DE1917996A1 - Diagnostic agent for peroxides - Google Patents
Diagnostic agent for peroxidesInfo
- Publication number
- DE1917996A1 DE1917996A1 DE19691917996 DE1917996A DE1917996A1 DE 1917996 A1 DE1917996 A1 DE 1917996A1 DE 19691917996 DE19691917996 DE 19691917996 DE 1917996 A DE1917996 A DE 1917996A DE 1917996 A1 DE1917996 A1 DE 1917996A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- substances
- group
- chromogen
- formula
- hydroperoxide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/725—Haemoglobin using peroxidative activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B26/00—Hydrazone dyes; Triazene dyes
- C09B26/02—Hydrazone dyes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
- G01N31/228—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators for peroxides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
Description
Verfahren und diagnostische Mittel zur Bestimmung von Hydroperoxiden und peroxidatisoh wirksamen Substanzen» Methods and diagnostic means for the determination of hydroperoxides and peroxidatisoh active substances »
Zusatz zur Patentanmeldung Aktenzeichen P 16 48 84O.7·Addition to the patent application file number P 16 48 84O.7
Gegenstand der Hauptanmeldung P 16 48 84O.7 sind diagnostische Mittel und Verfahren zur Bestimmung von Hydroperoxiden bzw. von Substanzen, aus denen durch eine vorgeschaltete Reaktion Wasserstoffperoxid-oder andere Hydroperoxide freigesetzt werden, sowie von Peroxidase bzw. anderen peroxidatisch wirkenden Substanzen. Als Indikatoren kommen im Hauptpatent die physiologisch unschädlichen Verbindungen der allgemeinen Formel I zur AnwendungThe main application P 16 48 84O.7 relates to diagnostic means and methods for the determination of hydroperoxides or substances, from which hydrogen peroxide or through an upstream reaction other hydroperoxides are released, as well as by peroxidase or other peroxidic substances. As indicators come in the main patent the physiologically harmless compounds of general formula I for use
N-NN-N
(D,(D,
in derin the
R, eine niedere Alkylgruppe,R, a lower alkyl group,
Rp Wasserstoff, eine Sulfoneäuregruppe oder eine Alkalisulfonatgruppe, ,Rp hydrogen, a sulfonic acid group or an alkali sulfonate group, ,
R, Wasserstoff oder eine niedere Alkylgruppe,R, hydrogen or a lower alkyl group,
X ein Schwerfeiatom, eine Vinylen- oder eine Iminogruppe, die gegebenenfalls durch niedere Alkylreste oder Arylreste substituiert ist,X is a heavy atom, a vinylene or an imino group, the optionally substituted by lower alkyl radicals or aryl radicals is,
•Λ• Λ
0098^2/07910098 ^ 2/0791
ein Stickstoffatom oder eine Methingruppe, welche auch zusammen mit R, einen durch R„ substituierten Benzolring bildet, bedeuten.a nitrogen atom or a methine group which, together with R, is a benzene ring substituted by R " forms, mean.
In Ausgestaltung der Hauptanmeldung F 16 49 84O.7 wurde nun gefunden, daß auch jene Verbindungen der Formel I, in denen X zusätzlich ein Sauerstoffatom oder ein mit zwei niederen Alkylgruppen substituiertes Kohlenstoffatom und gegebenenfalls R, zusätzlich ein Chloratom bedeutet, hervorragende Eigenschaften als Indikatoren besitzen.In an embodiment of the main application F 16 49 84O.7 it has now been found that also those compounds of the formula I in which X is additionally a Oxygen atom or a carbon atom substituted by two lower alkyl groups and optionally R also denotes a chlorine atom, have excellent properties as indicators.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist demnach ein Verfahren zur Bestimmung von Hydroperoxiden bzw. von Substanzen, die unter Freisetzung von Hydroperoxid reagieren sowie von Peroxidase bzw. peroxidatisch wirksamen Substanzen mit Hilfe eines Chromogens unter Verwendung der Reaktion der Hydroperoxide mit Feroxidase bzw. den peroxidatisch wirksamen Substanzen durch Auswertung der Verfärbung in an sich bekannter Weise, dadurch gekennzeichnet, daß man als Chromogene Substanzen der allgemeinen Formel I1 verwendet,The present invention accordingly provides a method for determining hydroperoxides or substances that react to release hydroperoxide and peroxidase or peroxidatically active substances with the aid of a chromogen using the reaction of the hydroperoxides with feroxidase or the peroxidatically active substances Evaluation of the discoloration in a manner known per se, characterized in that substances of the general formula I 1 are used as chromogenic substances,
