DE19909979A1 - Process for the preparation of glycoconjugates of 20 (S) -camptothecin - Google Patents

Process for the preparation of glycoconjugates of 20 (S) -camptothecin

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Abstract

The invention relates to a method for producing glyco-conjugates of 20(S)-camptothecin in which a 3-O-methylated beta -L-fucose building block is linked to the 20 hydroxyl group of a camptothecin derivative via thiourea-modified peptide spacers, whereby the decisive step exists in the linking of the building block (II) with the building block (V) in the presence of a particular coupling reagent such as N-[(dimethylamino)-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridin-1-yl-methylene]-N-m ethylmethane-aminium hexafluorophosphate-N-oxide (HATU).

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Glyco­ konjugaten von 20(S)-Camptothecin, in denen ein 3-O-methylierter β-L-Fucose- Baustein über Thioharnstoff-modifizierte Peptidspacer mit der 20-Hydroxylgruppe eines Camptothecin-Derivats verknüpft ist.The present invention relates to a method for producing glyco conjugates of 20 (S) -camptothecin in which a 3-O-methylated β-L-fucose Building block via thiourea-modified peptide spacer with the 20-hydroxyl group of a camptothecin derivative.

20(S)-Camptothecin ist ein pentacyclisches Alkaloid, das 1966 von Wall et al. isoliert wurde (J. Am. Chem. Soc. 88, 3888 (1966)). Es besitzt ein hohes Antitumor- Wirkpotential in zahlreichen In-vitro- und In-vivo-Tests. Leider scheiterte jedoch die Realisierung des vielversprechenden Potentials in der klinischen Untersuchungsphase an Toxizitäts- und Löslichkeitsproblemen.20 (S) -camptothecin is a pentacyclic alkaloid developed by Wall et al. was isolated (J. Am. Chem. Soc. 88, 3888 (1966)). It has a high anti-tumor Effective potential in numerous in vitro and in vivo tests. Unfortunately, however, the failed Realization of the promising potential in the clinical investigation phase of toxicity and solubility problems.

Durch Öffnung des E-Ring-Lactons und Bildung des Natriumsalzes wurde eine wasserlösliche Verbindung erhalten, die in einem pH-abhängigen Gleichgewicht mit der ringgeschlossenen Form steht. Klinische Studien führten auch hier bisher nicht zum Erfolg.
By opening the E-ring lactone and forming the sodium salt, a water-soluble compound was obtained which is in a pH-dependent equilibrium with the ring-closed form. Clinical studies have so far not been successful here either.

Etwa 20 Jahre später wurde gefunden, daß die biologische Aktivität auf eine Enzym­ inhibition der Topoisomerase I zurückzuführen ist. Seither wurden die Forschungs­ aktivitäten wieder verstärkt, um verträglichere und in-vivo wirksame Camptothecin- Derivate zu finden.About 20 years later it was found that the biological activity on an enzyme inhibition of topoisomerase I is due. Since then, the research activities intensified again in order to make camptothecin To find derivatives.

Zur Verbesserung der Wasserlöslichkeit wurden Salze von A-Ring- und B-Ring- modifizierten Camptothecin-Derivaten sowie von 20-O-Acyl-Derivaten mit ionisier­ baren Gruppen beschrieben (Vishnuvajjala et al. US 4943579). Letzteres Prodrug- Konzept wurde später auch auf modifizierte Camptothecin-Derivate übertragen (Wani et al. WO 9602546). Die beschriebenen 20-O-Acyl-Prodrugs haben allerdings in-vivo eine sehr kurze Halbwertszeit und werden sehr schnell zum Grundkörper gespalten.Salts from A-ring and B-ring modified camptothecin derivatives and of 20-O-acyl derivatives with ionized  described groups (Vishnuvajjala et al. US 4943579). The latter prodrug The concept was later transferred to modified camptothecin derivatives (Wani et al. WO 9602546). The 20-O-acyl prodrugs described, however, have in vivo a very short half-life and very quickly become the basic body split.

In der WO 9631532 werden zuckermodifizierte Cytostatika und Verfahren zu Ihrer Herstellung beschrieben, bei denen die Verknüpfung von verschiedenen cyto­ toxischen oder cytostatisch aktiven Verbindungen mit z. B. regioselektiv modifi­ zierten Kohlenhydratbausteinen über bestimmte Spacer zu einer Verbesserung der Tumorselektivität führt.In WO 9631532, sugar-modified cytostatics and methods become yours Manufacturing described in which the linking of different cyto toxic or cytostatically active compounds with e.g. B. regioselective modifi adorned carbohydrate building blocks via certain spacers to improve the Tumor selectivity leads.

In der WO 9851703 werden spezifische Glycokonjugate von 20(S)-Camptothecin der Formel (I) sowie Verfahren zu Ihrer Herstellung beschrieben:
WO 9851703 describes specific glycoconjugates of 20 (S) -camptothecin of the formula (I) and processes for their preparation:

worin
R1 für eine sterisch anspuchsvolle unpolare Seitenkette einer Aminosäure steht und
R2 für eine basische Seitenkette einer Aminosäure steht.wherein
R 1 stands for a sterically demanding non-polar side chain of an amino acid and
R 2 represents a basic side chain of an amino acid.

Es zeigte sich überraschend, daß der besondere Aufbau der dort beschriebenen Camptothecinderivate, nämlich die Anknüpfung von in 3-Stellung modifizierten β-L- Fucose-Bausteinen über einen Thioharnstoff-modifizierten Peptid-Spacer, bestehend aus einer sterisch anspruchsvollen unpolaren und einer basischen Aminosäure an die 20-Hydroxyl-Gruppe von 20(S)-Camptothecin, zu ganz besonders bevorzugten Konjugaten führt, die gegenüber den bislang bekannten Verbindungen eine beson­ ders hohe Stabilität, bessere Wasserlöslichkeit, höhere Verträglichkeit, größere thera­ peutische Wirksamkeit gegenüber verschiedenen Tumoren sowohl in vitro als auch in vivo und eine deutlich höhere Tumorselektivität insbesondere im Hinblick auf Knochenmarktoxizität zeigen.It was surprisingly found that the special structure of those described there Camptothecin derivatives, namely the attachment of β-L- modified in the 3-position Fucose building blocks via a thiourea-modified peptide spacer from a sterically demanding non-polar and a basic amino acid to the 20-hydroxyl group of 20 (S) -camptothecin, particularly preferred Conjugates leads that a special compared to the previously known compounds ders high stability, better water solubility, higher tolerance, greater thera Efficacy against various tumors both in vitro and in vivo and a significantly higher tumor selectivity especially with regard to Show bone marrow toxicity.

In der WO 9851703 sind zwei Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) beschrieben.WO 9851703 describes two processes for the preparation of the compounds of Formula (I) described.

