DE19815812A1 - New camptothecin derivatives useful as cytostatic agents for treating cancer - Google Patents

Abstract

Camptothecin amino acid or peptide esters (I) are new. Compounds of formula (I) and their salts are new: A = 2-9C alkanoyl optionally substituted by halogen, OH, 1-8C alkoxy, amino, carbonyl (sic), COOH or 6-12C aryl; 7-13C aroyl optionally substituted by halogen, OH, 1-8C alkoxy, amino, carbonyl (sic), COOH or 1-8C alkyl; (6-12C aryl)carbamyl or (1-8C alkyl)carbamyl optionally substituted by halogen, OH, 1-8C alkoxy, carbonyl (sic), COOH, 1-8C alkyl or 6-12C aryl; or 6-12C arylsulfonyl or 1-8C alkylsulfonyl optionally substituted by halogen, 1-8C alkoxy, 1-8C alkyl or 6-12C aryl; R, R' = amino acid side chains; CPT = an ester-linked camptothecin residue optionally modified in the A, B or C ring; n = 0-10.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Konjugate aus Cytostatika und Nα-modifizierten Aminosäuren bzw. Peptiden, Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel, insbesondere im Zusammenhang mit Krebserkrankungen.The present invention relates to conjugates of cytostatic and Nα-modified Amino acids or peptides, process for their preparation and their use as a medicine, especially in the context of cancer.

Die Chemotherapie bei Tumorerkrankungen ist begleitet von meist schwerwiegenden Nebenwirkungen, bedingt durch die Toxizität von Chemotherapeutika auf proliferie­ rende Zellen anderer Gewebe. Seit vielen Jahren beschäftigen sich Wissenschaftler mit dem Problem der Verbesserung der Selektivität von eingesetzten Wirkstoffen. Ein vielfach verfolgter Ansatz ist die Synthese von Prodrugs, die mehr oder weniger selektiv im Zielgewebe beispielsweise durch Veränderung des pH-Wertes (z. B. Tietze et al., DE 42 29 903) durch Enzyme (z. B. Glucuronidasen; Jacquesy et al., EP 511 917; Bosslet et al., EP 595 133) oder durch Antikörper-Enzym-Konjugate (Bagshaawe et al., WO 88/07378; Senter et al., US PS 4 975 278; Bosslet et al., EP 595 133) freigesetzt werden. Problematisch bei diesen Ansätzen ist u. a. die mangelnde Stabilität der Konjugate in anderen Geweben und Organen und insbesondere die ubiquitäre Wirkstoffverteilung, die sich an die extrazelluläre Wirkstofffreisetzung im Tumorgewebe anschließt.Chemotherapy for tumors is accompanied by mostly serious Side effects due to the toxicity of chemotherapeutic agents to proliferate cells of other tissues. For many years, scientists have been involved with the problem of improving the selectivity of active ingredients used. On often followed approach is the synthesis of prodrugs, more or less selectively in the target tissue, for example by changing the pH (eg Tietze et al., DE 42 29 903) by enzymes (eg glucuronidases, Jacquesy et al., EP 511,917; Bosslet et al., EP 595 133) or by antibody-enzyme conjugates (Bagshaawe et al., WO 88/07378; Senter et al., U.S. Patent 4,975,278; Bosslet et al., EP 595 133) are released. The problem with these approaches is u. a. the lacking Stability of the conjugates in other tissues and organs and in particular the ubiquitous drug distribution, which is related to extracellular drug release in the Tumor tissue connects.

20(S)-Camptothecin (3) ist ein pentacyclisches Alkaloid, das 1966 von Wall et al. isoliert wurde (J. Amer. Chem. Soc. 88 (1966) 3888). Es besitzt ein hohes Antitumor- Wirkpotential in zahlreichen In-vitro- und In-vivo-Tests. Die Realisierung des vielver­ sprechenden Potentials in der Klinik scheiterte jedoch an Toxizitäts- und Löslich­ keitsproblemen.20 (S) -camptothecin (3) is a pentacyclic alkaloid reported by Wall et al. was isolated (J. Amer. Chem. Soc. 88 (1966) 3888). It has a high anti-tumor Potential for action in numerous in vitro and in vivo tests. The realization of the vielver however, the potential for speech in the clinic failed due to toxicity and solubility keitsproblemen.

Durch Öffnung des E-Ring-Lactons und Bildung des Natriumsalzes wurde eine wasserlösliche Verbindung erhalten, die in einem pH-abhängigen Gleichgewicht mit der ringgeschlossenen Form steht. Klinische Studien führten auch hier bisher nicht zum Erfolg. Upon opening of the E-ring lactone and formation of the sodium salt, a water-soluble compound obtained in a pH-dependent equilibrium with the ring-closed shape stands. Clinical studies have not led to this to success.  

Etwa 20 Jahre später wurde gefunden, daß die biologische Aktivität auf eine Enzym­ inhibition der Topoisomerase I zurückzuführen ist. Seither wurden die Forschungs­ Aktivitäten wieder verstärkt, um verträglichere und in vivo wirksame Camptothecin- Derivate zu finden.About 20 years later it was found that the biological activity on an enzyme Inhibition of topoisomerase I is due. Since then, the research Increased activity to provide more tolerable and in vivo effective camptothecin To find derivatives.

Zur Verbesserung der Wasserlöslichkeit wurden z. B. Salze von A-Ring- und B-Ring- modifizierten Camptothecin-Derivaten sowie von 20-O-Acyl-Derivaten mit ionisier­ baren Gruppen beschrieben (Vishnuvajjala et al., US 4 943 579). Das letztere Prodrug-Konzept wurde später auch auf modifizierte Camptothecin-Derivate übertragen (Wani et al. WO 96/02546). Die beschriebenen 20-O-Acyl-Prodrugs haben allerdings in vivo eine sehr kurze Halbwertszeit und werden sehr schnell zum Grundkörper gespalten.To improve the water solubility z. Salts of A-ring and B-ring modified camptothecin derivatives and of 20-O-acyl derivatives with ionizing Baren groups described (Vishnuvajjala et al., US 4,943,579). The latter Prodrug concept was later also applied to modified camptothecin derivatives (Wani et al., WO 96/02546). The described 20-O-acyl prodrugs have however, in vivo a very short half-life and become very fast for Split main body.

Es wurde nun gefunden, daß die Modifizierung von Cytostatika wie z. B. Campto­ thecin bzw. Camptothecin-Derivaten mit N^α-modifizierten Aminosäuren und Peptiden zu neuen Verbindungen mit überraschenden, interessanten Eigenschaften führt:
It has now been found that the modification of cytostatics such. B. Campto thecin or camptothecin derivatives with N ^α- modified amino acids and peptides leads to new compounds with surprising, interesting properties:

• - Die so erhaltenen Konjugate sind synthetisch gut zugänglich und zeigen in vitro eine hohe Aktivität gegenüber verschiedenen Tumorzellinien und Tumor­ xenografts.- The conjugates thus obtained are synthetically readily accessible and show in in vitro a high activity against various tumor cell lines and tumor xenografts.
• - In Abhängigkeit von der Zusammensetzung der Nα-modifizierten Amino­ säuren zeigen die erfindungsgemäßen Konjugate im Vergleich zu den zu­ grundeliegenden Cytostatika wesentlich verbesserte Löslichkeitseigenschaften. - Depending on the composition of the Nα-modified amino acids show the conjugates of the invention compared to those basic cytostatic drugs have significantly improved solubility properties.  
• - Bedingt durch die α-Modifizierung sind sie in extrazellulärem Medium und in Blut wesentlich stabiler als die zuvor beschriebenen reinen Aminosäure- Prodrugs von Camptothecin-Derivaten.- Due to the α-modification they are in extracellular medium and in Blood is much more stable than the previously described pure amino acid Prodrugs of camptothecin derivatives.
• - Im Fall von 20-O-Acylierungen von Camptothecin-Derivaten wird durch die esterartige Verknüpfung der Carrier-Reste mit der 20-Hydroxygruppe der für die Wirkung wichtige Lactonring stabilisiert.In the case of 20-O-acylations of camptothecin derivatives, the ester-like linkage of the carrier residues with the 20-hydroxy group of for the effect stabilized important lactone ring.

