DE19922902A1 - Method and device for opening containers sealed with a sealing film - Google Patents
Method and device for opening containers sealed with a sealing filmInfo
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Abstract
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren und eine Vorrichtung zum Öffnen von mit einer Siegelfolie verschlossenen Behältern.The present invention relates to a method and a Device for opening with a sealing film sealed containers.
Das gas- und/oder flüssigkeitsdichte Versiegeln von Hohlräumen und Oberflächen ist eine Aufgabe die sich in vielen Bereichen der Technik stellt. Es gibt verschiedene Verfahren und Vorrichtungen, die diese Aufgabe erfüllen. Eine der am häufigsten eingesetzten Methoden besteht in der Verwendung von thermoplastischem Material, meist in Form eines dünnen Films, mit dem das zu versiegelnde Objekt so um- oder abgeschlossen wird, daß an allen verbleibenden Öffnungen zwei Oberflächen aus thermoplastischem Material in Berührung stehen. Diese werden anschließend kurzzeitig dergestalt über den Schmelzpunkt des thermoplastischen Materials erhitzt, daß die Oberflächen an den erhitzten Stellen verschmelzen und sich ein abgeschlossener, kontinuierlicher Behälter bzw. eine hermetische Versiegelung ergibt (siehe z. B. US 3765990, US 3648428, US 3792567, US 4001075). Das thermoplastische Versiegeln wird beispielsweise auch in der Mikro- und Molekularbiologie bzw. -genetik auf Mikrotiterplatten angewendet, teils für die Lagerung von Proben bei tiefen Temperaturen oder zur Verhinderung des Wasserzutritts bei der parallelen Durchführung von Polymerase-Kettenreaktionen (PCR) im großen Maßstab, bei der die Mikrotiterplatten in Wasserbäder getaucht werden. Vorrichtungen zum Heiß-Versiegeln von Microtiterplatten werden z. B. von Advanced Biotechnologies, Epsom, UK oder Genetix Ltd., Christchurch, UK angeboten.The gas and / or liquid-tight sealing of cavities and surfaces is a task in many areas of technology. There are different procedures and Devices that accomplish this task. One of the most The most commonly used methods are the use of thermoplastic material, usually in the form of a thin film, with which the object to be sealed is closed or closed is that on all remaining openings two surfaces made of thermoplastic material in contact. This are then briefly created via the Melting point of the thermoplastic material heated that the Surfaces in the heated areas fuse and become one closed, continuous container or one hermetic sealing results (see e.g. US 3765990, US 3648428, US 3792567, US 4001075). The thermoplastic Sealing is also used, for example, in the micro and Molecular biology or genetics on microtiter plates used, partly for storing samples at depth Temperatures or to prevent water from entering parallel implementation of polymerase chain reactions (PCR) on a large scale, where the microtiter plates in Water baths can be dipped. Heat sealing devices of microtiter plates are e.g. B. from Advanced Biotechnologies, Epsom, UK or Genetix Ltd., Christchurch, UK offered.
Nicht immer ist eine permanente Versiegelung das Ziel. In vielen Fällen soll die Versiegelung das Gut z. B. vor Beschädigung beim Transport oder vor dem Zutritt oder Austritt von Wasser, Sauerstoff oder Mikroorganismen während Transport und Lagerung oder der Sterilisation (vgl. US 5579392) schützen, sie muß jedoch vor einer weiteren Nutzung des Gutes entfernt werden. Während bei unempfindlichen Gütern die Versiegelung durch Zerreißen oder Zerschneiden des thermoplastischen Materials entfernt werden kann (z. B. WO 98/52861, US 5613346), sind solche Methoden nicht in allen Fällen anwendbar.A permanent seal is not always the goal. In in many cases, the sealing of the good z. B. before Damage during transport or before entry or exit of water, oxygen or microorganisms during transportation and storage or sterilization (see US 5579392) protect, but it must be prevented from further use of the property be removed. While with insensitive goods the Sealing by tearing or cutting the thermoplastic material can be removed (e.g. WO 98/52861, US 5613346), such methods are not in all Cases applicable.
Insbesondere bei den beschriebenen Anwendungen in der Mikro- und Molekularbiologie bzw. -genetik wird das Entfernen der Versiegelung zwar in der Literatur als leicht durchführbar beschrieben (E. Maier, Robotic technology in library screening, Laboratory Robotics and Automation 7 (1995), 123-132), es stellt sich jedoch in der Praxis als problematisch heraus. Wenn zur Probenentnahme die Versiegelung durch Aufreißen entfernt wird, besteht die Gefahr von umfangreichen Probenverlusten und/oder Kreuzkontaminationen. Für die Rückgewinnung von Proben aus mit Polypropylen-Film versiegelten Mikrotiterplatten ist ein Werkzeug mit der Bezeichnung "Pierce Plate" bei Advanced Technologies erhältlich, das mittels in eine Kunststoffplatte eingelassenen Dornen den thermoplastischen Film perforieren soll, um den Zugang zu den Proben zu ermöglichen. Hierbei besteht stets die Gefahr, die Proben zu kreuzkontaminieren oder Fremdstoffe einzutragen.Especially in the described applications in micro and molecular biology or genetics will remove the Sealing is easy to carry out in the literature (E. Maier, Robotic technology in library screening, Laboratory Robotics and Automation 7 (1995), 123-132), however, it is problematic in practice out. If the seal is used to take a sample Tearing open, there is a risk of extensive Sample loss and / or cross contamination. For the Recovery of samples from with polypropylene film sealed microtiter plates is a tool with the Designation "Pierce Plate" by Advanced Technologies available, which is embedded in a plastic plate Thorns to perforate the thermoplastic film around the Allow access to samples. There is always the Risk of cross-contamination of the samples or foreign matter to be entered.