Gemäß dem ersten Verfahren werden die erfindungsgemäßen Glycokonjugate der Formel (I) durch sequentielle Verknüpfung von 20(S)-Camptothecin mit zwei entsprechenden Aminosäuren über ein Peptidyl-Camptothecin der Formel (II) zu einem Peptidyl-Camptothecin der Formel (III) und anschließende Anbindung des Isothiocyanats der Formel (IV) hergestellt (lineare Synthese):
According to the first method, the glycoconjugates of the formula (I) according to the invention are converted into a peptidyl camptothecin of the formula (III) by sequential linking of 20 (S) -camptothecin with two corresponding amino acids via a peptidyl-camptothecin of the formula (II) and subsequent binding of the isothiocyanate of the formula (IV) prepared (linear synthesis):

wobei R1 und R2 die vorstehend angegebenen Bedeutungen haben.where R 1 and R 2 have the meanings given above.

Dieses Verfahren weist jedoch den Nachteil auf, daß von toxischem Camptothecin ausgegangen und bei weiteren Stufen des Verfahrens jeweils ein toxikologisch nicht unbedenkliches Camptothecinderivat erhalten wird.However, this method has the disadvantage that of toxic camptothecin assumed and not toxicologically at further stages of the process safe camptothecin derivative is obtained.

Es wurde deshalb in der WO 9851703 noch ein zweites Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) vorgeschlagen, bei welchem das Isothiocyanat der Formel (IV) zunächst mit einer gegebenenfalls geschützten terminalen basischen Aminosäure zu einem Baustein der Formel (V) verknüpft und dieser Baustein anschließend mit der freien Aminogruppe des Aminosäurekonjugats der Formel (II) aus 20(S)-Camptothecin und einer unpolaren, sterisch anspruchsvollen Aminosäure umgesetzt wird (konvergente Synthese):
WO 9851703 therefore proposed a second process for the preparation of the compounds of the formula (I), in which the isothiocyanate of the formula (IV) is first linked to an optionally protected terminal basic amino acid to form a building block of the formula (V) and this Building block is then reacted with the free amino group of the amino acid conjugate of the formula (II) from 20 (S) -camptothecin and a non-polar, sterically demanding amino acid (convergent synthesis):

Bei diesem Verfahren wird bei der Herstellung des Bausteins (V) kein toxikologisch bedenkliches Camptothecinderivat als Zwischenprodukt durchlaufen, weswegen es aus Gründen der Sicherheit und der damit verbundenen Verringerung an einzu­ haltenden Sicherheitsmaßnahmen gegenüber dem ersten Herstellungsverfahren be­ vorzugt ist. Zudem besteht bei der konvergenten Syntheseroute die längste Reak­ tionsfolge aus zwei Stufen, was gegenüber der aus drei Stufen bestehenden linearen Syntheseroute eine Einsparung eines Reaktionsschritts mit den damit verbundenen ökonomischen Vorteilen bedeutet.With this method, the building block (V) is not toxicologically pass through questionable camptothecin derivative as an intermediate, which is why for reasons of security and the associated reduction in security measures compared to the first manufacturing process is preferred. In addition, there is the longest reak in the convergent synthesis route sequence of two levels, which is compared to the linear level consisting of three levels Synthesis route a saving of a reaction step with the associated economic advantages means.

Der Schlüsselschritt beim zweiten Verfahren besteht in der Kupplung der Bausteine (II) und (V). Hierfür wird die Carboxylgruppe des Bausteins (V) aktiviert und anschließend mit der freien Aminogruppe des Bausteins (II) zur Reaktion gebracht. In der WO 9851703 werden für die Aktivierung der Carboxylgruppe die in der Peptidchemie bekannten Kupplungsreagenzien verwendet, wie sie z. B. in Jakubke/Jeschkeit: Aminosäuren, Peptide, Proteine; Verlag Chemie 1982 oder Tetrahedr. Lett. 34, 6705 (1993) beschrieben sind. Als Beispiele sind N-Carbon­ säureanhydride, Säurechloride oder gemischte Anhydride, Addukte mit Carbodi­ imiden z. B. N,N'-Diethyl-, N,N'-Diisopropyl-, N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethyl-carbodiimid-Hydrochlorid, N-Cyclohexyl- N'-(2-morpholinoethyl)-carbodiimid-metho-p-toluolsulfonat, oder Carbonylverbin­ dungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5- phenyl-1,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert-Butyl-5-methyl-isoxazoliumperchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-dihydrochinolin, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroform, oder Benzotriazolyl­ oxy-tris-(dimethylamino)-phosphonium-hexafluorophosphat, 1-Hydroxybenzo­ triazol- oder N-Hydroxysuccinimidester genannt. Weiterhin wird vorgeschlagen, die Aminosäurekomponente in Form eines Leuchs'schen Anhydrids einzusetzen.The key step in the second process is to couple the building blocks (II) and (V). For this, the carboxyl group of the building block (V) is activated and then reacted with the free amino group of the building block (II). WO 9851703 describes the activation of the carboxyl group in the Peptide chemistry known coupling reagents used, such as. B. in Jakubke / Jeschkeit: amino acids, peptides, proteins; Verlag Chemie 1982 or Tetrahedr. Lett. 34, 6705 (1993). Examples are N-carbon acid anhydrides, acid chlorides or mixed anhydrides, adducts with Carbodi imiden z. B. N, N'-diethyl, N, N'-diisopropyl, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, N- (3-dimethylaminopropyl) -N'-ethyl-carbodiimide hydrochloride, N-cyclohexyl- N '- (2-morpholinoethyl) carbodiimide metho-p-toluenesulfonate, or carbonyl compound such as carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5- phenyl-1,2-oxazolium-3-sulfate or 2-tert-butyl-5-methyl-isoxazolium perchlorate, or acylamino compounds such as 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline, or propanephosphonic anhydride, or isobutylchloroform, or benzotriazolyl oxy-tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate, 1-hydroxybenzo called triazole or N-hydroxysuccinimide esters. It is also proposed that To use amino acid components in the form of a Leuchsian anhydride.

Es zeigte sich jedoch, daß mit den in der WO 9851703 offenbarten Kupplungs­ reagenzien die Verbindung der Bausteine (II) und (V) insbesondere mit zunehmender Größe der Reste R1 und R2 überhaupt nicht oder nur in mittelmäßigen bis schlechten Ausbeuten gelingt. Insbesondere wird für den Fall, daß R2 für die Seitenkette der Aminosäure Histidin steht, eine Vielzahl von Nebenreaktionen beobachtet (z. B. Epimerisierung, intramolekulare Thiolyse des aktivierten Bausteins (V), andere Acylierungen am Baustein (II) usw.), welche die gewünschte Kupplungsreaktion entweder vollständig unterbinden oder nur in sehr schlechten Ausbeuten gelingen lassen. Wird die Kupplung beispielsweise mit N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethyl­ carbodiimid-Hydrochlorid (EDC1) als Kupplungsreagenz durchgeführt, liegen die erzielten Ausbeuten unter 10%. Ebenso werden bei der Kupplung in Gegenwart von Benzotriazolyloxy-tris-(dimethylamino)-phosphonium-hexafluorophosphat (BOP) erhebliche Nebenreaktionen der Carboxylkomponente (V) und lediglich eine sehr geringe Umsetzung zur Zielverbindung (I) beobachtet.However, it was found that with the coupling reagents disclosed in WO 9851703, the connection of the building blocks (II) and (V), in particular with increasing size of the radicals R 1 and R 2, does not succeed at all or only in moderate to poor yields. In particular, in the event that R 2 stands for the side chain of the amino acid histidine, a large number of side reactions are observed (e.g. epimerization, intramolecular thiolysis of the activated building block (V), other acylations on the building block (II) etc.), which either completely prevent the desired coupling reaction or only allow it to succeed in very poor yields. If the coupling is carried out, for example, with N- (3-dimethylaminopropyl) -N'-ethyl carbodiimide hydrochloride (EDC1) as the coupling reagent, the yields achieved are below 10%. Likewise, considerable side reactions of the carboxyl component (V) and only a very slight conversion to the target compound (I) are observed in the coupling in the presence of benzotriazolyloxy tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate (BOP).