in welcherin which
Rp Wasserstoff, eine SuIfonsäuregruppe oder eine Alkalisulfonatgruppe,Rp hydrogen, a sulfonic acid group or an alkali sulfonate group,
009842/0791009842/0791
R-· Wasserstoff, ein Halogenatom oder eine niedere Alkylgruppe, Y ein Stickstoffatom oder eine Methingruppe, welche gegebenenfalls auch zusammen mit R ' einen durch R- substituierten Benzolring bilden kann,R- hydrogen, a halogen atom or a lower alkyl group, Y is a nitrogen atom or a methine group, which optionally together with R 'is also substituted by R- Can form benzene ring,
einer der Reste X* ein Schwefelatom, eine Vinylengruppe, eine gegebenenfalls nieder-alkylierte oder-arylierte Iminogruppe, ein Sauerstoffatom oder ein mit zwei niederen Alkylgruppen substituiertes Kohlenstoffatom bedeutet, während der andere Rest X1 ein Sauerstoffatom oder ein mit zwei niederen Alkylgruppen substituiertes Kohlenstoffatom darstellt, wobei dieser für den Fall, daß R,· ein Halogenatom bedeutet, auch ein Schwefelatom, eine Vinylengruppe oder eine gegebenenfalls niedere alkylierte oder arylierte Iminogruppe sein kann.one of the radicals X * is a sulfur atom, a vinylene group, an optionally lower alkylated or arylated imino group, an oxygen atom or a carbon atom substituted by two lower alkyl groups, while the other radical X 1 is an oxygen atom or a carbon atom substituted by two lower alkyl groups , in the event that R, · denotes a halogen atom, this can also be a sulfur atom, a vinylene group or an optionally lower alkylated or arylated imino group.
Weitere Gegenstände der Erfindung sind diagnostische Mittel zur Bestimmung von Hydroperoxiden bzw. Substanzen , die unter Freisetzung von Hydroperoxiden reagieren, sowie diagnostische Mittel zur Bestimmung ron Hämoglobin oder anderen peroxidatisoh wirksamen Substanzen.Further objects of the invention are diagnostic means for determination of hydroperoxides or substances that react to release hydroperoxides, as well as diagnostic agents for determining hemoglobin or other peroxidation-active substances.
Die Bestimmung von Hydroperoxiden nach dem erfindungsgemäßen Verfahren ist vorzugsweise für gekoppelte und ungekoppelte Enzymreaktionen geeignet, wie z.B. zur Bestimmung von Glucose, Galaktose, Aminosäuren, Harnsäure, Peroxiden, Hämoglobin, Peroxidase oder anderen peroxidatisch wirksamen Substanzen sowie Enzymaktivitäten. Die routinemäßige Bestimmung von derartigen Substraten ist wegen ihrer elementarenwichtigkeit aus der klinischen Chemie und aus der Lebensmittel-Chemie nicht mehr wegzudenken. Bei der Bestimmung von Glucose beispielsweise, wird diese von Glucoseoxidaee zu Gluconsäure oxydiert, wobei der Luftsaueretoff zu Wasserstoffperoxid reduziert wird, ύββ Wasserstoffperoxid oxydiert dann mittels Peroxidaae oder einer peroxidatisch wirkenden Substanz den erfindungsgemäC verwendeten Indikator zum entsprechenden Farbstoff.The determination of hydroperoxides by the method according to the invention is preferably suitable for coupled and uncoupled enzyme reactions, e.g. for the determination of glucose, galactose, amino acids, uric acid, Peroxides, hemoglobin, peroxidase or other peroxidatically active Substances as well as enzyme activities. The routine determination of such substrates is, because of their elementary importance, from clinical practice Chemistry and food chemistry can no longer be imagined without it. When determining glucose, for example, this is determined by Glucoseoxidaee Gluconic acid oxidizes, the oxygen in the air to hydrogen peroxide is reduced, ύββ hydrogen peroxide then oxidizes by means of Peroxidaae or a peroxidic substance, the indicator used according to the invention for the corresponding dye.