Als Alternative hierzu wurde vorgeschlagen, anstelle der Polypropylenfolie eine Kunststoff/Aluminium-laminierte Folie zu verwenden. Dieses Folienlaminat wird mit einem dafür entwickelten Werkzeug ("Foil Stripper") entfernt, indem an einer Seite beginnend die Folie auf einen Stab aufgewickelt und dabei vom Träger gelöst wird. Aufgrund der unterschiedlichen thermischen Ausdehnungskoeffizienten von Aluminium und Kunststoff ist jedoch die Versiegelung bei dieser Methode nicht immer flüssigkeits- und gasdicht, und löst sich insbesondere unter den Bedingungen der PCR, bei der das Probengut zyklischen Temperaturveränderungen ausgesetzt ist, oft ab.As an alternative, it has been proposed to replace the Polypropylene film is a plastic / aluminum laminated film to use. This foil laminate comes with one for it developed tool ("Foil Stripper") removed by starting from one side, the film is wound onto a rod while being released from the carrier. Due to the different coefficients of thermal expansion of Aluminum and plastic, however, is the seal on this method is not always liquid and gas tight, and dissolves in particular under the conditions of PCR, in which the sample is exposed to cyclical temperature changes is, often off.
Ein weiterer Vorschlag besteht darin, die mit Polypropylen- Film versiegelten Platten nach Gebrauch in derselben Vorrichtung, die für das Versiegeln benützt wird (Temperatur ca. 170°C), erneut kurz zu erhitzen und anschließend die Folie abzulösen. Das Versiegeln der Mikrotiterplatten benötigt nach Angabe des Herstellers bei 170°C ca. 3-4 s (Q-Sealer Heat Sealing Machine: Users Guide, Genetix Ltd.). Um ein Wiederablösen der Folie zu erreichen, muß man häufig deutlich länger erhitzen. Dies führt oft dazu, daß die Proben zum Sieden gelangen, was unter anderem zu Probenverlusten führen kann oder Mikroorganismen abtöten würde. Zudem muß man die noch heiße Versiegelung nach dem Erhitzen von der Mikrotiterplatte innerhalb so kurzer Zeit ablösen, daß viele Anwender zu schnellem Reißen neigen. Dies kann wiederum zu Probenverlusten und Kreuzkontaminationen führen.Another suggestion is to use polypropylene Film sealed plates after use in the same Device used for sealing (temperature approx. 170 ° C), briefly reheat and then the Peel off the film. The sealing of the microtiter plates is required according to the manufacturer at approx. 3-4 s at 170 ° C (Q-Sealer Heat Sealing Machine: Users Guide, Genetix Ltd.). To a To achieve redetachment of the film, one often has to be clear heat longer. This often leads to the samples being They boil, which among other things leads to sample losses can or would kill microorganisms. You also have to still hot seal after heating from the Remove the microplate within such a short time that many Users tend to tear quickly. This, in turn, can Lead to sample loss and cross-contamination.
Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren und eine Vorrichtung zum Öffnen von mit einer Folie verschlossenen Behältern bereitzustellen.The present invention is based on the object Method and device for opening with a film provide sealed containers.
Diese Aufgabe wird mit den Merkmalen der Patentansprüche gelöst. This object is achieved with the features of the claims solved.
Die Erfindung stellt ein Verfahren bereit zum Entfernen von Versiegelungen, welche insbesondere unter Verwendung thermoplastischer Materialien mittels des Verfahrens der Hitzeversiegelung hergestellt wurden, wobei die Versiegelung mittels einer Hitzequelle, die im Abstand von der Versiegelung angeordnet ist, zum Aufplatzen gebracht wird und/oder mindestens teilweise verbrennt, wodurch das versiegelte Gut zugänglich wird. Weiterhin betrifft die Erfindung eine Vorrichtung die zur Durchführung eines solchen Verfahrens geeignet ist.The invention provides a method for removing Seals, which are used in particular thermoplastic materials using the method of Heat sealers were made, the sealant using a heat source that is spaced from the seal is arranged to burst and / or burns at least partially, causing the sealed good becomes accessible. The invention further relates to a Device for performing such a method suitable is.
Die Erfindung ermöglicht insbesondere ein einfaches und
schonendes Öffnen bzw. Entfernen von Versiegelungen.
Erfindungsgemäß wird die Folie und eine darunterliegende
Gasschicht in dem Behälter durch Annähern an eine Hitzequelle
für kurze Zeit stark erhitzt. Vorzugsweise wird die Temperatur
der Hitzequelle und die Dauer der Einwirkung dabei so gewählt,
daß sich
In particular, the invention enables simple and gentle opening or removal of seals. According to the invention, the film and an underlying gas layer in the container are strongly heated for a short time by moving closer to a heat source. The temperature of the heat source and the duration of the action are preferably chosen so that
- a) die Gasschicht unter der Versiegelung an der Grenzfläche zum thermoplastischen Material soweit ausdehnt und das thermoplastische Material soweit erweicht, daß es zu einem Aufplatzen der Versiegelung kommt; unda) the gas layer under the seal at the interface with thermoplastic material expands so far and that thermoplastic material softens to the extent that it becomes a The seal bursts open; and
- b) die Erwärmung so schnell geschieht, daß das darunter liegende Gut nicht oder nur geringfügig erwärmt wird.b) the heating happens so quickly that it underneath lying goods are not or only slightly warmed.
