14 Tage nach Infektion in vivo antibacterial activity of antibiotic AH374 live mice / all mice: 14 days after infection
Stamm Smithaureus
Tribe of smith
Stamm Hoseaureus
Trunk pants
C203pyogenes
C203
SVlpneumoniae
SVl
▼on. den infizierten, unbehandelten Kontrollmäusen starben 95-100$ innerhalb von 5 Tagen nach Infektion. ▼ on. the infected, untreated control mice died $ 95-100 within 5 days of infection.
ax co ax co
Durch die folgenden Beispiele wird die Erfindung näher erläutert.The invention is illustrated in more detail by the following examples.
I · ■ I · ■
Inokulumherateilung Inoculum therapy
Ein typisches Medium zur Vermehrung des ersten Inokulums wird nach folgendem Rezept bereitet:A typical medium for propagating the first inoculum is prepared according to the following recipe:
Melasse 20 gMolasses 20 g
Glucose 10gGlucose 10g
0000
39 8 4 27 1 S U , °«ginal /nspected :39 8 4 27 1 S U, ° «ginal / nspected:
Die von einer Agarsehrägkultur yon S. eburosporeus abgewaschenen oder abgeschabten Sporen werden zum Beimpfen-von •zwei 500 ml Kolben verwendet, die je 100 ml des vorstehend angegebenen Mediums enthalten. Die Kolben werden auf eine Rotationssehüttelvorrichtung gestellt und 48 Stunden bei 28°C intensiv bewegt. Das erhaltene Kolbeninokulum wird in einen 19 1(5 gallon)-Glasfermenter überführt, der 12 steriles Medium enthält. Der Glasfsrmenter wird während einer Züchtungsdauer von etwa 48 Stunden mit steriler Mift belüftet, worauf sein Inhalt zum Beimpfen eines 300 1 Tankfermenters verwendet wird. . ■Those washed off from an agar shred culture of S. eburosporeus or scraped-off spores are used for inoculation-of • Two 500 ml flasks are used, each 100 ml of the above specified medium. The pistons are on a Put a rotary shaker device and agitated intensively for 48 hours at 28 ° C. The piston inoculum obtained is transferred to a 19 liter (5 gallon) glass fermenter containing 12 sterile media. The glass fermenter is during a cultivation time of about 48 hours with sterile Mift ventilated, whereupon its contents for inoculating a 300 1 tank fermenter is used. . ■
B e i s ρ i e 1 2B e i s ρ i e 1 2
Ein Fermentationsmedium wird nach folgendem Rezept bereitet: ·A fermentation medium is made according to the following recipe prepares:
Soyabohnenmehl 10 gSoybean flour 10 g
Gerelose 10gGerelose 10g
Natriumchlorid ...................... 5gSodium chloride ...................... 5g
Galciumcarbonat 1gCalcium carbonate 1g
Distillers' S,olubles aus Mais, ..5 gDistillers' S, olubles of corn, ..5 g
Wa.sser ........ ................ ad 1000 mlWater ........ ................ to 1000 ml
Das Permentationsmedium wird bei 120°C 45 bis 60 Minuten lang mit Wasserdampf mit einem Druck von 1 atu (15 psi) süerilisiert. Nach dem Sterilisieren beträgt der pH-Wert des Mediums 6,6. 300 1 steriles Medium in einem 400 1-Tankfermenter werden mit 12 1 des in Beispiel 1 beschriebenen Inokulums be-· impft, und-die Permentation.--wird bei 28°C unter Verwendung von Hodag LG—8-Ö1 als Entschäumungsmittel durchgeführt. Die Belüftung erfolgt mit einer Geschwindigkeit von 0,5The permeation medium is at 120 ° C for 45 to 60 minutes sterilized for a long time with steam at 1 atu (15 psi) pressure. After sterilization, the pH value of the medium is 6.6. 300 l sterile medium in a 400 l tank fermenter are loaded with 12 l of the inoculum described in Example 1 inoculates, and -permentation .-- is using at 28 ° C carried out by Hodag LG-8-Ö1 as a defoaming agent. the Aeration occurs at a rate of 0.5
009842/198 A009842/198 A
ί "ί "
sterilier luft pro Liter Medium und pro Minute. Das Medium wird' mit einem Rührer gerührt, der. mit 500 Umdrehungen pro Minute betrieben wird. Nach einer Fermentationsdauer von etwa 70 Stunden wird die Maisehe geerntet.sterilizing air per liter of medium and per minute. The medium is' stirred with a stirrer that. with 500 revolutions operated per minute. After a fermentation period of around 70 hours, the maize is harvested.