Die Erfindung betrifft Verbindungen der allgemeinen Formel (I)
The invention relates to compounds of the general formula (I)

mit R, R' Seitenketten von Aminosäureresten.with R, R 'side chains of amino acid residues.

Bevorzugt sind R, R' Seitenketten von Aminosäureresten, wie z. B. Alanin, Aspara­ ginsäure, Glutaminsäure, Glycin, Leucin, Histidin, Lysin, Arginin, Ornithin, Serin, Tyrosin, Valin, Diaminopropionsäure, α-, γ-Diaminobuttersäure oder Phenylalamin, wobei mehrere Aminosäurereste über die α-Aminogruppe peptidisch verknüpft sein können.Preferably, R, R 'are side chains of amino acid residues, such as. Alanine, Aspara ginic acid, glutamic acid, glycine, leucine, histidine, lysine, arginine, ornithine, serine, Tyrosine, valine, diaminopropionic acid, α-, γ-diaminobutyric acid or phenylalanine, wherein several amino acid residues are peptide linked through the α-amino group can.

Falls R und R' weitere funktionelle Gruppen tragen, so sind diese bevorzugt deblockiert, wobei dann R und R' gleich oder unterschiedlich im Sinne der Definition sein kann.If R and R 'bear further functional groups, these are preferred deblocked, where R and R 'are the same or different in the sense of the definition can be.

In der allgemeinen Formel (I) nimmt n Werte von 0 bis 10, bevorzugt 0 bis 2, an.In the general formula (I), n takes values of 0 to 10, preferably 0 to 2.

Weiterhin bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), worin CPT für einen Campto­ thecin-Rest oder ein im A-Ring, B-Ring oder C-Ring modifiziertes Camptothecin- Derivat seht und CPT über eine Hydroxyfunktion esterartig verknüpft ist. Preference is furthermore given to compounds of the formula (I) in which CPT is a campto thecin residue or a camptothecin modified in the A-ring, B-ring or C-ring. Derivat see and CPT is ester-linked via a hydroxy function.  

Weiterhin bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), worin A eine Gruppe ist, die den proteolytischen Abbau von Peptidkonjugaten hemmen kann.Preference is furthermore given to compounds of the formula (I) in which A is a group which inhibit the proteolytic degradation of peptide conjugates.

A kann beispielsweise ein verzweigter oder unverzweigter (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁- C₆)-Alkylcarbonylrest sein, der weiterhin durch Halogen, Hydroxy, verzweigtes oder unverzweigtes (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkoxy, Amino, Carbonyl, Carboxy oder einen (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Arylrest substituiert sein kann.A may, for example, a branched or unbranched (C ₁ -C ₈₎ - be alkylcarbonyl, further substituted by halogen, hydroxy, branched or unbranched (C ₁ -C ₈₎ -, preferably (C ₆ C ₁₎ -, preferably (C ₁ -C ₆ ) alkoxy, amino, carbonyl, carboxy or a (C ₆ -C ₁₂ ), preferably (C ₆ ) -aryl may be substituted.

Weiterhin kann A ein (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Arylcarbonylrest sein, der durch Halogen, Hydroxy, verzweigtes oder unverzweigtes (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)- Alkoxy, Amino, Carabonyl, Carboxy oder einen verzweigten oder unverzweigten (C₁- C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkylrest substituiert sein kann.Furthermore, A may be a (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -arylcarbonyl radical represented by halogen, hydroxy, branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ), preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkoxy , amino, Carabonyl, carboxy or a branched or unbranched (C ₁ - C ₈₎ -, preferably (C ₁ -C ₆₎ alkyl may be substituted.

Weiterhin kann A ein (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Arylaminocarbonylrest oder ein verzweigter oder unverzweigter (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkylaminocarabonyl­ rest sein, der durch Halogen, Hydroxy, verzweigtes oder unverzweigtes (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkoxy, Carbonyl, Carboxy oder einen verzweigten oder unver­ zweigten (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkyl- bzw. (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Aryl­ rest substituiert sein kann.Furthermore, A may be a (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -Arylaminocarbonylrest or a branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ), preferably (C ₁ -C ₆ ) -Alkylaminocarabonyl rest by halogen , Hydroxy, branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ) -, preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkoxy, carbonyl, carboxy or a branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ) -, preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkyl or (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -aryl radical may be substituted.

Weiterhin kann A ein (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Aryl- oder ein verzweigter oder unverzweigter (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkylsulfonylrest sein, der durch Halo­ gen, verzweigtes oder unverzweigtes (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkoxy, oder einen verzweigten oder unverzweigten (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkyl- bzw. (C₆- C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Arylrest substituiert sein kann.Furthermore, A may be a (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -aryl or a branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ) -, preferably (C ₁ -C ₆ ) -Alkylsulfonylrest by Halo branched, branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ), preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkoxy, or a branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ), preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkyl or (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -Arylrest may be substituted.

Die Aminosäurereste können jeweils in der D-Form oder in der L-Form vorliegen.The amino acid residues may each be in the D-form or the L-form.

Die Nomenklatur der Aminosäuren folgt den von der IUPAC aufgestellten Regeln. Bei fehlender Angabe der Stereochemie wurden Aminosäuren der L-Form eingesetzt. The amino acid nomenclature follows the rules established by the IUPAC. If the stereochemistry was omitted, L-form amino acids were used.  

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in stereoisomeren Formen, beispiels­ weise als Enantiomere oder Diastereomere, oder als deren Gemische, beispielsweise als Racemat, vorliegen. Die Erfindung betrifft sowohl die reinen Stereoisomere als auch deren Gemische.The compounds of the invention can in stereoisomeric forms, for example as enantiomers or diastereomers, or as mixtures thereof, for example as a racemate. The invention relates to both the pure stereoisomers as also their mixtures.

Diastereomerengemische können gegebenenfalls, falls erforderlich, mittels bekannter Methoden in die einheitlichen Bestandteile getrennt werden, beispielsweise durch Chromatographie (z. B. HPLC) oder durch Kristallisationsverfahren. Möglich ist dies nicht nur auf der Endstufe der Konjugate, sondern gegebenenfalls auch auf Zwischen­ stufen. Aus den diastereomerenreinen Zwischenstufen können gegebenenfalls durch geeignete Syntheseführung die diastereomerenreinen Endstufen hergestellt werden.Diastereomeric mixtures may optionally, if necessary, by means of known Methods are separated into the unitary components, for example by Chromatography (eg HPLC) or by crystallization method. This is possible not only on the final stage of the conjugates, but possibly also on intermediate stages. From the diastereomerically pure intermediates may optionally by suitable synthesis of the diastereomerically pure final stages are produced.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Form ihrer Salze vorliegen. Im allgemeinen seien hier Salze mit organischen oder anorganischen Basen oder Säuren sowie innere Salze genannt.The compounds according to the invention can also be present in the form of their salts. in the general here are salts with organic or inorganic bases or acids and called internal salts.

