DE1598781A1 - Farbvergleichsskala - Google Patents
FarbvergleichsskalaInfo
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Description
E. M e r c k ( früher: M 68 752 IXb/421)
Aktiengesellschaft
Darmstadt
Farbvergleichsskala
Farbvergleichsskalen für die Auswertung von Farbreaktionen
sind auf vielen Anwendungsgebieten von großer Bedeutung. Besonders wichtig ist beispielsweise die Verwendung von Farbvergleichsskalen
für die Bestimmung von Indikator- und Reagenzienfärben. Hierbei wird beispielsweise ein Indikator- bzw. ein
Reagenzpapier in eine Lösung-der zu prüfenden Substanz getaucht, der dadurch hervorgerufene Farbton mit den Farbstufen
einer auf die betreffende Farbreaktion geeichte Farbskala verglichen und der dem gebildeten Farbton entsprechende Eichwert
aus der Skala abgelesen. Es ist bekannt, daß auf diese Weise z. B. der pH-Wert einer Lösung gestimmt werden kann.
Jedoch bringt sowohl die Herstellung als auch die Anwendung der bisher bekannten Vergleichsskalen für die Auswertung von
Farbreaktionen Schwierigkeiten mit sich. Bei den bekannten gedruckten Skalen wirkt sich vor allem nachteilig aus, daß
sie aus einzelnen Farbstufen zusammengesetzt sind und demnach die Zuordnung von Farbtönen, die zwischen diesen Stufen
liegen, nicht exakt möglich ist. Die absolute Genauigkeit
der Ablesung ist zudem noch von der Qualität des Farbdrucks abhängig. Hieraus ergeben sich leicht systematische Fehler
bei der Auswertung.
Ein weiterer Kachteil für die Herstellung der bisher angewandten auf einem Träger aufgedruckten diskontinuierlichen
Farbvergleichsskalen, wie sie beispielsweise für die · Bestimmung der Farbtöne von pH-Indikatoren verwendet werden,
besteht darin, daß die Eichfarben für die·einzelnen Farbatufen
vorgegeben sind und demnach auch jede einzelne Farbstufe mit dem jeweiligen Muster im Farbton abgestimmt
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werden muß. Die Anwendung des an sich technisch einfach zu handhabenden Vierfarbendrucks ist damit für den Druck
der bisher üblichen diskontinuierlichen Farbskalen schlecht möglich, da die Anfertigung der entsprechenden Zinkraster
zu schwierig ist. Diese Farbvergleichsskalen werden daher
in der Praxis mit dem aufwendigen Vollton-Druckverfahren hergestellt. Hierbei müssen die Druckfarben für jeden
einzelnen Farbton der Skala getrennt gemischt werden. Die Feinabstimmung der Farbtöne ist bei diesem Verfahren
auch für geübte Farbdrucker außerordentlich schwierig. Für jeden einzelnen Farbton der Skala ist ein Durchlauf
der Träger, beispielsweise der Papiere, durch die Druckmaschine erforderlich, wobei jeweils.in Bezug auf Sattheit
nochmals abgestimmt werden muß. Falls ein Farbwert schlecht ausfällt, muß die gesamte Charge verworfen werden. Jede
Neuauflage der gedruckten Farbskala erfordert die erneute Durchführung praktisch aller Arbeitsgänge.
Es wurde nun gefunden, daß die im folgenden beschriebene kontinuierliche Farbsiala im Vergleich zu den bekannten
auf Träger gedruckten diskontinuierlichen Farbskalen einfacher in der Herstellung und in der Anwendung is±fi
Gegenstand der vorliegenden Anmeldung ist eine Farbvergleichsskala
für die. Auswertung von Farbreaktionen, die durch ein Farbband gekennzeichnet ist, das auf einen Träger
nach dem Raster-Druckverfahren aufgedruckt ist, alle bei der jeweiligen Farbreaktion auftretenden Farbnuancen in
kontinuierlichem Übergang enthält und erst nach dem Aufbringen
auf den Trüger geeicht wird. ,
Wegen der erst nach dem Aufbringen des Farbbandes auf den Träger durchgeführten Eichung kann das Farbband nach der
Erfindung mit dem technisch einfach zu handhabenden Vierfarben-Rasterdruckverfahren
gedruckt werden. Da hierbei nur die Grundfarben verwendet werden, entfällt ein Mischen
einzelner Farbtöne durch den Drucker, wie es für die Herstellung der bisher angewandten diskontinuierlichen
Skalen erforderlich war. Beim jewe-ils einmaligen Aufdrucken "
der Grundfarben Blau. Rot, Gelb und gegebenenfalls ..; — *
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original
Schwarz sind insgesamt für das ganze Farbband lediglich 3 bis
Abstimmungen auf der Druckmaschine in Bezug auf Sattheit notwendig.