B e i s ρ i e 1 3 Isolierung und Reinigung B eis ρ ie 1 3 Isolation and purification
fc 300 1 fermentierte Maische werden mit etwa 2 <fo (Gewicht/Volumen) Filterhilfe (Diatomeenerde) filtriert, und der Filterkuchen wird mit etwa 30 1 Wasser gewaschen. Die fermentierte Maische wird vorher mit Natriumhydroxid auf pH 6,0 eingestellt. Die antibio.tische Aktivität in dem vereinigten Filtrat und Waschwasser wird an 900 g Aktivkohle (D,arco G-60) adsorbiert, und gefärbte Verunreinigungen werden aus der Aktivkohlesuspension durch Rühren mit etwa 30 1 40 fo-igem wässrigem Aceton entfernt. Die Aktivität wird aus der Aktivkohle durch Rühren mit 75 1 40 $-igem wässrigem Aceton, das mit konzentrierter Schwefelsäure auf pH 2,0 eingestellt ist, eluiert. Die Suspension wird filtriert, das Eluat wird unter vermindertem Druck auffc 300 liters of fermented mash are filtered with about 2 <fo (weight / volume) filter aid (diatomaceous earth), and the filter cake is washed with about 30 liters of water. The fermented mash is previously adjusted to pH 6.0 with sodium hydroxide. The antibiotic activity in the combined filtrate and wash water is adsorbed on 900 g activated carbon (D, arco G-60), and colored impurities are removed from the activated carbon suspension by stirring with about 30 1 40% aqueous acetone. The activity is eluted from the activated charcoal by stirring with 75% aqueous acetone which has been adjusted to pH 2.0 with concentrated sulfuric acid. The suspension is filtered, the eluate is reduced under reduced pressure
* etwa 4 1 wässrige Phase eingeengt und der pH-Wert wird mit Bariumhydroxid auf 5,2 eingestellt. Der Bariumsulfatniederschlag wird abfiltriert,und das Filtrat wird weiter auf etwa 700 ml eingeengt. Dieses Konzentrat wird mit ■ 100 g säurebehandeltem Aluminiumoxid aufgeschlämmt und auf eine Säule aufgegeben die mit 1 kg säurebehandeltem Aluminiumoxid in Methanol gefüllt wurde* Daa' säurebehandelte Aluminiumoxid wird durch Ansäuern einer wässrigen Aufschlämmung von Aluminiumoxid (Farbikat Merck) mit konzentrierter Schwefelsäure bis zu einem konstantem pH-Wert von 3,0, Filtrieren, Waschen mit Wasser und Methanol und Trocknen an der IiUft bereitet. Dann wird* Concentrate about 4 liters of aqueous phase and the pH is adjusted adjusted to 5.2 with barium hydroxide. The barium sulfate precipitate is filtered off and the filtrate is further concentrated to about 700 ml. This concentrate is slurried with ■ 100 g of acid-treated aluminum oxide and applied to a column containing 1 kg of acid-treated Alumina was filled in methanol * Daa 'acid treated Aluminum oxide is made by acidifying an aqueous slurry of aluminum oxide (Farbikat Merck) with concentrated sulfuric acid to a constant Prepare pH 3.0, filter, wash with water and methanol and dry on the IiUft. Then it will be
009842M984 BAD original009842M984 BAD original
die Kolonne mit 5 1 Methanol, darm, mit 60 1 50 $-igem ■ ■wässrigem Methanol und hierauf mit 10 1 25 ^-igera wässrigem Methanol eluiert» Geeignete Fraktionen., die Antibioticum AM 374 enthalten, wie durch Biotests gegen C. xerosis festgestellt wird, werden vereinigt, unter vermindertem Druck auf etwa 500 ml eingeengt und mit Bariumhydroxid auf einen pH-Wert von 6,2 eingestellt.. Der Bariumsulfatniederschlag wird abfiltriert, und das Filtrat wird lyophilisiert, wodurch 5,1 g rohes AM 374 (Reinheit etwa 30 bis 50 $>) erhalten werden.the column was eluted with 5 l of methanol, gut, with 60 l of 50% aqueous methanol and then with 10 l of 25% of aqueous methanol. Suitable fractions containing the antibiotic AM 374, such as by bioassays against C. xerosis is found, are combined, concentrated under reduced pressure to about 500 ml and adjusted to pH 6.2 with barium hydroxide. The barium sulfate precipitate is filtered off and the filtrate is lyophilized, yielding 5.1 g of crude AM 374 (purity about $ 30 to $ 50>) can be obtained.
Das auf diese Weise in einer Menge von 5,1 g erhaltene rohe AM 374 wird in 30 ml Wasser gelöst und auf eine Kolonne mit Ionenaustauscherharz CM Sephadex C-25 (H -Form) aufgegeben. Zur Zubereitung des Sephadex-Harze3 für den Ge-" brauch werden 250 g davon in etwa 3 1 Wasser aufgeschlämmt, und die Aufschlämmung wird mit konzentrierter H2SO. auf pH 2,0 eingestellt. Das überschüssige Wasser wird abdekan- diert, und das Harz wird mehrmals mit Wasser gewaschen. Die Aufschlämmung wird in eine Säule mit einem Innendurchmesser von 7,6 cm gegossen und zur Entfernung der überschüssigen Säure mit weiteren 5 I Wasser gewaschen.The crude AM 374 obtained in this way in an amount of 5.1 g is dissolved in 30 ml of water and applied to a column with ion exchange resin CM Sephadex C-25 (H form). To prepare the Sephadex resin3 for use, 250 g of it are slurried in about 3 liters of water, and the slurry is adjusted to pH 2.0 with concentrated H 2 SO. The excess water is decanted off and that Resin is washed several times with water, the slurry is poured into a column with an internal diameter of 7.6 cm and washed with an additional 5 liters of water to remove the excess acid.
Die Kolonne wird mit einem Gradienten zwischen 4 1 Wasser und 4 1 Wasser das mit konzentrierter Schwefelsäure auf pH 1 ,4 eingestellt ist, und anschließend mit weiteren 4 1 auf pH 1,4 eingestelltem Wasser eluiert; Es werden Fraktionen von jeweils etwa 100 ml aufgefangen, und die Bioaktivität (C.xerosis) und die Ultraviolettabsorption (290 mu) werden an 1- bis 100-fachen Verdünnungen dieser Fraktionen gemessen.The column is with a gradient between 4 liters of water and 4 1 water that with concentrated sulfuric acid to pH 1.4 is set, and then with a further 4 1 to pH 1.4 adjusted water eluted; Fractions of about 100 ml each are collected and the bioactivity (C. xerosis) and the ultraviolet absorption (290 mu) are from 1- to 100-fold dilutions of these fractions were measured.