Zu den Säuren, die addiert werden können, gehören vorzugsweise Halogenwasser­ stoffsäuren, wie z. B. die Chlorwasserstoffsäure und die Bromwasserstoffsäure, insbesondere die Chlorwasserstoffsäure, ferner Phosphorsäure, Salpetersäure, Schwefelsäure, mono- und bifunktionelle Carbonsäuren und Hydroxycarbonsäuren, wie z. B. Essigsäure, Trifluoressigsäuree, Maleinsäure, Malonsäure, Oxalsäure, Gluconsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Salizylsäure, Sorbinsäure und Milchsäure sowie Sulfonsäuren, wie z. B. p-Toluolsulfonsäure, 1,5- Naphthalindisulfonsäure oder Camphersulfonsäure.The acids which can be added preferably include halogenated water fatty acids, such as. Hydrochloric acid and hydrobromic acid, especially hydrochloric acid, furthermore phosphoric acid, nitric acid, Sulfuric acid, mono- and bifunctional carboxylic acids and hydroxycarboxylic acids, such as Acetic acid, trifluoroacetic acid, maleic acid, malonic acid, oxalic acid, Gluconic acid, succinic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, salicylic acid, Sorbic acid and lactic acid and sulfonic acids, such as. For example, p-toluenesulfonic acid, 1,5- Naphthalenedisulfonic acid or camphorsulfonic acid.

Physiologisch unbedenkliche Salze können ebenso Metall- oder Ammoniumsalze solcher erfindungsgemäßen Verbindungen sein, die eine freie Carboxylgruppe be­ sitzen. Besonders bevorzugt sind z. B. Natrium-, Kalium-, Magnesium- oder Calcium­ salze, sowie Ammoniumsalze, die abgeleitet sind von Ammoniak oder organischen Aminen wie beispielsweise Ethylamin, Di- bzw. Triethylamin, Di- bzw. Triethanol­ amin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Arginin, Lysin, Ethylendiamin oder Phenethylamin. Physiologically acceptable salts may also be metal or ammonium salts such compounds of the invention be a free carboxyl group be sit. Particular preference is z. As sodium, potassium, magnesium or calcium salts, as well as ammonium salts, which are derived from ammonia or organic Amines such as ethylamine, di- or triethylamine, di- or triethanol amine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, arginine, lysine, ethylenediamine or Phenethylamine.  

Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (I), dadurch gekennzeichnet, daß man Peptidkonjugate; von Camptothecin oder von Camptothecin-Derivaten in bekannter Weise herstellt, selektiv an der α-Amingruppe der terminalen Aminosäure zu (II) deblockiert und anschließend mit Verbindungen der allgemeinen Formel (III)
The invention further relates to a process for the preparation of compounds of the general formula (I), characterized in that peptide conjugates; of camptothecin or of camptothecin derivatives in a known manner, deblocked selectively at the α-amine group of the terminal amino acid to (II) and subsequently deblocked with compounds of general formula (III)

in geeigneten Lösemitteln gegebenenfalls in Gegenwart einer Base umsetzt,
worin A die oben angegebene Bedeutung hat und X entweder eine Abgangsgruppe wie OH, Halogen, OB (inneres oder symmetrisches Anhydrid wie Bernsteinsäure­ anhydrid, Acetanhydrid, bzw. Ester) sein kann.in suitable solvents, if appropriate in the presence of a base,
wherein A has the meaning given above and X may be either a leaving group such as OH, halogen, OB (internal or symmetrical anhydride such as succinic anhydride, acetic anhydride, or ester).

Weiterhin kann die Gruppe AX zusammen ein Elektrophil wie z. B. ein Isocyanat sein.Furthermore, the group AX together an electrophile such. B. be an isocyanate.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (II) sind zugänglich, indem man nach üblichen Methoden der Peptidchemie gegebenenfalls geschützte Aminosäurebausteine an die Hydroxyfunktionen von CPT anknüpft und gegebenenfalls durch schrittweise Einführung weiterer Aminosäurebausteine eine Peptidkette aufbaut. Alternativ können auch gegebenenfalls Schutzgruppen tragende Peptid-Bausteine nach üblichen Metho­ den mit CPT verknüpft werden.The compounds of general formula (II) are accessible by customary methods of peptide chemistry optionally protected amino acid building blocks linked to the hydroxy functions of CPT and optionally by stepwise Introduction of additional amino acid building blocks to build a peptide chain. Alternatively you can also optionally protecting groups bearing peptide building blocks by conventional methods linked to CPT.

Die Reaktionen können bei verschiedenen Druck- und Temperaturverhältnissen, beispielsweise 0,5 bis 2 bar, bzw. -30 bis +100°C, in geeigneten Lösungsmitteln wie Dimethylformamid (DMF), Tetrahydrofuran (THF), Dichlormethan, Chloroform, niederen Alkoholen, Acetonitril, Dioxan, Wasser oder in Gemischen der genannten Lösungsmittel durchgeführt werden. In der Regel sind Reaktionen in DMF oder THF/Dichlormethan bei Normaldruck und bei einer Temperatur von 0 bis 60°C, insbesondere bei etwa Raumtemperatur, bevorzugt.The reactions can be carried out under different pressure and temperature conditions, for example, 0.5 to 2 bar, or -30 to + 100 ° C, in suitable solvents such as Dimethylformamide (DMF), tetrahydrofuran (THF), dichloromethane, chloroform,  lower alcohols, acetonitrile, dioxane, water or mixtures thereof Solvents are carried out. In general, reactions are in DMF or THF / dichloromethane at atmospheric pressure and at a temperature of 0 to 60 ° C, especially at about room temperature, preferably.

Für die Aktivierung der Carboxylgruppen kommen die in der Peptidchemie bekannten Kupplungsreagenzien wie sie z. B. in Jakubke/Jeschkeit: Aminosäuren, Peptide, Proteine; Verlag Chemie 1982 oder Tetrahedr. Ltt. 34, 6705 (1993) beschrieben sind, in Frage. Bevorzugt sind beispielsweise Säurechloride, N-Carbonsäureanhydride oder gemischte Anhydride.For the activation of the carboxyl groups are those known in peptide chemistry Coupling reagents as z. In Jakubke / Jeschkeit: amino acids, peptides, proteins; Verlag Chemie 1982 or Tetrahedr. Ltt. 34, 6705 (1993), in question. Preferred are, for example, acid chlorides, N-carboxylic anhydrides or mixed anhydrides.

Weiterhin bevorzugt zur Aktivierung der Carboxylgruppen ist die Bildung von Addukten mit Carbodiimiden z. B. N,N'-Diethyl-, N,N'-Diisopropyl-, N,N'- Dicyclohexylcarbodiimid, N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethyl-carbodiimid-Hydro­ chlorid, N-Cyclohexyl-N'-(2-morpholinoethyl)-carbodiimid-metho-p-toluolsulfonat, oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbin­ dungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-1,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert.-Butyl-5-methyl­ isoxazoliumperchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-1-ethoxycarbonyl- 1,2-dihydrochinolin, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroform, oder Benzotriazolyloxy-tris(dimethylamino)phosphonium-hexafluorophosphat, 1- Hydroxybenzotriazol oder Hydroxysuccinimidester.Further preferred for activation of the carboxyl groups is the formation of Adducts with carbodiimides z. N, N'-diethyl, N, N'-diisopropyl, N, N'- Dicyclohexylcarbodiimide, N- (3-dimethylaminopropyl) -N'-ethyl-carbodiimide-hydro chloride, N-cyclohexyl-N '- (2-morpholinoethyl) -carbodiimide-metho-p-toluenesulfonate, or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compound such as 2-ethyl-5-phenyl-1,2-oxazolium-3-sulfate or 2-tert-butyl-5-methyl isoxazolium perchlorate, or acylamino compounds such as 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl 1,2-dihydroquinoline, or propanephosphonic anhydride, or isobutylchloroform, or benzotriazolyloxy-tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate, 1- Hydroxybenzotriazole or hydroxysuccinimide ester.