Es war daher die Aufgabe der vorliegenden Erfindung, das vorstehende konvergente Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) zu verbessern und insbesondere für eine größere Variationsbreite der Reste R1 und R2 durchführbar zu machen.It was therefore the object of the present invention to improve the above convergent process for the preparation of the compounds of the formula (I) and, in particular, to make it possible to carry out a greater range of variation of the radicals R 1 and R 2 .

Überraschend wurde gefunden, daß durch die Verwendung bestimmter Kupplungsreagenzien bei dem Schritt der Kupplung der Bausteine (II) und (V) das vorstehende zweite Herstellungsverfahren mit allen herkömmlichen Aminosäuren in moderaten bis guten Ausbeuten durchführbar ist.Surprisingly, it was found that through the use of certain Coupling reagents in the step of coupling building blocks (II) and (V) above second production method with all conventional amino acids in moderate to good yields is feasible.

Die vorliegende Erfindung betrifft somit ein Verfahren zur Herstellung von Ver­ bindungen der Formel (I),
The present invention thus relates to a process for the preparation of compounds of the formula (I),

worin
R1 für eine sterisch anspuchsvolle unpolare Seitenkette einer Aminosäure steht und
R2 für eine basische Seitenkette einer Aminosäure steht,
bei dem man das Isothiocyanat der Formel (IV)
wherein
R 1 stands for a sterically demanding non-polar side chain of an amino acid and
R 2 represents a basic side chain of an amino acid,
in which the isothiocyanate of the formula (IV)

mit einer gegebenenfalls geschützten terminalen basischen Aminosäure
with an optionally protected terminal basic amino acid

worin R2 die vorstehend angegebene Bedeutung hat,
zu einem Aminosäurekonjugat der Formel (V) umsetzt,
wherein R 2 has the meaning given above,
converted to an amino acid conjugate of the formula (V),

worin R2 die vorstehend angegebene Bedeutung hat,
dieses dann mit Aminosäurekonjugaten der Formel (II) umsetzt,
wherein R 2 has the meaning given above,
this is then reacted with amino acid conjugates of the formula (II),

worin R1 die vorstehend angegebene Bedeutung hat,
die Seitenkettenschutzgruppe abspaltet und die Verbindungen gegebenenfalls in ein geeignetes Salz überführt,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Kupplung der Bausteine (II) und (V) in Gegenwart eines Kupplungsreagenzes durchgeführt wird, daß aus der aus folgenden Verbindungen bestehenden Gruppe ausgewählt ist:
where R 1 has the meaning given above,
the side chain protecting group is split off and the compounds are optionally converted into a suitable salt,
characterized in that
the coupling of the building blocks (II) and (V) is carried out in the presence of a coupling reagent that is selected from the group consisting of the following compounds:

Besonders bevorzugt wird als Kupplungsreagenz N-[(Dimethylamino)-1H-1,2,3- triazolo[4,5-b]pyridin-1-yl-methylen]-N-methylmethanaminiumhexafluorphosphat- N-oxid (HATU) eingesetzt:
N - [(Dimethylamino) -1H-1,2,3-triazolo [4,5-b] pyridin-1-ylmethylene] -N-methylmethanaminium hexafluorophosphate N-oxide (HATU) is particularly preferably used as coupling reagent:

Weiterhin ist erfindungsgemäß bevorzugt, bei dem vorstehenden Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I) Aminosäuren zu verwenden, bei denen R1 für einen verzweigten Alkylrest mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen steht und R2 für einen Rest der Formel -(CH2)n-R3 steht, wobei
R3-NH2,
It is also preferred according to the invention to use amino acids in the above process for the preparation of compounds of the formula (I) in which R 1 is a branched alkyl radical having up to 4 carbon atoms and R 2 is a radical of the formula - (CH 2 ) n -R 3 stands for
R 3 -NH 2 ,

bedeutet und n für eine Zahl von 1 bis 4 steht.means and n for a number from 1 to 4 stands.

Insbesondere bevorzugt ist hierbei die Verwendung von Aminosäuren, bei denen R1 für einen verzweigten Alkylrest der Formeln
The use of amino acids in which R1 is a branched alkyl radical of the formulas is particularly preferred

steht und R2 für einen Rest der Formeln
stands and R 2 for a remainder of the formulas

Gemäß der am meisten bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Verbindung wird beim vorstehenden Herstellungsverfahren zunächst das Isothiocyanat der Formel (IV) mit gegebenenfalls geschütztem Lysin oder Histdin, vorzugsweise ungeschütztem Histidin, und das Camptothecin mit Valin umgesetzt. Nach Kupplung der so erhaltenen Bausteine (V) und (II) in Gegenwart von N-[(Dimethylamino)-1H- 1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridin-1-yl-methylen]-N-methylmethanaminiumhexafluorphos­ phat-N-oxid (HATU) und gegebenenfalls anschließender Schutzgruppenabspaltung werden dann gemäß der am meisten bevorzugten Ausführungsform des erfin­ dungsgemäßen Verfahrens als Verbindungen der Formel (I) 20(S)-20-O-{Nα-[4-(3- O-Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy)-phenylamino-thiocarbonyl]-L-histidyl-L-valyl}- camptothecin oder 20(S)-20-O-{Nα-[4-(3-O-Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy)-phenyl­ amino-thiocarbonyl]-L-lysyl-L-valyl}-camptothecin erhalten, besonders bevorzugt 20(S)-20-O-{Nα-[4-(3-O-Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy)-phenylamino-thiocarbon­ yl]-L-histidyl-L-valyl}-camptothecin.According to the most preferred embodiment of the present compound, the isothiocyanate of the formula (IV) is first reacted with optionally protected lysine or histdin, preferably unprotected histidine, and the camptothecin with valine in the above preparation process. After coupling the building blocks (V) and (II) thus obtained in the presence of N - [(dimethylamino) -1H- 1,2,3-triazolo [4,5-b] pyridin-1-ylmethylene] -N- Methylmethanaminiumhexafluorophosph-N-oxide (HATU) and optionally subsequent deprotection are then, according to the most preferred embodiment of the process according to the invention, as compounds of the formula (I) 20 (S) -20-O- {N α - [4- (3rd - O-methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy) -phenylamino-thiocarbonyl] -L-histidyl-L-valyl} - camptothecin or 20 (S) -20-O- {N α - [4- (3-O -Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy) -phenylamino-thiocarbonyl] -L-lysyl-L-valyl} -camptothecin, particularly preferably 20 (S) -20-O- {N α - [4- (3 -O-methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy) -phenylamino-thiocarbon yl] -L-histidyl-L-valyl} -camptothecin.