Die Auswertung -erfolgt beispielsweise durch optische Ausmessung im Spektralphotometer oder bei Verwendung von Testpapierstreifen bzw. Testfilmen durch Vergleich der Farbstärke mit Blindproben bekannter Zu-The evaluation takes place, for example, by optical measurement in the Spectrophotometer or when using test paper strips or test films by comparing the color strength with blank samples of known additives
•Λ• Λ
009842/Q791009842 / Q791
sammensetzung bzw. Farbtafeln. Besonders vorteilhafte und gut abgestufte Farbänderungen*erhält man überraschenderweise, wenn man die Substanzen i) zusätzlich mit Reduktionsmitteln der Formel II versetzt, . .composition or color tables. Particularly advantageous and well graded Color changes * are surprisingly obtained if the substances i) additionally mixed with reducing agents of the formula II,. .
(II),(II),
in welcherin which
VI Wasserstoff oder eine gegebenenfalls alkylierte oder arylierte Hydroxyl- oder Aminogruppe,V I hydrogen or an optionally alkylated or arylated hydroxyl or amino group,
W eine Amino-, Alkoxy-, Alkyl-,· Aryl-, Carboxy- oder SuIfonsäuregruppe undW is an amino, alkoxy, alkyl, aryl, carboxy or sulfonic acid group and
W1 Wasserstoff oder eine Amino-, Alkoxy-, Alkyl-, Aryl-, Carboxy- oder SuIfonsäuregruppe, sowie gegebenenfalls deren Alkalisalze bedeuten.W 1 is hydrogen or an amino, alkoxy, alkyl, aryl, carboxy or sulfonic acid group, and optionally alkali metal salts thereof.
Diese Substanzen, die als "Modifier" wirken, geben für sich alleine keine oder nur sehr unspezifische Verfärbungen und sind deshalb als Indikatoren im allgemeinen nicht geeignet. Zusammen mit den Substanzen der allgemeinen Formel I* erhält man aber besonders deutliche und gutThese substances, which act as "modifiers", give on their own no or only very unspecific discoloration and are therefore classified as Indicators generally not suitable. Together with the substances of the general formula I *, however, one obtains particularly clear and good results abgestufte Farbumschläge. Bevorzugte Ausführungsformen der vorliegendengraduated color changes. Preferred embodiments of the present
f
Erfindung enthalten daher eine Kombination der Substanzen I1 und II als f
Invention therefore contain a combination of substances I 1 and II as
Indikator.Indicator.
Selbstverständlich läßt sich umgekehrt das erfindungsgemäße Verfahren auch zur Bestimmung der Indikatoren I1 sowie der Modifier II mit Hilfe von Hydroperoxiden und einer peroxidatisch wirksamen Substanz benutzen,Of course, conversely, the method according to the invention can also be used to determine the indicators I 1 and the modifiers II with the aid of hydroperoxides and a peroxidatically active substance,
•Λ• Λ
009842/0791009842/0791
was bei der Produktionaüberwachung dieser Diagnostika sehr nützlich ist,which is very useful in monitoring the production of these diagnostics is,
toto
Die Herstellung der Verbindungen I? erfolgt in an sich bekannter Weise durch Umsetzung von 2-Halogen- oder 2-Mercapto-Quartäraalzen mit einem entsprechenden N-alkylierten Hydrazonsalz unter Zugabe eines Amins, vorzugsweise von Triäthylamin in einem polaren Lösungsmittel (z.B. Methanol) bei einer Temperatur von 15-100 C. Die Reaktion ist je nach Reaktivität der einzelnen Komponenten innerhalb von 10 Minuten bis 2 Stunden beendet [S. Hünig et al.fLiebigs Ann. Chem. 676, S. 32-65 (1964)].The production of the connections I ? takes place in a manner known per se by reacting 2-halogen or 2-mercapto-quaternary salts with a corresponding N-alkylated hydrazone salt with the addition of an amine, preferably triethylamine in a polar solvent (eg methanol) at a temperature of 15-100.degree Depending on the reactivity of the individual components, the reaction is complete within 10 minutes to 2 hours [p. Hünig et al. f Liebigs Ann. Chem. 676 , pp. 32-65 (1964)].
