DE1768047A1 - Verfahren zur Herstellung asparagin- und glutaminhaltiger Peptide - Google Patents
Verfahren zur Herstellung asparagin- und glutaminhaltiger PeptideInfo
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Description
Verfahren zur Herstellung asparagin- und glutaminhaltiger
Peptide
Bei der Synthese von asparagin- und glutaminhaltigen
Peptiden, bei denen die Amid funkt ionen nicht geschützt
sind, treten zahlreiche Nebenreaktionen auf. Bei Asparagin- wie auch bei Glutamin-peptiden kann die
Amidfunktion durch peptidbildende Reagentien zur
Nitrilgruppe dehydratisiert werden, durch intermediär auftretende cyclische Imide können Isoasparagin-
bzw. Isoglutarain-derivate entstehen und durch saure wie
auch basische Hydrolyse kann die Amidfunktion gespalten werden (vgl. E. Schröder u. K. Lübke, The Peptides,
Vol. I, Academic Press, New York und London, 1965,
S. 110, 203-204 und 191). Bei N-terminalen Glutaminpeptiden.
spielt auch die Pyroglutaminsäurebildung eine Rolle (vgl. Liebigs Ann. Chem. 707, 232 (1967). Um
diese Nebenreaktionen zu vermeiden, wurden bereits Schutzgruppen für die Amidfunktionen entwickelt.
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/2
So wurde z.B. durch Umsetzung von N-Carbobenzoxy-L-glutamin
mit Xanthydrol in Eisessig das N^-Carbe-' benzöxy-N^-xanthyl-L-glutämiii gewonnen. DielXänthylgruppe
läßt sich rait HBf- in Eisessig wieder abspalten. "Doch die Ausbeute nach" der Abspaltung" isif'
gering. Ein weiterer Nachteil ist die Schwerlöslichkeit
der Xanthy!verbindungen" tVgl. Bull. Chem.' Soc. Jap.
35, 1966 (1962)). -- ~_: ' -.-: ■ - -' ν ---.--
Aus N- geschützt en Glutaminsäure- und Asparagine äure-oi- *
benzylestern wurde durch Umsetzung mit Bis-(2,4-dimethoxy- -benzylamin) nach dev- Inamin*methöd€-die-entsprechenden -
$-[Risr (:2/4—dimethoxybenzyl) }-araide- hergestellt = (vgl.
Tetrahedron Letters (London)-l&S6 r S. 3483^r-JlXeSe--
Schutzgruppe läßt sich durch längeres Stehen in Trifiuoressigsäure/Änisol
abspalten. Von Nachteil bei dieser Methode ist die unwirtschaftliche und umständliche
Herstellung der amid-geschützten Asparagin- und Glutaminderivate.
Nach dem gleichen aufwendigen Verfahren wurde N-Carbobenzoxy-N°-benzhydryl-L-glutamin
hergestellt (vgl. Bull. Chem. Soc. Jap. 40, 2164 (1967)). Diese Schutzgruppe
wird in wasserfreiem Fluorwasserstoff abgespalten.
-Auf—der Suche narch -geergneteren Amidschutzgruppen
wurde^nun überraschenderv/eise gefunden,, daß sich das 4,4'-Dimethoxybenzhydrol sowohl mit Aspai^agin bu&r - —·
"Glutamin, als auch mit N-Carbobenzoxy-asparagin-oder
N-Carbobenzoxy-glutaniin in Eisessig unter Protonenkatalyse
zu den entsprechenden 4,4I-Dimethoxybenzhydrylamiden
umsetzt.- Der. 4.~4'--Dimethoxybenzhydrylrest fet
sauer wieder leicht abspaltbar."
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Her-
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ORIGINAL INSPECTED
567F6S047
stellung von asparagin- und glutamin-haltiger Peptide,
das dadurch gekennzeichnet ist, daß man Asparagin und Glutamin oder deren säurestabilen Derivate.__der allgemeinen Formel (I) -
G-(A) -NH-CH-eO-tB) -OR
co
in der G Y_ . · ; ■ -r.Z^'.'r'j
Γ „_ . '" """■"'"■ '"" r""]| einen unter den Bedin_gürigen--d«r Her—
1 *·~ ""^ oder ein Proton
stellung säurestabilen AcylresO/" A und B gleiche oder
verschiedene Aminosäurereste oder Peptidbruchst.ücke.
und R einen Alkyl-, Aralkyl- oder Arylrest oder ein Proton bedeuten, χ und y für die Zahl 0 oder eine ganze
Zähl und ri für die Zahlen 1 und 2 stehen, mit- 4,4'-Dimethoxybenzhydro-1
in Eisessig -in Gegenwart saurer Katalysatoren zu djm_ Verbindungen der allgemeäjien _ _
Formel (II)
G-(A) -NH-CH-CO-(B)-OR
CI-I) bzw»
wobei G, A, B, R; χ, y und η die oben genannte Bedeutung
haben, umsetzt, diese Derivate nach den allgemeinen Methoden der Peptidchemie in andere Derivate
109847/172 E OfvGlt,At ,.. /4
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der allgemeinen Formel (Ha) , wobei sich (Ha) hinsichtlich A und/oder B und/oder χ bzw. y von
den Verbindungen der Formel II unterscheidet, über-
gegebenenfalls
führt undYänschließend die 4,4'-Dimethoxybenzhydryl-
führt undYänschließend die 4,4'-Dimethoxybenzhydryl-
1 I
— gruppe durch Behandeln mittels starker organischer
Säuren oder mittels Mineralsäuren abspaltet.