Als Basen können beispielsweise Triethylamin, Hünig-Base, Ethyldiisopropylamin, Pyridin, N,N-Dimethylaminopyridin oder andere eingesetzt werden.Examples of suitable bases are triethylamine, Hünig base, ethyldiisopropylamine, Pyridine, N, N-dimethylaminopyridine or others are used.

Als Schutzgruppen für eventuelle weitere reaktive Funktionen im Camptothecin-Teil oder für Drittfunktionen der Aminosäuren können die in der Peptidchemie bekannten Schutzgruppen beispielsweise vom Urethan-, Alkyl-, Acyl-, Ester- oder Amid-Typ eingesetzt werden.As protecting groups for possible further reactive functions in the Camptothecin part or for third-order amino acid functions, those known in peptide chemistry Protecting groups of, for example, urethane, alkyl, acyl, ester or amide type be used.

Aminoschutzgruppen im Rahmen der Erfindung sind die üblichen in der Peptid- Chemie verwendeten Aminoschutzgruppen. Amino-protective groups in the context of the invention are the customary in the peptide Chemistry used amino protecting groups.  

Hierzu gehören bevorzugt: Benzyloxycarbonyl (Cbz), 3,4-Dimethoxybenzyloxy­ carbonyl, 3,5-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 2,4-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 4- Methoxybenzyloxycarbonyl, 4-Nitrobenzyloxycarbonyl, 2-Nitrobenzyloxycarbonyl, 2- Nitro-4,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, tert.- Butoxycarbonyl (Boc), Allyloxycarbonyl, Vinyloxycarbonyl, 3,4,5-Trimethoxy­ benzyloxycarbonyl, Phthaloyl, 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, 2,2,2-Trichlor-tert.- butoxycarbonyl, Menthyloxycarbonyl, 4-Nitrophenoxycarbonyl, Fluorenyl-9-meth­ oxycarbonyl (Fmoc), Formyl, Acetyl, Propionyl, Pivaloyl, 2-Choracetyl, 2-Brom­ acetyl, 2,2,2-Trifluoracetyl, Benzoyl, Benzyl, 4-Chlorbenzoyl, 4-Brombenzoyl, 4- Nitrobenzoyl, Phthalimido, Isovaleroyl oder Benzyloxymethylen, 4-Nitrobenzyl, 2,4- Dinitrobenzyl, 4-Nitrophenyl oder 2-Nitrophenylsulfenyl. Besonders bevorzugte Schutzgruppen sind Fmoc, Boc und Cbz.These include preferably: benzyloxycarbonyl (Cbz), 3,4-dimethoxybenzyloxy carbonyl, 3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl, 2,4-dimethoxybenzyloxycarbonyl, 4- Methoxybenzyloxycarbonyl, 4-nitrobenzyloxycarbonyl, 2-nitrobenzyloxycarbonyl, 2- Nitro-4,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl, methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, tert. Butoxycarbonyl (Boc), allyloxycarbonyl, vinyloxycarbonyl, 3,4,5-trimethoxy benzyloxycarbonyl, phthaloyl, 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, 2,2,2-trichloro-tert. butoxycarbonyl, menthyloxycarbonyl, 4-nitrophenoxycarbonyl, fluorenyl-9-meth oxycarbonyl (Fmoc), formyl, acetyl, propionyl, pivaloyl, 2-chloroacetyl, 2-bromo acetyl, 2,2,2-trifluoroacetyl, benzoyl, benzyl, 4-chlorobenzoyl, 4-bromobenzoyl, 4- Nitrobenzoyl, phthalimido, isovaleroyl or benzyloxymethylene, 4-nitrobenzyl, 2,4- Dinitrobenzyl, 4-nitrophenyl or 2-nitrophenylsulfenyl. Especially preferred Protecting groups are Fmoc, Boc and Cbz.

Die Abspaltung von Schutzgruppen in den entsprechenden Reaktionsschritten kann z. B. durch Säure- oder Baseneinwirkung, hydrogenolytisch oder auf andere Weise reduktiv erfolgen.The cleavage of protective groups in the corresponding reaction steps can z. B. by acid or base action, hydrogenolytically or otherwise reductively.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich zur Behandlung von Krebs­ erkrankungen.The compounds according to the invention are suitable for the treatment of cancer diseases.

Zur vorliegenden Erfindung gehören pharmazeutische Zubereitungen, die neben nicht­ toxischen, inerten pharmazeutisch geeigneten Trägerstoffen eine oder mehrere erfin­ dungsgemäße Verbindungen enthalten oder die aus einem oder mehreren erfindungs­ gemäßen Wirkstoffen bestehen, sowie Verfahren zur Herstellung dieser Zuberei­ tungen.The present invention includes pharmaceutical preparations, in addition to not toxic, inert pharmaceutically acceptable excipients one or more inventions contain the compounds according to the invention or from one or more fiction, consist of active ingredients, as well as methods for preparing these Zuberei obligations.

Der oder die Wirkstoffe können gegebenenfalls in einem oder mehreren der oben angegebenen Trägerstoffe auch in mikroverkapselter Form vorliegen. The active ingredient (s) may optionally be in one or more of the above specified carriers are also present in microencapsulated form.  

Die therapeutisch wirksamen Verbindungen sollen in den oben aufgeführten pharma­ zeutischen Zubereitungen vorzugsweise in einer Konzentration von etwa 0,1 bis 99,5, vorzugsweise von etwa 0,5 bis 95 Gew.-%, der Gesamtmischung vorhanden sein.The therapeutically active compounds are intended in the above-mentioned pharma ceutical preparations preferably in a concentration of about 0.1 to 99.5, preferably from about 0.5 to 95% by weight of the total mixture.

Die oben aufgeführten pharmazeutischen Zubereitungen können außer den erfin­ dungsgemäßen Verbindungen auch weitere pharmazeutische Wirkstoffe enthalten.The pharmaceutical compositions listed above may except the inventions Compounds according to the invention also contain other active pharmaceutical ingredients.

Im allgemeinen hat es sich sowohl in der Human- als auch in der Veterinärmedizin als vorteilhaft erwiesen, den oder die erfindungsgemäßen Wirkstoffe in Gesamtmengen von etwa 0,5 bis etwa 500, vorzugsweise 5 bis 100 mg/kg Körpergewicht je 24 Stun­ den, gegebenenfalls in Form mehrerer Einzelgaben, zur Erzielung der gewünschten Ergebnisse zu verabreichen. Eine Einzelgabe enthält den oder die erfindungsgemäßen Wirkstoffe, vorzugsweise in Mengen von etwa 1 bis etwa 80, insbesondere 3 bis 30 mg/kg Körpergewicht.In general, it has been used in both human and veterinary medicine as proved advantageous, the one or more agents according to the invention in total amounts from about 0.5 to about 500, preferably 5 to 100 mg / kg of body weight per 24 hours , if appropriate in the form of several individual doses, to obtain the desired To give results. A single dose contains the invention or the invention Active ingredients, preferably in amounts of from about 1 to about 80, especially 3 to 30 mg / kg body weight.