Dies läßt sich vorzugsweise durch Erhitzen mit einer Gasflamme für 0,5-5 s erreichen. Die Dauer der Einwirkung und die Temperatur der Hitzequelle müssen dabei auch auf das thermoplastische Material der Versiegelung abgestimmt werden. Die bei der teilweisen Verbrennung des thermoplastischen Materials entstehenden Gase können dabei in einem Gasstrom abgeführt werden. Es ist dabei von Vorteil, wenn die Temperatur der Hitzequelle über dem Entzündungspunkt des thermoplastischen Materials liegt, so daß die nach dem Aufplatzen der Versiegelung verbleibenden Reste zumindest teilweise abbrennen oder einschmelzen und den Hohlraum freigeben.This can preferably be done by heating with a gas flame reach for 0.5-5 s. The duration of exposure and the The temperature of the heat source must also be on the thermoplastic material of the seal can be matched. The partial combustion of the thermoplastic The resulting gases can be in a gas stream be dissipated. It is an advantage if the Temperature of the heat source above the point of ignition thermoplastic material, so that after At least the remnants of the remaining fragments burst open partially burn or melt and the cavity release.
Als Hitzequelle eignet sich eine offene Flamme, ein Wärmestrahler, z. B. eine Infrarotlampe, eine Heißgaserzeugungseinrichtung oder ein Laser. Vorzugsweise werden Folien mit besonders guten Absorptionseigenschaften für die ausgestrahlte Energie verwendet. Beispielsweise absorbiert eine dunkel eingefärbte Polypropylenfolie Energie im Frequenzspektrum des sichtbaren Lichtes besser als eine nichteingefärbte Folie.An open flame is a suitable heat source Radiant heaters, e.g. B. an infrared lamp, a Hot gas generating device or a laser. Preferably are films with particularly good absorption properties for uses the radiated energy. For example absorbed a dark colored polypropylene film energy in Frequency spectrum of visible light better than one non-colored film.
Nach einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird beim Entfernen der Versiegelung der Behälter und vorzugsweise das darin enthaltene Gut gekühlt. Es wird der Boden des Behälters oder der Behälter vollständig gekühlt. Die Kühlung erfolgt mit einer Kühleinrichtung oder in dem der Behälter auf Trockeneis gestellt wird.According to a preferred embodiment of the invention, the Remove the sealing of the container and preferably that Contains chilled goods. It becomes the bottom of the container or the container is completely cooled. The cooling takes place with a cooling device or in which the container is on dry ice is provided.
Die Erfindung hat mehrere Vorteile gegenüber den bisher verwendeten Verfahren. Zum Ersten lassen sich Versiegelungen wesentlich schneller und zuverlässiger entfernen als mit den bisher verwendeten Methoden. Das versiegelte Gut wird weiterhin bei erfindungsgemäßer Ausführung deutlich weniger erwärmt und damit geschont. Da kein weiteres manuelles Entfernen der Versiegelung mehr nötig ist, ist dieses Verfahren einfacher und anwenderfreundlicher, während gleichzeitig die Gefahr von Verlusten an versiegeltem Gut und der unerwünschte Eintrag von Fremdkörpern oder -substanzen minimiert werden. Weiterhin bietet sie gerade bei den beschriebenen Anwendungen in Mikro- und Molekularbiologie bzw. -genetik die Möglichkeit, unter sterilen Bedingungen zu arbeiten.The invention has several advantages over the previous ones method used. First, there are seals remove much faster and more reliably than with the previously used methods. The sealed good will furthermore significantly less in the embodiment according to the invention warmed and thus protected. Since no other manual Removing the seal is more necessary Procedure easier and more user-friendly while at the same time the risk of loss of sealed goods and the unwanted entry of foreign bodies or substances be minimized. Furthermore, it offers especially with the described applications in micro and molecular biology or -genetics the ability to work under sterile conditions work.
Die Erfindung ermöglicht insbesondere ein neues Verfahren zum Lagern von biologischem Material. Vor allem vermeidet sie eine Kreuzkontamination der in einer Mikrotiterplatte enthaltenen Proben. Die hohe Temperatur der oberen Schicht beim Hitzeversiegeln führt zu einer Sterilisation. Weiterhin ist die Zeit beim Versiegeln und beim Öffnen der Folie so kurz, daß die enthaltenen Proben nicht aufgeheizt werden. Wenn die Mikrotiterplatte gekühlt wird, wird nur die oberste Schicht der Mikrotiterplatte durch den Heißgasstrom aufgeheizt. Das Öffnen erfolgt in wenigen Sekunden. Der dabei auftretende Wärmetransport sowohl von Kunststoff als auch von wasserbasierenden Lösungen ist gering. Die drei vorstehend genannten Faktoren eröffnen die Möglichkeit Polypropylenplatten zum Lagern von biologischem Material, wie Bakterien, Viren, Zellen, Verbindungen etc. einzusetzen.The invention particularly enables a new method for Storage of biological material. Above all, she avoids one Cross-contamination of those contained in a microtiter plate Rehearse. The high temperature of the upper layer when Heat sealing leads to sterilization. Still is the time when sealing and opening the film is so short that the samples contained are not heated. If the Microtiter plate is cooled, only the top layer the microtiter plate is heated by the hot gas flow. The Opening takes place in a few seconds. The one that occurs Heat transfer of both plastic and water-based solutions is low. The three above The factors mentioned open up the possibility Polypropylene sheets for storing biological material, such as Use bacteria, viruses, cells, compounds etc.
Eine weitere Anwendungsmöglichkeit besteht darin, hitzeversiegelte Mikrotiterplatten zur Lyse von Bakterien oder Hefe durch Erhitzen zu verwenden. Eine vorteilhafte Verwendungsmöglichkeit besteht zur weiteren Analyse, z. B. durch PCR.Another possible application is heat sealed microtiter plates for the lysis of bacteria or Use yeast by heating. An advantageous one It can be used for further analysis, e.g. B. by PCR.