Wie sich zeigt, enthalten die Fraktionen 58 bis 80 die Hauptmenge des gewünschten Antibioticuma, und diese Fraktionen werden vereinigt, Der pH-Wert dieser vereinigten Erektionen wird mit Bariumhydroxid auf 6,3 eingestellt, undAs can be seen, fractions 58 to 80 contain the majority of the desired antibiotic, and these fractions are combined. The pH of these combined erections is adjusted to 6.3 with barium hydroxide, and
-" 26 -- "26 -
das abgeschiedene Bariumsulfat wird mit EiIfe von Diatomeenerde abfiltriert. Das Piltrat wird auf etwa 200 ml eingeengt und. lyophilisiert, wodurch etwa 1,5 g rohes Antibioticum erhalten werden. Das rohe Antibioticum wird in 50 ml Wasser gelöst, und der pH-Wert der lösung wird mit Ionenaustauscherharz IR45 (OH~-Form) auf etwa 8,2 eingestellt. Die Suspension wird filtriert, und das Filtrat wird lyophilisiert. Das lyophilisierte Produkt wird in 40 ml Wasser gelöst, und das Antibioticum wird durch Zusatz'von 400 ml Aceton ausgefällt. Der kristalline Niederschlag wird abfiltriert und in einer kleinen Menge Methanol gelöst. Durch Zusatz von Aceton scheidet sich das gereinigte Antibioticum AM 374 ab und wird abfiltriert. Die Ausbeute beträgt 1,18 g. 'the deposited barium sulfate is filtered off with egg from diatomaceous earth. The piltrate is concentrated to about 200 ml and. lyophilized to give about 1.5 g of crude antibiotic. The raw antibiotic is dissolved in 50 ml of water and the pH of the solution is adjusted to about 8.2 with ion exchange resin IR45 (OH ~ form). The suspension is filtered and the filtrate is lyophilized. The lyophilized product is dissolved in 40 ml of water and the antibiotic is precipitated by adding 400 ml of acetone. The crystalline precipitate is filtered off and dissolved in a small amount of methanol. By adding acetone, the purified AM 374 antibiotic separates and is filtered off. The yield is 1.18 g. '
Eine Mikroanalysenprobe wird durch Ausfällung von wie oben erhaltenem AM 374 aus äthanolischem Aceton und 2 Tage langes Trocknen des Niederschlags im Hochvakuum (10 mm) bei 1000G hergestellt. Die Ergebnisse der chemischen Analyse dieses Produkts und die anderen physikalischen und biologischen Eigenschaften des neuen Antibioticums wurden bereits angegeben.A micro analytical sample is prepared by precipitation of long as obtained above AM 374 from ethanolic acetone and 2 days drying the precipitate in a high vacuum (10 mm) at 100 G 0. The results of the chemical analysis of this product and the other physical and biological properties of the new antibiotic have already been given.
' . Bei- spie" 1" 4.'. Example " 1" 4.
150 mg AM 374-Base werden in 60 ml warmem Methanol gelöst, worauf 1 Tropfen einer 1;1-Lösung von Methanol und konzentrierter Schwefelsäure zugesetzt wird. Der entstandene Niederschlag wird abfiltriert und mit etwas Methanol und Aceton gewaschen, wodurch 98 mg AM 374-Sulfat erhalten werden.150 mg of AM 374 base are dissolved in 60 ml of warm methanol, whereupon 1 drop of a 1; 1 solution of methanol and more concentrated Sulfuric acid is added. The resulting precipitate is filtered off and mixed with a little methanol and acetone washed to give 98 mg of AM 374 sulfate.
Alternativ wird AM 374-Sulfat durch Einstellen einer wässrigen Lösung von AM 374-Base mit Schwefelsäure auf etwa pH 6,3Alternatively, AM 374 sulfate is made by adjusting an aqueous solution of AM 374 base with sulfuric acid to about pH 6.3
und anschließende Fällung mit Aceton hergestellt.and subsequent precipitation with acetone.
Eine Mikroanalysenprobe wird durch Abscheidung,aus wässrigem Aceton und 2 Tage langes Trocknen des Niederschlags im Hochvakuum (10 mm.): bei 10Q0C erhalten, In.dieser Weise hergestelttes AM 374-Sulfat enthält die Eemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Sauerstoff, Stickstoff, Schwefel und Chlor in · praktisch folgenden G-ewichtsproze.ntsätzen: .Microanalysis of sample (mm. 10) by deposition, long from aqueous acetone and 2 days drying the precipitate in a high vacuum: receive at 10Q 0 C, In.dieser manner hergestelttes AM contains 374-sulfate, the Eemente carbon, hydrogen, oxygen, nitrogen, Sulfur and chlorine in practically the following weight percentages:.
■ Kohlenstoff 51 ,68■ carbon 51, 68
Wasserstoff ................ 5,85Hydrogen ................ 5.85
Sauerstoff 30,25Oxygen 30.25
Stickstoff .7,02Nitrogen, 7.02
Schwefel 1,36Sulfur 1.36
Der optische Drehwert beträgt £ & J ^ = 104° (- 1,8°) . (C?s-1.1075 in Wasser). Ultraviolettmaxima treten auf beiThe optical rotation value is £ & J ^ = 104 ° (- 1.8 °). (C? S-1.1075 in water). Ultraviolet maxima occur
282 mn (E1 =44) in sauren Lösungen 282 mn (E1 ■„. = 43) in neutralen Lösungen282 mn (E 1 = 44) in acidic solutions 282 mn (E 1 ■ „. = 43) in neutral solutions
305 mn (E1'0 - = 48) in basischen Lösungen305 mn (E 1 ' 0 - = 48) in basic solutions
/ · CHi . t / · CHi. t
sh260 mu (E1 _ = 85) in basichen Lösungensh260 mu (E 1 _ = 85) in basic solutions
j · CHI · j · CHI ·
Ein Infrarotabsorptionsspektrum von AM 374-Sulfat in einein.wie üblich hergestelltenKBr-Preßling weist charakteristisehe· . Absorptionen bei folgenden Wellenlängen, angegeben in Mikron auf: 3,0, 3,45, 5,75sh, 5,9Osh, 5,99, 6,03, 6,20, · 6,32, 6,67, 6,78sh, 6,87, 7,05, 7,20, 7,53, 7,65, 8,25, 8,65sh, 8,87, 9,45, 9,73, 9*88sh, 1O,45sh, 11,05,· 12,0, 12,35, 13,3, H,4. ^An infrared absorption spectrum of AM 374 sulfate in one Commonly produced KBr compact has characteristics. Absorptions at the following wavelengths, given in microns: 3.0, 3.45, 5.75sh, 5.9Osh, 5.99, 6.03, 6.20, · 6.32, 6.67, 6.78sh, 6.87, 7.05, 7.20, 7.53, 7.65, 8.25, 8.65sh, 8.87, 9.45, 9.73, 9 * 88sh, 1O, 45sh, 11.05, x 12.0, 12.35, 13.3, H, 4. ^
009842/198 4 BAD oRSGli4AL |009842/198 4 BAD ORSGLI4AL |
- 28 Beispiels ......- 28 example ......