Die zur Herstellung der Asparagin- und Glutaminpeptide der Formel (I) benötigten amidsubstituierten
Asparagin- und Glutamin-derivate der Formel (II) können entweder
1) aus den N-Carbobenzoxyyerbindungen von Glutamiii und
Asparagin durch" Umsetzen"mit 4.4'-Dimethoxybehzhydrol
in Eisessig als Lösungsmittel unter Zusatz von sauren katalysatoren wie konz. Schwefelsäure, BF3-Diäthylätherat,
ZnCl0"oder A1C1„ oder organischer SuIf o.ft-"
säuren wie Toluolsulfonsäure in katalytischen Mengen,
■- oder
2) aus Glutamin oder Asparagin durch Umsetzung mit 4.4'-Dimethoxybenzhydrol.in
Eisessig als Lösungsmittel unter Zusatz von konz. Schwefelsaure oder BF„-Diäthylätherat
in molaren Mengen hergestellt v/erden.
Außerdem lassen sich die 4.4'-Dimethoxybenzhydrylreste
auch nachträglich in asparagin- und glutaminhaltige Peptide einführen.
Diese Verbindungen können nun nach den allgemeinen---
_ Methoden der Peptidchemie. zur Herstellung der asparagin- und glutaminhaltigen Peptide verwendet werden. So lassen
sich z.B. aus den nach Methode 1 hergestellten N-Carbobenzoxy-verbindungen in bekannter Vi'eise die aktivierten
Ester, wie p-Nitrophenylester herstellen. Mit Diazo-
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methan entstehen die entsprechenden Methylester, die durch Hydrierung in Eisessig/Methanol und anschließender
Titration mit methanolischer Salzsäure in die Methylesterhydrochloride
überführt werden können. Aus den nach Methode 2 hergestellten N5*1- 4.4'-Dimethoxybenzhydryi-asparagin-
und -glutamin lassen sich beispielsweise die N-Phthalyl- und N-o—Nitrosulfenyl-Verbindungen
herstellen.
Aus diesen Verbindungen können in üblicher Weise, z.B. nach der Methode der gemischten Anhydride, der
aktivierten Ester oder der Carbodiimid- und Inamin- .. Methode Peptide hergestellt werden, aus denen nach
Freisetzung einer Carboxylgruppe, z.B. durch Verseifen eines Esters oder Freisetzen einer Aminogruppe, weitere
höhere Peptide aufgebaut werden können.
Die Wahl der sonstigen, bei der Peptidsynthese verwendeten - Schutzgruppen hängt von der Differenzier- barkeit
gegenüber den neuen gemäß der Erfindung ver- .. wendeten Araidschutzgruppen ab.
Die neuen Schutzgruppen sind stabil gegen alkalische Verseifung, Aamonolyse oder Hydrazinolyse," so daß z.B.
in ihrer Anwesenheit Carbonsäureester in Carbonsäuren, Carbonsäureamide od.er -hydrazide überführi.^nd_.Nr:-. _5.i^»=..^--
Phthalylgruppen abgespalten werden können. Auch gegen andere nukleophilen Reagentien.,_ d.ie_zur Abspaltung der..
N-o-Nitrosulfenylgruppe dienen, sind die neuen Schutzgruppen resistent: Der o-Nitrosulfenyl-rest läßt sich
unter milden Reaktionsbedingungen'mit oder ohne Zusatz von Indol mittels methanolischer Salzsäure selektiv abspalten.
Gegen katalytische Hydrierung sind die neuen
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Schutzgruppen ebenfalls stabil. So kann die N-Carbobenzoxygruppe selektiv abhydriert werden.
Als weitere Bausteine der die Asparagin- und Glutaminderivate der allgemeinen Formel (II) enthaltenden
Peptide kommen für A und B alle in natürlich vorkommenden Peptiden anzutreffenden Aminosäuren in
ihrer L- oder D-Form infrage. Auch der Einsatz von
ß-Aminosäuren, wie z.B. ß-Alanin oder anderer nur
synthetisch oder halbsynthetisch zugänglicher Aminosäuren, z.B. αί-Methylalanin, oi-Methyl-3.4-dioxy-L-phenylalanin
oder ß-Chloralanin ist möglich. Y/eitere
funktioneile Gruppen der Aminosäuren können oder müssen entsprechend den in der Peptidchemie üblichen
Regeln geschützt werden (vgl. E. Schröder u. K. Lübke, The Peptides, New York u. London 1965, Bd. I, insbes.