Biologische TestungBiological testing 1. Wachstumsinhibitionstest zur Bestimmung der cytotoxischen Eigen­ schaften1. Growth inhibition test for the determination of cytotoxic properties companies

Die humanen Dickdarmtumorzellinien SW 480 und HT 29 (ATCC-Nr. CCl 228 und HBT-38) sowie die Maus-Melanom-Zellinie B16F10 wurden in Rouxschalen in RPMI 1640 Medium unter Zusatz von 10% FCS gezogen. Anschließend wurde trypsiniert und in RPMI plus 10% FCS zu einer Zellzahl von 50 000 Zellen/ml aufgenommen. 100 µl Zellsuspension/Well wurden in eine 96 Mikrowellplatte gegeben und 1 Tag bei 37°C im CO₂-Brutschrank inkubiert. Anschließend wurden weitere 100 µl RPMI Medium und 1 µl DMSO mit den Prüfsubstanzen zugesetzt. Das Wachstum wurde nach Tag 3 und Tag 6 überprüft. Dazu wurde zu jedem Mikrowell 40 µl MTT-Lösung (3- (4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolinbromid) mit einer Ausgangs­ konzentration von 5 mg/ml H₂O zugesetzt. Es wurde 5 Stunden im CO₂- Brutschrank bei 37°C inkubiert. Anschließend wurde das Medium abgesaugt und 100 µl i-Propanol/Well zugesetzt. Nach 30 Minuten Schütteln mit 100 µl H₂O wurde die Extinktion bei 540 nm mit einem Titertek Multiskan MCC/340 (Flow) gemessen.The human colon tumor cell lines SW 480 and HT 29 (ATCC No. CCl 228 and HBT-38) and the mouse melanoma cell line B16F10 were grown in Roux dishes in RPMI 1640 medium supplemented with 10% FCS. It was then trypsinized and taken up in RPMI plus 10% FCS to a cell number of 50,000 cells / ml. 100 μl of cell suspension / well were placed in a 96 microwell plate and incubated for 1 day at 37 ° C in a CO ₂ incubator. Subsequently, another 100 μl of RPMI medium and 1 μl of DMSO were added with the test substances. Growth was checked after day 3 and day 6. To this was added to each microwell 40 ul MTT solution (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolinbromid) with a starting concentration of 5 mg / ml H ₂ O added. It was incubated for 5 hours in a CO ₂ incubator at 37 ° C. The medium was then filtered off with suction and 100 μl of i-propanol / well were added. After shaking for 30 minutes with 100 μl H ₂ O, the absorbance at 540 nm was measured with a Titertek Multiskan MCC / 340 (Flow).

Die cytotoxische Wirkung ist in der Tabelle 1 als IC₅₀-Wert jeweils für die SW 480- und HT 29- und B16F10-Zellinie angegeben:The cytotoxic effect is given in Table 1 as the IC ₅₀ value for each of the SW 480 and HT 29 and B16F10 cell lines:

Tabelle 1 Table 1

2. Hämatopoetische Aktivität von Konjugaten im Vergleich zum zugrunde­ liegenden Wirkstoff2. Hematopoietic activity of conjugates compared to the underlying lying active ingredient Material und Methodenmaterial and methods

Knochenmarkzellen wurden aus dem Femur der Maus gespült. 10⁵-Zellen werden in McCoy 5A-Medium (0,3% Agar) zusammen mit rekombinaten murinen GM-CSF (Genzyme; Stammzellen-Kolonienbildung) und den Sub­ stanzen (10^-4 bis 100 µg/ml) bei 37°C und 7% CO₂ inkubiert. 7 Tage später wurden die Kolonien (< 50 Zellen) und Kluster (17-50 Zellen) ausgezählt.Bone marrow cells were rinsed from the mouse femur. 10 ⁵ cells are added to McCoy 5A medium (0.3% agar) together with recombinant murine GM-CSF (Genzyme) and the sub stances (10 ^-4 to 100 μg / ml) at 37 ° C and 7% CO ₂ incubated. Seven days later, colonies (<50 cells) and clusters (17-50 cells) were counted.

ErgebnisseResults

Wie in Tabelle 2 dargestellt zeigen die untersuchten Konjugate eine gegenüber dem zugrundeliegenden Wirkstoffe drastisch verminderte Hemmung der Knochenmarkstammzellproliferation.As shown in Table 2, the conjugates tested show one opposite the underlying drugs drastically reduced inhibition of Bone marrow stem cell proliferation.

Tabelle 2Table 2 Hemmung der CSF-induzierten Proliferation von Knochenmarkstammzellen der MausInhibition of CSF-induced proliferation of mouse bone marrow stem cells

Beispielexample IC₅₀ [ng/ml]IC ₅₀ [ng / ml] Camptothecincamptothecin 22 22 100100 55 9090 66 6060 1010 200200

Synthesebeispielesynthesis Examples Synthesebeispiele VorstufenSynthesis Examples Precursors Aminosäure bzw. PeptidkonjugateAmino acid or peptide conjugates

Folgende Aminosäure-Konjugate von 20(S)-Camptothecin oder 20(S)-Camptothecin- Derivaten sind in WO 96/31532 beschrieben oder können in Analogie dazu hergestellt werden.The following amino acid conjugates of 20 (S) -camptothecin or 20 (S) -camptothecin Derivatives are in WO 96/31532 described or can be prepared in analogy.

I. Peptidkonjugate von 20(S)-CamptothecinI. Peptide conjugates of 20 (S) -camptothecin Beispiel E1Example E1 20-O-[N^ε-(Fluorenyl-9-methoxycarbonyl)-lysyl-alanyl]-camptothecin, Trifluoracetat20-O- [N ^ε - (fluorenyl-9-methoxycarbonyl) -lysyl-alanyl] -camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E2Example E2 20-O-[N^ε-(Fluorenyl-9-methoxycarbonyl)-lysyl-phenylalanyl]-camptothecin, Trifluoracetat20-O- [N ^ε - (fluorenyl-9-methoxycarbonyl) -lysyl-phenylalanyl] -camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E3Example E3 20-O-[N^ε-(Fluorenyl-9-methoxycarbonyl)-lysyl-leucyl]-camptothecin, Trifluoracetat20-O- [N ^ε - (fluorenyl-9-methoxycarbonyl) -lysyl-leucyl] -camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E4Example E4 20-O-[N^ε-(Fluorenyl-9-methoxycarbonyl)-lysyl-D-leucyl]-camptothecin, Trifluoracetat20-O- [N ^ε - (fluorenyl-9-methoxycarbonyl) -lysyl-D-leucyl] -camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E5Example E5 20-O-[N^ε-(Fluorenyl-9-methoxycarbonyl)-D-lysyl-leucyl]-camptothecin, Trifluoracetat20-O- [N ^ε - (fluorenyl-9-methoxycarbonyl) -D-lysyl-leucyl] -camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E6Example E6 20-O-[N^ε-(Fluorenyl-9-methoxycarbonyl)-lysyl-valyl]-camptothecin, Trifluoracetat20-O- [N ^ε - (fluorenyl-9-methoxycarbonyl) -lysyl-valyl] -camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E7Example E7 20-O-[N^ε-(Fluorenyl-9-methoxycarbonyl)-lysyl-D-valyl]-camptothecin, Trifluoracetat20-O- [N ^ε - (fluorenyl-9-methoxycarbonyl) -lysyl-D-valyl] camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E8Example E8 20-O-[Histidyl-valyl]-camptothecin, Trifluoracetat20-O- [histidyl valyl] camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E9Example E9 20-O-[Glutamyl-valyl]-camptothecin, Trifluoracetat20-O- [glutamyl-valyl] camptothecin, trifluoroacetate II. Peptidkonjugate von CamptothecinderivatenII. Peptide conjugates of camptothecin derivatives Beispiel E10Example E10 10,11-Methylendioxy-20-O-{N^ε-[fluorenyl-9-methoxycarbonyl]-lysyl-leucyl}- camptothecin, Trifluoracetat10,11-methylenedioxy-20-O- {N ^ε - [fluorenyl-9-methoxycarbonyl] -lysyl-leucyl} camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E11Example E11 7-Ethyl-20-O-{N^ε-[fluorenyl-9-methoxycarbonyl]-lysyl-valyl}-camptothecin, Trifluoracetat7-ethyl-20-O- {N ^ε - [fluorenyl-9-methoxycarbonyl] -lysyl-valyl} -camptothecin, trifluoroacetate Beispiel E12Example E12 7-Ethyl-20-O-{N^ε-[fluorenyl-9-methoxycarbonyl]-lysyl-valyl}-10-hydroxy­ camptothecin, Trifluoracetat7-Ethyl-20-O- {N ^ε - [fluorenyl-9-methoxycarbonyl] -lysyl valyl} -10-hydroxy camptothecin, trifluoroacetate Methoden zur Modifizierung der α-AminofunktionMethods for modifying the α-amino function Allgemeine VorschriftenGeneral regulations A: Acylierung mit freien CarbonsäurenA: Acylation with free carboxylic acids