Das Verfahren kann ebenso zum Öffnen von Platten eingesetzt werden, in welchen Banken von Verbindungen gelagert werden. Hierbei ist bisher das Hauptproblem der Kontamination, das mit der vorliegenden Erfindung vermieden werden kann. Ein zusätzlicher Vorteil besteht beim Einsatz von DMSO (Dimethylsulfoxid), eine chemische Verbindung, die zum Lagern von biologischem Material eingesetzt wird. Der Schmelzpunkt von DMSO beträgt etwa 12°C. Dies erleichtert die Handhabung von Lösungen und Gemischen, welche gefroren oder flüssig gehalten werden sollen. The method can also be used to open plates in which banks of connections are stored. So far, the main problem of contamination has been with of the present invention can be avoided. On there is an additional advantage when using DMSO (Dimethyl sulfoxide), a chemical compound used for storage of biological material is used. The melting point of DMSO is about 12 ° C. This makes handling easier of solutions and mixtures, which are frozen or liquid to be held.
Üblicherweise werden zum Lagern von Verbindungen Miktrotiterplatten mit 96 Vertiefungen (Kammern oder Aufnahmebehältern) eingesetzt. Die vorliegende Erfindung ermöglicht die Handhabung von Mikrotiterplatten, die eine höhere Anzahl von Vertiefungen aufweisen. Das Verfahren zum Öffnen von Mikrotiterplatten unter Verwendung eines Gasbrenners eröffnet die Möglichkeit, Verbindungen in Mikrotiterplatten zu lagern, die 384 oder mehr Vertiefungen bis zu 1536 Vertiefungen aufweisen.Usually used to store connections Microtitre plates with 96 wells (chambers or Receptacles) used. The present invention enables the handling of microtiter plates, the one have a higher number of depressions. The procedure for Open microtiter plates using a Gas burner opens up the possibility of connections in Store microtiter plates that have 384 or more wells have up to 1536 wells.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird das Verfahren wie folgt durchgeführt. In einem ersten Schritt werden in die Vertiefungen einer Mikrotiterplatte jeweils Proben abgelegt. In einem zweiten Schritt werden die Vertiefungen in der Mikrotiterplatte mit einer Versiegelungsfolie beispielsweise durch Heißversiegeln verschlossen. In einem dritten Schritt wird die Mikrotiterplatte mit den Proben an einen anderen Ort transportiert und dort gelagert, z. B. bei kühlen Temperaturen. In einem vierten Schritt werden eine oder mehrere beliebige der Vielzahl von Vertiefungen in der Mikrotiterplatte freigelegt, indem die entsprechende Versiegelung mit dem vorstehend beschriebenen Verfahren geöffnet wird. Optional kann eine oder auch zwei und mehrere Reihen der auf einer der Mikrotiterplatte vorhandenen Reihen in diesem vierten Schritt geöffnet werden. In einem fünften Schritt werden die Proben aus den freigelegten Vertiefungen z. B. für eine nachfolgende Untersuchung entnommen. Anschließend können die Schritte 3-5 einmal oder mehrmals wiederholt werden. Das heißt die verbleibenden Proben können wieder gelagert werden und in einem weiteren Schritt einige oder mehrere der Proben durch Freilegen von einzelnen Vertiefungen oder von einer oder mehreren Reihen für eine nachfolgende Untersuchung entnommen werden. Beispielsweise können in sechs aufeinanderfolgenden Vorgängen jeweils zwei Reihen einer Mikrotiterplatte geöffnet werden, die insgesamt 12 Reihen aufweist.According to a preferred embodiment of the invention, the Procedure performed as follows. In a first step are in the wells of a microtiter plate, respectively Samples filed. In a second step, the Wells in the microtiter plate with a Sealing film, for example by heat sealing locked. In a third step, the Microtiter plate with the samples in another place transported and stored there, e.g. B. at cool temperatures. In a fourth step, one or more of any the multitude of wells in the microtiter plate exposed by the appropriate seal with the method described above is opened. Optional can be one or two and more rows of on one of the Microtiter plate existing rows in this fourth step be opened. In a fifth step, the samples from the uncovered wells z. B. for a subsequent one Examination taken. Then steps 3-5 be repeated one or more times. That is called remaining samples can be stored again and in a further step through some or more of the samples Expose individual wells or one or taken from several rows for a subsequent investigation become. For example, in six consecutive Two rows of a microtiter plate are opened which has a total of 12 rows.
Das mit einer Versiegelungsfolie verschließbare System mit einer Vielzahl von Vertiefungen ermöglicht den Einsatz von automatisierten Systemen.The system that can be closed with a sealing film a variety of wells enables the use of automated systems.
Anstelle von Heißversiegeln kann eine Versiegelungsfolie zum Verschließen einer Vertiefung in einer Mikrotiterplatte durch Kleben aufgebracht werden. Das Öffnen oder Freilegen der Vertiefung erfolgt in der gleichen Weise wie zuvor beschrieben. Das vorliegende System ist nicht auf ein bestimmtes Material beschränkt, insbesondere können die Mikrotiterplatten aus Kunststoff wie Polypropylen, Polycarbonat und Polystyrol bestehen. Die Versiegelungsfolien können aus Kunststoff bestehen, z. B. aus Polypropylen, Polystyrol oder Polyethylen. Außerdem können Kunststoffolien mit einer Metallschicht versehen sein, z. B. mit einer Aluminiumbeschichtung.Instead of heat sealing, a sealing film for Seal a well in a microtiter plate Glue can be applied. Opening or exposing the Deepening is done in the same way as before described. The present system is not based on one certain material limited, in particular the Microtiter plates made of plastic such as polypropylene, Polycarbonate and polystyrene exist. The sealing foils can be made of plastic, e.g. B. made of polypropylene, Polystyrene or polyethylene. Plastic films can also be used be provided with a metal layer, e.g. B. with a Aluminum coating.