200 mg AM 374-Base werden in 10 ml 0,1 η Salzsäure gelöst, und die Lösung wird unter vermindertem Druck auf etwa 2 ml eingeengt, wodurch sich ein zum Teil mikrokristalliner Niederschlag bildet. Dieser Niederschlag wird abfiltriert, in inöglist wenig Wasser wieder gelöst und mit Aceton wieder gefällt. Nach Abfiltrieren und Y/aschen mit etwas weiterem Aceton werden 116 mg AM 374-Chlorid erhalten.200 mg AM 374 base are dissolved in 10 ml 0.1 η hydrochloric acid, and the solution is concentrated under reduced pressure to about 2 ml, whereby a partially microcrystalline Precipitation forms. This precipitate is filtered off, redissolved in a little water and again with acetone pleases. After filtering off and washing with a little more acetone, 116 mg of AM 374 chloride are obtained.
Eine Mikroanalysenprobe wird durch Abscheidung aus wässrigem Aceton und 2 Tage langes Trocknen des Niederschlags im Hochvakuum (10 mm) bei 100uC erhalten. Auf diese Weise hergestelltes AM 374-Chlorid enthält die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Sauerstoff, Stickstoff und Chlor in praktisch folgenden Gewichtsprozentsätzen:A micro analytical sample is obtained by deposition from aqueous acetone and 2 days long drying the precipitate in a high vacuum (10 mm) at 100 u C. AM 374 chloride produced in this way contains the elements carbon, hydrogen, oxygen, nitrogen and chlorine in practically the following percentages by weight:
Kohlenstoff 52,20Carbon 52.20
Wasserstoff 6,22Hydrogen 6.22
Sauerstoff , 28,03Oxygen, 28.03
Stickstoff . 7,26Nitrogen. 7.26
Chlor 6,34Chlorine 6.34
Der optische Drehwert beträgt £&J jp = 106° (+ 2,8) (G = 1,057: in Wasser). Ultraviolettmaxima traten aufThe optical rotation value is £ & J jp = 106 ° (+ 2.8) (G = 1.057: in water). Ultraviolet maxima occurred
bei wat w
282 mu (E./ = 42) in sauren Lösungen
/ ι cm282 mu (E. / = 42) in acidic solutions
/ ι cm
282 mu (E^m = 39t5) in neutralen Lösungen. 305 mu (E1^n = 52 ) in basischen Lösungen282 mu (E ^ m = 39t5) in neutral solutions. 305 mu (E 1 ^ n = 52) in basic solutions
sh260 mu (E1^1n » 92) in basischen Lösungensh260 mu (E 1 ^ 1n »92) in basic solutions
00 9 842/198400 9 842/1984
; -■- BAD; - ■ - BATHROOM
Ein Infrarotabsorptionsspektrum von AK 574-Clilorid in einem wie üblich hergestellten KBr-Preßling weist charakteristische Absorptionen bei folgenden Wellenlängen, angegeben in Mikron, auf: 3,0, 3,27, 3,40, 5,75sh,· 5,9Osh, 5,98, 6,15, 6,28, 6,65, 6,82sh, 7,03, 7,15, 7,50i 7,65, 8,25, 8,60, 8,83, 9,42, 9,70, 9,88, 10,45sh, ".11,05, 11,9, 12,3, 13,3, U,37. An infrared absorption spectrum of AK 574-Clilorid in a KBr compact produced as usual has characteristic absorptions at the following wavelengths, given in microns: 3.0, 3.27, 3.40, 5.75sh, 5.9Osh, 5 , 98, 6.15, 6.28, 6.65, 6.82sh, 7.03, 7.15, 7.50i 7.65, 8.25, 8.60, 8.83, 9.42, 9.70, 9.88, 10.45sh, ".11.05, 11.9, 12.3, 13.3, U, 37.
Beispiele Säurehydrolyseprodukt von Examples of acid hydrolysis product of AM 374-BaseAM 374 base
1 g Antibioticum AM 374-Base wird in 7,5 ml siedendem V/asser gelöst. Nach Zugabe von 1,25 ml 5 η Salzsäure wird die erhaltene Lösung 2 bis 3 Minuten lang gekocht. Die Lösung wird mit weiteren 2 ml 5n Salzsäure versetzt, abgekühlt und filtriert. Der Niederschlag wird mit insgesamt 3 ml 5 η Salzsäure gewaschen, in Wasser wieder gelöst und zu einem Rückstand eingeengt. Diese Arbeitsweise wird noch zweimal wiederholt, worauf der Rückstand aus wässrigem Aceton abgeschieden wird. Es werden 516 mg Säurehydrolyseprodukt erhalten. 1 g of antibiotic AM 374 base is dissolved in 7.5 ml of boiling water. After adding 1.25 ml of 5 η hydrochloric acid , the resulting solution is boiled for 2 to 3 minutes. The solution is mixed with a further 2 ml of 5N hydrochloric acid, cooled and filtered. The precipitate is washed with a total of 3 ml of 5 η hydrochloric acid, redissolved in water and concentrated to a residue. This procedure is repeated twice, whereupon the residue is precipitated from aqueous acetone. 516 mg of acid hydrolysis product are obtained.