Seiten 3-75). Als säurestabiler· Acylrest kommt die Carbobenzoxy-f j oder auch ein Proton infrage.
Die Abspaltung der neuen Schutzgruppe gelingt erfindungsgemäß
durch Behandeln mit starken organischen Säuren wie Ameisensäure und Halogencarbonsäuren vom Typ der Trifluoressigsäure,
Difluorchloressigsäure oder Trichloressigsäure, die gleichzeitig als Lösungsmittel dienen
können, ferner mit vorzugsweise wasserfreien Mineralsäuren wie HBr in Eisessig, wasserfreiem Fluorwasserstoff,
oder mit organischen Sulfonsäurenfin Ameisensäure
als Lösungsmittel. Die Abspaltung kann bei Zimmertemperatur oder höheren Temperaturen vorgenommen werden. Zusätze die
das entstehende Kation abfangen können, wie Anisol, Phenolen, Indol bzw. Indolderivaten beschleunigen die Abspaltung.
+) Phthalyl-, Trifluoracetyl-, Tosyl- und Benzoylgruppe
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Tabelle 1 gibt die Abspaltungsbedingungen und die Abspaltungszeiten wieder, die bei N^-4.4'-Dimethoxybenzhydryl-L-glutamin
gewonnen wurden.
Abspaltung der Amid-Schutzgruppe von N -4.4'-Dimethoxybenzhydryl-L-glutamin
unter" verschiedenen Bedingungen. (Die Abspaltungszeit wurde papierchromatographisch ermittelt)-r
Abspaltungsmedium
Abspaltungszeit
1) siedende Trifluoressigsäure
2) siedende Trifluoressigsäure/Anisol
3) Trifluoressigsäure/Anisol bei
Zimmertemperatur
4) halbkonzentrierte HBr/Eisessig bei Zimmertemperatur
5) halbkonz. HBr/Eisessig/Indol
bei Zimmertemperatur
6) Eisessig/BF3-Diäthylätherat bei Ziimaertemperatur
7) Ameisensäure/Anisol bei 80
8) Ameisensäure/Toluolsulfonsäure (4:1) Anisol bei S0°
9) TriChloressigsäure/Anisol bei IGO
10) Trichloressigsäure/Anisol bei
15 Minuten Minuten
2- 3 .Stunden 1- 2 Stunden 5-10 Minuten
2 Stunden 1 Stunde
5 Minuten Minuten 10-15 Minuten
Die Verfahrensprodukte können nach Abspaltung der neuen Schutzgruppe als Therapeutika Verwendung finden
oder als Zwischenprodukte, wobei die Schutzgruppe auch an den Peptiden belassen werden kann, zur Herstellung anderer
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/s
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therapeutisch wertvoller glutamin- oder asparaginhaltiger
Peptide, v/ie z.B. Oxytocin, Vaspressin,
Glucagon, Secretin oder Insulin eingesetzt werden.
Glucagon, Secretin oder Insulin eingesetzt werden.
Durch die nachstehenden Beispiele wird die Erfindung näher erläutert.
/9
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Herstellung von L-Tyrosyl-L-glutamin:
a) N^-4.4'-Dimethoxybenzhydryl-L-glutamin
<aO 1.45 g (10 mMol) Glutamin und 2.4 g 4.4'-Dimethbxy- j
benzhydrol (10 mMol) gibt man in 50 ml Eisessig. Dazu gibt man bei Zimmertemperatur 0,54 m konz.
Schwefelsäure und ruht etwa 2 Stunden. Danach gibt
man 2 g wasserfreies Natriumacetat zu und .engt. ein..
Der Rückstand wird zwischen Natriumacetatlösung und Essigester verteilt. Über Nacht fällt im Eisschrank
ein Niederschlag ab, der abgesaugt und mit Ytesser gewaschen wird.. Ausb* 1.145g (= 31 % d. Th.),
F. P. 205-206°. kc]p2 = + 7.5° (c = 2 in Eisessig)
ß) Die Verbindung kann auch wie &lgt erhalten werden:
5.1 g (1OmT1IoI) N-Carbobenzoxy-Mlö-4.4'-dimethoxy- '
benzhydryl-L-glutamin (hergestellt nach b) werden ™
in einer Mischung aus Eisessig und Methanol (1:1) gelöst. Dazu gibt man Palladiumkatalysator und
leitet so lange Y/asserstof f ein bis kein. CO2 mehr
entweicht. Der Katalysator wird abgesaugt und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wird mit Äther
verrieben und getrocknet. Ausb. 3.65 g (= 98 % d.Th.)· Nach Umkristallisation aus Wasser: Ausb. 2.81 g
(= 75.5 % d.Th.), F.P. 205-206°.
b) N-Carbobenzoxy-N -4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutamin
oO 23 g Carbobenzoxy-L-glutamin (0.1 JIoI) und 24 g
109847/1725 /io
4.4'-Dimethoxybenzhydrol (0.1 Mol) werden in
250 ml Eisessig gelöst. Dazu gibt man bei Zimmertemperatur 0. 5 ml konzentrierte Schv/ef elsäure.