Sofern an einer Stelle der gedruckten Skala eine Farbe beim Druck versehentlich zu stark aufgebracht wurde,
kann dieser Fehler in der Regel bei der nachträglichen Eichung wieder korrigiert werden.
Ferner ist noch von Vorteil, daß bei Anwendung des Vierfarben-Rasterdruckverfahrens
für die Herstellung der Farbskala nach der Erfindung bei Neuauflage das Farbband in der gleichen Qualität
mit den für die Erstauflage hergestellten Zinkrastern ohne '
große Vorbereitungen gedruckt werden kann.
Bei Anwendung der neuen kontinuierlichen Farbskala nach der Erfindung wird eine größere Genauigkeit und eine bessere Reproduzierbarkeit
in der Auswertung von Farbreaktionen erzielt. So lassen sich Farbtöne, die zwischen zwei aufeinanderfolgenden"
Farbstufen einer diskontinuierlichen Farbskala liegen, in dem kontinuierlichen Farbband nach der Erfindung eindeutig einem
Zwischenwert zuordnen. Durch die nachträgliche Eichung des Farbbandes ergibt sich außerdem auch eine größere absolute
Genauigkeit für die -ablesung.
Außerdem ist von Vorteil, daß beim Druck der Farbskala nach
der Erfindung die einzelnen Farbnuancen in beliebigen Bereichen mehr oder weniger breit angelegt werden können. Damit läßt sich
auch eine Farbskala herateilen, die nicht linear geeicht ist, d. h. deren Eichstriche in gewissen Bereichen -auseinandergerückt
sind,- in den anderen Bereichen enger zusammenliegen. Eine derartige Eichung Mete;t z. B. Vorteile bei Farbskalen,
die zur Auswertung von Farbreaktionen diagnostischer Test- · papiere dienen. In den diagnostisch interessanten Bereichen
werden hierbei die Farbtöne breit angelegt, so daß die Eichstriche in diesen Bereichen größere Abstände haben und
damit eine genaue Ablesung ermöglichen, während in den Farbbereiohen der Skala, in denen nur eine grobe
BAD
#09044/1378
Abschätzung der Farbwerte erforderlich ist, die Eichstriche
eng zusammengerückt werden können.
Das Farbband nach der Erfindung wird mit dem Raster-Druckverfahren
auf den Träger gebracht. Als Träger sind feste bedruckbare Stoffe mit glatter Cberfläche, vorzugsweise
Papier, Karton oder Folien aus geeigneten synthetischen Polymeren, z. B. bedruckbaren gegebenenfalls substituierten
polymeren Kohlenwasserstoffen wie Polyvinylchlorid, Polyvinylidenchlorid, Polystyrol oder Polyamiden
oder Polycarbonaten oder Harnstoffpreßmassen verwendbar.
Vorzugsweise wird die Farbskala nach der Erfindung auf
Papier oder Karton oder ei.nen anderen geeigneten undurchsichtigen
Träger gedruckt. Die Farbskala dient vorzugsweise der Auswertung von Farbreaktionen, insbesondere Reagenzien
- und Indikatorfarbreaktionen, die auf Papier hervorgerufen wurden. Jedoch ist auch die Auswertung entsprechender
Farbreaktionen, die in einem durchsichtigen Medium, z. B. in Lösung auftreten, mit Hilfe der erfindungsgemäßen
Farbvergeleichsskala möglich. Selbstverständlich kann die Farbskala auch auf eine durchsichtige Folie, beispielsweise
auf eine der oben aufgeführten Folien, gedruckt werden,
die für einen Vergleich gegebenenfalls auf einer undurchsichtigen weißen Unterlage, z. B. auf Papier angebracht
oder aufgelegt werden.
Besonders bewährt haben sich Farbskalen nach der Erfindung, die Rechteck-Form ( etwa 0,3 bis 3» vorzugsweise 1 bis 2 cm
Höhe und etwa 5 bis 3o, vorzugsweise 15 bis 2o cm Länge) oder Ringform ( etwa 0,3 bis 3, vorzugsweise 1 bis 2 cm
Radiendifferenz und 5-30, vorzugsweise 15-2o cm mittlerer Ringumfang) aufweisen.
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Die für den Druck erforderlichen Raster werden hergestellt,
indem man den Anteil der Grundfarben in einer Reihe vorgegebener Eichfarben bestimmt, und die erhaltenen Grundfarbenanteile
anschließend in entsprechen kontinuierliche ineinander übergehende Rasterwerte überträgt.