Eine Mikroanalysenprobe wird durch Abscheidung aus wässrigem Aceton und 2 lage langes Trocknen des Niederschlags im Hochvakuum (10"*^ mm) bei IQO0C erhalten. Das auf diese Weiee hergestellte AM 374-Hydrolyseprodukt enthält die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Sauerstoff, Stickstoff, und Chlor in praktisch folgenden Gewichtsprozentsätzen: A microanalysis sample is obtained by separating out aqueous acetone and drying the precipitate for 2 layers in a high vacuum (10 "* ^ mm) at IQO 0 C. The AM 374 hydrolysis product produced in this way contains the elements carbon, hydrogen, oxygen, nitrogen, and chlorine in practically the following percentages by weight:
Kohlenstoff 52,54*Carbon 52.54 *
Wasserstoff 5,81Hydrogen 5.81
Sauerstoff -25,52Oxygen -25.52
Stickstoff 8,32Nitrogen 8.32
Chlor 7,11Chlorine 7.11
Der optische Drehwert beträgt /~a_/ ^-' = -69° (1 3,6°) (C = 0,839 in Wasser)The optical rotation value is / ~ a_ / ^ - '= -69 ° (1 3.6 °) (C = 0.839 in water)
Ultraviolettmaxima treten auf bei:Ultraviolet maxima occur at:
mu (E1^ = 46) in sauren Lösungenmu (E 1 ^ = 46) in acidic solutions
280 lu (eJ"_ = 51,5) in neutralen Lösungen280 lu (eJ "_ = 51.5) in neutral solutions
/ f CIu/ f CIu
mu (E1^V =86) in basiehen Lösungen j ι cmmu (E 1 ^ V = 86) in basic solutions j ι cm
sh260 nm (E1. = H3) in basischen Lösungensh260 nm (E 1. = H3) in basic solutions
Ein Infrarotabsorptionsspektrum von AM 374-Hydrolyseprodukt
in einem wie üblich hergestellten KBr-Preßling weist charakteristische Absorptionen bei folgenden
Wellenlängen, angegeben in Mikron, auf: 3,0, 3,3Osh,
3,43, 5,75sh, 5,92sh, 6,0, 6,15sh, 6,25, 6,48sh, 6,68, 6,85, 7,03, 7,18, 7,5, 7,67, 7,95sh, 8,30,
8,55sh, 8,86, 9,15, 9,45, 9,9, TQ,45siir 11,1, 11,55sh,
11,9, 13,3, 14,4. ...An infrared absorption spectrum of AM 374 hydrolysis product in a KBr compact produced as usual has characteristic absorptions at the following
Wavelengths, given in microns, on: 3.0, 3.3Osh, 3.43, 5.75sh, 5.92sh, 6.0, 6.15sh, 6.25, 6.48sh, 6.68, 6, 85, 7.03, 7.18, 7.5, 7.67, 7.95sh, 8.30, 8.55sh, 8.86, 9.15, 9.45, 9.9, TQ, 45sii r 11.1, 11.55sh, 11.9, 13.3, 14.4. ...
INSPECTEDINSPECTED
JIIIIiIIMlIJIIIIiIIMlI
B e i s ρ i e 1 7B e i s ρ i e 1 7
gemahlener gelber Mais 514ground yellow corn 514
Soyabohnenölinehl (44 fi) 300Soybean Oil Oil (44 fi) 300
Kaisglutenmehl . 50Kaisgluten flour. 50
Menhaden-PischEehl (60fo) " 50Menhaden-PischEehl (60fo) "50
Pett ■ 40Pett ■ 40
entwässertes Alfalfamehl (17$) 20dehydrated alfalfa flour ($ 17) 20
gemahlener Kalkstein 5ground limestone 5
Dicalciumphosphat 12Dicalcium phosphate 12
Natriumchlorid 3Sodium chloride 3
Spurenmirierale - 1Trace Miriers - 1
Vitamxnvormischung 5Vitamin premix 5
Spurenminerale sind Mangan (6,CfO ,Jod (0,12$),Trace minerals are manganese (6, CfO, iodine ($ 0.12),
Eisen (2,Of9), Kupfer (0,2%), Zink (2,0/0. Cobalt (0,02c/o)Iron (2, Of 9 ), copper (0.2%), zinc (2.0 / 0. Cobalt (0.02 c / o)
und Calciumand calcium
2
Vitaminvormischung pro kg Putter enthält 125 mg butyliertes Hydroxytoluol, 500 mlDL-Methionin, 3300 I.U.
Vitamin A, 1100 I. U. Vitamin D5, 2,2 I.U. Vitamin E,
11 meg. Vitamin B-p» 4,4 mg Riboflavin, 27,5 mg Niacin,
8,8 mg Pantothensäure, 500 mg Cholinchlorid, 1,43 mg
Polsäure und 1,1 mg MenadionnatriumbisulfIt auf 5 g gemahlenen gelben Mais. ·
2
Vitamin premix per kg putter contains 125 mg butylated hydroxytoluene, 500 ml DL-methionine, 3300 IU vitamin A, 1100 IU vitamin D 5 , 2.2 IU vitamin E, 11 meg. Vitamin Bp »4.4 mg riboflavin, 27.5 mg niacin, 8.8 mg pantothenic acid, 500 mg choline chloride, 1.43 mg poly acid and 1.1 mg menadione sodium bisulfite on 5 g ground yellow corn. ·
Von einem Händler bezogene Eintagsküken (6 männliche und 6 weibliche Tiere pro Gruppe) werden in beheizten Brutkästen untergebracht und in einem Kükenraum gehalten, der bei etwa 240C gehalten wird. Alle Kükengruppen werden zu Beginn der Tests und an ihrem Ende nach 20 Tagen gewogen. Putter und Wasser werden ad libitum zur VerfigingFrom a merchant-related day-old chicks (6 male and 6 female animals per group) are housed in heated brooders and held in a chick space which is maintained at about 24 0 C. All groups of chicks are weighed at the start of the tests and at the end after 20 days. Putter and water are available ad libitum
0098Ä2/198A0098Ä2 / 198A
gestellt. Für sämtliche Tests wird das oben beschriebene Grundfutter verwendet. Die Ergebnisse werden ermittelt für (a) unbehandelte Kontrollen, (b) 10 ppm AM 374, (c) 2 ppm AM 374. Die erzielten Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle aufgeführt, aus der zu ersehen ist, daß mit beiden Behandlungskonzentrationen von AM 374 das Wachstum der behandelten Tiere beträchtlich verbessert wird.posed. The forage described above is used for all tests. The results are determined for (a) untreated controls, (b) 10 ppm AM 374, (c) 2 ppm AM 374. The results obtained are in the the following table, from which it can be seen that with both treatment concentrations of AM 374 the Growth of the treated animals is considerably improved.