0,5 mmol der α-aminodeblockierten Peptidkonjugate mit Camptothecin oder Campto­ thecin-Derivaten werden zusammen mit 0,5 mmol der Carboxylkomponenten in 50 ml Dimethylformamid gelöst und dann bei 5°C mit 1,5 Äq. Hydroxybenzotriazol, 1,2 Äq. N-Ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl-carbodiimid Hydrochlorid sowie 2 Äq. Hünig- Base versetzt. Man läßt auf Raumtemperatur erwärmen und über Nacht rühren. Das Lösungsmittel wird abgedampft und der Rückstand mit Wasser verrührt. Man saugt ab, nimmt den Rückstand in Methanol/Dichlormethan 1 : 1 auf und fällt mit Diethyl­ ether. Gegebenenfalls wird diese Prozedur wiederholt. Man erhält die Zielverbin­ dungen in der Regel in Ausbeuten von über 70%.0.5 mmol of the α-amino-blocked peptide conjugates with camptothecin or Campto Thecin derivatives are combined with 0.5 mmol of the carboxyl components in 50 ml Dissolved dimethylformamide and then at 5 ° C with 1.5 eq. Hydroxybenzotriazole, 1.2 eq. N-ethyl-N '- (3-dimethylaminopropyl-carbodiimide hydrochloride and 2 eq. Hünig- Base offset. Allow to warm to room temperature and stir overnight. The Solvent is evaporated and the residue is stirred with water. Man sucks , the residue is taken up in methanol / dichloromethane 1: 1 and precipitated with diethyl ether. If necessary, this procedure is repeated. You get the target compound usually in yields of over 70%.

B: Acylierung mit CarbonsäureanhydridenB: Acylation with carboxylic acid anhydrides

0,5 mmol der α-aminodeblockierten Peptidkonjugate mit Camptothecin oder Campto­ thecin-Derivaten werden zusammen mit 2 mmol der Carbonsäureanhydrids in 50 ml Dimethylformamid gelöst und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungs­ mittel wird abgedampft und der Rückstand mit Wasser verrührt. Man saugt ab, nimmt den Rückstand in Methanol/Dichlormethan 1 : 1 auf und fällt mit Diethylether. Gegebe­ nenfalls wird diese Prozedur wiederholt. Man erhält die Zielverbindungen in der Regel in Ausbeuten von über 80%.0.5 mmol of the α-amino-blocked peptide conjugates with camptothecin or Campto Thecin derivatives are mixed with 2 mmol of the carboxylic acid anhydride in 50 ml Dissolved dimethylformamide and stirred overnight at room temperature. The solution The mixture is evaporated off and the residue is stirred with water. One sucks, takes  the residue in methanol / dichloromethane 1: 1 and precipitated with diethyl ether. Gegebe if necessary, this procedure is repeated. The target compounds are usually obtained in yields of over 80%.

C: Acylierung mit IsocyanatenC: Acylation with isocyanates

0,5 mmol der α-aminodeblockierten Peptidkonjugate mit Camptothecin oder Campto­ thecin-Derivaten werden zusammen mit 0,5 mmol des Isocyanats (im Chemikalien­ handel erhältlich oder nach Standardmethoden herstellbar) und 2 Äq. Hünig-Base in 40 ml Dimethylformamid gelöst und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wird abgedampft und der Rückstand mit Wasser verrührt. Man saugt ab, nimmt den Rückstand in Methanol/Dichlormethan 1 : 1 auf und fällt mit Diethyl­ ether. Gegebenenfalls wird diese Prozedur wiederholt. Man erhält die Zielverbin­ dungen in der Regel in Ausbeuten von über 80%.0.5 mmol of the α-amino-blocked peptide conjugates with camptothecin or Campto Thecin derivatives are used together with 0.5 mmol of the isocyanate (in chemicals commercially available or can be prepared by standard methods) and 2 eq. Hünig-Base in Dissolved 40 ml of dimethylformamide and stirred overnight at room temperature. The Solvent is evaporated and the residue is stirred with water. Man sucks , the residue is taken up in methanol / dichloromethane 1: 1 and precipitated with diethyl ether. If necessary, this procedure is repeated. You get the target compound usually in yields of over 80%.

D: Acylierung mit Carbonsäurechloriden und SulfonsäurechloridenD: Acylation with carboxylic acid chlorides and sulfonyl chlorides

Reaktionen erfolgen in Analogie zu Vorschrift B in Dichlormethan als Lösungsmittel und gegebenenfalls noch in Gegenwart von 2 Äq. Hünig-Base.Reactions are carried out in analogy to procedure B in dichloromethane as solvent and optionally in the presence of 2 eq. Hunig base.

E: Allgemeine Vorschrift zur Ablösung der Fmoc-SchutzgruppeE: General procedure for the replacement of the Fmoc protective group

0,25 mmol der modifizierten Peptidkonjugate, die in der Seitenkette die Fluorenyl-9- methoxycarbonyl-Schutzgruppe tragen, werden in 20 ml Dimethylformamid gelöst und nach Zugabe von 2 ml Piperidin 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wird abgedampft und der Rückstand aus Methanol/Dichlormethan 1 : 1 mit Diethylether gefällt. Man erhält die Zielverbindungen in der Regel in Ausbeuten von über 80%. 0.25 mmol of the modified peptide conjugates containing in the side chain the fluorenyl-9- carrying methoxycarbonyl protective group are dissolved in 20 ml of dimethylformamide and stirred after addition of 2 ml of piperidine for 30 min at room temperature. The Solvent is evaporated and the residue from methanol / dichloromethane 1: 1 precipitated with diethyl ether. The target compounds are usually obtained in yields of over 80%.  

F: Überführung in HydrochlorideF: Transfer to hydrochlorides

0,25 mmol der seitenketten-aminodeblockierten Peptidkonjugate mit Camptothecin oder Camptothecin-Derivaten werden in Wasser aufgenommen und mit 1 Äq. von 0,1 M wäßriger Salzsäure versetzt. Sollte keine Lösung entstanden sein wird mit wenig Dioxan versetzt. Die Mischung wird lyophilisiert und anschließend gegebe­ nenfalls noch mit Dichlormethan digriert oder aus Methanol/Dichlormethan 1 : 1 mit Diethylether gefällt.0.25 mmol of side chain aminodeblocked peptide conjugates with camptothecin or camptothecin derivatives are taken up in water and washed with 1 eq. from 0.1 M aqueous hydrochloric acid. If no solution is created with little dioxane added. The mixture is lyophilized and then given if appropriate, digriert with dichloromethane or from methanol / dichloromethane 1: 1 with Diethyl ether like.