Die vorliegende Erfindung ermöglicht den Einsatz von Systemen, bei denen die Vertiefung mit einer Folie verschlossen wird, z. B. Polypropylenplatten zum Lagern von biologischen und chemischen Proben. Die biologischen Proben können eukariotische oder prokariotische Zellen, Viren, Proteine oder Nukleinsäuren (Genome, RNA, cDNA, PCR-Fragmente) sein.The present invention enables the use of systems in which the recess is closed with a film, e.g. B. polypropylene sheets for storing biological and chemical samples. The biological samples can eukaryotic or procaryotic cells, viruses, proteins or Nucleic acids (genomes, RNA, cDNA, PCR fragments).
Die vorliegende Erfindung hat vor allem den Vorteil, daß die einzelnen Proben in einer Mikrotiterplatte sicher gelagert werden können und beim Öffnen von einzelnen oder mehreren der Vertiefungen eine Kontamination der Proben untereinander sicher vermieden wird.The present invention has the main advantage that the individual samples safely stored in a microtiter plate can be and when opening one or more of the Wells contamination of the samples with each other is safely avoided.
Die Erfindung wird nachstehend anhand von Ausführungsbeispielen und der Zeichnungen näher erläutert. The invention is described below with reference to Embodiments and the drawings explained in more detail.
Es zeigen:Show it:
Fig. 1A, B und C Aufsichten von Mikrotiterplatten nach dem Heißversiegeln mit unterschiedlichen Versiegelungszeiten, Fig. 1A, B and C are plan views of microtiter plates by heat sealing with varying times sealing,
Fig. 2A, B, C und D Aufsichten von Mikrotiterplatten, von denen die Versiegelungsfolie zumindest teilweise entfernt worden ist, wobei die Versiegelung nach einem bekannten Verfahren durch Erhitzen mittels einer Heizplatte nach unterschiedlichen Aufheizzeiten erfolgte, und Fig. 2A, B, C and D are plan views of microtiter plates, of which the sealing film has been at least partially removed, wherein the seal carried out by a known method by heating with a hot plate after different heating times, and
Fig. 3A und B die Aufsicht einer Mikrotiterplatte mit Versiegelung bzw. nachdem die Versiegelungen mit Hilfe des erfindungsgemäßen Verfahrens geöffnet worden sind, Fig. 3A and B, the plan view of a microtiter plate with or after the sealing with the aid of the inventive method have been opened seal,
Fig. 4 eine Seitenansicht einer bevorzugten Ausführungsform einer erfindungsgemäßen Vorrichtung zum Öffnen von Versiegelungen und Fig. 4 is a side view of a preferred embodiment of a device according to the invention for opening seals and
Fig. 5 eine Vorderansicht der Ausführungsform von Fig. 4. Polypropylen PP Mikrotiterplatten mit 384 Vertiefungen (Kat.#X5005, Genetix) und Polypropylen-Film (Heat Seal Film, cat#X5151, Genetix) wurden mit Hilfe einer Hitzeversiegelungsvorrichtung von Genetix (Kat.#X5161), bestehend aus einer hitzeableitenden Basisplatte und einer elektrisch beheizten oberen Platte, an der ein Griff zum Ausüben von Druck auf die zu versiegelnde Oberfläche befestigt ist, mit einer Folie versiegelt. Die Hitzeversiegelungsvorrichtung wurde jeweils für mindestens 15 Minuten vorgewärmt und bei einer Temperatur von 170°C betrieben. Fig. 5 is a front view of the embodiment of Fig. 4. Polypropylene PP microtiter plates with 384 wells (cat. # X5005, Genetix) and polypropylene film (Heat Seal Film, cat # X5151, Genetix) were removed with the aid of a heat sealing device from Genetix (cat . # X5161), consisting of a heat-dissipating base plate and an electrically heated upper plate, to which a handle is attached to exert pressure on the surface to be sealed, sealed with a film. The heat sealer was preheated for at least 15 minutes and operated at a temperature of 170 ° C.
Zur Optimierung der Bedingungen beim Versiegeln von
Mikrotiterplatten wurden folgende Versuche durchgeführt:
40 µl einer 1 mM Lösung von Kresolrot (C-9877, Sigma) in 0.1 mM
TrisHCl, pH 8.8, wurden in die Vertiefungen von neun
Mikrotiterplatten pipettiert. Die Platten wurden mit Heat Seal
Film bedeckt und je drei Platten durch Absenken und Andrücken
der vorgewärmten oberen Platte für 1, 2, oder 4 s versiegelt.
Um ungleichmäßiges Erhitzen weitgehendst auszuschließen wurden
die Mikrotiterplatten anschließend um 180° gedreht und erneut
für denselben Zeitraum erhitzt. Zwei mal 4 s entspricht den
Empfehlungen des Herstellers.The following tests were carried out to optimize the conditions when sealing microtiter plates:
40 μl of a 1 mM solution of cresol red (C-9877, Sigma) in 0.1 mM TrisHCl, pH 8.8 were pipetted into the wells of nine microtiter plates. The plates were covered with heat seal film and three plates were sealed by lowering and pressing the preheated upper plate for 1, 2 or 4 s. In order to largely rule out uneven heating, the microtiter plates were then rotated through 180 ° and heated again for the same period. Two times 4 s corresponds to the manufacturer's recommendations.
Um die Güte der Versiegelung festzustellen wurden die so versiegelten Platten drei mal für 10 min in ein Wasserbad bei 85°C getaucht und unmittelbar anschließend für 5 min in einem Eisbad abgekühlt. Abschließend wurden die Platten unter fließendem Wasser gewaschen, auf einen Transilluminator überführt und mittels eines Herolab E.A.S.Y System ausgewertet.To determine the quality of the seal, they were so sealed plates three times for 10 min in a water bath Submerged 85 ° C and immediately afterwards for 5 min in one Cooled ice bath. Finally, the plates were under running water, washed on a transilluminator transferred and using a Herolab E.A.S.Y system evaluated.