Die Darstellung der als Ausgangaprodukte verwendeten Hydrazone sowie der Ν-quaternisierten Salze erfolgt analog den von S. Hünig (Ann. Chem. 6Ο9, S.160-180 [1957J) und H. Balli (Liebigs Ann. Chem. £££, S.1-8 [196IJ) angegebenen Vorschriften. Die Verbindungen I1 können erfindungsgemäß sowohl für den optischen Test in der Küvette, als auch auf Reagenzpapieren und in Reagenzfolien allein oder zusammen mit den "Modifiern" der Formel II eingesetzt werden.The hydrazones used as starting products and the Ν-quaternized salts are represented analogously to that of S. Hünig (Ann. Chem. 6Ο9 , pp.160-180 [1957J) and H. Balli (Liebigs Ann. Chem. £££, p 1-8 [196IJ) specified regulations. According to the invention, the compounds I 1 can be used both for the optical test in the cuvette and on reagent papers and in reagent foils either alone or together with the "modifiers" of the formula II.
Das erfindungsgemäße Verfahren und die diagnostischen Mittel sind in den folgenden Beispielen näher erläutert:The method according to the invention and the diagnostic means are in explained in more detail in the following examples:
-Λ-Λ
0098427079100984270791
45 g Propiofan (BASF), 35 g einer Lösung von 37 g Algipon in 2 Liter eines 0,5 molaren Phosphat- oder Citratpuffers vom pH 5»7» 1 E Texapon P. (Pa. Henkel Düsseldorf), 10 ml Wasser, 0,075" 6 Peroxidase und 0,15 g Glucoaeoxidase werden zu einem homogenen Brei verrührt. Zu dieser Mischung gibt man 6 ml einer maximal 5 foigen methanolischen Lösung eines der nachstehend aufgeführten Indikatoren, sowie gewünschtenfalls einen der Modifier der Formel II, welcher in den nachfolgend angeführten Lösungsmitteln gelöst und zu der Indikatormischung gegeben wird. Mit den so hergestellten Mischungen, in denen bis zu 0,3 $ Indikator enthalten sind, werden Folien in einer Schichtdicke von 300 /u beschichtet und getrocknet. Auf einen derart hergestellten Teststreifen bringt man einen Tropfen glucosehaltigen Blutes, läßt diesen einige Zeit einwirken und erhält nach dem Abwischen des Tropfens die in der Tabelle I angegebenen Farbreaktionen, welche je nach Glucose-Konzentrationen mehr oder weniger stark abgestuft sinda45 g Propiofan (BASF), 35 g of a solution of 37 g Algipon in 2 liters of a 0.5 molar phosphate or citrate buffer with a pH of 5-7-1 E Texapon P. (Pa. Henkel Düsseldorf), 10 ml of water, 0.075 " 6 Peroxidase and 0.15 g Glucoaeoxidase are stirred to a homogeneous paste. To this mixture are added 6 ml of a maximum 5- fold methanolic solution of one of the indicators listed below and, if desired, one of the modifiers of the formula II, which is in the solvents listed below The mixtures produced in this way, which contain up to 0.3 $ indicator, are coated with a layer thickness of 300 μl and dried. A drop of glucose-containing blood is placed on a test strip produced in this way , lets it take effect for some time and, after wiping off the drop, receives the color reactions given in Table I, which are more or less pronounced depending on the glucose concentrations tiered are a
Indikatoren der Formel I1:Indicators of formula I 1 :
A 2,2'-Azino-di-[3-äthylbenzoxazolon(2)] B l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)3-2-[l-äthylpyridon(2)]-azin C l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)J-2-[3-äthylbenzthiazolon(2)J-azin D l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)]-2-[l-äthylchinolinon(2)]-azinA 2,2'-azino-di- [3-ethylbenzoxazolone (2)] B l- [3-ethylbenzoxazolone (2) 3-2- [l-ethylpyridone (2)] azine C1- [3-ethylbenzoxazolone (2) I-2- [3-ethylbenzthiazolone (2) I-azine D l- [3-ethylbenzoxazolone (2)] - 2- [l-ethylquinolinone (2)] azine
E 1-[l-Äthyl-3 s 3-dimethyl-indolinon(2)]-2-[3-äthylbenzthiazolon(2)]-azin E 1- [1-ethyl-3 s 3-dimethyl-indolinone (2)] - 2- [3-ethylbenzthiazolone (2)] - azine
F l-[3-Methylbenzthiazolon(2)]-2-L,-athyl-6-chlorpyridon(2)J-azin F 1- [3-methylbenzthiazolone (2)] -2-L , -ethyl-6-chloropyridone (2) J-azine
G l-[l-Äthylchinolon(2)]-2-[l-äthyl-6-chlorpyridon(2)]-azinG l- [l-ethylquinolone (2)] - 2- [l-ethyl-6-chloropyridone (2)] azine
009842/0791009842/0791
IIII
KönzentratioiKoenzentratioi
ι inι in
' orange I.