Der Druck des Farbbandes mit dem Rasterdruckverfahren erfolgt in üblicher Weise. So kann man das erfindungsgemäße
Farbband nach dem Hoch-,Tief- oder Flachdruckverfahren drucken, wie es beispielsweise in dem von
R. Russ und A. Köpf 1949 herausgegehenen Handbuch der Reproduktionstechnik, Polygraph Verlag GmbH., Frankfurt/M.,
Band III, Seite 62 bis 1963 und Band IV beschrieben ist. Es hat sich herausgestellt, daß für die Auswertung
von Farbreaktionen besonders günstig eine Farbskala nach der Erfindung geeignet* ist, die im Rasterdruckverfahren
wie folgt hergestellt wird:
Zunächst wird eine Reihe von Eichfarben mit einer Anzahl der zu prüfenden Stoffe in verschiedenen Konzentrationen
erzeugt, z. B* durch Befeuchten von Reagenzpapier mit Lösungen verschiedener Konzentrationen der zu prüfenden
Substanzen. Für jede Eichfarbe wird der Anteil der Grundfarben mit Hilfe von im Handel befindlichen Farbwerttabellen
bzw. Farbmischtafeln festgestellt. ( In einer Farbwerttabelle
bzw. Farbmischtafel sind für größenordnungsgemäß 1000 Mischfarben die jeweiligen Anteile an Grundfarben
zusammengestellt). Inschließend werden die in der Farbwerttabelle
bzw. Farbwtrtmischtafel aufgeführten Grundfarben
in Form von Lösungen mit Hilfe eines Sprays auf eine Unterlage, beispielsweise einen Bogen Papier nacheinander so
aufgesprüht, daß die Anteile jeder Grundfarbe bei den Eichwerten den aus der Farbanalyse vorgegebenen Anteilen
entsprechen und daß die einzeienen Farbtöne der Eichwerte
kontinuierlich ineinander übergehen,
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Gegebenenfalls .werden danach die Farbtöne durch
Versprühen von hochverdiinnten Lösungen der Grundfarben vollends an die Eichfarben angeglichen. Das entstehende
Farbband setzt sich aus zahlreichen kleinen Pu nkten der verwendeten Grundfarben zusemmen. Dieser Effekt tritt
jedoch in der fertig gedruckten Farbskala nicht mehr in Erscheinung, da die Vorlage zur Erstellung der Zinkplatten
für das Rasterdruckverfahren photographisch verkleinert
SO
wird. Anhand der angefertigten Vorlage werden dann in an sich üblicher Weise photographisch die entsprechenden
Metallraster für den Druck des Farbbanaes angefertigt, wie es beispielsweise in dem von R. Russ und A. Köpf
herausgegebenen Handbuch der Reproduktionstechnik, Band II, Seiten 121-162 und 176-262 beschrieben ist.
Nach dem Druck wird das Farbband durch Vergleich mit den vorgegebenen Eichfarben und Eintragen der Markierungsstriche
mit den entsprechenden Konzentrationsgaben der zu prüfenden Substanz an den zugehörigen Farbtönen der Skala geeicht.
Die Übertragung der nach der Farbanalyse wie oben angegeben-
in den vorgegebenen Eichfarben bestimmten Anteile der Grundfarben in entsprechende Rasterwerte, kann auch auf
andere geeignete Weise erfolgen. So ist es beispielsweise möglich, eine Vorlage für die Herstellung der Raster dadurch
herzustellen, daß man die Grundfarben auf eine unterlage, z. B. einen Bogen Papier, in den aus den Eichfarben bestimmten
Anteilen aufpinselt und die einzelnen Farbstufen kontinuierlich ineinander verlaufen läßt. Durch anschließendes
gegebenenfalls wiederholtes Aufpinseln verdünnter lösungen der Grundfarben können die Farbtöne dec Farbbandes vollends
an die Eichfarben angeglichen werden. Die Herstellung der Raster nach der so erhaltenen Vorlage "erfolgt in an sich
Üblicher Weise.
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Es ist auch möglich, die nach der Farbanalyse der Eichfarben bestimmten Anteile an Grundfarben für die
Vergleichsskala direkt, ohne Herstellung eines Musterfarbbandes in entsprechende Basterwerte zu übertragen.
Man kann hierzu beispielsweise so vorgehen, daß für jede Grundfarbe ein vergrößertes Basterbild aufgezeichnet und
anschließend photographisch verkleinert und auf die Zinkplatte übertragen wird. Pur jede Grundfarbe wird bei
dieser Ausführungsform auf einer hellen Unterlage, beispielsweise auf einem Papier von geeigneter Größe,
(z.B. 5ox 3oo cm) ein Gitter aus senkrechten und " waagerechten Linien in geeignetem Abstand, z. B. im
Abstand von 2mm, aufgezeichnet. Die Strichdicke wird hierbei kontinuierlich so geändert, daß die entstehenden
Karos eine Fläche besitzen, die dem jeweiligen relativen Anteil der Grundfarbe an dejr betreffenden Stelle der
Vorlage entspricht. Durch photographische Verkleinerung
in geeignetem Verhältnis,-beispielsweise im Verhältnis 1 : 50 erhält man den Easter, der für die Zinkplattenätzung
in an sich bekannter Weise verwendet wird.