Kresolrot ist ein pH-Indikator, und wechselt seine Farbe von einem intensiven Rot bei pH < 8.8 zu blaßgelb bei pH < 7.2. Die Güte der Versiegelung war daher an dem Verschwinden der roten Farbe in den Vertiefungen der Mikrotiterplatte zu erkennen. Im Transilluminator-Bild sind intakt versiegelte Vertiefungen als dunkle Punkte zu erkennen, während helle oder farblose Punkte Vertiefungen darstellen, deren Inhalt wegen einer unvollständigen Versiegelung oder einer Verletzung der Versiegelung ausgewaschen werden konnte. Fig. 1A, B und C zeigen typische Ergebnisse für die verwendeten Versiegelungsdauern von 2 × 1 s, 2 × 2 s und 2 × 4 s. Wie Fig. 1C zeigt, ergaben nur die für 2 × 4 s erhitzten Platten eine zuverlässig dichte Versiegelung. Nach Erhitzen für 2 × 1 s blieben 15 ± 8 Vertiefungen je Platte und nach je 2 × 2 s 5 ± 6 Vertiefungen unversiegelt. Cresol red is a pH indicator and changes color from an intense red at pH <8.8 to pale yellow at pH <7.2. The quality of the seal could therefore be recognized by the disappearance of the red color in the wells of the microtiter plate. In the transilluminator image, intactly sealed depressions can be recognized as dark points, while light or colorless points represent depressions whose contents could be washed out due to an incomplete seal or a breach of the seal. Fig. 1A, B and C show typical results for the used sealing durations of 2 × 1 s, 2 s × 2 and 2 × 4 s. As shown in FIG. 1C, only the plates heated for 2 × 4 s gave a reliably tight seal. After heating for 2 × 1 s, 15 ± 8 wells per plate and after 2 × 2 s 5 ± 6 wells remained unsealed.
Zum Entfernen der Versiegelung nach einem bekannten Verfahren
unter Verwendung einer Versiegelungsvorrichtung wurden
folgende Versuche durchgeführt:
40 µl einer 1 mM Lösung von Kresolrot (C-9877, Sigma) in 0.1 mM
TrisHCl, pH 8.8, wurden in die Vertiefungen von zwölf
Mikrotiterplatten pipettiert. Die Platten wurden mit Heat Seal
Film bedeckt und durch Absenken und Andrücken der vorgewärmten
oberen Platte für 4 s versiegelt, die Platten um 180° gedreht
und erneut für 4 s erhitzt. Um die Versiegelung aller
Vertiefungen sicherzustellen, wurden die so versiegelten
Platten drei mal für 10 min in ein Wasserbad bei 85°C
getaucht, unmittelbar anschließend für 5 min in einem Eisbad
abgekühlt und abschließend auf einem Transilluminator auf
entfärbte Vertiefungen überprüft.The following experiments were carried out to remove the seal by a known method using a sealing device:
40 ul of a 1 mM solution of cresol red (C-9877, Sigma) in 0.1 mM TrisHCl, pH 8.8, were pipetted into the wells of twelve microtiter plates. The plates were covered with heat seal film and sealed by lowering and pressing the preheated upper plate for 4 s, the plates rotated by 180 ° and heated again for 4 s. In order to ensure the sealing of all wells, the plates sealed in this way were immersed three times in a water bath at 85 ° C. for 10 min, immediately afterwards cooled in an ice bath for 5 min and finally checked for discolored wells on a transilluminator.
Zum Entfernen der Versiegelung wurden die Platten in die Versiegelungsvorrichtung eingebracht, je drei Platten unter Andrücken wie oben beschrieben für jeweils 10, 20, 40 oder 80 s erhitzt und anschließend die Versiegelung in einem Ruck abgezogen. Nach dem Entfernen der Versiegelung wurden die Platten unter fließendem Wasser gewaschen, auf einen Transilluminator überführt und mittels eines Herolab E.A.S.Y System ausgewertet.To remove the seal, the plates were placed in the Sealing device introduced, three plates under each Press as described above for 10, 20, 40 or 80 s each heated and then the seal in one jerk deducted. After removing the seal, the Washed plates under running water on one Transilluminator transferred and using a Herolab E.A.S.Y System evaluated.
Zur Bestimmung der Effizienz der Entfernung des Polypropylenfilms wurde das Vorliegen von im Transilluminator als dunkle Punkte erscheinenden, mit Kresolrotlösung gefüllten Vertiefungen bewertet. Fig. 2A, B, C und D zeigt typische Beispiele für die mit den untersuchten Heizzeiten erhaltenen Ergebnisse. Nur wenn die Platten 40 s (Fig. 2C) oder vorzugsweise 80 s (Fig. 2D) erhitzt wurden, wurde die Versiegelung zuverlässig entfernt. To determine the efficiency of the removal of the polypropylene film, the presence of depressions which appeared in the transilluminator as dark spots and were filled with cresol red solution was assessed. Fig. 2A, B, C and D shows typical examples of the obtained results with the investigated heating times. The seal was only reliably removed when the plates were heated for 40 s ( FIG. 2C) or preferably 80 s ( FIG. 2D).
Die folgenden Beobachtungen wurden bei Anwendung dieser Methode gemacht: a) Erhitzen der Platte für 40 s reichte aus, um die gesamte Platte auf über 50°C zu erhitzen; b) Beim Abreißen des Films waren Kreuzkontaminationen häufig.The following observations were made using this Method made: a) heating the plate for 40 s was sufficient, to heat the entire plate to over 50 ° C; b) When Tear-off of the film was common for cross-contamination.