'orange
8)-2,4-diaulfon-8) -2,4-diaulfone-
säureacid
grün I.
green
sulfonsäure(6)sulfonic acid (6)
!!
eäureacid
p-sulfonsäurep-sulfonic acid
thol-8)-2,4-thol-8) -2,4-
disulfonsäuredisulfonic acid
eäureacid
sulfonsäure(6)sulfonic acid (6)
sulfonsäure(e)sulfonic acid (s)
formamid rosa-violettformamid pink-violet
cy!säurecy! acid
p-aulfonsaurap-aulfonic aura
thol-8)-2,4-thol-8) -2,4-
disulfonsäuredisulfonic acid
säureacid
••
I
t 0.1
I.
t
009842/0791009842/0791
Modifiersubstanzenν
Modifier substances
Beispiel 2Example 2
1 ml einer 0,2 $igen methanolischen Lösung von l-[l-Äthyl-3,3-dimethylindolinon-(2)]-2-[3-äthylbenzthiazolon(2)]-azin, 1 ml einer 0,1 $igen methanolischen Lösung von p-Aminosalicylsäure, 0,03 nl einer 1 ^igen Lösung von Peroxidase in einem 0,1 molaren Phosphatpuffer vom pH 5,7 und 0,05 ml einer Lösung von Wasserstoffperoxid werden zusammen pipettiert, umgerührt und bei einer Wellenlänge von 530 nm gemessen. Die1 ml of a 0.2% methanolic solution of l- [l-ethyl-3,3-dimethylindolinone- (2)] - 2- [3-ethylbenzthiazolone (2)] azine, 1 ml of a 0.1% methanolic solution of p-aminosalicylic acid, 0.03 nl of a 1 ^ igen Solution of peroxidase in a 0.1 molar phosphate buffer of pH 5.7 and 0.05 ml of a solution of hydrogen peroxide are pipetted together, stirred and measured at a wavelength of 530 nm. the
Wasserstoffperoxid-Konzentration wird mit Hilfe einer vorher aufgestellten Eichkurve bestimmt.Hydrogen peroxide concentration is determined using a previously established Calibration curve determined.
009842/0791009842/0791
Beispiel 3Example 3
Ein Filterpapier (2316 der Fa. Schleicher & Schüll) wird mit einer Lösung von 75 mg Peroxidase, 143 mg Glucoseoxidase und 0,25 ml Texapon P (Fa. Henkel, Düsseldorf) in 100 ml eines 0,1 molaren Phosphatpuffers vom pH 5»6 imprägniert und getrocknet. Das in dieser Weise imprägnierte Papier wird anschließend in eine Lösung von 0,2 g l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)J-2-[l-äthylchinolinon(2)]-azin und 0,1 g p-Aminosalicylsäure in 100 ml Methanol getaucht und getrocknet. Beim Benetzen eines Streifens des so hergestellten Heagenzpapieres mit Harn, welcher pathologische Glucosemengen enthält, verfärbt sich dieser je nach Glucosekonzentration verschieden stark rotviolett.A filter paper (2316 from Schleicher & Schüll) is mixed with a solution of 75 mg peroxidase, 143 mg glucose oxidase and 0.25 ml Texapon P (Fa. Henkel, Düsseldorf) impregnated in 100 ml of a 0.1 molar phosphate buffer with a pH of 5-6 and dried. The paper impregnated in this way is then in a solution of 0.2 g of l- [3-ethylbenzoxazolone (2) J-2- [l-ethylquinolinone (2)] - azine and 0.1 g of p-aminosalicylic acid immersed in 100 ml of methanol and dried. When wetting a strip of the so made heap paper with urine, which shows pathological glucose levels contains, it turns red-violet to varying degrees depending on the glucose concentration.