009842,198*009842,198 *
Wachstum und Putterverwertung von Küken bei Verabreichung von AM 374H enthaltendem Futter Growth and putter conversion of chicks when given feed containing AM 374H
FutterzusatzFeed additive
Gewichts- Putter/ VerhältnisWeight putter / ratio
Menge Ver- zunähme (g), Gewichtssu- Überlebende (ppm) such 0-20 «Tag nähmeAmount of gain (g), weight survivors (ppm) look for 0-20 «day would take
Verbesserung % Gewichts- Futter/Gezunahme wichtszunähmeImprovement % food weight / gain weight gain
keinernone
AM 374H keiner AM 374H AM 374H none AM 374H
4040
6,86.8
4,94.9
4,94.9
7,47.4
2.2.
COCO
ι Οι Ο
- 34 -'
Beispiele- 34 - '
Examples
Bestandteil Konzentration Constituent concentration (°/o)(° / o)
gemahlener gelber -Mais ' "51,4ground yellow corn '"51.4
' Soyabohnenölmehl (44$) 30,0 >'Soybean Oil Flour ($ 44) 30.0>
Maisglutenmehl 5,0Corn gluten flour 5.0
Menhaden-Fischmehl (60%) 5,0Menhaden fish meal (60%) 5.0
Fett (NRG-50) " 4,0Fat (NRG-50) "4.0
■ entwässertes ilfalfamehl (17$) .' 2,0■ dehydrated ilfalfa meal ($ 17). ' 2.0
gemahlener Kalkstein (33 $ Ca) 0,5ground limestone ($ 33 Ca) 0.5
Dicalciumphosphat ' 1,2Dicalcium phosphate '1.2
Natriumchlorid ' · .0,3Sodium chloride '· .0.3
Spurenminerale ^ 0,1Trace minerals ^ 0.1
ρ
Vitaminvormischung 0,5ρ
Vitamin premix 0.5
!Lime Crest Z-2 Delamix; enthält 25,5 $ Calcium, 6,0 $ Mangan, 2,0 $ Eisen, 2,0 $ Zink* 0,12 $ Jod und 0,02 $ Cobalt.! Lime Crest Z-2 Delamix; contains 25.5 $ calcium, $ 6.0 manganese, $ 2.0 iron, $ 2.0 zinc * $ 0.12 iodine and $ 0.02 cobalt.
^Liefert 3300 I.U.Vitamin A, 1100 I.U.Vitamin D31 2,2 I,U.Vitamin B, 500 mg Cholinchlorid, 500 mg ; DI-Methionin, 125 mg Äthoxyquin, 27,5 mg Niacin, 8,8 mg Panto.the'nsäure, 4,4 mg Riboflavin, 1,43 mg Fola^ure, 1,1 mg Menadion, 0,011 mg Vitamin B12 P11O kg futter.^ Supplies 3300 IUVitamin A, 1100 IUVitamin D 31 2.2 I, U.Vitamin B, 500 mg choline chloride, 500 mg; DI-methionine, 125 mg ethoxyquine, 27.5 mg niacin, 8.8 mg panto-theanic acid, 4.4 mg riboflavin, 1.43 mg folic acid, 1.1 mg menadione, 0.011 mg vitamin B 12 P. 11 O kg of feed.
009342/1984009342/1984
Putter···1
Putter···
Menge2
lot
Gewichts-4th
Weight
Verhältnis6th
relationship
erung8th
eration
ONJ
O
0-2O.Tag, increase (g)
0-2O day
wichtszunahmeLining / Ge
weight gain
Ver3
Ver
ia_ Verbess.7
ia_ improve
nähme: Gev; nothing to
would take
Futter/Ge 5 /
Lining / Ge
OO Φ
OO
Spalte 4: "Gewichtszunahme" (g), 0. bis 20. Tag, gibt die gesamte Gewichtszunahme während der Testdauer von 20 Tagen an.Column 4: "Weight gain" (g), 0th to 20th day, gives the total weight gain during the test period from 20 days on.
Spalte 5i "Futter/Gewichtszunahme" gibt das Verhältnis von verbrauchtem Futter in g zu Zunahme des Körpergewichts in g an. Column 5i "feed / weight gain" gives the ratio of food consumed in g to increase in body weight in g.
Spalte 7: "Prozent Verbesserung (Gewichtszunahme)" gibt die Verbesserung der Gewichtszunahme in Prozent .Column 7: "Percent improvement (weight gain)" gives the improvement in weight gain in percent.
an, zum Beispielon, for example
315 x 100315 x 100
Oj-Oj-
100 = 18,4..100 = 18.4 ..
Spalte 8 "Prozent Verbesserung (Futter/Gewichtszunahme)" gibt die prozentuale Verbesserung des Verhältnisses von Gramm Futter pro Gramm Gewichtszunahme an, zum BeispielColumn 8 "Percent improvement (feed / weight gain)" gives the percentage improvement in the ratio of Grams of food per gram of weight gain, for example
1,7 x 100 -100 = 13,3. 1.7 x 100 -100 = 13.3.