Man läßt über Nacht stehen und gießt dann in 750 ml Wasser. Es scheidet sich ein Öl aus,
das bald kristallisiert. Der Kristallbrei wird abgesaugt und in Essigester warn gelöst. Die
Essigesterlösung wird mit Tfasser ausgeschüttelt, mit Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der
Rückstand wird mit Äther verrieben und abgesaugt. Ausb.~45,8 g (= 90 % d.Th.), F. P. 117-120°
[oC]Z = -6,75 (c = 2, in Dimethylformamid)
ß) Andere Herstellungsweise:
Nach der üblichen Methode der Carbobenzoxylierung erhält man aus N -4.4'-Dimethoxybenzhydroyl-L-gutamin
in 80 % Ausbeute N-Carbobenzoxy-N'^-4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutamin.
F.P. 117-120 .
c) N-Carbobenzoxy-N -4.4'-dinethoxybenzhydryl-L-glutamin-methylester
5,1 g N-Carbobenzoxy-Nc0-4. 4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutamin
werden in Tetrahydrofuran gelöst. Bei Zimmertemperatur wird ätherische Diazomethanlösung
bis zur bleibenden Gelbfärbung zugetropft. Überschüssiges Diazomethan wird mit ein paar Tropfen
Eisessig zerstört. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgezogen und der Rückstand mit Petroläther verriben.
Ausb. 5.2 g (= 100 % d.Th.), F. P. 146-150° 2 - -10.8° (c = 2 in Dimethylformamid)
/11 109847/1725
d) N^-4.4f-Dimethoxybenzhydryl~L-glutaminmethylester-hydrochlorid
23 g N-Carbobenzoxy-N -4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutaminmethylester
werden in einer Mischung aus Eisessig/Methanol· (1:1) gelöst und mit Pd-Katalysator
hydriert, +)und die Lösung gegen Thymolblau mit methanolischer Salzsäure titriert.
Im Vakuum wird das Lösungsmittelgemisch abdestilliert.
Der Rückstand wird in Methanol gelöst und an einer neutralen AlgOo-Säule chromatographiert.
Ausb. 11,8 g (= 70 % d.Th.) Umkristallisierbar aus Methanol/Äther, F.P. 182-183°
UIp2 * + 21,4° (c = 2, in Methanol).
e) N-Carbobenzoxy-O-tert.-butyl-L-tyrosyl-N -4.41-dimethoxybenzhydryl-L-glutamin-methylester
5,6 g N-Carbobenzoxy-O-tert.-butyl-L-tyrosindicyclohexylamin-salz
werden durch Verrühren bei 0° mit 2n Zitronensäure und Essigester in die
freie Säure überführt. Der Essigesterrückstand wird in 40 ml Methylencialorid gelöst. Dazu gibt
man 4,2 g Nw-4.4'-DimethOxybenzhydryl-L-glutaninmethylesterhydrochlorid,
kühlt auf -10 ab und gibt 1,4 ml Triäthylamin zu. Man läßt 10 Minuten rühren und gibt eine Lösung von 2.2 g Dicyclohexylcarbodiimid
in wenig Methylenchlorid zu. Man rührt nun noch einige Stunden bei 0 , stellt den
Ansatz über Nacht in den Eisschrank und destilliert anderntags das Methylenchlorid ab. Der Rückstand
wird mit Dimethylformamid verrührt, von Unlöslichem
+) Nach Beendigung der CO9-Entwicklung wird der Katalysator.,
abfiltriert Δ /
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wird abgesaugt und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird mit Methanol aufgekocht,
gekühlt und abgesaugt. Ausb. 5,9 g (80%d.Th.) F. P. 181-183°. Nach Umkristallisieren
aus Methanol:" F. P. 190-192°
22 ο
[oCJD = -12,1 (c = 2, in Dimethylformamid)
[oCJD = -12,1 (c = 2, in Dimethylformamid)
f) O-tert.-Butyl-L-tyrosy1-1^-4.4'-dimethoxybenzfe
hydryl-L-glutamin
6 g N-Carbobenzoxy-O-tert.-butyl-L-tyroxyl-N^-
4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutamin-methylester werden in ca. 40 ml Dioxan suspendiert. Dazu gibt
man 8.1 ml In NaOH und rührt etwa 2 Stunden bei Zimmertemperatur. Man neutralisiert mit ein paar
Tropfen 2n Zitronensäure und engt ein. Der Rückstand wird zwischen Essigester und 2n Zitronensäure
verteilt. Der Essigesterphase wird mit Wasser ein mal ausgeschüttelt, mit Natriumsulfat
getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird in Eisessig/Methanol (1:1) gelöst und katalytisch
P hydriert. Nachdem die Hydrierung beendet ist, wird
der Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum eingeengt und der Rückstand mit Essigester verrührt
und abgesaugt. Ausb. 4.6 g (= 95 % d.Th.). Läßt sich aus 70 %igem Alkohol Umkristallisieren. Es kristallisiert
als Hemihydrat aus. F.P. 174-177°
99
[<X]jJ = + 19.85 (c = 2, in Eisessig)
Die Substanz ist papierchromatographisch (Schleicher
u. Sehüll Nr. 2043 b) einheitlich : Rf = 0.949 in n-Butanol/Eisessig/Pyridin/Vt'asser (375:75:250:300);
Rf = 0.876 in n-Butanol/Eisessig/ttasser (4:1:5).