Ein Filterpapier (23 S der Fa. Schleicher & Schüll) wird mit einer Lösung von 0,25 ml Texapon P (Fa. Henkel, Düsseldorf) und 100 mg Natriumalginat in 100 ml eines 0,1 molaren Phosphatpuffers vom pH 5,6 imprägniert und getrocknet. Das so hergestellte Papier wird mit einer Lösung von 0,2 g l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)]-2-[l-äthylchinolinon(2)]-azin und 0,1 g p-Aminosalicylsäure in 100 ml Methanol imprägniert und getrocknet. Bringt man auf ein so hergestelltes Reagenzpapier einen Tropfen einer Körperflüssigkeit, welche,Blut enthält, und tropft anschließend 3 /£iges Wasserstoffperoxid auf das Papier, so färbt ea sich noch bei einer Blutkonzentration von 1:50.000 rotviolett.A filter paper (23 S from Schleicher & Schüll) is impregnated with a solution of 0.25 ml of Texapon P (from Henkel, Düsseldorf) and 100 mg of sodium alginate in 100 ml of a 0.1 molar phosphate buffer of pH 5.6 and dried. The paper produced in this way is impregnated with a solution of 0.2 g of l- [3-ethylbenzoxazolone (2)] - 2- [l-ethylquinolinone (2)] azine and 0.1 g of p-aminosalicylic acid in 100 ml of methanol and dried. If a drop of a body fluid which contains blood is placed on a reagent paper produced in this way, and 3 % hydrogen peroxide is then dripped onto the paper, it turns red-violet at a blood concentration of 1: 50,000.
009842/0791009842/0791
Beispiel 5Example 5
Ein Filterpapier (2316 der Firma Schleicher & Schüll) wird mit einer Lösung von 40 m8 Peroxidase und 0,25 ml Texapon P (Fa. Henkel, Düsseldorf) in 100 ml eines 0,1 molaren Phosphatpuffeis vom pH 5,6 imprägniert und getrocknet. Anschließend wird das so vorbereitete Papier mit einer kalt gesättigten methanolischen Lösung von l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)]-2-[3-äthylbenzthiazolon(2)]-azin imprägniert und getrocknet. Bringt man auf ein so hergestelltes Reagenzpapier Lösungen von Wasserstoffperoxid in verschiedener Konzentration, so färben sich die Papiere je nach Wasserstoffperoxid-Konzentration verschieden stark grünblau. Die untere Nachweisgrenze liegt bei 0,01 γ Wasserstoffperoxid/ml. A filter paper (2316 of the firm Schleicher & Schull) is treated with a solution of 40 m 8 peroxidase and 0.25 ml Texapon P (Fa. Henkel, Dusseldorf) in 100 ml of 0.1 molar pH 5.6 Phosphatpuffeis from impregnated and dried . The paper prepared in this way is then impregnated with a cold, saturated methanolic solution of 1- [3-ethylbenzoxazolone (2)] - 2- [3-ethylbenzthiazolone (2)] azine and dried. If on a test paper thus prepared solutions of hydrogen peroxide in different concentrations, then the papers color depending on the concentration of hydrogen peroxide to different degrees green blue. The lower detection limit is 0.01 γ hydrogen peroxide / ml.
1 ml einer Lösung, welche eine der nachstehend aufgeführten Indikatorverbindungen I1 je nach Löslichkeit bis zu einer Konzentration von 1 fo enthält, wird mit 1 ml einer Lösung von 150 mg Glucoseoxidaae und 75 cig Peroxidase in 100 ml eines 0,1 molaren Phosphat puffers vom pH 5 »6 und 1 ml einer Qlucoselöaung vereinigt. Man erhält die in der Tabelle II angegebenen Farbreaktionen. Als Modifier wird jeweils 0,1 ml einer 1 foigen methanolischen Lösung von p-Aminosalicylaäure zugegeben.1 ml of a solution which contains one of the indicator compounds I 1 listed below, depending on solubility up to a concentration of 1 fo , is mixed with 1 ml of a solution of 150 mg Glucoseoxidaae and 75 cig peroxidase in 100 ml of a 0.1 molar phosphate buffer from pH 5 »6 and 1 ml of a glucose solution combined. The color reactions given in Table II are obtained. 0.1 ml of a 1- fold methanolic solution of p-aminosalicylic acid is added as a modifier.