1,51.5
009842/1984009842/1984
ORlGiNAL INSPECTEDORlGiNAL INSPECTED
• · Be i s ρ i e. 1 9 Herstellung von AM 374 enthaltenden !Tabletten • · Be is ρ i e. 19 Manufacture of tablets containing AM 374
Antibioticum AM 374 wird zu üblichen pharmazeutischen Tabletten entsprechend folgender Rezeptur verarbeitet: Antibiotic AM 374 is processed into common pharmaceutical tablets according to the following recipe:
355355
Der Wirkstoff AM 374, die Lactose und die Maisstärke zum Mischen werden miteinander vermischt. Die Maisstärke für Paste wird in Wasser in. einem Verhältnis von 100 g Maisstärke pro 800 ml Wasser suspendiert und durch Erwärmen unter Bühren in eine Paste übergeführt". Dann wird die erhaltene Paste zum Granulieren des vermischten Pulvers verwendet. Falls nötig, wird weiteres Wasser verwendet. Das feuchte Granulat wird durch ein Sieb mit einer lichten Maschenweite von 2,38 mm (Sieb Nr, 8) geführt und bei 49°C (1200P) getrocknet · Das trockene Granulat wird durch ein. Sieb mit einer lichten Maeohenweite von 1,19 mm (Sieb Nr. 16) geführt und mit dem; Magnesiumstearat'gleitfähig gemacht. Dann wird das Granulat in.einer geeigneten Tablettierinaechine zu Tabletten verpreßt (Tablettengewicht 355 ng)t Jede Tablette enthält 50. mg Wirkstoff.The active ingredient AM 374, the lactose and the corn starch for mixing are mixed together. The corn starch for paste is suspended in water in a ratio of 100 g corn starch per 800 ml water and made into a paste by heating with stirring. "Then the resulting paste is used to granulate the mixed powder. If necessary, additional water is used . The wet granulation is passed through a sieve having a mesh width of 2.38 mm (sieve No., 8) and dried at 49 ° C (120 0 P) · The dry granulate is passed through a. sieve with an Maeohenweite of 1 19 mm (sieve no. 16) and made slippery with the "magnesium stearate." Then the granules are compressed into tablets in a suitable tabletting machine (tablet weight 355 ng). Each tablet contains 50 mg of active ingredient.
ι 1ι 1
Beispiel 10 ΓExample 10 Γ
"'V Herstellung von AM 3-74 enthaltenden hart- "'V Manufacture of AM 3-74 containing hard-
• Der Wirkstoff AM 374 kann in hartachaligen Kapseln verab-' reicht werden. Folgende Rezeptur ist zur Herstellung solcherAre • The active ingredient AM 374 can be administered in capsules hartachaligen enough '. The following recipe is for making them
··
iaia
\- ■ /^ ■^■..iiJ.y^\ - ■ / ^ ■ ^ ■ ..iiJ.y ^
Kapseln geeignet:Capsules suitable:
Bestandteil pro Kapsel für 1000 Kapseln,Component per capsule for 1000 capsules,
mg g mg g
AM 374 50 50AM 374 50 50
Lactose 90 90Lactose 90 90
Magnesiums te ar at . 1 ' 1Magnesium te ar at. 1 '1
141 · 141141 · 141
-ν-ν
" Der Wirkstoff, die Lactose und das Magnesiumstearat"The active ingredient, the lactose and the magnesium stearate
werden miteinander vermischt. Mit der Mischung werden hart-.' schalige Kapseln geeigneter Größe mit einem Füllgewicht von 141· mg pro Kapsel gefüllt.are mixed together. With the mixture become hard. ' shell capsules of suitable size with a filling weight of 141 mg per capsule.
Beispiel 11 \ Example 11 \
Herstellung einer oralen Lösung von AM 374 Preparation of an oral solution of AM 374
Die Parabene und die Saccharose werden in etwa 2/3 des Endvolumens von destilliertem Wasser bei 800G gerührt» und daa Gel (Veegum) wird unter Rühren zugesetzt. Nach Abkühlen der Lösung auf 4ΟυΟ werden der Wirkstoff und daa Aromamittel unter Rühren zugegeben. Die abgekühlte Lösung wird mit destilliertem Wasser auf das Endyolumen eingestellt.The parabens and sucrose are stirred in about 2/3 of the final volume of distilled water at 80 0 G »and daa gel (Veegum) is added with stirring. After cooling the solution to 4Ο υ Ο the active ingredient and daa flavoring agent are added under stirring. The cooled solution is adjusted to the final volume with distilled water.
Die Lösung liefert 50 mg Wirkatoff pro 5 ml Lösung als Doöiö.The solution delivers 50 mg of active ingredient per 5 ml of solution as Doöio.
0Q9842/19840Q9842 / 1984
-.39 -Beispiel 12 -.39 - example 12
Mit dem Wirkstoff AM 374 kann eine Injektionslösung nach folgender Rezeptur "bereitet werden:With the active ingredient AM 374, an injection solution can be used the following recipe "must be prepared:
Bestandteil Menge Component quantity fo fo (Gew./YoI.)(Wt./YoI.)
AM 574 ■ V ' 5,0AM 574 ■ V '5.0
Polyäthylenglycol 4000 U.S.P. 4,0Polyethylene glycol 4000 U.S.P. 4.0
Natriumchlorid π.S.P. 0,90Sodium chloride π.S.P. 0.90
Benzylalkohol, reagensrein 0,90Benzyl alcohol, reagent grade 0.90
Wasser für Injektionszwecke . ad 100,00Water for injections. ad 100.00
Der Träger wird durch Vermischen aller vorstehend genannten Bestandteile mit Ausnahme von AM 574 "bereitet. Der Träger und der feinstgemahlene Wirkstoff werden durch ,geeignete Maßnahmen sterilisiert. Eine Losung des Wirkstoffs in dem Träger wird durch Aufschlämmen ' des Wirkstoffs mit einem Teil des Trägers und anschließende Zugabe des übrigen Teils des Trägers unter Rühren hergestellt.The carrier is prepared by mixing all of the above ingredients with the exception of AM 574 ". The carrier and the finely ground active ingredient are made by, suitable Measures sterilized. A solution of the active ingredient in the Carrier is made by slurrying the active ingredient with part of the carrier and then adding the remainder Part of the support prepared with stirring.
,Eine Dosis dieser Lösung von T ml liefert 50 mg Wirkstoff., A dose of this solution of T ml provides 50 mg of active ingredient.