Nach Anknüpfung der ersten Aminosäure an Camptothecin unter Bildung des Bausteins (II) können Diastereomerengemische entstehen. Reine Diastereomere der erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich nach den oben angegebenen Verfahren beispielsweise herstellen, in dem man nach Anknüpfung des ersten Aminosäure­ bausteins an das Camptothecin und anschließender Schutzgruppenabspaltung die Diastereomere in geeigneter Weise trennt. Aus einer diastereomerenreinen Zwischen­ verbindung (II) kann auf dem oben angegebenen Weg die diastereomerenreine Zielverbindung (I) hergestellt werden.After attaching the first amino acid to camptothecin to form the Building block (II) can form mixtures of diastereomers. Pure diastereomers of Compounds according to the invention can be prepared by the processes specified above for example, in which, after attaching the first amino acid building blocks to the camptothecin and subsequent deprotection Separates diastereomers in a suitable manner. From a diastereomerically pure intermediate Compound (II) can be the diastereomerically pure in the above way Target compound (I) are made.

Ebenfalls können nach Kupplung der Bausteine (II) und (V) Diastereomeren­ gemische entstehen. Diese können auf der Stufe des salzfreien Glykokonjugats (I) entweder durch Säulenchromatographie oder durch Kristallisations- oder Digera­ tionsverfahren voneinander getrennt werden. Bevorzugt ist ein Verrühren mit Methanol oder eine Fällung aus Dichlormethan/Methanol mit Diethylether oder Methyl-t-butylether.Diastereomers can also be obtained after coupling of the building blocks (II) and (V) mixtures arise. These can be at the level of the salt-free glycoconjugate (I) either by column chromatography or by crystallization or digera tion processes are separated from each other. Mixing with is preferred Methanol or a precipitation from dichloromethane / methanol with diethyl ether or Methyl t-butyl ether.

Die Einzelschritte des vorstehenden erfindungsgemäßen Herstellungsverfahrens können bei verschiedenen Druck- und Temperaturverhältnissen, beispielsweise 0,5 bis 2 bar und vorzugsweise unter Normaldruck, bzw. -30 bis +100°C und vorzugs­ weise -10 bis + 80°C, in geeigneten Lösungsmitteln wie Dimethylformamid (DMF), Tetrahydrofuran (THF), Dichlormethan, Chloroform, niederen Alkoholen, Aceto­ nitril, Dioxan, Wasser oder in Gemischen der genannten Lösungsmittel durchgeführt werden. In der Regel sind Reaktionen in DMF, Dichlormethan, THF, Dioxan/Wasser oder THF/Dichlormethan bei Raumtemperatur oder unter Eiskühlung und Normal­ druck bevorzugt.The individual steps of the above manufacturing method according to the invention can at different pressure and temperature conditions, for example 0.5 up to 2 bar and preferably under normal pressure, or -30 to + 100 ° C and preferred wise -10 to + 80 ° C, in suitable solvents such as dimethylformamide (DMF), Tetrahydrofuran (THF), dichloromethane, chloroform, lower alcohols, aceto nitrile, dioxane, water or in mixtures of the solvents mentioned become. As a rule, reactions are in DMF, dichloromethane, THF, dioxane / water or THF / dichloromethane at room temperature or under ice cooling and normal pressure preferred.

Das als Ausgangsverbindung dienende Isothiocyanat der Formel (IV) kann bei­ spielsweise gemäß dem in der WO 98/51703 beschriebenen Verfahren aus käuflich erhältlichem p-Nitrophenyl-β-L-fucopyranosid durch selektive Veretherung der Hydroxygruppe in 3-Position des Saccharidrestes mit Methyliodid und Dibutyl­ zinnoxid, Reduktion der Nitrogruppe mittels katalytischer Hydrierung und an­ schließender Umsetzung mit einem Thiokohlensäurederivat wie beispielsweise Thio­ phosgen oder Thiocarbonyl-bisimidazol in Gegenwart einer Base wie Ethyldiiso­ propylamin hergestellt werden.The isothiocyanate of the formula (IV) which serves as the starting compound can be used for for example, according to the method described in WO 98/51703  available p-nitrophenyl-β-L-fucopyranoside by selective etherification of the Hydroxy group in the 3-position of the saccharide residue with methyl iodide and dibutyl tin oxide, reduction of the nitro group by means of catalytic hydrogenation and on final reaction with a thiocarbonic acid derivative such as thio phosgene or thiocarbonyl-bisimidazole in the presence of a base such as ethyldiiso propylamine can be produced.

Für die Aktivierung der Carboxylgruppen kommen die in der Peptidchemie be­ kannten Kupplungsreagenzien wie sie z. B. in Jakubke/Jeschkeit: Aminosäuren, Peptide, Proteine; Verlag Chemie 1982 oder Tetrahedr. Lett. 34, 6705 (1993) beschrieben sind, in Frage. Bevorzugt sind beispielsweise N-Carbonsäureanhydride, Säurechloride oder gemischte Anhydride.For the activation of the carboxyl groups come those in peptide chemistry knew coupling reagents such as z. B. in Jakubke / Jeschkeit: amino acids, Peptides, proteins; Verlag Chemie 1982 or Tetrahedr. Lett. 34, 6705 (1993) are described in question. Preferred are, for example, N-carboxylic anhydrides, Acid chlorides or mixed anhydrides.

Weiterhin geeignet zur Aktivierung der Carboxylgruppen ist die Bildung von Addukten mit Carbodiimiden z. B. N,N'-Diethyl-, N,N'-Diisopropyl-, N,N'-Dicyclo­ hexylcarbodiimid, N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethyl-carbodiimid-Hydrochlorid, N-Cyclohexyl-N'-(2-morpholinoethyl)-carbodiimid-metho-p-toluolsulfonat oder Car­ bonylverbindungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-1,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert-Butyl-5-methyl-isoxazolium­ perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-di­ hydrochinolin, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroform, oder Benzotriazolyloxy-tris-(dimethylamino)-phosphonium-hexafluorophosphat, 1-Hy­ droxybenzotriazol- oder N-Hydroxysuccinimidester.The formation of is also suitable for activating the carboxyl groups Adducts with carbodiimides e.g. B. N, N'-diethyl, N, N'-diisopropyl, N, N'-dicyclo hexylcarbodiimide, N- (3-dimethylaminopropyl) -N'-ethyl-carbodiimide hydrochloride, N-Cyclohexyl-N '- (2-morpholinoethyl) carbodiimide metho-p-toluenesulfonate or Car bonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-1,2-oxazolium-3-sulfate or 2-tert-butyl-5-methyl-isoxazolium perchlorate, or acylamino compounds such as 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-di hydroquinoline, or propanephosphonic anhydride, or isobutylchloroform, or Benzotriazolyloxy tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate, 1-Hy hydroxybenzotriazole or N-hydroxysuccinimide esters.