In einer anderen Ausführungsform werden die verschieden starken Basterpunkte für jede Grundfarbe wie folgt
hergestellt: Man legt eine normale Rasterplatte ( d. h. eine der im Handel befindlichen durchsichtigen Basterfolien
mit 20 bis 80 Basterpunkten pro cm Länge) auf einen lichtempfindlichen Film, deckt mit einer lichtdurchlässigen
Platte ab und belichtet. Dann wird die Abdeckplatte kontinuierlich mit unterschiedlicher Geschwindigkeit
entfernt, so daß die einzelnen Abschnitte verschieden lang belichtet und dadurch nach der folgenden Entwicklung
des Films verschieden stark geschwärzt sind. Der entwickelte Film wird dann in üblicher tföise für die Herstellung
der Metallraster weiterverwendet.
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Die'Farbskala nach der Erfindung wird für die Auswertung
.von beliebigen Farbreaktionen, wie z. B. in der Firmenschrift
" Änfärbereagenzien für Dünnschicht-und Papier
-Chromatographie" (1961) der Fa.E.Merck AG Darmstadt
beschrieben sind, angewandt. So ist es z. B. möglich, mit einem entsprechend geeichten Farbband Farbreaktionen
auszuwerten, mit deren Hilfe die Konzentration von anorganisch en Substanzen ( bzw. Ionen) bestimmt wird, z. B.
können folgende Reaktionen ausgewertet werden:
Farbänderung von pH-Indikatoren ( z. B. Thymolblau, Naphtholphtalein, Phenolrot, Methylorange 3,5-Dinit.robenzolsulfonsaure-(i)-2-azo-4-naphtol-(1),
ß-Naphtolviolett) zur Mess ung des pH.
Farbänderung von Redoxindikatoren ( z. B. Kaliumjodid/Starke,
Perox^dase/Anisidin, Tetrazolsalze z. B. 3~Z.5,5-Dimethyl-
-thiazolyl-(2)_7™2,5-diphenyltetrazoliumbromid, oder
leukofarbstoffe) zur Messung von oxydierenden bzw. reduzierenden Verbindungen ( z. B. von HpOp).
Farbänderung von Gruppenreagenzien, z. B. Ninhydrin
für die Messung von Aminosäuren und primären .aminen,
Dinitrophenylhydrazin für die Messung von Ketonen od€r Benzidin und Hatriummetaperjodat für Bestimmung mehrwertiger
Alkohole ( z. B. von Zuckern). In diesen Fällen ist eine Farbvergleichsskala besonders wichtig für ,die halbquantitative
Auswertung von Chromatogrammen.
Farbänderung von unspezifischen Farbstoffen mit einem »
Reaktionspartner einer spezifischen Reaktion, z. B. Glucose-Bestimmung mit Glucoseoxydase,. Peroxydase und
Dianisidin; Milchsäure-Nachweis mit Lactatdehydrogenase, Nicotinamidadenindinucleotid (NAD), Phenezinmethosulfat
und Tetrazolsalzen.
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Farbänderung an spezifischen Reagenzien, ζ. B. Cyanoferrat
(II) fur Fe (III)-Ionen.
Besonders geeignet ist eine Farbskala nach der Erfindung zur Auswertung von Färb änderung en v.o.n Indikatorgemischen,
insbesondere von pH-Indikatorgemischen, beispielsweise a-Naphtolphtalein/Phenolrot oder Hexamethoxyrot/Methylrot
Kongorot/Phenolrot/N&phtolphtalein/Thymolphtalein/Nitramin
oder anderen Mischindikatoren, wie sie z. B. im Biochemischen Taschenbuch, Springer-Verlag, Berlin, Band II,
Seite 109 (1964) angegeben sind.
Die Eichung der Skala erfolgt zweckmäßigerweise, indem an
den Markierungsstrichen die Konzentrationen der die Farbreaktion· hervorgerufenen Verbindungen eingetragen werden.
So wird beispielsweise eine'Farbskala zur Auswertung der
Farbtönungen eines pH-Indikators durch Eintragen der pH-Werte aufgrund der vorgegebenen Eichfarben an den Markierungsstrichen in Abständen von beispielsweise 0,2 pH-Einheiten
geeicht.
Besonders bewährt hat sich eine Ausführungsform der Farbskala
nach der Erfindung, die anhand der Geschwindigkeit
der durch eine Mischung von Acet-ylcholin bzw. einem
Acetyrcholinsalz mit dem Enzym Cholinesterase in Gegenwart
des Indikatorgemiechs Phenolrot/Naphtolphtalein verursachten Farbänderung geeicht wurde. An den Markierungsstrichen der Skala wird hierbei die jeweilige Konzentration
an Cholinesterase eingetragen, die der Freisetzung einerφ
bestimmten Essigsäuremenge pro Zeiteinheit entspricht
und damit verschiedene pH-iiferte und entsprechend unterschiedliche
Indikatorfarbtöne hervorruft. Die Farbskala enthält in diesem Fäll.ineinander übergehende Farbtöne von
Violett Über Hot und Orange bis Hellöelb.