ORIGINALORIGINAL
Claims (7)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US81565269A | 1969-04-14 | 1969-04-14 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2017837A1 true DE2017837A1 (en) | 1970-10-15 |
Family
ID=25218416
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19702017837 Pending DE2017837A1 (en) | 1969-04-14 | 1970-04-14 | Antibiotic AM 374 and its manufacture |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS4824752B1 (en) |
AT (2) | AT296502B (en) |
BE (1) | BE748876A (en) |
BR (1) | BR7018219D0 (en) |
CA (1) | CA959781A (en) |
CH (1) | CH558831A (en) |
CS (1) | CS177812B2 (en) |
DE (1) | DE2017837A1 (en) |
DK (1) | DK129359B (en) |
FR (1) | FR2042325B1 (en) |
GB (1) | GB1281605A (en) |
HK (1) | HK63176A (en) |
IL (1) | IL34319A (en) |
NL (1) | NL7005333A (en) |
PH (1) | PH10951A (en) |
SU (1) | SU469265A3 (en) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6416883U (en) * | 1987-07-21 | 1989-01-27 |
-
1970
- 1970-04-10 PH PH11317A patent/PH10951A/en unknown
- 1970-04-13 SU SU1428119A patent/SU469265A3/en active
- 1970-04-13 GB GB07470/70A patent/GB1281605A/en not_active Expired
- 1970-04-13 DK DK184170AA patent/DK129359B/en unknown
- 1970-04-13 BE BE748876D patent/BE748876A/en unknown
- 1970-04-13 CA CA079,993A patent/CA959781A/en not_active Expired
- 1970-04-14 CS CS2522A patent/CS177812B2/cs unknown
- 1970-04-14 FR FR707013387A patent/FR2042325B1/fr not_active Expired
- 1970-04-14 AT AT341170A patent/AT296502B/en not_active IP Right Cessation
- 1970-04-14 NL NL7005333A patent/NL7005333A/xx not_active Application Discontinuation
- 1970-04-14 IL IL34319A patent/IL34319A/en unknown
- 1970-04-14 JP JP45031872A patent/JPS4824752B1/ja active Pending
- 1970-04-14 CH CH552570A patent/CH558831A/en not_active IP Right Cessation
- 1970-04-14 AT AT492171A patent/AT314958B/en not_active IP Right Cessation
- 1970-04-14 DE DE19702017837 patent/DE2017837A1/en active Pending
- 1970-04-19 BR BR218219/70A patent/BR7018219D0/en unknown
-
1976
- 1976-10-07 HK HK631/76*UA patent/HK63176A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2042325A1 (en) | 1971-02-12 |
BR7018219D0 (en) | 1973-04-26 |
GB1281605A (en) | 1972-07-12 |
FR2042325B1 (en) | 1973-06-08 |
NL7005333A (en) | 1970-10-16 |
BE748876A (en) | 1970-10-13 |
JPS4824752B1 (en) | 1973-07-24 |
IL34319A0 (en) | 1970-06-17 |
AT296502B (en) | 1972-02-25 |
SU469265A3 (en) | 1975-04-30 |
CH558831A (en) | 1975-02-14 |
HK63176A (en) | 1976-10-15 |
CA959781A (en) | 1974-12-24 |
CS177812B2 (en) | 1977-08-31 |
DK129359B (en) | 1974-09-30 |
PH10951A (en) | 1977-10-05 |
AT314958B (en) | 1974-05-10 |
IL34319A (en) | 1974-06-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE2843702A1 (en) | NEW ANTIBIOTIC SUBSTANCE AND ITS PRODUCTION BY BREEDING A STREPTOMYCES | |
DE2931082C2 (en) | ||
DE3003624A1 (en) | ANTIBIOTICA C-19393 S LOW 2 AND H LOW 2 | |
US3700768A (en) | Antibiotic am374 and method of production using streptomyces eburosporeus | |
DE2431270C2 (en) | Antibiotic substance, process for its preparation and use of this antibiotic substance as a growth-promoting agent | |
DE1617881C2 (en) | Antibiotic enduracidin and its manufacture | |
DE2647158A1 (en) | ANTIBIOTICUM | |
DE2017837A1 (en) | Antibiotic AM 374 and its manufacture | |
DE1929355C3 (en) | Thiopeptin antibiotics and their use in feed additives | |
DE2708493A1 (en) | NEW ANTIBIOTIC AM-1042 | |
DE2404958C2 (en) | Metabolite A-27106 and process for its preparation | |
DE2209018C2 (en) | Glycopeptide antibiotic A-4696 hydrochloride and animal feed containing it | |
DE2703938C2 (en) | Antibiotic Mixture A-7413, Antibiotic A-7413 Factors A, B, C and D, and Use of the Antibiotic Mixture or its Isolated Factors A, B, C and D as a growth promoting agent in poultry | |
DE2652677A1 (en) | ANTIBIOTICA 890A LOW 1 AND 890A LOW 3 | |
CH637159A5 (en) | Preparation of an antibiotic mixture | |
DE1965566C3 (en) | Complementary feed or animal feed containing antibiotics | |
DE2902889A1 (en) | ANIMAL FEED ADDITIVE, METHOD OF MANUFACTURING AND USING TESSEL | |
DE2140322A1 (en) | New antibiotic | |
DE2848793A1 (en) | ANTIBIOTIC, ITS PRODUCTION AND USE AS A MEDICINAL PRODUCT | |
DE2140674C3 (en) | Mocimycin (antibiotic MYC 8003), its salts, process for its manufacture and its use as a feed additive | |
DE961655C (en) | Making an antibiotic | |
DE958241C (en) | Process for the production and extraction of an antibiotic compound | |
DE933053C (en) | Method of making antibiotic 106-7 | |
CH467858A (en) | Method for obtaining an antibiotic | |
AT226371B (en) | Process for the preparation of a novel nitrogen-containing organic base and its acid addition salts |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
OHJ | Non-payment of the annual fee |