Weiterhin kann die Aminosäurekomponente auch in Form eines Leuchs'schen Anhydrids eingesetzt werden. Diese Art der Aminosäureaktivierung ist bevorzugt bei der Acylierung von 20(S)-Camptothecin mit Aminosäurenkomponenten.Furthermore, the amino acid component can also be in the form of a Leuchs' Anhydrids are used. This type of amino acid activation is preferred for the acylation of 20 (S) -camptothecin with amino acid components.

Wie vorstehend erwähnt ist für die Kupplung der Bausteine (II) und (V) ein beson­ deres Kupplungsreagenz erforderlich, das aus der aus folgenden Verbindungen be­ stehenden Gruppe ausgewählt ist:
As mentioned above, a special coupling reagent, which is selected from the group consisting of the following compounds, is required for the coupling of the building blocks (II) and (V):

Besonders bevorzugt wird hierbei als Kupplungsreagenz N-[(Dimethylamino)-1H- 1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridin-1-yl-methylen]-N-methylmethanaminiumhexafluorphos­ phat-N-oxid (HATU) eingesetzt:
N - [(Dimethylamino) -1H-1,2,3-triazolo [4,5-b] pyridin-1-ylmethylene] -N-methylmethanaminium hexafluorophosphate N-oxide (HATU) is particularly preferably used here as the coupling reagent :

Diese besonderen Kupplungsreagenzien sind käuflich erhältlich. Beispielsweise kann HATU von der Firma Perseptive Biosystems GmbH, Wiesbaden. Deutschland, be­ zogen werden.These special coupling reagents are commercially available. For example HATU from Perseptive Biosystems GmbH, Wiesbaden. Germany, be be drawn.

Als Basen können bei den Einzelschritten des erfindungsgemäßen Herstellungs­ verfahrens beispielsweise Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Pyridin, N,N-Di­ methylaminopyridin oder andere in derartigen Schritten herkömmlich verwendete Basen eingesetzt werden. Bases can be used in the individual steps of the production according to the invention process for example triethylamine, ethyldiisopropylamine, pyridine, N, N-Di methylaminopyridine or others conventionally used in such steps Bases are used.  

Als Schutzgruppen für Drittfunktionen der Aminosäuren können die in der Peptid­ chemie bekannten Schutzgruppen beispielsweise vom Urethan-, Alkyl-, Acyl-, Ester- oder Amid-Typ eingesetzt werden.Protective groups for third-party functions of the amino acids can be those in the peptide Chemically known protective groups, for example urethane, alkyl, acyl, ester or amide type can be used.

Aminoschutzgruppen im Rahmen der Erfindung sind die üblichen in der Peptid- Chemie verwendeten Aminoschutzgruppen.Amino protecting groups in the context of the invention are the usual ones in the peptide Chemistry used amino protecting groups.

Hierzu gehören bevorzugt: Benzyloxycarbonyl, 3,4-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 3,5-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 2,4-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 4-Methoxy­ benzyloxycarbonyl, 4-Nitrobenzyloxycarbonyl, 2-Nitrobenzyloxycarbonyl, 2-Nitro- 4,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, tert-Butoxy­ carbonyl (Boc), Allyloxycarbonyl, Vinyloxycarbonyl, 3,4,5-Trimethoxybenzyloxy­ carbonyl, Phthaloyl, 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, 2,2,2-Trichlor-tert-butoxy­ carbonyl, Menthyloxycarbonyl, 4-Nitrophenoxycarbonyl, Fluorenyl-9-methoxy­ carbonyl (Fmoc), Formyl, Acetyl, Propionyl, Pivaloyl, 2-Chloracetyl, 2-Bromacetyl, 2,2,2-Trifluoracetyl, 2,2,2-Trichloracetyl, Benzoyl, Benzyl, 4-Chlorbenzoyl, 4-Brom­ benzoyl, 4-Nitrobenzoyl, Phthalimido, Isovaleroyl oder Benzyloxymethylen, 4-Nitro­ benzyl, 2,4-Dinitrobenzyl, 4-Nitrophenyl oder 2-Nitrophenylsulfenyl. Besonders bevorzugt sind die Fmoc-Gruppe und die Boc-Gruppe.These preferably include: benzyloxycarbonyl, 3,4-dimethoxybenzyloxycarbonyl, 3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl, 2,4-dimethoxybenzyloxycarbonyl, 4-methoxy benzyloxycarbonyl, 4-nitrobenzyloxycarbonyl, 2-nitrobenzyloxycarbonyl, 2-nitro- 4,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl, methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, tert-butoxy carbonyl (Boc), allyloxycarbonyl, vinyloxycarbonyl, 3,4,5-trimethoxybenzyloxy carbonyl, phthaloyl, 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, 2,2,2-trichloro-tert-butoxy carbonyl, menthyloxycarbonyl, 4-nitrophenoxycarbonyl, fluorenyl-9-methoxy carbonyl (Fmoc), formyl, acetyl, propionyl, pivaloyl, 2-chloroacetyl, 2-bromoacetyl, 2,2,2-trifluoroacetyl, 2,2,2-trichloroacetyl, benzoyl, benzyl, 4-chlorobenzoyl, 4-bromo benzoyl, 4-nitrobenzoyl, phthalimido, isovaleroyl or benzyloxymethylene, 4-nitro benzyl, 2,4-dinitrobenzyl, 4-nitrophenyl or 2-nitrophenylsulfenyl. Especially the Fmoc group and the Boc group are preferred.

Die Abspaltung von Schutzgruppen in entsprechenden Reaktionsschritten kann zum Beispiel durch Säure- oder Base-Einwirkung, hydrogenolytisch oder auf andere Weise reduktiv erfolgen.The splitting off of protective groups in corresponding reaction steps can lead to Example by exposure to acid or base, hydrogenolytically or to others Way reductive.

Der als Ausgangsverbindung verwendete Camptothecin-Baustein kann in der 20(R)- oder in der 20(S)-Konfiguration oder als Gemisch dieser beiden steroisomeren Formen vorliegen. Bevorzugt ist die 20(S)-Konfiguration.The camptothecin building block used as the starting compound can be found in the 20 (R) - or in the 20 (S) configuration or as a mixture of these two steroisomers Shapes are available. The 20 (S) configuration is preferred.

Die beim erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Aminosäuren können in der L- oder in der D-Konfiguration auftreten oder auch als Gemisch von D- und L-Form. The amino acids used in the method according to the invention can be or occur in the D configuration or as a mixture of D and L forms.  

Der Begriff "Aminosäuren" bezeichnet erfindungsgemäß insbesondere die in der Natur vorkommenden α-Aminosäuren, umfaßt darüber hinaus aber auch deren Homologe, Isomere und Derivate. Als Beispiel für Isomere können Enantiomere genannt werden. Derivate können beispielsweise mit Schutzgruppen versehene Aminosäuren sein.According to the invention, the term “amino acids” denotes in particular those in Naturally occurring α-amino acids, but also includes their Homologs, isomers and derivatives. Enantiomers can be used as examples of isomers to be named. Derivatives can, for example, be provided with protective groups Be amino acids.