- 1o -
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Anhand einer derart geeichten Farbskala kann der Cholinesterasegehalt im Serum bzw. Plasma aufgrund der
in einem Gemisch aus Phenolrot/Naphtolphtalein und Acetylcholin bzw. einem Acetylcholinsalz hervorgerufenen
Farbtönung mit großer Genauigkeit bestimmt werden. Eine Farbskala, die sichere Ergebnisse bei der Auswertung
dieser Farbreaktionen liefert, ist im vorliegenden Fall besonders wichtig, da die Cholinesterasekonzentration des
Blutplasmas bei gewissen Krankheiten für die Diagnose herangezogen wird und falsche Werte Fehldiagnosen
nach sich ziehen können.
Es ist auch möglich, die Farbskala aufgrund anderer als der oben aufgeführten Parameter zu eichen, z. B. nach der
Temperatur, sofern temperaturabhängige Farbreaktionen ausgewertet werden sollen. So kann man beispielsweise,
eine entsprechend geeichte Farbskala nach der vorliegenden Erfindung für die Auswertung der Verfärbung von temperaturanzsigenden
Farbanstrichen, beispielsweise von reversiblen temperaturangebenden Quecksilberverbindungen wie
Hg(HgJ.) bzw. von irreversiblen temperaturanzeigenden Verbindungen wie /Cr(HH5)5JJ(P2G7U, NH4VO5 für die Kessung
der Oberflächentemperatur, z. B. bei der Verschweißung von Kunststoffen oder bai der Kontrolle der Temperatur von
Maschinenteilen verwenden.
Die hierfür erforderliche Farbvergleichsskala wird erhalten,
indem man nach einer der oben beschriebenen Ausführungsformen
Raster hergestellt werden, welche den 4-Farbdruek von %
verschiedenen Eichtamperaturen entsprechenden Farbtöne in
kontinuierlichem Übergang ermöglichen. Das gedruckte Farbband wird nach Vergleich mit den bei den Eichtemperaturen
erzeugten Farbnuancen geeicht, indem Markierungsstriche
und die betreffenden Temperaturen an den entsprechenden Stellen auf das Farbband gedruckt werden.
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Farbvergleichsskala für die Bestimmung von pH-Werten
zwischen etwa 6 bis 9 unter Verwendung von Phenolrot/Naphtolphtalein ale Indikator
a) Herstellung und Analyse der Eichfarben für die Druckvorlage der Farbskala
Zur Herstellung der Eichfarben wird jeweils ein Indikatorpapierstreifen ( hergestellt durch Eintauchen
von Schleicher & Schüll-Papier 2043 b in eine Lösung
von 100 mg Phenolrot und 1C0 mg a-Haphtolphtalein
in 100 ml Methanol und anschließend Trocknen) mit einer Pufferlösung, z. B. einer Pufferlösung nach Sörensen (hergestellt
z.B. nach Angaben der Firmenschrift "Puffersubstanzen,
Pufferlösungen, Puffertitrisole®", Seite 7 und 8, 1965 der
E. Merck AG, Dannstadt), die einen der in der nachstehenden Tabelle genannten pH-Werte besitzen, getränkt.
der.
Pur Jeden auf den Indikatorstreifen gebildeten Farbtöne wird der Anteil der Grundfarben durch Vergleich mit dem im Handel befindlichen Farbmeßbogen der Firma Käst & Ehinger, Stuttgart-Feuerbach, bestimmt. Die bei den verschiedenen pH-Werten gebildeten Farbtöne enthalten demnach die folgenden Anteile an Grundfarben:
Pur Jeden auf den Indikatorstreifen gebildeten Farbtöne wird der Anteil der Grundfarben durch Vergleich mit dem im Handel befindlichen Farbmeßbogen der Firma Käst & Ehinger, Stuttgart-Feuerbach, bestimmt. Die bei den verschiedenen pH-Werten gebildeten Farbtöne enthalten demnach die folgenden Anteile an Grundfarben:
pH | Kot | Gelb | Blau | Schwarz |
j,8 | o, 20 | 1,oo | O ,OO | 0,00 |
6,1 | o,32 | 1,oo | ο,οο | ο,οο |
6,4 | o,48 | o*96 | ο,οο | 0,00 |
6,7 | o,64 | 0,88 | o,o4 | ο,οο |
fO | o,So | ο ,72 | o,o8 | ο,οο |
,3 | o,56 | o,12 | ο,οο | |
6 | o,96 . | o,4o | o,2o | 0,00 |
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- 12 -
■ta* ■ -
Rot | Gelb | Blau | Schwarz | |
PH | 1,00 | o,28 | o,28 | 0,00 |
7,9 | 1,oq | o,16 | o,4o | 0,00 |
8,2 | 1,00 | o,o8 | o,52 | 0,00 |
8,5 | 1 ,oo | o,o4 | o,64 | 0,00 |
8,8 | 1 ,oo | 0,00 | o,76 | 0,00 |
9,1 |
Die obigen Werte wurden durch Mittelbildung verschiedener Messungen und Auf- bzw. Abrunden auf ganze
Vielfache von o,o4 erhalten.