Beispiel 1example 1 20-O-[N^α-(Benzoyl)-lysyl-valyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (benzoyl) -lysyl-valyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E6, Benzoylchlorid
Methoden: D, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E6, benzoyl chloride
Methods: D, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,4= 0.4

Beispiel 2Example 2 20-O-[N^α-(Phenylacetyl)-lysyl-valyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (phenylacetyl) -lysyl-valyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E6, Phenylessigsäure
Methoden: A, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E6, phenylacetic acid
Methods: A, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,4= 0.4

Beispiel 3Example 3 20-O-[N^α-(Acetyl)-lysyl-valyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (acetyl) -lysyl-valyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E6, Acetanhydrid
Methoden: B, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E6, acetic anhydride
Methods: B, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,35 = 0.35

Beispiel 4Example 4 20-O-[N^α-(Succinyl)-lysyl-valyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (succinyl) lysyl-valyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E6, Bernsteinsäureanhydrid
Methoden: B, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E6, succinic anhydride
Methods: B, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,28= 0.28

Beispiel 5Example 5 20-O-[N^α-(Phenylamino-carbonyl)-lysyl-valyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (phenylamino-carbonyl) -lysyl-valyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E6, Phenylisocyanat
Methoden: C, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E6, phenyl isocyanate
Methods: C, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,48= 0.48

Beispiel 6Example 6 20-O-(N^α-(Phenylamino-carbonyl)-glutamyl-valyl]-camptothecin20-O- (N ^α - (phenylamino-carbonyl) -glutamyl-valyl] -camptothecin

Edukte: Beispiel E9, Fhenylisocyanat
Methoden: C
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 Rf = 0,76Starting materials: example E9, phenyl isocyanate
Methods: C
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 Rf = 0.76

Beispiel 7Example 7 20-O-[N^α-(Phenylamino-carbonyl)-histidyl-valyl]-camptothecin20-O- [N ^α - (phenylamino-carbonyl) -histidyl-valyl] -camptothecin

Edukte: Beispiel E8, Phenylisocyanat
Methoden: C, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E8, phenyl isocyanate
Methods: C, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,6 = 0.6

Beispiel 8Example 8 20-O-[N^α-(Acetyl)-histidyl-valyl]-camptothecin20-O- [N ^α - (acetyl) -histidyl-valyl] -camptothecin

Edukte: Beispiel E8, Acetanhydrid
Methoden: B, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E8, acetic anhydride
Methods: B, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,34= 0.34

Beispiel 9Example 9 20-O-(N^α-(Acetyl)-lysyl-D-valyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- (N ^α - (acetyl) -lysyl-D-valyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E7, Acetanhydrid
Methoden: B, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E7, acetic anhydride
Methods: B, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,25= 0.25

Beispiel 10Example 10 20-O-[N^α-(Phenylacetyl)-lysyl-D-valyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (phenylacetyl) -lysyl-D-valyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E7, Phenylessigsäure
Methoden: A, dann E, dann F
DC: AcetonitrillWasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E7, phenylacetic acid
Methods: A, then E, then F
TLC: acetonitrile / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,3= 0.3

Beispiel 11Example 11 20-O-[N^α-(Phenylamino-carbonyl)-lysyl-D-valyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (phenylamino-carbonyl) -lysyl-D-valyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E7, Phenylisocyanat
Methoden: C, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E7, phenyl isocyanate
Methods: C, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,4 = 0.4

Beispiel 12Example 12 20-O-[N^α-(Benzoyl)-lysyl-D-valyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (benzoyl) -lysyl-D-valyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E6, Benzoylchlorid
Methoden: D, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E6, benzoyl chloride
Methods: D, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,45= 0.45

Beispiel 13Example 13 20-O-[N^α-(Acetyl)-lysyl-leucyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (acetyl) -lysyl-leucyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E3, Acetanhydrid
Methoden: D, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E3, acetic anhydride
Methods: D, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,31= 0.31

Beispiel 14Example 14 20-O-[N^α-(Phenylacetyl)-lysyl-leucyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (phenylacetyl) -lysyl-leucyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E3, Phenylessigsäure
Methoden: A, dann E, dann F
DC: AcetonitrillWasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E3, phenylacetic acid
Methods: A, then E, then F
TLC: acetonitrile / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,42= 0.42

Beispiel 15Example 15 20-O-[N^α-(Succinyl)-lysyl-leucyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (succinyl) -lysyl-leucyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E3, Bernsteinsäureanhydrid
Methoden: B, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E3, succinic anhydride
Methods: B, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,3 = 0.3

Beispiel 16Example 16 20-O-[N^α-(Phenylamino-carbonyl)-lysyl-leucyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (phenylamino-carbonyl) -lysyl-leucyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E3, Phenylisocyanat
Methoden: C, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E3, phenyl isocyanate
Methods: C, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,45= 0.45

Beispiel 17Example 17 20-O-[N^α-(Acetyl)-lysyl-D-leucyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (acetyl) -lysyl-D-leucyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E4, Acetanhydrid
Methoden: B, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E4, acetic anhydride
Methods: B, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,53= 0.53

Beispiel 18Example 18 20-O-[N^α-(Phenylacetyl)-lysyl-D-leucyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (phenylacetyl) -lysyl-D-leucyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E4, Phenylessigsäure
Methoden: A, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E4, phenylacetic acid
Methods: A, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,44= 0.44

Beispiel 19Example 19 20-O-[N^α-(Phenylamino-carbonyl)-lysyl-D-leucyl]-camptothecin, Hydrochlorid20-O- [N ^α - (phenylamino-carbonyl) -lysyl-D-leucyl] -camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E4, Phenylisocyanat
Methoden: C, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2 R_f Starting materials: example E4, phenyl isocyanate
Methods: C, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2 R _f

= 0,48 = 0.48

Konjugate des 10,11-(Methylendioxy)-camptothecinsConjugates of 10,11- (methylenedioxy) -camptothecin Beispiel 20Example 20 10,11-(Methylendioxy)20-O-[N^α-(Phenylaminocarbonyl)-lysyl-leucyl]- camptothecin, Hydrochlorid10,11- (methylenedioxy) 20-O- [N ^α - (phenylaminocarbonyl) lysyl-leucyl] - camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E10, Phenylisocyanat
Methoden: C, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2
Starting materials: example E10, phenyl isocyanate
Methods: C, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2

Konjugate des 20(S)-7-Ethyl-10-hydroxy-camptothecins; allgemeine FormelConjugates of 20 (S) -7-ethyl-10-hydroxy camptothecin; general formula

Beispiel 21Example 21 7-Ethyl-10-hydroxy-20-O-[N^α-(Phenylamino-carbonyl)-lysyl-valyl]- camptothecin, Hydrochlorid7-ethyl-10-hydroxy-20-O- [N ^α - (phenylamino-carbonyl) lysyl-valyl] - camptothecin, hydrochloride

Edukte: Beispiel E12, Phenylisocyanat
Methoden: C, dann E, dann F
DC: Acetonitril/Wasser/Eisessig 5 : 1 : 0,2Starting materials: example E12, phenyl isocyanate
Methods: C, then E, then F
TLC: acetonitrile / water / glacial acetic acid 5: 1: 0.2

Claims (10)