009842/0791009842/0791
Fp. 0CMp. 0 C Reaktionsfarbe ohne mit ModifierReaction color without with modifier
2,2'-Azino-di-[3-äthylbenzozazolon(2)J2,2'-Azino-di- [3-ethylbenzozazolone (2) J.
l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)]-2- [1- äthylpyridon(2)]-azin1- [3-ethylbenzoxazolone (2)] - 2- [1- ethylpyridone (2)] azine
1-Γ 3-Äthylbenzoxazolon(2)]-2-[l- äthylohinolinon(2)J-azin1-Γ 3-ethylbenzoxazolone (2)] - 2- [l-ethylohinolinone (2) J-azine
l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)]-l- [3-ethylbenzoxazolone (2)] -
2-[3-äthylbenzthiazolon(2)]-azin2- [3-ethylbenzthiazolone (2)] azine
l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)J-2-[lf3-diäthylbenzimidazolon (2)]-azin1- [3-ethylbenzoxazolone (2) J-2- [lf3-diethylbenzimidazolone (2)] - azin
216-217 I45-I46216-217 I45-I46
199199
I93-I94I93-I94
215-216215-216
l-[3-Äthylbenzoxazolon(2)J-2-[l-äthyl-6-chlor-pyridon(2)J-azin l- [3-ethylbenzoxazolone (2) I-2- [l-ethyl-6-chloropyridone (2) I-azine
l-[l-Xthyl-3,3-dioethylindolinon(2)J-2-ί3-äthylbenzthiazolon(2)J-azin1- [1-Xthyl-3,3-dioethylindolinone (2) J-2-ί3-ethylbenzthiazolone (2) J-azine
1-[l-Äthyl-3,3-dimethylindolinon(2)J-2-Γ3-nethylbenzthiazolon(2)J-azin1- [1-ethyl-3,3-dimethylindolinone (2) J-2-Γ3-ethylbenzthiazolone (2) J-azine
1-[l-Äthyl-3,3-dinethylindolinonf 2)]-2~t1- äthylchinolinon(2)J-azin1- [1-Ethyl-3,3-dinethylindolinone (2)] - 2 ~ t1-ethylquinolinone (2) J-azine
2,2·-Azino-di[3-äthylbenzoxazolon-2-aulfonsäure-6]2,2 · -Azino-di [3-ethylbenzoxazolone-2-aulphonic acid-6]
2,2'-Azino-di[3-äthylbenz2,2'-azino-di [3-ethylbenz oxazolon-2-ama'oniuiD8ul-oxazolone-2-ama'oniuiD8ul- fonat-6]fonat-6]
206-209206-209
199 j199 y
258-260[Zers.]258-260 [decomp.]
300 [Zers.] blau 300 [decomp.] Blue
violett violett blau violet violet blue
violettviolet violettviolet
rotbraunred-brown
rotRed
rotRed
rotRed
braunorangebrown orange
rotRed
rotbraun rotviolettred-brown red-violet rotbraun rotviolettred-brown red-violet rotorange braunorangered-orange brown-orange
blaublue
blaublue
rotbraunred-brown
rotbraunred-brown
009842/0791009842/0791
Claims (6)
Priority Applications (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE1967B0094944 DE1648840C2 (en) | 1967-10-14 | 1967-10-14 | Methods and diagnostic agents for the determination of hydroperoxides and peroxidatically active substances |
DE19691917996 DE1917996C3 (en) | 1969-04-09 | Procedures and diagnostic tools. for the determination of hydroperoxides and peroxidatically active substances | |
CA079505A CA919563A (en) | 1969-04-09 | 1970-04-07 | Diagnostic reagent for peroxide and peroxidase detection |
GB1646670A GB1254417A (en) | 1969-04-09 | 1970-04-07 | Diagnostic agents |
FI96870A FI50911C (en) | 1969-04-09 | 1970-04-07 | Diagnostic substance for use in the analytical determination of hydrogen peroxide or peroxidatively active substances. |
CH518870A CH513401A (en) | 1968-10-14 | 1970-04-08 | Diagnostic agent for peroxides |
AT323170A AT297665B (en) | 1969-04-09 | 1970-04-08 | Method and diagnostic agent for the determination of hydroperoxides or of substances that react with the release of hydroperoxide, as well as of peroxidase or peroxidatically active substances |
FR7012659A FR2043072A6 (en) | 1969-04-09 | 1970-04-08 | |
NL7005081A NL165300C (en) | 1969-04-09 | 1970-04-09 | METHOD FOR DETERMINING HYDROPEROXIDES AND / OR SUBSTANCES REACTING WITH THE DELIVERY OF HYDROPEROXIDE, AND PEROXYDASE AND / OR SUBSTITUTIONAL HYDROXIDE HYDROXIDE HYDROXIDE HYDROXIDE HYDROXIDE HYDROXIDE HYDROXIDE HYDROXIDE HYDROXIDE HYDROPHYDENE HYDROPHYDENE HYDROPHYDENE HYDROPHYDENE HYDROPHYDENE HYDROPHYDENE WITH PEROXIDASE ACTION BY COLOR ASSESSMENT AND METHOD FOR PREPARING A DIAGNOSTIC MICRO METHOD FOR DETERMINING HYDROPEROXIDES AND / OR SUBSTANCES, DI |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE1967B0094944 DE1648840C2 (en) | 1967-10-14 | 1967-10-14 | Methods and diagnostic agents for the determination of hydroperoxides and peroxidatically active substances |