Die so bestimmten Itensitäten der einzelnen Grundfarben werden graphisch in Abhängigkeit von pH aufgetragen,
wobei die pH-Koordinate zusätzlich mit der der gewünschten Vorlage entsprechenden Längenskala ( im vorliegenden
Fall: 1 cm auf der x-Achse - 0,2 pH-Stufen, entsprechend 5 cm Farbbandvorlage) versehen wird. Man
erhält hierbei die in der Abbildung 1 dargestellten Kurven.
b) Herstellung der Druckvorlage
Die Vorlage für den Druck des Farbbandes wird anhand der nach a) erhaltenen Kurven wie folgt hergestellt:
Auf einem rechteckigen Bogen Papier mit den Maßen 100 cm auf JO cm werden die im Farbwertmeßbogen der
Firma Käst & Ehinger, Stuttgart-Feuerbach angegebenen
Druckfarben, aus denen sich nach der unter a) aufgeführten Tabelle die gewünschten Farbtöne zusammensetzen,
in jeweils 1 obiger Chloroformlösung nacheinander entsprechend
den in Abbildung 1 angegebenen Intensität aufgesprüht. Gegebenenfalls werden durch Nachsprühen
mit stark verdünnten ( etwa 0,5 #igen) Lösungen "der
Farben die Farbtöne den vorgegebenen Eichfarben vollständig angeglichen. Beim Ausschneiden der Vorlage wird
ein 5 cm breiter Rand verworfen. *-^__^
- 1 3 - ß4£)
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759878t
c.) Druck des Farbbandes
Aufgrund der .nach b) hergestellten Vorlage werden die für
den Vierfarbdruck erforderlichen Raster und die Zinkätzungen in üblicher -,/eise, wie z. B. im Handbuch der Reproduktionstechnik,
Polygraph Verlag GmbH, Frankfurt/M. 1948, Band II, Seite 121-162 und 176-262, beschrieben ist, hergestellt.
Mit den Zinkplatten wird dann in bekannter Weise im Buchdruckverfahren wie es beispielweise im dem vorstehend
genannten Handbuch, Band IV, beschrieben ist, das Farbband auf eine Unterlage, z. B. auf Kunstdruckpapier gedruckt.
d) Eichung des Farbbandes
Die Eichung des Bandes wird*nach dem Druck dadurch ausgeführt,
daß Markierungs striche für die pH-Werte im Abstand von
o,2 pH-Einheiten an diejenigen Farbtöne des Bandes gedruckt werden, die den jeweiligen Eichfarben entsprechen.
Die im folgenden beschriebene Farbvergleichsskala dient
der Auswertung der von dem Enzym Cholinesterase nach einer Inkubationszeit von 6 Minuten in Gegenwart von Acetylcholin
und dem Indikatorgemisch Phenolrot/Naphtolphtalein durch Freisetzen von Essigsäure hervorgerufenen Farbreaktion.
Bei dieser Reaktion ist die Geschwindigkeit der Indikator-
farbänderung charakteristisch für eine entsprechende
Cholinesterase-Konzentration.
Die Herstellung der Vorlage und der Druck des Farbbandes erfolgt wie in Beispiel 1 angegeben ist, mit dem Unterschied,
daß der Längenmaßstab in der graphischen Darstellung ( Beispiel 1b), nach der die Vorlage gesprüht wird, nicht
linear ist. Der Maßstab wird in den diagnostisch wiohtigen pH-Bereichen ( etwa pH 7»0 bis 8,3 entsprechend einem
•-14- BAD ORiGINAL
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Cholinesterasegehalt von 0 bis 3 Internationalen Einheiten/ml)
weit auseinandergezogen und in den diagnostisch uninteressanten pH-Bereichen ( pH<T7»O bzw^>
8,3) eng zusammengerückt ( vgl. hierzu Abb. 2d). Mit einem solchen Maßstab können geringfügige Farbveränderungen und damit
die diagnostisch wichtigen verminderten Cholesterinesterasekonzentrationen genau abgelesen werden, während der enge
Maßstab für die pH-Bereiche am Eande für die in diesen Bereichen lediglich erforderlichen groben Abschätzungen
des Cholinesterasegehalts genügt.
Die Eichung des Farbbandes ist im vorliegenden Beispiel etwas langwieriger, da die Reaktionsgeschwindigkeit
( pH-Änderung pro vorgegebener Zeiteinheit) der Eichung zugrunde gelegt werden muß *und da man als Eichlösung
nicht eine Lösung einer eingewogenen Menge Cholinesterase in einer Flüssigkeit, sondern Humanseren mit den zufällig
in diesen Seren vorhandenen Cholinesterasekonzentration und dem zufällig vorhandenen pH-rfert verwenden muß.