. ■' ' /13
109847/1725
g) L-Tyrosy1-L-glutamin
2 g 0-tert.-Butyl-Lr-tyrosyl-Nlp-4.4t-dimeth.oxybenzhydry
1--L-glutamin werden mit 2.5 ml Anisol und 20 ml Trifluoressigsäure 5 Minuten im Rückfluß
erhitzt. Anschließend wird die Trifluoressigsäure i. Vaku. eingeengt und der Rückstand
zwischen Wasser und Äther verteilt. Die wässrige Phase wird mit Lewatit IR 45 (Acetat-Form) gerührt,
bis sich ein pH von 4 eingestellt hat. Der Austauscher wird abfiltriert und das wässrige
Filtrat einge.engt. Ausb. 1 g (=95 % d.Th.). Die Substanz ist papierchromatographiscn rein.·
Rf = 0.471 in n-Butanol/Eisessig/Pyridin/Wasser
(375/75/250/300)
Rf = 0.091 in n-Butanol/Eisessig/Wasser (4:1:5)
Rf = 0.091 in n-Butanol/Eisessig/Wasser (4:1:5)
N-Carbobenzoxy- L- vaJji-L-glutaminyl-L- phenylalanin- methylester
a) N-Carbobenzoxy-Nw-4.4t-dimethoxybenzhydryl-L-glutaminp-n=itrophenylester
cd) 5.1 g (10 mMol) N-Carbobenzoxy-l·^u>-4. 4' -dimethoxybenzhydryl-L-glutamin
und 1.7 g p-Nitrophenol werden in 20 ml Dimethylformamid gelöst. Zu der
auf 0° abgekühlten Lösung gibt man 22 g Dicyclohexylcarbodiimid
und läßt 2 Std. bei 0° und 1 Std. bei Zimmertemperatur stehen, saugt den Niederschlag
ab und versetzt das Filtrat mit ca. 40 ml
/14 1 0 9847/1 72.5
567^768047
Wasser. Die sich ausscheidenden Kristalle werden abgesaugt und aus Alkohol umkristallisiert.
Ausb. 3.85 g (= 61 % d.Th.), F. P. 177-178° [cdρ2 = -10,8 (c = 1, in Dimethylformamid)
ß) 2 g (5 mMol) N-Carbobenzoxy-L-glutamin-p-nitrophenylester
werden in 25 ml Eisessig gelöst. Dazu gibt man 1,2 g 4.4'-Dimethoxybenzhydrol und
1 Tropfen konz. Schwefelsäure. Man läßt über Nacht bei Zimmertemperatur stehen, wobei sich
Kristalle abscheiden. Man verdünnt anderntags
mit etwa 30 ml Wasser und saugt den Kristallbrei
ab. Die Kristalle werden mit Alkohol aufgekocht und abgesaugt. Ausb. 2,8 g (= 90 % d.Th.), F.P.
175-178°.
b) N-Carbobenzoxy-NL<2-4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutaminyl-L-pheny!alanin-methylester
2.2 g (5 mSIol) N-Carbobenzoxy-L-glutaminyl-L-phenylalaninmethylester
werden in 25 ml Eisessig gelöst. Dazu gibt man 1.2 g 4.4'-Dimethoxybenzhydrol
und 1 Tropfen konz. Schwefelsäure. Man läßt über
^Beispiel 2 Nacht stehen und arbeitet wie unterVä) ß) auf. Ausb.
2.7 g (= 81 % d.Th.), F. P. 200-204°
22
Ip(Jj3 = -7.3 (c= 1, in Dimethylformamid)
Ip(Jj3 = -7.3 (c= 1, in Dimethylformamid)
Herstellung des als Ausgangsstoff verwendeten N^-Carbobenzoxy-L-glutaminyl-L-phenylalaninmethylesters:
10,8 g L-Phenylalaninmethylester-hydrochlorid werden
in 100 ml Tetrahydrofuran suspendiert. Man kühlt auf
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- 15 - Fw 567
0° und versetzt mit 6,8 ml Triäthylamin. Man rührt 10 Minuten und gibt dann eine Lösung von
20,1 g N -Carbobenzoxy-L-glutaiain-'l-nitrophenylester
in 100 ml Tetrahydrofuran/Dimethylformamid (9:1) zu. Nach 3 Tagen Stehen bei Zimmertemperatur
wird eingeengt und der Rückstand zwischen Essigester und Wasser verteilt. Die
Essigesterphase wird mit 2n Salzsäure, Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen.und eingeengt.