1. Verbindungen der allgemeinen Formel (I)
oder deren Salze, in der
A ein verzweigter oder unverzweigter (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)- Alkylcarbonylrest, der weiterhin durch Halogen, Hydroxy, verzweigtes oder unverzweigtes (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkoxy, Amino, Carbonyl, Carboxy oder einen (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Arylrest substituiert sein kann, oder
ein (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Arylcarbonylrest, der durch Halogen, Hydroxy, verzweigtes oder unverzweigtes (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkoxy, Amino, Carbonyl, Carboxy oder einen verzweigten oder unverzweigten (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkylrest substituiert sein kann, oder
ein (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Arylaminocarbonylrest oder ein verzweigter oder unverzweigter (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)- Alkylaminocarbonylrest, der durch Halogen, Hydroxy, verzweigtes oder unverzweigtes (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkoxy, Carbonyl, Carboxy oder einen verzweigten oder unverzweigten (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkyl- bzw. (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Arylrest substituiert sein kann, oder
ein (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Aryl- oder ein verzweigter oder unver­ zweigter (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkylsulfonylrest ist, der durch Halogen, verzweigtes oder unverzweigtes (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkoxy, oder einen verzweigten oder unverzweigten (C₁-C₈)-, bevorzugt (C₁-C₆)-Alkyl- bzw. (C₆-C₁₂)-, bevorzugt (C₆)-Arylrest substituiert sein kann,
R und R' gleich oder verschieden sind und Seitenketten von Aminosäureresten sind
CPT einen Camptothecin-Rest oder ein im A-Ring, B-Ring oder C-Ring modifiziertes Camptothecin-Derivat bedeutet, die über eine esterartige Verkämpfung über eine Hydroxygruppe angebunden sind und
n 0 bis 10 ist.1. Compounds of the general formula (I)
or their salts, in
A is a branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ), preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkylcarbonyl radical which is further preferably halogen, hydroxy, branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ) -, (C ₁ -C ₆ ) -alkoxy, amino, carbonyl, carboxy or a (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -aryl radical may be substituted, or
a (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -arylcarbonyl radical represented by halogen, hydroxy, branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ), preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkoxy, amino, carbonyl , Carboxy or a branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ), preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkyl radical, or
a (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -arylaminocarbonyl radical or a branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ), preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkylaminocarbonyl radical, represented by halogen, hydroxy, branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ) -, preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkoxy, carbonyl, carboxy or a branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ) -, preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkyl- or (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -Arylrest may be substituted, or
is a (C ₆ -C ₁₂ ) -, preferably (C ₆ ) -aryl or a branched or un-branched (C ₁ -C ₈ ) -, preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkylsulfonyl radical which is branched by halogen or unbranched (C ₁ -C ₈ ) -, preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkoxy, or a branched or unbranched (C ₁ -C ₈ ) -, preferably (C ₁ -C ₆ ) -alkyl or ( C ₆ -C ₁₂ ), preferably (C ₆ ) -aryl radical may be substituted,
R and R 'are the same or different and are side chains of amino acid residues
CPT means a camptothecin residue or a camptothecin derivative modified in the A-ring, B-ring or C-ring, which are attached via an ester-like fuming via a hydroxy group, and
n is 0 to 10. 2. Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R und R Seitenketten von Alanin, Asparaginsäure, Glutaminsäure, Glycin. Leucin, histidin, Lysin, Arginin, Ornithin, Serin, Tyrosin, Valin, Diaminopropionsäure, α,γ-Diaminobuttersäue und/oder Phenylalanin sind, wobei mehrere Amino­ säurereste über die α-Aminogruppe peptidisch verknüpft sein können.2. Compounds according to claim 1, characterized in that R and R Side chains of alanine, aspartic acid, glutamic acid, glycine. leucine, histidine, lysine, arginine, ornithine, serine, tyrosine, valine, diaminopropionic acid, α, γ-Diaminobuttersäue and / or phenylalanine, wherein a plurality of amino acid residues can be linked peptidyl via the α-amino group. 3. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß im ersten Schritt (A) Camptothecin mit einer carboxyaktivierten Aminosäure verestert wird, worauf im zweiten Schritt (B) eine oder mehrere Aminosäuren über Peptidbindungen mit der im ersten Schritt erhaltenen Verbindung konjugiert werden, worauf im dritten Schritt (C) die gegebenenfalls blockierte α-Aminogruppe der terminalen Aminosäure deblockiert wird und im letzten Schritt (D) die freie terminale α-Aminogruppe mit einer Verbindung der allgemeinen Formel A-X in geeigneten Lösemitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, umgesetzt wird und wobei A ein Rest gemäß Anspruch 1 ist und X für OH, Halogen oder OB steht, worin B = . . . oder wobei AX für eine Isocyanatgruppe steht.3. A process for the preparation of compounds according to any one of claims 1 or 2, characterized in that in the first step (A) camptothecin with a carboxy-activated amino acid is esterified, followed by in the second step (B) one or more amino acids via peptide bonds with the one in the first Step obtained compound are conjugated, followed by the third step (C) the optionally blocked α-amino group of the terminal amino acid is deblocked and in the last step (D) the free terminal α-amino group with a compound of general formula A-X in suitable solvents, optionally in the presence of a base, and wherein A is a radical according to claim 1 and X is OH, halogen or OB, wherein B =. , , or wherein AX stands for an isocyanate group. 4. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß als Lösemittel Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Dichlormethan, Chloroform, gerad- oder verzweigtkettige Alkanole mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, Acetonitril, Dioxan, Wasser oder Gemische dieser Lösemittel eingesetzt werden.4. The method according to claim 4, characterized in that as solvent Dimethylformamide, tetrahydrofuran, dichloromethane, chloroform, straight or  branched-chain alkanols having 1 to 6 carbon atoms, acetonitrile, dioxane, Water or mixtures of these solvents are used. 5. Verfahren nach Ansprüche 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet, daß Reaktionen in Dimethylformamid oder einem Tetrahydrofuran-Dichlormethan-Gemisch bei Normaldruck und einer Temperatur von 0 bis 50°C, bevorzugt Raumtemperatur, durchgeführt werden.5. The method according to claims 3 or 4, characterized in that reactions in dimethylformamide or a tetrahydrofuran-dichloromethane mixture at Normal pressure and a temperature of 0 to 50 ° C, preferably Room temperature to be performed. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß als Base Triethylamin, Hünig-Base, Ethyldiisopropylamin, Pyridin oder N,N-Di­ methylaminopyridin eingesetzt werden.6. The method according to any one of claims 3 to 5, characterized in that as Base triethylamine, Hünig's base, ethyldiisopropylamine, pyridine or N, N-di methylaminopyridine be used. 7. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß eine oder mehrere der nicht in den Reaktionen umzusetzenden reaktiven Gruppen mit üblichen Schutzgruppen blockiert sind.7. The method according to any one of claims 3 to 6, characterized in that one or more of the nonreactive reactive species Groups with usual protecting groups are blocked. 8. Verwendung der Verbindungen gemäß Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von Arzneimitteln, enthaltend neben nichttoxischen, inerten pharmazeutisch ge­ eigneten Trägerstoffen eine oder mehrere der Verbindungen gemäß Anspruch 1 oder 2, oder bestehend aus einer oder mehreren Verbindungen gemäß An­ spruch 1 oder 2.8. Use of the compounds according to claim 1 or 2 for the preparation of Medicaments containing, in addition to non-toxic, inert pharmaceutically suitable carriers one or more of the compounds according to claim 1 or 2, or consisting of one or more compounds according to An claim 1 or 2. 9. Verwendung gemäß Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Ver­ bindungen gemäß Anspruch 1 oder 2 in mikroverkapselter Form in einem oder mehreren Trägerstoffen vorliegen.9. Use according to claim 8, characterized in that the Ver Compounds according to claim 1 or 2 in microencapsulated form in one or several carriers present. 10. Verwendung gemäß einem der Ansprüche 8 oder 9 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Krebserkrankungen.10. Use according to one of claims 8 or 9 for the preparation of Medicines for the treatment of cancer.