Im einzelnen wird die Eichung wie folgt durchgeführte
Zunächst trägt man auf der gedrückten Skala eine mm-Einteilung
als vorläufigen Längenmaßstab einj so daß jeder Farbton einem bestimmten mm-iSTert ( im folgenden Farbwert
y genannt ) entspricht. Dann erzeugt man die gewünschte Farbreaktion durch Eintauchen von jeweils ,einem
Acetylcholin, Phenolrot und Naphtolphtalein enthaltenden
Indikatorpapier in eine Reihe von Serumproben von verschiedenem Cholinesterasegehalt ( im folgenden ζ genannt
ausgedrückt in Internationalen Einheiten pro ml Serum (U/ml)). Zu Beginn der Inkubationszeit und nach jeweils
einer weiteren Minute Inkubation wird der entstandene Farbton mit dem gedruckten Farbband verglichen und der dem
- 15 - -
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Farbton entsprechende Farbwert in mm abgelesen. Die Farbnuancen ( y, ausgedrückt in mm Farbband) werden in
Abhängigkeit von der Inkubationszeit ( im folgenden t genannt) graphisch aufgetragen. Man erhält so für eine Auswahl von
Seren die in Abb. 2a dargestellten Kurven..
Hierauf bestimmt man durch eine exakte Methode (Titration der freiwerdenden Essigsäure nach üblichen Verfahren)
die Cholinesterasekonzentration ( in U/ml) für die gleichen Serumproben.
Die Steigung ^T?- der Kurven in Abb. 2a wird für die
Werte y=ü, 10,20,30,40,50,60,70,00,90,100,110,120,13ο,
14o,15o.bestimmt. Anschließend werden diese 'Steigerungswerte 7^+- durch die zugehörigen Cholinesterasekonzentrationen
ζ dividiert und in Abhängigkeit von den Farbnuancen y ( ausgedrückt in mm Farbband) aufgetragen (vgl. Abb.
2b). Die zugehörige in Abb. 2b eingetragene Kurve ist ein Maß für die durchschnittliche Geschwindigkeit der Farbänderung
(ausgedrückt in mm Farbband pro Minute) für ein Serum, das 1 U/ml Cholinesterase enthält. Hieraus
können die gemittelten Farbnuancen (im folgenden y
genannt, ausgedrückt in mm Farbband) für beliebige Cholinesterase-Konzentrationen in Abhängigkeit von der
Zeit z. B. für die Cholinesterase-Konzentrationen z~ O, 1, 2» 3 etc. bis z*= 10 berechnet werden
( graphische Integration). Durch graphieöhe Auftragung
der so erhaltenen gemittelten Farbnuancen y in Abhängigkeit von der Zeit t für verschiedene Konzentrationen ,
ζ erhält man die in Abb. 2c dargestellte Kurvenschar ( wobei der y-Wert für t=0 (IntegratiQnskonstante)
= 2 gesetzt wird). Die y-Werte für die Zeit t»6 ergeben
- 16 -
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die Lage der Eichstriche ( ausgedrückt in mm Farbband)
bei 6 Minuten Inkubationszeit. Diese Eichung kann für Seren mit beliebigen iLnfangs-pH-Werten verwendet werden.
Wenn am Beginn der Inkubation ein von Null abweichender y-Wert abgelesen wird, muß dieser Wert von dem bei ;
t=6 abgelesenen y-Wert abgezogen werden.
Zur Kontrolle wird anschließend eine Fehleranalyse durchgeführt. Hierzu wird der Cholinesterasegehalt von einer
größeren Zahl S-ren mit Hilfe des näherungsweise geeichten Farbbandes und außerdem mit einer exakten
Vergleichsmethode bestimmt. Die Differenzen werden in Abhängigkeit von den abgelesenen Anfangs-und Endwerten
graphisch dargestellt. Hierbei können auch kleinere systematische Fehler leicht erkannt und durch eine
entsprechende Korrektur der Eichstriche ausgeschaltet werden.
Diese Art der Eichung berücksichtigt die unterschiedlichen
Anfangs-pH-Werte und die unterschiedlichen Pufferkapazitäten der verschiedenen Seren sowie den nicht linearen
Verlauf der Skala.
Man erhält nach der vorstehend gegebenen Arbeitsvorschrift die in Abb. 2d dargestellte Farbvergleichsskala.
Farbband für die schnelle Auswertung von Papier- oder · dünnschicht-chromatographischen Aminosäure-Trennungen
und für die halbquantitative Aminosäure-Bestimmung mit Hilfe eines Ninhydrin-Reagenzpapiers.