Unter Aminosäuren mit "sterisch anspruchsvollen" Seitenketten werden solche Aminosäuren verstanden, deren Seitenkette in der β- oder γ-Position eine Verzwei­ gung aufweist; als Beispiele seien Valin und Isoleucin bzw. Leucin genannt.Amino acids with "sterically demanding" side chains are such Amino acids understood, the side chain of which has a branch in the β or γ position supply; examples include valine and isoleucine and leucine.

Als typische Beispiele für Aminosäuren mit unpolaren Seitenketten seien genannt: Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Prolin, Tryptophan, Phenylalanin, Methionin.Typical examples of amino acids with non-polar side chains are: Alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine.

Als typische Beispiele für Aminosäure mit basischen Seitenketten seien genannt: Lysin, Arginin, Histidin, Ornithin, Diaminobuttersäure.Typical examples of amino acids with basic side chains are: Lysine, arginine, histidine, ornithine, diaminobutyric acid.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen liegen bevorzugt in Form ihrer Salze vor. Im allgemeinen seien hier Salze mit organischen oder anorganischen Säuren genannt. Diese Salze können durch Umsetzung der freien Verbindungen der Formel (I) mit organischen oder anorganischen Säuren hergestellt werden. Als Säuren kommen hierbei erfindungsgemäß vorzugsweise Halogenwasserstoffsäuren, wie z. B. die Chlorwasserstoffsäure und die Bromwasserstoffsäure, insbesondere die Chlorwasser­ stoffsäure, ferner Phosphorsäure, Salpetersäure, Schwefelsäure, mono- und bifunk­ tionelle Carbonsäuren und Hydroxycarbonsäuren, wie z. B. Essigsäure, Trifluor­ essigsäure, Maleinsäure, Malonsäure, Oxalsäure, Gluconsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Salizylsäure, Sorbinsäure und Milchsäure sowie Sulfonsäuren, wie z. B. p-Toluolsulfonsäure, 1,5-Naphthalindisulfonsäure oder Camphersulfonsäure in Frage. The compounds according to the invention are preferably in the form of their salts. in the general salts with organic or inorganic acids may be mentioned here. These salts can be reacted with the free compounds of the formula (I) organic or inorganic acids. Coming as acids according to the invention preferably hydrohalic acids, such as. B. the Hydrochloric acid and hydrobromic acid, especially the hydrochloric acid Substance acid, also phosphoric acid, nitric acid, sulfuric acid, mono- and bifunk tional carboxylic acids and hydroxycarboxylic acids, such as. B. acetic acid, trifluor acetic acid, maleic acid, malonic acid, oxalic acid, gluconic acid, succinic acid, Fumaric acid, tartaric acid, citric acid, salicylic acid, sorbic acid and lactic acid and sulfonic acids, such as. B. p-toluenesulfonic acid, 1,5-naphthalenedisulfonic acid or Camphorsulfonic acid in question.  

Die vorliegende Erfindung wird nachstehend anhand von nicht einschränkenden Bei­ spielen und Vergleichsbeispielen veranschaulicht.The present invention will hereinafter be described by way of non-limiting example play and illustrated comparative examples.

BeispieleExamples

Bei den nachstehenden Beispielen beziehen sich alle Mengenangaben, soweit nicht anders angegeben, auf Gewichtsprozente.In the examples below, all quantities relate, if not otherwise stated, percentages by weight.

1. Herstellung des Bausteins (V) 1. Production of the component (V)

1a) p-Aminophenyl-3-O-methyl-β-L-fucopyranosid 1a) p-Aminophenyl-3-O-methyl-β-L-fucopyranoside

6 g (21 mmol) p-Nitrophenyl-β-L-fucopyranosid in 300 ml absol. Methanol werden mit 7,84 g (31,5 mmol) Dibutylzinnoxid versetzt und 2 h unter Rückfluß erhitzt. Anschließend wird eingeengt, der Rückstand getrocknet und dann in 300 ml DMF aufgenommen. Nach Zugabe von 15,7 ml Methyliodid wird der Ansatz 40 h bei 70°C gerührt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand in 300 ml Dichlormethan aufgenommen. Die Suspension wird filtriert, die verbleibende Lösung erneut eingeengt und einer Flash-Chromatographie (Dichlormethan/Methanol 99 : 1) unterzogen. Nach Einengen erhält man 3,82 g (83%) des Zielproduktes.6 g (21 mmol) p-nitrophenyl-β-L-fucopyranoside in 300 ml absolute. Be methanol 7.84 g (31.5 mmol) of dibutyltin oxide were added and the mixture was heated under reflux for 2 h. It is then concentrated, the residue is dried and then in 300 ml of DMF added. After addition of 15.7 ml of methyl iodide, the mixture is at 40 ° C. for 40 h touched. The solvent is removed in vacuo and the residue in 300 ml Dichloromethane added. The suspension is filtered, the remaining solution concentrated again and a flash chromatography (dichloromethane / methanol 99: 1) subjected. After concentration, 3.82 g (83%) of the target product are obtained.

3,81 g (12,73 mmol) des so erhaltenen p-Nitrophenyl-3-O-methylß-L-fucopyrano­ sids werden in Methanol gelöst und nach Zusatz von Palladium auf Aktivkohle (10%) in einer Wasserstoffatmosphäre bei geringem Überdruck hydriert. Nach Abfiltrieren des Katalysators und Fällen mit Ether erhält man 3 g (88%) des Zielprodukts. [DC: Dichlormethan/Methanol 9 : 1 Rf = 0,53]. 3.81 g (12.73 mmol) of the p-nitrophenyl-3-O-methylß-L-fucopyrano-side thus obtained are dissolved in methanol and, after addition of palladium on activated carbon (10%), hydrogenated in a hydrogen atmosphere at a slight excess pressure. After filtering off the catalyst and precipitating with ether, 3 g (88%) of the target product are obtained. [TLC: dichloromethane / methanol 9: 1 R f = 0.53].

1b) p-Isothiocyanatophenyl-3-O-methyl-β-L-fucopyranosid (IV) 1b) p-isothiocyanatophenyl-3-O-methyl-β-L-fucopyranoside (IV)

Eine Lösung des nach 1a) erhaltenen 6,8 g (25,3 mmol) p-Aminophenyl-3-O-methyl­ β-L-fucopyranosids in 600 ml Dioxan/Wasser 1 : 1 wird unter Rühren mit 2,72 ml Thiophosgen (1,4 Äq.) versetzt. Nach 10 min. versetzt man mit 26 ml Ethyl­ diisopropylamin, rührt weitere 5 min bei RT und engt anschließend im Vakuum auf ein Volumen von 150 ml ein. Man setzt 800 ml Dichlormethan zu und trennt die Phasen. Die organische Phase wird zweimal mit Wasser gewaschen, über Natrium­ sulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird mit 200 ml Methyl-tert.- butylether und 200 ml Petrolether verrührt und abgesaugt. Man erhält 7,26 g (92%) des Isothiocyanats.A solution of the 6.8 g (25.3 mmol) of p-aminophenyl-3-O-methyl obtained according to 1a) β-L-fucopyranosids in 600 ml of dioxane / water 1: 1 is stirred with 2.72 ml Thiophosgene (1.4 eq.) Added. After 10 min. are mixed with 26 ml of ethyl diisopropylamine, stirred for a further 5 min at RT and then concentrated in vacuo a volume of 150 ml. 800 ml of dichloromethane are added and the are separated Phases. The organic phase is washed twice with water, over sodium dried sulfate and concentrated. The residue is mixed with 200 ml of methyl tert. butyl ether and 200 ml of petroleum ether stirred and suction filtered. 7.26 g (92%) are obtained. of isothiocyanate.