Der Rückstand wird aus Methanol/Wasser ™ (1:1) umkristallisiert. Ausb. 14.25 g (= 65 % d.Th.),
F.P. 181-182°
[cC]D = -10.45° (c = 2 in Dimethylformamid) ■ ·.- ·
[cC]D = -10.45° (c = 2 in Dimethylformamid) ■ ·.- ·
ß) 2.4 g L-Phenylalaninmethylester-hydrochlorid gibt
man in 20 ml Dimethylformamid. Dazu läßt man unter Rühren 1.4 ml Triäthylamin zutropfen. Man rührt
10 Minuten bei Zimmertemperatur und gibt dann eine Lösung von 6.3 g (10 mMol) N-Carbobenzoxy-Nw-4.4I-dimethoxybenzhydryl-L-glutamin-p-nitrophenylester
in Dimethylformamid zu und läßt mehrere Tage bei Zimmertemperatur stehen. Der Niederschlag wird ab- J
gesaugt und das FiI tr-at eingeengt. Der Rückstand
wird mit Methanol aufgekocht, gekühlt und abgesaugt. Ausb.: 5.05 g (= 76 % d.Th.), F.P. 201-204°.
c) N-Carbobenzoxy-lr-valyl-]S-4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutaminyl-L-phenylalanin-methylester
2.16 g (4 mMol) N-Carbobenzoxy-L-valyl-L-glutaminyl-L-phenyl-alaninmethylester
werden in 20 ml Eisessig gelöst. Dazu gibt man 1 Tropfen konz. Schwefelsäure
und läßt über Nacht bei Zimmertemperatur stehen. Anderntags wird wie bei Beispiel 2 a) ß) aufgearbeitet.
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- 16 - Fw 5676
Ausb. 2.65 g (= 86.4 % d.Th.), F. P. 242-245°,
[oC]" = -8,0 (c = 1, in Dimethylformamid)
Herstellung des als Ausgangsstoff verwendeten N -Carbobenzoxy-L-valyl-L-glutaminyl-L-phenylalanin-methylesters:
8.8 g N=4- Carbobenzoxy-L-glutaminyl-l-phenylalanin-methylester
werden in 30 ml Eisessig gelöst. Dazu gibt man 30 ml HBr/Eisessig und läßt 1 Std. bei Zimmertemperatur stehen. Mit Äther
wird ein Öl gefällt, das mit Äther verrieben wird und am Hochvakuum getrocknet wird..Die entstandene
amorphe Masse gibt man in Methylenchlorid und versetä
bei 0° mit 2.8 ml Triäthylamin und einer Lösung von N-Carbobenzoxy-L-valin-anhydrid (hergestellt
aus 10 g Carbobenzoxy-1-valin und Dicyclohexylcarbodiimid
in Methylenchlorid). Man läßt über Nacht im Eisschrank stehen und saugt den ausgefallenen
Niederschlag ab. Mit Methylenchlorid wird nachgewaschen. Der Niederschlag wird aus
Methanol umkristallisiert. Ausb. 2,9 g.F.P. 235-236°
= -4 (c = 1 in Dimethylformanid)
d) N-Carbobenzoxy-L-valyl-Ir-glutaminyl-L-phenylalaninmethylester
385 mg (0,5 mMol) N-Carbobenzoxy-L-valyl-No3-4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutaminyl-L-phenylalaninmethylester
werden mit 0,3 ml Anisol in 3 ml Trifluoressigsäure gelöst. Man läßt 3 Std. bei Zimmertemperatur
stehen und engt bei Zimmertemperatur i.Vak. ein. Der Rückstand wird mit Äther verrieben, abge-
/17 109847/1725
17 - · Fw 5676
saugt und gut mit Äther gewaschen. Ausb. 265 mg
98
22
22
(= 98 % d.Th. ), F. P-. 238-239°
D = -4.0 (c = 1 in Dimethylformamid)
Beispiel 3
N-Carbobenzoxy-L-asparaginyl-L-tyrosin-methylester
a) N-Carbobenzoxy-NvP-4. 4'-dimethoxybenzhydryl-L-asparaginy1-0-tert.-butyl-L-tyrosin-methylester
24.5 g (50 mMol) N-Carbobenzoxy-1^-4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-asparagin
werden in 150 ml Dimethylformamid gelöst. Dazu gibt man 14.5 g O-tert.-Butyl-L-
o tyrosin-methylester-hydrochlorid, kühlt auf -10 ab, gibt 6.8 ml Triäthylamin unter Rühren zu, beläßt
10 Minuten bei dieser Temperatur und gibt zum Schluß eine Lösung von 11 g Dicyclohexylca.i~bodiimid in wenig
Dimethylformamid zur Reaktionsmischung. Man läßt einige Stunden bei Eiskühlung rühren und stellt über Nacht in
den Eisschrank. Anderntags wird der Niederschlag abgesaugt und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wird
mit Methanol aufgekocht, gekühlt und abgesaugt.
