DE1963734A1 - Harnstoffderivate von Acylderivaten des KTI - Google Patents

Description

FARBENFABRIKEN BAYER AG

17. Dezember 1969

Patent- Abteilunf

Harnstoffderivate von Acylderivaten des KfI

Der Kallikrein-Trypsin-Inhibitor, im folgenden als XfI bezeichnet (Warenzeichen Trasylol ^ der Farbenfabriken Bayer AG, Leverkusen) stellt seit vielen Jahren ein ganz besonders wertvolles Arzneimittel, vor allem gegen entzündliehe Prozesse und gegen Verbrauchskoagulopathien dar»

KTI wird sehr stark in den Nieren gespeichert, was zur'folge hat, daß der KTI-Blutspiegel ziemlich schnell absinkt· Man hat sich aus diesem Grunde bemüht, KTI-Derivate aufzufinden, welche in den "Nieren weniger stark gespeichert werden und welche daher einen länger anhaltenden hohen Blutspiegel ergeben.

Es wurde nun gefunden, daß Harnstoff-Derivate von Acylderivaten des KTI dieser Forderung in hohem Maße entsprechen.

Unter Acylderivaten des KTI werden hier diejenigen verstanden, die im deutschen Patent .......... (Patentanmeldung Ie A 12 705 vom gleichen Tage) beschrieben werden*

Unter Harnstoffderivaten werden hier diejenigen verstanden, in denen die £-Amino-ßruppA des .lysinreetes in t5-3teilung des KTI durch eine Harnstoffgruppe oder eine Guanldin-Garappe ersetzt ist.

Die erfindungsgeznäßen neuen Verbindungen sind ebenso gut verträglich wie KTIt Ein wesentlicher Vorteil der neuen Verbin-

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düngen bestellt darin, daß sie in den Nieren nicht sehr stark gespeichert werden und daher einen lang anhaltenden hohen Blutspiegel ergeben. Die neuen Verbindungen werden außerdem mit dem Harn ausgeschieden und erweisen sich daher besonders wertvoll bei Erkrankungen des Urogenitaltraktes. Sie besitzen im übrigen etwa die gleiche Aktivität wie KTI selbst. Diese Aktivität wird gemessen in Inhibitor-Einheiten IE. Eine IE entspricht der Hemmung der Aktivität von 1 mg Trypsin, gemessen mit N-«^-Benzoyl-DL-arginin-p-nitro-anilid als Substrat unter den folgenden Standardbedingungen:

• 5 ml Gesamtvolumen
Temperatur 25⁰C
1 cm Lichtweg

1 mg Substrat in 1 ml dest. Wasser + 10 mE Trypsin in 0,001 normaler HCl +x ml Inhibitor-Lösung

ad 3*0 ml 0,-2-molarem Triäthanolamin-Puffer, pH 7,8
+ 0,02 Mole Calciumchlorid.

Ein weiterer Vorteil der erfindungsgemäßen neuen Verbindungen besteht darin, daß die Komplexbildung mit den Enzymen, z. B. mit Trypsin,schneller eintritt als mit dem KTI selbst und daß daher die Trypsinhemmung schneller erreicht wird..

Die neuen erfindungsgemäßen Verbindungen werden dadurch hergestellt, daß man die obengenannten Acylderivate des KTI mit Cyanaten bzw. mit Or-Alkylisoharnstoffen, vorzugsweise mit ~ O-Methylisoharnstoff, in an sich bekannter Weise umsetzt. Im 1. Falle erhält man statt Lysin Homocitrullin, im 2. Falle statt Lysin Homoarginin im reaktiven Zentrum der Acylderivate dea KTI, z.B..Tetra(maleoyl)-/T5-Homoarginin7-KTI, oder Tetra-(male öyl)-/T5 -Homo ei trullinJ-KTI.

Die erfindungsgemäßen neuen Verbindungen können in der Medizin

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für die gleichen Indikationen eingesetzt werden, für die man den KTI selbst seit vielen Jahren mit Erfolg anwendet. Auch die Applikationsformen und anzuwendenden Dosen entsprechen weitgehend denenj die vom KTZ her bekannt sind. ,

Beispiel 1

Eine Lösung von 19 mg des Tetra(maleoyl)-KTI in 4 ml 1,0 M 0-Methyl-isoharnstoff und 0,02 M EDTA mit einem pH-Wert von 9,5 wird 60 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen, danach mit 4,0 ml 0,5 M NH,Cl-lösung von pH 7,6 versetzt und anschliessend weitere 14 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Danach wird die Reaktionslösung auf eine Sephadex-G-50-Säule, die mit 0,02 M Ammoniumacetatpuffer, pH 6, äquilibriert wurde, aufgetragen und mit dem gleichen Puffer eluiert. Die den Tetra(maleoyl)-/i 5-Homoarginin/-KTI enthaltende Fraktion wird im Vakuum-Rotationsverdampfer konzentriert und mittels einer Bio-Gel-P-2-Säule entsalzt. Die salzfreie Lösung des modifizierten KTI wird lyophilisiert.

Ausbeute« Die salzfreie Lösung ergibt nach Lyophilisation 13 mg Tetra(maleoyl)~^5-Homoarginin/-KTI als lockeres farbloses Pulver, was einer Gesamtausbeute von 68 $ entspricht. Die spezifische Aktivität beträgt 3-3,6 IE/mg.

Beispiel 2

10mg Tetra(maleoyl)-KTI in 0»75 ml der Reaktionslösung, hergestellt aus 1,5 ml N-Äthyl-morpholin in 5 ml desti Wasser plus Eisessig bis pH 8,0 plus 500 mg Kaliumcyanat, werden 56 Stunden bei 2O⁰G inkubiert. Die Reaktionsmischung wird anschließend auf eine Sephadex-Gt-50-Säüle, die mit 0,01 M Tris-Pufferι pH 7,0, äquilibriert wurde, aufgetragen. Die Fraktionen der ersten im Eluat auftretenden Absorptionspeaks mit höherem Eiweißgehalt werden gesammelt und im Vakuum-Rotationsverdampfer auf 1/10 des Ausgangβvolumens eingeengt. Die Kon-

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zentration des in der Lösung enthaltenen Tetra(maleoyl)-/i 5-Homocitrullin/-KTI wird durch Messung der Absorption bei 275 nm, bezogen auf eine Lösung bekannter Konzentration des
Tetra(maleoyl)-KTI in 0,1 M Tris-Puffer, pH 7,0, bestimmt.

Ausbeute: Die Konzentration an Tetra(maleoyl)-^5-Homocitrulliii/-KTI beträgt 0,67 mg/ml, insgesamt 5,33 mg, d.h. bezogen auf die eingesetzte Menge an Tetra(maleoyl')-KTI 53 ^. Die
spezifische Aktivität beträgt 1,5-2,0 IE/mg.

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Claims (3)

.Patentansprüche

1. Harnstoffderivate von Acylderivaten des KTI.

2. Verfahren zur Herstellung von Harnstoffderivaten von Acylderivaten des KTI, dadurch gekennzeichnet, daß man Acylderivate des KTI mit Cyanaten oder mit O-Methyl-Isoharnstoff umsetzt. ■

3. Verwendung der Harnstoffderivate von Acylderivaten des KTI als Arzneimittel.

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