Gemäß einem bevorzugten Ausführungsbeispiel der Erfindung wurden die Versiegelungen unter Verwendung eines Bunsenbrenners entfernt.According to a preferred embodiment of the invention the seals were made using a Bunsen burner removed.
40 µl einer 1 mM Lösung von Kresolrot (C-9877, Sigma) in 0.1 mM TrisHCl, pH 8.8, wurden in die Vertiefungen von drei Mikrotiterplatten pipettiert. Die Platten wurden mit Heat Seal Film bedeckt und durch Absenken und Andrücken der vorgewärmten oberen Platte für 4 s versiegelt, die Platten um 180° gedreht und erneut für 4 s erhitzt. Um die Versiegelung aller Vertiefungen zu prüfen, wurden die so versiegelten Platten drei mal für 10 min in ein Wasserbad bei 85°C getaucht, unmittelbar anschließend für 5 min in einem Eisbad abgekühlt und abschließend auf einem Transilluminator auf entfärbte Vertiefungen überprüft.40 µl of a 1 mM solution of cresol red (C-9877, Sigma) in 0.1 mM TrisHCl, pH 8.8, were in the wells of three Pipetted microtiter plates. The plates were covered with heat seal Film covered and by lowering and pressing the preheated top plate sealed for 4 s, the plates rotated by 180 ° and heated again for 4 s. To seal everyone The plates sealed in this way were used to examine recesses dipped three times for 10 min in a water bath at 85 ° C, immediately cooled in an ice bath for 5 min and finally on a transilluminator on decolorized Wells checked.
Die Platten wurden auf eine flache Oberfläche gelegt und ein Bunsenbrenner in einer gleichförmigen Bewegung in 5-10 cm Abstand so über die Platte geführt, daß die Flamme jede Stelle der Platte für nicht länger als 1 s bestrich. Das Öffnen der Versiegelung konnte als Aufplatzen und schnelles Schmelzen und Abbrennen des Polypropylenfilms beobachtet werden. Nach dem Entfernen der Versiegelung wurden die Platten unter fließendem Wasser gewaschen, auf einen Transilluminator überführt und mittels eines Herolab E.A.S.Y System ausgewertet.The plates were placed on a flat surface and one Bunsen burner in a uniform movement in 5-10 cm Distance led over the plate so that the flame every spot coated the plate for no longer than 1 s. Opening the Sealing could burst and melt quickly and Burning of the polypropylene film can be observed. After this Removing the sealant, the plates were under running Washed water, transferred to a transilluminator and evaluated using a Herolab E.A.S.Y system.
Zur Bestimmung der Effizienz der Entfernung des Polypropylenfilms wurde das Vorliegen von im Transilluminator als dunkle Punkte erscheinenden, mit Kresolrotlösung gefüllten Vertiefungen bewertet. Fig. 3 zeigt ein typisches Beispiel für die erhaltenen Ergebnisse: Fig. 3A zeigt eine Mikrotiterplatte nach Versiegeln und Waschen, Abb. 3B dieselbe Platte nach Behandlung mit dem Bunsenbrenner. Alle Vertiefungen wurden jeweils zuverlässig in weniger als 3 s eröffnet.To determine the efficiency of the removal of the polypropylene film, the presence of depressions which appeared in the transilluminator as dark spots and were filled with cresol red solution was assessed. Fig. 3 shows a typical example of the results obtained: Fig. 3A shows a microtiter plate after sealing and washing, Fig. 3B the same plate after treatment with the Bunsen burner. All wells were reliably opened in less than 3 s.
In den Fig. 4 und 5 ist eine Prinzipdarstellung einer erfindungsgemäßen Vorrichtung zum Öffnen von Versiegelungen an Mikrotiterplatten gezeigt. Eine Mikrotiterplatte 1 ist auf einem Förderband 2 angeordnet und wird mit Hilfe des Förderbands durch ein Gehäuse 5 hindurch transportiert. Oberhalb des Förderbands ist eine Gasbrennereinrichtung 3 angeordnet, die in dieser bevorzugten Ausführungsform als Hitzequelle dient. Wie in der Vorderansicht von Fig. 5 gezeigt, sind mehrere Gas- und Luftzufuhranschlüsse 4 vorgesehen. In dem gezeigten Beispiel sind insgesamt fünf Gasflammen dargestellt, die quer zur Transportrichtung des Förderbands angeordnet sind und in Richtung auf die Mikrotiterplatte 1 weisen. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist die Hitzequelle 3 schwenkbar angeordnet, wodurch die Richtung der auf die Mikrotiterplatte weisenden Gasflammen einstellbar ist. Bevorzugt ist der Winkel gegenüber der Senkrechten zum Förderband um einen Winkel innerhalb eines Bereichs von +/-45° verschwenkbar.In Figs. 4 and 5 is a schematic representation of a device according to the invention is shown for opening seals to microtiter plates. A microtiter plate 1 is arranged on a conveyor belt 2 and is transported through a housing 5 with the aid of the conveyor belt. A gas burner device 3 is arranged above the conveyor belt and serves as a heat source in this preferred embodiment. As shown in the front view of FIG. 5, a plurality of gas and air supply ports 4 are provided. In the example shown, a total of five gas flames are shown, which are arranged transversely to the transport direction of the conveyor belt and point in the direction of the microtiter plate 1 . In a particularly preferred embodiment, the heat source 3 is arranged pivotably, as a result of which the direction of the gas flames pointing to the microtiter plate can be adjusted. The angle relative to the perpendicular to the conveyor belt can preferably be pivoted by an angle within a range of +/- 45 °.