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Je 0,005 ml einer Lösung aus 0,01, 0,02. 0,05, 0,1,
0,2, C,5, 1, 2, 5, 1o, 2o, 5o, bzw. 100 mg Alanin in
1o ml iVasser werden nebeneinander auf Schleicher & Schüll Papier 2043 b aufgetragen. Man läßttrocknen und taucht
in eine Lösung von 0,1 g Cadmiumacetat, 1o ml Wasser,
5 ml Eisessig und 1g Hinhydrin in 100 ml Aceton. Anschließend läßt man das imprägnierte Papier etwa
Minuten lang an der Luft liegen und bestimmt die Anteile der Grundfarben in den gebildeten Flecken mit Hilfe der
im Handel befindlichen Farbmischtafel der Concentra GmbH
(Frankfurt/M.)* Da in diesen Farbtabellen für die verschiedenen
Blau-Rot-Gelb-Mischungen die Kombinationen mit den verschiedenen Schwarzanteilen fehlen, legt man
gegebenenfalls eine oder mehrere durchsichtige graue Folien, deren Schwarzanteil getrennt mit Hilfe der in der
Tafel aufgeführten Reihe verschiedener Schwärzungsgrade
bestimmt wird, auf die Farbtabellen. Die jeweiligen Farbanteile ( erhalten durch Mitteilung verschiedener
Ablesungen und Auf- bzw. Abrunden auf ganze Vielfache von 0,04) sind in der folgenden Tabelle 2 zusammengestellt:
imino s äure kon- | Rot | GeIb | Blau | Schwarz |
zentration (mg | ||||
ilanin/ml) | 0,20 | 0,00 | 0,00 | 0,04 |
0,01 | 0,20 | 0,00 | 0,00 | 0,04 |
0,02 | 0,20 | 0,00 | 0,00 | 0,08 |
0,05 | 0,24 | 0,00 | 0,00 | 0,08 |
0,1 | C,28 | 0,00 | 0,04 | 0,12 |
0,2 | 0,40 | 0,04 | 0,16 | 0,12 |
0,5 | 0,48 | 0,08 | 0,28 | 0,12 |
0,56 | 0,16 | 0,40 | 0,12 | |
2 | 0,68 | 0,20 ' | 0,48 | 0,12 |
5 | 0,76 | 0,24 | 0,52 | 0,12 |
1o | 0,84 | 0,28 | 0,56 | 0,12 |
2o | 0,88 | 0,28 | 0,60 | 0,12 |
5o | 0,88 | 0,28 | 0,60 | 0,12 |
1oo | ||||
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Nach der Tabelle 2 werden die einzelnen Grundfarben, wie es in Beispiel 1 beschrieben ist, nacheinander auf ein weißes
Kunstdruckpapier gesprüht. Hierbei wird ein logarithmischer Konzentrationsmaßstab proportional zur Farbbandlänge gewählt,
um über einen größeren Konzentrationsbereich eine etwa gleiche visuelle Farbänderung pro cm Farbband und damit
i
eline etwa gleiche prozentuale Meßgenauigkeit zu erzielen.
eline etwa gleiche prozentuale Meßgenauigkeit zu erzielen.
Die Herstellung der Rasterplatten und der Druck des Farbbandes erfolgen nach dieser Vorlage in einer Klischeeanstalt wie in
Beispiel 1 angegeben-.;ist. Nach dem Farbdruck werden nochmals
wie im vorliegenden Beispiel, Absatz 2 beschrieben, die Eichfarben erzeugt und an den mit den Eiehfarben übereinstimmenden
Farbtönen Markierungsstriche und die betreffenden Konzentrationsangaben gedruckt.
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Claims (4)
1. Farbvergleichsskalen für die Auswertung von Farbreaktionen,
gekennzeichnet durch ein auf einen Träger nach dem Rasterdruckverfahren aufgedrucktes Farbband, das in kontinuierlichem
Übergang alle bei der jeweiligen Farbreaktion auftretenden Farbnuancen enthält, und das nach dem Aufbringen auf den
Träger geeicht werden.
2. Farbvergleichskala, gekennzeichnet durch ein Farbband nach Anspruch 1, wobei die zum Druck des Farbbandes
benötigten Easter durch Farbanalyse einer Reihe von Eichfarben und anschließende übertragung der so bestimmten
jeweiligen Grandfarbenanteile in entsprechende Rasterwerte hergestellt werden.
3. Farbvergleichsskala nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet,
daß das Farbband auf Papier, Karton oder eine Folie gedruckt ist.
4. Farbvergleichsskala nach Anspruch 1 bis 31 dadurch gekennzeichnet,
daß die Farbtöne des Farbbandes den von einem Indikator, vorzugsweise einem Gemisch aus Phenolrot
und Naphtolphtalein bei verschiedenen pH-Werten, vorzugsweise bei einem pH von eWa 6 bis 9, gebildeten Farbtönen
entsprechen.
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