1c) Nα-(4-(3-O-Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy)-phenylamino-thiocarbonyl]-L-histi­ din (V) 1c) N α - (4- (3-O-methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy) -phenylamino-thiocarbonyl] -L-histidine (V)

Eine Lösung von 10 g (0,0321 mol) des unter 1b) erhaltenen Isothiocyanats und 4,98 g (0,0321 mol) L-Histidin werden in 400 ml Dioxan/Wasser 1 : 1 suspendiert und mit 11 ml N-Ethyldiisopropylamin versetzt. Man rührt für 16 h bei Raumtemperatur, engt dann im Vakuum ein und redestilliert mit Dichlormethan/Methanol 1 : 1. Das Rohprodukt wird in 200 ml Methanol gelöst und in 1 L Methyl-t-butylether (MTBE) getropft. Der Rückstand wird abfiltriert, mit MTBE gewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält das Zielprodukt in einer Ausbeute von 95% [DC: Aceto­ nitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 Rf = 0,14].A solution of 10 g (0.0321 mol) of the isothiocyanate obtained in 1b) and 4.98 g (0.0321 mol) of L-histidine are suspended in 400 ml of dioxane / water 1: 1 and mixed with 11 ml of N-ethyldiisopropylamine . The mixture is stirred for 16 h at room temperature, then concentrated in vacuo and redistilled with dichloromethane / methanol 1: 1. The crude product is dissolved in 200 ml of methanol and added dropwise in 1 L of methyl t-butyl ether (MTBE). The residue is filtered off, washed with MTBE and dried in vacuo. The target product is obtained in a yield of 95% [TLC: aceto nitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R f = 0.14].

2. Herstellung des Bausteins (II) 2. Production of the component (II)

2a) 20(S)-20-O-[N-(tert-Butoxycarbonyl)-L/D-valyl]-camptothecin 2a) 20 (S) -20-O- [N- (tert-Butoxycarbonyl) -L / D-valyl] camptothecin

Eine Suspension von 10 g (28,7 mmol) 20(S)-Camptothecin in 500 ml absolutem Dichlormethan wird unter Rühren mit 14 g (2 Äquivalenten) N-(tert-Butoxy-car­ bonyl)-valin-N-carbonsäureanhydrid sowie 1 g 4-(N,N-Dimethylamino)-pyridin ver­ setzt. Nach 4 Tagen Erhitzen unter Rückfluß wird im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird mit 100 ml MTBE für 20 Minuten verrührt. Man setzt dann 200 ml Petrolether zu und filtriert. Man erhält 14,9 g (95%) der Zielverbindung. [DC: Acetonitril Rf = 0,34]. A suspension of 10 g (28.7 mmol) 20 (S) -camptothecin in 500 ml absolute dichloromethane is stirred with 14 g (2 equivalents) of N- (tert-butoxy-car bonyl) -valine-N-carboxylic acid anhydride and 1 g 4- (N, N-Dimethylamino) pyridine ver. After 4 days of heating under reflux, the mixture is concentrated in vacuo. The residue is stirred with 100 ml MTBE for 20 minutes. 200 ml of petroleum ether are then added and the mixture is filtered. 14.9 g (95%) of the target compound are obtained. [TLC: acetonitrile R f = 0.34].

2b) 20(S)-20-O-L-Valylcamptothecin, Trifluoracetat (II) 2b) 20 (S) -20-OL-valylcamptothecin, trifluoroacetate (II)

Eine Lösung von Verbindung 2a (11,65 g, 21 mmol) in einer Mischung aus 300 ml Dichlormethan und 70 ml wasserfreier Trifluoressigsäure wird für 1 h bei 5°C gerührt. Nach Einengen im Vakuum auf ein kleines Volumen wird das Produkt mit Diethylether ausgefällt und gründlich mit Diethylether gewaschen. Das Produkt wird nochmals aus Dichlormethan/Methanol mit Diethylether gefällt. Gegebenenfalls wird das Rohprodukt nochmals in 40 ml Methanol aufgenommen, mit 120 ml Methyl-t­ butylether versetzt und auf 0°C abgekühlt. Der Niederschlag wird abfiltriert, und man erhält 9,4 g (80%) der gewünschten Verbindung [DC: Acetonitril/Wasser 20 : 1 Rf = 0,39]. A solution of compound 2a (11.65 g, 21 mmol) in a mixture of 300 ml of dichloromethane and 70 ml of anhydrous trifluoroacetic acid is stirred at 5 ° C. for 1 h. After concentration in vacuo to a small volume, the product is precipitated with diethyl ether and washed thoroughly with diethyl ether. The product is precipitated again from dichloromethane / methanol with diethyl ether. If necessary, the crude product is taken up again in 40 ml of methanol, 120 ml of methyl t-butyl ether are added and the mixture is cooled to 0.degree. The precipitate is filtered off and 9.4 g (80%) of the desired compound are obtained [TLC: acetonitrile / water 20: 1 R f = 0.39].

3. Synthese der Verbindung (I) 3. Synthesis of compound (I)

3a) 20(S)-20-O{-Nα-[4-(3-O-Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy)-phenylamino-thiocar­ bonyl]-L-histidyl-L-valyl}-camptothecin 3a) 20 (S) -20-O {-N α - [4- (3-O-Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy) -phenylamino-thiocar bonyl] -L-histidyl-L-valyl} -camptothecin