Anstelle eines Gasbrenners kann mit Hilfe einer Heißluftpistole über die Einrichtung 3 ein Heißluftstrom auf die Mikrotiterplatte gerichtet werden.Instead of a gas burner, a hot-air gun can be used to direct a hot-air stream onto the microtiter plate via the device 3 .
Mit Hilfe der Vorrichtung sind unterschiedliche Parameter einstellbar. Die Temperatur sowie die Geschwindigkeit der Erwärmung der Siegelfolie kann durch eine entsprechende Regelung der Gas/Luftzufuhr erfolgen. Alternativ oder zusätzlich kann der Abstand und/oder der Winkel der Gasbrennereinrichtung zur Lage der Mikrotiterplatte bzw. des Förderbandes eingestellt werden. Weiterhin kann durch Einstellen der Transportgeschwindigkeit die Einwirkdauer der Hitzequelle auf die Mikrotiterplatte bestimmt werden. Eine weitere Möglichkeit besteht darin, die Dauer der Wärmezufuhr einzustellen, indem z. B. die Gas/Luftzufuhr nur während einer bestimmten Heizdauer erfolgt.With the help of the device there are different parameters adjustable. The temperature as well as the speed of the Heating the sealing film can be done by an appropriate Regulation of the gas / air supply take place. Alternatively or in addition, the distance and / or the angle of the Gas burner device for the position of the microtiter plate or Conveyor belt can be set. Furthermore, by Setting the transport speed the exposure time Heat source to be determined on the microtiter plate. A Another option is the duration of heat input adjust by z. B. the gas / air supply only during one certain heating duration.
Die Erfindung ist nicht auf das vorgeschriebenen Ausführungsbeispiel beschränkt, vielmehr kann das erfindungsgemäße Verfahren und die Vorrichtung vielseitig eingesetzt werden zum Öffnen von mit Folien verschlossenen Behältern, wobei unterschiedliche Folien oder Versiegelungen geöffnet und entfernt werden können. Alternativ zu einer offenen Flamme ist auch eine Heißluftpistole einsetzbar, insbesondere eine Heißluftpistole, die mit Temperaturen bis 600°C arbeitet.The invention is not prescribed to that Embodiment limited, rather that The inventive method and the device are versatile are used to open closed with foils Containers, with different foils or seals can be opened and removed. Alternatively to one open flame, a hot air gun can also be used, especially a hot air gun that can handle temperatures up to 600 ° C works.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens werden von einer Mikrotiterplatte nicht gleichzeitig alle Versiegelungen geöffnet, sondern nur jeweils bestimmte gewünschte Vertiefungen freigelegt. Beispielsweise können die Vertiefungen einer einzelnen Reihe oder mehrerer Reihen von einer solchen Mikrotiterplatte in einem ersten Vorgang geöffnet werden. Die Proben der freigelegten Vertiefungen können untersucht werden, beispielsweise mit Hilfe eines automatischen Systems entnommen werden. Anschließend kann die Mikrotiterplatte mit den darin verbliebenen Proben wieder gelagert werden, z. B. über Nacht oder eine Woche oder für längere Zeit. Die Lagerung kann abhängig von der in der Mikrotiterplatte vorhandenen Proben bei tiefen Temperaturen, z. B. -20°C bis zu -70°C erfolgen. In einem nächsten Vorgang werden die Versiegelungen von weiteren Vertiefungen entfernt, z. B. wird die nächste oder mehrere der nächstfolgenden Reihen von einer Mikrotiterplatte geöffnet. Die Proben können wieder entnommen werden und beispielsweise auf Agar übertragen werden. Der Vorgang, d. h. Lagern der verbleibenden Proben und anschließendes Öffnen von bestimmten der vorhandenen Vertiefungen kann gegebenenfalls mehrfach wiederholt werden.According to a preferred embodiment of the invention Procedures are not from a microtiter plate all seals opened at the same time, but only each time certain desired wells exposed. For example can be the wells of a single row or more Rows of such a microtiter plate in a first Process can be opened. The samples of the exposed Wells can be examined, for example with Be removed using an automatic system. Then the microtiter plate with the inside remaining samples are stored again, e.g. B. overnight or a week or for a long time. Storage can depending on the samples present in the microtiter plate at low temperatures, e.g. B. -20 ° C down to -70 ° C. In a next process, the seals from further depressions removed, e.g. B. will be the next or several of the next series from a microtiter plate open. The samples can be taken again and for example transferred to agar. The process, i.e. H. Store the remaining samples and then open them certain of the existing wells may be necessary can be repeated several times.
Claims (31)
in einem ersten Schritt Proben in den Vertiefungen einer Mikrotiterplatte angeordnet werden,
in einem zweiten Schritt die Vertiefungen der Mikrotiterplatte mit einer Folie vorzugsweise durch Heißversiegeln verschlossen werden,
in einem dritten Schritt die Mikrotiterplatte gelagert wird,
in einem vierten Schritt eine oder mehrere der Vertiefung, vorzugsweise eine oder mehrere Reihen der Vertiefungen einer Mikrotiterplatte geöffnet werden, und
in einem fünften Schritt die Proben der freigelegten Vertiefungen untersucht bzw. für eine anschließende Untersuchung entnommen werden,
wobei die Schritte 3 bis 5 einmal oder mehrmals wiederholt werden.30. Use according to one of claims 26 to 29, wherein
in a first step, samples are arranged in the wells of a microtiter plate,
in a second step, the wells of the microtiter plate are sealed with a film, preferably by heat sealing,
in a third step the microtiter plate is stored,
in a fourth step one or more of the wells, preferably one or more rows of wells of a microtiter plate are opened, and
in a fifth step, the samples of the exposed wells are examined or taken for a subsequent investigation,
repeating steps 3 to 5 one or more times.
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