Ausbeute: 28,05 g (= 77 % d.Th.), F.P. 203-209°
22
[o6]D = + 3.65 (c = 2, in Dimethylformamid)
[o6]D = + 3.65 (c = 2, in Dimethylformamid)
b) N-Carbobenzoxy-L-asparaginyl-L-tyrosin-methylester
1.45 g (2,02 mMol) N-Carbobenzoxy-ΝΛ-4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-asparaginy
1-0- tert. -butyl- L- ty rosinmethylester werden mit 1 ml Anisol in 10 ml Trifluor-
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- 18 - Fv/ 5676
asparagins:
essigsaure gelöst. Nach dreistündigem Stehen bei Zimmertemperatur wird bei Zimmertemperatur
im Vakuum eingeengt und der Rückstand gut mit Äther verrieben, abgesaugt und mit Äther gewaschen.
Ausb. 846 mg (= 94 % d.Th.) F. P. 197-199° iödß2 = + 7.75° (c = 1 in Dimethylformamid)
Herstellung des als Ausgangsstoff verwendeten N-Carbobenzoxy-N -4.4'-dimethoxybenzhydryi-L-
27 g N-Carbobenzoxy-L-asparagin (0.1 Mol) werden in
300 ml Eisessig heiß gelöst und wie bei Beispiel 1 b) oC) umgesetzt. Ausb. 47.5 g (= 96,5 % d.Th.),
F.P. 176-130°
[oUß - + 2,425 (c = 2, in Dimethylformamid)
[oUß - + 2,425 (c = 2, in Dimethylformamid)
N^-4.4'-Dimethoxybenzhydryl-L-asparagin-methylester-hydrochlorid
a) N^-4.4f-Dimethoxybenzhydryl-L-asparagin
1,3 g Asparagin (10 mMol) und 2.4 g 4.4'-Dimethoxybenzhydrol
(10 mMol) gibt man in 50 irfl Eisessig. Dazu
gibt man bei Zimmertemperatur 0.54 ml konz. Schwefelsäure
und rührt bis alles gelöst ist (etwa 2 Stunden). Danach gibt man 2 g wasserfreies Natriumacetat zu und
engt ein. Der Rückstand wird zwischen Natriumacetatlösung und Essigester verteilt. Es fällt ein gallertiger
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Niederschlag aus, der abgesaugt und mit T/asser und Essigester gewaschen wird. Der gallertige Rückstand
wird aus Vfasser umkristallisiert. Ausb. 2.1 g (= 58,6 %
d. Th.)
99 η
= + 9.75 (c - 2, in Eisessig) F.P. 226-230
b) 49,2 g N-Carbobenzoxy-1^-4,4'-dimethoxybenzhydryl-L-asparagin
werden in 400 ml Eisessig suspendiert und
mit Pd-Katalysator versetzt. In die Suspension wird ^
unter rühren so lange Viasserstoff eingeleitet bis alles gelöst ist und kein CO0 mehr entsteht. Der Katalysator
wird abgesaugt und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wird mit Natriumacetatlösung verrieben,' absaugt,
gut mit Wasser gewaschen und über P0Oi- getrocknet.
Ausb. 33,6 g (= 94 % d.Th.)
c) N-Carbobenzoxy-Νυ3-4. 4'-dimethoxybenzhydryl-L-asparaginmethylester
.
4,05 g N-Carbobenzo:cy-Nl^-4. 4'-dir.iethoxybenzhydryl-L-asparagin
werden wie bei Beispiel 1 c) mit Diazomethan verestert. Ausb. nach ümkristallisation aus Essigester/ ™
Petroläther: 3,4 g (= 82 % d.Th.) F.P. 188-190° [oÜp2 = -4.35° (c = 2 in Dimethylformamid)
d) Nu-4.4'-Dimethoxybenzhydryl-L-asparagin-methylesterhydrochlorid
\P
15.3 g N-Carbobenzoxy-N -4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-asparagin-methylester werden wie bei Beispiel 1 d) hydriert. Ausb. 10 g (= 81 %) F.P. 186-188° 99
15.3 g N-Carbobenzoxy-N -4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-asparagin-methylester werden wie bei Beispiel 1 d) hydriert. Ausb. 10 g (= 81 %) F.P. 186-188° 99
[ jJ = + 23.1 (c = 2 in Methanol)
/20
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o-Nitrosulfenyl-Nv^-4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-asparagincyclohexylamin-salz
33.6 g NjD-4.4t-Dimethoxybenzhydryl-Ir-asparagin werden
in 46 ml 2n Natronlauge und 116 ml Dioxan gelöst. Unter Einhaltung von pH 8 gibt man portionsweise 19,6 g
o-Nitrosulfenylchlorid und 46 ml 2n Natronlauge zu.