1,04 g (1,96 mmol) Nα-[4-(3-O-Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy)-phenylamino-thio­ carbonyl]-L-histidin (V, Beispiel 1) und 1 g (1,78 mmol) 20(S)-20-O-L-Valyl­ camptothecin Trifluoracetat (II, Beispiel 2) werden in 35 ml Dimethylformamid gelöst, die Mischung auf 0°C abgekühlt und anschließend mit 1,35 g (3,56 mmol) N- [(Dimethylamino)-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridin-1-yl-methylen]-N-methylmethan­ aminiumhexafluorphosphat-N-oxid (HATU) und 616 µl N-Ethyldiisopropylamin versetzt. Man läßt über Nacht bei 0°C rühren. Die Mischung wird dann in 400 ml MTBE getropft, der Rückstand abfiltriert und anschließend in 100 ml Methanol und 5 ml DMF aufgenommen. 3 ml einer 17%igen wäßrigen Ammoniak-Lösung werden zugegeben und die Mischung 10 Minuten gerührt. Anschließend wird die Mischung in 500 ml MTBE getropft. Der Rückstand wird abfiltriert, anschließend mit MTBE gewaschen und dann mit 25 ml Wasser verrührt. Nach 15 Minuten wird der Rück­ stand erneut gesammelt und über Nacht getrocknet. Das so erhaltene Rohprodukt besteht im wesentlichen aus einem Diastereomerengemisch (L-Histidin- und D- Histidin-Epimer der Zielverbindung). Die Abtrennung des als Nebenprodukt erhaltenen D-Histidin-Epimers erfolgt durch Verrühren des Rohproduktes mit 35 ml Methanol für 2 Stunden. Anschließend wird der Niederschlag abfiltriert und noch zweimal dieser Reinigungsoperation unterzogen. Man erhält so 819 mg (51%) des diastereomerenreinen Zielproduktes [DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 Rf = 0,38].1.04 g (1.96 mmol) N α - [4- (3-O-methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy) -phenylamino-thio carbonyl] -L-histidine (V, Example 1) and 1 g (1.78 mmol) 20 (S) -20-OL-valyl camptothecin trifluoroacetate (II, example 2) are dissolved in 35 ml of dimethylformamide, the mixture is cooled to 0 ° C. and then with 1.35 g (3.56 mmol ) N- [(Dimethylamino) -1H-1,2,3-triazolo [4,5-b] pyridin-1-ylmethylene] -N-methylmethane aminium hexafluorophosphate N-oxide (HATU) and 616 µl N-ethyldiisopropylamine transferred. The mixture is stirred at 0 ° C. overnight. The mixture is then added dropwise to 400 ml of MTBE, the residue is filtered off and then taken up in 100 ml of methanol and 5 ml of DMF. 3 ml of a 17% aqueous ammonia solution are added and the mixture is stirred for 10 minutes. The mixture is then added dropwise to 500 ml of MTBE. The residue is filtered off, then washed with MTBE and then stirred with 25 ml of water. After 15 minutes the residue is collected again and dried overnight. The crude product thus obtained essentially consists of a mixture of diastereomers (L-histidine and D-histidine epimer of the target compound). The D-histidine epimer obtained as a by-product is separated off by stirring the crude product with 35 ml of methanol for 2 hours. The precipitate is then filtered off and subjected to this cleaning operation twice more. This gives 819 mg (51%) of the diastereomerically pure target product [TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R f = 0.38].

3b) 20(S)-20-O-{Nα-[4-(3-O-Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy)-phenylamino-thiocar­ bonyl]-L-histidyl-L-valyl}-camptothecin, Hydrochlorid 3b) 20 (S) -20-O- {N α - [4- (3-O-Methyl-β-L-fucopyranosyl-oxy) -phenylamino-thiocar bonyl] -L-histidyl-L-valyl} -camptothecin , Hydrochloride

806 mg (0,9 mmol) der Verbindung aus Beispiel 3a werden in 40 ml Wasser suspendiert und mit 0,86 ml (0,95 Eq) einer 1M-Salzsäurelösung in das Hydrochlorid überführt. Unter Rühren entsteht eine Lösung, die anschließend lyophilisiert wird. Man erhält so 814 mg (97%) der Zielverbindung [DC: Acetonitril/Wasser 10 : 1, Rf = 0,15, [a] 22|D = -37,6° (c = 0,21 DMF)].].806 mg (0.9 mmol) of the compound from Example 3a are suspended in 40 ml of water and converted into the hydrochloride with 0.86 ml (0.95 Eq) of a 1M hydrochloric acid solution. A solution is formed with stirring, which is then lyophilized. This gives 814 mg (97%) of the target compound [TLC: acetonitrile / water 10: 1, R f = 0.15, [a] 22 | D = -37.6 ° (c = 0.21 DMF)]. ].

Claims (7)

1. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I),
worin
R1 für eine sterisch anspuchsvolle unpolare Seitenkette einer Aminosäure steht und
R2 für eine basische Seitenkette einer Aminosäure steht,
bei dem man das Isothiocyanat der Formel (IV)
mit einer gegebenenfalls geschützten terminalen basischen Aminosäure
worin R2 die vorstehend angegebene Bedeutung hat,
zu einem Aminosäurekonjugat der Formel (V) umsetzt,
worin R2 die vorstehend angegebene Bedeutung hat, dieses dann mit Aminosäurekonjugaten der Formel (II) umsetzt,
worin R1 die vorstehend angegebene Bedeutung hat, die Seiten­ kettenschutzgruppe abspaltet und die Verbindungen gegebenenfalls in ein geeignetes Salz überführt,
dadurch gekennzeichnet, daß die Kupplung der Bausteine (II) und (V) in Gegenwart eines Kupplungsreagenzes durchgeführt wird, daß aus der aus folgenden Verbindungen bestehenden Gruppe ausgewählt ist:
1. Process for the preparation of compounds of the formula (I),
wherein
R 1 stands for a sterically demanding non-polar side chain of an amino acid and
R 2 represents a basic side chain of an amino acid,
in which the isothiocyanate of the formula (IV)
with an optionally protected terminal basic amino acid
wherein R 2 has the meaning given above,
converted to an amino acid conjugate of the formula (V),
wherein R 2 has the meaning given above, this is then reacted with amino acid conjugates of the formula (II),
where R 1 has the meaning given above, cleaves the side chain protecting group and, if appropriate, converts the compounds into a suitable salt,
characterized in that the coupling of the building blocks (II) and (V) is carried out in the presence of a coupling reagent that is selected from the group consisting of the following compounds:
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Kupplung der Bausteine (II) und (V) in Gegenwart von N-[(Dimethylamino)-1H-1,2,3- triazolo[4,5-b]pyridin-1-yl-methylen]-N-methylmethanaminiumhexafluor­ phosphat-N-oxid (HATU)
durchgeführt wird.2. The method according to claim 1, characterized in that the coupling of the building blocks (II) and (V) in the presence of N - [(dimethylamino) -1H-1,2,3- triazolo [4,5-b] pyridine- 1-yl-methylene] -N-methylmethanaminium hexafluorophosphate-N-oxide (HATU)
is carried out. 3. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß Aminosäuren verwendet werden, bei denen
R1 für einen verzweigten Alkylrest mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen steht und
R2 für einen Rest der Formel -(CH2)n-R3 steht, wobei
R3 -NH2,
bedeutet und
n für eine Zahl 1 bis 4 steht.3. The method according to any one of claims 1 or 2, characterized in that amino acids are used in which
R 1 represents a branched alkyl radical having up to 4 carbon atoms and
R 2 represents a radical of the formula - (CH 2 ) n -R 3 , where
R 3 -NH 2 ,
means and
n stands for a number 1 to 4. 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß Aminosäuren verwendet werden, bei denen
R1 für einen verzweigten Alkylrest der Formeln
steht und
R2 für einen Rest der Formeln
4. The method according to any one of claims 1 to 3, characterized in that amino acids are used in which
R 1 for a branched alkyl radical of the formulas
stands and
R 2 for a remainder of the formulas
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Isothiocyanat der Formel (IV) mit gegebenenfalls geschütztem Lysin oder Histdin umgesetzt wird.5. The method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that the isothiocyanate of formula (IV) with optionally protected lysine or Histdin is implemented. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Isothiocyanat der Formel (IV) mit ungeschütztem Histdin umgesetzt wird. 6. The method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the isothiocyanate of the formula (IV) is reacted with unprotected histdin.   7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß das Camptothecin mit gegebenenfalls geschütztem Valin umgesetzt wird.7. The method according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the camptothecin is reacted with optionally protected valine.
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