DE1648840 | 1967-10-14 | ||
DE19691917996 DE1917996C3 (en) | 1969-04-09 | Procedures and diagnostic tools. for the determination of hydroperoxides and peroxidatically active substances |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE1917996A1 true DE1917996A1 (en) | 1970-10-15 |
DE1917996B2 DE1917996B2 (en) | 1977-05-12 |
DE1917996C3 DE1917996C3 (en) | 1978-01-05 |
Family
ID=
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0161436A1 (en) * | 1984-03-31 | 1985-11-21 | Roche Diagnostics GmbH | Redox indicators |
DE2462952C2 (en) * | 1974-12-21 | 1987-10-01 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim, De |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2462952C2 (en) * | 1974-12-21 | 1987-10-01 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim, De | |
EP0161436A1 (en) * | 1984-03-31 | 1985-11-21 | Roche Diagnostics GmbH | Redox indicators |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE1648840C2 (en) | 1970-09-17 |
DE1648840B1 (en) | 1970-02-12 |
DE1917996B2 (en) | 1977-05-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE2640211C3 (en) | Test device for the detection of peroxidatively active substances | |
DE1598133C3 (en) | ||
DE69535522T2 (en) | Coupling dye for the spectrophotometric determination of analytes | |
DE69314363T2 (en) | Improved oxidative coupling dye for the spectrophotometric quantitative analysis of analytes | |
DE60018300T2 (en) | 8- (ANILINO) -1-NAPHTHALINE-SULFONATE ANALOGUE AND ITS USE IN ANALYTE DETECTION TESTS | |
DE69117588T2 (en) | Composition and method for the determination of ketone bodies | |
DE2460903B2 (en) | New 33 '^ 3' Tetraalkylbenzidines | |
CH636964A5 (en) | DIAGNOSTIC AGENT, CONTAINING STABILIZED OXYDATION INDICATORS. | |
EP0098562B1 (en) | Process for the determination of conjugated and total bilirubin and suitable reagent therefor | |
DE3124594A1 (en) | AGENT AND METHOD FOR DETECTING HYDROGEN PEROXIDE | |
EP0248312B1 (en) | 4,6-dinitro benzothiazolone-2-hydrazones | |
CH507518A (en) | Determination of hydroperoxides and other material with | |
DE1598756A1 (en) | Agent for the determination of urea in liquids | |
DE69026611T2 (en) | Method for the determination of fructosamines | |
DE3408062A1 (en) | METHOD FOR DETERMINING SS HYDROXIBUTTERIC ACID AND A COMPOSITION FOR DETERMINING SS HYDROXIBUTTER ACID | |
DE2857298C2 (en) | Means for the determination of peroxidatively active substances | |
DE1917996A1 (en) | Diagnostic agent for peroxides | |
DE1917996C3 (en) | Procedures and diagnostic tools. for the determination of hydroperoxides and peroxidatically active substances | |
DE3889845T2 (en) | Process for the mass analysis of hydrogen peroxide and reagent therefor. | |
DE68923616T2 (en) | REDUCABLE INDICATORS CONTAINING AND USING PYROGALLOL. | |
DE1917997C3 (en) | Methods and diagnostic agents for the determination of hydroperoxides and peroxidatically active substances | |
DE3783285T2 (en) | INDICATOR COMPOSITION AND METHOD FOR THEIR PRODUCTION. | |
CH513401A (en) | Diagnostic agent for peroxides | |
DE1773839C3 (en) | Method and diagnostic agent for the determination of hydroperoxides or peroxidatically active substances | |
DE1917997A1 (en) | Methods and diagnostic agents for the determination of hydroperoxides and peroxidatically active substances |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) |