Anschließend wird mit 930 ml Wasser verdünnt, mit Zitronensäure angesäuert (pH 3) und mit Essigester die wässrige Phase
zwei mal ausgeschüttelt. Der Essigester wird mit Natrium- . sulfat getrocknet und mit Cyclohexylamin"versetzt. Es fällt
ein gelber Kristallbrei aus, der abgesaugt und mit Essigester gewaschen wird. Ausbeute 47,5 g (84.6 % d.Th.),
F. P. 182-184°
N-Carbobenzoxy-Nvli-4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutaminyl-L-leucin-methylester
5,1 g N-Carbobenzoxy-NuJ-4.4'-dimethoxybenzhydryl-L-glutamin
werden in 30 ml absoluten Tetrahydrofuran gelöst. Dazu gibt man 1,7 g L-Leucinnethylester-hydrochlorid und unter Rühren
1,4 ml Triäthylamin. Innerhalb einer Stunde läßt man bei Zimmertemperatur unter Rühren 1,2 g Methyläthinyldiäthylainin,
gelöst in 10 ml Tetrahydrofuran zutropfen. Es entsteht bald ein dicker Brei, der mit Tetrahydrofuran verdünnt vird.
Nachdem alles eingetropft ist, läßt man 30 Minuten nachrühren, engt ein, verteilt den Rückstand zwischen Wasser
und viel warmen Essigester, schüttelt die Essigesterphase
mit 2n Zitronensäure, Natriumbicarbonatlösung und Wasser
aus, trocknet mit Natriumsulfat und engt ein. Der Rückstand.
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- 21 - Pw 5676
wird mit Petroläther verrieben. Ausb. 5,5 g (=87 % d.Th.), F.P. 169-171°. Nach Ümkristallisation aus
Essigester/Petroläther: Ausb. 4.4 g (= 70 % d.Th.), F.P. 174-178° *
Essigester/Petroläther: Ausb. 4.4 g (= 70 % d.Th.), F.P. 174-178° *
[eö]D = -10,0 (c = 1, in Dimethylformamid).
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Claims (1)
-
P a t e η t a η S P r U C h e I I Π Verfahren zur Herstellung von asparagin- und glutamin-haltiger Peptide, dadurch gekennzeichnet, daß man Asparagin und
Glutamin oder deren säurestabilen Derivate der
allgemeinen Formel (I)G- (A)x-NH-CH-CO- (B) -OR■2'n(0H0) CO(D. .. . . ._^ einen unter den Bedingungen der Her-%— —<■..- . ·—■ ■ '■■» «Qder ein Protonstellung säurestabilen Acylrest*y<£* und B gleiche oder verschiedene Aminosäurereste oder Peptidbruchstücke und R einen Alkyl-, Aralkyl- oder Arylrest oder ein Proton bedeuten, χ und y für die Zahl 0 oder eine ganze Zahl und η für die Zahlen 1 und 2 stehen, mit 4,4'-Dimethoxybenzhydrol in Eisessig in Gegenwart saurer Katalysatoren zu den Verbindungen der allgemeinen
Formel (II)G- (A)-NH-CH-CO- (B)-OR
χ i yH3C0\\(II) bzw. (Ha)109847/1725/23- 23 - Fw 5676wobei G, A, B, R, χ, y und η die oben genannte Bedeutung haben, umsetzt, diese Derivate nach den allgemeinen Methoden der Peptidchemie in andere Derivate der allgemeinen Formel '(1'Ia), wobei sich (Ha) hinsichtlich A und/oder B und/oder χ bzw. y von den Verbindungen der Formel II unterscheidet,' überführt und gegebenenfalls anschließend die 4,4'-Dimethoxybenzhydrylgruppe durch Behandeln mittels starker organischer Säuren oder mittels Llineralsäuren abspaltet.2) Verbindungen der allgemeinen FormelNHR1
:-NH-CO- (CH0) -CH-COORNHR1I 1 io) -CH-CCin der η die Zahlen 1 oder 2, R Y/asserstoff oder die Methylgruppe und R1 Wasserstoff oder den Carbobenzoxyrest bedeuten, ,Yv'obei, falls R1 Vi'asserstoff und R die Methylgruppe bedeuten, die Verbindungen in Form ihrer Salze mit starken Säuren vorliegen.109.847/1.725
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Cited By (1)
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EP0394194A1 (de) * | 1989-04-17 | 1990-10-24 | Calbiochem-Novabiochem Ag | Geschützte Aminosäuren und Verfahren zu ihrer Herstellung |
US5324833A (en) * | 1989-04-17 | 1994-06-28 | Novabiochem Ag | Protected amino acids and process for the preparation thereof |
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NL168501B (nl) | 1981-11-16 |
CH514548A (de) | 1971-10-31 |
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